CN104173700A

CN104173700A - 一种知母总皂苷的提取方法

Info

Publication number: CN104173700A
Application number: CN201410450515.1A
Authority: CN
Inventors: 苏刘花; 杨存
Original assignee: Nanjing Zelang Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Nanjing Zelang Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2014-09-05
Filing date: 2014-09-05
Publication date: 2014-12-03

Abstract

本发明公开了一种知母总皂苷的提取方法。方法步骤如下：1）将知母烘干，粉碎；2）称取一定量的知母粉末加水浸润，然后加入知母粉末重量0.5%-3%的生物酶试剂进行酶解处理；3）酶解完成后，加入乙醇水溶液回流提取，得到提取液；4）将提取液过滤，滤渣重复提取，合并提取液，减压浓缩，得到知母总皂苷浓缩液；5）将浓缩液上大孔吸附树脂柱洗脱，收集乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，即得知母总皂苷。采用本发明制备知母总皂苷，工艺操作简单、生产成本低、所得产品纯度高、易于实现工业化生产。

Description

一种知母总皂苷的提取方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种生物酶解技术与大孔吸附树脂相结合的方法提取、纯化知母总皂苷。

背景技术

知母，中药名，属清热下火药。主治：温热病、高热烦渴、咳嗽气喘、燥咳、便秘、骨蒸潮热、虚烦不眠、消渴淋浊。知母也叫毛知母，在我国各地都有栽培，它有很强的抗旱抗寒能力，属多年生草本植物，在干旱少雨的荒山、荒漠、荒地中都能生长，是绿化山区和荒原的首选品种，它在全年各个季节都能播种，但主要以春播或夏播。知母为常用中药材，被社会广泛使用。家种知母主产河北省安国市、安徽省亳州市，形成了全国知名的两个种植基地。野生毛知母主产地河北张北、易县、赤城、来源、阜平；山西榆社、五台、代县、寿阳；内蒙古扎鲁特旗、西乌珠穆、东台珠穆、林西、科尔左中旗、阿荣旗；辽宁铁岭、阜新等地亦有分布。

现代研究证明，知母根茎中含总皂甙约6%，其中有知母皂甙（Timosaponin）A-Ⅰ、A-Ⅱ、A-Ⅲ、A-Ⅳ， B-Ⅰ和B-Ⅱ。其中知母皂甙A-Ⅰ是萨尔萨皂甙元β-D-吡喃半乳糖甙，知母皂甙A-Ⅲ是萨尔萨皂甙元与知母双糖（Timobiose）结合而成的双糖甙。知母根茎中的皂甙元有萨尔萨皂甙元（Sarsasapogenin）、吗尔考皂甙元（Markogenin）、新芰脱皂甙元（Neogitogenin）。以前从知母中分离出来的皂甙知母宁（Asphonin）是吗尔考皂甙、知母皂甙A-Ⅲ、A-Ⅳ、B等的混合物．亦分离出异菝葜皂甙元（Smilagenin）等皂甙类成分。尚含有黄酮类的芒果甙（Mangiferin,Chi- monin），异芒果甙（Isomangiferin）；生物碱类的胆碱（Choline），尼克酰胺（Nicotinamide）；有机酸类的鞣酸（Tannic acid），烟酸（Nicotinic acid）以及四种知母多糖（Anemarn A，B，C，D）。另外尚含铁、锌、锰、铜、铬、镍等多种金属元素以及黏液质、还原糖等。可以用于温病，邪在气分，高热、烦渴的气分实热证，有泻火除烦的作用，与石膏、竹叶配伍有协同之效；用于治疗肺热咳嗽或阴虚燥咳，有清泄肺火，滋阴润肺之效。常与贝母同用以增强清肺润燥之功，如《医方集解》二母散；用于阴虚火旺，骨蒸潮热，盗汗者，有滋阴降火的作用，常与黄柏相须为用；既能清泄肺胃之火，又能滋养肺肾之阴，故宜用于阴虚消渴，症见口渴、饮多、尿多者，同山药、五味子等配合使用可增强疗效，如玉液汤。

皂苷（saponin）别称：碱皂体、皂素、皂甙、皂角苷或皂草苷。“皂苷”一词由英文名 Saponin 意译而来，英文名则源于拉丁语的 Sapo，意为肥皂。皂苷（Saponin）是苷元为三萜或螺旋甾烷类化合物的一类糖苷，主要分布于陆地高等植物中，也少量存在于海星和海参等海洋生物中。许多中草药如人参、远志、桔梗、甘草、知母和柴胡等的主要有效成分都含有皂苷。有些皂苷还具有抗菌的活性或解热、镇静、抗癌等有价值的生物活性。

目前，在我国有关提取知母总皂苷的工艺文献和专利都很少见到。本发明采用生物酶解技术与大孔吸附树脂相结合的方法提取、纯化知母总皂苷。该发明操作过程简单，提取率高，对环境污染小，成本消耗低，易于实现工业化生产。

发明内容

本发明的目的是为了填补从知母中提取总皂苷工艺的空白，提供一种操作简单、提取效率高、污染小的知母总皂苷的提取方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

