CN104043148B - 一种韧带支架及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种含丝素蛋白复合取向纳米纤维的韧带支架及其制备方法，属于医疗器械技术领域。所述韧带支架是以丝素蛋白复合医用高分子合成材料的取向纤维组成，具有多孔三维结构，复合取向纤维中丝素蛋白与医用高分子合成材料的质量比为1/20～1/1，复合取向纤维的直径为500nm-10000nm，韧带的厚度为1mm-10mm，韧带的宽度为1mm-15mm，韧带支架具有微结构均匀性、良好的生物相容性，提供了韧带细胞生长的基质结构，复合纤维的取向结构增强了在韧带的抗拉强度，本发明韧带支架制备方法简单、操作方便、对制备过程具有良好的可控性，适应于制备各种不同截面结构和长度的韧带支架。
Description
技术领域
本发明涉及一种含丝素蛋白复合取向纳米纤维的韧带支架及其制备方法，属于医疗器械技术领域。
背景技术
在日常工作及体育运动中，韧带损伤的几率相当高，直接导致关节连接不稳定及关节炎症的发生，已经成为不可忽视的健康问题，但是韧带的自我修复能力很差。已有的韧带修复方法多种多样，包括自身肌腱移植、同种或异种肌腱移植和人工韧带修复材料等。由于同种移植或异种移植都存在来源不足、风险大、免疫排斥反应等问题，在临床应用上受到较大的限制，因此以人工韧带的修复材料来替代损伤韧带成为主流的韧带修复治疗措施。人工韧带修复材料因其细胞、组织相容性、降解吸收以及力学性能等问题仍未被很好的解决，长期疗效有待提高。近年来组织工程的兴起和迅猛发展为损伤韧带的修复开辟了新的治疗途径。
组织工程学是基于材料学、工程学和生命科学共同发展并相互融合的产物，其中最基本的思路是在体外分离、培养细胞接种到具有一定空间结构的支架上，通过细胞之间的相互黏附、生长增殖、分泌细胞外基质，从而形成具有一定结构和功能的组织和器官。因此作为组织工程的韧带支架需要满足四个条件，适合细胞黏附生长的生物相容性、提供细胞生长的空隙结构、与新生组织相适应的降解特性、满足韧带支架的结构与力学性能。静电纺技术是制备组织工程支架的方法之一，相比其它的方法，此技术更加方便、简单、灵活，而且可以使用于大部分的聚合物。其制备的纤维膜具有比表面积大、孔隙率高、表面能和活性高的特点，非常适合细胞的黏附与生长。但静电纺纤维膜中纤维是杂乱无章的，拉伸强度较低。目前已有许多通过高速旋转的辊筒、高速旋转的轮及两平行金属板作为收集装置，获得取向排布的纤维膜或纤维束，在纤维取向方向上力学性能是提高了，但由于纤维取向孔隙大为减少，不利于细胞的黏附与生长，也限制了这些方法的应用。中国专利公开号CN102813965A，公开日2012年12月12日，发明创造的名称为一种多层有序的丝素蛋白组织工程支架及其制备方法，该申请案公开了一种多层有序的丝素蛋白组织工程支架及其制备方法，是通过在高速旋转辊筒上贴附导电铝箔，每静电纺一层后，取下铝箔旋转一定角度在贴附到旋转辊筒上，重新开始静电纺，以此形成相互夹角的多层，其不足之处是膜层之间黏附不可能很强，由于是取向膜，主要是膜层之间的孔隙，与牵伸方向夹角较大的膜层对牵伸强度贡献较小，整体牵伸强度较小，由于是通过底层铝箔纸导电接地，支架不能做到较厚，最大也只有160μm。至目前为止，还未有满足韧带支架、特别是前十字韧带支架对生物相容性、均匀空隙的三维结构及抗拉伸强度要求的组织工程支架及其制备方法的报道。
发明内容
