CN104203210B

CN104203210B - 合欢提取物与对应局部合成物的化妆品应用

Info

Publication number: CN104203210B
Application number: CN201280046856.1A
Authority: CN
Inventors: 阿尔诺·佛尼亚; 克莱尔-玛丽·格瑞佐; 菲利普·蒙东
Original assignee: Sederma SA
Current assignee: Sederma SA
Priority date: 2011-09-27
Filing date: 2012-09-27
Publication date: 2017-09-12
Anticipated expiration: 2032-09-27
Also published as: BR112014007158A2; CN104203210A; JP6242795B2; JP2015509072A; BR112014007158B1; US9737476B2; WO2013046137A3; FR2980362B1; WO2013046137A2; FR2980362A1; EP2760429B1; US20150017269A1; HK1204930A1; EP2760429A2

Abstract

本发明提出将合欢提取物用于皮肤糖化的化妆品处理。提取物首选从花和/或种子获得。运用化妆品配方来处理皮肤疲劳，尤其是用于改善皮肤的发光度和眼睛轮廓（眼袋和黑眼圈），以及用于处理皮肤柔软度的损失。首选的合成物，尤其适用于眼睛轮廓，包括合欢提取物与能够从豨莶草提取的豨莶苷的组合物。

Description

合欢提取物与对应局部合成物的化妆品应用

技术领域

本发明论述“合欢(Albizia Julibrissin)”提取物与对应局部合成物的化妆品局部应用。

本发明主要涉及化妆品和皮肤药物工业；这些工业生产和/或使用处理哺乳动物、动物或人类皮肤(包括头皮)、粘膜和附器(比如体毛、眼睫毛、眉毛、指甲或头发)的产品，目的是改善其外观和/或总体状态。

这些工业对新产品的需求不断提高，尤其需要从植物中提取出的活性成分；因为它们允许组合效率，限制刺激和过敏的风险，减小副作用，生物降解性，具有标记/证明的机会，以及对可持续发展和/或公平贸易方法的适用性。

本发明的目标就是要满足这个需求。

合欢也被称为“Silk Tree(木棉树)”或“Mimosa of Constantinople(君士坦丁堡的含羞草)”，属于含羞草科的落叶树。其原产地在东亚和南美，但早已被人类传播到几乎每个大洲。

合欢提取物已经被提议在化妆品中使用。

JP2009242296披露了合欢提取物能够抑制对黑色素生产的作用和刺激胶原蛋白的生产。

KR20100090530披露了用合欢皮提取物抑制金属蛋白酶类的活性。

KR20020080657披露了合欢皮提取物的抗自由基活性。

JP4342519披露了使用合欢提取物来抑制酪氨酸酶的活性。

JP2000143488披露了合欢提取物对于皮肤和发毛的润湿性。

JP2048515披露了在头发产品中使用合欢提取物，用于防止脱发和促进生长。

JP2010235548披露了化妆品和食品/饮料中使用的一种试剂，用于增白皮肤、恢复头发、提供抗氧化剂效应和治疗疾病(例如老化、肥胖症和发炎)；该试剂包含合欢提取物。

发明内容

本发明的主题是，使用合欢提取物，用于糖化的局部化妆品处理。

人体需要糖、葡萄糖来为它生产能量。不过，葡萄糖永远不能被人体完全用于这个有利目的。这种被吸收糖的残余部分将以一种非酶促反应方式，与蛋白质、核酸或类脂的胺基反应，形成高级糖基化最终产品(简称为AGE产品)。

AGE形成涉及若干个连续阶段。在早期阶段，还原糖(比如葡萄糖)的醛基与蛋白质胺形成一种称为“希夫碱”的不稳定的键；它快速重排，生成不在最终状态的阿马多瑞化合物。这种阿马多瑞产品经历许多后续反应，比如氧化、冷凝、脱水，形成中间试剂(例如醛)，导致随时间在组织上聚集的高级糖化(AGEs)复杂最终产物的聚集。

在阿马多瑞产品阶段，糖也能去质子化，形成若干个非常活泼的分子：乙二醛(GO)或其甲基乙二醛衍生物(MGO)，3-脱氧葡糖醛酮(3-DG)或果糖胺。接着，乙二醛和3-DG能够与游离蛋白质胺结合，生成不同的AGEs，比如羧甲基-赖氨酸(CML)、羧甲基-精氨酸(CMA)、羧甲基-半胱氨酸(CMC)和它们的乙基等同物或吡咯素、甲基乙二醛-赖氨酸二聚物等。

这些相同活泼化学形式的形成也能作为葡萄糖自行氧化的结果而执行，导致能与乙二醛、甲基乙二醛和3脱氧葡糖醛酮类型容易地反应的二羰基化糖毒素；上面提到的这些分子能导致AGEs的合成。

此外，其它糖类(比如核糖或木糖)虽然存在的数量较小，但比葡萄糖和果糖的反应性要强得多，而且也生成AGE；实际已经证明了AGE的体外毒性。

这些不同的副反应导致许多改良蛋白质(糖化)的形成；它们的机能、酶和结构性质都被削弱，对于细胞或有机体的良好机能发挥具有严重后果。此外，核酸与糖毒素的结合导致可能对细胞有害的突变。

对皮肤而言，发现AGEs不仅存在于真皮中，而且也存在于表皮中，远到角质层。如果它们的蛋白质具有长的寿命，那么对器官的影响更加严重。因此，与80岁相比，20岁时，半衰期为15年的真皮的胶原蛋白在羧甲基-赖氨酸(CML)、N-羧乙基-赖氨酸(CEL)和戊糖中要多3倍。胶原蛋白的性质，连同弹性蛋白、粘连蛋白和层粘连蛋白的性质均被改变，导致真皮细胞外基质的机械性质和弹性发生变化；真皮变得柔韧性减小，刚性增大，而且也更加松弛，没有活性。糖化的确不仅影响具有长寿命的蛋白质。波形蛋白是一种寿命比胶原蛋白短得多的细胞内蛋白质。它是细胞骨架的中间丝的重要合成物部分。波形蛋白参与到皮肤成纤维细胞的许多功能当中，例如愈合、流动性与收缩。从波形蛋白中积累的MGO形成的AGEs导致它聚集，减小细胞的收缩能力，并使胶原蛋白纤维紊乱。

在细胞内部，线粒体蛋白质直接和间接地受到未用于能量生产的葡萄糖的攻击。这些蛋白质被糖化，导致ATP合成收率的下降和有缺陷的能量生产。这个过程发生在所有体腔内，包括皮肤。细胞也有代谢传感器或探头；它们允许调节其能量生产。AMPK(AMP-激活的蛋白质激酶)是其中之一。这通过提高ATP新合成来响应减小的ATP。已知酶的活性部位对糖化非常敏感；因此，它可能丧失其调节功能。

此外，AGEs通过它们基质蛋白的糖化/变更来改变血管通透性。接下来发生的微-炎性反应导致血管流量减小、而且血液成分漏到血管外面，从而造成流体和废物在它们周围的积累。这导致形成黑眼圈和某些形式的眼袋。

因此，AGEs是细胞功能障碍的一个重大来源；而且，它们的逐步积累倾向于降低组织和细胞的性质与性能：较小柔软性，较小可动性，较小响应性，较小能量生产。所有机能都被削弱。

另外，细胞具有基于酶系统的、抵抗糖化的主动防御机制，称为乙二醛酶-1和-2；通过GSH的干预，它解除甲基乙二醛和其它反应性醛类物种的毒性。糖化产品倾向于降低乙二醛酶活性。如上所述，糖化是一种快速影响；只需在高血糖症的几天之后，就能量化它在各种器官中的牵连。糖毒素导致细胞生产能量和大分子改变的能力下降。糖毒素的影响也会随着时间积累。它们导致细胞对附加应激的响应性降低，并导致一种可通过利用身体疲劳而模拟来理解的“细胞疲劳”。当细胞(或身体)年轻时，它的恢复能力最大，而且它恢复得最快。日常疲劳的积累降低了这种能力，并放大糖毒素的有害影响。

瞬态疲劳变得平常，然后成为慢性的。这些迹象能在脸上看到：黑眼圈和眼袋，面色暗淡和拉长的面部特点，不太活泼的皮肤，疲惫的皮肤。在细胞和组织中，新陈代谢受损。

因此，通过减小糖毒素的日常影响来对抗细胞疲劳是我们要达到的一个目标，尤其是通过保护褪黑激素；褪黑激素是在身体的不同部分、尤其是在皮肤中产生的分子。它对睡眠的补偿调节和保护作用有影响，尤其是通过保护细胞的能量生产能力。糖毒素能降低褪黑激素水平；而维持这些水平对于保护细胞的恢复能力有直接好处。

这些生化过程对皮肤的影响是如此重要；我们已经看到它们在细胞水平上的影响。糖化导致暗淡的皮肤，松驰的皮肤，没有光泽，具有疲惫的外观，例如呈现黑眼圈和眼袋、缺乏张力和柔韧性。

申请人已经显示，根据本发明的合欢提取物展示出对抗糖化的两个决定性和互补性的效应：

-首先，对抗糖化的预防效应，以防止它的实施；

-第二，修复效应，根据本发明称为“去糖化”效应或“脱糖化”、或解毒效应；在糖化已经开始的情况下，它允许限制其负面后果。糖化产品被合欢花提取物中和或解毒，导致疲惫皮肤上 (尤其是具有光泽和和柔软度损失)的修复效应。

因此，根据本发明，合欢花提取物能用于，尤其是：

-治疗皮肤疲劳(疲惫的皮肤)；和/或

-解除皮肤(包括头皮)及其附器的毒性；和/或

-改善皮肤及其附器的面色的亮度或发光度，并治疗皮肤柔软度的损失；和/或

-用于治疗眼睛轮廓，尤其是黑眼圈和眼袋。

下面详细介绍的体内和体外试验展示了合欢提取物对皮肤分子的糖化、尤其是蛋白质的活性。特别是，AGE-Reader^TM(DiagnOptics Technologies公司)被用作医疗装置，用于AGEs积累的非侵入式测量。

根据本发明，“提取物”是指能通过普通萃取技术或通过体外植物细胞培养而获得的一种提取物。例如，能够使用的普通技术包括浸泡，简单煎汤，浸滤，回流萃取，超临界流体萃取，超声波或微波萃取，或者使用逆流技术萃取。萃取溶剂能够从下列物质中选择：水，丙二醇，丁二醇，甘油，PEG-6辛酸/癸酸甘油酯，聚乙二醇，甲基和/或乙基二甘醇醚，环状多元醇，乙氧基化或丙氧基化二甘醇，醇类(甲醇、乙醇、丙醇、丁醇)；或这些溶剂的任何混合物。

本发明也涵盖了通过体外植物培养而获得的一种提取物。存在各种技术，包括未分化或去分化细胞的培养、组织或器官培养，或者通过体细胞胚胎发生或通过营养繁殖的体外微繁殖。

通过体外植物培养获得提取物，展示出与农业-工业路径(在露地中植物培养，在工厂中后续萃取)相比的优点：获得的材料不存在有毒物质(除草剂等)，可再现性得到改善，生物多样性得以保留，等等。

根据本发明，植物的所有部位、包括气生的(比如叶子、花或种子或根)，都能被使用。

根据本发明，我们首选从植物的花和/或种子获得的合欢提取物；具体描述如下。

根据本发明，能够使用纯的合欢提取物，或者将它稀释在生理学上可以接受的赋形剂或基体当中。

提取物的使用方式首选稀释在生理学上可以接受的赋形剂或基体中，尤其是水醇基体。

本发明也包含作为起糖化作用的活性成分而包括在内的局部合成物，即生理学上可以接受的介质中有效数量的合欢提取物。正如前文解释的那样，合欢提取物对蛋白质的去糖和皮肤解毒具有显著效果。

局部应用可以是化妆品和/或皮肤药物。

根据其它有利特点，合欢提取物能够与一个或多个附加的活性成分组合使用，尤其是用于提供比较广泛的一系列化妆品性质。例如，附加的活性成分可以下列范围内选择：美白、抗发红、抗斑点活性成分，镇静活性成分，用于处理过敏、反应性皮肤、UV防晒霜、增湿、润湿剂、去死皮、平滑、调色、抗老化、抗皱和细线的活性成分，改善机械性质和弹性、面色发光度、解毒的活性成分，防毛发再生活性成分，作用于皮肤屏障的活性成分，防痤疮活性成分，作用于皮脂分泌、消光、均匀的活性成分，抗炎、抗氧化剂、抗自由基、抗糖化的活性成分，用于眼睛轮廓(黑眼圈和眼袋)、用于增强活度的活性成分，促进血液循环的活性成分，肽类，维生素类，等。这些活性成分能够从植物材料获得，比如植物提取物、或者通过植物培养或发酵获得的产品。

