CN104163853A - 一种制备利那洛肽的方法 - Google Patents
一种制备利那洛肽的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104163853A CN104163853A CN201410357720.3A CN201410357720A CN104163853A CN 104163853 A CN104163853 A CN 104163853A CN 201410357720 A CN201410357720 A CN 201410357720A CN 104163853 A CN104163853 A CN 104163853A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- trt
- fmoc
- resin
- tbu
- cys
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- KXGCNMMJRFDFNR-WDRJZQOASA-N linaclotide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H]3CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N2)=O)CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@H](CC(N)=O)NC3=O)C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N1)=O)[C@H](O)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 KXGCNMMJRFDFNR-WDRJZQOASA-N 0.000 title claims abstract description 67
- 108010024409 linaclotide Proteins 0.000 title claims abstract description 67
- 229960000812 linaclotide Drugs 0.000 title claims abstract description 67
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 147
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 147
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 49
- MFBYPDKTAJXHNI-VKHMYHEASA-N Gly-Cys Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](CS)C([O-])=O MFBYPDKTAJXHNI-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 31
- ALJGSKMBIUEJOB-FXQIFTODSA-N Pro-Ala-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 ALJGSKMBIUEJOB-FXQIFTODSA-N 0.000 claims abstract description 31
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 28
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 27
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims abstract description 24
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims abstract description 15
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims abstract description 8
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 150000007970 thio esters Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 111
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 55
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 38
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 34
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 34
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 34
- KLBPUVPNPAJWHZ-UMSFTDKQSA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-tritylsulfanylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)SC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KLBPUVPNPAJWHZ-UMSFTDKQSA-N 0.000 claims description 33
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 30
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 24
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 17
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims description 16
- SWZCTMTWRHEBIN-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=C(O)C=C1 SWZCTMTWRHEBIN-QFIPXVFZSA-N 0.000 claims description 14
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 14
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims description 10
- 150000003053 piperidines Chemical class 0.000 claims description 10
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N NMP Substances CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 9
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 claims description 9
- JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-2-[chloro(diphenyl)methyl]benzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 8
- 239000007810 chemical reaction solvent Substances 0.000 claims description 8
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 claims description 8
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims description 8
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 claims description 7
- 239000007821 HATU Substances 0.000 claims description 7
- JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]phenyl]propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C)=CC=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N 0.000 claims description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 5
