CN103497029A - 一种微生物肥料中复合菌种的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种微生物肥料中复合菌种的制备方法，将复合微生物菌剂中的菌种分别进行单独发酵后得到各菌种的单一菌液；再将单一菌液混合进行发酵得到复合微生物菌剂。该方法制备的复合微生物肥料能有效保持菌种活性，菌种间的协同性强，肥效高。
Description
技术领域
本发明涉及微生物肥料技术领域，特别是涉及一种微生物肥料中复合菌种的制备方法。
背景技术
现在市面上有多种多样的微生物有机肥料，而在人们日益追求更高品质的生活的今天，开发高效安全的肥料已经成为发展的趋势。而现有的果树肥料大都为会造成药物残留，很多都对人体有强烈的毒副作用，并且造价高、生产工艺复杂。由于化学肥料的过量使用和作物的连年种植，土壤开始大面积板结，土壤中的有益菌群越来越少，重茬、根结线虫等土传病害日益严重；还会造成树体羸弱、不抽条、抗病力差，各种生理性病害和侵染性病害频发，喷洒型肥料可避免这些问题。此外，苹果是人们日常生活中最喜爱的并且普及面最广一种水果之一，苹果极易出现变色、软化和腐烂的现象，尤其是苹果褐变是最常见的问题，低温、气调和化学防腐剂是目前苹果保鲜的最有效方法，但是普遍存在成本高、有药品残留等问题。一种从苹果生长期就兼顾预防苹果褐变的问题的果树肥料，是本发明需要解决的问题。
发明内容
本发明的目的就是针对上述存在的缺陷而提供一种微生物肥料中复合菌种的制备方法。将复合微生物菌剂中的菌种分别进行单独发酵后得到各菌种的单一菌液；再将单一菌液混合进行发酵得到复合微生物菌剂。该方法制备的复合微生物肥料能有效保持菌种活性，菌种间的协同性强，肥效高。
本发明的一种微生物肥料中复合菌种的制备方法技术方案为，
（1）将复合微生物菌剂中的菌种分别进行单独发酵后得到各菌种的单一菌液；
（2）将单一菌液混合进行发酵得到复合微生物菌剂；
其中，该微生物肥料含有按重量份的以下组分：聚丙烯酰胺10-20份、苦参碱3-5份、抗坏血酸3-5份、EDTA3-5份、ZnCl23-5份以及微生物菌剂50-150份，其余为水；复合微生物菌剂为酵母菌、地衣芽孢菌、枯草芽孢杆菌、光合菌、细黄链霉菌、侧孢芽孢杆菌。
步骤（1）具体为，将酵母菌、地衣芽孢菌、枯草芽孢杆菌、光合菌、细黄链霉菌、侧孢芽孢杆菌分别接种于一级培养基，活化培养为一级菌种；将一级菌种分别接种于二级培养基，制备二级单一菌种。
细黄链霉菌的一级培养基为马铃薯汁1000重量份、蔗糖20-50重量份、琼脂15-25重量份，PH值7-8，温度25-30℃；二级培养基为马铃薯汁1000重量份、聚丙烯酰胺1-2重量份、苦参碱0.3-0.5重量份、抗坏血酸0.3-0.5重量份、EDTA0.3-0.5重量份、ZnCl20.3-0.5重量份、硫酸锌0.1-0.2重量份。
酵母菌的一级培养基为麦芽汁1000重量份，琼脂15重量份；二级培养基成分：麸皮15重量份，聚丙烯酰胺1-2重量份、苦参碱0.3-0.5重量份、抗坏血酸0.3-0.5重量份、EDTA0.3-0.5重量份、ZnCl20.3-0.5重量份、硫酸锌0.1-0.2重量份，水1000重量份。
