CN104181244A

CN104181244A - 中药材中有机氯类农药残留量的测定方法

Info

Publication number: CN104181244A
Application number: CN201410409334.4A
Authority: CN
Inventors: 谢建军; 何曼莉; 陈捷; 陈文锐
Original assignee: Inspection and Quarantine Technology Center of Guangdong Entry Exit Inspection and Quarantine Bureau
Current assignee: Inspection and Quarantine Technology Center of Guangdong Entry Exit Inspection and Quarantine Bureau
Priority date: 2014-08-19
Filing date: 2014-08-19
Publication date: 2014-12-03
Anticipated expiration: 2034-08-19
Also published as: CN104181244B

Abstract

本发明提供了一种中药材中有机氯类农药残留量的测定方法，建立GPC-SPE-GC法同时检测中药材中17种有机氯农药残留量，本发明包括如下步骤：提取、GPC初步净化、固相萃取二元净化：采用氨丙基柱NH₂SPE：200mg/3mL和石墨化碳黑柱GCB SPE：250mg/3mL联用，依次净化；用体积比为8∶2的正己烷∶丙酮溶液洗脱。本发明方法相对于传统的浓硫酸净化法具有较高的灵敏度，安全性，为我国中药材安全生产，出口及食品药品的安全监督提供可靠的检测手段，值得推广应用。

Description

中药材中有机氯类农药残留量的测定方法

技术领域

本发明属于中药材测定技术领域，涉及中药材中有机氯类农药残留量的测定方法，更具体的说，是涉及利用GPC-SPE-GC方法测定中药材中17种有机氯类农药的残留量。

背景技术

有机氯类农药是一种组成成分含有有机氯元素的有机化合物，对防治植物病虫害起到重要作用，是农业上迄今为止生产量最大、使用面积最广的一类有机合成农药。其具有蒸气压低、挥发性小、脂溶性强以及结构稳定，不易被生物体内酶降解等系列特性，长期使用会造成环境污染、人和动物的蓄积毒性。有机氯农药干扰人体内分泌系统，直接通过细胞介导而发挥其致癌性。2001年5月127个国家(包括中国)和地区的代表在瑞典斯德哥尔摩签署了“控制持久性有机污染物”的国际公约，严格禁止或限制使用12种持久性有机污染物，其中有机氯农药就占了9种：DDT、艾氏剂、氯丹、狄氏剂、异狄氏剂、七氯、灭蚁灵、毒杀芬、六氯苯。

中药是我国宝贵的文化遗产，但由于我国中药材种植长期处于小农经济状态，中药材生产基地建设零星分散，在中药材的种植过程中农药的滥用情况时有发生，导致中药材农药残留状况颇为严重。上海中医学院陈君等对全国300多种中药材的农药残留量进行调查，发现全部样品存在有机氯类农药的残留情况。2009至2011年，世界绿色和平组织对中国各大超市抽查，发现含有不同程度的农药残留，其中就包括有机氯农药。特别是2013年，世界绿色和平组织对我国的中药产品进行抽样检测，发现菊花、枸杞、金银花等七种中药产品的36个样品，35个测出农药残留，32个检测出3种以上农药残留。目前，世界上许多国家都制定了有机氯农药的最大允许残留限量，一般其限量范围都在0.05～0.3mg/kg之间，个别的为1mg/kg或3mg/kg。

近年来，中药材中有机氯类农药残留的检测方法也在不断发展。文献报道有用正己烷进行提取，浓硫酸磺化对中药材(浙贝、白芍、白术、元胡、玄参)中的有机氯类农药进行多残留分析；也有用GC-NIC-MS进行分析的方法，前处理同样是用浓硫酸磺化法；这些方法不适合种类多样的中药材进行批处理，成本相对较高。我国现有中药材检测有机氯类残留量检测方法标准SN 0181-1992《出口中药材中六六六，滴滴涕残留量检验方法》和DB 12/183-2003《人参中六六六、滴滴涕、五氯硝基苯最高残留限量和测定方法》，及2010年版中国药典方法。目前，这些文献或标准方法前处理均是以浓硫酸磺化为主，且一次同时检测有机氯类农药残留种类少，主要是检测六六六、滴滴涕和五氯硝基苯，对残留检测操作人员存在一定的安全风险，效率低；此外，以环戊二烯为原料农药，如氯丹、七氯、硫丹等，一般不能用三氧化硫或其水合物进行磺化，会产生一定的损失；脂肪族化合物或是不起作用，或是使脂肪族化合物发生氧化分解，从而生成复杂的混合物。因此，建立高效、安全、快速的中药材中有机氯类农药多残留分析方法是非常重要的。本方法可以一次同时检测17种有机氯类农药，前处理方法安全、环保、快速、高效，可为我国中药材安全生产、出口创汇及食品药品的安全监督提供可靠的检测手段。

