CN104069066B - 黄癸固体分散体及其在治疗糖尿病及并发症中的应用 - Google Patents

Abstract

黄癸固体分散体及其在治疗糖尿病及并发症中的应用，本发明涉及化学制药、药物制剂、药物代谢动力学及药效学领域，具体涉及一种化合物黄连素与癸酸钠多元固体分散体及制备方法和药理活性，其特征是将黄连素、促吸收剂癸酸钠和固体分散体载体制备成黄癸固体分散体，其中黄连素以无定形分散在固体分散体载体中。本发明的黄癸固体分散体不仅具有制备方法简便易操作的优点，而且大大提高了黄连素的溶解度及肠粘膜透过率，从而提高了生物利用度。本发明的黄癸固体分散体在治疗糖尿病及糖尿病心肌病、糖尿病大血管病变、糖尿病肾病、糖尿病脑病和糖尿病眼病（视网膜病）等糖尿病并发症以及糖尿病相关疾病方面效果显著。本发明的黄癸固体分散体原料来源丰富，使用方便，为患者提供了新的治疗糖尿病及其并发症候选药物。

Description

黄癸固体分散体及其在治疗糖尿病及并发症中的应用

技术领域

本发明涉及化学制药、药物制剂、药物代谢动力学及药效学领域，具体涉及一种黄癸固体分散体及其在治疗糖尿病及并发症中的应用。

技术背景

黄连素（英文名：Berberine），常用的盐酸黄连素又叫盐酸小檗碱，分子式C₂₀H₁₈ClNO₄﹒H₂O，分子量389.83，具有下述化学结构，

黄连素是一种重要的生物碱，是我国应用很久的中药。可从黄连、黄柏、三颗针等植物中提取。它具有显著的抑菌作用。近年来发现，黄连素具有显著的降血糖作用，疗效确切、持续时间较长，兼有磺酰脲类和双胍类化合物的特点，并对糖尿病并发症如心血管疾病、高血压等有显著疗效，且无肝肾功能、血象异常及低血糖反应。

虽然黄连素具有显著的降糖作用，但其目前仍未作为一种降糖药应用于临床主要是由于黄连素口服吸收差，生物利用度低。有文献报道，黄连素口服生物利用度仅<5%，因此药物有效血药浓度不易维持。治疗糖尿病时需要大剂量频繁服用（0.9-2.5g/d）才能达到有效浓度，但患者容易出现便秘、胃不适，食欲减退、纳差、腹泻，甚至肠道菌群紊乱等胃肠道副反应，导致停止治疗，限制了黄连素的临床应用。造成黄连素肠道吸收差的主要原因：①肠粘膜透过率低；②溶解度差。

本发明中采用高效无毒的肠道促吸收剂癸酸钠来增加黄连素的肠粘膜通透性。研究表明，癸酸钠主要通过细胞旁通路和细胞内通路增加肠道粘膜的通透性，从而提高药物生物利用。本发明人前期申请专利CN101574343A公开的一种治疗糖尿病的药物组合，将黄连素与癸酸钠等促吸收剂联合使用，可增加黄连素在肠道的吸收，提高了其血药浓度，一定程度上改善了黄连素的生物利用度，解决了黄连素肠粘膜透过率低的问题。

本发明采用固体分散技术解决黄连素水溶性差的问题，固体分散技术是在载体中分散水难溶性药物，增大药物的溶解度和溶出速率，提高药物口服生物利用度一种纳米技术，采用固体分散技术制备的固体分散体是指药物以分子、胶体或纳米粒子（1-100nm）以及无定形状态高度分散于惰性载体中，形成的一种以固体形式存在的分散体系，主要通过①使被包裹药物粒径减小至纳米级；②减少了药物的再聚集和结块，抑制药物的晶体化；③增大药物纳米粒的比表面积从而增加了药物的润湿性；④增加药物在载体扩散层中的溶解度，从而增加药物的口服生物利用度。

发明内容

本发明的目的在于针对黄连素水溶性差和肠粘膜通透率低的问题，提供一种含有主要药效成分黄连素及促吸收剂癸酸钠的黄癸固体分散体及其制备方法，及其在治疗糖尿病及并发症中的应用。