地衣芽孢菌、枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌的一级培养基为蔗糖10重量份，黄豆粉5重量份，琼脂15重量份，水1000重量份；二级培养基成分：黄豆粉5重量份，蔗糖10重量份，聚丙烯酰胺1-2重量份、苦参碱0.3-0.5重量份、抗坏血酸0.3-0.5重量份、EDTA0.3-0.5重量份、ZnCl20.3-0.5重量份、硫酸锌0.1-0.2重量份，水1000重量份。
光合菌培养条件为PH 值7.5-8.5，水硬度10 度以下，温度25℃ -34℃；光照度：3000LX-4000LX 。
步骤（2）具体为，将单一菌液按0.2-2%的接种量全部接种到混合菌种培养基中进行发酵。
步骤（2）中混合菌种培养基含有聚丙烯酰胺、苦参碱、抗坏血酸、EDTA、ZnCl2、硫酸锌的混合物水溶液。
步骤（2）中混合菌种培养基中，聚丙烯酰胺10-20重量份、苦参碱3-5重量份、抗坏血酸3-5重量份、EDTA3-5重量份、ZnCl23-5重量份、硫酸锌1-2重量份的混合物与水的质量比例为3:100。
复合微生物菌剂中，各菌种的含量为：酵母菌15亿/ml、地衣芽孢菌20亿/ ml、枯草芽孢杆菌20亿/ ml、光合菌150亿/ ml、细黄链霉菌10亿/ ml、侧孢芽孢杆菌20亿/ ml。
本发明的有益效果为：本发明提供一种微生物肥料中复合菌种的制备方法。将复合微生物菌剂中的菌种分别进行单独发酵后得到各菌种的单一菌液；再将单一菌液混合进行发酵得到复合微生物菌剂。该方法制备的复合微生物肥料能有效保持菌种活性，菌种间的协同性强，肥效高。
本发明将有益微生物经纯培养以及复合发酵后再与聚丙烯酰胺、苦参碱、抗坏血酸、EDTA、ZnCl2混合得到，突破了现有复合微生物产品的拮抗作用，在发酵成熟液混合后另外添加0.3％-1％的硫酸锌这样不仅消除了多菌种复合后的拮抗作用，而且增加了彼此的协同作用。
该肥料结构稳定，功能广泛，无毒副作用，在种植业以及环保等方面有良好的应用前景，可以在农业生产中代替化学肥料在种植型农业中作为喷洒型肥料，尤其是对于苹果树效果明显，在苹果表面能形成一层有效防护层，防止苹果氧化，抑制有害微生物生长，有效预防苹果褐变，提高产品的质量和产率。
现有技术中的肥料大多采用成品菌剂与填料混合，缺少发酵代谢产物，另外烘干过程温度过高，微生物损耗严重，严重影响了肥料产品的肥效。本发明从根本上解决的这些问题，使得本发明产品的肥效有了极大的改进和提高。
具体实施方式：
为了更好地理解本发明，下面用具体实例来详细说明本发明的技术方案，但是本发明并不局限于此。本发明用到的原始菌种均够于中国农业微生物菌种保藏管理中心(Agricultural Culture Collection of China英文缩写ACCC)得到，本发明用到的原料均采用化学纯。
实施例１
一种微生物肥料中复合菌种的制备方法，聚丙烯酰胺10份、苦参碱5份、抗坏血酸3份、EDTA3份、ZnCl25份以及微生物菌剂100份，其余为水。
制备步骤为：
（1）将酵母菌、地衣芽孢菌、枯草芽孢杆菌、光合菌、细黄链霉菌、侧孢芽孢杆菌分别接种于一级培养基，活化培养为一级菌种；将一级菌种分别接种于二级培养基，制备二级单一菌种。
细黄链霉菌的一级培养基为马铃薯汁1000重量份、蔗糖30重量份、琼脂20重量份，PH值7-8，温度25-30℃；二级培养基为马铃薯汁1000重量份、聚丙烯酰胺1重量份、苦参碱0.5重量份、抗坏血酸0.5重量份、EDTA0.5重量份、ZnCl20.5重量份、硫酸锌0.2重量份。
