CN104082132A - 一种甜玉米单倍体化学浸种加倍方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及农业技术领域，具体涉及一种甜玉米单倍体化学浸种加倍方法。该方法包含如下具体步骤：首先对甜玉米种子表面消毒，再将消毒后的种子放入含有秋水仙素的营养液中进行加倍处理，然后播种移栽；所述的加倍处理的条件为：含质量分数为0.02％秋水仙素的营养液32℃下加倍处理30h、含质量分数为0.02％秋水仙素的营养液32℃下加倍处理24h或含质量分数为0.06％秋水仙素的营养液32℃下加倍处理30h。该方法机械损伤少、操作方便、植物药害率低、对人体的毒害作用小，平均加倍率为11.82％～14.29％，高于传统加倍方法和自然加倍方法的6～7倍，便于规模化应用。
Description
技术领域
本发明涉及农业技术领域，具体涉及一种甜玉米单倍体化学浸种加倍方法。
背景技术
甜玉米籽粒含有丰富和均衡的营养成分，具有较好的口感，已经成为不可或缺的营养和保健食品之一。单倍体技术因其育种周期短、效率高、自交系纯度高，是玉米育种的首选方法。
目前，单倍体育种技术在普通玉米中应用非常广泛，但甜玉米的相关研究却报道较少。限制单倍体育种主要障碍之一是单倍体的加倍率偏低，影响因素非常多，除了加倍材料的遗传背景外，温度、湿度、时间、时机、试剂的浓度与类型等均显著影响加倍率。相关研究在普通玉米中已经比较全面和深入，但针对甜玉米的研究非常缺乏。甜玉米因抗性较弱，加倍过程因药物毒性植株极易死亡；同时其单倍体幼苗弱小、抗逆性差，对加倍过程的机械损伤非常敏感，因此，选择机械损伤少、操作方便的加倍方法，对甜玉米的单倍体育种应用非常关键。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种甜玉米单倍体化学浸种加倍方法。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种甜玉米单倍体化学浸种加倍方法，包含如下具体步骤：
(1)种子消毒
甜玉米单倍体种子先用乙醇消毒，再用次氯酸钠溶液处理，之后再用无菌水冲洗；
(2)种子加倍
将步骤(1)中消毒过的甜玉米单倍体种子放入含有秋水仙素的营养液中进行加倍处理，加入营养液的量以恰好浸没种子为准；之后，再用清水冲洗；
(3)播种
将步骤(2)处理过的甜玉米种子播种到育苗盘中，常温下育苗；
(4)移栽
待玉米苗长至3～4片叶后，移栽至大田；
步骤(1)中所述的甜玉米优选为甜玉米“粤甜13号”；
步骤(1)中所述的乙醇的体积分数优选为75％，消毒时间为1min～2min；
步骤(1)中所述的体积分数为75％的乙醇消毒的时间优选为1min；
步骤(1)中所述的次氯酸钠溶液的体积分数为15％，处理时间为15min～20min；
步骤(1)中所述的体积分数为15％的次氯酸钠溶液处理的时间优选为15min；
步骤(1)中所述的无菌水的冲洗次数为3～5次；
步骤(1)中所述的无菌水的冲洗次数优选为3次；
步骤(2)所述的加倍处理的条件为：含质量分数为0.02％秋水仙素的营养液32℃下加倍处理30h、含质量分数为0.02％秋水仙素的营养液32℃下加倍处理24h或含质量分数为0.06％秋水仙素的营养液32℃下加倍处理30h；
步骤(2)所述的加倍处理的条件优选为含质量分数为0.02％秋水仙素的营养液32℃下加倍处理30h；
步骤(2)中所述的营养液包含MS大量元素、MS微量元素和20g/L蔗糖；
步骤(2)中所述的清水冲洗的时间为30min～40min；
步骤(2)中所述的清水冲洗的时间优选为30min；
步骤(3)中所述的常温为25℃～28℃；
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明提供的甜玉米单倍体化学浸种加倍方法在浸种加倍前不经过清水浸泡，而是经过种子消毒后直接采用秋水仙素加倍，不仅极大地节约了种子处理时间，更重要的是可有效降低甜玉米单倍体种子的药害率，提高加倍效率；
(2)本发明提供的甜玉米单倍体化学浸种加倍方法秋水仙素使用浓度低，在减少化学药品消耗、有效地降低实验成本的同时，可有效地降低甜玉米苗的药害率，以及减轻播种时对人体的毒害作用；
(3)本发明提供的甜玉米单倍体化学浸种加倍方法平均加倍率为11.82％～14.29％，加倍率明显高于改良前的传统化学浸种加倍方法，便于规模化应用。
附图说明