本发明的目的是这样实现的：该黄癸固体分散体是由下述重量份数配比的原料制成：

黄连素1份、载体材料1～12份、癸酸钠0.1～2份；

所述各原料的优选重量份数配比是：

黄连素1份、载体材料1～6份、癸酸钠0.5～2份；

其中，所述的载体材料是PEG4000，PEG6000，PVP K30，HPMC K4M，POLOXAMER188的一种或几种的混合物。

本发明黄癸固体分散体可采用如下四种方法制备：

①、将黄连素、癸酸钠及固体分散体载体材料充分混合于球磨机中研磨，研磨时间为60分钟，后干燥粉碎过筛即得；

②、将黄连素、癸酸钠及载体材料溶于有机溶剂中，超声使各组分充分分散混匀，将所得溶液喷雾干燥即得。所述有机溶剂是乙醇、氯仿、四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、丙酮或其混合物，优选乙醇。

③、将黄连素溶于有机溶剂中，再加入载体材料，使其完全溶解，加入促吸收剂癸酸钠，然后再减压条件下旋转蒸发除去溶剂，加热干燥，粉碎过筛即得；所述有机溶剂是乙醇，氯仿，四氢呋喃，二氯甲烷，1,4-二氧六环，丙酮的至少一种或其任意两种的混合溶剂，优选乙醇。

④、将黄连素、癸酸钠及载体材料充分混匀置于高压反应釜中，通入超临界流体，调整反应釜温度及压力在超临界流体临界点之上，静置24小时，减压即得，所述超临界流体可以是超临界CO₂和超临界甲醇，优选超临界CO₂。

本发明黄癸固体分散体还可以和稀释剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂中的一种或几种混合制备成各种剂型。优选剂型有胶囊、片剂和滴丸剂。

本发明中制备的黄癸固体分散体在对于糖尿病及其并发症疾病的治疗或预防的药物中的应用，所述的并发症为下述至少一种：糖尿病心肌病、糖尿病大血管病变、糖尿病肾病、糖尿病脑病和糖尿病眼病（视网膜病）等糖尿病并发症以及糖尿病相关疾病。

本发明以黄连素为主要成分，辅以促吸收剂癸酸钠以及水溶性的载体材料，采用四种不同的制备方法，制备成不同组成比例的黄癸固体分散体，并对其进行了一系列研究。

1)首先采用差示扫描量热（Differential scanning calorimetry，DSC）曲线分析和X-射线衍射（X-ray diffraction，XRD）分析对黄癸固体分散体进行了质量控制，结果显示黄连素在黄癸固体分散体中的特征晶体峰明显消失，黄连素主要以无定形状态存在，达到高度的分散状态，这非常有利于药物的溶出。

2)药剂学表征主要检测了黄癸固体分散体中黄连素的表观溶解度和体外溶出度。结果显示，黄连素在与癸酸钠混合制备成固体分散体后，其表观溶解度显著增加，最高可增加5-6倍。表明黄连素在载体中充分分散，晶型发生改变，达到纳米级别的无定形状态，使得黄连素的比表面积增大，亲水系数增加，最终使黄连素的溶解度显著增加。此外，促吸收剂癸酸钠同时也是一种表面活性剂，也能一定程度上增加黄连素水中溶解度。体外溶出度实验结果表明，黄癸固体分散体在体外溶出情况良好，较黄连素原料药及市售黄连素片剂有明显改善，表明黄癸固体分散体由于黄连素存在的晶型发生了改变以及载体的作用可以显著改善溶出效率。

3)进一步我们选择溶解度最佳的黄癸固体分散体进行药物吸收动力学研究，在体肠循环实验结果显示，黄癸固体分散体产品能显著增加黄连素在小肠的吸收，增加黄连素的血药浓度，其药物吸收量显著多于黄连素纯品及市售黄连素片。本发明中的黄癸固体分散体与黄连素原料药、市售黄连素片口服给药后大鼠生物利用度结果显示，黄癸固体分散体产品较黄连素原料药，市售黄连素相比，其释放的黄连素最大血药浓度Cmax、药时曲线下面积均有显著提高AUC，达到最大血药浓度Cmax所用的时间Tmax明显减少，提示黄连素与癸酸钠制备成固体分散体可明显改善黄连素的口服生物利用度。

4)最后黄癸固体分散体的药效学研究显示，与黄连素纯品和市售黄连素片相比，黄癸固体分散体产品具有显著地降血糖作用，提示黄连素只有与癸酸钠联用制成黄癸固体分散体才能发挥其显著的降血糖作用，且与二甲双胍及格列苯脲相比结果可以看出，黄癸固体分散体具有优于其二者的降血糖作用，提示黄癸固体分散体具有很好的开发前景。

