CN104174036A - 一种实现诊疗一体化的纳米胶束及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种纳米胶束，其包括AIE染料、药物活性成分及双亲性载体，所述AIE染料、药物活性成分及双亲性载体的质量比为1∶1∶5-10。同时还公开了其制备方法和在制备肿瘤诊断和/或治疗剂中的应用。所述纳米胶束可实现诊疗一体化，用于体内非侵入性荧光成像和诊断及疾病治疗，可以充分地利用肿瘤的EPR效应，很好地聚集在肿瘤部位，实现其载带药物活性成分在肿瘤部位的富集，起到高效治疗肿瘤的作用；而且，AIE红光染料发光效率高，不容易淬灭，能够很好的反映药物活性成分在体内的输送和生物分布情况，并且能够用于肿瘤的诊断。
Description
技术领域
本发明属于药物活性成分化学领域，涉及一种纳米胶束及其制备方法和应用，具体涉及一种包含聚集诱导发光的红光荧光染料、药物活性成分和载体的实现诊疗一体化的纳米胶束及其制备方法和应用
背景技术
肿瘤治疗和诊断一直是一个很热门的研究方向，目前已经有很多研究小组报道了对肿瘤非侵入性诊疗的体系。活体生物发光成像是最常用的诊断方法之一，它能使研究人员直接快速的测量各种肿瘤模型中肿瘤的生长、转移以及对药物活性成分的反应。活体生物发光成像的特点是极高的灵敏度，能够用于微小的肿瘤病灶(少到几百个细胞)的检测，比传统方法的灵敏度有了大大的提高；它非常适合于肿瘤体内生长的定量分析，避免由宰杀模型动物而造成的个体差异。正是基于以上优点，活体成像技术已成为本领域应用最广的诊断手段。
基于长波长发光的诊疗一体化是目前研究的热点，因为只有长波长的荧光物质才能穿透组织，在荧光系统上成像形貌。但是传统的荧光染料分子之间容易发生自淬灭现象，这是由于荧光分子之间聚集以后发生了荧光共振能量转移，或是发生反应产生了不利于它们发光的物质。并且这种自淬灭现象在荧光染料与药物活性成分联用以后会被进一步放大，这样非常不利于诊疗一体化药物活性成分的发展。
本发明中公布的染料是一种红色荧光的聚集诱导发光(Aggregation-InducedEmission，AIE)染料，它的发光机理恰恰却是聚集后能够产生很强的荧光。这种染料的出现克服了聚集自淬灭的缺点，负载于纳米药物活性成分载体之后反而比在有机溶剂中发光效率高，能够很好的反映纳米药物活性成分在体内的输送和生物分布情况。
正常组织中的微血管内皮间隙致密、结构完整，大分子和脂质颗粒不易透过血管壁，而实体瘤组织中血管丰富、血管壁间隙较宽、结构完整性差，淋巴回流缺失，造成实体瘤对大分子类物质和脂质颗粒具有选择性高通透性和滞留性，这种现象被称作实体瘤组织的高通透性和滞留效应，简称EPR效应。由此可见，本领域可利用肿瘤的EPR效应，使AIE染料和/或抗药物活性成分被动富集在肿瘤部位，实现诊疗一体化。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种诊疗一体化的纳米胶束，它克服了传统染料发光效率低、聚集容易淬灭的缺点；而且其纳米粒径尺寸可以利用肿瘤的EPR效应，在肿瘤位置有很好的富集作用。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
一种纳米胶束，其包括AIE染料、药物活性成分及双亲性载体，所述AIE染料、药物活性成分及双亲性载体的质量比为1:1:5-10，例如1:1:5、1:1:6、1:1:7、1:1:8、1:1:8或1:1:10。
其中所述AIE染料为红荧光AIE染料，AIE红光染料发光效率高，不容易淬灭，能够很好的反映药物活性成分在体内的输送和生物分布情况；所药物活性成分为疏水性抗肿瘤药物活性成分，可为医药领域人员所熟知的各种疏水性抗肿瘤药物活性成分，优选地，所述药物活性成分为阿霉素、姜黄素、紫杉醇、柔红霉素和多西他赛中的一种或至少两种的混合物，其中，疏水性阿霉素是指将市售的盐酸阿霉素中和后得到的阿霉素，疏水性阿霉素也可以通过商购得到；所述双亲性载体为PLGA-PEG、PGA-PEG、PCL-PEG、DSPE-PEG、DSPE-PEG-FA或蛋黄卵磷脂中的一种或至少两种的混合物。