- LOBUWFUSGOYXQX-DHUJRADRSA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(4-methoxyphenyl)-diphenylmethyl]sulfanylpropanoic acid Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 LOBUWFUSGOYXQX-DHUJRADRSA-N 0.000 claims description 4
- KJYAFJQCGPUXJY-UMSFTDKQSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-oxo-4-(tritylamino)butanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C(=O)NC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KJYAFJQCGPUXJY-UMSFTDKQSA-N 0.000 claims description 4
- OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 4
- LZOLWEQBVPVDPR-VLIAUNLRSA-N (2s,3r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]butanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H]([C@H](OC(C)(C)C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 LZOLWEQBVPVDPR-VLIAUNLRSA-N 0.000 claims description 4
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 claims description 4
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 claims description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 4
- ZPGDWQNBZYOZTI-SFHVURJKSA-N (2s)-1-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonyl)pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ZPGDWQNBZYOZTI-SFHVURJKSA-N 0.000 claims description 3
- QWXZOFZKSQXPDC-NSHDSACASA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 QWXZOFZKSQXPDC-NSHDSACASA-N 0.000 claims description 3
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 5
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003875 Wang resin Substances 0.000 abstract 1
- 238000000197 pyrolysis Methods 0.000 abstract 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 60
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 46
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 43
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 22
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 16
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000003746 solid phase reaction Methods 0.000 description 15
- 238000010671 solid-state reaction Methods 0.000 description 15
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 12
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 12
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 9
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 9
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 7
- RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N Trifluoroethanol Chemical compound OCC(F)(F)F RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 6
- -1 alkyl phosphorus Chemical compound 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 5
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 4
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 3
- BWZVCCNYKMEVEX-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-Trimethylpyridine Chemical compound CC1=CC(C)=NC(C)=C1 BWZVCCNYKMEVEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100034605 Atrial natriuretic peptide receptor 3 Human genes 0.000 description 2
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 2
- GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N DMF Natural products CC1=CC=C(C)O1 GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000924488 Homo sapiens Atrial natriuretic peptide receptor 3 Proteins 0.000 description 2
- AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N N-methyl-pyrrolidine Natural products CN1CC=CC1 AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 125000005519 fluorenylmethyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N glutathione disulfide Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CSSC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 1,2-ethanedithiol Chemical compound SCCS VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000844746 Drosophila melanogaster Drosomycin Proteins 0.000 description 1
- 108010053070 Glutathione Disulfide Proteins 0.000 description 1