酵母菌的一级培养基为麦芽汁1000重量份，琼脂15重量份；二级培养基成分：麸皮15重量份，聚丙烯酰胺1重量份、苦参碱0.5重量份、抗坏血酸0.5重量份、EDTA0.5重量份、ZnCl20.5重量份、硫酸锌0.2重量份，水1000重量份。
地衣芽孢菌、枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌的一级培养基为蔗糖10重量份，黄豆粉5重量份，琼脂15重量份，水1000重量份；二级培养基成分：黄豆粉5重量份，蔗糖10重量份，聚丙烯酰胺1重量份、苦参碱0.5重量份、抗坏血酸0.5重量份、EDTA0.5重量份、ZnCl20.5重量份、硫酸锌0.2重量份，水1000重量份。
光合菌培养条件为PH 值7.5-8.5，水硬度10 度以下，温度25℃ -34℃；光照度：4000LX 。
将单一菌液按1%的接种量全部接种到混合菌种培养基中，其中，混合菌种培养基含有重量份为聚丙烯酰胺10份、苦参碱5份、抗坏血酸3份、EDTA3份、ZnCl25份、硫酸锌2份的混合物水溶液，进行发酵，得到复合微生物菌剂。混合菌种培养基中，聚丙烯酰胺、苦参碱、抗坏血酸、EDTA、ZnCl2、硫酸锌的混合物与水的质量比例为3:100。
所述复合微生物菌剂中，各菌种的含量为：酵母菌15亿/ml、地衣芽孢菌20亿/ ml、枯草芽孢杆菌20亿/ ml、光合菌150亿/ ml、细黄链霉菌10亿/ ml、侧孢芽孢杆菌20亿/ ml。
（2）聚丙烯酰胺10份、苦参碱5份、抗坏血酸3份、EDTA3份、ZnCl25份混合，搅拌均匀；
（3）将步骤（1）中得到的复合微生物菌剂与步骤（2）中的混合物充分混合，加水稀释100倍，得到苹果树肥料A。
实施例2
一种微生物肥料中复合菌种的制备方法，聚丙烯酰胺20份、苦参碱3份、抗坏血酸3份、EDTA4份、ZnCl23份以及微生物菌剂150份，其余为水。
（1）将酵母菌、地衣芽孢菌、枯草芽孢杆菌、光合菌、细黄链霉菌、侧孢芽孢杆菌分别接种于一级培养基，活化培养为一级菌种；将一级菌种分别接种于二级培养基，制备二级单一菌种。
细黄链霉菌的一级培养基为马铃薯汁1000重量份、蔗糖50重量份、琼脂15重量份，PH值7-8，温度25-30℃；二级培养基为马铃薯汁1000重量份、聚丙烯酰胺2重量份、苦参碱0.3重量份、抗坏血酸0.3重量份、EDTA0.4重量份、ZnCl20.3重量份、硫酸锌0.1重量份。
酵母菌的一级培养基为麦芽汁1000重量份，琼脂15重量份；二级培养基成分：麸皮15重量份，聚丙烯酰胺2重量份、苦参碱0.3重量份、抗坏血酸0.3重量份、EDTA0.4重量份、ZnCl20.3重量份、硫酸锌0.1重量份，水1000重量份。
地衣芽孢菌、枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌的一级培养基为蔗糖15重量份，黄豆粉10重量份，琼脂15重量份，水1000重量份；二级培养基成分：黄豆粉10重量份，蔗糖15重量份，聚丙烯酰胺2重量份、苦参碱0.3重量份、抗坏血酸0.3重量份、EDTA0.4重量份、ZnCl20.3重量份、硫酸锌0.1重量份，水1000重量份。
光合菌培养条件为PH 值7.5-8.5，水硬度10 度以下，温度25℃ -34℃；光照度：3000LX 。