本发明另一目的在于提供本发明所述纳米胶束的制备方法。所述纳米胶束可通过两类方法进行制备，所述第一种方法包括以下步骤：
1)将所述AIE荧光染料与药物活性成分以及双亲性的载体按配比在有机溶剂中混合均匀，得到溶液；
2)干燥去除步骤1)中所得溶液的有机溶剂，所得的干燥物料与水性溶剂接触水化，制得所述纳米胶束。
其中所述干燥除去有机溶剂的方法为溶剂挥发法、乳化法、旋转蒸发成膜法、喷雾干燥、磁搅挥发、透析法或冻干法中的一种或至少两种的组合；例如可以参照《药剂学》(人民卫生出版社，2007年出版)中公开的采用真空旋转蒸发成膜法来除去溶剂。
所述水化可以是水浴、超声、震荡和振摇中的一种或至少两种的组合。优选60℃水浴加热水化。
在一个本发明优选的实施方案中，所述干燥除去有机溶剂的温度为20-60℃，例如20℃、25℃、30℃、35℃、40℃，优选20-40℃，干燥时间为0.05-12小时，例如0.005小时、0.1小时、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时，优选1小时。
第二种所述的纳米胶束的制备方法包括以下步骤：
1)将所述AIE荧光染料与药物活性成分以及双亲性的载体按配比在有机溶剂中混合均匀，得到溶液；
2)使用水性溶剂通过反溶剂法或微乳液法等方法直接除去有机溶剂，得到所需纳米胶束。
对于所述的两种纳米胶束的制备方法，所述AIE染料、药物活性成分及双亲性载体在pH值为4.5-9.0的有机溶剂中混合，进一步优选6.5-7.5；所述AIE染料、药物活性成分及双亲性载体的总质量与有机溶剂质量的比值为1:1200-1500；所述水性溶剂的用量也没有特别的限制，只要可将其组分转变为纳米胶束即可，优选地，相对于每12mg AIE染料、药物活性成分及双亲性载体的干重量，所述水性溶剂加入量为1-2mL。
所述有机溶剂为极性较大的有机溶剂中的任意一种或至少两种的混合物，优选氯仿、乙腈、二氯甲烷、乙醇或甲醇中的一种或至少两种的混合物；所述水性溶剂为水或缓冲液，其中所述水为经过三次蒸馏的超纯水，所述缓冲液位生理盐水、葡萄糖水溶液、磷酸盐缓冲，具体为为本领域技术人员所熟知的能用于药物活性成分组合物的各种缓冲液，例如，pH7.3-7.5的磷酸盐(PBS)缓冲液，HEPES缓冲液或和生理盐水。优选为pH值为7.3-7.5的磷酸盐缓冲液。其中，pH值为7.3-7.5的磷酸盐缓冲液为含有7.5-8.5g/L的氯化钠、0.15-0.25g/L的氯化钾、2.8-3.0g/L的磷酸氢二钠和0.15-0.25g/L的磷酸二氢钾的水溶液。所述水性溶剂的用量也没有特别的限制，只要可将其组分转变为纳米胶束即可，优选地，相对于每12mg AIE染料、药物活性成分及双亲性载体的干重量之和，所述水性溶剂加入量为1-2mL。
任选地，为防止所得的纳米胶束里面有游离药物活性成分，该方法还包括将纳米胶束中的疏水性药物活性成分进行分离的步骤。所述分离的方法为领域技术人员所公知，例如，可以使用0.22μm的无菌滤膜进行过滤或者用截留分子量为3000Da的超滤管在离心机中用12000转/分钟离心30分钟。
通过动态光散射法(纳米材料学，哈尔滨工程大学出版社，2002年版)测定的数值，本发明的纳米胶束的粒径为100-120nm。
通过更加直观精确的透射电子显微镜检测，本发明的纳米胶束粒径为30-50nm。
本发明的目的之一还在于提供所述的纳米胶束在制备肿瘤诊断和/或治疗剂中的应用。本发明采用纳米技术制作出了一种高分子纳米胶束，它的粒径尺寸在30-50nm之间，能够很好地利用肿瘤的EPR效应，并富集在肿瘤部位，对于肿瘤的诊断和治疗都能有非常好的效果。
本发明提供的诊疗一体化纳米胶束由于粒径在30-50nm之间，可以充分的利用肿瘤的EPR效应，良好地聚集在肿瘤部位，实现其载带药物活性成分在肿瘤部位的富集，起到高效治疗肿瘤的作用；而且，AIE红光染料发光效率高，不容易淬灭，能够很好的反映药物活性成分在体内的输送和生物分布情况，并且能够用于肿瘤的诊断，同时与药物活性成分脂质体相比不降低药效，从而实现诊疗一体化，同时利用纳米之间被动靶向的特点，可以减轻所装载药物活性成分对人体的伤害。
附图说明