图1是秋水仙素浓度对甜玉米单倍体植株的散粉率、结实率和药害率影响的结果分析图。
图2是加倍时间对甜玉米单倍体植株的散粉率、结实率和药害率影响的结果分析图。
图3是加倍温度对甜玉米单倍体植株的散粉率、结实率和药害率影响的结果分析图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例和对比实施例数据计算方式：
散粉率(％)＝散粉株数/存活双单倍体数×100％
药害率(％)＝药害株数/出苗数×100％
结实率(％)＝结实株数/存活双单倍体数×100％
实施例中所用甜玉米品种“粤甜13号”由广东省农业科学院作物研究所玉米室提供，秋水仙素购于广州市丛源仪器有限公司，表1为营养液详细配方。
表1营养液配方
实施例1“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.02％的秋水仙素中32℃加倍不同时间的化学浸种加倍试验
(1)种子消毒
将甜玉米单倍体种子均分9份，每份含有450粒单倍体种子，分别装在无菌的网袋中；用体积分数为75％的乙醇消毒1min，取出后，再用体积分数为15％的次氯酸钠溶液处理15min，然后再用无菌水冲洗3次；
(2)种子加倍
将消毒过的9份种子放入含有质量分数为0.02％秋水仙素的营养液中，每一种子网袋中加入营养液的量以恰好浸没种子为准；其中3份种子放置在32℃的人工气候箱中处理18h，3份种子放置在32℃的人工气候箱中处理24h，另外3份种子放置在32℃的人工气候箱中处理30h；之后，将营养液倒掉，再用自来水冲洗30min；
(3)播种
将步骤(2)处理过的种子播种到育苗盘中，在基地温室中育苗；
(4)移栽
待玉米苗长到3叶时，记录出苗数，并将茎秆为紫色的假双单倍体苗剔除，然后移栽至大田，生长、开花、结实。
表2、3和4分别是“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.02％的秋水仙素中32℃加倍18h、24h、30h的化学浸种加倍结果，甜玉米单倍体种子的平均加倍率分别为为7.93％、12.78％和14.29％。
表2“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.02％的秋水仙素中32℃加倍18h的化学浸种加倍结果
表3“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.02％的秋水仙素中32℃加倍24h的化学浸种加倍结果
表4“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.02％的秋水仙素中32℃加倍30h的化学浸种加倍结果
实施例2“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.02％的秋水仙素中27℃加倍不同时间的化学浸种加倍试验
(1)种子消毒
将甜玉米单倍体种子均分9份，每份含有450粒单倍体种子，分别装在无菌的网袋中；用体积分数为75％的乙醇消毒1min，取出后，再用体积分数为15％的次氯酸钠溶液处理15min，然后再用无菌水冲洗3次；
(2)种子加倍
将消毒过的9份种子放入含有质量分数为0.02％秋水仙素的营养液中，每一种子网袋中加入营养液的量以恰好浸没种子为准，其中3份种子放置在27℃的人工气候箱中处理18h，3份种子放置在27℃的人工气候箱中处理24h，另外3份种子放置在27℃的人工气候箱中处理30h；之后，将营养液倒掉，再用自来水冲洗30min；
(3)播种
将步骤(2)处理过的种子播种到育苗盘中，在基地温室中育苗；
(4)移栽
待玉米苗长到3叶时，记录出苗数，并将茎秆为紫色的假双单倍体苗剔除，然后移栽至大田，生长、开花、结实。
表5、6和7分别是“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.02％的秋水仙素中27℃加倍18h、24h、30h的化学浸种加倍结果，甜玉米单倍体种子的平均加倍率分别为4.01％、7.25％和1.47％。
表5“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.02％的秋水仙素中27℃加倍18h的化学浸种加倍结果
表6“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.02％的秋水仙素中27℃加倍24h的化学浸种加倍结果