- 208000022120 Jeavons syndrome Diseases 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012964 benzotriazole Substances 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- RQFCJASXJCIDSX-UUOKFMHZSA-N guanosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O RQFCJASXJCIDSX-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- 239000004226 guanylic acid Substances 0.000 description 1
- 235000013928 guanylic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 238000001698 laser desorption ionisation Methods 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000036445 liquid secretion Effects 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 235000015898 miriam Nutrition 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 108010066925 sleep-promoting factor B Proteins 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 125000002653 sulfanylmethyl group Chemical group [H]SC([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明涉及一种制备利那洛肽的方法。本发明的具体步骤为：A）结合固液相方法合成五肽片段Ⅰ：Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl；B）通过固相方法合成九肽片段树脂Ⅱ：H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂；C）将五肽片段Ⅰ加入九肽片段树脂Ⅱ中，通过硫酯交换和S→N酰基转移得到新的14肽片段树脂，脱Fmoc保护基，裂解后得到纯度相对较高的利那洛肽线性肽；D）最后采用GSH/GSSH氧化体系氧化得到利那洛肽。本发明通过硫酯交换和S→N酰基转移提供了一种合成条件温和，纯度、收率较高，适合规模化生产的利那洛肽的制备工艺。
Description
技术领域
本发明涉及多肽医药合成领域，具体涉及一种制备利那洛肽的方法。
背景技术
利那洛肽，英名为：Linaclotide，结构式如下：
肽序列为：
利那洛肽（linaclotide）是一种含有14个氨基酸的多肽，是全球首个鸟苷酸环化酶-C激动剂，可结合并激活肠上皮细胞管腔表面的鸟苷酸环化酶C受体，导致细胞内和细胞外环鸟苷酸增多。其净效应是氯和碳酸氢盐分泌进入肠腔增加，进而导致液体分泌增多以及大便通过加速，用于治疗便秘型肠易激综合征以及慢性特发性便秘患者。分别于2012年8月30日和2012年11月26日获得美国FDA和欧盟EMEA批准上市。
关于利那洛肽的制备方法，原研专利US7304036对利那洛肽的合成部分无具体报道。Miriam等人发表一篇文章尝试了利那洛肽的合成（Optimized Fmoc Solid-Phase Synthesis of the Cysteine-Rich Peptide Linaclotide，Biopolymers (2011), 96(1), 69-80.）文献中分别采用了三种方法进行合成：（1）采用Trt为Cys保护基固相合成线性肽粗肽，然后在液相中室温一步氧化得到利那洛肽；（2）分别采用Trt，Acm为Cys保护基固相合成线性肽粗肽，然后采用半选择策略完成二硫键的合成；（3）分别采用Mmt，Trt，Acm或Acm，Trt，pMeOBzl为Cys保护基固相合成线性肽粗肽，然后采用完全选择性策略完成二硫键的合成。第一种方法，线性肽纯度只有65%、收率低，不利于规模化大生产，第二、三种方法使用多种侧链脱除和氧化试剂，必然会导致杂质增多，不利于得到高纯度、高收率的产物，也不利于工艺放大。
中国专利CN 102875655A采用Mmt保护基保护半胱氨酸侧链，用逐一偶联方式合成利那洛肽线性粗肽，最后采用GSH/GSSH氧化体系氧化得到利那洛肽，其方法得到的线性肽纯度不高、杂质相对较多，不利于规模化大生产。
综上所述，现有利那洛肽的固相合成过程中，由于合成周期长，成本高，收率低，杂质多，不适用于工业化生产。
发明内容
本发明人用现有的合成方法，制备利那洛肽，发现合成步骤较多，合成周期长，纯度和收率不高，不适于工业化规模生产。为此，本发明人对利那洛肽的合成方法进行了研究，从而得到了本发明的技术方案。
本发明的目的是提供一种制备利那洛肽的方法。本发明的合成路线如图1所示：A）结合固液相方法合成五肽片段Ⅰ： Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl；B）通过固相方法合成九肽片段树脂Ⅱ： H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂；C）将五肽片段Ⅰ加入九肽片段树脂Ⅱ中，通过硫酯交换和S→N 酰基转移得到新的14肽片段树脂，脱Fmoc保护基，裂解后得到利那洛肽线性肽；D）最后采用GSH/GSSH氧化体系氧化得到利那洛肽。
本发明中一些常用的缩写具有以下含义；
Fmoc ：芴甲氧羰基
Fmoc-AA ：芴甲氧羰基保护的氨基酸
DIC ：N，N′-二异丙基碳化二亚胺
PyBOP ：六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷
HATU ：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯
HOBt ：1- 羟基苯骈三唑
tBu ：叔丁基
Trt ：三苯甲基
Boc ：叔丁氧羰基
Mmt ：4-甲氧基三苯甲基
Acm ：乙酰氨甲基
Cys ：半胱氨酸
Glu ：谷氨酸
Tyr ：酪氨酸
Asn ：天冬酰胺
Pro ：脯氨酸
Ala ：丙氨酸
Thr ：苏氨酸
DMF ：N，N′-二甲基甲酰胺
MeOH ：甲醇
DCM ：二氯甲烷
TFE ：三氟乙醇
NMP ：N-甲基吡咯烷酮
DMSO ：二甲基亚砜
TFA ：三氟醋酸
EDT ：乙二硫醇
PhSMe ：苯甲硫醚
Piperidine ：六氢吡啶
DMAP ：4-二甲氨基吡啶
DIEA ：N，N′-二异丙基乙胺
TMP ：2,4,6-三甲基吡啶
GSH ：还原型
GSSH ：氧化型谷胱甘肽
为此本发明提供一种利那洛肽的合成方法，其步骤如下：
步骤1，结合固液相方法合成五肽片段Ⅰ：Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl；
步骤2，通过固相方法合成九肽片段树脂Ⅱ：H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂；
步骤3，将五肽片段Ⅰ加入九肽片段树脂Ⅱ中，通过硫酯交换和S→N 酰基转移得到新的长肽片段树脂，脱Fmoc保护基，裂解后得到利那洛肽线性肽；
步骤4，最后采用GSH/GSSH氧化体系氧化得到利那洛肽。
其中，步骤1所述的五肽片段Ⅰ：Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl的合成方法包括如下步骤：1）采用2-CTC树脂为起始树脂，在活化剂系统的存在下， Fmoc-Cys(Trt)-OH和2-CTC树脂偶联得到取代度为0.10~0.90 mmol/g的Fmoc-Cys(Trt)-CTC树脂；2）采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除上Fmoc-Cys(Trt)-CTC树脂的Fmoc保护基，得到H-Cys(Trt)-CTC树脂；3）在偶联剂系统的存在下，H-Cys(Trt)-CTC树脂和Fmoc保护且侧链保护的酪氨酸偶联得到Fmoc-Tyr(tBu)-Cys(Trt)-CTC树脂；4）重复步骤2）、3），依次进行氨基酸（Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH）偶联得到Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)- CTC树脂；5）采用由体积比为1:4 的TFE和DCM组成的裂解液裂解树脂后得到Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-OH；6）采用液相方法，Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-OH、HSBzl和DIC偶联得到合成Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-SBzl；7）采用由体积比为2.5∶5∶5∶87.5的EDT、PhSMe、H2O和TFA的裂解液去五肽侧链保护基得到五肽片段Ⅰ：Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl；所述活化剂系统选自NMM、Et3N、DIEA或TMP；所述偶联剂系统包括缩合剂和反应溶剂，所述缩合剂选自DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOBt/DIEA；所述反应溶剂选自DMF、DCM、NMP、DMSO或他们之间的任意组合。