图1为本发明所述纳米胶束的动态光散射图。
图2为本发明所述纳米胶束的透射电子显微镜图。
图3为本发明所述纳米胶束用于小动物活体成像图。
图4为本发明所述纳米胶束在的肿瘤抑制作用效果图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
实施例1
本发明所述纳米胶束的制备
(1)分别把AIE染料(1mg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量体积为5mL的离心管称取10mg包裹材料将其溶于2mL的氯仿中，将包裹材料溶液转移到容量体积为50mL的茄型烧瓶中，用2mL的氯仿涮洗离心管两遍，将涮洗液转移到茄型烧瓶中，然后分别取1mL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型烧瓶中，最后再向茄型烧瓶中补加3mL氯仿，摇匀。
(2)将步骤(1)中的混合溶液参照药剂学(人民卫生出版社，2007年出版)中公开的方法进行真空旋转蒸发得到12mg干燥后的物料。
(3)向步骤(2)中含有干燥后的物料的茄型烧瓶中加入2mL的三蒸水，放在超声机中超声分散，时间为2分钟，温度控制在20-40℃。超声结束后将溶液静置1小时，最后将得到的溶液滤过0.22μm的无菌滤膜，除去游离的阿霉素，得到所需纳米胶束。
实施例2
本发明所述纳米胶束可通过以下方法制备
(1)分别把AIE染料(1mg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量体积为5mL的离心管称取20mg包裹材料将其溶于3mL的氯仿中，将包裹材料溶液转移到容量体积为100mL的茄型烧瓶中，用5mL的氯仿涮洗离心管两遍，将涮洗液转移到茄型烧瓶中，然后分别取2mL的AIE溶液和4mL的阿霉素溶液加入茄型烧瓶中，最后再向茄型烧瓶中补加6mL氯仿，摇匀。
(2)将步骤(1)中的混合溶液参照药剂学(人民卫生出版社，2007年出版)中公开的方法进行真空旋转蒸发得到24mg干燥后的物料。
(3)向步骤(2)中含有干燥后的物料的茄型烧瓶中加入2mL的三蒸水，放在超声机中超声分散，时间为2分钟，温度控制在20-40℃。超声结束后将溶液静置1小时，最后将得到的溶液滤过0.22μm的无菌滤膜，除去游离的阿霉素，得到所需纳米胶束。
实施例3
本发明所述纳米胶束可通过以下方法制备
(1)分别把AIE染料(1mg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量体积为5mL的离心管称取10mg包裹材料将其溶于2mL的氯仿中，将包裹材料溶液转移到容量体积为50mL的茄型烧瓶中，用2mL的氯仿涮洗离心管两遍，将涮洗液转移到茄型烧瓶中，然后分别取1mL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型烧瓶中，最后再向茄型烧瓶中补加3mL氯仿，摇匀。
(2)将步骤(1)中的混合溶液参照药剂学(人民卫生出版社，2007年出版)中公开的方法进行真空旋转蒸发得到12mg干燥后的物料。
(3)向步骤(2)中含有干燥后的物料的茄型烧瓶中加入2mL的生理盐水，放在超声机中超声分散，时间为2分钟，温度控制在20-40℃。超声结束后将溶液静置1小时，最后将得到的溶液滤过0.22μm的无菌滤膜，除去游离的阿霉素，得到所需纳米胶束。
实施例4
本发明所述纳米胶束可通过以下方法制备
(1)分别把AIE染料(1mg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量体积为5mL的离心管称取20mg包裹材料将其溶于3mL的氯仿中，将包裹材料溶液转移到容量体积为100mL的茄型烧瓶中，用5mL的氯仿涮洗离心管两遍，将涮洗液转移到茄型烧瓶中，然后分别取2mL的AIE溶液和4mL的阿霉素溶液加入茄型烧瓶中，最后再向茄型烧瓶中补加3mL氯仿，摇匀。
(2)将步骤(1)中的混合溶液参照药剂学(人民卫生出版社，2007年出版)中公开的方法进行真空旋转蒸发得到24mg干燥后的物料。