1）将知母烘干，粉碎；

2）称取一定量的知母粉末加水浸润，然后加入知母粉末重量0.5%-3%的生物酶试剂进行酶解处理，收集酶解原料；

3）然后加入乙醇水溶液回流提取，得到提取液；

4）将提取液过滤，滤渣重复提取2-3次，合并提取液，减压浓缩至原体积的1/4-1/2，得到知母总皂苷浓缩液；

5）将浓缩液上大孔吸附树脂柱洗脱，收集乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，即得知母总皂苷。

步骤2）中所述的粉末大小为40-60目，粉末与水的质量体积比为1：0.5-1倍，浸泡时间为30-60分钟。

步骤2）中所述的生物酶为纤维素酶、淀粉酶、半纤维素酶和果胶酶中的一种，酶解时的温度设定在30-45℃，酶解时间为2-4小时。

步骤3）中所述的乙醇水溶液浓度为50%-70%，体积为粉末重量的3-6倍。

步骤5）中所述的大孔吸附树脂为X-5、AB-8、NK-2、NKA-2、NK-9、D3520、D101、WLD中的一种。

步骤5）中所述洗脱过程为先用2~4倍柱体积水洗去糖分，然后用2~5倍柱体积、10%~20%乙醇洗去部分杂质，最后用2~5倍柱体积乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液。

采用本方法生产知母总皂苷，利用生物酶解技术与大孔吸附树脂相结合的方法，充分破坏细胞壁，增加和加快了活性成分的流出，通过大孔吸附树脂柱纯化过程，不仅大大提高了知母总皂苷的纯度，而且大孔吸附树脂可以回收再利用，从而降低了生产成本。该工艺简便易操作、提取效率高、污染小、所得产品纯度高、易于实现工业化生产。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

取新鲜的知母烘干、粉碎，过40目筛。称取知母粉末50克放入提取器中，加入25毫升的水浸泡30分钟，然后加入0.25克的果胶酶试剂，在温度为30℃的条件下酶解2分钟，收集酶解原料，然后加入250毫升60%的乙醇水溶液回流提取，滤渣提取2次，合并3次滤液，减压浓缩至原体积的1/4，得到知母总皂苷浓缩液。将知母总皂苷的浓缩液倒入X-5大孔吸附树脂柱中，先用2倍柱体积水洗去糖分，然后用2倍柱体积、10%乙醇洗去部分杂质，最后用2倍柱体积乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，即得总皂苷。经检测总皂苷的含量为89.53%，总皂苷的提取率为59.5%。

实施例2：

取新鲜的知母烘干、粉碎，过60目筛。称取知母粉末50克放入提取器中，加入30毫升的水浸泡40分钟，然后加入1克的果胶酶，在温度为40℃的条件下酶解3分钟，收集酶解原料，然后加入250毫升60%的乙醇水溶液回流提取，滤渣提取2次，合并3次滤液，减压浓缩至原体积的1/3，得到知母总皂苷浓缩液。将知母总皂苷的浓缩液倒入D3520大孔吸附树脂柱中，先用3倍柱体积水洗去糖分，然后用4倍柱体积、15%乙醇洗去部分杂质，最后用4倍柱体积乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，即得总皂苷。经检测总皂苷的含量为90.13%，总皂苷的提取率为60.52%。

实施例3：

取新鲜的知母烘干、粉碎，过60目筛。称取知母粉末50克放入提取器中，加入50毫升的水浸泡60分钟，然后加入1.5g克的生物酶试剂，在温度为45℃的条件下酶解4分钟，收集酶解原料，然后加入250毫升60%的乙醇水溶液回流提取，滤渣提取3次，合并4次滤液，减压浓缩至原体积的1/2，得到知母总皂苷浓缩液。将知母总皂苷的浓缩液倒入AB-8大孔吸附树脂柱中，先用4倍柱体积水洗去糖分，然后用5倍柱体积、20%乙醇洗去部分杂质，最后用5倍柱体积乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，即得总皂苷。经检测总皂苷的含量为91.55%，总皂苷的提取率为61.45%。

Claims

1. 一种知母总皂苷的提取方法，其特征在于以下步骤：

1）将知母烘干，粉碎；

3）然后加入乙醇水溶液回流提取，得到提取液；

2. 根据权利要求1所述的知母总皂苷的提取方法，其特征在于：步骤2）中所述的粉末大小为40-60目，粉末与水的质量体积比为1：0.5-1倍，浸泡时间为30-60分钟。

3. 根据权利要求1所述的知母总皂苷的提取方法，其特征在于：步骤2）中所述的生物酶为纤维素酶、淀粉酶、半纤维素酶和果胶酶中的一种，酶解时的温度设定在30-45℃，酶解时间为2-4小时。

4. 根据权利要求1所述的知母总皂苷的提取方法，其特征在于：步骤3）中所述的乙醇水溶液浓度为50%-70%，体积为粉末重量的3-6倍。

5. 根据权利要求1所述的知母总皂苷的提取方法，其特征在于：步骤5）中所述的大孔吸附树脂为X-5、AB-8、NK-2、NKA-2、NK-9、D3520、D101、WLD中的一种。

6. 根据权利要求1所述的知母总皂苷的提取方法，其特征在于：步骤5）中所述洗脱过程为先用2~4倍柱体积水洗去糖分，然后用2~5倍柱体积、10%~20%乙醇洗去部分杂质，最后用2~5倍柱体积乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液。