CN104198612B - 一种乌拉尔甘草皂苷a的含量测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，包括（1）设置色谱条件；（2）对照品溶液的制备；（3）供试品溶液的制备；（4）精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，通过高效液相色谱法测量得到乌拉尔甘草皂苷A的含量。本发明采用高效液相色谱法（HPLC）来测定乌拉尔甘草皂苷A的含量，其具有专一性，能够准确、简便，快捷地测定乌拉尔甘草皂苷的含量。且采用梯度洗脱进行分析，有较好的分离效果，还能够缩短分析时间。经过试验表明，所测成分分离度，线性关系，重现性，精密度，稳定性，回收率均较好。
Description
技术领域
本发明涉及一种含量测定方法，尤其是涉及一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，属于化学成分检测技术领域。
背景技术
甘草为豆科植物乌拉尔甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草G.inflata Bat.、光果甘草G. glabra L. 的干燥根及根茎。其味甘，性平，归心、肺、脾、胃经。具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药的功效。药理研究表明，甘草具有抗氧化、抗病毒、抗抑郁、抗炎、抗肾炎以及保肝活性。甘草中三萜皂苷是其主要的活性物质基础，主要由 1 分子的五环三萜苷元与 2分子的葡萄糖醛酸构成。相关研究表明，这些主要的皂苷类成分具有保肝、抗癌、抗炎、抗病毒以及神经保护活性等作用。对甘草中皂苷类成分进行了分离得到 14 个化合物，分别鉴定为uralsaponin C（1）、uralsaponin D（2）、licorice-saponin A3（3）、uralsaponin F（4）、22β-acetoxyl-glycyrrizin（5）、24-hydroxyl-licorice-saponin E2（6）、licorice-saponin E2（7）、licorice-saponin G2（8）、22β-acetoxyl- glyrrhaldehyde（9）、3β-O-[β-D-glucuronopyranosyl- (1→2)-β-D-glucuronopyranosyl]-glycyrretol（10）、araboglycyrrhizin（11）、licorice-saponin J2（12）、甘草酸（glycyrrhizin，13）、单葡糖醛酸基甘草次酸（glycyrrhetic acidmonoglucuronide，14）。其中化合物10即为乌拉尔甘草皂苷A。
现有专利和文献资料中仅有乌拉尔甘草的鉴别和成分研究的报道，如《乌拉尔甘草中皂甙的研究》和《乌拉尔甘草皂苷类成分研究》以及申请号为201310231850.8的专利《一种乌拉尔甘草与胀果甘草种子的鉴定方法》，并无对乌拉尔甘草皂苷A的含量测定的方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种重现性、精密度、稳定性均有较大优势的乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）设置色谱条件：室温，相对湿度25~40%；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以浓度为1%的冰醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速：0.8~1.2ml/min，柱温25~40℃，检测波长250~257nm；
；
（2）对照品溶液的制备：精密称取乌拉尔甘草皂苷A对照品，加浓度为50%-100%的乙醇溶解制成对照品溶液；
（3）供试品溶液的制备：称取乌拉尔甘草粗提物，加浓度为50%-100%的乙醇，超声溶解5~20分钟，放冷，即得；
（4）测定法：精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，通过高效液相色谱法测量得到乌拉尔甘草皂苷A的含量。
进一步，步骤（1）中所述的室温为20℃，相对湿度为35%，流速为1ml/min；柱温为30℃，检测波长为252nm。
步骤（1）中所述的梯度洗脱按下表规定进行：
。
步骤（2）中所述的对照品溶液的浓度为0.1~0.5mg/ml，优选为0.2mg/ml。
步骤（2）中所述的乙醇的浓度优选为80%。
步骤（3）中所述的供试品溶液的浓度为0.2~2mg/ml，优选为1mg/ml。
此外，步骤（3）中所述的超声时间优选为10min。
本发明的有益效果为：本发明采用高效液相色谱法（HPLC）来测定乌拉尔甘草皂苷A的含量，其具有专一性，能够准确、简便，快捷地测定乌拉尔甘草皂苷的含量。且采用梯度洗脱进行分析，有较好的分离效果，还能够缩短分析时间。经过试验表明，所测成分分离度，线性关系，重现性，精密度，稳定性，回收率均较好。
具体实施方式
下面给出本发明的具体实施例，详细描述本发明的技术特征。
下述实施例中检测仪器：岛津高效液相色谱仪，包括LC 10ATvp plus二元泵，SPD10Avp plus紫外检测器，LC-solution色谱工作站。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。乌拉尔甘草粗提物由江苏天晟药业有限公司提供，乌拉尔甘草皂苷A对照品由江苏天晟药业有限公司研发中心提供，其中，乌拉尔甘草皂苷A经1H,13C鉴定,HPLC归一化纯度为98%。
实施例1
1 色谱条件与系统适应性
色谱柱：C18色谱柱（Agilent TC-C18（2）4.6×250mm，5μm）；以乙腈为流动相A，以1%冰醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速：1ml/min，柱温30℃，检测波长252nm，