本发明中，所述的树脂的取代度是采用紫外吸光光度法测定的树脂的取代度，用20%哌啶/DMF溶液将偶联Fmoc保护型氨基酸的树脂上的Fmoc保护基脱保护下来，用紫外吸光光度法测定其浓度，然后采用含Fmoc的氨基酸标准化合物例如Fmoc-Leu-OH，以外标法标定树脂上的Fmoc的mmol数值，除以树脂重量，即得到树脂的取代度或称之为替代度。
其中，步骤2所述九肽片段树脂Ⅱ：H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂的合成方法包括如下步骤：1）采用王树脂为起始树脂，在活化剂系统的存在下， Fmoc-Tyr(tBu)-OH和王树脂偶联得到取代度为0.10~0.90 mmol/g取代度的Fmoc-Tyr(tBu)-王树脂；2）采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除上Fmoc-Tyr(tBu)-王树脂的Fmoc保护基，得到H-Tyr(tBu)-王树脂；3）在偶联剂系统的存在下，H-Tyr(tBu)-王树脂和Fmoc保护且侧链保护的半胱氨酸偶联得到Fmoc-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-王树脂；4）重复步骤2）、3），依次进行氨基酸(Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Mmt)-OH)偶联得到Fmoc -Cys(Mmt)Asn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂；5）采用由体积比为1:2:7的TFE、AcOH和DCM的裂解液去Mmt保护基得到Fmoc -CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂；6）采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除Fmoc保护基得到九肽片段树脂Ⅱ：H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂；所述活化剂系统由DIC、HOBt和DMAP组成；所述偶联剂系统包括缩合剂和反应溶剂，所述缩合剂选自DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOBt/DIEA；所述反应溶剂选自DMF、DCM、NMP、DMSO或他们之间的组合。
其中，步骤3所述的利那洛肽线性肽合成方法，1)Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl溶解DMF中加入H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂，在25℃下反应4小时，得到Fmoc-CysCysGluTyrCys-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂；2）采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除Fmoc保护基得到H-CysCysGluTyrCys-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂；3）采用由体积比为2.5∶5∶5∶87.5的EDT、PhSMe、H2O和TFA的裂解液去侧链保护基同时将多肽从树脂上裂解下来得到利那洛肽线性肽粗肽。
本发明的方法是经过筛选获得的，筛选过程如下：
1）反应温度的选择：
25℃和35℃
2）反应时间的选择：
2小时、4小时和6小时。
为此提出了6种实验条件：
实验条件1：1）取1.89g Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl (2.0mmol) 溶解DMF中加入3.55 g H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂(1.0mmol)，在25℃下反应4小时，得到Fmoc-CysCysGluTyrCys-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂；2）采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除Fmoc保护基得到H-CysCysGluTyrCys-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂；3）采用由体积比为2.5∶5∶5∶87.5的EDT、PhSMe、H2O和TFA的裂解液去侧链保护基同时将多肽从树脂上裂解下来得到利那洛肽线性肽；4）采用GSH/GSSH氧化体系氧化得到利那洛肽；5）纯化、冻干，得到利那洛肽精肽。
实验条件2―6，实验操作如实验条件1所示，不同的实验条件及其实验结果如下：
| 实验条件 | 温度 | 时间 | 总收率 | 纯度 |
| 实验条件1 | 25℃ | 2小时 | 29% | 99.40% |
| 实验条件2 | 25℃ | 4小时 | 36% | 99.50 % |
| 实验条件3 | 25℃ | 6小时 | 35% | 99.48 % |
| 实验条件4 | 35℃ | 2小时 | 29% | 98.45% |
| 实验条件5 | 35℃ | 4小时 | 24% | 97.34% |
| 实验条件6 | 35℃ | 6小时 | 21% | 95.34% |
以上结果表明，实验条件2的纯化效果最优。
本发明的方法和现有技术相比具有明显的优势，有关对比实验如下：
| 专利 | 总收率 | 纯度 |
| 本发明技术 | 36% | 99.50 % |
| CN 102875655A | 26% | 99.30% |
| US7304036 | 20% | 98.00% |
本发明的有益效果是：选用五肽片段Ⅰ： Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl加入九肽片段树脂Ⅱ： H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂中，通过硫酯交换和S→N 酰基转移得到新的14肽片段树脂，脱Fmoc保护基，裂解后得到纯度相对较高的利那洛肽线性肽，最后采用GSH/GSSH氧化体系氧化得到利那洛肽。本发明通过硫酯交换和S→N 酰基转移提供了一种合成条件温和，纯度、收率较高，适合规模化生产的利那洛肽的制备工艺。
附图说明
图1本发明的合成路线；
图2利那洛肽粗肽的HPLC谱图；
图3利那洛肽精肽的HPLC谱图；
图4利那洛肽对照品的HPLC谱图；
图5利那洛肽精肽质谱谱图。
具体实施方式
以下通过实施例进一步说明本发明。
具体地，关于下面实施例中涉及的各商购氨基酸以及氨基酸片段，以及各商购树脂，其生产厂家和商品型号如下：
Fmoc保护基氨基酸原料、2-CTC树脂和王树脂均为常规的市售试剂（厂家：吉尔生化（上海）有限公司；化学纯）；Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl是本专利描述合成的。
有机溶剂和其它原料来源均为市售品（厂家：国药集团化学试剂有限公司；化学纯）。
另外，下面实施例中提到的“旋蒸浓缩”以及“冻干”以及测定HPLC和质谱的条件和所用设备型号及生产厂家说明如下：
旋蒸浓缩设备：旋转蒸发仪R-200/205（瑞士Buchi(布奇)公司）；
旋蒸浓缩条件：30℃下，真空（-0.1Mpa）条件下旋蒸浓缩，浓缩后体积在旋蒸前总体积75%以下。
冻干设备：冻干机FD-3（北京博医康实验仪器有限公司）；
冻干条件：将冻干盘放入冰箱冷冻室(-20℃) 中，预冻6 h。开启冻干机，打开制冷，预冷30 min以上，设置冻干曲线如下：
第一段：在-27 ℃运行16 h；第二段：在-5℃运行4 h；第三段：在5℃运行2 h；第四段：在30℃运行16 h。
HPLC：Dionex高效液相色谱仪；用十八烷基硅烷键合硅胶（5μm，250×4.6mm）为填充剂；以0.1%TFA溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；检测波长为220nm；柱温30℃。取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
质谱： MALDI-TOF-MS 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱；仪器型号为AUTO FLEX SPEED TOF-TOF。