令人惊讶的是，本发明人已经发现，与豨莶苷组合在一起后，本发明的合欢提取物特别适合于处理面部，而且更加特别适合眼睛轮廓。根据关于总体眼睛轮廓处理(预防性和治疗性)的发明，豨莶苷能强化和补充合欢的抗糖化活性。

豨莶苷是豨莶精醇的一种糖的形式，具有下列分子式：

豨莶苷能够从任何供应源获得；尤其是借助于半化学合成、化学合成、酶，通过生物技术的许多方法之一，通过植物萃取，或者通过在工业上使用的最终产品中以合理成本获得它而使用的任何其它方式。

根据具体设备，提取物是植物性的豨莶苷，是从Siegesbeckia Orientalis(豨莶草)提取的；这种植物也被称为“holy herb(圣草)”或“St.Paul's wort(小连翘属植物)”。虽然原产于印度，但豨莶草已经传播到许多热带国家，尤其是马达加斯加。已知它是具有镇定和瘢痕生成效果的药用植物。FR2285142中披露了从豨莶草获得豨莶苷的方法。

豨莶苷也能以豨莶草提取物的形式存在，包括滴定数量的豨莶苷。

在不同著名出售的化妆品配料中，都配了豨莶苷。例如：

-Sederma公司销售的豨莶苷^TM：从豨莶草中提取的分子豨莶苷和来自富含积雪草皂苷的Centella Asiatica(积雪草)的提取物联合体；积雪草对真皮细胞外基体具有抗炎和再构造性质，已经声明这个成分能治疗妊辰纹。

-Sederma公司销售的Chromocare^TM：富含豨莶苷的豨莶草提取物和富含冬凌草甲素的Rabdosia rubescens(冬凌草)提取物的联合体；它能与氧化应激做斗争，并对发色团老化(胶原蛋白降级，发炎和黑色素的刺激)产生有益的影响。

根据本发明，提出了在生理学上可以接受的介质中包含合欢提取物和豨莶苷的组分。

综上所述，合欢提取物是根据本发明获得的一种提取物。

在技术规格中详细描述的体外试验显示了利用根据本发明的合欢提取物和豨莶苷的组合物而获得的活性和最佳协合作用。尤其是，已经显示：

-抗老化基因的增加；

-对弹性蛋白非酶糖化的协同作用；

-金属蛋白酶类MMP1后应激的抑制活性；

-胶原蛋白I和弹性蛋白的增加。

也在下文详细说明的体内试验显示了合欢提取物和豨莶苷组合物在眼睛轮廓的可见全局疲劳方面的化妆品优势：细线和皱纹，眼睑，黑眼圈和眼袋。

其它附加活性成分尤其能够从下列范围中选择：维生素B3化合物，烟酰胺或生育酚类化合物，类维生素A化合物，比如松香油、去氧苯经妥、α-硫辛酸、白藜芦醇或DHEA，肽类，尤其是N-乙酰基-酪氨酸-精氨酸-O-十六烷基酯，Pal-VGVAPG(SEQ ID号：1)，Pal-KTTKS(SEQ ID号：2)，Pal-GHK，Pal-KMO2K和Pal-GQPR(SEQ ID号：3)；它们是在局部化妆品或真皮医药合成物中使用的常规活性成分。

通过下面的描述，将能更好地理解本发明。

具体实施例

合成物制备

根据本发明，表述“生理学上可以接受的介质”意思是不受限制的水性或水醇溶液，油包水乳液，水包油乳液，微-乳液，含水凝胶，无水凝胶，浆液，泡囊或粉末的分散体。

“生理学上可以接受”意思是，合成物适合于表皮或透皮使用，可接触哺乳动物、尤其是人类的粘膜、附器(指甲，头发，体毛)、头皮和皮肤，没有毒性、不兼容性、不稳定性、过敏反应等其它风险。

这个“生理学上可以接受的介质”构成通称为合成物赋形剂的东西。

对于根据本发明的使用，合欢提取物或豨莶苷(如果存在的话)的有效数量，也就是说它的剂量，取决于各种因素，比如年龄、患者皮肤状态、病症或病情的严重性、以及管理模式等。有效数量意思是足以实现期望效果的无毒害数量。

对于根据本发明的抗糖化和眼睛轮廓应用，以有效数量存在的合欢提取物或豨莶苷(如果存在的话)一般存在的数量范围是从0.00001％到90％，更加特别的是从0.0001％到25％，非常特殊是的从0.001％到10％；基于合成物的总重量。具有熟练技能的人能够根据期望效果来调节提取物的量。此处使用的所有百分比和比例均是指总合成物的重量，所有测量均是在25℃下进行的；除非另有规定。

合成物的赋形剂的选择是根据合欢和豨莶苷(如果存在)材料的约束条件(稳定性，溶解性，等)，以及在必要时，根据进一步打算在合成物中应用的剂型。

在组合到合成物中时，合欢提取物和豨莶苷(如果存在)可以合成物借助于水溶液，或者是通过普通生理学上可以接受的助溶剂溶解，例如(但不限于)这个清单：乙醇，丙醇，异丙醇，丙二醇，甘油，丁二醇，或聚乙二醇，或者是它们的任意组合。也可能对利用乳化剂来溶液提取物而感兴趣。也能使用粉末介质。

本发明采用合成物一般是通过在制造表皮和口服合成物及注射合成物的领域中技术熟练人员都非常熟悉的常规方法制备的。此类方法可能涉及配料在一个或多个步骤中的混合物，以获得均匀状态，利用或不用加热、冷却，等。

可能含有本发明合欢提取物和豨莶苷(如果存在)的不同草本制剂形式可以是下面列出的所有形式：例如，面霜、乳液、乳剂或霜膏，凝胶，乳液，分散剂，溶液，悬浮剂，清洁剂，打底剂，无水制剂(棒状，尤其是润唇膏，身体和浴油)，淋浴和洗澡用凝胶，香波和护发液，用于皮肤护理或头发的乳剂或面霜，清洗乳液或乳剂，防晒乳液，乳液或乳剂，人工晒黑乳液，乳液或乳剂，剃前、剃中或剃后乳剂、泡沫、凝胶或洗液，化妆品，唇膏，染眉毛油或指甲油，皮肤香油、浆液，粘结或吸附材料，透皮补丁，或者润肤剂粉末、洗液、乳液或乳剂、喷剂，身体和洗浴油，打底基础，软膏，乳液，胶体，压紧的悬浮剂或固体，铅笔，可喷涂的配方，可刷的、脸红、红色、描眼膏，描唇笔，润唇膏，面部或身体用粉末，定型啫喱或摩丝，指甲调整，唇膏，皮肤调节剂，保湿霜，光泽剂，肥皂，角质脱落剂，收敛剂，脱毛剂，永久波浪溶液，去头屑配方，止汗或止汗合成物，包括细棒，“辊上”除臭剂，空气清新剂，鼻子喷剂等等。这些合成物也可以采用唇膏的形式，目的可以是给嘴唇上色，或者防止它们皲裂，或者眼睛用化妆品、眼影和面部打底剂。本专利的合成物可以包括化妆品，个人护理产品和药物制剂。也能考虑包括了加压推进剂、采用泡沫形式的合成物，或采用气溶胶形式的合成物。根据本发明的合成物也能供口腔应用，例如牙膏。在此情况下，合成物可以包含通常用于口腔应用的佐剂和添加剂，包括表面活性剂、增稠剂、润湿剂、磨光剂(比如硅石)，各种活性成分，比如氟化物，尤其是氟化钠，以及任选的甜味剂，比如糖精钠。

根据本发明，合欢提取物和豨莶苷(如果存在)所处的形式可以是溶液、悬浮液、乳浊液、糊膏、或粉末，可以单独存在或作为预混物，或者采用单独载体或作为媒介中的预混剂，比如大-、微-、或毫微囊剂，大-、微-或纳米级小球，脂质体，油质体或乳糜微粒，大-、微-、或纳米颗粒，或者大-、微或纳米海绵，微-或纳米乳液，或吸附上的有机聚合物粉末、滑石粉、膨润土、孢子或外膜，以及其它无机或有机载体。

根据本发明，合欢提取物和豨莶苷(如果存在)能够以任何一种形式使用；其形式可以是结合到或组合入、或吸附入或吸附在大-、微-、和纳米颗粒上，或大-、微-、和纳米包膜上，用于处理织物、天然或合成纤维、毛织物；以及可以用于打算与皮肤直接接触的日用或夜用的布料或内衣、手帕或衣物的任何材料，从而通过这种皮肤织物接触而施加它们的化妆品效果，并允许连续的局部释放。

化妆品处理方法

本发明也提出了用于处理皮肤蛋白质糖化的化妆品局部处理的方法，包括在需要如此处理的对象的皮肤上，如上文所述，局部涂抹有效数量的含合欢提取物的合成物。

“局部处理”意思是打算在它涂抹之处起使用的涂覆：皮肤，粘膜，皮肤附器。

根据本发明的方法特别适用于：

-处理已经丧失它们发光度和柔软度的疲惫的皮肤(皮肤疲劳)；和/或

-对皮肤(包括头皮)及其附器进行解毒；和/或

-改善皮肤及其附器的面色的亮度，并处理皮肤柔软度损失；和/或

-用于处理眼睛轮廓，尤其是黑眼圈和眼袋。

根据本方法的其它特点，合欢提取物能够方便地与豨莶苷结合，正如上文所述；因此，这种方法特别适合于处理疲惫的皮肤，尤其是对于由黑眼圈和眼袋、皱纹和细线以及眼睑动作的协同效果导致的眼睛轮廓。

通过定期的局部运用，比如每天，能获得皮肤、粘膜和附器的外观与总体条件的改善。

从业者将感激包括含合欢提取物的合成物的局部化妆品处理；例如，这种处理的实现可通过局部涂抹本专利中描述的合成物，根据涂抹此类合成物常用的方法。局部合成物最好是每天抹一次，持续至少一星期时间；但是，它也能在2、4、8或12个星期的时期内涂抹。局部合成物最好是涂抹到脸上和颈部，但也能涂抹到需要美学改善的皮肤的任何部位；此处，合成物保留在需要处理的皮肤区域，而且最好不要从皮肤上除去或冲走。作为参考，对于化妆品面部处理，护肤霜的欧洲标准剂量是2.72mg/cm²/天/人。

还需要理解，作为本文的作用，术语治疗和处理包括并包含皮肤病学影响的还原、改善、进步、释放、和/或消除，包括老化。本发明的合成物和方法适用于处理皮肤上许多区域中的皮肤条件，包括(但不限于)脸、额头、嘴唇、脖子、领口、手臂、手、身体、腿、膝盖、脚、胸部、背部、臀部等等。

本发明的重要优点之一在于，通过这种局部的、非侵入式运用方法，在任意必要或希望的时刻，都能够运用局部选择性的“轻柔”处理。对于抗皱应用，例如，可以使用注射器或微-套筒进行非常局部的应用。

不过，也可以考虑，将根据本发明的合成物进行皮下注射。

根据其它特点，本发明的化妆品处理方法能够与目标针对皮肤的一个或多个其它处理方法组合，比如光-疗法、热或芳香疗法处理。

根据本发明，可以提出具有若干个隔间或套件的装置，以运用上述方法；例如，它们可以包括(但不限于)，在第一个隔间中装包含本发明合欢提取物的合成物，在第二个隔间中装包含其它活性成分的合成物，比如豨莶苷、和/或赋形剂。在此情况下，上述第一和第二个隔间中所装的合成物被认为是组合合成物，用于适时的同步、单独或分步使用，尤其是在上面引用的处理方法之一当中。