本发明的黄癸固体分散体原料来源丰富，辅料无毒、无污染，操作简便，使用方便，而且大大提高了黄连素的溶解度和肠粘膜透过率，从而提高了生物利用度。

本发明黄癸固体分散体治疗糖尿病及其并发症具有以下明显效果：

黄癸固体分散体改善糖尿病并发症：

糖尿病的持续高血糖，引起多重并发症，主要包括糖尿病心肌病、糖尿病大血管病变、糖尿病肾病、糖尿病脑病和糖尿病眼病（视网膜病）等糖尿病并发症。糖尿病形成后，引发多种并发症。从生物学的本质上理解，糖尿病的本身和它的多种并发症，均是由于机体的能量代谢异常引起的。黄癸固体分散体治疗糖尿病及其并发症主要是通过增加黄连素生物利用度，使其血药浓度达到有效的治疗浓度，降低血糖，纠正机体各组织器官异常的能量代谢，使机体处于能量稳态中。黄癸固体分散体治疗糖尿病及其并发症，从主要药效学的药效指标，到分子生物学的多个相关重要靶点，疗效都十分明显，包括逆转与糖尿病和与发病相关的能量代谢调节重要蛋白AMP蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)，和1型11β-羟基类固醇脱氢酶（11β-hydroxysteroid dehydrogenase1,11β-HSD1）等2型糖尿病药物的新靶点。本专利书仅列出黄癸固体分散体治疗几种糖尿病并发症的主要药效学的一些指标。

附图说明

图1是本发明黄癸固体分散体的DSC曲线分析图（DSC：差示扫描量热；Temperature：温度）

图2是本发明黄癸固体分散体的XRD分析图（2θ：扫描角度）

图3是黄连素原料药、市售黄连素片及本发明黄癸固体分散体的表观溶解度图（Solubility：溶解度）

图4是黄连素原料药、市售黄连素片及本发明黄癸固体分散体120min药物累积溶出度图（Accumulated dissolution：药物累积溶出度；Time：时间）

图5是本发明实施例9中黄癸固体分散体产品在小肠各时间点的吸收量曲线图（Absorbed dose：药物吸收量；Time：时间）

图6是本发明实施例9中黄癸固体分散体产品降血糖作用柱状图（与对照组相比*P<0.05，与DM模型组相比^#P<0.05，与二甲双胍组相比^△P<0.05，与格列苯脲组相比（Plasma glucose concentration：血糖）

图7是给予本发明实施例9中黄癸固体分散体产品3个月后，各组大鼠心脏彩超图

图8是给予本发明实施例9中黄癸固体分散体产品3个月后，各组大鼠心肌组织形态学HE染色图（400×）

图9是给予本发明实施例9中黄癸固体分散体产品3个月后，各组大鼠血清中NO含量柱状图（*P<0.05，**P<0.01，与对照组相比；^#P<0.05，^##P<0.01，与模型组相比）（PlasmaNO Concentration：血浆一氧化氮浓度）

图10是给予本发明实施例9中黄癸固体分散体产品3个月后，产品对大鼠胸主动脉乙酰胆碱（ACh）诱导内皮依赖性舒张反应的影响曲线图（*P<0.05，**P<0.01，与对照组相比；^#P<0.05，^##P<0.01，与模型组相比）（Relaxation：血管松弛度；Concentration of Ach：乙酰胆碱浓度）

图11是给予本发明实施例9中黄癸固体分散体产品3个月后，各组大鼠血肌酐的含量柱状图（*P<0.05，**P<0.01，与对照组相比；^#P<0.05，^##P<0.01，与模型组相比）（PlasmaCreatinine Concentration：血浆肌酐浓度）

图12是给予本发明实施例9中黄癸固体分散体产品3个月后，各组大鼠血尿素氮的含量柱状图（*P<0.05，**P<0.01，与对照组相比；^#P<0.05，^##P<0.01，与模型组相比）（PlasmaUsea Nitrogen Concentration：血浆尿素氮含量）

图13是给予本发明实施例9中黄癸固体分散体产品3个月后，各组大鼠尿白蛋白的含量柱状图（*P<0.05，**P<0.01，与对照组相比；^#P<0.05，^##P<0.01，与模型组相比）（UrineAlbumin Concentration：尿液白蛋白浓度）

图14是给予本发明实施例9中黄癸固体分散体产品3个月后，各组大鼠尿总蛋白的含量柱状图（*P<0.05，**P<0.01，与对照组相比；^#P<0.05，^##P<0.01，与模型组相比）（UrineTotal Protein concentration：尿液总蛋白浓度）

