CN104058862A

CN104058862A - 一种添加了八角的灵芝代料栽培培养基

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Publication number: CN104058862A
Application number: CN201410311129.4A
Authority: CN
Inventors: 王运凤
Original assignee: Luxuriant Source Guilin Agrotechnique Development Corp Ltd
Current assignee: Luxuriant Source Guilin Agrotechnique Development Corp Ltd
Priority date: 2014-06-30
Filing date: 2014-06-30
Publication date: 2014-09-24
Anticipated expiration: 2034-06-30
Also published as: CN104058862B

Abstract

本发明公开了一种添加了八角的灵芝代料栽培培养基，由下述重量份的原料制成：木屑35-70份、辅料25-60份、石膏0.5-1.5份、糖0.1-1份、八角1-5份，料水比为1：1.3-1.5。采用本发明的灵芝代料栽培培养基，培养出来的灵芝具有更好的增强免疫力的功能。

Description

一种添加了八角的灵芝代料栽培培养基

技术领域

本发明涉及食用菌栽培领域，尤其涉及一种添加了八角的灵芝代料栽培培养基。

背景技术

灵芝(学名：Ganoderma Lucidum Karst)，又称灵芝草、仙草，别称赤芝、红芝、木灵芝、菌灵芝、万年蕈、灵芝草，是多孔菌科植物赤芝或紫芝的全株，为多孔菌科真菌灵芝的子实体。外形呈伞状，菌盖肾形、半圆形或近圆形。灵芝作为拥有数千年药用历史的中国传统珍贵药材，具有补气安神，止咳平喘的功效，用于眩晕不眠，心悸气短，虚劳咳喘。灵芝具备很高的药用价值，经过科研机构数十年的现代药理学研究证实，灵芝对于增强人体免疫力，调节血糖，控制血压，辅助肿瘤放化疗，保肝护肝，促进睡眠等方面均具有显著疗效。灵芝多糖是灵芝药用功能的主要有效成分之一，主要存在于灵芝细胞壁内壁，大部分为β-葡聚糖，其单糖组成除含有大量葡萄糖外，还含有少量阿拉伯糖、木糖、岩藻糖，鼠李糖，半乳糖和甘露糖等，它们大多以(1-3)、(1-4)和(1-6)等糖苷键连接，具有广泛的生物活性，如增强免疫力、清除人体自由基、保护心血管、抗辐射、保护肝脏、抗肿瘤等作用。三萜类也是灵芝的有效成分之一，灵芝所含三萜类不下百余种，其中以四环三萜类为主，灵芝的苦味与所含三萜类有关，对人体肝癌细胞具有细胞毒作用，也能抑制组织胺的释放，具有保肝和抗过敏等作用。

由于自然生长的灵芝少，且含有大量的粗纤维及其它杂质，而灵芝多糖含量不高(通常为2-5％)，不便于直接作为保健食品或药品原料，因此，许多科学工作者开展灵芝的人工培养及栽培技术研究。目前，灵芝的人工代(瓶)料栽培、发酵生产等技术相继取得成功，其中，发酵生产对设备要求高，投资大，不利于广泛推广应用；人工栽培灵芝在我国由来已久，从椴木栽培到代料栽培技术的发展，促进了灵芝大范围人工栽培。如中国专利CN103724115A，公开了一种灵芝袋栽菌包，主要采用以下原料按重量百分比配制而成：桑木屑75-80％、棉籽壳10-16％、麦麸3-5％、石膏粉0.8-1.2％、含水量55-65％,pH值6.5-7.5，装袋。灵芝生长所需要的营养物质与其它食用菌从总体上来说大体一致，如碳素营养、氮素营养、维生素及矿物质等，在灵芝代料栽培培养培养基的配比中，传统主料有棉籽壳、杂木屑、农作物秸秆等，辅料有麦麸、木糠、玉米粉等，另有石膏、过磷酸钙、白糖等添加料。人工代料栽培主要以木屑、棉籽壳、蔗渣、作物秸秆等农林下脚料及废渣废料作栽培原料，操作简便，投资少，易于普遍推广应用，但废渣废料成分复杂，有的可能含有有害成分，对灵芝产品品质控制不利。因此寻找新型的代料栽培培养基是灵芝栽培产业化的关键。

八角,又名八角茴香，为木兰科植物八角茴香(Illicium verum Hook.f.)的干燥成熟果实。为乔木，高10-15米；树冠塔形，椭圆形或圆锥形；树皮深灰色；枝密集。主产于广西西部和南部。八角茴香的果实主治寒疝腹痛、腰膝冷痛、胃寒呕吐、脘腹疼痛、寒湿脚气等。将八角应用在灵芝的代料栽培培养基中具有广阔的市场前景和经济价值。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种成本低廉、效果明显的添加了八角的灵芝代料栽培培养基。