附加配料

CTFA国际化妆品配料字典和手册(第13次修订，2010年)(出版商是位于美国华盛顿特区的Cosmetic,Toiletry,and Fragrance Association,Inc.公司)描述了不受限制的、非常广泛的、皮肤护理行业中常规使用的化妆品和制药配料；它们都能作为本发明合成物中的附加配料/化合物来使用。这些配料类别的示例包括，但不限于：修补剂，皮肤抗老化剂，抗皱剂，抗萎缩剂，皮肤保湿剂，皮肤光滑剂，抗菌剂，抗寄生虫剂，抗真菌剂，抑菌剂，抑真菌剂，杀菌剂，抑菌剂，抗微生物挤，抗炎剂，抗痒剂，麻醉剂，抗病毒剂，角质层分离剂，自由基清除剂，挤皮脂溢剂，去头屑剂，皮肤区别、增殖或着色调节剂，渗透加速剂，脱皮剂，黑色素合成刺激或抑制剂，增白、脱色或增亮剂，蛋白着色剂，自助美黑剂，NO-合酶抑制剂，抗氧化剂，自由基清除剂和/或抗大气污染剂，活性羰基物种清除剂，抗糖化剂，紧缩剂，刺激表皮或外皮大分子合成、和/或能够抑制或防止它们降级的试剂，比如胶原蛋白合成刺激剂，弹性蛋白合成刺激剂，核心蛋白聚糖合成刺激剂，层粘连蛋白合成刺激剂，防卫素合成刺激剂，伴侣蛋白合成刺激剂，水通道蛋白合成刺激剂，透明质酸合成刺激剂，粘连蛋白合成刺激剂，长寿基因蛋白合成刺激剂，类脂和角质层组分(神经酰胺、脂肪酸等)的合成刺激剂，胶原蛋白降级抑制剂，弹性蛋白降级抑制剂，成纤维细胞增殖刺激剂，角质形成细胞增殖刺激剂，脂肪细胞增殖刺激剂，黑素细胞增殖刺激剂，角质形成细胞分化刺激剂，脂肪细胞分化刺激剂，乙酰胆碱酯酶抑制剂，糖胺聚糖合成刺激剂，DNA修复剂，DNA保护剂，止痒剂，敏感皮肤治疗和/或护理剂，固化剂，抗妊娠纹剂，收敛剂，皮脂分泌调节剂剂，真皮松弛剂剂，辅助治疗剂，再上皮刺激剂，再上皮辅佐剂，细胞因子生长因子，镇静剂，抗炎剂，作用于毛细血管循环和/或微循环的试剂，血管生成刺激剂，血管通透性抑制剂，细胞新陈代谢作用剂，真皮-外皮接合部改良剂，生发诱导剂，头发生长抑制或阻滞剂，肌肉松弛剂，抗污染和/或抗自由基剂，脂解刺激剂，减肥剂，抗脂肪团剂，微循环作用剂，细胞能量新陈代谢作用剂，清洁剂，毛发调节剂，头发定型剂，头发生长促进剂，防晒剂，完全防晒剂，补妆剂，除垢剂，药物，乳化剂，润肤剂，有机溶剂，防腐剂，除臭剂活性成分，生理学上可以接受的载体，表面活性剂，研磨剂，吸附剂，美学组分，比如香料，颜料，染料，着色剂，天然着色剂，精油，触摸剂，化妆品收敛剂，防痤疮剂，抗凝血剂，防泡剂，抗氧化剂，粘合剂，生物添加剂，酶，酶抑制剂，酶诱导剂，辅酶，螯合剂，植物提取物，植物衍生物，精油，海洋提取物，从生物发酵或生物技术工艺获得的试剂，矿物盐，细胞提取物，防晒剂(能有效防止紫外线A和/或B射线的有机或矿物光保护剂)，神经酰胺，肽，缓冲剂，体积增大剂，螯合剂，化学添加剂，着色剂，化妆品生物杀伤剂，变性剂，医用收敛剂，外用止痛剂，成膜剂，比如聚合物，用于强化合成物的成膜性和直接性，季铵衍生物，直接性提高剂，遮光剂，pH值调整剂和调节剂(如三乙醇胺)，推进剂，还原剂，多价螯合剂，脱色和/或增亮剂，皮肤调理剂(例如，润湿剂，包括杂项和闭塞的)，水分保持剂，α-含氧酸，β-含氧酸，保湿剂，表皮水解酶，愈合和/或镇静剂，皮肤处理剂，抗皱剂，眼袋减少或治疗剂，脱落剂，增稠剂，软化剂，胶凝聚合物，维生素类及其衍生物，湿润剂，剥离剂，镇定剂，皮肤治疗剂，木脂素，防腐剂(如苯氧基乙醇和对羟基苯甲酸酯)，抗紫外线剂，细胞毒性剂，抗肿瘤药，粘度调节剂，非挥发性溶剂，珠光剂，止汗剂，脱毛剂，牛痘，芳香水，皮肤重构剂(如豨莶草提取物)，赋形剂，填充剂，矿物质，抗分枝杆菌剂，抗过敏剂，H1或H2抗组胺药，抗刺激剂，免疫系统刺激剂，免疫系统抑制剂，驱虫剂，润滑剂，颜料或染料，裉色剂，防腐剂，光稳定剂，以及它们的混合物；只要它们在物理上和化学上与该合成物的其它配料、尤其是与本发明的活性成分兼容。还有，这些附加配料的性质不得对本发明的活性成分造成不可接受的改变。这些附加配料可以是合成的或天然的，比如植物提取物，或者来自生物发酵过程。更多示例能够在《CTFA化妆品配料手册》中找到。

此类附加活性成分/化合物可以从整个组中选择，包括：糖胺，葡糖胺，D-葡糖胺，N-乙酰葡糖胺，N-乙酰-D-葡糖胺，甘露糖胺，N-乙酰甘露糖胺，半乳糖胺，N-乙酰半乳糖胺，维生素B3及其衍生物，烟酰胺，脱氢乙酸钠，脱氢乙酸及其盐，植物甾醇，水杨酸化合物，去氧苯经妥，二烷酰基羟脯氨酸化合物，大豆提取物和衍生物，雌马酚，异黄酮，黄酮，植烷三醇，金合欢醇，香叶醇，红没药醇，肽类及其衍生物，二-、三-、四-、五-和六肽及其衍生物，KTTKS(SEQ ID号：4)，Pal-KTTKS(SEQ ID号：2)，肌肽，N-酰基氨基酸化合物，类维生素A类，视黄基丙酸，松香油，视黄醇棕榈酸酯，视黄基醋酸酯，视黄醛，视黄酸，水溶性维生素，抗坏血酸，维生素C，抗坏血酸葡糖苷，抗坏血酸棕榈酸酯，抗坏血酸磷酸镁，抗坏血酸磷酸酯钠，维生素B及它们的盐和衍生物，维生素B1，维生素B2，维生素B6，维生素B12，维生素原及它们的盐和衍生物，维生素K及其衍生物，泛酸及其衍生物，泛基乙基醚，泛醇及其衍生物，泛醇，生物素，氨基酸及其盐和衍生物，水溶性氨基酸，天冬酰胺，丙氨酸，吲哚，谷氨酸，水不溶性维生素，维生素A，维生素E，维生素E，维生素D和单-、二-和三-萜类化合物，β-紫罗兰醇，雪松醇及它们的衍生物，水不溶性氨基酸，酪氨酸，色胺，颗粒材料，丁基羟基甲苯，丁基羟基苯甲醚，尿囊素，生育酚烟酸酯，生育酚，生育酚酯，棕榈酰-Gly-His-Lys(Pal-GHK)，植物甾醇，羟基酸，羟基酸，乳酸，乳糖酸，酮酸，丙酮酸，植酸，溶血磷脂酸，二苯乙烯，肉桂酸酯，白藜芦醇，激动素，玉米素，二甲基氨基乙醇，天然肽，大豆肽，糖酸的盐类，葡萄糖酸锰，葡萄糖酸锌，吡罗克酮胺，3,4,4'-三氯碳酰苯胺，三氯二苯脲，羟基吡啶硫酮锌，氢醌，曲酸，抗坏血酸，抗坏血酸磷酸镁，抗坏血酸葡糖苷，吡哆醇，芦荟，萜醇，尿囊素，红没药醇，甘草酸二钾，甘油酸，山梨糖醇酸，季戊四醇酸，吡咯烷酮羧酸及其盐，二羟基丙酮，赤藓酮糖，甘油醛，丁香油，薄荷醇，樟脑，桉树油，丁子香酚，乳酸薄荷酯，金缕梅馏出液，二十碳烯和乙烯基吡咯烷酮共聚物，碘丙基氨基甲酸丁酯，多糖，必需脂肪酸，水杨酸盐，甘草次酸，类胡萝卜素，神经酰胺和假性神经酰胺，脂质复合物，一般具有天然来源的油类，比如牛油树脂，杏仁油，月见草油，梅油，棕榈油，栀子花油，氢醌，HEPES，丙半胱氨酸，O-辛酰基-6-D-麦芽糖，甲基甘氨酸二乙酸的二钠盐，类固醇，比如DHEA的薯蓣皂苷配基和衍生物，DHEA或脱氢表雄酮和/或它们的前体或者化学或生物衍生物，N-乙氧羰基-4-对氨基苯酚，蓝莓提取物，植物激素，酿酒酵母提取物，海藻提取物，大豆、羽扇豆、玉米和/或豌豆的提取物，阿尔维林及其盐类，特别是阿尔维林柠檬酸，假叶树和七叶树的提取物，十八碳烯二酸，它们的类似物和衍生物、及混合物，金属蛋白酶抑制剂。

与合成物组合后特别有用的更多皮肤护理和头发护理活性成分能够在“SEDERMA商业文献”和网站www.sederma.fr.上找到。

例如，也会提到下列商业活性成分：甜菜碱，甘油，Actimoist Bio 2^TM(Activeorganics)(译注：商品名称与公司名称)，AquaCacteen^TM(Mibelle AG Cosmetics)，Aquaphyline^TM(Silab)，AquaregulK^TM(Solabia)，Carciline^TM(Greentech)，Codiavelane^TM(Biotech Marine)，Dermaflux^TM(Arch Chemicals，Inc)，Hydra'Flow^TM(Sochibo)，Hydromoist L^TM(Symrise)，RenovHyal^TM(Soliance)，Seamoss^TM(Biotech Marine)，Essenskin^TM(Sederma)，Moist 24^TM(Sederma)，Argireline^TM(Lipotec公司乙酰基六胜肽-3的商品名)，已知在名称Gatuline Expression^TM之下的千日菊酰胺或印度金钮扣的提取物，已知在名称Boswellin^TM之下的齿叶乳香树提取物，Deepaline PVB^TM(Seppic)，Syn-AKE^TM(Pentapharm)，Ameliox^TM，Bioxilift^TM(Silab)，Juvinity^TM(Sederma)，Revidrate^TM(Sederma)，Chronodyn^TM(Sederma)，O.D.A.white^TM(Sederma)，Idealift^TM(Sederma)，Resistem^TM(Sederma)，Widelash^TM(Sederma)或它们的混合物。

在能够与本发明的合成物组合的其它植物提取物当中，可能存在特别提到下列物质的提取物：常春藤，尤其是英国常春藤(Hedera Helix，译注：括号中是中文意思相同的别名)，柴胡，银柴胡，山金车(Arnica Montana L)，迷迭香(Rosmarinus officinalis N)，万寿菊(Calendula officinalis)，鼠尾草(Salvia officinalis L)，人参(Panax ginseng)，银杏，小连翘属植物(Hyperycum Perforatum)，假叶树(Ruscus aculeatus L)，欧洲绣线菊(Filipendula ulmaria L)，大花爪哇茶(Orthosiphon Stamincus Benth)，海藻(FucusVesiculosus)，桦树(Betula alba)，绿茶，可乐果(Cola Nipida)，七叶树，烟草，积雪草，石南属植物，墨角藻，柳树，鼠耳草，七叶皂苷，苍术，黄金洋甘菊，杏属、白术桔梗、Sinnomenum、牵牛、千斤拔属的植物，紫锦苏，比如C.Forskohlii，C.blumei，C.esquirolii，C.scutellaroides，C.xanthantus和C.Barbatus，比如彩叶草石竹的根的提取物；Ballote，Guioa，Davallia，Terminalia，Barringtonia，Trema，antirobia，号角树，argania，山药的提取物，比如怀山药或墨西哥山药；阿米芹，豨莶属的提取物，尤其是豨莶草，杜鹃花科的蔬菜提取物，尤其是越桔提取物(Vaccinium angustifollium)或Arctostaphylos uva ursi，aloe vera，含甾醇类的植物(如植物甾醇)，Manjistha(提取自茜草属的植物，尤其是茜草)，以及穆库尔(提取自没药属的植物，尤其是印度没药)，可乐果提取物，洋甘菊，红车轴草提取物，卡瓦胡椒提取物(SEDERMA公司的Kava Kava^TM)，假马齿苋提取物(SEDERMA公司的Bacocalmine^TM)和海鞭提取物；甘草，桑树，白千层(茶树)，极叉开拉瑞阿，冬凌草，眼虫，天仙藤蛭，查帕拉尔高粱，向日葵提取物，依南木，Spermacocea属的Mitracarpe，Buchubarosma，指甲花属，Adiantium Capillus-Veneris L.，白屈菜，丝瓜，日本柑橘(温州蜜柑的柑橘变种)，崇庆枇杷茶，白茅，黄海罂粟，柏杉，玉竹何首乌，罗锅底，黑接骨木，棉豆，百金花属，巨藻，特纳草，知母，马齿苋草，啤酒花，阿拉比卡咖啡树，巴拉圭茶，ZingimberZerumbet Smith，心叶球花，或石莼的提取物。