实施例一：取代度为0.10mmol/g的Fmoc-Cys(Trt)-CTC树脂的合成
称取取代度为0.40mmol/g的2-CTC树脂50.00g，加入到固相反应柱中，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤1次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取58.57g Fmoc-Cys(Trt)-OH(100mmol)用DMF溶解，冰水浴下加入17ml DIEA(100mmol)活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时后，加入500ml无水甲醇封闭1小时。用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，用无水甲醇封闭30分钟，甲醇收缩干燥，得到Fmoc-Cys(Trt)-CTC树脂，检测替代度为0.10mmol/g。
实施例二：取代度为0.90mmol/g的Fmoc-Cys(Trt)-CTC树脂的合成
称取取代度为1.50mmol/g的2-CTC树脂133.33g，加入到固相反应柱中，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤1次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取585.70g Fmoc-Cys(Trt)-OH(1000mmol)用DMF溶解，冰水浴下加入165ml DIEA(1000mmol)活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时后，加入2000ml无水甲醇封闭1小时。用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，用无水甲醇封闭30分钟，甲醇收缩干燥，得到Fmoc-Cys(Trt)-CTC树脂，检测替代度为0.90mmol/g。
实施例三：取代度为0.50mmol/g的Fmoc-Cys(Trt)-CTC树脂的合成
称取取代度为1.00mmol/g的2-CTC树脂200.00g，加入到固相反应柱中，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤1次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取585.70g Fmoc-Cys(Trt)-OH(1000mmol)用DMF溶解，冰水浴下加入165ml DIEA(1000mmol)活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时后，加入2000ml无水甲醇封闭1小时。用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，用无水甲醇封闭30分钟，甲醇收缩干燥，得到Fmoc-Cys(Trt)-CTC树脂，检测替代度为0.50mmol/g。
实施例四： Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-CTC树脂的合成
称取200.00g取代度为0.50mmol/g的Fmoc-Cys(Trt)-CTC树脂(100mmol)，加入固相反应柱中，用DMF洗涤1次，用DMF溶胀Fmoc- Cys(Trt)-CTC树脂30分钟后，用DMF:吡啶体积比为4:1的混合溶液脱去Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次，称取137.91g Fmoc-Tyr(tBu) -OH（300mmol）、40.52g HOBt（300mmol）加入体积比为1:1的DCM和DMF混合溶液，冰水浴下加入46ml DIC（300mmol）活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，室温下反应2小时后，以茚三酮法检测判断反应终点，如果树脂无色透明，则表示反应完全；树脂显色，则表示反应不完全，需要再反应1小时，此判断标准适用于后续氨基酸偶联中以茚三酮法检测判断反应终点。重复上述脱除Fmoc保护和加入相应氨基酸偶联的步骤，按照利那洛肽主链肽序，依次完成Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH和Fmoc-Cys(Trt)-OH的偶联。其中Fmoc-Glu(OtBu)-OH偶联时溶剂换为：选用体积比为1:4的DMSO和DMF混合溶液；Fmoc-Asp(OtBu)-OH偶联时偶联试剂换为：PyBOP/HOBt/DIEA；第二个Fmoc-Cys(Trt)-OH偶联时偶联试剂换为：HATU/HOBt/DIEA，偶联完毕，将利那洛肽CTC树脂用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，MeOH洗涤3次，DCM洗涤3次，MeOH洗涤3次，抽干得到311.43g Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-CTC树脂。
实施例五：Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-OH的合成
称取311.43g Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-CTC树脂加入到5000mL的三口圆底烧瓶中，按体积比为1:4 的TFE和DCM配置裂解液3200ml，将裂解液加入上述树脂中，室温反应2小时，过滤，用少量TFA洗涤裂解后的树脂3次，合并滤液，浓缩，将浓缩后的液体加入到冰乙醚中沉淀1小时，离心，无水乙醚离心洗涤6次，真空干燥，得到168.40g Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-OH。
实施例六：Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-SBzl的合成
称取168.40g Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-OH（100mmol），15.00g HSBzl（120mmol）加入2000ml THF中，冰水浴下加入19ml DIC（120mmol），反应1小时，升温到室温反应3小时，反应液过滤，母液旋干，加DCM溶解，过滤，饱和碳酸氢钠洗3遍，纯水2遍，反萃2遍，合并有机相，无水碳酸钠干燥，旋干，冰乙醇重结晶3次，过滤，固体油泵拉干的到158.62g Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-SBzl，收率89%。
实施例七：Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl的合成
称取158.62 g Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-SBzl加入到3000mL的三口圆底烧瓶中，按体积比为2.5∶5∶5∶87.5的EDT、PhSMe、H2O和TFA的配置裂解液1600ml，将裂解液加入上述树脂中，室温反应2小时，浓缩，将浓缩后的液体加入到冰乙醚中沉淀1小时，离心，无水乙醚离心洗涤6次，真空干燥，得到84.14g Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl。
实施例八：取代度为0.10mmol/g的Fmoc-Tyr(tBu)-王树脂的合成
称取取代度为0.40mmol/g的王树脂50g，加入到固相反应柱中，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤1次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取45.95g Fmoc-Tyr(tBu)-OH(100mmol)、13.51g HOBt(100mmol)用DMF溶解，冰水浴下加入15.5ml DIC(100mmol)活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，5分钟后加入1.22g DMAP(10mmol)，反应2小时后，用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，用100ml醋酸酐/吡啶封端过夜，甲醇收缩干燥，得到Fmoc-Tyr(tBu)-王树脂，检测替代度为0.10mmol/g。
实施例九：取代度为0.90mmol/g的Fmoc-Tyr(tBu)-王树脂的合成