发明内容

为克服上述技术缺陷，本发明提供了一种中药材中有机氯类农药残留量的测定方法，建立GPC-SPE-GC法同时检测中药材中17种有机氯农药残留量，该方法相对于传统的硫酸净化法具有较高的灵敏度和安全性。

本发明的方法采用如下技术方案，包括如下步骤：

(1)提取：对中药材前处理后，用体积比为1：1的乙酸乙酯：丙酮提取，得到提取液；

(2)初步净化：对所述步骤(1)中得到的提取液采用凝胶渗透色谱GPC净化，得到浓缩液；

(3)固相萃取二元净化：采用氨丙基柱NH₂SPE：200mg/3mL和石墨化碳黑柱GCBSPE：250mg/3mL联用，依次净化；用体积比为8：2的正己烷：丙酮溶液洗脱；

所述步骤(1)中对中药材前处理为：取中药材粉末加入去离子水浸泡。

所述步骤(1)中用体积比为1：1的乙酸乙酯：丙酮提取的操作如下：将处理过的中药材加入体积比为1：1的乙酸乙酯：丙酮15mL、8g氯化钠，经涡旋器震荡均匀后置于水平往复式摇床提取10min，再于台式高速冷冻离心机4500r/min离心5min，吸取上清液于另一50mL离心管中，再加入10mL体积比为1：1的乙酸乙酯：丙酮重复提取，合并上清液。

所述步骤(2)中凝胶渗透色谱GPC净化操作如下：取步骤(1)中得到的10mL所述提取液用氮吹仪浓缩至约0.5mL，用体积比为1：1的环己烷：乙酸乙酯溶液定容至10mL，上GPC进行净化，收集680-1080s的流出液，浓缩，用体积比为8：2的正己烷：丙酮溶液定容至2mL。

所述步骤(3)中采用氨丙基柱NH₂SPE：200mg/3mL净化的操作如下：所述氨丙基柱中加入1g无水硫酸钠，用体积比为8：2的正己烷：丙酮4mL分两次活化，倒去活化液，将步骤(2)中得到的所述浓缩液过柱，再用体积比为8：2的正己烷：丙酮6mL分3次洗脱，合并洗脱液，吹氮浓缩至少于1mL，得到浓缩液。

所述步骤(3)中采用GCB SPE：250mg/3mL柱净化的操作如下：所述石墨化碳黑柱用体积比为8：2的正己烷：丙酮4mL分两次活化，倒去活化液，将所述氨丙基柱净化得到的浓缩液过柱，并用体积比为8：2的正己烷：丙酮6mL分3次洗脱，合并洗脱液，吹氮浓缩至少0.5mL时，加入1mL正己烷进行溶剂交换，继续吹氮浓缩至少于0.5mL。

所述步骤(3)中正己烷：丙酮溶液的洗脱体积为6mL。

所述有机氯类农药包括α-666、γ-666、七氯、艾氏剂、β-666、δ-666、α-硫丹、反-氯丹、顺-氯丹、p’p-DDE、狄氏剂、异狄氏剂、o’p-DDT、p’p-DDT、β-硫丹、p’p-DDD和硫丹硫酸酯中的至少一种。