表7“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.02％的秋水仙素中27℃加倍30h的化学浸种加倍结果
实施例3“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.02％的秋水仙素中22℃加倍不同时间的化学浸种加倍试验
(1)种子消毒
将甜玉米单倍体种子均分9份，每份含有450粒单倍体种子，分别装在无菌的网袋中。用体积分数为75％的乙醇消毒1min，取出后，再用体积分数为15％的次氯酸钠溶液处理15min，然后再用无菌水冲洗3次；
(2)种子加倍
将消毒过的9份种子放入含有质量分数为0.02％秋水仙素的营养液中，每一种子网袋中加入营养液的量以恰好浸没种子为准，其中3份种子放置在22℃的人工气候箱中处理18h，3份种子放置在22℃的人工气候箱中处理24h，另外3份种子放置在22℃的人工气候箱中处理30h；之后，将营养液倒掉，再用自来水冲洗30min；
(3)播种
将步骤(2)处理过的种子播种到育苗盘中，在基地温室中育苗；
(4)移栽
待玉米苗长到3叶时，记录出苗数，并将茎秆为紫色的假双单倍体苗剔除，然后移栽至大田，生长、开花、结实。
表8、9和10分别是“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.02％的秋水仙素中22℃加倍18h、24h、30h的化学浸种加倍结果，甜玉米单倍体种子的平均加倍率分别为4.85％、2.38％和4.62％。
表8“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.02％的秋水仙素中22℃加倍18h的化学浸种加倍结果
表9“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.02％的秋水仙素中22℃加倍24h的化学浸种加倍结果
表10“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.02％的秋水仙素中22℃加倍30h的化学浸种加倍结果
实施例4“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.06％的秋水仙素中32℃加倍不同时间的化学浸种加倍试验
(1)种子消毒
将甜玉米单倍体种子均分9份，每份含有450粒单倍体种子，分别装在无菌的网袋中；用体积分数为75％的乙醇消毒1min，取出后，再用体积分数为15％的次氯酸钠溶液处理15min，然后再用无菌水冲洗3次；
(2)种子加倍
将消毒过的9份种子放入含有质量分数为0.06％秋水仙素的营养液中，每一种子网袋中加入营养液的量以恰好浸没种子为准；其中3份种子放置在32℃的人工气候箱中处理18h，3份种子放置在32℃的人工气候箱中处理24h，另外3份种子放置在32℃的人工气候箱中处理30h；之后，将营养液倒掉，再用自来水冲洗30min；
(3)播种
将步骤(2)处理过的种子播种到育苗盘中，在基地温室中育苗；
(4)移栽
待玉米苗长到3叶时，记录出苗数，并将茎秆为紫色的假双单倍体苗剔除，然后移栽至大田，生长、开花、结实。
表11、12和13分别是“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.06％的秋水仙素中32℃加倍18h、24h、30h的化学浸种加倍结果，甜玉米单倍体种子的平均加倍率分别为2.33％、5.03％和11.82％。
表11“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.06％的秋水仙素中32℃加倍18h的化学浸种加倍结果
表12“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.06％的秋水仙素中32℃加倍24h的化学浸种加倍结果
表13“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.06％的秋水仙素中32℃加倍30h的化学浸种加倍结果
实施例5“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.06％秋水仙素中和27℃加倍不同时间的化学浸种加倍试验
(1)种子消毒