针对上述存在的问题，本发明的目的是要解决现有韧带支架存在的缺陷，采用丝素蛋白复合医用高分子合成材料为材料，提供一种具有纤维取向及均匀空隙的、满足力学性能要求的三维结构韧带支架及其制备方法。
实现本发明的技术方案是：一种韧带支架及其制备方法，所述的韧带支架是以丝素蛋白复合医用高分子合成材料为材料，采用静电纺的方法制备的复合取向纤维组成的具有多孔的三维结构韧带，复合取向纤维中丝素蛋白与医用高分子合成材料的质量比为1/20～1/1，复合取向纤维的直径为500nm-10000nm，韧带的厚度为1mm-10mm，韧带的宽度为1mm-15mm。
韧带支架的制备，按以下步骤进行：
a取丝素蛋白溶液或丝素蛋白粉体分散液与医用高分子合成材料溶液混合，得到丝素蛋白与医用高分子合成材料的质量比为1/20～1/1，丝素蛋白与医用高分子合成材料的总溶质质量浓度为7％～15％的混合溶液，并将混合溶液吸入静电纺用的纺丝液管。
b搭建静电纺的装置，将与需要制备的韧带长度的1～3倍周长的收集轮固定在可调速的导电旋转体上，收集轮与导电旋转体在同一轴线上，收集轮为电绝缘材料，收集轮的厚度为1mm-15mm，收集轮的两边分别黏附导电的金属圆盘，金属圆盘的半径比收集轮的半径大1mm，金属圆盘与导电旋转体连接并接地。
c静电纺制备韧带支架，将吸有复合溶液的静电纺用纺丝液管置于静电纺推泵中，静电纺丝液推出速度0.2ml/小时～4ml/小时，收集轮的旋转速度为50转/min～1000转/min，静电纺的高压电源输出5kV～30kV的电压，纺丝液管的喷嘴与收集轮之间的距离为5cm～30cm，静电纺获得由直径为500nm-10000nm的复合取向纤维组成的厚度为0.5mm-1.5mm的非织造膜后，将收集轮两边的金属圆盘更换比原金属圆盘半径大1mm的金属圆盘，继续静电纺，以此更换收集轮两边的金属圆盘1～10次，获得厚度为1mm-10mm，宽度为1mm-15mm的静电纺非织造环。
d将步骤c获得的静电纺非织造环在质量百分比为0.5～2％的京尼平溶液的蒸汽或体积百分比为75％的乙醇蒸汽或质量百分比为25％的戊二醛溶液的蒸汽中熏蒸交联20～72小时，再经30℃、-0.1MPa的真空烘箱中脱附2～4天，得到韧带的厚度为1mm-10mm，韧带的宽度为1mm-15mm的韧带支架。
由于采用以上技术方案，本发明韧带支架可有效的消除现有组织工程韧带支架中大多满足细胞黏附生长的生物相容性、也有细胞生长的空隙结构、但支架主要成二维膜状，而少有三维的立体结构，同时也产生了现有韧带支架的抗拉强度的不足，及其抗拉强度的快速下降的特性。本发明的韧带支架制备方法，以素蛋白复合医用高分子合成材料为材料，结合可变半径的导电圆盘构成收集鼓，实现了由复合取向纤维组成具有多孔结构的三维立体的组织工程韧带支架。
本发明的静电纺的韧带支架的制备方法，由于采用可变半径的两导电圆盘及之间的电结缘性轮组成纤维收集轮，可以方便的通过改变两导电圆盘之间电结缘性轮的宽度来调整制备的韧带支架的宽度；同时，两导电圆盘之间的电结缘性轮支撑着静电纺的纤维，当两导电圆盘之间的纤维膜逐渐变厚时，静电纺过程中膜表面的纤维所带的电荷越易聚集，将影响静电纺过程的顺利进行，这时以逐步增大导电圆盘的半径来促使聚集电荷的释放，来保证静电纺的顺利进行，依次增大导电金属圆盘的直径，实现三维立体结构的静电纺；这种由静电纺纤维逐渐织造起来的三维立体结构，具有微结构均匀的特性，是区别于由多层膜复合而成的三维立体结构；在两导电圆盘