CN104116762A - 牛樟芝复合配方及包含该牛樟芝复合配方的医药组成物 - Google Patents

Abstract

一种牛樟芝复合配方，用以抑制肿瘤细胞的生长，其包含：以重量百分比计为27.3～50.0%的牛樟芝、以重量百分比计为27.3～40.0%的灵芝及以重量百分比计为16.7～45.4%的甘草。本发明的牛樟芝复合配方，相较于牛樟芝、灵芝或甘草单方，对于肿瘤细胞具有较佳的抑制效果，并且通过多种中草药材的组成配比，而能够达到减低长期服用牛樟芝单方而引起的副作用的功效。

Description

牛樟芝复合配方及包含该牛樟芝复合配方的医药组成物

技术领域

本发明关于一种牛樟芝复合配方，特别是佐以灵芝及甘草，可以抑制肿瘤细胞生长的牛樟芝复合配方，本发明更关于包含该牛樟芝复合配方的医药组成物。

背景技术

肿瘤的治疗方法在中西医不尽相同，西医治疗主要以外科手术，放射疗法，化学疗法与免疫疗法；中医则以一些传统中草药材来作为治疗。

牛樟芝（Taiwanofungus camphoratus），又名牛樟菇或樟芝，属于真菌界中的担子菌门（Basidiomycota）、担子菌亚门（Basidiomycotina）、同担子菌纲（Homobasidiomycetes）、无折菌目（Aphyllophorales）、多孔菌科（Polyporaceae）、薄孔菌属（Antrodia），牛樟芝仅生长于台湾特有牛樟树（Cinnamomum kanehirai）的中空芯材内壁，其子实体为一年生至多年生，呈鲜红色、橘红色或淡肉桂色，具有樟树香气。

从牛樟芝的菌丝体或子实体抽出物中，发现多种生理活性物质，例如多醣体、腺苷或数种三萜类化合物，其中，三萜类化合物中，如胺蕈A（Antcin A）、胺蕈B（Antcin B）、胺蕈C（Antcin C）、胺蕈E（AntcinE）、胺蕈F（Antcin F）、甲基胺蕈酯G（Methylantcinate G）、甲基胺蕈酯H（Methylantcinate H）、胺卓蕈（Antrocin）、4,7-双甲氧基-5-甲基-1,3双氧苯（4,7-dimethoxy-5-methyl-1,3-benzodioxole）及2,2’,5,5’-四甲氧基-3,4,3’,4’-双甲基-内双氧-6,6’-联苯（2,2’,5,5’-tetramethoxy-3,4,3’,4’-bimethyl-enedioxy-6,6’-dimethylbiphenyl）等，经研究证实具有抗肿瘤细胞生长的能力。

于中医药性分类中，牛樟芝隶属寒凉性药物，虽然短期服用下具有极佳的抗发炎效果，对现代人因饮食不当或长期疲劳所造成的慢性肝炎具有较佳的保健效果；然而，长期服用牛樟芝将可能造成体内自由基浓度过度下降，导致体质转寒，免疫力反而下降，对于接受化学治疗或放射线治疗的肿瘤患者，刚开始服用牛樟芝可以降低其副作用，但长期服用高剂量的牛樟芝，却反而可能会产生血液感染机率增加等免疫力下降的现象。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种牛樟芝复合配方，相较于牛樟芝单方，具有较佳的肿瘤抑制效果。