将单一菌液按0.2%的接种量全部接种到混合菌种培养基中，其中，混合菌种培养基含有重量份为聚丙烯酰胺20份、苦参碱3份、抗坏血酸3份、EDTA4份、ZnCl23份、硫酸锌1份的混合物水溶液，进行发酵，得到复合微生物菌剂。混合菌种培养基中，聚丙烯酰胺、苦参碱、抗坏血酸、EDTA、ZnCl2、硫酸锌的混合物与水的质量比例为3:100。
所述复合微生物菌剂中，各菌种的含量为：酵母菌15亿/ml、地衣芽孢菌20亿/ ml、枯草芽孢杆菌20亿/ ml、光合菌150亿/ ml、细黄链霉菌10亿/ ml、侧孢芽孢杆菌20亿/ ml。
（2）聚丙烯酰胺20份、苦参碱3份、抗坏血酸3份、EDTA4份、ZnCl23份混合，搅拌均匀；
（3）将步骤（1）中得到的复合微生物菌剂与步骤（2）中的混合物充分混合，加水稀释200倍，得到苹果树肥料B。
实施例3
一种微生物肥料中复合菌种的制备方法，聚丙烯酰胺15份、苦参碱4份、抗坏血酸3份、EDTA3份、ZnCl24份以及微生物菌剂50份，其余为水。
（1）将酵母菌、地衣芽孢菌、枯草芽孢杆菌、光合菌、细黄链霉菌、侧孢芽孢杆菌分别接种于一级培养基，活化培养为一级菌种；将一级菌种分别接种于二级培养基，制备二级单一菌种。
细黄链霉菌的一级培养基为马铃薯汁1000重量份、蔗糖20重量份、琼脂25重量份，PH值7-8，温度25-30℃；二级培养基为马铃薯汁1000重量份、聚丙烯酰胺1.5重量份、苦参碱0.4重量份、抗坏血酸0.3重量份、EDTA0.3重量份、ZnCl20.4重量份、硫酸锌0.15重量份。
酵母菌的一级培养基为麦芽汁1000重量份，琼脂15重量份；二级培养基成分：麸皮15重量份，聚丙烯酰胺1.5重量份、苦参碱0.4重量份、抗坏血酸0.3重量份、EDTA0.3重量份、ZnCl20.4重量份、硫酸锌0.15重量份，水1000重量份。
地衣芽孢菌、枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌的一级培养基为蔗糖5重量份，黄豆粉8重量份，琼脂15重量份，水1000重量份；二级培养基成分：黄豆粉8重量份，蔗糖5重量份，聚丙烯酰胺1.5重量份、苦参碱0.4重量份、抗坏血酸0.3重量份、EDTA0.3重量份、ZnCl20.4重量份、硫酸锌0.15重量份，水1000重量份。
光合菌培养条件为PH 值7.5-8.5，水硬度10 度以下，温度25℃ -34℃；光照度：3500LX 。
将单一菌液按2%的接种量全部接种到混合菌种培养基中，其中，混合菌种培养基含有重量份为聚丙烯酰胺15份、苦参碱4份、抗坏血酸3份、EDTA3份、ZnCl24份、硫酸锌1.5份的混合物水溶液，进行发酵，得到复合微生物菌剂。混合菌种培养基中，聚丙烯酰胺、苦参碱、抗坏血酸、EDTA、ZnCl2、硫酸锌的混合物与水的质量比例为3:100。
所述复合微生物菌剂中，各菌种的含量为：酵母菌15亿/ml、地衣芽孢菌20亿/ ml、枯草芽孢杆菌20亿/ ml、光合菌150亿/ ml、细黄链霉菌10亿/ ml、侧孢芽孢杆菌20亿/ ml。
（2）聚丙烯酰胺15份、苦参碱4份、抗坏血酸3份、EDTA3份、ZnCl24份混合，搅拌均匀；
（3）将步骤（1）中得到的复合微生物菌剂与步骤（2）中的混合物充分混合，加水稀释100倍，得到苹果树肥料C。
实施例4
一种微生物肥料中复合菌种的制备方法，聚丙烯酰胺20份、苦参碱5份、抗坏血酸5份、EDTA3份、ZnCl25份以及微生物菌剂120份，其余为水。
（1）将酵母菌、地衣芽孢菌、枯草芽孢杆菌、光合菌、细黄链霉菌、侧孢芽孢杆菌分别接种于一级培养基，活化培养为一级菌种；将一级菌种分别接种于二级培养基，制备二级单一菌种。
