CN104130074A - 一种牛樟菌的液态碳氮源培养基及培养方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种牛樟菌的液态碳氮源培养基。所述的培养基包含以下重量份的组分：牛樟木萃取的营养液5%-10%，葡萄糖10%-20%，可溶性淀粉0.5%-2%，酵母0.1%-5%，麦芽糖0.1%-20%，蛋白5%-10%，蔬菜汁2%-6%，固化剂0.5-5%，水余量。采用该培养基进行牛樟菌培养的方法为先将菌种活化，再将活化的菌种进行摇瓶培养获得牛樟菌体，再将牛樟菌体烘干制得牛樟干燥菌块，最后将干燥菌块进行休眠。采用本发明所述的培养基进行牛樟菌培养时，可提高牛樟菌的产量，也提高了其三萜类的含量，还避免传统的液态培养基培养时其他微生物的污染。

Description

一种牛樟菌的液态碳氮源培养基及培养方法

技术领域

本发明涉及一种真菌培养基，具体涉及一种牛樟菌的液态碳氮源培养基及培养方法。

背景技术

牛樟芝(Taiwanofungus camphorates)，又名牛樟菇或樟芝，属于真菌界中的担子菌门(Basidiomycota)、担子菌亚(Basidiomycotina)、同担子菌纲(Homobasidiomycetes)、无折菌目(Aphyllophorales)、多孔菌科(Polyporaceae)、薄孔菌属(Antrodia)。牛樟芝自身富含的麦角固醇三萜类化合物和多醣体具有显著的生理活性，可迅速有效地找到癌细胞，并侵入癌细胞诱导其凋亡，同时大幅度提升人体自身免疫系统，以达到抗癌强体的目的，因此，抗癌效果显著。牛樟芝的生长经历了菌丝体、类子实体菌包及子实体的过程，研究证实，无论是野生的还是人工栽培的子实体均含有麦角固醇三萜类化合物，而无论是野生的还是人工栽培的的菌丝体都不含麦角固醇三萜类化合物。

牛樟芝只生长在台湾的保育树种牛樟木上，为台湾特有菇类，也是目前世界是最珍贵的真菌。但野生牛樟芝子实体取得不易，且价格昂贵，且野生牛樟芝子实体三萜类不易萃取出，且萃取成本高。因此，目前业者希望通过实验室人工培养的方式来培养产生大量牛樟菌，以萃取其三萜类成分。目前多数采用固态培养方式以培养出大量牛樟菌菌丝体，但牛樟菌菌丝体生长布满在固态培养基表面后，其生长速度就会开始减慢，因此，如何提高人工培养的牛樟菌的生长速度，提高牛樟菌的产量是值得探讨的研究的问题。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明提供牛樟菌的液态碳氮源培养基。

本发明的技术方案如下：

一种牛樟菌的液态碳氮源培养基，所述的培养基包含以下重量份的组分：

牛樟木萃取的营养液    5%-10%，

葡萄糖                10%-20%，

可溶性淀粉            0.5%-2%，

酵母                  0.1%-5%，

麦芽糖                0.1%-20%，

蛋白胨                5%-10%，

蔬菜汁                2%-6%，

固化剂                0.5-5%，

水                    余量。

优选的，所述的葡萄糖、可溶性淀粉、酵母及麦芽糖的重量百分比为（5-12）：（0.8-3）：（1.2-3.5）：（（6-12）。

优选的，所述的水为二次蒸馏水。

优选的，所述的蔬菜汁为胡萝卜汁。

优选的，所述的固化剂为琼脂。

所述的培养基配制步骤为：将重量百分比为5%-10%的牛樟木萃取的营养液、 10%-20%的葡萄糖 、0.5%-2%的可溶性淀粉 、0.1%-5%的酵母、0.1%-20%的麦芽糖、5%-10%的蛋白胨 、2%-6%的蔬菜汁、0.5-5%的固化剂 、加水配制成混合溶液，煮沸溶解，加热至50-60℃浓缩0.5-1h。

采用如上所述的培养基进行牛樟菌培养的方法，包括以下步骤：

（1）菌种活化：从斜面试管将菌种接种于培养皿中，培养，得活化的菌种；

（2）取步骤（1）中培养后的活化的菌种0.5-2cm2置入装有50-100ml培养基的三角瓶中培养获得牛樟菌体；

（3）将步骤（2）中的获得的牛樟菌体干燥，获得牛樟干燥菌块;