本发明方法相对于传统的浓硫酸净化法具有较高的灵敏度，安全性，为我国中药材安全生产，出口及食品药品的安全监督提供可靠的检测手段，值得推广应用。

附图说明

图1为17种有机氯农药化合物用GPC分段收集累积回收率曲线图，其中图1A是α-666、γ-666、七氯标准品用GPC分段收集累积回收率曲线图；图1B是艾氏剂、β-666、δ-666、α-硫丹标准品用GPC分段收集累积回收率曲线图；图1C是反式氯丹、顺式氯丹、p’p-DDE、狄氏剂、异狄氏剂标准品用GPC分段收集累积回收率曲线图；图1D是o’p-DDT、p’p-DDT、β-硫丹、p’p-DDD和硫丹硫酸酯标准品用GPC分段收集累积回收率曲线图；

图2为七氯和硫丹标准品洗脱实验结果图，其中，图2A为七氯在GCB、NH₂、Florisil、Al₂O₃SPE上的洗脱曲线，图2B为硫丹在GCB、NH₂、Florisil、Al₂O₃SPE上的洗脱曲线；

图3为黄芪空白样品通过3种SPE小柱(NH₂SPE、GCB SPE、Florisil SPE)两两组合净化后的色谱图，其中图3A为GCB SPE和Florisil SPE联用净化后的色谱图；图3B为NH₂SPE和Florisil SPE联用净化后的色谱图；图3C为GCB SPE和NH₂SPE净化后的色谱图；

图4为17种有机氯农药标准品在NH₂SPE和GCB SPE联用后的淋洗曲线；图4A为α-666、γ-666、七氯、艾氏剂的淋洗曲线，图4B为β-666、δ-666、α-硫丹、反-氯丹的淋洗曲线，图4C为顺-氯丹、p,p-DDE、狄氏剂、异狄氏剂的淋洗曲线，图4D为o,p-DDT、p,p-DDT、β-硫丹、p,p-DDD、硫丹硫酸酯的淋洗曲线；

图5为黄芪空白、17种有机氯农药的标准(10μg/L，B)和黄芪添加标准(10μg/L，C)色谱图；其中，图5A为黄芪空白样品的色谱图，图5B为17种有机氯农药的标准(10μg/L)的色谱图，图5C为黄芪空白样品添加标准(10μg/L)的色谱图(图中编号对应表5化合物)。

具体实施方式

为使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，下列实施例中未提及的具体实验方法，通常按照常规实验方法进行。

仪器和试剂:

HP6890气相色谱仪：美国Agilent公司；

凝胶渗透色谱仪：美国J₂Scientific公司；

电子分析天平：BT124，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；

速冷冻离心机：3-16PK，美国Sigma公司；

吹氮浓缩仪：Turbovap LV，美国Zymark公司；

氨丙基柱：NH₂SPE，200mg/3mL，北京振翔工贸有限公司；

石墨化碳黑柱：GCB SPE，250mg/3mL,上海安谱科学仪器有限公司；

超纯水仪：Milli-Q，美国Millipore公司。

标准品：

α-666(98.0％)、β-666(98.5％)、γ-666(98.6％)、α-硫丹(97.0％)、β-硫丹(99.5％)、硫丹硫酸酯(99.5％)、顺-氯丹(99.6％)、反-氯丹(98.0％)、七氯(99.0％)、艾氏剂(98.0％)、狄氏剂(99.0％)、异狄氏剂(99.0％)均购自德国Dr.Ehrenstorger公司；

δ-666(100μg/mL)、p’p-DDE(100μg/mL)、o’p-DDT(100μg/mL)、p’p-DDD(100μg/mL)、p’p-DDT(100μg/mL)均购自农业部环境保护科研检测所；

丙酮、正己烷、乙酸乙酯、环己烷、氯化钠、无水硫酸钠：AR，广州化学试剂厂；

正己烷：HPLC，美国Fisher Scientific公司；

实验用水为超纯水。

样品来源：以下实施例所用药材样品均购自本地药房。

标准工作液的配制：

分别准确称取0.01g的α-666、β-666、γ-666、α-硫丹、β-硫丹、硫丹硫酸酯、顺-氯丹、反-氯丹、七氯、艾氏剂、狄氏剂及异狄氏剂于10mL棕色容量瓶，用HPLC正己烷配成1mg/mL标准贮备液。根据标准曲线和实验要求用HPLC正己烷稀释成相应质量浓度的标准工作液于棕色容量瓶中，4℃保存，有效期2个月。

