CN104130171A - 一种莱菔硫烷的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种以芸苔属蔬菜为原料制备莱菔硫烷的方法。原料经粉碎后，在特定pH值下水解，水解后除去蛋白质，采用大孔吸附树脂吸附，乙醇水溶液洗脱，从而有效地提高莱菔硫烷的含量。

Description

一种莱菔硫烷的制备方法

技术领域：

本发明涉及一种以芸苔属蔬菜为原料制备莱菔硫烷的方法。 

背景技术：

莱菔硫烷(sulforaphane，1-异硫氰基-4R-[甲基亚硫酰基]丁烷)广泛存在于十字花科植物芸苔属(Brassica)蔬菜中，人们日常食用的蔬菜，如结球甘蓝、抱子甘蓝、散叶甘蓝、球茎甘蓝、青花菜、芥菜和辣根等都属于这一类蔬菜。 

葡萄糖莱菔硫烷(glucoraphanin)是莱菔硫烷的前体物，葡萄糖莱菔硫烷经芥子硫苷酸酶水解生成莱菔硫烷。 

一、莱菔硫烷的生理功能： 

1、莱菔硫烷不具有任何细胞毒性。 

2、抑制肿瘤的形成 

大量实验证明，莱菔硫烷对食道癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、肝癌及大肠癌等都有很好的防治效果。 

3、莱菔硫烷提高组织的谷胱甘肽水平 

4、莱菔硫烷可以诱导细胞合成II型解毒酶，如谷胱甘肽转移酶、NAD(P)H-醌还原酶、血红素氧化酶，使细胞免受活性氧的攻击。 

5、抑制并杀死幽门螺杆菌。 

近几年，人们逐渐认识到莱菔硫烷具有诱导II型解毒酶和抑制肿瘤形成的功能，因而莱菔硫烷的制备也倍受关注。 

二、莱菔硫烷的制备方法 

1、全化学合成法 

最初的化学合成制备莱菔硫烷的方法是由Schmid和Karier于1948年发明的，该方法虽然反应过程简单，但是合成出来菔硫烷为外消旋体(D型和L型的莱菔硫烷的混合物)，而天然的莱菔硫烷为L型的。现今大多采用立体化学手性合成的方法制备。手性合成法虽然只合成L型的莱菔硫烷，但是反应机理复杂，反应步骤多，产率不高，副产物多，分离提取困难等缺点，再加上原材料成本高难以大规模工业化生产。 

2、天然产物提取法 

Davide Berteli等用二氯甲烷萃取青花菜的水解物，再利用固相萃取(SPE)分离纯化莱菔硫烷，实验步骤简单，莱菔硫烷的纯度也较高；Kore等采用葡聚糖凝胶过滤的方法可以将莱菔硫烷和莱菔硫烷腈很好的分离，Nathan等提出了采用制备色谱从青花菜种子中分离纯化莱菔硫烷的工艺，该工艺一也可以将莱菔硫烷和莱菔硫烷腈等完全分离，但以上这三种方法都只限于实验水平，难于大规模生产。 

公开号为CN1149986A的中国专利申请公开了一种制备含莱菔硫烷的芸苔属蔬菜压片的制备方法。该方法通过钝化芸苔属蔬菜中内生的黑芥子硫苷酸酶，添加外生的黑芥子硫苷酸酶转化成为莱菔硫烷。该方法只涉及含莱菔硫烷的蔬菜浓缩物和增补剂，但是未涉及莱菔硫烷分离纯化。 

发明内容：

本发明的目的在于提供一种莱菔硫烷的制备方法。以芸苔属蔬菜为原料经粉碎后，在特定pH值下水解，水解液通过调节pH值除去蛋白，采用以聚苯乙烯基苯为基体的大孔吸附树脂进行吸附，经过乙醇水溶液进行洗脱，从而有效地提高莱菔硫烷的含量。 