及之间的电结缘性轮组成纤维收集轮中，两导电圆盘之间形成电容，使静电纺的纳米纤维在两导电圆盘之间取向排布，同时，收集轮的旋转又使纳米纤维在旋转方向取向排布，这两种力作用的结果就在两导电圆盘之间形成多孔的纤维取向结构带，这种纤维的取向结构增强了在取向方向上的抗拉强度；静电纺获得的三维支架再经后处理，就是交联处理，实现医用高分子合成材料分子链之间的交联，进一步增大纤维及三维支架的抗拉伸强度，同时，采用的熏蒸交联方法，减少了支架对交联剂的吸入。
本发明的静电纺的韧带支架的制备方法，以丝素蛋白复合医用高分子合成材料为材料，医用高分子合成材料提供、并保留了其原有的高强度与韧性，为韧带提供力学性能的保证；丝素蛋白进一步提高、并保证了韧带支架的生物相容性，特别是丝素粉体保留了天然生物材料细胞发育的基质条件。韧带支架的孔隙结构为细胞向支架内部繁殖提供了空间，同时，韧带支架的取向纤维结构更有利于韧带种子细胞的黏附、及其在取向方向上迁移与繁殖；丝素蛋白复合医用高分子合成材料为材料的缓慢降解特性与韧带的组织的缓慢生长特性相适应，并保持着拉伸强度的缓慢下降。本发明的韧带支架制备方法简单、操作方便、成本低廉，对制备过程具有良好的可控性，本发明适应于制备各种不同截面结构和长度的韧带支架。
附图说明
图1为韧带支架表面形貌电镜图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细描述。
一种韧带支架及其制备方法，所述韧带支架是以丝素蛋白和医用高分子合成材料复合取向纤维组成的具有多孔的三维结构韧带，复合取向纤维中丝素蛋白与医用高分子合成材料的质量比为1/20～1/1，复合取向纤维的直径为500nm-10000nm，韧带的厚度为1mm-10mm，韧带的宽度为1mm-15mm。
韧带支架的制备，配制好丝素蛋白溶液或丝素蛋白粉体分散液及医用高分子合成材料聚乙烯醇(PVA)溶液或聚氨酯(PU)溶液或聚己内酯溶液(PCL)或聚氨酯(PU)与聚己内酯(PCL)混合溶液后，按以下步骤进行：
a取丝素蛋白溶液或丝素蛋白粉体分散液与医用高分子合成材料溶液混合，得到丝素蛋白与医用高分子合成材料的质量比为1/20～1/1，丝素蛋白与医用高分子合成材料的总溶质质量浓度为7％～15％的混合溶液，并将混合溶液吸入静电纺用的纺丝液管。
b搭建静电纺的装置，将与需要制备的韧带长度的1～3倍周长的收集轮固定在可调速的导电旋转体上，收集轮与导电旋转体在同一轴线上，收集轮为电绝缘材料，收集轮的厚度为1mm-15mm，收集轮的两边分别黏附导电的金属圆盘，金属圆盘的半径比收集轮的半径大1mm，金属圆盘与导电旋转体连接并接地。
c静电纺制备韧带支架，将吸有复合溶液的静电纺用纺丝液管置于静电纺推泵中，静电纺丝液推出速度0.2ml/小时～4ml/小时，收集轮的旋转速度为50转/min～1000转/min，静电纺的高压电源输出5kV～30kV的电压，纺丝液管的喷嘴与收集轮之间的距离为5cm～30cm，静电纺获得由直径为500nm-10000nm的复合取向纤维组成的厚度为0.5mm-1.5mm的非织造膜后，将收集轮两边的金属圆盘更换比原金属圆盘半径大1mm的金属圆盘，继续静电纺，以此更换收集轮两边的金属圆盘1～10次，获得厚度为1mm-10mm，宽度为1mm-15mm的静电纺非织造环。
