CN104083510B - 一种家禽用护肝颗粒及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种家禽用护肝颗粒及其制备方法，是由柴胡、茵陈、板蓝根、五味子、猪胆粉、绿豆组方制成的颗粒剂，是护肝片的改剂型产品，具有疏肝理气，健脾消食，用于鸡脂肪肝综合征；同时也改进了提取工艺，使得从五味子提取出来的五味子醇甲得率较高；还采用了特定的辅料用量，使得颗粒成品率高、溶化性和粒度良好。

Description

一种家禽用护肝颗粒及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种家禽用护肝颗粒及其制备方法，属于兽药领域。

背景技术

《中国药典》一部的护肝片，是由柴胡、茵陈、板蓝根、五味子、猪胆粉、绿豆组方制成的颗粒剂。

目前家禽脂肪肝综合征等疾病主要都是西药治疗，药品副作用大，疗效也不稳定。

发明内容

本发明的目的是提供一种家禽用护肝颗粒及其制备方法，是护肝片的改剂型产品，具有疏肝理气，健脾消食，用于鸡脂肪肝综合征；同时也改进了提取工艺，使得从五味子提取出来的五味子醇甲得率较高；还采用了特定的辅料用量，使得颗粒成品率高、溶化性和粒度良好。

一种家禽用护肝颗粒，由下列质量份数的原料制成：柴胡313份、茵陈313份、板蓝根313份、五味子168份、猪胆粉20份、绿豆128份；制备方法为：柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆加水煎煮二次，每次2小时，第一次水的质量是柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆总质量的9.5-10.5倍，第二次水的质量是柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆总质量的7.5-8.5倍，合并两次煎液，滤过，滤液减压浓缩成60℃条件下相对密度为1.25-1.30的浸膏，备用；将五味子粉碎后，用75%乙醇回流提取三次，第一次75%乙醇的质量是五味子质量的5倍，回流提取3小时，第二次75%乙醇的质量是五味子质量的4倍，回流提取2小时，第三次75%乙醇的质量是五味子质量的4倍，回流提取1小时，合并提取液，回收乙醇，减压浓缩至60℃条件下相对密度为1.25-1.30的浸膏；将两种浸膏合并，加入猪胆粉与辅料，制颗粒，干燥，即得。

其中辅料为蔗糖和糊精组成，辅料的用量为合并后浸膏质量的1.2-1.8倍，蔗糖和糊精质量比例为2：1。

本发明处方源于《中国药典》一部 “护肝片”，由柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆、猪胆粉、五味子组成，具有疏肝理气，健脾消食功效。本发明根据其处方中药味的功能、药理学研究及临床研究，将其应用于鸡脂肪肝综合症的治疗。护肝片的剂型为片剂，须逐只喂服给药，临床用药不方便，颗粒剂既可混饲给药，亦可混饮给药，适用于现代规模化、集约化养殖的用药习惯，故选用颗粒剂。

五味子、板蓝根、茵陈、柴胡购于亳州千草饮片厂，猪胆粉购于山东，其质量均符合《中国兽药典》的相关规定。绿豆购于南昌进贤，质量符合《中国兽药典》。

五味子提取工艺的选择：以五味子醇甲得率为指标，单因素考察乙醇用量对提取效果的影响：取五味子药材50g各五份，加75%乙醇回流提取3次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，乙醇用量按表1设定水平。合并提取液，浓缩并定容至250mL，备用。

精密量取上述储备液1mL，蒸干，用甲醇20mL分三次（10mL，5mL，5mL）溶解转移至25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品，按照五味子药材（《中国兽药典》二部）项下的含量测定方法测定，计算储备液中五味子醇甲的含量及五味子醇甲的转移率。

见表1。可见乙醇用量对五味子醇甲的转移率有影响，乙醇用量越高，转移率越高。当乙醇用量至五味子质量的6，5，5倍量时，再增加乙醇用量对含量没有有效贡献，故乙醇用量选择为第一次6倍量，第二次5倍量，第三次5倍量。