发明要点： 

本发明的原料采用芸苔属蔬菜，包括，但不仅限于，结球甘蓝、抱子甘蓝、散叶甘蓝、球茎甘蓝、青花菜、芥菜和辣根，本方法适用于以芸苔属蔬菜的种子、花、茎和叶等组织作为原料。对于本方法优选的芸苔属蔬菜是青花菜(别名：绿菜花、西兰花)，最优选的原料是青花菜的花和种子。 

水解液离心以后，上清液调节pH值以除去蛋白，防止上柱堵塞，柱压过高。 

具体步骤如下： 

1、莱菔硫烷的生成 

以种子、花、茎、叶为原料可以直接研磨成粉末，先加入质量比1∶1的去离子水，pH值为2.2-7.5的Na2HPO4-柠檬酸缓冲液溶液，水解2-8小时。 

2、除去蛋白 

水解液离心后取其上清液，调节pH值为2～3左右，可以有效地除去蛋白质，而且 

莱菔硫烷的含量不受影响。离心，取上清液。 

3、大孔吸附树脂吸附与解析 

将处理好的一定量的聚苯乙烯基苯为基体的大孔吸附树脂装柱，以步骤2得到的除去蛋白后的上清液为上样液，在一定的流速下过柱，等到吸附平衡后，使用乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，除去乙醇，冷冻干燥后得到莱菔硫烷产品； 

上述方法中，步骤1所采用的蔬菜种子可以为脱脂或未脱脂的种子。 

上述方法中，步骤2所采用的以聚苯乙烯基苯为基体大孔吸附树脂型号包括非极性的、中等极性的以及极性的。 

发明效果： 

经过本发明使用的方法最终得到莱菔硫烷的产品的纯度达到30％～40％。 

具体实施方式：

实施例1： 

(1)水解生成莱菔硫烷 

称取50g青花菜种子，研磨成粉末状，加入300mL pH值为7.0的缓冲溶液，水解5h； 

(2)除去蛋白 

调节步骤1的上清液的pH值到2，离心，取上清液。 

(3)大孔吸附树脂吸附与解析 

步骤2的上清液作为上柱液体经过10ml大孔吸附树脂SP850吸附后，使用100ml的40％乙醇溶液进行洗脱，减压蒸馏浓缩为黄褐色油状的莱菔硫烷产品，含量为40.52％； 

实施例2： 

(1)水解生成莱菔硫烷 

称取经石油醚脱脂的50g青花菜种子粉末，加入300mL pH值为7.0的缓冲溶液，水解5h； 

(2)除去蛋白 

调节步骤1的上清液的pH值到3，离心，取上清液。 

(3)大孔吸附树脂吸附与解析 

步骤2的上清液作为上柱液体经过10ml大孔吸附树脂SP207吸附后，使用100ml的60％乙醇溶液进行洗脱，减压蒸馏浓缩为黄褐色油状的莱菔硫烷产品，含量为34.72％。 

Claims (3)

1.利用芝麻菜苷制备莱菔硫烷的方法，其特征在于步骤如下： 

(1)莱菔硫烷的生成 

以种子、花、茎、叶为原料可以直接研磨成粉末，先加入质量比1∶1的去离子水，pH值为2.2-7.5的Na2HPO4-柠檬酸缓冲液溶液，水解2-8小时。 

(2)除去蛋白 

水解液离心后取其上清液，调节pH值为2～3左右，可以有效地除去蛋白质，而且莱菔硫烷的含量不受影响。离心，取上清液。 

(3)大孔吸附树脂吸附与解析 

将处理好的一定量的聚苯乙烯基苯为基体的大孔吸附树脂装柱，以步骤2得到的除去蛋白后的上清液为上样液，在一定的流速下过柱，等到吸附平衡后，使用乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，除去乙醇，冷冻干燥后得到莱菔硫烷产品。 

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1所采用的蔬菜种子可以为脱脂或未脱脂的种子。 

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2所采用的以聚苯乙烯基苯为基体大孔吸附树脂型号包括非极性的、中等极性的以及极性的。