本发明的再一目的是提供一种牛樟芝复合配方，可以减缓长期服用牛樟芝造成的气虚等副作用。

本发明的又一目的是提供一种医药组成物，是以该牛樟芝复合配方作为一药物组成份，以抑制肿瘤细胞的生长。

为达到前述发明目的，本发明所运用的技术手段及借助该技术手段所能达到的功效包含有：

一种牛樟芝复合配方，包含：以重量百分比计为27.3～50.0%的牛樟芝、以重量百分比计为27.3～40.0%的灵芝及以重量百分计比为16.7～45.4%的甘草。

本发明的牛樟芝复合配方，其中，包含以重量百分比计为30.8%的牛樟芝。

本发明的牛樟芝复合配方，其中，包含以重量百分比计为30.8%的灵芝。

本发明的牛樟芝复合配方，其中，包含以重量百分比计为38.5%的甘草。

本发明的牛樟芝复合配方，其中，包含以重量百分比计为30.8%的牛樟芝、以重量百分比计为30.8%的灵芝及以重量百分比计为38.5%的甘草。

本发明的牛樟芝复合配方，其中，该牛樟芝选自牛樟芝子实体。

一种医药组成物，包含：如前述的牛樟芝复合配方；及医药学上可以接受的载剂或赋形剂。

本发明的牛樟芝复合配方可以有效抑制肿瘤细胞的生长，因而能够作为一种辅助抑制肿瘤细胞的活性成分，为本发明的功效。

本发明的牛樟芝复合配方，相较于牛樟芝、灵芝或甘草单方，可以有效地抑制肿瘤细胞的生长，并且通过多种中草药材的组成配比，而能够达到减缓长期服用牛樟芝单方而引起的副作用的功效。

本发明的包含该牛樟芝复合配方的医药组成物，借助该牛樟芝复合配方有效抑制肿瘤细胞的生长，具有使肿瘤细胞发生毒杀作用而无法增生或扩散的功效。

附图说明

图1A是以本发明牛樟芝复合配方处理小鼠肉瘤细胞的细胞存活率曲线图。

图1B是以125μl/ml的本发明牛樟芝复合配方处理小鼠肉瘤细胞的细胞存活率柱状图。

图2A是以本发明牛樟芝复合配方处理人类肺肿瘤细胞的细胞存活率曲线图。

图2B是以125μl/ml的本发明牛樟芝复合配方处理人类肺肿瘤细胞的细胞存活率柱状图。

图3A是以本发明牛樟芝复合配方处理人类肝肿瘤细胞的细胞存活率曲线图。

图3B是以125μl/ml的本发明牛樟芝复合配方处理人类肝肿瘤细胞的细胞存活率柱状图。

图4A是以本发明牛樟芝复合配方处理人类大肠肿瘤细胞的细胞存活率曲线图。

图4B是以125μl/ml的本发明牛樟芝复合配方处理人类大肠肿瘤细胞的细胞存活率柱状图。

图5A是以本发明牛樟芝复合配方处理人类乳房肿瘤细胞的细胞存活率曲线图。

图5B是以125μl/ml的本发明牛樟芝复合配方处理人类乳房肿瘤细胞的细胞存活率柱状图。

图6A是以本发明牛樟芝复合配方喂食肿瘤小鼠的30天后牺牲的小鼠及取出的肿瘤尺寸。

图6B是以本发明牛樟芝复合配方喂食肿瘤小鼠的小鼠体内肿瘤生长情形。

图7是以本发明牛樟芝复合配方喂食肿瘤小鼠的小鼠存活折线图。

具体实施方式

为让本发明的上述及其它目的、特征及优点能更明显易懂，下文特举本发明的较佳实施例，并配合的附图，作详细说明如下：

本发明的牛樟芝复合配方，包含灵芝及甘草，该牛樟芝、该灵芝及该甘草是以一特定比例混合，特别是以重量百分比计为27.3～50.0%的牛樟芝、以重量百分比计为27.3～40.0%的灵芝及以重量百分计比为16.7～45.4%的甘草，能够有效抑制肿瘤细胞的生长。

于本较佳实施例中，是选用牛樟芝子实体，牛樟芝子实体的三萜类含量高，抗发炎的效果较佳；此外，本较佳实施例采用灵芝子实体及甘草根及根茎部位，上述部位较容易取得，因而可以降低成本，但不以此为限。

本发明的牛樟芝复合配方可以有效抑制肿瘤细胞的生长，因而能够作为一种辅助抑制肿瘤细胞的活性成分，较佳可以将该牛樟芝复合配方的萃取物用于制备预防或治疗肿瘤的药物或保健食品，该牛樟芝复合配方的萃取物与医药学上可以接受的载剂或赋形剂组合形成一医药组合物，其中，该牛樟芝复合配方的萃取物可以制备成任何方便食用的形式，如锭剂、胶囊、粉剂、粒剂或液剂等，或者将该中草药复方萃取物与其它食品或饮料组合，以一适于食用的形式供生物体以口服方式服用。