称取取代度为1.50mmol/g的王树脂13.33g，加入到固相反应柱中，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤1次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取45.95g Fmoc-Tyr(tBu)-OH(100mmol)、13.51g HOBt(100mmol)用DMF溶解，冰水浴下加入15.5ml DIC(100mmol)活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，5分钟后加入1.22g DMAP(10mmol)，反应2小时后，用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，用100ml醋酸酐/吡啶封端过夜，甲醇收缩干燥，得到Fmoc-Tyr(tBu)-王树脂，检测替代度为0.90mmol/g。
实施例十：取代度为0.50mmol/g的Fmoc-Tyr(tBu)-王树脂的合成
称取取代度为1.00mmol/g的王树脂20g，加入到固相反应柱中，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤1次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取45.95g Fmoc-Tyr(tBu)-OH(100mmol)、13.51g HOBt(100mmol)用DMF溶解，冰水浴下加入15.5ml DIC(100mmol)活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，5分钟后加入1.22g DMAP(10mmol)，反应2小时后，用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，用100ml醋酸酐/吡啶封端过夜，甲醇收缩干燥，得到27.25g Fmoc-Tyr(tBu)-王树脂，检测替代度为0.50mmol/g。
实施例十一： H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂的合成
称取20.00g取代度为0.50mmol/g的Fmoc-Tyr(tBu)-王树脂（10mmol），加入固相反应柱中，用DMF洗涤1次，用DMF溶胀Fmoc-Tyr(tBu)-王树脂30分钟后，用DMF:吡啶体积比为4:1的混合溶液脱去Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次，称取17.57g Fmoc-Cys(Trt)-OH（30mmol）、4.05g HOBt（30mmol）加入体积比为1:1的DCM和DMF混合溶液，冰水浴下加入4.6ml DIC（30mmol）活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，室温下反应2小时后，以茚三酮法检测判断反应终点，如果树脂无色透明，则表示反应完全；树脂显色，则表示反应不完全，需要再反应1小时，此判断标准适用于后续氨基酸偶联中以茚三酮法检测判断反应终点。重复上述脱除Fmoc保护和加入相应氨基酸偶联的步骤，按照利那洛肽主链肽序，依次完成Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH 、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Mmt)-OH的偶联。
其中Fmoc-Thr(tBu)-OH偶联时溶剂换为：选用体积比为1:4的DMSO和DMF混合溶液；Fmoc-Asn(Trt)-OH偶联时偶联试剂换为：PyBOP/HOBt/DIEA；Fmoc-Cys(Mmt)-OH偶联时偶联试剂换为：HATU/HOBt/DIEA，偶联完毕，采用由体积比为1:2:7的TFE、AcOH和DCM的裂解液去Mmt保护基，然后用DMF洗涤6次，得到Fmoc -CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂，用DMF:吡啶体积比为4:1的混合溶液脱去Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次，DCM洗涤3次，MeOH洗涤3次，DCM洗涤3次，MeOH洗涤3次，抽干得到35.53g H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂。
实施例十二：H-CysCysGluTyrCys-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂的合成
称取35.53g H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂（10mmol），加入固相反应柱中，用DMF洗涤1次，用DMF溶胀H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂30分钟后，称取18.92g Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl（20mmol）加入DMF溶液，加入上述装有树脂的反应柱中，25℃下反应4小时后，得到Fmoc-CysCysGluTyrCys-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂。用DMF:吡啶体积比为4:1的混合溶液脱去Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次，DCM洗涤3次，MeOH洗涤3次，DCM洗涤3次，MeOH洗涤3次，抽干得到42.54g H- CysCysGluTyrCys-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂，肽树脂收率：99%。
实施例十三：利那洛肽线性肽的合成
称取41.53g H- CysCysGluTyrCys-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂，加入到1000mL的三口圆底烧瓶中，按体积比为2.5∶5∶5∶87.5的EDT、PhSMe、H2O和TFA的配置裂解液420ml，将裂解液加入上述树脂中，室温反应2小时，浓缩，将浓缩后的液体加入到冰乙醚中沉淀1小时，离心，无水乙醚离心洗涤6次，真空干燥，得到15.02 g利那洛肽线性肽，线性肽收率：98%。
实施例十四：利那洛肽粗肽的制备
以1mg/ml 的浓度将15.02g利那洛肽线性肽（10mmol）溶于15L水中。在溶液中加入30.75g GSH（100mmol）和6.13g GSSG（10mmol）搅拌溶解后，用乙酸或氨水将pH值调至7.5-7.9，25-30℃搅拌反应12小时，HPLC检测，其HPLC谱图如图2所示，HPLC纯度87.50%，环化收率：利那洛肽对照品浓度×利那洛肽粗肽峰面积/利那洛肽对照品峰面积×体积/（10 mmol×利那洛肽分子量）=1×192.202/240.202×15/（10×1.526）=79%，利那洛肽粗肽=利那洛肽对照品浓度×利那洛肽粗肽峰面积/利那洛肽对照品峰面积×体积=1×192.202/240.202×15=12.00g。
注：利那洛肽对照品浓度：1.0 mg/ml；
体积：15L；
利那洛肽粗肽峰面积：192.202 mAU*min；
利那洛肽对照品峰面积：240.202 mAU*min（HPLC谱图如图4）。
实施例十五：利那洛肽精肽的制备
将上述反应液用乙酸将pH值调至5.5-6.5，通过C18或C8柱2次纯化、转盐、冷冻干燥后得到目标产物。第一次纯化条件：流动相为：A相： 0.1%TFA；B相：乙腈，检测波长220nm，收集目的峰馏分。第二次纯化条件：流动相为：A相： 0.3%乙酸；B相：乙腈。检测波长220nm，收集目的峰馏分。转盐条件：流 动 相：A相：20mM乙酸铵-水溶液；B相：乙腈；检测波长220nm。收集目的峰馏分，旋蒸浓缩，冻干得到利那洛肽精肽5.61 g，其HPLC谱图如图3，HPLC纯度99.50 %，单杂≤0.20 %，纯化总收率47%（利那洛肽精肽/利那洛肽粗肽=5.61/12.00），所示总收率36%（肽树脂收率×线性肽收率×环化收率×纯化总收率=99%×98%×79%×47%）。其质谱如图5所示，[M+Na]+：1548.318、[M+K]+：1564.298，利那洛肽的理论精确分子量为：1525.8，样品质谱结果与理论分子量相符，结构正确。
以上内容是结合具体的修选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保户范围。
Claims (6)
1.一种制备利那洛肽的方法，所述方法步骤如下：
步骤1，结合固液相方法合成五肽片段Ⅰ：Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl；
步骤2，通过固相方法合成九肽片段树脂Ⅱ：H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂；
步骤3，将五肽片段Ⅰ加入九肽片段树脂Ⅱ中，通过硫酯交换和S→N 酰基转移得到新的长肽片段树脂，脱Fmoc保护基，裂解后得到利那洛肽线性肽；
步骤4，最后采用GSH/GSSH氧化体系氧化得到利那洛肽。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：