本发明是通过如下技术方案来实现的：

一种添加了八角的灵芝代料栽培培养基，由下述重量份的原料制成：木屑35-70份、辅料25-60份、石膏0.5-1.5份、糖0.1-1份、八角1-5份，料水比为1：1.3-1.5。

优选的，由下述重量份的原料制成：木屑42份、辅料53份、石膏1份、糖1份、八角3份，料水比为1：1.3-1.5。

所述的灵芝包括优选鹿角灵芝、平盖灵芝。

所述的木屑优选来源枫木和椎木。

所述的辅料为棉籽壳、麦麸、玉米粉中的一种或几种组成，当混合使用时，可以是任意比例。

所述的八角为新鲜或干制后的八角、或者生产中成药或调料后获得的残渣、或者经过提取八角活性成分后得到的八角残渣。

所述的提取八角活性成分工艺包括提取、分离、纯化等工艺。

一种添加了八角的灵芝代料栽培培养基的制备方法，包括如下步骤：

(1)木屑前期加工：将砍伐后树木的主干及枝条去皮后粉碎至粒径为0.5-1.0cm，晒干备用；

(2)配料：按照培养基的配方进行配料；

(3)拌料：首先将木屑、辅料、石膏、糖、八角混匀形成干料，然后加水充分拌匀形成培养基基质，加水量以手抓紧握指缝见水但不形成水珠即可，料水比1:1.3-1.5；

(4)装袋：拌料结束后，堆料1-2小时，使水分被培养基基质充分吸收，即可装袋。

优选17X35X0.05规格聚丙烯塑料出菇袋，装料约400克，装料不宜太满，料包两头扎口，袋口注意清洁，防止后期杂菌污染；

(5)灭菌：将料包放入灭菌设备，高压蒸汽(121℃)灭菌1.5-2小时，或常压(100℃)灭菌10-12小时，灭菌结束后将料包移入冷却室，待温度降至30℃以下，即可接种。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

1、八角，有一定的抑菌作用，八角水煎剂对人型结核杆菌及枯草杆菌有抑菌作用；八角乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、枯草杆菌、霍乱弧菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、痢疾杆菌、大肠杆菌及常见致病菌均有较强的抑制作用，八角醇提取物在体外对革兰氏阳性细菌(金黄色葡萄球菌。肺炎球菌、白喉杆菌等)的抑茵作用与青霉素钾盐20单位/ml相似；对革兰氏阴性细菌(枯草杆菌、大肠杆菌、霍乱弧茵及伤寒、副伤寒、痢疾杆菌等)之抑菌作用与硫酸链霉素50单位/ml相似；对真菌之抑菌作用大于1％的苯甲酸及水杨酸。而且八角得栽培以土层深厚、疏松、腐殖质含量丰富的壤土或砂质壤土，这样的条件正是杂菌适宜的环境，本发明通过在灵芝代料栽培培养基加入八角，可以充分发挥八角的抑菌功能，减少培养基被杂菌污染的危害。

2、灵芝在传统中就是作为增强免疫力的中药在使用，而本发明通过在灵芝代料栽培培养基加入八角，通过研究发现,相比现有的灵芝代料栽培培养基,栽培出来的灵芝具有更加好的增强免疫力的效果。

3、八角是广西的道地药材，一般都是通过提取获取活性成分，或者在中成药、调料的制备中应用，实际生产中，一个生产工艺只是针对八角中的一个或几个成分，而其他的成分并没用充分利用，八角的使用量巨大，工业上作为生产的残渣、或者经过提取八角活性成分后得到的八角残渣一般都是作为废弃物放弃，本发明可充分利用八角使用后的废弃物，变废为宝，增加了八角的附加值。

具体实施方式

下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。

实施例1：

一种添加了八角的平盖灵芝代料栽培培养基，由下述原料制成：枫木木屑35kg、棉籽壳60kg、石膏0.5kg、糖0.1kg、生产中成药后获得的八角残渣5kg，料水比为1：1.3。