为证实本发明较佳实施例的牛樟芝复合配方具有较佳的肿瘤抑制效果，遂进行以下试验：

（A）牛樟芝复合配方粗萃物的制备

本试验中，取如第1表所示的中草药材进行混合，较佳地，可以将该等中草药材分别粉碎成较小颗粒，例如小于5毫米见方的颗粒，再进行混合，可以增加其混合效率及后续萃取效率。

第1表、各组酒精粗萃物的成分及所其占重量百分比（%）

组别	牛樟芝	灵芝	甘草
				A1	40.0	40.0	20.0
A2	50.0	33.3	16.7
				A3	30.8	30.8	38.5
A4	27.3	27.3	45.4

A5	100	0	0
				A6	0	100	0
A7	0	0	100

取5千克的各组混合中草药材，以1升的95%酒精进行萃取，于50℃定温回流8小时，并且重复萃取三次，最后借助真空过滤、减压浓缩及冷冻干燥，即可以获得一酒精粗萃物，并且以该酒精粗萃物进行后续试验。

（B）对肿瘤细胞株存活率的影响

本试验是选用购自食品工业发展研究所的小鼠肉瘤（S-180细胞）、人类肺肿瘤（A549细胞）、人类肝肿瘤（HepG2细胞）、人类大肠肿瘤（HCT-116细胞）及人类乳房肿瘤（MDA-MB-231细胞）细胞株，该等肿瘤细胞株均培养于含有10%胎牛血清（FBS，Biological Industries，Kibbutzbeit haemek）、2mmol/L _L-麸氨酸（L-Glutamine，购自HyClone，USA）、1×非必须胺基酸（购自HyClone，USA）、100μg/ml链霉素（Streptomycin）及100U/ml青霉素（Penicillin，购自HyClone，USA）的培养液（Dulbecco′sModified Eagle Medium;DMEM），将该等肿瘤细胞株置于37℃、5%二氧化碳、湿度为95%的培养箱，每隔两天更换一次新鲜培养液。

上述肿瘤细胞株于继代培养时，可以先将培养液与细胞以1000转进行离心5分钟，去除上清液后，再加入新鲜培养液，并且使10公分培养皿中维持细胞数为约1×10⁵至1×10⁶cells/ml。

实验进行时，可以取出已经长8至9分满的上述肿瘤细胞株的10公分培养皿，去除已变色的培养液，加入8毫升PBS缓冲溶液冲洗细胞，加入胰蛋白酶/乙二胺乙酸（Trypsin/EDTA），反应1至3分钟后，轻摇培养皿使细胞自壁上脱落，加入已回温的培养液，轻轻将细胞冲散，再将含细胞的培养液分别置入离心管内，以1500转离心10分钟，除去上清液后，再加入含血清的培养液，使细胞分散均匀，并取出20μl该等肿瘤细胞，加入20μl0.04%的锥虫蓝（Trypan Blue）进行染色，放入细胞计数器，并于显微镜下计数活细胞数，细胞存活率必须不小于95%才可以进行后续试验。

以含血清的培养液将上述肿瘤细胞株的浓度调整为1x10⁵cell/ml，并且各取100μl的该等肿瘤细胞株接种于96孔盘，使每个槽孔含有1x10⁴细胞，并于37℃、含5％二氧化碳的培养箱进行隔夜培养。

经过24小时培养后，加入如第1表所示的酒精粗萃物，混合均匀后，于37℃，含5%的二氧化碳培养箱隔夜培养24小时。

24小时后，移除培养液，以磷酸缓冲液冲洗后，再加入0.5mg/ml MTT处理4小时，利用分光光度计检测每个槽孔于570nm波长下的吸光值。

请参照图1A所示，为以不同浓度的第A1至A7组酒精粗萃物处理肉瘤细胞的细胞存活率曲线图，其存活率（%）计算公式如下：

存活率＝（受试组测得吸光值/对照组测得吸光值）×100%

由实验结果可以得知，相较于牛樟芝、灵芝及甘草单方（第A5至A7组曲线），本较佳实施例的牛樟芝复合配方（第A1至A4组曲线）确实具有较佳的小鼠肉瘤细胞存活抑制效果。