辅料的选择：

单一辅料的考察：以糖粉、糊精、可溶性淀粉、乳糖、微晶纤维素作为颗粒成型工艺的辅料，以颗粒成品率、溶化性、粒度为考察指标，考察不同辅料对护肝浸膏的适用性。

（1）试验方法

在预实验基础上，按处方比例秤取水提浸膏、醇提浸膏、猪胆粉各5份，分别加适量糖粉、糊精、可溶性淀粉、乳糖、微晶纤维素，按湿法制粒步骤实验室手工制粒。配方见表2。溶化性、粒度按《中国兽药典》二部附录检查。

（2）试验结果（见表 3）

试验结果表明，以蔗糖为辅料，颗粒成型率较低，原因在于糖粉粘性较强，制粒时容易粘筛网，致使颗粒总量降低；以糊精、可溶性淀粉为辅料，成品率较低，原因在于制出的细粉较多，导致成品率低；微晶纤维素颗粒的溶化性不符合规定；乳糖制粒效果较好，但成本较高。

采用单一辅料，不能有效改善护肝颗粒的成型工艺的中的成品率低、溶化性不佳、粒度不合格的问题。制剂经验表明，蔗糖和糊精配合使用，效果较好，因此下面采用蔗糖-糊精为辅料，考察这两种辅料对颗粒成品率、溶化性、粒度的影响。

蔗糖与糊精的比例及用量考察：在以上试实验基础上，拟定试验中浸膏、药粉、蔗糖、糊精的比例（见表4）。分别按照表中不同比例及用量的辅料混合均匀，实验室手工制粒。以成品率、溶化性及粒度为考察指标。

实验结果可见：

①试验1、2、3辅料中蔗糖-糊精（1：1），所得颗粒细粉较多，成品率较低；

②试验4、5、6辅料中蔗糖-糊精（2：1），所得颗粒溶化性、粒度较好，成品率较高，表明蔗糖-糊精比例为2：1适合本品制粒；

③浸膏与辅料比例为1：1.2-1：1.8之内，颗粒的溶化性、粒度均符合要求，成品率无差异。

综上，本发明的优点为：1、在护肝片的基础上改变剂型，不仅可以用于鸡脂肪肝综合症的治疗，而且临床用药方便，适用于现代规模化、集约化养殖的用药习惯；2、采用特定的五味子提取工艺，使得提取出来的五味子醇甲的含量及五味子醇甲的转移率较高；3、选择特定的辅料构成和用量，制得的颗粒成品率较高、溶化性和粒度较好。

具体实施方式：

实施例1：

一种家禽用护肝颗粒，由下列质量份数的原料制成：柴胡313份、茵陈313份、板蓝根313份、五味子168份、猪胆粉20份、绿豆128份；制备方法为：柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆加水煎煮二次，每次2小时，第一次水的质量是柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆总质量的9.5倍，第二次水的质量是柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆总质量的7.5倍，合并两次煎液，滤过，滤液减压浓缩成60℃条件下相对密度为1.25的浸膏，备用；将五味子粉碎后，用75%乙醇回流提取三次，第一次75%乙醇的质量是五味子质量的5倍，回流提取3小时，第二次75%乙醇的质量是五味子质量的4倍，回流提取2小时，第三次75%乙醇的质量是五味子质量的4倍，回流提取1小时，合并提取液，回收乙醇，减压浓缩至60℃条件下相对密度为1.25的浸膏；将两种浸膏合并，加入猪胆粉与辅料，制颗粒，干燥，即得。

其中辅料为蔗糖和糊精组成，辅料的用量为合并后浸膏质量的1.2倍，蔗糖和糊精质量比例为2：1。

实施例2：

一种家禽用护肝颗粒，由下列质量份数的原料制成：柴胡313份、茵陈313份、板蓝根313份、五味子168份、猪胆粉20份、绿豆128份；制备方法为：柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆加水煎煮二次，每次2小时，第一次水的质量是柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆总质量的10倍，第二次水的质量是柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆总质量的8倍，合并两次煎液，滤过，滤液减压浓缩成60℃条件下相对密度为1.27的浸膏，备用；将五味子粉碎后，用75%乙醇回流提取三次，第一次75%乙醇的质量是五味子质量的5倍，回流提取3小时，第二次75%乙醇的质量是五味子质量的4倍，回流提取2小时，第三次75%乙醇的质量是五味子质量的4倍，回流提取1小时，合并提取液，回收乙醇，减压浓缩至60℃条件下相对密度为1.27的浸膏；将两种浸膏合并，加入猪胆粉与辅料，制颗粒，干燥，即得。