标准曲线制作：

移取适合浓度的混合标准一级贮备液，用正己烷稀释成六个浓度水平的有机氯(α-666、β-666、γ-666、δ-666、p’p-DDE、o’p-DDT、p’p-DDD、p’p-DDT、α-硫丹、β-硫丹、硫丹硫酸酯、顺-氯丹、反-氯丹、艾氏剂、狄氏剂、异狄氏剂、七氯)混合标准工作溶液，质量浓度分别为10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL、100μg/mL。

气相色谱(GC)条件

毛细管色谱柱：Agilent HP-170130m×0.32mm×0.25μm；

载气：5.0mL/min持续7min，再以2℃/min的速度降至3.0mL/min，保持5min；

柱温：80℃保持1min，以40℃/min的速度升至180℃，保持3.0min，以30℃/min的速度升至250℃，保持10.0min；

进样口温度：250℃；

检测器温度：250℃；

载气：N₂(纯度>99.99％)；

进样量：1.0μL。

凝胶渗透色谱(GPC)条件

凝胶色谱净化柱：300mm×25mm(i.d)；

填料：Bio-Beads，S-X₃，38μm～75μm；

浓缩温度：45℃；

流动相：环己烷-乙酸乙酯(50+50，体积比)；

定容试剂：8：2的正己烷：丙酮溶液；

流速：5mL/min；

进样量：5.0mL。

实施例1：提取溶剂的选择

取中药材粉末于50mL离心管中，添加一定浓度的标准品溶液，加入去离子水浸泡20min，加入提取液提取。

本实施例根据有机氯农药的特性，首先进行了一元溶剂萃取实验，分别用25mL石油醚、正己烷、乙酸乙酯及丙酮进行提取。实验结果见表1，表1为一元溶剂萃取17种有机氯类农药回收率结果。

表1

提取溶剂	石油醚	正己烷	乙酸乙酯	丙酮
					回收率	60％～70％	30％～40％	50％～80％	110％～140％

试验结果表明，四种提取溶剂17种有机氯类农药回收率分别在60％～70％、30％～40％、50％～80％、110％～140％之间。根据实验结果可以看出，用石油醚、正己烷、乙酸乙酯作为提取剂的提取回收率偏低，而丙酮回收率偏高，结果表明使用一元溶剂萃取效果较差。

单独用丙酮作为提取溶剂，因其极性较大，会提取太多杂质。因此，又进行了二元溶剂萃取筛选实验，分别用25mL石油醚+乙酸乙酯(4：1)、丙酮+乙酸乙酯(1：1)、丙酮+正己烷(3：1)进行提取，实验结果见表2，表2为不同溶剂对17种农药的提取效果。

表2

表3为综合表2得出的二元溶剂萃取回收率结果。实验结果显示三种二元溶剂萃取的回收率分别集中在50％～70％、90％～110％、110％～140％。

表3

提取溶剂	石油醚+乙酸乙酯(4：1)	丙酮+乙酸乙酯(1：1)	丙酮+正己烷(3：1)
				回收率	50％～70％	90％～110％	110％～140％

从表2和表3可以很明显地看出，使用丙酮+乙酸乙酯(1：1)作为提取溶剂，17种农药的提取回收率很好，介于90％～110％之间；因此最终选定丙酮+乙酸乙酯(1：1)作为本实验的提取溶剂。

实施例2：GPC净化的效果实验

中药材种类繁多，各类中药材样品基体组成复杂；因此，净化对中药材中农药残留量的检测是非常关键的步骤。GPC是通过目标化合物与杂质之间的分子量差值大小去除中药材提取液中的大分子的脂类、色素及其他基体杂质。