将甜玉米单倍体种子均分9份，每份含有450粒单倍体种子，分别装在无菌的网袋中；用体积分数为75％的乙醇消毒1min，取出后，再用体积分数为15％的次氯酸钠溶液处理15min，然后再用无菌水冲洗3次；
(2)种子加倍
将消毒过的9份种子放入含有质量分数为0.06％秋水仙素的营养液中，每一种子网袋中加入营养液的量以恰好浸没种子为准，其中3份种子放置在27℃的人工气候箱中处理18h，3份种子放置在27℃的人工气候箱中处理24h，另外3份种子放置在32℃的人工气候箱中处理30h；之后，将营养液倒掉，再用自来水冲洗30min；
(3)播种
将步骤(2)处理过的种子播种到育苗盘中，在基地温室中育苗；
(4)移栽
待玉米苗长到3叶时，记录出苗数，并将茎秆为紫色的假双单倍体苗剔除，然后移栽至大田，生长、开花、结实。
表14、15和16分别是“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.06％的秋水仙素中27℃加倍18h、24h、30h的化学浸种加倍结果，甜玉米单倍体种子的平均加倍率分别为4.63％、5.47％和1.45％；
表14“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.06％的秋水仙素中27℃加倍18h的化学浸种加倍结果
表15“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.06％的秋水仙素中27℃加倍24h的化学浸种加倍结果
表16“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.06％的秋水仙素中27℃加倍30h的化学浸种加倍结果
实施例6“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.06％秋水仙素中和22℃加倍不同时间的化学浸种加倍试验
(1)种子消毒
将甜玉米单倍体种子均分9份，每份含有450粒单倍体种子，分别装在无菌的网袋中；用体积分数为75％的乙醇消毒1min，取出后，再用体积分数为15％的次氯酸钠溶液处理15min，然后再用无菌水冲洗3次；
(2)种子加倍
将消毒过的9份种子放入含有质量分数为0.06％秋水仙素的营养液中，每一种子网袋中加入营养液的量以恰好浸没种子为准，其中3份种子放置在22℃的人工气候箱中处理18h，3份种子放置在22℃的人工气候箱中处理24h，另外3份种子放置在22℃的人工气候箱中处理30h；之后，将营养液倒掉，再用自来水冲洗30min；
(3)播种
将步骤(2)处理过的种子播种到育苗盘中，在基地温室中育苗；
(4)移栽
待玉米苗长到3叶时，记录出苗数，并将茎秆为紫色的假双单倍体苗剔除，然后移栽至大田，生长、开花、结实。
表17、18和19分别是“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.06％的秋水仙素中22℃加倍18h、24h、30h的化学浸种加倍结果，甜玉米单倍体种子的平均加倍率分别为2.06％、1.32％和1.85％。
表17对“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.06％的秋水仙素中22℃加倍18h的化学浸种加倍结果
表18“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.06％的秋水仙素中22℃加倍24h的化学浸种加倍结果
表19“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.06％的秋水仙素中22℃加倍30h的化学浸种加倍结果
实施例7“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.10％秋水仙素中和32℃加倍不同时间的化学浸种加倍试验
(1)种子消毒
将甜玉米单倍体种子均分9份，每份含有450粒单倍体种子，分别装在无菌的网袋中；用体积分数为75％的乙醇消毒1min，取出后，再用体积分数为15％的次氯酸钠溶液处理15min，然后再用无菌水冲洗3次；
(2)种子加倍
将消毒过的9份种子放入含有质量分数为0.10％秋水仙素的营养液中，每一种子网袋中加入营养液的量以恰好浸没种子为准，其中3份种子放置在32℃的人工气候箱中处理18h，3份种子放置在32℃的人工气候箱中处理24h，另外3份种子放置在32℃的人工气候箱中处理30h；之后，将营养液倒掉，再用自来水冲洗30min；