其中辅料为蔗糖和糊精组成，辅料的用量为合并后浸膏质量的1.5倍，蔗糖和糊精质量比例为2：1。

实施例3：

一种家禽用护肝颗粒，由下列质量份数的原料制成：柴胡313份、茵陈313份、板蓝根313份、五味子168份、猪胆粉20份、绿豆128份；制备方法为：柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆加水煎煮二次，每次2小时，第一次水的质量是柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆总质量的10.5倍，第二次水的质量是柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆总质量的8.5倍，合并两次煎液，滤过，滤液减压浓缩成60℃条件下相对密度为1.30的浸膏，备用；将五味子粉碎后，用75%乙醇回流提取三次，第一次75%乙醇的质量是五味子质量的5倍，回流提取3小时，第二次75%乙醇的质量是五味子质量的4倍，回流提取2小时，第三次75%乙醇的质量是五味子质量的4倍，回流提取1小时，合并提取液，回收乙醇，减压浓缩至60℃条件下相对密度为1.30的浸膏；将两种浸膏合并，加入猪胆粉与辅料，制颗粒，干燥，即得。

其中辅料为蔗糖和糊精组成，辅料的用量为合并后浸膏质量的1.8倍，蔗糖和糊精质量比例为2：1。

实施例4：

一种家禽用护肝颗粒，由下列质量份数的原料制成：柴胡313份、茵陈313份、板蓝根313份、五味子168份、猪胆粉20份、绿豆128份；制备方法为：柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆加水煎煮二次，每次2小时，第一次水的质量是柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆总质量的9倍，第二次水的质量是柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆总质量的7倍，合并两次煎液，滤过，滤液减压浓缩成60℃条件下相对密度为1.23的浸膏，备用；将五味子粉碎后，用75%乙醇回流提取三次，第一次75%乙醇的质量是五味子质量的5倍，回流提取3小时，第二次75%乙醇的质量是五味子质量的4倍，回流提取2小时，第三次75%乙醇的质量是五味子质量的4倍，回流提取1小时，合并提取液，回收乙醇，减压浓缩至60℃条件下相对密度为1.23的浸膏；将两种浸膏合并，加入猪胆粉与辅料，制颗粒，干燥，即得。

其中辅料为蔗糖和糊精组成，辅料的用量为合并后浸膏质量的1.1倍，蔗糖和糊精质量比例为2：1。

实施例5：

一种家禽用护肝颗粒，由下列质量份数的原料制成：柴胡313份、茵陈313份、板蓝根313份、五味子168份、猪胆粉20份、绿豆128份；制备方法为：柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆加水煎煮二次，每次2小时，第一次水的质量是柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆总质量的11倍，第二次水的质量是柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆总质量的9倍，合并两次煎液，滤过，滤液减压浓缩成60℃条件下相对密度为1.32的浸膏，备用；将五味子粉碎后，用75%乙醇回流提取三次，第一次75%乙醇的质量是五味子质量的5倍，回流提取3小时，第二次75%乙醇的质量是五味子质量的4倍，回流提取2小时，第三次75%乙醇的质量是五味子质量的4倍，回流提取1小时，合并提取液，回收乙醇，减压浓缩至60℃条件下相对密度为1.32的浸膏；将两种浸膏合并，加入猪胆粉与辅料，制颗粒，干燥，即得。

其中辅料为蔗糖和糊精组成，辅料的用量为合并后浸膏质量的1.9倍，蔗糖和糊精质量比例为2：1。

药效试验：

1、护肝颗粒对脂肪肝模型大鼠的保护作用研究

1.1材料

1.1.1动物：大鼠，昆明种，体重：180～220g，由南昌大学医学院实验动物中心提供。

1.1.2器材：全自动血生化分析仪（日本，AU2700型），0.25ml注射器、4号针头；吸管；721分光光度计。

1.1.3药品及试剂：护肝颗粒（100g/袋，1.743g生药/g），批号：20081018，江西中成中药原料有限公司生产。护肝片（100片/盒，1.255g生药/片），批号：20081225，黑龙江葵花药业股份有限公司。胆固醇、胆酸钠，湖南祁东县同信生化厂。猪油为市售。MDA、SOD测试试剂盒，购自南京建成生物工程公司，批号20061226。