请参照图1B所示，以浓度为125μl/ml的第A1至A7组酒精粗萃物处理小鼠肉瘤细胞的细胞存活率折线图，第A3组明显具有较佳的小鼠肉瘤细胞存活抑制效果。

此外，无论是针对人类肺肿瘤细胞（如图2A及图2B所示）、人类肝肿瘤细胞（如图3A及图3B所示）、人类大肠肿瘤细胞（如图4A及图4B所示）及人类乳房肿瘤细胞（如图5A及图5B所示），相较于牛樟芝、灵芝及甘草单方（第A5至A7组），本较佳实施例的牛樟芝复合配方（第A1至A4组）均具有较佳的存活抑制效果。

（C）对肿瘤小鼠的肿瘤抑制效力评估

本试验是选用购自中国台湾的国立成功大学医学院动物中心的Balb/C雄性小鼠，该小鼠皆在8周周龄以上，体重20-25g之间。该小鼠饲养于中国台湾的成功大学医学院的SPF动物中心，维持室温在25±1℃的动物室，光照时间与黑暗时间各为12小时。而且，小鼠可以自由的进食与饮水；饲料（购自美国LabDiet,Inc.）及饮水皆由成功大学医学院动物中心供应。

将小鼠肉瘤细胞株（如前述的S-180细胞株，购自食品工业发展研究所）以生理食盐水稀释至浓度为5×10⁶cell/ml后，将该小鼠肉瘤细胞株于小鼠后背部位进行皮下注射。

接着，将第A3组的酒精粗萃物分别以0.25%（第C2组）、0.5%（第C3组）及1%（第C4组）的比例稀释于小鼠饲料中，以未添加本较佳实施例的酒精粗萃物的第C1组作为控制组，使小鼠自由进食30天，每3天量测一次肿瘤大小（肿瘤大小计算公式＝长度×宽度×高度×0.45），并且观察各组小鼠的存活率。

请参照图6A及图6B所示，于小鼠饲料中添加本较佳实施例的酒精粗萃物（第C2至C4组）可以有效减小肿瘤的体积及其生长速度（如图6B所示），并且，肿瘤生长的抑制效果与本较佳实施例的酒精粗萃物的浓度呈正相关。

再者，续参照图7所示，喂食本较佳实施例的粗萃物也可以显着降低肿瘤细胞对小鼠的致死率。

综合上述，本发明的牛樟芝复合配方可以有效抑制肿瘤细胞的生长，因而能够作为一种辅助抑制肿瘤细胞的活性成分，为本发明的功效。

再者，本发明的牛樟芝复合配方，相较于牛樟芝、灵芝或甘草单方，对于肿瘤细胞具有较佳的抑制效果，并且通过多种中草药材的组成配比，而能够达到减低长期服用牛樟芝单方而引起的副作用的功效。

此外，本发明的包含该牛樟芝复合配方的医药组成物，借助该牛樟芝复合配方有效抑制肿瘤细胞的生长，具有使肿瘤细胞发生毒杀作用而无法增生或扩散的功效。

Claims (7)

1.一种牛樟芝复合配方，其特征包含：以重量百分比计为27.3～50.0%的牛樟芝、以重量百分比计为27.3～40.0%的灵芝及以重量百分比计为16.7～45.4%的甘草。

2.如权利要求1所述的牛樟芝复合配方，其特征在于，包含以重量百分比计为30.8%的牛樟芝。

3.如权利要求1所述的牛樟芝复合配方，其特征在于，包含以重量百分比计为30.8%的灵芝。

4.如权利要求1所述的牛樟芝复合配方，其特征在于，包含以重量百分比计为38.5%的甘草。

5.如权利要求1所述的牛樟芝复合配方，其特征在于，包含以重量百分比计为30.8%的牛樟芝、以重量百分比计为30.8%的灵芝及以重量百分比计为38.5%的甘草。

6.如权利要求1所述的牛樟芝复合配方，其特征在于，该牛樟芝选自牛樟芝子实体。

7.一种医药组合物，包含：如权利要求1所述的牛樟芝复合配方；及医药学上可以接受的载剂或赋形剂。