(3)播种
将步骤(2)处理过的种子播种到育苗盘中，在基地温室中育苗；
(4)移栽
待玉米苗长到3叶时，记录出苗数，并将茎秆为紫色的假双单倍体苗剔除，然后移栽至大田，生长、开花、结实。
表20、21和22分别是“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.10％的秋水仙素中32℃加倍18h、24h、30h的化学浸种加倍结果，甜玉米单倍体种子的平均加倍率分别为2.64％、2.27％和4.68％。
表20“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.10％的秋水仙素中32℃加倍18h的化学浸种加倍结果
表21“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.10％的秋水仙素中32℃加倍24h的化学浸种加倍结果
表22“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.10％的秋水仙素中32℃加倍30h的化学浸种加倍结果
实施例8“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.10％秋水仙素中和27℃加倍不同时间的化学浸种加倍试验
(1)种子消毒
将甜玉米单倍体种子均分9份，每份含有450粒单倍体种子，分别装在无菌的网袋中；用体积分数为75％的乙醇消毒1min，取出后，再用体积分数为15％的次氯酸钠溶液处理15min，然后再用无菌水冲洗3次；
(2)种子加倍
将消毒过的9份种子放入含有质量分数为0.10％秋水仙素的营养液中，每一种子网袋中加入营养液的量以恰好浸没种子为准，其中3份种子放置在27℃的人工气候箱中处理18h，3份种子放置在27℃的人工气候箱中处理24h，另外3份种子放置在27℃的人工气候箱中处理30h；之后，营养液倒掉，再用自来水冲洗30min；
(3)播种
将步骤(2)处理过的种子播种到育苗盘中，在基地温室中育苗；
(4)移栽
待玉米苗长到3叶时，记录出苗数，并将茎秆为紫色的假双单倍体苗剔除，然后移栽至大田，生长、开花、结实。
表23、24和25分别是“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.10％的秋水仙素中27℃加倍18h、24h、30h的化学浸种加倍结果，甜玉米单倍体种子的平均加倍率分别为2.74％、2.25％和1.53％。
表23“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.10％的秋水仙素中27℃加倍18h的化学浸种加倍结果
表24“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.10％的秋水仙素中27℃加倍24h的化学浸种加倍结果
表25“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.10％的秋水仙素中27℃加倍30h的化学浸种加倍结果
实施例9“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.10％秋水仙素中和22℃加倍不同时间的化学浸种加倍试验
(1)种子消毒
将甜玉米单倍体种子均分9份，每份含有450粒单倍体种子，分别装在无菌的网袋中；用体积分数为75％的乙醇消毒1min，取出后，再用体积分数为15％的次氯酸钠溶液处理15min，然后再用无菌水冲洗3次；
(2)种子加倍
将消毒过的9份种子放入含有质量分数为0.10％秋水仙素的营养液中，每一种子网袋中加入营养液的量以恰好浸没种子为准，其中3份种子放置在22℃的人工气候箱中处理18h，3份种子放置在22℃的人工气候箱中处理24h，另外3份种子放置在22℃的人工气候箱中处理30h；之后，将营养液倒掉，再用自来水冲洗30min；
(3)播种
将步骤(2)处理过的种子播种到育苗盘中，在基地温室中育苗；
(4)移栽
待玉米苗长到3叶时，记录出苗数，并将茎秆为紫色的假双单倍体苗剔除，然后移栽至大田，生长、开花、结实。