1.2方法

1.2.1实验分组、给药及造模方法

96只大鼠适应性喂养1周后，随机分为造模组（84只）和正常对照组。造模组饲以高脂饲料，配方为：普通饲料+10%猪油+2%胆固醇+0.2%胆酸钠（质量比），正常对照组饲以普通饲料，实验动物自由饮水和进食。4周后将造模后大鼠称重、按体重层次随机分为模型组、护肝片组（剂量1.6g生药/kg）及护肝颗粒实施例1-5组（剂量1.6g生药/kg），各组12只，除正常对照组外，其余各组均继续饲以高脂饲料，并用等容量给药法于每日晨按10ml/kg灌胃，为排除灌胃对动物食欲的影响，模型组和空白对照组给予等容量蒸馏水，连续给药4w。末次给药后大鼠禁食6小时称重，每组取10只用戊巴比妥钠腹腔麻醉(30mg/kg)，刺心脏采血处死；迅速摘取肝脏并称得湿质量。

1.2.2检测指标

（1）肝脏指数（按以下公式计算）

肝脏指数=肝湿质量／体质量 ×100%

（2）生化指标检测

血样经离心，取血清，使用全自动生化分析仪测定谷丙氨酸转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL C）；肝组织匀浆，按试剂盒方法测定丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活力。

1.2.3统计方法

计量资料以均值加减标准差表示()，用SPSS12.0软件包进行统计分析，行单因素方差分析SNK法组间均值两两比较。检验水准α=0.05。计数资料采用Χ²检验。

1.3结果

1.3.1对肝脏指数的影响

结果见表5，模型组大鼠肝脏指数与正常对照组相比显著升高（P<0.01）；各给药组肝脏指数有不同程度下降，其中护肝颗粒实施例1-3组的肝脏指数与模型对照组相比，明显降低。

与空白组比较，^ΔΔP<0.01，^ΔP<0.05；与模型组组比较，**P<0.01，*P<0.05

1.3.2对大鼠血脂的影响

结果见表6，模型组大鼠TG、TC、HDL-C、LDL-C与正常对照组相比，有显著性差异（P<0.01）；给药后，各给药组TG、TC、LDL-C有不同程度下降，HDL-C有不同程度上升；其中护肝颗粒实施例1-3组的TG、TC、HDL-C、LDL-C水平与模型对照组相比，效果较好。

与空白组比较，^ΔΔP<0.01，^ΔP<0.05；与模型组组比较，**P<0.01，*P<0.05

1.3.3大鼠ALT、AST水平的影响

结果见表7，模型组大鼠ALT、AST显著升高，与正常对照组相比，有显著性差异（P<0.01）；各给药组ALT、AST有所下降，其中护肝颗粒实施例1-3组与模型对照组相比，效果较好。

与空白组比较，^ΔΔP<0.01，^ΔP<0.05；与模型组组比较，**P<0.01，*P<0.05

1.3.4对大鼠抗氧化力的影响

护肝颗粒实施例1-3组能明显降低肝脏MDA水平，提高SOD水平，具有较强的抗氧化作用，与模型组比较差异有显著性(P<0.05，见表8)，效果最佳。

与空白组比较，^ΔΔP<0.01，^ΔP<0.05；与模型组组比较，**P<0.01，*P<0.05

1.4小结

护肝颗粒可低脂肪肝模型大鼠肝脏MDA含量，提高SOD含量，从而显著改善脂肪肝模型大鼠的肝脏功能；可调节血脂，减轻脂肪变性程度，对脂肪肝模型大鼠具有较好的保护作用。在本发明工艺范围内的实施例1-3的治疗效果明显优于在本发明工艺范围外的实施例4、5和护肝片，可见采用本发明的剂型和特定的工艺，可大大有效地用于治疗鸡脂肪肝综合症等疾病。