具体实施方式

实施例1

取0.5g黄连素置于圆底烧瓶中，加入125ml无水乙醇中，超声溶解，再加入0.25g癸酸钠和0.5gPVP K30，超声溶解。然后在40℃减压条件下旋转蒸发除去溶剂，置于恒温干燥器中，50℃干燥过夜，次日取出，粉碎过200目筛，即得黄癸固体分散体。

实施例2

将黄连素1g，癸酸钠0.5g，PEG60003g研磨充分混合均匀，置于高压反应釜中，调节反应釜温度为50℃，通入超临界CO₂，调节反应釜压力为20KPa，静置24小时后，减压即得黄癸固体分散体。

实施例3

将黄连素1g，POLOXAMER1886g，癸酸钠0.5g溶于无水乙醇中，再将溶液用喷雾干燥器喷雾干燥制得黄癸固体分散体，最后将固体分散体置于50℃下干燥2小时。

实施例4

将黄连素1g，癸酸钠1g，PEG60001g研磨充分混合均匀，置于高压反应釜中，调节反应釜温度为50℃，通入超临界CO₂，调节反应釜压力为20KPa，静置24小时后，减压即得黄癸固体分散体。

实施例5

将黄连素1g，POLOXAMER1883g，癸酸钠1g溶于无水乙醇中，再将溶液用喷雾干燥器喷雾干燥制的黄癸固体分散体，最后将固体分散体置于50℃下干燥2小时。

实施例6

取0.5g黄连素置于圆底烧瓶中，加入125ml无水乙醇中，超声溶解，再加入0.5g癸酸钠和3gPVP K30，超声溶解。然后在40℃减压条件下旋转蒸发除去溶剂，置于恒温干燥器中，50℃干燥过夜。次日取出，粉碎过200目筛，即得黄癸固体分散体。

实施例7

将黄连素1g，POLOXAMER1881g，癸酸钠2g溶于无水乙醇中，再将溶液用喷雾干燥器喷雾干燥制的黄癸固体分散体，最后将固体分散体置于50℃下干燥2小时。

实施例8

取0.5g黄连素置于圆底烧瓶中，加入125ml无水乙醇中，超声溶解，再加入1g癸酸钠和1.5gPVP K30，超声溶解。然后在40℃减压条件下旋转蒸发除去溶剂，置于恒温干燥器中，50℃干燥过夜。次日取出，粉碎过200目筛，即得黄癸固体分散体。

实施例9

将黄连素1g，癸酸钠2g，PEG60006g研磨充分混合均匀，置于高压反应釜中，调节反应釜温度为50℃，通入超临界CO₂，调节反应釜压力为20KPa，静置24小时后，减压即得黄癸固体分散体。

实施例1-9中黄癸固体分散体处方组成，是采用正交试验设计产生的，以载体材料的选择和黄连素、癸酸钠在反应体系中比例为三个影响因素，每个因素选取三个水平来优化制剂处方（如表1所示）。表中黄连素与癸酸钠重量比1:0.5，1:1，1:2为最优比，黄连素与载体材料重量比1:1，1:3，1:6为最优比，最优载体材料选择应用广泛、水溶性极好、价格低廉的PEG6000，PVP K30，POLOXAMER188。

表1黄癸固体分散体正交试验设计表

由上表即可产生9种不同处方成分的黄癸固体分散体，其具体处方结果如表2所示。

表2黄癸固体分散体组成成分表

实验号	A（黄连素与癸酸钠比例）	B（黄连素与载体比例）	C（载体材料）
				实施例1	1:0.5	1:1	PVP K30

实施例2	1:0.5	1:3	PEG6000
				实施例3	1:0.5	1:6	POLOXAMER188
实施例4	1:1	1:1	PEG6000
				实施例5	1:1	1:3	POLOXAMER188
实施例6	1:1	1:6	PVP K30
				实施例7	1:2	1:1	POLOXAMER188
实施例8	1:2	1:3	PVP K30
				实施例9	1:2	1:6	PEG6000

针对实施例1-9中制备的黄癸固体分散体的质量控制，本发明主要采用差示扫描量热曲线分析和X-射线衍射分析两种方法进行了研究。

DSC分析结果显示，固体分散体中已无明显的黄连素晶体特征吸收峰（见图1）；XRD测定结果显示，黄连素晶体特征衍射峰显著下降（见图2），以上两个结果表明，黄连素在实施例1-9制备的黄癸固体分散体中主要是以无定形状态存在，达到很高的分散状态，这非常有利于药物的溶出。