凝胶渗透色谱(GPC)条件如下：

凝胶色谱净化柱：300mm×25mm(i.d)；

填料：Bio-Beads，S-X3，38μm～75μm；

浓缩温度：45℃；

流动相：环己烷-乙酸乙酯(50+50，体积比)；

定容试剂：8：2的正己烷：丙酮溶液；

流速：5mL/min；

进样量：5.0mL。

通过对17种有机氯标准品的分段收集，上机测定，发现，收集目标物时间为600-1080s时，标准品累积回收率基本都在98％～125％之间，图1为17种有机氯农药化合物GPC分段收集累积回收率曲线图，其中图1A是α-666、γ-666、七氯标准品用GPC分段收集累积回收率曲线图；图1B是艾氏剂、β-666、δ-666、α-硫丹标准品用GPC分段收集累积回收率曲线图；图1C是反式氯丹、顺式氯丹、p’p-DDE、狄氏剂、异狄氏剂标准品用GPC分段收集累积回收率曲线图；图1D是o’p-DDT、p’p-DDT、β-硫丹、p’p-DDD和硫丹硫酸酯标准品用GPC分段收集累积回收率曲线图。

实施例3：固相萃取柱(SPE)类型及淋洗液量的选择

由于中药材所含各种化学成分很多，种类复杂，仅仅用GPC净化达不到上机测定的要求；故仍需使用其他净化技术如固相萃取技术进一步净化。根据有机氯农药的特性，首先选用单一柱子净化，分别用石墨化碳黑固相萃取柱(GCB SPE，250mg/3mL)，氨丙基柱固相萃取(NH₂SPE，200mg/3mL)，佛罗里硅土固相萃取柱(Florisil SPE，1.5g/3mL)，中性氧化铝固相萃取柱(Al₂O₃SPE，2.0g/3mL)进行净化。采用10mL正己烷+丙酮(8：2)，对50ng/mL有机氯农药标准品进行淋洗曲线研究。

实验结果见表4，表4为石墨化碳黑固相萃取柱(GCB SPE，250mg/3mL)，氨丙基柱固相萃取(NH₂SPE，200mg/3mL)，佛罗里硅土固相萃取柱(Florisil SPE，1.5g/3mL)，中性氧化铝固相萃取柱(Al₂O₃SPE，2.0g/3mL)净化的回收率结果。

表4

实验结果显现为4种SPE柱回收率分别集中在108％～154％、86％～113％、99％～119％、74％～104％。Al₂O₃SPE用4mL正己烷+丙酮(8：2)即可将七氯、氯丹、滴滴涕、狄氏剂、异狄氏剂完全洗脱，而用10mL淋洗液也不能将艾氏剂、六六六、硫丹完全洗脱下来，表明Al₂O₃SPE对这些农药吸附严重，其他3种SPE柱用6mL正己烷+丙酮(8：2)即可将所需农药基本完全洗脱下来，所以本方法不考虑使用Al₂O₃SPE进行净化。

为了直观表示，仅以七氯和硫丹洗脱实验结果做图，见图2；其中，图2A为50ng/mL七氯用10mL正己烷+丙酮(8：2)分别在GCB、NH₂、Florisil、Al₂O₃SPE上的洗脱曲线，图2B为50ng/mL硫丹用10mL正己烷+丙酮(8：2)分别在GCB、NH₂、Florisil、Al₂O₃SPE上的洗脱曲线。

由于中药材都有大量自身的气味以及色素，选用单一的SPE小柱，去除杂质的效果不明显。为了得到较好的净化效果，将3种SPE小柱(NH₂SPE、GCB SPE、Florisil SPE)两两组合使用。结果见图3，图3为黄芪空白样品通过3种SPE小柱(NH₂SPE、GCB SPE、FlorisilSPE)两两组合净化后的色谱图，其中图3A为GCB SPE和Florisil SPE联用净化后的色谱图；图3B为NH₂SPE和Florisil SPE联用净化后的色谱图；图3C为GCB SPE和NH₂SPE净化后的色谱图。由图3可见，氨丙基柱(NH₂SPE，200mg/3mL)和GCB柱(GCB SPE，250mL)一起使用，各有机氯农药的回收率较好，杂质峰数量少，且其峰响应强度低。而其他两种组合杂质峰数量多，峰强度较大，会干扰结果分析。因此，最后选用氨丙基柱(NH₂SPE，200mg/3mL)和石墨化碳黑柱(GCB SPE，250mg/3mL)柱净化。