2、护肝颗粒对功能性消化不良小鼠胃肠动力的的影响

2.1材料

2.1.1动物：小鼠，体重：18～22g，由南昌大学医学院实验动物中心提供。

2.1.2器材：天平、直尺、手术剪、手术镊、缝合线。

2.1.3药品及试剂：护肝颗粒（100g/袋，1.734g生药/g），批号：20081018，江西中成中药原料有限公司生产。护肝片（100片/盒，1.255g生药/片），批号：20071225，黑龙江葵花药业股份有限公司。

2.2方法

2.2.1半固体营养糊的制备：取10g羧甲基纤维素钠（CMC），溶于250ml蒸馏水中，分别加入16g奶粉、8g糖、8g淀粉和2g活性炭末，搅拌均匀。配制成300ml约300g的黑色半固体糊状物。冰箱冷藏，用时恢复至室温。

2.2.2分组：取体重18～22g健康小鼠，单笼禁食24小时，自由饮水，随机分为8组，每组8只，即空白组，模型组，阳性药物对照组，护肝颗粒实施例1-5组。

2.2.3造模方法：参照郭氏适度夹尾法制造功能性消化不良（FD）模型：用试管夹夹尾，每次30min，每日4次，连续刺激1周。

2.2.4给药方法

阳性药物对照组灌胃给予护肝片2.24g生药/kg，护肝颗粒实施例1-5量组分别灌胃给予2.24g生药/kg，体积量为0.1ml/10g，空白组给予相应体积生理盐水；每天1次，自造模结束后1天起连续给药5天，给药期间正常进食及饮水。

2.2.4胃排空速度末次给药后1小时，将已禁食（不禁水）18小时的小鼠灌胃给予半固体黑色糊，每只0.8ml。20分钟后脱颈椎处死小鼠，开腹，结扎胃贲门和幽门，取胃，用滤纸拭干后称全重，然后沿胃大弯剪开胃体，洗去胃内容物后拭干，称净重。以胃全重和胃净重的差值为胃内残留物重，计算胃内残留物占所灌半固体糊重量的百分比为胃内残留率。同时迅速取出小肠，轻轻剥离肠系膜后将小肠拉成直线，测量幽门至回盲部的小肠全长及幽门至黑色半固体糊前沿的距离。以幽门至黑色半固体糊前沿的距离占幽门至回盲部全长的百分率为小肠推进率。

2.3结果

模型组小鼠的胃内残留率增高（P<0.01），小肠推进率降低（P<0.05），表明夹尾法可刺激小鼠造成功能性消化不良。护肝颗粒实施例1-5组和阳性药物组可降低模型小鼠的胃内残留率，提高小肠推进率，尤其以实施例护肝颗粒实施例1-3组效果最佳（表9）。

与空白组比较，^ΔΔP<0.01，^ΔP<0.05；与模型组组比较，**P<0.01，*P<0.05

2.4小结

护肝颗粒对消化不良模型小鼠的胃排空、小肠推进有促进作用。在本发明工艺范围内的实施例1-3的治疗效果明显优于在本发明工艺范围外的实施例4、5和护肝片，可见采用本发明的剂型和特定的工艺，可大大有效地用于治疗鸡脂肪肝综合症等疾病。

Claims (1)

1.一种家禽用护肝颗粒，其特征为：由下列质量份数的原料制成：柴胡313份、茵陈313份、板蓝根313份、五味子168份、猪胆粉20份、绿豆128份；制备方法为：柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆加水煎煮二次，每次2小时，第一次水的质量是柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆总质量的10倍，第二次水的质量是柴胡、茵陈、板蓝根、绿豆总质量的8倍，合并两次煎液，滤过，滤液减压浓缩成60℃条件下相对密度为1.27的浸膏，备用；将五味子粉碎后，用75%乙醇回流提取三次，第一次75%乙醇的质量是五味子质量的5倍，回流提取3小时，第二次75%乙醇的质量是五味子质量的4倍，回流提取2小时，第三次75%乙醇的质量是五味子质量的4倍，回流提取1小时，合并提取液，回收乙醇，减压浓缩至60℃条件下相对密度为1.27的浸膏；将两种浸膏合并，加入猪胆粉与辅料，制颗粒，干燥，即得；

其中辅料为蔗糖和糊精组成，辅料的用量为合并后浸膏质量的1.5倍，蔗糖和糊精质量比例为2：1。