实验方法：

①差示扫描量热曲线分析

条件：样品量，5mg；扫描范围，20-160℃；升温速率，10℃·min^-1；扫描环境，N₂气氛。

②X-射线衍射分析

条件为：Cu/石墨靶单色器；管流，20mA；高压强度，40kV；扫描范围，2°-10°；步长，0.04°；扫描速率，2θ角0.04°·s^-1。

针对实施例1-9中制备的黄癸固体分散体的药剂学表征，本发明主要从以下两个方面进行了研究。

1)表观溶解度

本发明实施例1-9制备的黄癸固体分散体中黄连素的表观溶解度进行了测定，结果如图3所示，黄连素在与癸酸钠混合制备成固体分散体后，其表观溶解度显著增加，最高可增加5-6倍。表明黄连素在载体中充分分散，晶型发生改变，达到纳米级别的无定形状态，使得黄连素的比较面积增大，亲水系数增加，最终使黄连素的溶解度显著增加。此外，促吸收剂癸酸钠同时也是一种表面活性剂，也能一定程度上增加黄连素水中溶解度。

实验方法：

将20mg的过量样品（黄连素原料药、市售黄连素片、黄癸固体分散体）置于10mL具塞离心管中，加去离子水至刻度，超声分散1min，恒温摇床振摇48h后，混悬液15000×g离心10min，上清液稀释后，于263nm处测定吸收度，计算各样品中黄连素的表观溶解度。振摇条件：温度为25℃；振摇频率为50次·min^-1。

2)体外溶出度实验

实施例1-9中根据正交试验设计制备的9个样品的黄癸固体分散体在体外溶出情况良好，较原料药及市售黄连素片剂有明显改善。按体外溶出度测定方法操作，分别测定黄连素原料药，市售黄连素片和1-9号样品的体外溶出度，溶出曲线见图4。由图可见，与黄连素原料药及市售黄连素片相比，所制备的黄癸固体分散体均提高了黄连素的溶出度。溶出速率测定结果表明：所制备的9个黄癸固体分散体提高了黄连素的溶出速率，9个固体分散体在60min内的累积溶出百分率达到53.33%～82.03%，而黄连素原料药和市售黄连素片的累积溶出百分率仅为22.05%和17.23%，表明黄癸固体分散体由于黄连素存在的晶型发生了改变以及载体的作用可以显著改善溶出效果。

本发明中采用L9(3³)表安排正交试验筛选固体分散体最优处方，对实施例中每次实验制得的固体分散体进行体外溶出度试验，以60min药物的累积释放百分率（P60）为指标进行分析，以确定各因素的最佳水平。由表3可见，依据K值大小，找出各因素的最佳水平为A3B3C2，由Rj大小可见各因素对其溶出度的影响大小以此为A>C>B。

表3固体分散体制备工艺研究正交试验结果表

实验号	A（黄连素与癸酸钠比例）	B（黄连素与载体比例）	C（载体材料）	P60%
					实施例1	1:0.5	1:1	PVP K30	54.20
实施例2	1:0.5	1:3	PEG6000	60.20
					实施例3	1:0.5	1:6	POLOXAMER188	69.83
实施例4	1:1	1:1	PEG6000	63.60
					实施例5	1:1	1:3	POLOXAMER188	58.49
实施例6	1:1	1:6	PVP K30	53.33
					实施例7	1:2	1:1	POLOXAMER188	75.56
实施例8	1:2	1:3	PVP K30	79.20

实施例9	1:2	1:6	PEG6000	82.03
					K1	57.74	64.45	62.24
K2	58.47	65.96	71.61
					K3	78.93	68.39	61.29
Rj	12.03	3.61	5.70

实验方法：

精密称定黄连素、市售黄连素片及相当于黄连素100mg的黄癸固体分散体样品置溶出杯中，于3、5、10、20、30、60、120min取样5mL（同时补入同温溶出介质5mL），0.45μm微孔滤膜过滤后，高效液相色谱法测定溶出液中药物含量，并计算累积溶出百分率。溶出条件，中国药典2005年版二部小杯法；溶出介质为人工肠液(pH7.4)900mL；温度为(37±0.5)℃；转速为50r·min^-1。

针对实施例1-9中制备的黄癸固体分散体的药物吸收动力学，本发明选择实施例1-9制备的黄癸固体分散体中120min累积溶出度百分率最高的实施例9制备的产品从以下两个方面进行了研究。