在本实施例中选用氨丙基柱和石墨化碳黑柱对17种有机氯农药进行净化。每次2mL正己烷+丙酮(8：2)淋洗液，共10mL淋洗液收集结果见表5和图4所示，图4为17种有机氯农药标准品在NH₂SPE和GCB SPE联用后的淋洗曲线；为了便于区分各标准品的淋洗曲线，分开4张图显示其结果，其中，图4A为α-666、γ-666、七氯、艾氏剂的淋洗曲线，图4B为β-666、δ-666、α-硫丹、反-氯丹的淋洗曲线，图4C为顺-氯丹、p,p-DDE、狄氏剂、异狄氏剂的淋洗曲线，图4D为o,p-DDT、p,p-DDT、β-硫丹、p,p-DDD、硫丹硫酸酯的淋洗曲线。此结果表明这17种农药使用6mL正己烷+丙酮(8：2)淋洗液都有较好的回收率。因此，最终选用6mL正己烷：丙酮(8：2)的淋洗液进行洗脱。

表5

实施例4：线性关系实验

取一系列不同质量浓度(10、20、30、40、50、100μg/L)的α-666、γ-666、七氯、艾氏剂、β-666、δ-666、α-硫丹、反-氯丹、顺-氯丹、p,p-DDE、狄试剂、异狄试剂、o’p-DDT、p’p-DDT、β-硫丹、p’p-DDD、硫丹硫酸酯的混合标准溶液，以仪器响应峰面积对混合标准的质量浓度做标准曲线。

结果见表6，表6为17种有机氯农药标准品回归曲线汇总表。该结果显示，17种有机氯农药的浓度(X)在10-100μg/L范围内与响应峰面积(Y)呈线性关系。

表6

实施例5：检出限与定量限

综合实施例1-3的实验结果，确定按如下方法对中药材样品进行处理：

①提取：取中药材粉末2.00g于50mL离心管中，加入10mL去离子水浸泡20min，加入乙酸乙酯：丙酮(1:1)提取液15mL，8g氯化钠，经涡旋器震荡均匀后摇床10min，再于台式高速冷冻离心机中4500r/min离心5min，吸取上清液于新另一50mL离心管中，再加入10mL乙酸乙酯：丙酮(1:1)提取液重复提取，合并上清液，混匀；

②净化：取上述10mL提取液用氮吹仪浓缩至约0.5mL，用环己烷：乙酸乙酯(1：1)定容至10mL，上凝胶渗透色谱(GPC)进行净化，收集600～1080s的流出液，浓缩，正己烷：丙酮(8：2)定容至2mL；凝胶渗透色谱(GPC)条件如下：

凝胶色谱净化柱：300mm×25mm(i.d)；

填料：Bio-Beads，S-X3，38μm～75μm；

浓缩温度：45℃；

流动相：环己烷-乙酸乙酯(50+50，体积比)；

定容试剂：正己烷：丙酮(8：2)；

流速：5mL/min；

进样量：5.0mL。

③氨丙基柱(200mg/3mL)，柱中加入1g无水硫酸钠，用正己烷：丙酮(8：2)4mL分两次活化，倒去活化液，将②中浓缩液过柱，再用正己烷：丙酮(8：2)6mL分3次洗脱，合并洗脱液，吹氮浓缩至少于1mL。

④GCB柱(250mg/3mL)用正己烷：丙酮(8：2)4mL分两次活化，倒去活化液，将③中浓缩液过柱，并用正己烷：丙酮(8：2)6mL分3次洗脱，合并洗脱液，吹氮浓缩至少于0.5mL时，加入1mL正己烷进行溶剂交换，继续吹氮浓缩至少于0.5mL。

⑤正己烷定容至1mL，装瓶上机。

按照上述样品处理的方法以黄芪样品基质进行加标实验，依据3倍信噪比峰面积对应的17种化合物含量为检出限(LOD)，10倍信噪比峰面积对应的化合物含量为定量限(LOQ)，经检测计算，17种化合物检出限在0.09-1.25μg/kg之间，结果见表7，表7为17种化合物加标回收率及相对标准偏差(RSD)以及检出限和定量限。