灵芝代料栽培培养基的制备方法，包括如下步骤：

(2)配料：按照培养基的配方进行配料；

(3)拌料：首先将木屑、辅料、石膏、糖、八角残渣混匀形成干料，然后加水充分拌匀形成培养基基质，加水量以手抓紧握指缝见水但不形成水珠即可；

选用17X35X0.05规格聚丙烯塑料出菇袋，装料约400克，装料不宜太满，料包两头扎口，袋口注意清洁，防止后期杂菌污染；

(5)灭菌：将料包放入灭菌设备，高压蒸汽(121℃)灭菌1.5-2小时，灭菌结束后将料包移入冷却室，待温度降至30℃以下，即可接种。

实施例2：

一种添加了八角的平盖灵芝代料栽培培养基，由下述原料制成：椎木木屑70kg、棉籽壳10kg、玉米粉15kg、石膏1.5kg、糖1kg、经过提取八角活性成分后得到的八角残渣1kg，料水比为1：1.5。

灵芝代料栽培培养基的制备方法，包括如下步骤：

(2)配料：按照培养基的配方进行配料；

(5)灭菌：将料包放入灭菌设备，常压(100℃)灭菌10-12小时，灭菌结束后将料包移入冷却室，待温度降至30℃以下，即可接种。

实施例3：

一种添加了八角的鹿角灵芝代料栽培培养基，由下述原料制成：枫木木屑42kg、麦麸53kg、石膏1kg、糖1kg、新鲜的八角3kg，料水比为1：1.4。

灵芝代料栽培培养基的制备方法，包括如下步骤：

(2)配料：按照培养基的配方进行配料；

实施例4：

一种添加了八角的鹿角灵芝代料栽培培养基，由下述原料制成：椎木木屑40kg、麦麸55kg、石膏1kg、糖0.8kg、干制后的八角3.2kg，料水比为1：1.3。

灵芝代料栽培培养基的制备方法，包括如下步骤：

(2)配料：按照培养基的配方进行配料；

对比例

一种鹿角灵芝代料栽培培养基，由下述原料制成：杨树木屑42kg、麦麸56kg、石膏1kg、糖1kg，料水比为1：1.4。

灵芝代料栽培培养基的制备方法，包括如下步骤：

(2)配料：按照培养基的配方进行配料；

(3)拌料：首先将木屑、辅料、石膏、糖混匀形成干料，然后加水充分拌匀形成培养基基质，加水量以手抓紧握指缝见水但不形成水珠即可；

实验例：通过本发明得到的灵芝对增强免疫力的实验

1、分别将实施例4和对比例得到的灵芝，通过相同的制备方法得到的灵芝提取物，灌装胶囊，作为实验组和对照组。

用量：实施例4得到的胶囊，0.5g/粒，内容物为灰色粉末，密封，置阴凉、干燥处保存。人口服推荐量为每日2次，每次2粒，成人体重按60kg计算，折合剂量0.0333g/kg·bw。取胶囊内容物进行试验。

2、实验动物与分组：清洁级昆明种雌性小鼠120只，体重为18g～22g,由桂林医学院动物实验中心提供。每40只分为1组，共三组。免疫I组，进行碳廓清实验；免疫II组，进行脏体比值测定、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、迟发型变态反应实验、半数溶血值(HC₅₀)的测定和抗体生成细胞数的测定；免疫III组，进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、NK细胞的活性测定。

3、实验时剂量选择及处理：据人体口服推荐量，设本发明得到胶囊的低、中、高剂量分别为0.167g/kg·bw、0.333g/kg·bw、0.999g/kg·bw(分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍)。分别取实施例4得到的胶囊内容物1.67g、3.33g、9.99g加蒸馏水配至200ml，对照组给与对比例得到的胶囊内容物，分别给予受试动物灌胃，每天灌胃一次，灌胃体积为0.2ml/10g·bw，连续30天。

4、实验方法：

(1)脏器/体重比值测定：称重后处死小鼠，取出脾脏和胸腺，在电子分析天平上称重，计算脏/体比值。

(2)迟发型变态反应(DTH)(足跖增厚法)：小鼠腹腔注射线2％(v/v)SRBC(0.2ml/每鼠)致敏后4天，测量左后足跖厚度，然后在测量部位皮下注射20％(v/v)SRBC(20ul/每鼠)，于注射后24h测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值。以攻击前后足跖厚度差值(足跖肿胀度)来表示DTH的程度。

(3)ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(MTT法)：无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，制成细胞悬液，经200目筛网过滤。用Hank’s液洗2次，每次离心10分钟(1000r/min)。然后将细胞悬浮于lmL完全培养液中，计数活细胞数，用RPMI1640培养液调整细胞浓度为3X10⁶个/mL。再将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，在其中一孔加75μLConA液(相当于7.5μg/mL),另一孔作为对照，置5％二氧化碳，37℃培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/mL)50μL/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中，每个孔作3个平行孔，用酶标仪，以570nm波长测定光密度值。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA也的光密度值表示。