其中，步骤1所述的五肽片段Ⅰ：Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl的合成方法包括如下步骤：1）采用2-CTC树脂为起始树脂，在活化剂系统的存在下， Fmoc-Cys(Trt)-OH和2-CTC树脂偶联得到取代度为0.10~0.90 mmol/g的Fmoc-Cys(Trt)-CTC树脂；2）采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除上Fmoc-Cys(Trt)-CTC树脂的Fmoc保护基，得到H-Cys(Trt)-CTC树脂；3）在偶联剂系统的存在下，H-Cys(Trt)-CTC树脂和Fmoc保护且侧链保护的酪氨酸偶联得到Fmoc-Tyr(tBu)-Cys(Trt)-CTC树脂；4）重复步骤2）、3），依次进行氨基酸（Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH）偶联得到Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)- CTC树脂；5）采用由体积比为1:4 的TFE和DCM组成的裂解液裂解树脂后得到Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-OH；6）采用液相方法，Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-OH、HSBzl和DIC偶联得到合成Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-SBzl；7）采用由体积比为2.5∶5∶5∶87.5的EDT、PhSMe、H2O和TFA的裂解液去五肽侧链保护基得到五肽片段Ⅰ：Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是：
其中，步骤2所述九肽片段树脂Ⅱ：H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂的合成方法包括如下步骤：1）采用王树脂为起始树脂，在活化剂系统的存在下， Fmoc-Tyr(tBu)-OH和王树脂偶联得到取代度为0.10~0.90 mmol/g取代度的Fmoc-Tyr(tBu)-王树脂；2）采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除上Fmoc-Tyr(tBu)-王树脂的Fmoc保护基，得到H-Tyr(tBu)-王树脂；3）在偶联剂系统的存在下，H-Tyr(tBu)-王树脂和Fmoc保护且侧链保护的半胱氨酸偶联得到Fmoc-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-王树脂；4）重复步骤2）、3），依次进行氨基酸(Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Mmt)-OH)偶联得到Fmoc -Cys(Mmt)Asn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂；5）采用由体积比为1:2:7的TFE、AcOH和DCM的裂解液去Mmt保护基得到Fmoc -CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂；6）采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除Fmoc保护基得到九肽片段树脂Ⅱ：H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征是：
其中，步骤3所述的利那洛肽线性肽合成方法，1)Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl溶解DMF中加入H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂，在25℃下反应4小时，得到Fmoc-CysCysGluTyrCys-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂；2）采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除Fmoc保护基得到H-CysCysGluTyrCys-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王树脂；3）采用由体积比为2.5∶5∶5∶87.5的EDT、PhSMe、H2O和TFA的裂解液去侧链保护基同时将多肽从树脂上裂解下来得到利那洛肽线性肽粗肽。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征是：
所述活化剂系统选自NMM、DIEA或TMP；所述偶联剂系统包括缩合剂和反应溶剂，所述缩合剂选自DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOBt/DIEA；所述反应溶剂选自DMF、DCM、NMP、DMSO或他们之间的任意组合。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征是：
所述活化剂系统由DIC、HOBt和DMAP组成；所述偶联剂系统包括缩合剂和反应溶剂，所述缩合剂选自DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOBt/DIEA；所述反应溶剂选自DMF、DCM、NMP、DMSO或他们之间的组合。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410357720.3A CN104163853B (zh) | 2014-07-25 | 2014-07-25 | 一种制备利那洛肽的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410357720.3A CN104163853B (zh) | 2014-07-25 | 2014-07-25 | 一种制备利那洛肽的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104163853A true CN104163853A (zh) | 2014-11-26 |
| CN104163853B CN104163853B (zh) | 2017-01-11 |
Family
ID=51907852
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410357720.3A Expired - Fee Related CN104163853B (zh) | 2014-07-25 | 2014-07-25 | 一种制备利那洛肽的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104163853B (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017101810A1 (zh) * | 2015-12-18 | 2017-06-22 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种利那洛肽的合成方法 |
| CN107383170A (zh) * | 2017-08-15 | 2017-11-24 | 苏州科技大学 | 一种普卡那肽的简易合成方法 |
| CN107936094A (zh) * | 2017-12-30 | 2018-04-20 | 江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司 | 一种利拉洛肽的固液相相结合的合成方法 |
| CN109021087A (zh) * | 2018-09-17 | 2018-12-18 | 滨海吉尔多肽有限公司 | 一种固液相结合制备齐考诺肽的方法 |
| CN113754735A (zh) * | 2021-10-11 | 2021-12-07 | 杭州信海医药科技有限公司 | 一种利那洛肽的制备方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102875655B (zh) * | 2012-09-29 | 2014-12-17 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种合成利那洛肽的方法 |
| CN103626849B (zh) * | 2013-11-27 | 2017-01-11 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种利那洛肽的制备方法 |
-
2014
- 2014-07-25 CN CN201410357720.3A patent/CN104163853B/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017101810A1 (zh) * | 2015-12-18 | 2017-06-22 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种利那洛肽的合成方法 |