本发明的合成物可能包括肽类，包括(但不限于)二-、三-、四-、五-和六肽，以及它们的衍生物。根据采用的具体设备，合成物中附加肽的浓度范围是从1x10^-7％到20％，最好是从1x10^-6％到10％，首选在1x10^-5％和5％之间；均为重量比。

根据本发明，术语“肽”指含10氨基酸或以下的各种肽，它们的衍生物，异构体，以及与其它物种的络合物，比如金属离子(例如，铜、锌、锰、镁等等)。术语“肽类”同时指天然肽类与合成肽类。它也指含有天然发现的、和/或商业上可获得的肽类的合成物。

此处使用的合适二肽包括、但不限于肌肽(β-AH)，YR，VW，NF，DF，KT，KC，CK，KP，KK或TT。此处使用的合适三肽包括、但不限于RKR，HGG，GHK，GKH，GGH，GHG，KFK，KPK，KMOK，KMO₂K或KAvaK。此处使用的合适四肽包括、但不限于RSRK(SEQ ID号：5)，GQPR(SEQ ID号：6)或KTFK(SEQ ID号：7)。此处使用的合适五肽包括、但不限于KTTKS(SEQ ID号：4)。合适的六肽包括、但不限于GKTTKS(SEQ ID号：8)，VGVAPG(SEQ ID号：9)。

此处使用的其它合适肽类包括、但不限于肽的亲油性衍生物，首选棕榈酰基衍生物，以及上面提到的金属络合物(例如，三肽HGG的铜络合物)。首选的二肽衍生物包括N-棕榈酰-β-丙氨酸-Ala-His，N-乙酰基-酪氨酸-精氨酸-十六烷基酯(Calmosensine^TM，Idealift^TM，来自Sederma公司)。首选的三肽衍生物包括N-棕榈酰-Gly-Lys-His，和Pal-Gly-His-Ly，(Pal-GKH和Pal-GHK，来自Sederma公司)，HGG的铜衍生物(Lamin^TM，来自Sigma公司)，Lipospondin(N-Elaidoyl-KFK)和它的保守置换的类似物，N-乙酰基-RKR-NH2(肽CK+)，N-Biot-GHK (来自Sederma公司)，Pal-KMO2K(Sederma公司)及其衍生物。本发明中使用的合适的四肽衍生物包括、但不限于：N-棕榈酰-GQPR(SEQ ID号：3)(来自Sederma公司)。此处使用的合适的五肽衍生物包括、但不限于：N-棕榈酰-KTTKS(SEQ ID号：2)(可作为Sederma公司的Matrixyl^TM获得)，具有X Met或Leu的N-棕榈酰-Tyr-Gly-Gly-Phe-X(SEQ ID号：10)或它们的混合物。此处使用的合适六肽衍生物包括、但不限于：N-棕榈酰-VGVAPG(SEQ ID号：1)和它们的衍生物。Pal-GHK和Pal-GQPR(SEQ ID号：3)(基体yl^TM3000，Sederma)的混合物也能被提及。

能够在市场上获得的含三肽或衍生物的首选合成物包括Sederma公司的生物肽-CL^TM，Maxilip^TM，Biobustyl^TM，Procapil^TM和Matrixyl^TM与synthe’6^TM。能够在市场上获得的首选四肽来源的合成物包括由Sederma公司提出的Rigin^TM，Eyeliss^TM，Matrixyl^TMReloaded和Matrixyl3000^TM；它们含有在50到500ppm之间的棕榈酰-GQPR(SEQ ID号：3)和载体。

作为附加的活性成分，也能提到下列市场上销售的肽类：Vialox^TM，Syn-ake^TM或Syn-Coll^TM(Pentapharm，译注：商品名称与公司名称)，Hydroxyprolisilane CN^TM(Exsymol)，Argireline^TM，Leuphasyl^TM，Aldenine^TM，Trylgen^TM，Eyeseryl^TM，Serilesine^TM或Decorinyl^TM(Lipotec)，Collaxyl^TM或Quintescine^TM(Vincience)，BONT-L-Peptide^TM(lnfinitec Activos)，Cytokinol^TMLS(Laboratoires Serobiologiques/Cognis)，Kollaren^TM，IP2000^TM或Meliprene^TM(lnstitut Européen de Biologie Cellulaire)，Neutrazen^TM(Innovations)，ECM-Protect^TM(Atrium Innovations)，Timp-Peptide^TM或ECMModuline^TM(lnfinitec Activos)。

A)获得能够根据本发明使用的合欢提取物的示例

规程的示例1：使用醇或醇类的混合物，最好是乙醇，执行合欢种子回流之下的热萃取。在除去醇之后，用甘油/水混合物吸收残余物。

或者，萃取能够利用醇与水的混合物来进行。

规程的示例2：执行合欢花回流之下的热水溶液萃取。获得的提取物与甘油混合，以形成一种水-甘油的混合物。

这样获得的水-甘油合欢提取物在通过HPLC色谱识别的合欢氨酸中滴定。它能直接用在草本制剂配方中；或者在赋形剂中进一步稀释，形成“活性成分”，用于下面解释的将来的草本制剂配方。

B)《活性成分》的配方

活性成分是含有根据上文A)获得的水-甘油合欢提取物的合成物，溶解在基体中，形成生理学上可以接受的介质。这个活性成分特别适合于化妆品行业，用于制备化妆品配方，例如乳剂、凝胶等(参见下面给出的草本制剂示例)。

对于根据上文A)在2％合欢氨酸中滴定而获得的合欢提取物，可以将它的有效数量(即，1％到15％)混合到所有亲水性基体中，比如凝胶、水性缓冲溶液、甘油或具有生理学上可以接受的短链的任何其它多元醇。

例如，而且为了描述体内试验和草本制剂，首选使用的就是将这个7.5％水-甘油提取物溶解在甘油中。正是这个活性成分，它自行配制在适用于皮肤的化妆品合成物中，最佳范围是1到5％。根据本发明，活性成分也可以是含有与豨莶苷组合的合欢提取物的合成物。

对于根据上文A)在2％合欢氨酸中滴定而获得的合欢提取物，可以将它的有效数量(即，1％到15％)与有效数量(即0.01％到1％)的豨莶苷在所有亲水性基体中进行混合；比如凝胶、水性缓冲溶液、甘油或具有生理学上可以接受的短链的任何其它多元醇。

作为用于体内试验和(例如)下面给出的草本制剂配方的示例，制备了一种活性成分。它含7.5％的水-甘油合欢提取物，在丁二醇基体中的2％+0.05％豨莶苷中进行滴定(提取自豨莶草；粉末形式)。这个活性成分将以1到5％的最佳比例自行配制在适用于皮肤的化妆品合成物中。

C)体外试验；合欢提取物的抗糖化活性

根据本发明，在下面给出的体外试验中，已经显示了合欢提取物的抗糖化活性。

对于在细胞培养上实现的试验，使用根据上文示例A)获得的、含2％合欢氨酸的水-甘油提取物，以0.006％的浓度稀释在细胞培养介质类型的含水赋形剂中。

1.真皮纤维品质的改善

a.测量成纤维细胞中的羧甲基-赖氨酸(CML)

原理和协议：CML(特定类型的AGEs)在具体时间范围内积累在由成纤维细胞合成的真皮蛋白质上。体外，在培养中的成纤维细胞上，可以通过糖化应激来加速这种现象。

将500μM的甲基乙二醛(MGO)运用于合人真皮成纤维细胞(HDF)，以激发AGE形成。在4天时间37℃的这种糖化接触之后，通过漂洗将MGO从培养物中除去，运用合欢提取物5天。然后，取出上层清液，用Elisa(酶联免疫吸附)法测定成纤维细胞释放的CML。从细胞层，以平行方式对细胞进行计数。执行了两个独立的试验。

结果：合欢提取物没有产生细胞数量的任何变化。利用MGO处理使存活率降低了44％，并使CML增加了124％(p<0.01，与参照物相比)。

与此同时，合欢提取物使CML减小了43％(p<0.05；与有MGO的参照物相比)。这个试验突出展示了本发明提取物的去糖化特点，因为在糖化剂的作用之后，它减小了CML。

表1：CML在培养的成纤维细胞中的变化

阳极对照氨基胍0.03％：-41％CML；(p<0.01)。

b.外植体中AGEs的减少

原理和协议：放置取自34岁妇女的人类腹部皮肤外植体，使它与溶解在存活介质中的糖化剂MGO接触。在糖化阶段之后，皮肤(n＝5/案例)接受含合欢提取物的霜剂或安慰剂霜剂(根据草本制剂段落示例1的霜剂)的运用。局部运用每天实施一次，持续4.5天。在利用荧光抗-AGE抗体标记之前，皮肤部分被包住，并利用显微切片机切割。每个案例拍10张照片，在合适的软件上分析。

结果：结果显示，AGE标记显著地位于真皮中，富含稳定基质蛋白的一个区域(尤其是胶原蛋白)。因此，在这个区域进行了量化。

表2：AGEs在皮肤外植体中的变化

*AFU＝任意荧光单位

与已经接受含合欢提取物霜剂的外植体相比(p<0.01)，利用MGO处理外植体、然后运用安慰剂霜剂，导致AGE标记增大了23％。这展示了去糖化现象；合欢提取物的存在能帮助外植体摆脱形成的AGEs的一部分(通过参考参照物)。

c.波形蛋白损坏的减少

原理和协议：与具有长半衰期的蛋白质一样(比如胶原蛋白)，具有较短半衰期的蛋白质也能通过糖毒素而改变。本试验中研究了波形蛋白；上文提到了它在细胞收缩和真皮粘附力的组织中的角色。我们也已经知道这个蛋白质是敏感的，尤其对形成CML的MGO。因此，保护它非常重要。

使用与上文(点1b)相同的外植体，运用荧光抗-波形蛋白抗体执行波形蛋白的标记；量化也使用相同的方法。

结果：照片显示了真皮上部的波形蛋白标记。因此，在这个区域执行量化。

表3：皮肤外植体上波形蛋白标记的变化

*UFA＝任意荧光单位

合欢提取物对抗糖化应激的有益效果清楚地出现，就像提取物似乎已经将在初始阶段已经被糖化的波形蛋白的重要部分“去糖化”一样(通过参考参照物)。

a.收缩能力的改善

原理和协议：糖毒素能改变真皮胶原蛋白和弹性蛋白的机械性质，从而导致真皮的瓦解和硬化。准备含胶原蛋白I和III、以及真皮人类成纤维细胞的凝胶(n＝4/案例)。聚合之后，凝胶用MGO±合欢提取物处理5天。利用CCD照相机监视收缩。T0和T5天的凝胶表面之间的差异是凝胶收缩的良好指标。

结果：安慰剂凝胶的MGO处理使它的收缩性减小78％；这可以归因于成纤维细胞存活率的减小和形成的AGEs对凝胶的破坏。如果与应激案例比较，与参照物相比，合欢提取物使收缩性改善了68％。