1)在体肠循环实验

在体肠循环实验结果显示（见图5），实施例9黄癸固体分散体产品能显著增加黄连素在小肠的吸收，增加黄连素的血药浓度，其药物吸收量显著多于黄连素纯品及市售黄连素片。

实验方法：

雄性Wistar大鼠24只，随机分为3组：黄连素原料药组、实施例9黄癸固体分散体组、市售黄连素片组。将大鼠禁食16h后麻醉、固定。沿腹中线打开腹腔，结扎胆总管，在十二指肠上端和回肠下端各剪开一个小口，两开口端插管并结扎，插管与恒流泵连接形成回路。37℃恒温供试药液100ml以5ml/min的速度循环10min，继之以1ml/min的速度循环，计时开始。供试液为含酚红56μmol/L和受试药物的PBS缓冲液。于循环0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0h取回流液1.5ml，同时补充等量酚红溶液。高效液相色谱法测定各时间点回流液中酚红和黄连素在肠循环液中浓度。

2)生物利用度实验

本发明中主要观察黄连素原料药、市售黄连素片和实施例9黄癸固体分散体口服给药后大鼠的生物利用度，结果如表4所示，实施例9黄癸固体分散体产品较黄连素原料药，市售黄连素相比，其释放的黄连素最大血药浓度Cmax、药时曲线下面积AUC均有显著提高，达到最大血药浓度Cmax所用时间Tmax明显减少，提示黄连素与癸酸钠制备成黄癸固体分散体可明显改善黄连素的口服生物利用度。

表4实施例9制备的黄癸固体分散体产品生物利用度

	黄连素纯品	市售黄连素片	实施例9
				AUC0-24h(ng ml-1h)	2467.326±196.4	2238.456±169.3	7968.168±237.9
Tmax(min)	45min	60min	30min
				Cmax(ngml-1)	673.86±35.42	599.63±53.23	2365.42±102.33

实验方法：

雄性Wistar大鼠18只，随机平均分为3组，实验前禁食12h,分别给予实施例9黄癸固体分散体、市售黄连素片以及黄连素原料药灌胃。于给药后0.5,1,2,3,5,7,12,24h从眼眶后静脉丛取血，置抗凝管中，在冰箱冷冻保存。高效液相法测定药物浓度，计算各项吸收动力学参数。

针对实施例9中制备的黄癸固体分散体的药效学研究如下：

本发明进一步对实施例9制备的黄癸固体分散体的药效学进行了研究，如图6结果显示，与黄连素纯品和市售黄连素片相比，实施例9黄癸固体分散体具有显著地降血糖作用，提示黄连素只有与癸酸钠联用制成黄癸固体分散体才能发挥其显著的降血糖作用，且与二甲双胍及格列苯脲相比结果可以看出，黄癸固体分散体具有优于其二者的降血糖作用，提示黄癸固体分散体具有很好的开发前景。

实验方法：

高脂饲料喂养Wistar大鼠4周，按30mg/kg体重两次腹腔内注射STZ后，继续高脂饲料喂养4周，诱导2型糖尿病大鼠模型。本实验室已成功建立高脂膳食结合小剂量STZ诱导糖尿病大鼠模型，并发表SCI论文1篇。模型建立成功后，给予黄癸固体分散体治疗。大鼠分成7组：①对照组(CON)，②糖尿病大鼠（DM）组，③DM+黄连素纯品组，④DM＋市售黄连素片剂组，⑤DM＋实施例9黄癸固体分散体组，⑥DM+二甲双胍组（阳性对照组）⑦DM+格列苯脲组（阳性对照组）。灌胃给药时间为4周。

本发明中制备的黄癸固体分散体针对糖尿病并发症的应用，我们观察了宏观的药效学指标。研究结果十分详尽，但在本专利中只呈现主要的药效学相关数据，黄癸固体分散体治疗糖尿病视网膜病，脑病相关数据也未列出。

本发明中实施的黄癸固体分散体对各糖尿病并发症的治疗作用，采用相同的糖尿病造模方法，但可造成多种不同的并发症。由各个系统和器官所表现的不同的疾病指标，来反映相应的糖尿病并发症的发生，以及黄癸固体分散体的疗效。本发明采用高脂联合小剂量链脲佐菌素诱导2型糖尿病模型，成模后继续高脂饮食6个月，制备糖尿病并发症模型。结果显示，糖尿病并发症模型组大鼠病症明显。实施例9制备的黄癸固体分散体的药物治疗在第3个月开始实施，持续3个月，连续经口给药治疗（灌胃），给药剂量为25，50，100mg/Kg。阳性药采用二甲双胍500mg/Kg灌胃3个月作为对比。