表26、27和28分别是“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.10％的秋水仙素中22℃加倍18h、24h、30h的化学浸种加倍结果，甜玉米单倍体种子的平均加倍率分别为3.04％、2.51％和2.33％；
表26“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.10％的秋水仙素中22℃加倍18h的化学浸种加倍结果
表27“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.10％的秋水仙素中22℃加倍24h的化学浸种加倍结果
表28“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.10％的秋水仙素中22℃加倍30h的化学浸种加倍结果
对比实施例1对“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.02％秋水仙素浓度下的传统化学浸种加倍试验
(1)种子消毒
将甜玉米单倍体种子均分3份，每份含有504粒单倍体种子，分别装在无菌的网袋中。用体积分数为75％的乙醇消毒1min，取出后，再用体积分数为15％的次氯酸钠溶液处理15min，然后再用无菌水冲洗3次；
(2)种子加倍
在室温(25℃～28℃)下，用无菌水浸泡种子24h，再用质量分数为0.02％秋水仙素溶液处理12h，再用清水冲洗30min；
(3)播种
将步骤(2)处理过的种子播种到育苗盘中，在基地温室中育苗；
(4)移栽
待玉米苗长到3叶时，记录出苗数，并将茎秆为紫色的假双单倍体苗剔除，然后移栽至大田，生长、开花、结实。
表29是本实施例的实验结果，其中，3份甜玉米单倍体种子的平均加倍率为1.20％，明显低于实施例1的结果，说明改良后的加倍方法能明显提高单倍体的加倍率。
表29“粤甜13号”甜玉米单倍体种子的传统化学浸种加倍结果分析
对比实施例2对“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.06％秋水仙素浓度下的传统化学浸种加倍试验
(1)种子消毒
将甜玉米单倍体种子均分3份，每份含有504粒单倍体种子，分别装在无菌的网袋中；用体积分数为75％的乙醇消毒1min，取出后，再用体积分数为15％的次氯酸钠溶液处理15min，然后再用无菌水冲洗3次；
(2)种子加倍
在室温(25℃～28℃)下，用无菌水浸泡种子24h，再用质量分数为0.06％秋水仙素溶液处理12h，再用清水冲洗30min；
(3)播种
将步骤(2)处理过的种子播种到育苗盘中，在基地温室中育苗；
(4)移栽
待玉米苗长到3叶时，记录出苗数，并将假茎秆为紫色的双单倍体苗剔除，然后移栽至大田，生长、开花、结实。
表30是本实施例的实验结果，其中，3份甜玉米单倍体种子的平均加倍率为1.90％。
表30“粤甜13号”甜玉米单倍体种子的传统化学浸种加倍结果分析
对比实施例3对“粤甜13号”甜玉米单倍体种子在质量分数为0.10％秋水仙素浓度下的传统化学浸种加倍试验
(1)种子消毒
将甜玉米单倍体种子均分3份，每份含有504粒单倍体种子，分别装在无菌的网袋中；用体积分数为75％的乙醇消毒1min，取出后，再用体积分数为15％的次氯酸钠溶液处理15min，然后再用无菌水冲洗3次；
(2)种子加倍
在室温(25℃～28℃)下，用无菌水浸泡种子24h，再用质量分数为0.10％秋水仙素溶液处理12h，再用清水冲洗30min；
(3)播种
将步骤(2)处理过的种子播种到育苗盘中，在基地温室中育苗；
(4)移栽
待玉米苗长到3叶时，记录出苗数，并将假茎秆为紫色的双单倍体苗剔除，然后移栽至大田，生长、开花、结实。
表31是本实施例的实验结果，其中，3份甜玉米单倍体种子的平均加倍率为1.46％。
表31“粤甜13号”甜玉米单倍体种子的传统化学浸种加倍结果分析
对比实施例4“粤甜13号”甜玉米单倍体种子的自然加倍试验
(1)种子消毒
将甜玉米单倍体种子均分3份，每份含有504粒单倍体种子，分别装在无菌的网袋中；用体积分数为75％的乙醇消毒1min，取出后，再用体积分数为15％的次氯酸钠溶液处理15min，然后再用无菌水冲洗3次；
(2)在室温(25℃～28℃)下，用无菌水浸泡种子24h，之后播种到大田，生长、开花、结实。
表32是本实施例的实验结果，其中，3份甜玉米单倍体种子的平均加倍率为2.06％，结果要比对比实施例1、对比实施例2和对比实施例3的结果好，说明甜玉米采用对比实施例1、对比实施例2和对比实施例3的常用浸种加倍方法易对甜玉米单倍体造成损伤，降低结实率。