细黄链霉菌的一级培养基为马铃薯汁1000重量份、蔗糖40重量份、琼脂20重量份，PH值7-8，温度25-30℃；二级培养基为马铃薯汁1000重量份、聚丙烯酰胺2重量份、苦参碱0.5重量份、抗坏血酸0.5重量份、EDTA0.3重量份、ZnCl20.5重量份、硫酸锌0.2重量份。
酵母菌的一级培养基为麦芽汁1000重量份，琼脂15重量份；二级培养基成分：麸皮15重量份，聚丙烯酰胺2重量份、苦参碱0.5重量份、抗坏血酸0.5重量份、EDTA0.3重量份、ZnCl20.5重量份、硫酸锌0.2重量份，水1000重量份。
地衣芽孢菌、枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌的一级培养基为蔗糖15重量份，黄豆粉10重量份，琼脂15重量份，水1000重量份；二级培养基成分：黄豆粉10重量份，蔗糖15重量份，聚丙烯酰胺-2重量份、苦参碱0.5重量份、抗坏血酸0.5重量份、EDTA0.3重量份、ZnCl20.5重量份、硫酸锌0.2重量份，水1000重量份。
光合菌培养条件为PH 值7.5-8.5，水硬度10 度以下，温度25℃ -34℃；光照度：4000LX 。
将单一菌液按1.5%的接种量全部接种到混合菌种培养基中，其中，混合菌种培养基含有重量份为聚丙烯酰胺20份、苦参碱5份、抗坏血酸5份、EDTA3份、ZnCl25份、硫酸锌2份的混合物水溶液，进行发酵，得到复合微生物菌剂。混合菌种培养基中，聚丙烯酰胺、苦参碱、抗坏血酸、EDTA、ZnCl2、硫酸锌的混合物与水的质量比例为3:100。
所述复合微生物菌剂中，各菌种的含量为：酵母菌15亿/ml、地衣芽孢菌20亿/ ml、枯草芽孢杆菌20亿/ ml、光合菌150亿/ ml、细黄链霉菌10亿/ ml、侧孢芽孢杆菌20亿/ ml。
（2）聚丙烯酰胺20份、苦参碱5份、抗坏血酸5份、EDTA3份、ZnCl25份混合，搅拌均匀；
（3）将步骤（1）中得到的复合微生物菌剂与步骤（2）中的混合物充分混合，加水稀释300倍，得到苹果树肥料D。
实施例5
为了更好的说明本发明制得的肥料的作用，对本发明的产品进行了田间试验，试验过程如下：
一、试验设计，
1. 喷施本发明的肥料
将实施例1-4中的肥料A、B、C、D叶面喷施2 次。
2. 喷施本发明的肥料+常规施肥
将实施例1-4中的肥料A、B、C、D叶面喷施2 次，配合常规土壤施肥。
3. 常规施肥
进进行常规土壤施肥。
二、试验作物
试验作物为结果期苹果树。
三、实验结果
成熟期到后，1.2.3三种实验统计结果见表1。
表1
。
由上表可以看出，实验1和实验2的产量、褐变率和虫害率数据相差不大，但比单纯的常规施肥产量增加，褐变率和虫害率明显降低，由此可见，本发明的肥料可以在农业生产中代替化学肥料在种植型农业中作为喷洒型肥料，尤其是对于苹果树效果明显，在苹果表面能形成一层有效防护层，防止苹果氧化，抑制有害微生物生长，有效预防苹果褐变，提高产品的质量和产率。
Claims (10)
1.一种微生物肥料中复合菌种的制备方法，其特征在于，
（1）将复合微生物菌剂中的菌种分别进行单独发酵后得到各菌种的单一菌液；
（2）将单一菌液混合进行发酵得到复合微生物菌剂；