(4)抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)：取羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心(2000r/min)10min,将压积SRBC用生理盐水配成2％(v/v)的细胞悬液，每鼠腹腔注射0.2ml。将免疫后4天的小鼠处死，取脾，轻轻撕碎，用Hanks液制成细胞悬液，200目筛网过滤，洗涤、离心2次，最后将细胞悬浮在5mlHanks液中。将表层培养基加热溶解后与等量的PH7.4、2倍浓度的Hanks液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加入用SA液配制的10％SRBC50ul(v/v)、20ul脾细胞悬液，迅速混匀后倾倒于已刷薄层琼脂糖的玻片上，待琼脂糖凝固后将玻片平扣放在玻片架上，放入二氧化碳培养箱中温育1.5h，将用SA液稀释的补体(1：10)加入到玻片凹槽内继续温育1.5h后计数溶血空斑数。

(5)半数溶血值(HC₅₀)的测定：取羊血，用生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2％(v/v，用生理盐水配制)压积RBC0.2mL进行免疫。5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1h，将凝固血与管壁剥离，使用权血清充分析出，2000rpm离心10min，收集血清。用SA缓冲液将血清稀释为200倍，取1mL置试管内，依次加入10％(v/v,用SA缓冲液配制)压积SRBC0.5Ml，补体1mL(用SA缓冲液按1：10稀释)。另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37℃恒温水浴中保温30min后，冰浴终止反应。2000rpm离心10min，取上清1mL，加都氏试剂3mL。同时取10％(v/v，用SA缓冲液配制)压积SRBC0.25mL，加都氏试剂到4mL于另量试管中，充分混匀，放置10min后，于540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。溶血素的量以半数溶血值(HC₅₀)表示，按下式计算：

半数溶血值(HC₅₀)＝样品光密度值/SRBC半数溶血时的光密度值×稀释倍数

(6)小鼠碳廓清实验：小鼠尾静脉注射以生理盐水稀释4倍的印度墨汁，每10g体重注射0.1mL，墨汁注入后立即计时，于注入墨汁后第2、10min，分别从内眦静脉丛取血20ul，加入到2mlNa₂CO₃溶液作空白对照，用722型分光光度计在600nm波长处比色测光密度值(OD)。将小鼠处死，取肝、脾、称重，计算吞噬指数a。

(7)小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)：小鼠腹腔注射20％(v/v,用生理盐水配制)的压积鸡红细胞(2000rpm，10min)悬液1mL，间隔30min，颈椎脱臼处死，取腹腔巨噬细胞洗液1mL，滴于载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，置37℃孵箱温育30min。孵毕，于生理盐水中漂洗以除去未贴片细胞。晾干，以甲醇：丙酮(1：1)固定，4％(v/v)Giemsa-磷酸缓冲液染色，用蒸馏水漂洗晾干。油镜下每片计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数：

吞噬率％＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100

吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数

(8)NK细胞流行性的测定(同位素³H—TdR测定法)：取传代后24h生长良好的YAC—1细胞(存活率>95％)按1×10⁶/mL YAC—1细胞悬液加³H—TdR10μCi进行标记，于37℃，5％二氧化碳培养箱中培养2h，每30min振荡1次，标记后的细胞用培养液洗涤3次，重悬于培养液中，使细胞浓度为1×10⁵个/mL。受试小鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾，制成脾细胞悬液，用Hank’s液洗3次，每次1000rpm离心10min，再用2mL含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液悬浮，用台酚兰染色计数(活细胞数应在95％以上)，调整细胞浓度为1×10⁷个/mL。在96孔板中每孔加100μLtriton X-100。每个榈设3个复孔，置5％二氧化碳，37℃培养4h。用多头细胞取集器取集于玻璃纤维滤纸上，用液闪仪测定每分钟脉冲数(cpm)。

NK细胞活性＝(1-实验孔cpm/(空白对照孔cpm—最大释放孔cpm))×100％

5、实验结果：

(1)本发明实施例4得到的胶囊内容物对小鼠体重的影响，见表1、2、3：

表1 本发明实施例4得到胶囊增强免疫力功能实验(I)组小鼠(雌)体重

表2 本发明实施例4得到胶囊增强免疫力功能实验(II)组小鼠(雌)体重

表3 本发明实施例4得到胶囊增强免疫力功能实验(III)组小鼠(雌)体重

由表1-3可见，各剂量组实验初、实验中期、实验末小鼠体重及实验期间小鼠体重增长对照组比较，差异无显著性(P>0.05)

(2)本发明实施例4得到胶囊对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响，见表4：

表4 本发明实施例4得到胶囊对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响

由表4可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例4得到胶囊内容物30天，对小鼠脾脏/体重比值和胸腺/体重比值无显著影响(P>0.05)