表4：真皮点阵收缩的变化

2.呼吸能力的改善

a.ATP短缺情形中收缩能力的改善

原理和协议：准备含胶原蛋白I和III、以及真皮人类成纤维细胞的凝胶(n＝4/案例)。聚合之后，凝胶接受2DG(2-脱氧葡萄糖)，葡萄糖(非糖化)的一种非高能类似物，ATP形成的可逆抑制剂。这些培养物也已经接受、或不接受合欢提取物，为期5天。利用CCD照相机监视收缩。这个相同表面上T0和T5天的凝胶表面之间的差异是凝胶收缩的良好指标。

结果：参照物凝胶的收缩符合预期。对于参照案例，在不改变存活率的条件下，通过减少ATP供应的2DG处理使收缩减少75％。尽管ATP缺乏(利用2DG)，合欢提取物使收缩改善98％(p<0.05；与参照案例相比)。这说明，尽管ATP不足，但提取物仍允许细胞较好地维持它们的收缩性。

表5：2DG接触后真皮点阵收缩的变化

b.“疲劳”应激之下呼吸能力的改善

原理和协议：下面的培养协议旨在模拟细胞的疲劳和休息阶段。在有或没有合欢提取物的条件下，将HDF连续培养16天。在第4天和第13天，利用500μM的MGO，给细胞施加疲劳应激3天。在所有案例的终点，测量ATP(n＝5/案例；2个独立试验)。

结果：在没有糖化处理的情况下，在参照案例和利用合欢提取物的案例之间没有明显的差异。在参照案例中，与未糖化案例相比，利用MGO处理(糖化应激)极大地减小了ATP数量(-74％)。对于有合欢提取物存在的糖化处理情况，与糖化后的参照案例相比，ATP合成是182％。

因此，与参照物相比，尽管有糖化应激，合欢提取物仍然能够使细胞维持良好的ATP合成水平。

表6：ATP浓度的变化

c.AMPK能量传感器的保护

糖毒素降低线粒体的功能能力，尤其是通过改变它们的呼吸酶。糖毒素也攻击某些负责探测AMP和ATP水平波动的细胞内传感器，比如依赖AMP的激酶(pAMPK)；从而根据需要调节细胞呼吸的力度。快速和响应性的能量生产要求，这个酶不能被糖化，要保持其性质完好。

原理和协议：放置取自34岁妇女的人类腹部皮肤外植体，使它与溶解在存活介质中的MGO接触。在糖化阶段之后，皮肤(n＝5/案例)接受合欢提取物或安慰剂霜剂的应用。局部运用每天实施一次，持续4.5天。在利用荧光抗-pAMPK抗体标记之前，皮肤部分利用显微切片机切割。每个案例拍10张照片，在合适的软件上分析。

结果：结果显示，pAMPK标记显著地位于真皮上执行了量化的地方。与参照案例相比，含合欢提取物的霜剂的局部运用允许细胞较好地保护能量传感器AMPK。因此，提取物似乎已经将在初始阶段已经被糖化的酶的一部分“去糖化”。

表7：pAMPK标记的变化

浓度	pAMPK(AFU*)	％变化；显著性
			有MGO的参照物	0.87±0.30	基准
MGO和合欢提取物	1.09±0.40	+25％；p<0.01

*AFU＝任意荧光单位

3.糖毒素解毒系统

a.乙二醛酶-1的维持

原理和协议：前文可以看出，一旦它们通过乙二醛酶-1形成，MGO和GO就能被中和；因为乙二醛酶-1能阻止最终糖毒素的形成和这些蛋白-糖化剂合成的放大。

将500μM的甲基乙二醛(MGO)应用于愈合的人体真皮成纤维细胞，目的是在它们的细胞外基体中激发糖毒素形成。在37℃的糖化接触期之后，通过漂洗将MGO从培养物中除去，运用合欢提取物5天。接着，萃取细胞层，通过Western Blot(蛋白质印迹法)量化残余的乙二醛酶-1。利用当量的蛋白质(通过BCA的蛋白质化验)，进行比较。

结果：在没有糖化处理时，参照案例和利用合欢提取物的案例之间没有明显的差异。在参照案例中，糖化处理导致乙二醛酶-1合成下降56％(p<0.01，与未糖化参照物相比)。在有合欢提取物存在的条件下，进一步的糖化处理后，与糖化案例参照相比，仍然有多出41％的乙二醛酶。本发明的提取物似乎已经将在初始培养阶段已经被糖化的酶的重要部分“去糖化”。

b.维持蛋白酶体的活性

原理和协议：蛋白酶体是一种细胞内蛋白质结构；专门用来调节受损蛋白质的细胞内容净化，尤其是通过糖化应激损坏的，从而能变成有毒的。蛋白酶体对糖毒素敏感；其过程可以是直接的(通过糖化)，也可以是间接的(如果ATP合成较低，因为它是依赖于ATP的)。

使用血清白蛋白(BSA)作为蛋白质模型。在与MGO接触的条件下，将BSA糖化一星期。随后，这个糖毒素(糖化的BSA)在有或没有合欢提取物的条件下孵化6天。

让两种溶液中的每一个接触愈合处的人体真皮成纤维细胞3天，以通过糖化的蛋白质来诱导蛋白酶体改变。在这个接触之后，以及在漂洗之后，将细胞粉碎，执行蛋白酶体活性的测定。

结果：在没有糖化处理的情况下，合欢提取物对蛋白酶体的活性没有影响。这些结果显示，通过它与细胞的接触，模型糖毒素(BSA-AGE)明显降低细胞净化系统(即蛋白酶体)的活性达16％(两个独立实验)。这个试验显示，细胞外糖毒素能通过不同代谢路径调节细胞中的作用。相同BSA-AGE络合物与合欢提取物接触6天后丧失其毒性，变得不能降低人类真皮成纤维细胞中的蛋白酶体活性。可以假设，通过6天与合欢提取物的接触，糖毒素模型(BSA-AGE)被解毒(去糖化)。.

表8：与BSA-AGE接触之后蛋白酶体活性的变化

*蛋白酶体的活性，单位是ΔUA/min/10⁶个细胞

c.AGE-色素形成的减少

原理和协议：MGO间接地涉及到称为脂褐素的另一组毒素的生成当中。在皮肤部位上能看到的这种色素呈黄色。这是糟糕的特征，因为它是从不同的受损细胞成分的集合形成的。蛋白酶体的功能降低会允许它积累。蛋白酶体的糖化(因此也是改变)会促进这种有毒色素的积累。使用与上面2a条中相同的“疲劳”细胞应激，交替运用两个休息期(+/-合欢提取物)和2个应激期(+/-合欢提取物，利用500μM微米的MGO)。在第二个糖化应激末尾，在细胞上执行一定剂量的脂褐素标记物，并减小到细胞的数量。

结果：结果显示，MGO产生了二酪氨酸积累的大量上升(+129％，p<0.01)。与此同时，合欢提取物明显地限制了其形成。

合欢提取物有能力从基本上降低二酪氨酸形成(对于本案例，在我们的实验中探测不到)；提取物存在时，利用MGO观察到的二酪氨酸的数量低于阴性参照物(没有MGO)。

表9：脂褐素AGE-色素积累的变化

*AFU：任意荧光单位；阳性MGO参照物：生育酚500μM：-61.1％(p<0.01)

d.AGEs对血管形成的影响的减小

原理和协议：AGEs在血管的直接环境中、或者在血管本身中形成；这可能导致废物和流体的积累，从而造成眼圈底下的黑暗颜色。Het-CAM使用的鸡蛋处在它们发育的非常早期，神经系统还未完全发育。发明人开发出一种原始方法，用于评估与AGE相关的血管形成中的变化。

BSA利用MGO糖化。在这个阶段末尾，将这个糖毒素(糖化的BSA)放置得与合欢提取物接触或不接触一天时间。

然后，将两类糖化溶液涂抹到蛋膜上。由于AGEs诱导的血管舒张的结果，此刻之前已经变得看不见的血管现在变得清晰可见。对结果进行打分，以评估对血管负面影响的减少。

结果

表10：在Het-CAM试验中，合欢提取物导致的阴性AGE相关影响的下降

在给蛋血管网络运用了BSA-AGE之后，它的毒性效应快速表现出来，能看到严重损坏，伴随着漏血和脉管网络的发展。

施加了利用合欢提取物解毒(去糖化)的BSA之后，产生出大的、依赖于剂量的损坏降低：0.075％的提取物(p<0.01)是-55％；0.225％的提取物(p<0.01)是-70％。因此，与参照物相比，合欢提取物有助于保护脉管网络、防止糖毒素的有害损坏，降低漏血和过度血管形成，从而降低了黑眼圈的颜色。

e.成纤维细胞褪黑激素合成的保护

原理和协议：如前所述，褪黑激素往往能强调它在细胞保护方面的优势。在有或没有甲基乙二醛(MGO)存在的条件下，监视人类真皮成纤维细胞(HDF)褪黑激素合成的变化。据此，展示了接触2小时后，由于这个应激导致的褪黑激素高达-20％的取决于剂量的下降。

在第二个系列的实验中，HDF已经与本发明的提取物接触了24小时；接着，在漂洗之后，已经象前面一样与MGO接触。24小时后，监视褪黑激素合成。

结果

表11：糖化应激造成的褪黑激素合成的变化；本发明合欢提取物的影响

与参照物相比，MGO导致褪黑激素减少了32％(p<0.05)；保护中使用的本发明的提取物将褪黑激素维持在稳态浓度，防止了它的损耗。

D)体外试验：合欢提取物和豨莶苷组合的活性

1. 3个衰老基因的表述的提高

术语“衰老基因”涉及在老化过程中代表它们活性变化的所有基因，或者利益于它们的功能而在维持体内平衡中扮演角色的所有基因。

a)FOXOs(叉头转录因子O亚族)

叉头转录因子O亚族的意思是对氧化损坏的调节。当脱乙酰化时，FOXOs蛋白比较活跃。细胞应激导致它们的乙酰化和活性降低。沉默调节蛋白(SIRT1)是FOXOs路径的主要激活剂之一。人类真皮成纤维细胞中的FOXO3a基因消失具有与衰老表型的类似性：ROS(活性氧)的较大生成和细胞群体倍增时间比较重要。

b)应激诱导蛋白(Sesns)

应激诱导蛋白是应激响应蛋白质。通过类似于抗氧化剂的直接作用，或者类似于自噬诱导体，允许有缺陷的线粒体(ROS生成体)的消除，它们能抑制氧化损坏。因此，它们被认为是老化过程中的生理制动器。

使用SIPS(应激诱导早衰)协议来测试本发明的组合物的影响。

将人类真皮成纤维细胞培养3天。接着，它们接受或不接受本发明的产品(试验品)，在不同浓度下测试另外的3天时间。然后，在2小时内，让细胞承受氧化应激动(H2O2)。。细胞单层再次接触或不接触试验产品达6小时。下一步，提供RNA，并通过实时RT-PCR来量化3个衰老基因的表述。

将利用本发明组合物处理过的细胞与未处理的细胞进行对比。

表12：

对于参照物，比例＝1

上述结果显示，与未处理的细胞相比，利用本发明的组合物，这个衰老基因出现明显的诱导。

2.弹性蛋白的非酶糖化

蛋白质和还原糖(例如果糖或葡萄糖)之间发生的非酶糖化是一种自发的、缓慢的反应，能够通过热量来加速。在本试验中，蛋白质是可溶性牛弹性蛋白；还原糖是果糖。在有或没有试验产品的情况下，在50℃温度，将它们孵化9天。糖化造成的最终产品可以通过荧光来量化(λex ＝360nm，λem＝460nm)。

表13：

氨基胍0.03％：-99％；p<0.01

上述结果显示，与参照物相比，合欢提取物能导致弹性蛋白非酶糖化下降(-23％；p<0.05)。虽然豨莶苷独自没有影响，但合欢提取物与豨莶苷的组合显示了协同影响(-31％；p<0.01)。

3.金属蛋白酶MMP1和MMP2的抑制活性

培养人类真皮成纤维细胞，直到合流。接着，让细胞接触或不接触试验产品，持续24小时。然后，在有或没有试验产品的条件下，利用香烟烟雾的提取物来刺激细胞。在有或没有试验产品的最后一次孵化之后，通过ELISA法测量培养介质中存在的金属蛋白酶MMP1和MMP2，并减小到细胞数量(利用Hoescht试剂评估)。