(3)向步骤(2)中含有干燥后的物料的茄型烧瓶中加入2mL的生理盐水，放在超声机中超声分散，时间为2分钟，温度控制在20-40℃。超声结束后将溶液静置1小时，最后将得到的溶液滤过0.22μm的无菌滤膜，除去游离的阿霉素，得到所需纳米胶束。
实施例5
本发明所述纳米胶束可通过以下方法制备本
(1)分别把AIE染料(1mg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量体积为5mL的离心管称取10mg包裹材料将其溶于2mL的氯仿中，将包裹材料溶液转移到容量体积为50mL的茄型烧瓶中，用2mL的氯仿涮洗离心管两遍，将涮洗液转移到茄型烧瓶中，然后分别取1mL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型烧瓶中，最后再向茄型烧瓶中补加3mL氯仿，摇匀。
(2)将步骤(1)中的混合溶液参照药剂学(人民卫生出版社，2007年出版)中公开的方法进行真空旋转蒸发得到12mg干燥后的物料。
(3)向步骤(2)中含有干燥后的物料的茄型烧瓶中加入2mL的三蒸水，放在60℃热水中水浴加热30min，期间每隔10min需振摇1min。水浴结束后将溶液静置1小时，最后将得到的溶液滤过0.22μm的无菌滤膜，除去游离的阿霉素，得到所需纳米胶束。
实施例6
本发明所述纳米胶束可通过以下方法制备
(1)分别把AIE染料(1mg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量体积为5mL的离心管称取10mg包裹材料将其溶于2mL的氯仿中，将包裹材料溶液转移到容量体积为50mL的茄型烧瓶中，用2mL的氯仿涮洗离心管两遍，将涮洗液转移到茄型烧瓶中，然后分别取1mL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型烧瓶中，最后再向茄型烧瓶中补加3mL氯仿，摇匀。
(2)将步骤(1)中的混合溶液参照药剂学(人民卫生出版社，2007年出版)中公开的方法进行真空旋转蒸发得到12mg干燥后的物料。
(3)向步骤(2)中含有干燥后的物料的茄型烧瓶中加入2mL的生理盐水，放在60℃热水中水浴加热30min，期间每隔10min需振摇1min。水浴结束后将溶液静置1小时，最后将得到的溶液滤过0.22μm的无菌滤膜，除去游离的阿霉素，得到所需纳米胶束。
实施例7
本发明所述纳米胶束可通过以下方法制备
(1)分别把AIE染料(1mg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量体积为5mL的离心管称取20mg包裹材料将其溶于3mL的氯仿中，将包裹材料溶液转移到容量体积为100mL的茄型烧瓶中，用5mL的氯仿涮洗离心管两遍，将涮洗液转移到茄型烧瓶中，然后分别取2mL的AIE溶液和4mL的阿霉素溶液加入茄型烧瓶中，最后再向茄型烧瓶中补加3mL氯仿，摇匀。
(2)将步骤(1)中的混合溶液参照药剂学(人民卫生出版社，2007年出版)中公开的方法进行真空旋转蒸发得到24mg干燥后的物料。
(3)向步骤(2)中含有干燥后的物料的茄型烧瓶中加入2mL的生理盐水，放在60℃热水中水浴加热30min，期间每隔10min需振摇1min。水浴结束后将溶液静置1小时，最后将得到的溶液滤过0.22μm的无菌滤膜，除去游离的阿霉素，得到所需纳米胶束。
实施例8
本发明所述纳米胶束可通过以下方法制备
(1)分别把AIE染料(1mg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量体积为5mL的离心管称取10mg包裹材料将其溶于2mL的氯仿中，将包裹材料溶液转移到容量体积为50mL的茄型烧瓶中，用2mL的氯仿涮洗离心管两遍，将涮洗液转移到茄型烧瓶中，然后分别取1mL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型烧瓶中，最后再向茄型烧瓶中补加3mL氯仿，摇匀。
(2)向步骤(1)中的混合溶液中加入2mL的三蒸水，然后超声直至混合溶液成为均一的乳状液体为止。