(3)本发明实施例4得到胶囊对小鼠细胞免疫功能的影响，见表5、6：

A：本发明实施例4得到胶囊对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响，见表5：

表5 本发明实施例4得到胶囊对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响

由表5可知，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例4得到胶囊内容物30天，中、高剂量组足跖肿胀度明显高于对照组，差异具有显著性(P>0.05)。

B：本发明实施例4得到胶囊对小鼠ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力实验的影响，见表6：

表6 本发明实施例4得到胶囊对小鼠淋巴细胞转化能力实验的影响

由表6可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例4得到胶囊内容物30天，各剂量组小鼠淋巴细胞转化能力与对照组比较，差异无显著性(P>0.05)。

(4)本发明实施例4得到胶囊对体液免疫的影响，见表7、8：

A：本发明实施例4得到胶囊对小鼠抗体生成细胞数的影响，见表7：

表7 本发明实施例4得到胶囊对小鼠抗体生成细胞数的影响

由表7可知，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例4得到胶囊内容物30天，中、高剂量组小鼠抗体生成细胞数明显高于对照组，差异具有显著性(P<0.05或P<0.01)。

B：本发明实施例4得到胶囊对小鼠半数溶血值(HC₅₀)的影响，见表8：

表8 本发明实施例4得到胶囊对小鼠半数溶血值(HC50)的影响

由表8可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例4得到胶囊内容物30天，高剂量组小鼠半数溶血值与照组比较，差异有显著性(P<0.01)

(5)本发明实施例4得到胶囊对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响，见表9、10、11：

A：本发明实施例4得到胶囊对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清的影响，见表9：

表9 本发明实施例4得到胶囊对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清的影响

由表9可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例4得到胶囊内容物30天，中、高剂量组小鼠吞噬指数显著高于对照组，差异有显著性(P<0.05)。

B：本发明实施例4得到胶囊对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响，见表10、11：

表10 本发明实施例4得到胶囊对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率的影响

表11 本发明实施例4得到胶囊对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数的影响

由表10-11可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例4得到胶囊内容物30天，各剂量组对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力未见明显影响。

(6)本发明实施例4得到胶囊对小鼠NK细胞活性的影响，见表12：

表12 本发明实施例4得到胶囊对小鼠NK细胞活性的影响

由表12可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例4得到胶囊内容物30天，各剂量组对小鼠NK细胞活性与对照组比较，差异无显著性(P>0.05)。

6、实验结论：

经口给予小鼠0.167g/kg·bw、0.333g/kg·bw、0.999g/kg·bw剂量的本发明实施例4得到胶囊内容物30天，0.333g/kg·bw、0.999g/kg·bw剂量能增强小鼠迟发型变态反应、提高小鼠的抗体生成细胞数，提高小鼠单核-巨噬细胞碳廓清的能力，0.999g/kg·bw剂量能提高小鼠血清半数溶血值。与对照组比较，P<0.05或P<0.01。对小鼠体重增长、脾脏/体重比值、胸腺/体重比值、ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力及小鼠NK细胞活性、小鼠巨噬细胞鸡红细胞的能力无明显影响。提示本发明实施例4得到的灵芝提取物相比对比例得到的灵芝提取物具有更加明显的增强免疫力的功能。

Claims

1.一种添加了八角的灵芝代料栽培培养基，其特征在于：由下述重量份的原料制成：木屑35-70份、辅料25-60份、石膏0.5-1.5份、糖0.1-1份、八角1-5份，料水比为1：1.3-1.5。

2.根据权利要求1所述的一种添加了八角的灵芝代料栽培培养基，其特征在于：由下述重量份的原料制成：木屑42份、辅料53份、石膏1份、糖1份、八角3份，料水比为1：1.3-1.5。

3.根据权利要求1或2所述的一种添加了八角的灵芝代料栽培培养基，其特征在于：所述的灵芝为鹿角灵芝、平盖灵芝。

4.根据权利要求1或2所述的一种添加了八角的灵芝代料栽培培养基，其特征在于：所述的木屑来源枫木和椎木。

5.根据权利要求1或2所述的一种添加了八角的灵芝代料栽培培养基，其特征在于：所述的辅料为棉籽壳、麦麸、玉米粉中的一种或几种组成，当混合使用时，可以是任意比例。

6.根据权利要求1或2所述的一种添加了八角的灵芝代料栽培培养基，其特征在于：所述的八角为新鲜或干制后的八角、或者生产中成药或调料后获得的残渣、或者经过提取八角活性成分后得到的八角残渣。