表14：

这些结果显示了应激之后的MMP提高。与参照物细胞相比，在处理过的细胞中，本发明的组合导致应激诱导的MMP降低。

4.人类真皮成纤维细胞中胶原蛋白I的增加

将人类真皮成纤维细胞培养24小时。接着，让细胞接触或不接触试验产品，持续6天。通过固定细胞层的免疫标记，最终量化细胞生成的胶原蛋白I。

表15：

与参照物细胞相比，在处理过的细胞中，本发明的组合刺激了胶原蛋白I的合成。

E)草本制剂配方的示例

本发明的活性成分：含有根据段落B制备的合欢提取物的合成物。

下面将描述各种配方，有或没有附加的化妆品活性成分；对于每个情况，后者的作用是支持和/或补充本发明活性成分的活性。根据它们的功能、应用部位(身体、脸部、颈部、胸部、手部等)、希望的最终效果和目标消费者，这些配料可以是任何种类。

示例1：霜剂形式

规程：称取A相；在不搅拌的情况下，让它浸泡30分钟。将A相放在75℃的水浴中加热。称取并混合B相。称取C相，在水浴中加热到75℃，彻底混合。将B相添加到A相。均匀混合。在搅拌条件下，将C相倒入A相+B相。彻底混合。添加D相，无需准备。添加E相，彻底混合。添加F相，彻底混合。

示例2：晚膏形式

规程：称取A相，在85℃的水浴中加热。称取B相，在85℃的水浴中加热。称取C相。形成乳液前，将C相添加到A相，彻底混合。在剧烈搅拌条件下，缓慢地将A+C相倒入B相中。在搅拌之下彻底混合，以冷却。将D相添加到35℃左右的乳液中，彻底混合。

能够添加到本配方的附加配料示例：

Covi-Ox T90^TM：Cognis公司销售的抗氧化剂活性物质(生育酚)。例如，能够将它的0.1％添加到B相中。

Crodarom Goji^TM：Crodarom公司销售的抗氧化剂、解毒和保湿剂活性物质。可以将它与C相同时添加到A相中，例如高达2.50％。

示例3：鹈后乳液形式(凝胶-霜剂)

规程：称取A相，将它放置于螺旋浆搅拌之下。称取并混合B相。在搅拌之下，将B相添加到A相，彻底匀化30分钟。在75℃的水浴中加热A+B相。称取C相，在水浴中加热到75℃。在Staro搅拌之下，将C相倒入A+B相，彻底混合。称取并匀化D相。在40℃左右，将D相添加在以前的相中，彻底混合。在35℃以下，利用E相，将pH值调节到5.00-5.50，彻底混合。添加F相，均匀混合。添加G相，均匀混合。检查pH值在5.50-5.00。

能够添加到本配方的附加配料示例：

Kelisoft^TM：Sederma公司销售的抗毛发再生活性物质。可以将它添加到配制过程末尾，在G相之前，高达3.00％。

Calmosensine^TM：Sederma公司销售的敏感皮肤镇定活性物质。可以将它添加到配制过程末尾，在G相之前，高达3.00％。

NG Seve de Bouleau^TM：Sederma公司销售的调色和增湿剂。可以将它添加到配制过程末尾，在G相之前，高达3.00％。

示例4：用于眼睛轮廓的凝胶形式

规程：称取并匀化A相。称取B相，混合均匀。在螺旋浆搅拌之下，将B相添加到A相。让它浸泡。称取C相，匀化。在强烈螺旋搅拌之下，将C相添加到A+B相。在普通螺旋浆搅拌之下，让它匀化1小时。利用D相，将pH值调节到5.50。在螺旋浆搅拌之下匀化。在前一相中添加E相，彻底混合。添加F相，彻底混合。

能够添加到本配方的附加配料示例：

EYELISS^TM：Sederma公司销售的眼睛轮廓活性物质(尤其用于黑眼圈和眼袋)。可以将3.00％添加到E相。

示例5：面膜形式

规程：称取A相，将它放置于螺旋浆搅拌之下。称取并混合B相。在螺旋浆搅拌之下，在A相中缓慢添加B相，彻底混合。无需搅拌，在80℃水浴中加热A+B相2小时。快速搅拌，然后让它在搅拌之下冷却。在40℃左右，向以前的相中添加C相。在35℃以下，利用D相，将pH值调节到5.50，彻底混合。在缓慢搅拌之下，添加E相。添加F相，彻底混合。添加G相，彻底混合。检查pH值处在5.0-5.5。

能够添加到本配方的附加配料示例：

KOMBUCHKA^TM：Sederma公司销售的作用于面色发光度的活性物质。可以将3.00％添加在配制末尾，在F相之前。

Novaplant Ginger Special^TM：Crodarom公司销售的增加血液循环的活性物质。可以将稀释在Crodateric CAB 30(Cocamidopopyl Betaine)中的2.00％添加在D相之后。

示例6：用于面部的凝胶形式

规程：在搅拌之下，分散A相。将Ultrez 10撒到水中，让它浸泡30分钟。加热C相，直到完全溶解。混合A相与B相。将C相添加到(B+A)相中。在搅拌之下，将D相添加在(A+B+C)相中。添加E相。利用F相中和。添加G相，混合。

能够添加到本配方的附加配料示例：

RIGIN^TM：Sederma公司销售的活性物质，能改善皮肤的弹性和稳固性，提高皮肤的水合与光滑度。例如，可以将3％(重量比)添加在G相中。

MATRIXYL 3000^TM：Sederma公司销售的肽基抗皱配料；它能帮助修复老化造成的皮肤损害。例如，可以将3％(重量比)添加在G相中。

MATRIXYL synthe’6^TM：Sederma公司销售的肽基抗皱配料；它能帮助修复老化造成的皮肤损害。例如，可以将2％(重量比)添加在G相中。

示例7：其它霜剂形式

规程：称取A相，让它浸泡30分钟。然后，在75℃的水浴中加热A相。加热B相，直到溶解。将B相添加到A相。在75℃的水浴中加热C相。在搅拌之下，将C相添加到(A+B)相。彻底搅拌各相。在55℃左右，利用E相中和。添加F相，然后是G相，彻底匀化。

能够添加到本配方的附加配料示例：

DERMAXYL^TM：Sederma公司销售的抗老化活性物质；它能把皱纹修平，并修复皮肤屏障。例如，可以将2％(重量比)添加到(A+B+C)相。

Retinol，Resveratrol et Niacinamide：抗老化配料，尤其是抗皱剂。例如，可以将0.1％的松香油或0.5％的白藜芦醇添加到(A+B+C)相。例如，可以将10％的烟酰胺水溶液添加到F相。

CHRONODYN^TM：Sederma公司销售的活性物质；它有利于皮肤的调色和稳固，擦除疲劳迹象。例如，可以将3％添加到F相。

VENUCEANE^TM：Sederma公司销售的活性物质；它能防止光老化的可见迹象(斑点，皱纹，干燥...)，保护细胞结构、防止紫外线造成的损坏，并增强皮肤强度。例如，可以将3％添加到F相。

示例8：用于身体的霜剂形式

规程：称取A相，让它浸泡30分钟。在75℃的水浴中加热A相。加热B相，直到溶解。将B相添加到A相。在75℃的水浴中加热C相。在搅拌之下，将C相添加到(A+B)相。添加D相，彻底混合。在55℃左右，利用E相中和，均匀混合。添加F相和G相，彻底混合。

能够添加到本配方的附加配料示例：

JUVINITY^TM：Sederma公司销售的活性物质；它能减小面部和“乳沟”的老化迹象，修平皱纹，重构和增密真皮。例如，可以将2％添加到(A+B+C)相。

生育酚(维生素E)或u酸(ALA)：具有抗氧化剂和抗自由基性质的活性物质。例如，可以将0.5％(重量比)添加(A+B+C)相。

O.D.A.white^TM：Sederma公司销售的活性物质；通过减少黑色素合成，它能使皮肤增亮。例如，可以将1％添加到(A+B+C)相。

Bio-Bustyl^TM：Sederma公司销售的活性物质；含有肽和细菌滤液，对于女性胸部具有稳固和调色的全局使用。例如，能够将3％添加到F相。

示例9：浆液形式

规程：A相：将卡波姆撒在水中，静置15分钟。混合B相。将B相倒入A相，匀化。称取C相，混合，并在搅拌之下添加到A+B相。让它浸泡1小时。无需准备，在搅拌之下，将D相添加在前一相中。利用E相中和。开始搅拌。然后添加F相。允许在搅拌之下混合至少1小时，然后添加G相。混合均匀。

能够添加到本配方的附加配料示例：

LUMISPHERE^TM：Sederma公司销售的活性物质；它是装在聚甲基丙烯酸甲酯微包膜中的双乙酰基波尔定(DAB)和改性二氧化钛锰(TiO₂Mn)的组合物。TiO₂Mn能给予皮肤均匀、光亮的光泽效果；而DAB则能提供增亮的生理效应。例如，可以将4％添加到F相。

REVIDRATE^TM：Sederma公司销售的活性物质；它尤其能改善表皮的凝聚性和水合性。例如，可以将2％添加到C相。

EVERMAT^TM：Sederma公司销售的活性物质；它能减少皮脂分泌，从而参与到油性皮肤的治疗中。例如，可以将4％添加到F相。

HALOXYL^TM：Sederma公司销售的活性物质；通过再吸收眼圈，它能改善眼睛轮廓。例如，可以将3％添加到F相。

示例10：洗液形式

规程：称取A相。称取B相，混合。在搅拌之下，用30分钟时间，将B相加入A相。称取C相，混合，直到获得均匀的掺合物。在搅拌之下，向A+B相中添加C相。在前一相中添加D相。在搅拌之下，添加E相，混合均匀。称取F相，混合，并添加到前一相，彻底匀化。

能够添加到本配方的附加配料示例：

EYELISS^TM：如上所述。例如，能够将3.00％添加到E相。

Ac-Net^TM：Sederma公司销售的活性物质；有能力完成油性和易发痤疮皮肤的完全处理。例如，可以将3％添加到E相。

EVERMAT^TM：如上所述。例如，可以将4％添加到E相。

HYDRERGY^TM：Sederma公司销售的活性物质；它是一种长期保湿剂，而且能刺激ATP的合成。例如，可以将3％添加到E相。

示例11：毛细血管洗液

配料	INCI名称	重量％
			A相
Incroquat CTC 30	西曲氯铵	1.00
			柠檬酸	柠檬酸	0.22
柠檬酸三钠	柠檬酸三钠	1.20
			山梨酸酯	山梨酸钾	0.10
H₂O		Qsp
			B相
Nipagine	尼泊金甲酯	0.20
			Procetyl AWS	PPG 5Ceteth 20	2.00
C相
			本发明的活性成分		3.00
D相
			Crillet 1	多山醇酯20	1.00
香料	香料	0.10

示例12：润唇膏

规程：在85℃加热A相。混合B相，并在85℃加热。混合。在搅拌之下(Staro s＝3000，然后s＝1200)，将A相缓慢倒入B相。添加在80℃预热的C相，匀化。添加35℃左右的D相。浇铸。

F)根据本发明的合欢提取物和豨莶苷组合的草本制剂配方特殊示例

本发明的活性成分：含有根据段落B制备的合欢提取物和豨莶苷的合成物。

示例13：霜剂形式，尤其针对眼睛轮廓

规程：

无需搅拌，将A相撒在水中，静置1小时。匀化B相，在螺旋浆搅拌之下，用30分钟时间，将它加入A相。在staro搅拌之下，向A+B相中添加C相。无需准备，在staro搅拌之下，将D相加入前一相。在staro搅拌之下，利用E相中和。混合F相，在staro搅拌之下将它加入前一相。在前一相中添加G相，混合均匀。

能够添加到本配方的附加配料示例：

MATRIXYL 3000^TM：Sederma公司销售的肽基抗皱配料；它能帮助修复老化造成的皮肤损害。例如，可以将3％(重量比)添加在配制末尾。

RESISTEM^TM：Sederma公司销售的抗老化配料；它是通过心叶球花的茎细胞培养而获得的植物提取物。它帮助降低前老化剂和局部微-发炎的水平，减少皮肤发红，强化自然皮肤辉光。例如，可以将3％(重量比)添加在配制末尾。