研究结果主要有以下几个方面：

1)黄癸固体分散体治疗糖尿病心肌病

黄癸固体分散体对糖尿病心肌病的实施及疗效。糖尿病心肌病的发病率很高。本发明中对糖尿病心肌病大鼠进行了心脏彩超及心肌组织形态学研究。心脏超声结果显示，模型组心肌肥大，心功能减弱，出现了明显的舒张功能障碍，易于导致心力衰竭，给予实施例9黄癸固体分散体扭转了大鼠心功能障碍，心脏舒张功能明显改善（如图7所示）。心肌组织形态学观察HE染色结果如图8所示，模型组心肌损害，出现心肌细胞凋亡，且有明显的心肌纤维化。给药组相关指标得到了明显改善。

实验方法：

大鼠通过高脂饮食联合小剂量STZ（30mg/Kg）诱导2型糖尿病，筛选血糖在7～15mmol/L的模型大鼠继续高脂饮食喂养，此过程持续6个月。经糖尿病模型建立3个月后，初期糖尿病心肌病已经出现。模型组病情进一步发展。给药组在后3个月的灌胃给药治疗，分别给予实施例9黄癸固体分散体25、50、100mg/Kg。采用心脏彩超观察糖尿病心肌病大鼠的心功能指标，主要观察直接反应心脏舒张功能的E/A峰，HE染色观察各组大鼠心肌组织形态学改变。图7中显示，模型组大鼠E/A峰倒置，表明模型组大鼠心脏舒张功能损伤严重，给予实施例9黄癸固体分散体可改善大鼠心脏舒张功能，100mg/Kg给药组大鼠E/A峰恢复至正常与对照组大鼠相当。同时，由各组心肌组织形态学HE染色观察可得（见图8），模型组心肌纤维排列紊乱，且出现心肌纤维化，给药组对心肌有明显的保护作用。

2)黄癸固体分散体治疗糖尿病大血管病变

黄癸固体分散体对糖尿病大血管病变的实施及疗效。糖尿病血管病变体现是血管内皮细胞NO减少导致的内皮功能障碍，进一步发展为血管舒张功能降低。如图9～10显示，给药组大鼠相比模型组而言，NO含量明显增加，血管舒张功能得以显著改善。

实验方法：

大鼠通过高脂饮食联合小剂量STZ（30mg/Kg）诱导2型糖尿病，筛选血糖在7～15mmol/L的模型大鼠继续高脂饮食喂养，此过程持续6个月。经糖尿病模型建立3个月后，初期糖尿病大血管病变已经出现。模型组病情进一步发展。给药组在后3个月的灌胃给药治疗，分别给予实施例9黄癸固体分散体25、50、100mg/Kg。本实验中检测了大鼠血清中NO含量及实施例9黄癸固体分散体对各组大鼠胸主动脉乙酰胆碱（ACh）诱导内皮依赖性舒张反应的影响。图9中结果显示，黄癸固体分散体产品可显著增加模型大鼠血清中NO含量。而且黄癸固体分散体产品对ACh引起的大鼠胸主动脉收缩有显著的舒张作用，结果如图10所示。以上结果均显示，黄癸固体分散体对糖尿病大鼠大血管病变有较强的治疗作用，可以显著改善糖尿病大鼠血管的舒张功能。

3)黄癸固体分散体治疗糖尿病肾病

黄癸固体分散体对糖尿病肾病的实施及疗效。糖尿病肾病主要表现是血中肌酐和尿素氮明显增加，尿液中总蛋白和白蛋白增多。本发明结果显示，给药组治疗3个月后，血中尿液中相关指标相对于模型组而言显著降低（见图11～14）。

实验方法：

大鼠通过高脂饮食联合小剂量STZ（30mg/Kg）诱导2型糖尿病，筛选血糖在7～15mmol/L的模型大鼠继续高脂饮食喂养，此过程持续6个月。经糖尿病模型建立3个月后，初期糖尿病肾病已经出现。模型组病情进一步发展。给药组在后3个月的灌胃给药治疗，分别给予实施例9黄癸固体分散体25、50、100mg/Kg。本实验中检测了大鼠血清中肌酐及尿素氮含量，同时检测了24小时内各组大鼠尿液中的总蛋白和白蛋白排出量。图11～14结果显示，糖尿病肾病模型组大鼠血清中肌酐和尿素氮含量较对照组显著升高，黄癸固体分散体产品灌胃治疗可显著降低二者血中浓度，并呈现一定剂量依赖性。24小时内尿液中总蛋白及白蛋白排出量来看，黄癸固体分散体产品可减少二者的排除，对肾脏起到很好的保护作用。综上结果可以得出以下结论，黄癸固体分散体对糖尿病肾病有很好的治疗效果。