| US10442838B2 (en) | 2015-12-18 | 2019-10-15 | Hybio Pharmaceutical Co., Ltd. | Linaclotide synthesis method |
| CN107383170A (zh) * | 2017-08-15 | 2017-11-24 | 苏州科技大学 | 一种普卡那肽的简易合成方法 |
| CN107936094A (zh) * | 2017-12-30 | 2018-04-20 | 江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司 | 一种利拉洛肽的固液相相结合的合成方法 |
| CN109021087A (zh) * | 2018-09-17 | 2018-12-18 | 滨海吉尔多肽有限公司 | 一种固液相结合制备齐考诺肽的方法 |
| CN113754735A (zh) * | 2021-10-11 | 2021-12-07 | 杭州信海医药科技有限公司 | 一种利那洛肽的制备方法 |
| CN113754735B (zh) * | 2021-10-11 | 2023-07-21 | 杭州信海医药科技有限公司 | 一种利那洛肽的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104163853B (zh) | 2017-01-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104356224A (zh) | 一种制备萨摩鲁泰的方法 | |
| CN103980358B (zh) | 一种制备利拉鲁肽的方法 | |
| CN102875655B (zh) | 一种合成利那洛肽的方法 | |
| CN104163853A (zh) | 一种制备利那洛肽的方法 | |
| CN101357936B (zh) | 固相多肽合成曲普瑞林的制备方法 | |
| CN103992383B (zh) | 一种制备艾替班特的方法 | |
| CN104086632A (zh) | 一种制备西曲瑞克的方法 | |
| US10577394B2 (en) | Ganirelix precursor and method for preparing ganirelix acetate by using the same | |
| CN106167514A (zh) | 一种利那洛肽的合成和纯化方法 | |
| EP3438121A1 (en) | Liquid phase synthesis method for oxytocin using polypeptides | |
| EP3398957A1 (en) | Method for synthesizing etelcalcetide | |
| CN105504012A (zh) | 一种多肽的制备方法 | |
| CN107573408A (zh) | 一种高纯度亮丙瑞林的合成方法 | |
| CN103819553A (zh) | 一种使用固相和液相组合技术制备利西拉来的方法 | |
| CN104211801A (zh) | 一种制备利西拉来的方法 | |
| CN105001307B (zh) | 一种溶解难溶多肽的偶联肽链及其在液相色谱中分离纯化的应用 | |
| CN104861042A (zh) | 特异性微波合成制备醋酸西曲瑞克的方法 | |
| Anfinsen et al. | The synthesis of protected peptide fragments of a staphylococcal nuclease. | |
| CN105001298A (zh) | 一种难溶多肽的合成-分离纯化方法 | |
| CN104356221B (zh) | 一种制备培西加南的方法 | |
| CN103980357A (zh) | 一种合成胸腺法新的方法 | |
| CN104017058B (zh) | 一种制备醋酸加尼瑞克的方法 | |
| CN103351426B (zh) | 一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法 | |
| CN107778351B (zh) | 一种全固相合成奥曲肽的方法 | |
| CN104447963B (zh) | 一种制备阿肽地尔的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 310018 Hangzhou economic and Technological Development Zone, Zhejiang, No. 6 Avenue, No. 452 Applicant after: HANGZHOU ADLAI NORTYE PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: 310018 Hangzhou economic and Technological Development Zone, Zhejiang, No. 6 Avenue, No. 452 Applicant before: Hangzhou Sinopep Pharmaceutical Inc. Address after: 310018 Hangzhou economic and Technological Development Zone, Zhejiang, No. 6 Avenue, No. 452 Applicant after: ADLAI NORTYE BIOPHARMA Co.,Ltd. Address before: 310018 Hangzhou economic and Technological Development Zone, Zhejiang, No. 6 Avenue, No. 452 Applicant before: HANGZHOU ADLAI NORTYE PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd. |
|
| COR | Change of bibliographic data | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP03 | Change of name, title or address | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 310018 Building C2109-2117, D2101-2117, 452 No. 6 Street, Hangzhou Economic and Technological Development Zone, Zhejiang Province Patentee after: Hangzhou Arnold Biomedical Technology Co.,Ltd. Address before: 310018 452 No. 6 Street, Hangzhou Economic and Technological Development Zone, Zhejiang Province Patentee before: ADLAI NORTYE BIOPHARMA Co.,Ltd. |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Method for preparing linaclotide Effective date of registration: 20190215 Granted publication date: 20170111 Pledgee: Hangzhou United Rural Commercial Bank Limited by Share Ltd. branch of science and technology Pledgor: Hangzhou Arnold Biomedical Technology Co.,Ltd. Registration number: 2019330000054 |
|
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Date of cancellation: 20201010 Granted publication date: 20170111 Pledgee: Hangzhou United Rural Commercial Bank Limited by Share Ltd. branch of science and technology Pledgor: Hangzhou Arnold Biomedical Technology Co.,Ltd. Registration number: 2019330000054 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20170111 Termination date: 20210725 |