表32“粤甜13号”甜玉米单倍体种子的自然加倍结果分析
图1是秋水仙素浓度对甜玉米单倍体植株的散粉率、结实率和药害率影响的结果分析图。从图中可以看出，甜玉米单倍体植株的散粉率和结实率随秋水仙素浓度的增加而降低，药害率则增加，说明秋水仙素浓度在质量分数为0.02％时加倍效果最好。
图2是加倍时间对甜玉米单倍体植株的散粉率、结实率和药害率影响的结果分析图，从图中可以看出，甜玉米单倍体植株的散粉率和加倍率随加倍时间的增加变化不明显，而药害率下降明显，说明加倍时间在30h时加倍效果最好。
图3是加倍温度对甜玉米单倍体植株的散粉率、结实率和药害率影响的结果分析图。从图中可以看出，甜玉米单倍体植株的散粉率和药害率随加倍温度的增加而降低，结实率增加，说明加倍温度为32℃时加倍效果最好。
实施例中，处理方式为含质量分数为0.02％秋水仙素的营养液32℃下加倍处理30h效果最好，加倍率为14.29％，与对比实施例相比，能明显提高甜玉米单倍加倍率；其次是含质量分数为0.02％秋水仙素的营养液32℃下加倍处理24h或含质量分数为0.06％秋水仙素的营养液32℃下加倍处理30h加倍效果较好，加倍率分别为12.78％和11.82％。该三种处理方法机械损伤少、操作方便、植物药害率低、对人体的毒害作用小，为本发明较优化学浸种加倍方法。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种甜玉米单倍体化学浸种加倍方法，其特征在于包含如下具体步骤：
(1)种子消毒
甜玉米单倍体种子先用乙醇消毒，再用次氯酸钠溶液处理，之后再用无菌水冲洗；
(2)种子加倍
将步骤(1)中消毒过的甜玉米单倍体种子放入含有秋水仙素的营养液中进行加倍处理，加入营养液的量以恰好浸没种子为准；之后，再用清水冲洗；
(3)播种
将步骤(2)处理过的甜玉米种子播种到育苗盘中，常温下育苗；
(4)移栽
待玉米苗长至3～4片叶后，移栽至大田。
2.根据权利要求1所述的甜玉米单倍体化学浸种加倍方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的甜玉米为甜玉米“粤甜13号”。
3.根据权利要求1所述的甜玉米单倍体化学浸种加倍方法，其特征在于：
步骤(2)所述的加倍处理的条件为：含质量分数为0.02％秋水仙素的营养液32℃下加倍处理30h、含质量分数为0.02％秋水仙素的营养液32℃下加倍处理24h或含质量分数为0.06％秋水仙素的营养液32℃下加倍处理30h。
4.根据权利要求3所述的甜玉米单倍体化学浸种加倍方法，其特征在于：
步骤(2)所述的加倍处理的条件为含质量分数为0.02％秋水仙素的营养液32℃下加倍处理30h。
5.根据权利要求1所述的甜玉米单倍体化学浸种加倍方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的乙醇的体积分数为75％，消毒时间为1min～2min。
6.根据权利要求5所述的甜玉米单倍体化学浸种加倍方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的体积分数为75％的乙醇消毒的时间优选为1min。
7.根据权利要求1所述的甜玉米单倍体化学浸种加倍方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的次氯酸钠溶液的体积分数为15％，处理时间为15min～20min。
8.根据权利要求7所述的甜玉米单倍体化学浸种加倍方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的体积分数为15％的次氯酸钠溶液处理的时间为15min。
9.根据权利要求1所述的甜玉米单倍体化学浸种加倍方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的无菌水的冲洗次数为3～5；
步骤(2)中所述的清水冲洗的时间为30min～40min。
10.根据权利要求1所述的甜玉米单倍体化学浸种加倍方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的营养液包含MS大量元素、MS微量元素和20g/L蔗糖。
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