针对实施例1-9中制备的黄癸固体分散体的最终剂型，主要是以下几种：

1)片剂

实施例1-9中制备的黄癸固体分散体80Kg与适量微晶纤维素、预胶化淀粉、甘露醇、十二烷基硫酸钠和柠檬酸等辅料均匀混合，加入润滑剂以片剂常规制备方法制备黄癸固体分散体片剂。

2)胶囊剂

实施例1-9中制备的黄癸固体分散体80Kg与适量微晶纤维素、HPMC、硬脂酸镁以及海藻酸钠混合均匀后，以胶囊剂常规制备方法制备黄癸固体分散体胶囊剂。

3)滴丸剂

实施例1-9中制备的黄癸固体分散体80Kg与适量预胶化淀粉、乳糖、糊精、微晶纤维素和硬脂酸镁充分混合，以滴丸剂常规制备方法制备黄癸固体分散体滴丸剂。

Claims (9)

1.一种黄癸固体分散体，其特征在于：该黄癸固体分散体是由下述重量份数配比的原料制成：

黄连素1份、载体材料1～12份、癸酸钠0.1～2份；

其中，所述的载体材料是PEG4000，PEG6000，PVP K30，HPMC K4M或POLOXAMER188；

制备方法是：将黄连素、癸酸钠及固体分散体载体材料充分混合于球磨机中研磨，研磨时间为60分钟，后干燥粉碎过筛即得。

2.一种黄癸固体分散体，其特征在于：该黄癸固体分散体是由下述重量份数配比的原料制成：

黄连素1份、载体材料1～12份、癸酸钠0.1～2份；

其中，所述的载体材料是PEG4000，PEG6000，PVP K30，HPMC K4M或POLOXAMER188；

制备方法是：将黄连素、癸酸钠及载体材料溶于有机溶剂中，超声使各组分充分分散混匀，将所得溶液喷雾干燥即得；所述有机溶剂是乙醇，氯仿，四氢呋喃，二氯甲烷，1,4-二氧六环，丙酮或其混合物。

3.根据权利要求2所述的一种黄癸固体分散体，其特征在于：所述有机溶剂是乙醇。

4.一种黄癸固体分散体，其特征在于：该黄癸固体分散体是由下述重量份数配比的原料制成：

黄连素1份、载体材料1～12份、癸酸钠0.1～2份；

其中，所述的载体材料是PEG4000，PEG6000，PVP K30，HPMC K4M或POLOXAMER188；

制备方法是：将黄连素溶于有机溶剂中，再加入载体材料，使载体材料完全溶解，加入促吸收剂癸酸钠，然后在减压条件下旋转蒸发除去溶剂，加热干燥，粉碎过筛即得；所述有机溶剂是乙醇，氯仿，四氢呋喃，二氯甲烷，1,4-二氧六环，丙酮的至少一种或其任意两种的混合溶剂。

5.根据权利要求4所述的一种黄癸固体分散体，其特征在于：所述有机溶剂是乙醇。

6.一种黄癸固体分散体，其特征在于：该黄癸固体分散体是由下述重量份数配比的原料制成：

黄连素1份、载体材料1～12份、癸酸钠0.1～2份；

其中，所述的载体材料是PEG4000，PEG6000，PVP K30，HPMC K4M或POLOXAMER188；

制备方法是：将黄连素、癸酸钠及载体材料充分混匀置于高压反应釜中，通入超临界流体，调整反应釜温度及压力在超临界流体临界点之上，静置24小时，减压即得，所述超临界流体是超临界CO₂或超临界甲醇。

7.根据权利要求6所述的一种黄癸固体分散体，其特征在于，所述超临界流体是超临界CO₂。

8.由权利要求1、2、3或4所述的一种黄癸固体分散体制备的药物，其特征在于：所述的黄癸固体分散体与稀释剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂中的一种或几种混合制备成各种剂型的药物，所述药物的剂型包括胶囊、片剂和滴丸剂。

9.权利要求1、2、3或4所述的黄癸固体分散体在制备治疗或预防糖尿病及其并发症疾病的药物中的应用。