其中，该微生物肥料含有按重量份的以下组分：聚丙烯酰胺10-20份、苦参碱3-5份、抗坏血酸3-5份、EDTA3-5份、ZnCl23-5份以及微生物菌剂50-150份，其余为水；复合微生物菌剂为酵母菌、地衣芽孢菌、枯草芽孢杆菌、光合菌、细黄链霉菌、侧孢芽孢杆菌。
2. 根据权利要求1所述的一种微生物肥料中复合菌种的制备方法，其特征在于，步骤（1）具体为，将酵母菌、地衣芽孢菌、枯草芽孢杆菌、光合菌、细黄链霉菌、侧孢芽孢杆菌分别接种于一级培养基，活化培养为一级菌种；将一级菌种分别接种于二级培养基，制备二级单一菌种。
3. 根据权利要求2所述的一种微生物肥料中复合菌种的制备方法，其特征在于，细黄链霉菌的一级培养基为马铃薯汁1000重量份、蔗糖20-50重量份、琼脂15-25重量份，PH值7-8，温度25-30℃；二级培养基为马铃薯汁1000重量份、聚丙烯酰胺1-2重量份、苦参碱0.3-0.5重量份、抗坏血酸0.3-0.5重量份、EDTA0.3-0.5重量份、ZnCl20.3-0.5重量份、硫酸锌0.1-0.2重量份。
4. 根据权利要求2所述的一种微生物肥料中复合菌种的制备方法，其特征在于，酵母菌的一级培养基为麦芽汁1000重量份，琼脂15重量份；二级培养基成分：麸皮15重量份，聚丙烯酰胺1-2重量份、苦参碱0.3-0.5重量份、抗坏血酸0.3-0.5重量份、EDTA0.3-0.5重量份、ZnCl20.3-0.5重量份、硫酸锌0.1-0.2重量份，水1000重量份。
5. 根据权利要求2所述的一种微生物肥料中复合菌种的制备方法，其特征在于，地衣芽孢菌、枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌的一级培养基为蔗糖5-15重量份，黄豆粉5-10重量份，琼脂15重量份，水1000重量份；二级培养基成分：黄豆粉5-10重量份，蔗糖5-15重量份，聚丙烯酰胺1-2重量份、苦参碱0.3-0.5重量份、抗坏血酸0.3-0.5重量份、EDTA0.3-0.5重量份、ZnCl20.3-0.5重量份、硫酸锌0.1-0.2重量份，水1000重量份。
6. 根据权利要求2所述的一种微生物肥料中复合菌种的制备方法，其特征在于，光合菌培养条件为PH 值7.5-8.5，水硬度10 度以下，温度25℃ -34℃；光照度：3000LX-4000LX 。
7. 根据权利要求1所述的一种微生物肥料中复合菌种的制备方法，其特征在于，步骤（2）具体为，将单一菌液按0.2-2%的接种量全部接种到混合菌种培养基中进行发酵。
8. 根据权利要求7所述的一种微生物肥料中复合菌种的制备方法，其特征在于，步骤（2）中混合菌种培养基含有聚丙烯酰胺、苦参碱、抗坏血酸、EDTA、ZnCl2、硫酸锌的混合物水溶液。
9. 根据权利要求8所述的一种微生物肥料中复合菌种的制备方法，其特征在于，步骤（2）中混合菌种培养基中，聚丙烯酰胺10-20重量份、苦参碱3-5重量份、抗坏血酸3-5重量份、EDTA3-5重量份、ZnCl23-5重量份、硫酸锌1-2重量份的混合物与水的质量比例为3:100。
10. 根据权利要求1所述的一种微生物肥料中复合菌种的制备方法，其特征在于，复合微生物菌剂中，各菌种的含量为：酵母菌15亿/ml、地衣芽孢菌20亿/ ml、枯草芽孢杆菌20亿/ ml、光合菌150亿/ ml、细黄链霉菌10亿/ ml、侧孢芽孢杆菌20亿/ ml。
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