（4）将牛樟干燥菌块密封于培养环境，避光，停止供氧，将温度调低至休眠温度，使牛樟菌进入休眠期并维持4-12个月；

优选的，步骤（1）中所述的培养温度为25-28℃，所述的培养时间为5-7d。

优选的，步骤（2）中所述的培养为摇床培养，所述的摇床培养的速度为100-150r/min，所述的培养温度为25-28℃，培养时间为5-7d。

优选的，步骤（3）中的干燥温度为30-40℃，干燥时间为1-3h；步骤（3）中所述的干燥方式为烘干，所述的牛樟干燥菌块的含水量低于2%；步骤（4）中所述的休眠温度为15-25℃。

本发明与现有技术相比，有益效果体现在以下几点：

1.研究显示，适宜樟芝菌丝体生物的碳氮源为葡萄糖、可溶性淀粉、酵母粉及麦芽糖，而以麦芽糖最为适宜，可提高三萜含量，根据牛樟菌的适宜生长环境，本发明将培养基的成分限定为牛樟木萃取的营养液、葡萄糖、可溶性淀粉、酵母、麦芽糖、蛋白胨、蔬菜汁、固化剂、水，且将各个成分按一定比例配制，尤其适合牛樟菌的培养，从而提高牛樟菌的产量，也提高了其三萜类的含量。

2.本发明在采用所述的培养基进行牛樟菌培养时，先进行菌种活化，再进行摇瓶培养，可使牛樟菌迅速繁殖，避免了传统的液态培养基培养时其他微生物污染的情形。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明。

实施例1

一种牛樟菌的液态碳氮源培养基，所述的培养基包含以下重量份的组分：

牛樟木萃取的营养液    5%，

葡萄糖                10%，

可溶性淀粉            0.5%，

酵母                  0.1%，

麦芽糖                0.1%，

蛋白胨                5%，

胡萝卜汁               2%，

琼脂                   0.5，

  二次蒸馏水             余量。

所述的培养基配制步骤为：将重量百分比为5%的牛樟木萃取的营养液、 10%的葡萄糖 、0.5%的可溶性淀粉 、0.1%的酵母、0.1%的麦芽糖、5%的蛋白胨 、2%的胡萝卜汁、0.5%的琼脂、加水配制成混合溶液，煮沸溶解，加热至50℃浓缩0.5h。

采用如上所述的培养基进行牛樟菌培养的方法，包括以下步骤：

（1）菌种活化：从斜面试管将菌种接种于培养皿中，培养，培养温度为25℃，培养时间为5d，得活化的菌种；

（2）取步骤（1）中培养后的活化的菌种0.5cm2置入装有50ml培养基的三角瓶中进行摇床培养获得牛樟菌体，摇床培养的速度为100r/min，培养温度为25℃，培养时间为5d；

（3）将步骤（2）中的获得的牛樟菌体烘干，干燥温度为30℃，干燥时间为1h，获得含水量低于2%的牛樟干燥菌块；

（4）将牛樟干燥菌块密封于培养环境，避光，停止供氧，将温度调低至休眠温度15℃，使牛樟菌进入休眠期并维持4个月。

实施例2

一种牛樟菌的液态碳氮源培养基，所述的培养基包含以下重量份的组分：

牛樟木萃取的营养液       10%，

葡萄糖                   20%，

可溶性淀粉              2%，

酵母                    5%，

麦芽糖                  20%，

蛋白胨                  10%，

胡萝卜汁                6%，

琼脂                    5%，

二次蒸馏水              余量。

所述的培养基配制步骤为：将重量百分比为10%的牛樟木萃取的营养液、20%的葡萄糖 、2%的可溶性淀粉 、5%的酵母、20%的麦芽糖、10%的蛋白胨 、6%的胡萝卜汁、5%的琼脂 、加水配制成混合溶液，煮沸溶解，加热至60℃浓缩1h。

采用如上所述的培养基进行牛樟菌培养的方法，包括以下步骤：

（1）菌种活化：从斜面试管将菌种接种于培养皿中，培养，培养温度为28℃，培养时间为7d，得活化的菌种；

（2）取步骤（1）中培养后的活化的菌种2cm2置入装有100ml培养基的三角瓶中进行摇床培养获得牛樟菌体，摇床培养的速度为150r/min，培养温度为28℃，培养时间为7d；