。
2 实验方法与结果
2.1 对照品溶液的制备
精密称取乌拉尔甘草皂苷A对照品10.21mg，置50ml量瓶中，加80%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备:
精密称取乌拉尔甘草粗提物50.37mg，置50ml量瓶中，加一定量的80%乙醇，超声溶解，10分钟后，放冷，再用乙醇稀释至刻度，即得。
2.2测定结果
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定。
供试品在和对照品的相同保留时间上出现相同的峰，同时计算得乌拉尔甘草皂苷A草定含量为20.8%。
实施例2
1 色谱条件与系统适应性
色谱柱：C18色谱柱（Agilent TC-C18（2）4.6×250mm，5μm）；以乙腈为流动相A，以1%冰醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速：0.8ml/min，柱温25℃，检测波长250nm，
。
2 实验方法与结果
2.1 对照品溶液的制备：
精密称取自制乌拉尔甘草皂苷A对照品9.98mg，置100ml量瓶中，加60%乙醇溶解并稀释至刻度，即得。
2.2 供试品溶液的制备:
精密称取乌拉尔甘草粗提物50.51mg，置100ml量瓶中，加一定量的60%乙醇，超声溶解，15分钟后，放冷，再用乙醇稀释至刻度，即得。
2.3 含量测定
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定。
在对照品相同保留时间，样品出现相同的峰，计算得乌拉尔甘草皂苷A含量为19.5%。
实施例3
1 色谱条件与系统适应性
色谱柱：C18色谱柱（Agilent TC-C18（2）4.6×250mm，5μm）；以乙腈为流动相A，以1%冰醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速：1.2ml/min，柱温40℃，检测波长257nm，
。
2 实验方法与结果
2.1 对照品溶液的制备：
分别精密称取乌拉尔甘草皂苷A对照品12.27mg，置25ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备:
精密称取乌拉尔甘草粗提物50.41mg，置25ml量瓶中，加一定量的无水乙醇，超声溶解，20分钟后，放冷，再用乙醇稀释至刻度，即得。
2.3 含量测定：
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定。
在对照品相同保留时间，样品出现相同的峰，计算得乌拉尔甘草皂苷A含量为21.7%。
以上所述仅是本发明专利的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明专利原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明专利的保护范围。
Claims (8)
1.一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)设置色谱条件：室温，相对湿度35％，所述的室温为20℃；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以浓度为1％的冰醋酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为1ml/min，柱温为30℃，检测波长为252nm，
所述的梯度洗脱如下：
(2)对照品溶液的制备：精密称取乌拉尔甘草皂苷A对照品，加浓度为50％-100％的乙醇溶解制成对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：称取乌拉尔甘草粗提物，加浓度为50％-100％的乙醇，超声溶解5～20分钟，放冷，即得；
(4)测定法：精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，通过高效液相色谱法测量得到乌拉尔甘草皂苷A的含量。
2.根据权利要求1所述的一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，步骤(1)中所述的梯度洗脱如下：
。
3.根据权利要求1所述的一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，步骤(2)中所述的对照品溶液的浓度为0.1～0.5mg/ml。
4.根据权利要求1或3所述的一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，步骤(2)中所述的对照品溶液的浓度为0.2mg/ml。
5.根据权利要求1所述的一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，步骤(2)中所述的乙醇的浓度为80％。
6.根据权利要求1所述的一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，步骤(3)中所述的供试品溶液的浓度为0.2～2mg/ml。
7.根据权利要求1或6所述的一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，步骤(3)中所述的供试品溶液的浓度为1mg/ml。
8.根据权利要求1所述的一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，步骤(3)中所述的超声时间为10min。
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