表7

选择黄芪样品为例，黄芪样品空白和添加17种有机氯的标准回收色谱图，结果见图5。图5为黄芪空白、17种有机氯农药的标准(10μg/L,B)和黄芪添加标准(10μg/L，C)色谱图，其中，图5A为黄芪空白的色谱图，图5B为17种有机氯农药的标准(10μg/L)的色谱图，图5C为黄芪添加标准(10μg/L)的色谱图(图中编号对应表5化合物)。

实施例6：实际样品测定

用所建立的GC-GPC-SPE方法检测了市场上在售的鸡蛋花、干枣、人参、丹参、高丽红参、鱼腥草、黄芪枸杞、菊花、玉竹、凉粉草、西洋参、百合、金银花等20种中药材，对其17种有机氯农药残留进行分析，检测26个批次中，7个样品被检测出农药残留，其中3个样品检测出3种以上农药残留，结果见表8，表8为实际样品测定结果。该结果表明，本方法能较好的对实际样品中17种有机氯农药残留进行分析。

表8

注：表中“-”表示未检出，“*”表示无标准方法；方法A：SN0181-1992《出口中药材中六六六，滴滴涕残留量检验方法》；方法B：DB12/183-2003《人参中六六六、滴滴涕、五氯硝基苯最高残留限量和测定方法》

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims

1.中药材中有机氯类农药残留量的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)提取：对所述中药材进行前处理后，用体积比为1：1的乙酸乙酯：丙酮提取，得到提取液；

(3)固相萃取二元净化：采用氨丙基柱NH₂SPE：200mg/3mL和石墨化碳黑柱GCBSPE：250mg/3mL联用，依次净化；用体积比为8：2的正己烷：丙酮溶液洗脱。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(1)中对中药材进行前处理为：取所述中药材粉末加入去离子水浸泡。

3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(1)中用体积比为1：1的乙酸乙酯：丙酮提取的操作如下：

在所述处理过的中药材中加入体积比为1：1的乙酸乙酯：丙酮，经涡旋器震荡均匀后，置于水平往复式摇床提取10min，再于台式高速冷冻离心机4500r/min离心5min，吸取上清液于另一离心管中，再加入体积比为1：1的乙酸乙酯：丙酮重复提取，合并上清液，混匀。

4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(2)中凝胶渗透色谱GPC净化操作如下：

取所述步骤(1)中得到的提取液10mL用氮吹仪浓缩至少于0.5mL，用体积比为1：1的环己烷：乙酸乙酯溶液定容至10mL，上GPC进行净化，收集600-1080s时流出液，浓缩，用体积比为8：2的正己烷：丙酮溶液定容至2mL。

5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(3)中采用氨丙基柱NH₂SPE：200mg/3mL净化的操作如下：

所述氨丙基柱中加入1g无水硫酸钠，用体积比为8：2的正己烷：丙酮分两次活化，倒去活化液，将所述步骤(2)中得到的浓缩液过柱，再用体积比为8：2的正己烷：丙酮分次洗脱，合并洗脱液，吹氮浓缩至少于1mL，得到浓缩液。

6.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(3)中采用石墨化碳黑柱GCB SPE：250mg/3mL柱净化的操作如下：

所述石墨化碳黑柱用体积比为8：2的正己烷：丙酮分次活化，倒去活化液，将所述氨丙基柱净化得到的浓缩液过柱，并用体积比为8：2的正己烷：丙酮分次洗脱，合并洗脱液，吹氮浓缩至少0.5mL时，加入正己烷进行溶剂交换，继续吹氮浓缩至少于0.5mL。

7.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(3)中正己烷：丙酮溶液的洗脱体积为6mL。

8.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述有机氯类农药包括α-666、γ-666、七氯、艾氏剂、β-666、δ-666、α-硫丹、反-氯丹、顺-氯丹、p’p-DDE、狄氏剂、异狄氏剂、o’p-DDT、p’p-DDT、β-硫丹、p’p-DDD和硫丹硫酸酯中的至少一种。