(3)向装有步骤(2)中的乳状液体的茄型烧瓶中放入一枚磁搅拌子，然后搅拌直至乳状液变成澄清透亮的溶液为止。然后静置1小时，最后将得到的溶液滤过0.22μm的无菌滤膜，除去游离的阿霉素，得到所需纳米胶束。
实施例9
本发明所述纳米胶束可通过以下方法制备
(1)分别把AIE染料(1mg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量体积为5mL的离心管称取10mg包裹材料将其溶于2mL的氯仿中，将包裹材料溶液转移到容量体积为50mL的茄型烧瓶中，用2mL的氯仿涮洗离心管两遍，将涮洗液转移到茄型烧瓶中，然后分别取1mL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型烧瓶中，最后再向茄型烧瓶中补加3mL氯仿，摇匀。
(2)向步骤(1)中的混合溶液中加入2mL的生理盐水，然后超声直至混合溶液成为均一的乳状液体为止。
(3)向装有步骤(2)中的乳状液体的茄型烧瓶中放入一枚磁搅拌子，然后搅拌直至乳状液变成澄清透亮的溶液为止。然后静置1小时，最后将得到的溶液滤过0.22μm的无菌滤膜，除去游离的阿霉素，得到所需纳米胶束。
实施例10
本发明所述纳米胶束可通过以下方法制备
(1)分别把AIE染料(1mg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量体积为5mL的离心管称取10mg包裹材料将其溶于2mL的氯仿中，将包裹材料溶液转移到容量体积为50mL的茄型烧瓶中，用2mL的氯仿涮洗离心管两遍，将涮洗液转移到茄型烧瓶中，然后分别取1mL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型烧瓶中，最后再向茄型烧瓶中补加3mL氯仿，摇匀。
(2)将步骤(1)中的混合溶液参照药剂学(人民卫生出版社，2007年出版)中公开的方法进行真空旋转蒸发得到12mg干燥后的物料。
(3)向步骤(2)中含有干燥后的物料的茄型烧瓶中加入2mL的生理盐水，放在60℃热水中水浴加热30min，期间每隔10min需振摇1min。水浴结束后将溶液静置1小时。然后将静置后的纳米胶束转移到3000Da的超滤管中，设定12000rpm/min，离心30min后取超滤管上部的溶液即为所需纳米胶束。
实施例11
本发明所述纳米胶束可通过以下方法制备
(1)分别把AIE染料(1mg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量体积为5mL的离心管称取5mg包裹材料将其溶于2mL的氯仿中，将包裹材料溶液转移到容量体积为50mL的茄型烧瓶中，用2mL的氯仿涮洗离心管两遍，将涮洗液转移到茄型烧瓶中，然后分别取1mL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型烧瓶中，最后再向茄型烧瓶中补加3mL氯仿，摇匀。
(2)将步骤(1)中的混合溶液参照药剂学(人民卫生出版社，2007年出版)中公开的方法进行真空旋转蒸发得到7mg干燥后的物料。
(3)向步骤(2)中含有干燥后的物料的茄型烧瓶中加入2mL的三蒸水，放在超声机中超声分散，时间为2分钟，温度控制在20-40℃。超声结束后将溶液静置1小时，最后将得到的溶液滤过0.22μm的无菌滤膜，除去游离的阿霉素，得到所需纳米胶束。
实施例12
本发明所述纳米胶束可通过以下方法制备
(1)分别把AIE染料(1mg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量体积为5mL的离心管称取10mg包裹材料将其溶于3mL的氯仿中，将包裹材料溶液转移到容量体积为100mL的茄型烧瓶中，用5mL的氯仿涮洗离心管两遍，将涮洗液转移到茄型烧瓶中，然后分别取2mL的AIE溶液和4mL的阿霉素溶液加入茄型烧瓶中，最后再向茄型烧瓶中补加6mL氯仿，摇匀。
(2)将步骤(1)中的混合溶液参照药剂学(人民卫生出版社，2007年出版)中公开的方法进行真空旋转蒸发得到14mg干燥后的物料。