示例14：凝胶形式，尤其用于眼睛轮廓

规程：无需搅拌，将A相撒在水中，静置1小时。在快速螺旋浆搅拌之下，让B相分散在水中，让它混合30分钟。称取并匀化C相。在螺旋浆搅拌下，将C相添加到B相。静置30分钟。在叶片搅拌之下，将A相加入B+C相。在螺旋浆搅拌之下，在前一相中添加D相，然后是叶片搅拌。在叶片搅拌之下，用E相中和前一相。将G相加入前一相，混合均匀。

能够添加到本配方的附加配料示例：

IDEALIFT^TM：Sederma公司销售的脂肽基配料；它能抵抗皮肤下垂，并改善对重力的耐受力。可以将4％添加在配制末尾。

示例15：浆液形式

规程：称取A相，将它放置于螺旋浆搅拌之下。称取并匀化B相。将B相加入A相，均匀混合。称取C相，均匀混合。在螺旋浆搅拌之下，将C相加入A+B相。无需准备，在螺旋浆搅拌之下添加D相。添加E相，在叶片搅拌之下保持30分钟，以便匀化。

能够添加到本配方的附加配料示例：

RIGIN^TM：Sederma公司销售的活性物质，能改善皮肤的弹性和稳固性，提高皮肤的水合与光滑度。可以将3％(重量比)添加在配制末尾。

示例16：卸妆乳液

配料	INCI名称	重量％
			A相
H₂O	水	Qsp100
			山梨酸钾	山梨酸钾	0.10
B相
			丁二醇	丁二醇	35.00
Crovol A70-LQ-(RB)	PEG-60杏仁甘油酯	1.00
			Crodateric CAB 30-LQ-(RB)	椰油酰胺丙基甜菜碱	1.00
Tween 20-LQ-(RB)	多山醇酯-20	2.00
			苯氧乙醇	苯氧乙醇	Qs
香料	香料	0.10
			C相
本发明的配料		3.00

规程：称取A相，将它放置于轻柔的螺旋浆搅拌之下。称取并匀化B相。在快速螺旋浆搅拌之下，将B相加入A相。在轻柔螺旋浆搅拌之下，将C相加入A+B相。在轻柔螺旋浆搅拌之下，添加D相。

能够添加到本配方的附加配料示例：

Birch SAP^TM：Sederma公司销售的皮肤调色和保湿配料，基于来自桦树边材的原料液。可以将3％添加在配制末尾。

示例17：眼睛轮廓补丁(用于处理黑眼圈和眼袋)

配料	INCI名称	重量％
			A相
H₂O	水	Qsp100
			山梨酸钾	山梨酸钾	0.10
B相
			甘油	甘油	3.00
苯氧乙醇	苯氧乙醇	qs
			Satiagel VPC 614	鹿角菜胶(角叉菜)提取物	1.00
Viscogum BCR 13/250	刺槐豆胶和蔗糖	1.00
			C相
H₂O	水	5.00
			NaOH 30％	氢氧化钾	0.50
D相
			根据本发明的配料		3.00
E相
			香料	香料	0.10

规程：称取A相，在85℃的水浴中，将它放置于螺旋浆搅拌之下。称取并匀化B相。螺旋浆搅拌之下，将B相加入A相。在叶片搅拌之下，让它保持匀化1小时。从水浴中取出，让它在叶片搅拌之下冷却。在70℃以下，添加C相。添加D相。添加E相。将补丁倒入模具中，让它在室温下冷却2小时。

能够添加到本配方的附加配料示例：

Wonderlight^TM：Sederma公司销售的增亮剂。在冷却之前，可以将3％添加到C相之前的配制过程当中。

示例18：流体凝胶形式

配料	INCI名称	重量％
			A相
H₂O	水	Qsp100
			山梨酸钾	山梨酸钾	0.10
B相
			Renex G26	甘油聚醚-26	5.00
苯氧乙醇	苯氧乙醇	Qs
			Crovol A70	PEG-60杏仁甘油酯	0.50
N-Hance HP40	羟丙基瓜儿胶	0.40
			Keltrol CG-SFT	黄原胶	0.50
C相
			Tween 20	多山醇酯-20	1.00
香料	香料	0.10
			D相
根据本发明的配料		3.00

规程：称取A相，将它放置于螺旋浆搅拌之下。称取并匀化B相。在螺旋浆搅拌之下，将B相加入A相。均匀混合。称取C相并匀化。在螺旋浆搅拌之下，将C相加入A+B相。均匀混合。将D相加入前一相，混合均匀。

能够添加到本配方的附加配料示例：

Skin Tightener^TM：Sederma公司销售的配料，醇溶蛋白与聚甘露糖醛酸的联合体；它能使增亮和修平。能够将10％添加在配制末尾。

G)合欢提取物的糖化活性的体内评估

在下面给出的体内试验中，已经显示了合欢提取物根据本发明的糖化活性。

根据示例1制备的霜剂用于这些试验。

原理

针对一组24名志愿者，执行了药效试验；这些人的脸上呈现出可见的应激迹象(疲劳迹象)，或净晚期糖化皮肤水平。

此外，针对一组14名志愿者，通过采用胶条方法测量，评估晚期糖化最终产物(AGEs)的数量。对于具有相同特征的第二组20名志愿者，已经设法改善这种状况。

在本次研究中，使用几种互补的方法：

·使用下文说明的AGE-Reader^TM装置，通过它们自发荧光的体内测量，分析晚期糖化最终产物含量。

·测量从前臂获得的胶条中的AGE含量(体外法)。

·使用的皮肤疲劳和松驰分析。

·由志愿者在睡醒时记录的、自行完成的对面部疲劳的诸如-每天一次和每周一次的评估。

协议

具体研究纳入标准

选择“受激”皮肤研究中的妇女时，主要以年龄为基础-她们必须在50和70岁之间-而且，根据AGE-Reader^TM测量，显示出足够高水平的糖化产物。

对于疲劳迹象和胶条样品，志愿者必须具有面部疲劳迹象(黑眼圈，扭歪的面部特点，面色暗淡)，而且显示过度前臂松驰的皮肤。志愿者必须是活跃的人；报告说，她们没有足够的时间来休息。她们必须遵循一个15天的洗脱期(只使用安慰剂)。

另外，全部3项试验要求，在试验前的3个月内和试验期间，志愿者应保持在恒定的激素状态(在避孕或替代或治愈性处理方面没有变化)。

研究期间，她们必须只使用提供的化妆品。

研究类型和持续时间

研究的执行采用具有非侵入式测量的单盲方式，针对：

·具有受激皮肤的24名志愿者(平均年龄60岁[范围是53到69岁])；她们在她们的主要前臂上，涂抹根据本发明制造的日霜和晚霜。安慰剂霜剂则涂抹在对侧前臂上。

·具有疲劳迹象的14名志愿者(平均年龄43.5岁[范围是38到50岁])；她们在她们的一只前臂上，分别涂抹根据本发明的日霜和晚霜。安慰剂霜剂则涂抹在对侧臂上。

·具有疲劳迹象的20名志愿者(平均年龄43岁[范围是31到50岁])；她们分别在她们的面部和一只前臂上涂抹根据本发明的日霜和晚霜。

根据本发明的日霜和晚霜以按摩的方式每天抹一次，持续2个月；安慰剂霜剂一天抹两次。

研究以下面的图形汇总。

使用学生t试验或Wilcoxon非参数试验(如果必要)，进行了统计研究。在每个情况下，使用了关于配对系列的双尾测试。

耐受性

临床研究在医疗监视之下进行；结果显示，志愿者对产品的耐受性非常好。

1.使用AGE-Reader^TM，分析晚期糖化最终产物的含量

原理

AGE-Reader^TM(DiagnOptics Technologies公司)是允许对AGEs积累进行非侵入式测量的第一种医疗装置。志愿者的皮肤暴露到波长为370±50nm的光之下；它激活功能荧光基团，尤其是AGEs中的那些。反射光有选择性地通过50μm直径纤维传播，通过分光光度计测量。利益于这台装置，能够测定志愿者皮肤自发荧光和它们不同的AGE含量之间的相互关系。

实践中，志愿者将他/她的前臂放在仪器上，通过1cm²的窗口进行测量。

结果

表16：在涂抹了本发明的霜剂或安慰剂霜剂之后，通过配备AGE-Reader^TM的AF*测量的糖化产物含量的变化

*AF＝任意自发荧光单位，24名志愿者，n＝3次测量

结果显示，与安慰剂相比，在每天涂抹一次日霜、接着是晚霜，持续2个月后，发现了自发荧光中的明显差异。

这个下降幅度有-8.6％，反映了糖化最终产物含量的下降。非常明显，很大一部分志愿者都有反应(71％)。

2.研究胶条中的AGEs(体外研究)

原理

使用在具有可见皮肤疲劳迹象的志愿者(N＝14)自上的试验，确认利用AGE-Reader^TM看到的，在根据本发明的合欢提取物处理过的培养细胞上和外植体中(查看体外部分)AGEs的下降。

测量分别在前臂上涂抹了本发明的日霜和晚霜、为期两个月之前与之后获得的胶条上的AGE含量。

将胶条取下，贮存在-80℃。将胶条上的蛋白质萃取到缓冲溶液中，然后将均浆装载到聚丙烯酰胺凝胶上，以运行蛋白质，并将它们转移到硝化纤维素膜上，用于通过Western Blot的显影。再次使用在体外部分中已经描述的抗-AGE抗体。在代表角蛋白的大约60kDa的主波段上，通过化学发光法来显影斑点。总的蛋白质与标准化结果平行测量。

结果

表17：涂抹了根据本发明的霜剂之后AGE蛋白质含量(角蛋白)的变化(N＝14名志愿者)。

结果显示，AGEs在T0和T2个之间是增加的；而且，由于使用了根据本发明含有合欢提取物的霜剂，这个增大的量减小了27％。

3.利用原理分析皮肤疲劳和松驰

RV 600(Courage&Khazaka公司)测量，在波已经从它的表面发射之后，声波在皮肤中的传播时间：这个指标被称为共振运行时间(简称为RRT)。仪器的皮肤探头包括到接收器距离为2mm的声波发射器。由于声波在皮肤中的传播量不能超过0.5mm，所以它允许检测真皮的品质。声音在材料中的传播速度取决于材料的密度和张力。声波最先跟踪由真皮纤维形成的“线”。因此，这些纤维的条件直接影响波的传播。

通过围绕其轴线逐步旋转探头，能够映射不同的传播时间。疲劳的皮肤具有较低的密度，较少的拉紧纤维，从而增大传播时间。另外，具有不良肤色的疲劳的皮肤也具有折痕，伴随着优先的方向(皮肤各向异性)。这改变了沿着某些测量轴线的传播时间。

利用 RV 600获得的若干个参数能描述皮肤状态的特征。从这些参数当中，使用了下列参数：

·最大共振运行时间(简称为RRTmax)；它反映皮肤中声音的“迟缓”，从而反映皮肤疲劳。

·TRRTmax/RRTmin比；它展示皮肤的各向异性性质，比例的大小反映在所有方向上不均匀的皮肤的“松驰度”。

结果

表18：运用了根据本发明的霜剂之后迟缓(皮肤疲劳)和松驰的变化

20名志愿者s，n＝3次重复

结果显示，运用根据本发明的霜剂，降低了志愿者中声音传播的迟缓；从第1个月降低了26.3％，从第2个月降低了30.7％。

与此同时，与T0相比，根据RRTmax/RRTmin比例测量的松驰从T1月下降了40.2％；2个月之后发现了改善(-44％)。

运用了根据本发明的霜剂后，皮肤从而恢复了其活力，这可以通过迟缓和松驰的降低展示出来。利用的这些结果显示，含本发明合欢提取物的霜剂明显改善了真皮纤维的密度和均匀性。

4.面部疲劳的自行评估

原理

为了获得关于面部疲劳的“原始”状态的信息，每个志愿者醒来后，在镜子前，评估现实生活情形中不同的疲劳准则。各种疲劳准则和研究设计如下图所示。

结果

a.总体疲劳

表19：在运用本发明的霜剂期间，面部疲劳的减少(20名志愿者)