（3）将步骤（2）中的获得的牛樟菌体烘干，干燥温度为40℃，干燥时间为3h，获得含水量低于2%的牛樟干燥菌块；

（4）将牛樟干燥菌块密封于培养环境，避光，停止供氧，将温度调低至休眠温度25℃，使牛樟菌进入休眠期并维持4-12个月。

实施例3

一种牛樟菌的液态碳氮源培养基，所述的培养基包含以下组分：牛樟木萃取的营养液、葡萄糖、可溶性淀粉、酵母、麦芽糖 、蛋白胨 、胡萝卜汁、琼脂、二次蒸馏水。

所述的葡萄糖、可溶性淀粉、酵母及麦芽糖的重量份之比为5：0.8：1.2：6。

所述的培养基配制步骤为：将重量百分比为8%的牛樟木萃取的营养液、8%的蛋白胨 、4%的胡萝卜汁、3%的琼脂 、重量份之比为为5：0.8：1.2：6葡萄糖、可溶性淀粉、酵母及麦芽糖、加水配制成混合溶液，煮沸溶解，加热至55℃浓缩0.8h。

采用如上所述的培养基进行牛樟菌培养的方法，包括以下步骤：

（1）菌种活化：从斜面试管将菌种接种于培养皿中，培养，培养温度为26℃，培养时间为6d，得活化的菌种；

（2）取步骤（1）中培养后的活化的菌种1cm2置入装有70ml培养基的三角瓶中进行摇床培养获得牛樟菌体，摇床培养的速度为120r/min，培养温度为26℃，培养时间为6d；

（3）将步骤（2）中的获得的牛樟菌体烘干，干燥温度为35℃，干燥时间为2h，获得含水量低于2%的牛樟干燥菌块；

（4）将牛樟干燥菌块密封于培养环境，避光，停止供氧，将温度调低至休眠温度20℃，使牛樟菌进入休眠期并维持10个月。

上述实施例仅为本发明的优选实施方式，并不应理解为对本发明的限定，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种牛樟菌的液态碳氮源培养基，其特征在于，所述的培养基包含以下重量份的组分：

牛樟木萃取的营养液    5%-10%，

葡萄糖                10%-20%，

可溶性淀粉            0.5%-2%，

酵母                  0.1%-5%，

麦芽糖                0.1%-20%，

蛋白胨                5%-10%，

蔬菜汁                2%-6%，

固化剂                0.5-5%，

水                    余量。

2.根据权利要求1所述的牛樟菌的液态碳氮源培养基，其特征在于，所述的所述的葡萄糖、可溶性淀粉、酵母及麦芽糖的重量百分比为（5-12）：（0.8-3）：（1.2-3.5）：（（6-12）。

3.根据权利要求1所述的牛樟菌的液态碳氮源培养基，其特征在于，所述的水为二次蒸馏水。

4.根据权利要求1所述的牛樟菌的液态碳氮源培养基，其特征在于，所述的蔬菜汁为胡萝卜汁。

5.根据权利要求1所述的牛樟菌的液态碳氮源培养基，其特征在于，所述的固化剂为琼脂。

6.根据权利要求1所述的牛樟菌的液态碳氮源培养基，其特征在于，所述的培养基配制步骤为：将重量百分比为5%-10%的牛樟木萃取的营养液、 10%-20%的葡萄糖 、0.5%-2%的可溶性淀粉 、0.1%-5%的酵母、0.1%-20%的麦芽糖、5%-10%的蛋白胨、2%-6%的蔬菜汁、0.5-5%的固化剂 、加水配制成混合溶液，煮沸溶解，加热至50-60℃浓缩0.5-1h。

7.采用如权利要求1-6任一所述的培养基进行牛樟菌培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）菌种活化：从斜面试管将菌种接种于培养皿中，培养，得活化的菌种；

（2）取步骤（1）中培养后的活化的菌种0.5-2cm2置入装有50-100ml培养基的三角瓶中培养获得牛樟菌体；

（3）将步骤（2）中的获得的牛樟菌体干燥，获得牛樟干燥菌块;

（4）将牛樟干燥菌块密封于培养环境，避光，停止供氧，将温度调低至休眠温度，使牛樟菌进入休眠期并维持4-12个月。

8.根据权利要求7所述的牛樟菌培养的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的培养温度为25-28℃，所述的培养时间为5-7d。

9.根据权利要求7所述的牛樟菌培养的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的培养为摇床培养，所述的摇床培养的速度为100-150r/min，所述的培养温度为25-28℃，培养时间为5-7d。

10.根据权利要求7所述的牛樟菌培养的方法，其特征在于，步骤（3）中的干燥温度为30-40℃，干燥时间为1-3h；步骤（3）中所述的干燥方式为烘干，所述的牛樟干燥菌块的含水量低于2%；步骤（4）中所述的休眠温度为15-25℃。