(3)向步骤(2)中含有干燥后的物料的茄型烧瓶中加入2mL的三蒸水，放在超声机中超声分散，时间为2分钟，温度控制在20-40℃。超声结束后将溶液静置1小时，最后将得到的溶液滤过0.22μm的无菌滤膜，除去游离的阿霉素，得到所需纳米胶束。
实施例13
本发明所述纳米胶束可通过以下方法制备
(1)分别把AIE染料(1mg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量体积为5mL的离心管称取5mg包裹材料将其溶于2mL的氯仿中，将包裹材料溶液转移到容量体积为50mL的茄型烧瓶中，用2mL的氯仿涮洗离心管两遍，将涮洗液转移到茄型烧瓶中，然后分别取1mL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型烧瓶中，最后再向茄型烧瓶中补加3mL氯仿，摇匀。
(2)将步骤(1)中的混合溶液参照药剂学(人民卫生出版社，2007年出版)中公开的方法进行真空旋转蒸发得到7mg干燥后的物料。
(3)向步骤(2)中含有干燥后的物料的茄型烧瓶中加入2mL的生理盐水，放在超声机中超声分散，时间为2分钟，温度控制在20-40℃。超声结束后将溶液静置1小时，最后将得到的溶液滤过0.22μm的无菌滤膜，除去游离的阿霉素，得到所需纳米胶束。
实施例14
本发明所述纳米胶束可通过以下方法制备
(1)分别把AIE染料(1mg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量体积为5mL的离心管称取10mg包裹材料将其溶于3mL的氯仿中，将包裹材料溶液转移到容量体积为100mL的茄型烧瓶中，用5mL的氯仿涮洗离心管两遍，将涮洗液转移到茄型烧瓶中，然后分别取2mL的AIE溶液和4mL的阿霉素溶液加入茄型烧瓶中，最后再向茄型烧瓶中补加3mL氯仿，摇匀。
(2)将步骤(1)中的混合溶液参照药剂学(人民卫生出版社，2007年出版)中公开的方法进行真空旋转蒸发得到14mg干燥后的物料。
(3)向步骤(2)中含有干燥后的物料的茄型烧瓶中加入2mL的生理盐水，放在超声机中超声分散，时间为2分钟，温度控制在20-40℃。超声结束后将溶液静置1小时，最后将得到的溶液滤过0.22μm的无菌滤膜，除去游离的阿霉素，得到所需纳米胶束。
实施例15
本发明所述纳米胶束可通过以下方法制备
(1)分别把AIE染料(1mg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量体积为5mL的离心管称取5mg包裹材料将其溶于2mL的氯仿中，将包裹材料溶液转移到容量体积为50mL的茄型烧瓶中，用2mL的氯仿涮洗离心管两遍，将涮洗液转移到茄型烧瓶中，然后分别取1mL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型烧瓶中，最后再向茄型烧瓶中补加3mL氯仿，摇匀。
(2)将步骤(1)中的混合溶液参照药剂学(人民卫生出版社，2007年出版)中公开的方法进行真空旋转蒸发得到7mg干燥后的物料。
(3)向步骤(2)中含有干燥后的物料的茄型烧瓶中加入2mL的三蒸水，放在60℃热水中水浴加热30min，期间每隔10min需振摇1min。水浴结束后将溶液静置1小时，最后将得到的溶液滤过0.22μm的无菌滤膜，除去游离的阿霉素，得到所需纳米胶束。
实施例16
本发明所述纳米胶束可通过以下方法制备
(1)分别把AIE染料(1mg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量体积为5mL的离心管称取5mg包裹材料将其溶于2mL的氯仿中，将包裹材料溶液转移到容量体积为50mL的茄型烧瓶中，用2mL的氯仿涮洗离心管两遍，将涮洗液转移到茄型烧瓶中，然后分别取1mL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型烧瓶中，最后再向茄型烧瓶中补加3mL氯仿，摇匀。
(2)将步骤(1)中的混合溶液参照药剂学(人民卫生出版社，2007年出版)中公开的方法进行真空旋转蒸发得到7mg干燥后的物料。