每两天一次，志愿者对他们总体面部疲劳的自行评估揭示，通过运用本发明的霜剂，总体疲劳得到恒定的规则性下降。

20名志愿者的平均分数是从2.05(代表中度面部疲劳)到1.15(代表轻微面部疲劳)。

这说明，总体疲劳的印象在T1月下降了36％，在2个月后下降了50％。从第10天开始，这种下降变得非常明显(p<0.01)。

b.具体指标

在调查问卷中，志愿者也填写了关于黑眼圈、眼袋、扭歪的面部特点和面色暗淡的一些细节。志愿者完成的每星期一次自行评估的结果完全证实了总体面部疲劳印象的重要下降。检验的四个指标的总体强度从T1月开始下降，在T2月时看到明显的附加下降。

表20：通过运用本发明的霜剂，清晨面部疲劳迹象的减少(20名志愿者)。

“眼袋”指标从30分下降到24分(T1月，-20％)，然后下降到19分(T2月，-37％)。

“黑眼圈”指标从33分下降到29分(T1月，-12％)，然后下降到20分(T2月，-40％)。

“扭歪的面部特点”指标从37分下降到29分(T1月，-22％)，然后下降到18分(T2月，-51％)。

“面色暗淡”指标从22分下降到16分(T2月，-27％)。

2个月的处理后，志愿者报告她们的目标疲劳迹象变得轻微，或不存在。

H)合欢提取物和豨莶苷组合物的糖化活性的体内评估

进行了三个独立的临床试验，以展示产品对下列对象的作用：

1.皱纹和眼睑

2.黑眼圈

3.Eye look(眼睛外观)

对于这些试验，使用了段落F)的示例13中的霜剂。

1.皱纹和眼睑上的试验

原理

本研究的目的是证明，在一天两次、运用了56天之后，皱纹和眼睑褶皱的减少。

参加研究的小组是22名白人妇女，平均年龄60岁(40-79)，眼角有鱼尾纹皱纹。研究采用与安慰剂对比的单盲方式。志愿者在眼睛轮廓上涂抹根据本发明的霜剂，一天两次，持续56天。安慰剂霜剂在对侧涂抹。

在不同方法与每一次的研究相关(T0，T56j)。

·Silflo^TM指纹，用于鱼尾纹的量化。

·FOITS技术，用于眼睑褶皱的量化。

·Photo bench(照片工作台)，用于专家小组对鱼尾纹和眼睑褶皱的量化。

结果

a.Silflo^TM指纹，用于鱼尾纹的量化

在每个测量时间，利用Silflo^TM硅酮聚合物，在选择的部位(鱼尾纹)，做出皮肤的阴模。然后，通过Quantirides Station^TM(Monaderm公司)，用阴影技术扫描每个铸模。为了简单，鱼尾纹的阴模用切向光照亮(LED灯；35°)。它在每个皱纹背后生成阴影。使用高分辨率数码相机(1920x1440像素)，执行图像采集。图像采用256灰度水平记录，然后通过特殊的Mountains Map^TM软件分析，以量化其减轻。

表21：

在运用根据本发明的霜剂2个月之后，注意到主要皱纹体积(-14％)、平均深度(-9.5％)、以及皱纹开度(+11.2％)的非常明显改善(p<0.01)。这些改善也明显不同(p<0.05)于利用安慰剂霜剂而发生的极小变化。

b.FOITS技术，用于眼睑褶皱的量化

原理

FOITS(快速光学体内成像系统)基于对研究区域(此处是眼睑)的条纹投影的分析。使用的装置是由投影仪和照相机组成的Dermatop^TM(EOTech公司)。这两个仪器是整体的，构成一个特定的角度，用于三角测量。研究区域减轻造成的变形条纹，允许对减轻进行3维重建。

然后，使用采集分析的3D Moutains Map^TM软件，提取眼睑褶皱的轮廓。计算褶皱的高度，以及它的表面积。

结果

表22：

在运用根据本发明的霜剂2个月之后，注意到褶皱高度20％的明显减小(p<0.01)。这个减小也明显不同(p<0.05)于在接受安慰剂的部位上观察到的几乎-1％的微小变化。

就下降表面而言，在运用根据本发明的霜剂2个月之后，存在13％的明显减小(p<0.05)。在安慰剂侧，则没有变化。产品和安慰剂之间的差异不明显，但趋势处在p＝0.16的范围内。

c.Photo bench(照片工作台)，用于专家小组对鱼尾纹和眼睑褶皱的量化

原理

通过包括高清Nikon D70数码相机、特殊的照明和志愿者约束系统的摄影工作台HeadScan^TM(Orion concept公司)，实现了照片的标准化。自愿者的姿势、照片和照明设置均被标准化，并控制得能够在以后再现。对于这个评估，照片在漫射光中做成，以便正确地看清颜色和减轻，并具有尽可能接近现实的结果。

将在T0和T56j拍摄的眼睛周围的区域(眼睛轮廓)一起呈现给六名专家；要求他们说出是否同意下列声明：

1。眼睑褶皱不太明显。

2.皮肤看起来光滑(细线和皱纹减少)。

结果

·问题“褶皱不太明显，皮肤比较光滑？”的结果表明，相对于10.5％的不利作用，47％的答复给出产品的有利作用(p<01)。另外，与安慰剂的比较展示，这些47％的有利答复明显好于运用了安慰剂后获得的28％的有利答复。

·问题“皮肤似乎比较光滑(皱纹和细线减少)？”展示，相对于只有4％的不利作用，49％答复显示出产品的有利作用(p<01)。另外，与安慰剂的比较展示，这些49％的有利答复明显好于运用了安慰剂后获得的30％的有利答复。

·

2.在黑眼圈上的试验

原理

该研究的目的是证明，一天两次，运用了28天和56天后，黑眼圈的减少。

参加研究的小组是24名白人妇女，平均年龄18岁，眼睛底下有黑眼圈。研究采用与安慰剂对比的单盲方式。志愿者在眼睛轮廓上涂抹根据本发明的霜剂，一天两次，持续28天和56天。安慰剂霜剂在对侧涂抹。

对于研究的不同时间测量(T0，T28d和T56d)，使用照片工作台来获得标准化照片。然后，分析黑眼圈的颜色。

拍摄标准化照片采用的照相系统包括，配备了微距镜头(AF-S Micro NikkorTM60mm)的专业照相机(D300NikonTM)的闪光系统(R1C1NikonTM)。

在测量黑眼圈时，可以认为，血红蛋白在眼部轮廓区域中的累积会产生颜色变化。这种变化与皮肤颜色的红色分量和蓝色分量的变化相关(紫色是环的特性)。

然后，使用能够在基准空间中使用的图像分析软件CIELabTM。CIELab色度空间通过3个坐标来定义颜色：

L*：从0(黑色)到100(白色)

a*：从100(红色)到-100(绿色)

b*：从100(黄色)到-100(蓝色)。

在目前的情形中，期望+a*和-b*的减小。

通过定义圆圈的面积、并将它与附近的区域(我们案例中的模板)比较，完成眼圈颜色的评估。这样，就能确定关于红色分量的Δa和关于蓝色分量的Δ-b。

结果

表23：

在运用了本发明的霜剂30天后，发现红色分量减少4.5％；与之相比，用安慰剂处理的一侧则是增大了+0.8％。本发明的霜剂和安慰剂之间作用的差异是明显的，p<0.05。

60天后，本发明霜剂的效果提高，具有高达7.5％的明显减少量(p<0.05)；而用安慰剂霜剂处理的一侧则显示了3％的退化。本发明的霜剂和安慰剂霜剂之间作用的差异非常明显，p<0.01。

表24：

在应用本发明霜剂后的30天，发现蓝色分量减少3.2％；与之相比，用安慰剂处理的一侧则是增大了1.9％。

60天后，本产品的效果使得蓝色分量明显减少了8.2％(p<0.05)；而用安慰剂霜剂处理的一侧则显示了4.1％的退化。本发明的霜剂和安慰剂之间作用的差异是明显的，p<0.05。

3.对眼睛外观的作用的试验

原理：本发明霜剂的药效研究是为了证明志愿者在他们眼睛外观(整体疲劳，黑眼圈，眼袋，细线)方面感觉到的改善。对于持续28天的每天两次的涂抹，每2-3天进行一次评估。

参加研究的小组是105名白人妇女，平均年龄51岁(在40到60岁之间)，声称具有疲劳的外观，并展示出下列2到3个特征之一：眼睛周围的细线，眼袋，黑眼圈。志愿者在眼睛轮廓上涂抹根据本发明的霜剂，一天两次，持续28天。

评估的执行是在清晨，在白天第一次涂抹之前，通过自行评估调查问卷。

要求志愿者回答4个问题：

1.你如何评价起床时你眼睛的疲劳情况？(全局)

2.你如何评价细线存在的重要性？

3.你如何评价眼袋的重要性？

4.你如何评价黑眼圈的重要性？

答案(得分)是：无(0)，轻微(1)，中度(2)，重要(3)。

问题1在每个星期一、星期三和星期五提出(28天中13次评估)；而问题2，3和4只是每星期提问一次(28天中5次评估)。

表25：全体成员对眼睛外观特征的平均评估。

结果作为平均分数表示。在第7，14，21，28天，条目平均值的减少表示为变化的％。统计试验是t学生试验。

根据对上文结果表的分析，可以说：

·本发明的霜剂改善了起床时眼睛外观的疲劳和黑眼圈、眼袋和细线。在28天使用结束时，对于4个列出的条目，参与者的评估结果是平均减少了42％到46％。这种减少在统计学上有意义，p<0.01。

·与D0时的眼睛外观相比，从应用的第2天开始，眼睛外观的疲劳显示出明显减少(-9％，p<0.01，2.7分相对于2.28)；在D7时，它达到-16％。

·与D0时的情况相比，在应用了7天之后，黑眼圈、眼袋和细线的外观显示出明显减少(细线和眼袋为16％，p<0.01；黑眼圈为-22％，p<0.01)。

Claims

1.合欢提取物在改善皮肤疲劳现象的局部化妆品处理上的应用,所述合欢提取物是合欢的花和/或种子的水和/或醇的提取物，所述改善皮肤疲劳现象选自改善眼袋、黑眼圈和皮肤的发光度，其中所述醇是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或其混合物。

2.根据权利要求1的应用，其特征在于，提取物被稀释在生理学上可以接受的赋形剂中。

3.根据权利要求1的应用，其特征在于，提取物被稀释在水-甘油的基体中。

4.根据权利要求1到3任一项的应用，其特征在于，提取物组合了在下列范围当中选择的一个或多个附加活性成分：增亮，抗发红，抗色斑，镇静，用于处理过敏或反应性皮肤，紫外线防晒剂，保湿，润湿剂，脱落，修平，调色，抗老化，解毒，抗毛发再生，作用于皮肤屏障，抗痤疮，作用于皮脂分泌，消光，抗炎，抗氧化剂，抗糖化，促进血液循环，肽类，维生素类活性成分。

5.根据权利要求4的应用，其特征在于，附加的活性成分是豨莶苷。

6.根据权利要求5的应用，其特征在于，豨莶苷是从豨莶草提取的。

7.用于改善皮肤疲劳现象的局部化妆品处理组合物，所述组合物包含处于生理学上可以接受的介质中的合欢提取物和豨莶苷，所述合欢提取物是合欢的花和/或种子的水和/或醇的提取物,其中所述醇是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或其混合物；所述合欢提取物或豨莶苷存在的数量范围是从0.001％到10％，基于组合物的总重。

8.根据权利要求7的组合物，其特征在于，豨莶苷是从豨莶草提取的。

9.根据权利要求7的组合物，其特征在于，包括在下列范围当中选择的一个或多个附加活性成分：增亮，抗发红，抗色斑，镇静，用于处理过敏或反应性皮肤，紫外线防晒剂，保湿，润湿剂，脱落，修平，调色，抗老化，解毒，抗毛发再生，作用于皮肤屏障，抗痤疮，作用于皮脂分泌，消光，抗炎，抗氧化剂，抗糖化，促进血液循环，肽类，维生素类活性成分。

10.根据权利要求7-9任一项的组合物，所述组合物用于皮肤疲劳的化妆品处理。

11.根据权利要求10的组合物，所述组合物用于眼睛轮廓的化妆品处理。

12.根据权利要求11的组合物，所述组合物用于黑眼圈和眼袋的化妆品处理。

13.合欢提取物和豨莶苷相联合在制备用于改善皮肤疲劳现象的局部化妆品处理组合物中的用途，其中所述合欢提取物是合欢的花和/或种子的水和/或醇的提取物,其中所述醇是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或其混合物。