(3)向步骤(2)中含有干燥后的物料的茄型烧瓶中加入2mL的生理盐水，放在60℃热水中水浴加热30min，期间每隔10min需振摇1min。水浴结束后将溶液静置1小时，最后将得到的溶液滤过0.22μm的无菌滤膜，除去游离的阿霉素，得到所需纳米胶束。
实施例17
将所得的纳米胶束依照《纳米材料学》(哈尔滨工程大学出版社，2002年版)测量动态光散射图，结果如图1所示。可见本发明纳米胶束的粒径为100-120nm。
实施例18
将所得的纳米胶束进行透射电子显微镜检测，其能更直观的观测胶束粒子的粒径。所得透射电子显微镜图如图2所示，可见本发明纳米胶束粒径为30-50nm。
实施例19
将发明所述纳米胶束用于小动物活体成像图，如图3所示，其中1号为对照荷瘤小鼠，2号为生理盐水对照组，3号为注射过本发明公布的纳米胶束的小鼠，可见本发明的纳米胶束可良好地应用于活体成像。
实施例20
将本发明所述纳米胶束进行抑瘤试验。图4为本发明所述纳米胶束的肿瘤抑制作用效果图，结果表明该胶束具有与自由药物活性成分相当的肿瘤抑制效果，在活体成像的同时并不降低药效。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (10)
1.一种纳米胶束，其特征在于，包括AIE染料、药物活性成分及双亲性载体，所述AIE染料、药物活性成分及双亲性载体的质量比为1:1:5-10。
2.根据权利要求1所述的纳米胶束，其特征在于，所述AIE染料为红荧光AIE染料。
3.根据权利要求1或2所述的纳米胶束，其特征在于，所述药物活性成分为疏水性抗肿瘤药物活性成分；
优选地，所述药物活性成分为阿霉素、姜黄素、紫杉醇、柔红霉素和多西他赛中的一种或至少两种的混合物。
4.根据权利要求1-3任一项所述的纳米胶束，其特征在于，所述双亲性载体为PLGA-PEG、PGA-PEG、PCL-PEG、DSPE-PEG、DSPE-PEG-FA或蛋黄卵磷脂中的一种或至少两种的混合物。
5.根据权利要求1-4任一项所述的纳米胶束的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
1)将所述AIE荧光染料与药物活性成分以及双亲性的载体按配比在有机溶剂中混合均匀，得到溶液；
2)干燥去除步骤1)中所得溶液的有机溶剂，所得的干燥物料与水性溶剂接触水化，制得所述纳米胶束。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述干燥除去有机溶剂的方法为溶剂挥发法、乳化法、旋转蒸发成膜法、喷雾干燥、磁搅挥发、透析法或冻干法中的一种或至少两种的组合；
优选地，所述水化是水浴、超声、震荡和振摇中的一种或至少两种的组合。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述干燥去除溶剂的温度为20-60℃，干燥时间为0.05-12小时。
8.根据权利要求1-4任一项所述的纳米胶束的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将所述AIE荧光染料与药物活性成分以及双亲性的载体按配比在有机溶剂中混合均匀，得到溶液；
2)使用水性溶剂通过反溶剂法或微乳液法直接除去有机溶剂，得到所需纳米胶束。
9.根据权利要求5-8所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述AIE染料、药物活性成分及双亲性载体在pH值为4.5-9.0的有机溶剂中混合，所述pH值进一步优选为6.5-7.5；
优选地，所述AIE染料、药物活性成分及双亲性载体的总质量与有机溶剂质量的比值为1:1200-1500；
优选地，相对于每12mg AIE染料、药物活性成分及双亲性载体的干重量之和，所述水性溶剂的量为1-2mL；
优选地，所述有机溶剂为氯仿、乙腈、二氯甲烷、乙醇或甲醇中的一种或至少两种的混合物；
优选地，所述水性溶剂为水、生理盐水、葡萄糖水溶液或磷酸盐缓冲液。
10.根据权利要求1-4任一项所述的纳米胶束在制备肿瘤诊断和/或治疗的药剂中的应用。
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