d将步骤c获得的静电纺非织造环在质量百分比为0.5～2％的京尼平溶液的蒸汽或体积百分比为75％的乙醇蒸汽或质量百分比为25％的戊二醛溶液的蒸汽中熏蒸交联20～72小时，再经30℃、-0.1MPa的真空烘箱中脱附2～4天，得到韧带的厚度为1mm-10mm，韧带的宽度为1mm-15mm的韧带支架。
如上所述的制备步骤a中丝素蛋白溶液或丝素蛋白粉体分散液，是蚕丝脱胶后，经过溶解，透析，冷冻干燥得到的丝素蛋白散入溶剂中，磁搅拌直至完全溶解得到稳定的丝素蛋白溶液，或蚕丝脱胶后粉碎得到的直径小于500nm的粉体状丝素蛋白分散于溶剂中，超声分散得到丝素粉体的分散液，丝素蛋白溶液的质量浓度为5％～20％；分散液的丝素蛋白粉体的质量浓度为5％～20％；配置丝素蛋白溶液的溶剂为六氟异丙醇或水，并在室温下磁搅拌；配制丝素粉体的分散液、医用高分子合成材料聚氨酯(PU)或聚己内酯(PCL)或聚氨酯(PU)与聚己内酯(PCL)的混合溶液的溶剂为N，N-二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺或二甲基亚砜中任意一种或两种的混合物，在常温下磁搅拌；配制医用高分子合成材料聚乙烯醇(PVA)溶液时以水为溶剂，并在80℃下磁搅拌；丝素蛋白溶液的水溶液只能与医用高分子合成材料聚乙烯醇(PVA)的水溶液混合；丝素蛋白溶液的六氟异丙醇溶液可以与医用高分子合成材料聚氨酯(PU)或聚己内酯(PCL)或聚氨酯(PU)与聚己内酯(PCL)混合的有机溶液混合。
医用高分子合成材料聚氨酯可以是现有的具有良好的生物相容性、高弹性的聚醚型聚氨酯、聚酯型聚氨酯和聚碳酸酯型聚氨酯。
丝素蛋白粉体可以为桑蚕丝或榨蚕丝脱胶后，通过机械粉碎的方法制备得到，丝素的微结构与基质特征没有改变；丝素蛋白可以为桑蚕丝或榨蚕丝脱胶后，经过溶解，透析，冷冻干燥得到。
下面结合实施例对本发明作进一步的阐述：
实施例一
a将六氟异丙醇为溶剂、质量浓度为5％的丝素蛋白溶液，与N，N-二甲基甲酰胺为溶剂质量浓度为20％聚氨酯(PU)溶液混合，得到丝素蛋白与医用高分子合成材料聚氨酯(PU)的质量比为1/20，丝素蛋白与医用高分子合成材料聚氨酯(PU)的总溶质质量浓度为7％的混合溶液，并将混合溶液吸入静电纺用的纺丝液管。
b搭建静电纺的装置，将与需要制备的韧带长度的1倍周长的收集轮固定在可调速的导电旋转体上，收集轮与导电旋转体在同一轴线上，收集轮为电绝缘材料，收集轮的厚度为1mm，收集轮的两边分别黏附导电的金属圆盘，金属圆盘的半径比收集轮的半径大1mm，金属圆盘与导电旋转体连接并接地。
c静电纺制备韧带支架，将吸有复合溶液的静电纺用纺丝液管置于静电纺推泵中，静电纺丝液推出速度4ml/小时，收集轮的旋转速度为1000转/min，静电纺的高压电源输出5kV的电压，纺丝液管的喷嘴与收集轮之间的距离为5cm，静电纺获得由直径为500nm的复合取向纤维组成的厚度为0.5mm的非织造膜后，将收集轮两边的金属圆盘更换比原金属圆盘半径大1mm的金属圆盘，继续静电纺，获得厚度为1mm，宽度为1mm的静电纺非织造环。
d将步骤c获得的静电纺非织造环在质量百分比为2％的京尼平溶液的蒸汽中熏蒸交联20，再经30℃、-0.1MPa的真空烘箱中脱附2天，得到韧带的厚度为1mm，韧带的宽度为1mm的韧带支架。韧带支架表面形貌如图1。
实施例二
a将六氟异丙醇为溶剂、质量浓度为10％的丝素蛋白溶液，与二甲基乙酰胺为溶剂质量浓度为10％聚己内酯(PCL)溶液混合，得到丝素蛋白与医用高分子合成材料聚己内酯(PCL)的质量比为1/10，丝素蛋白与医用高分子合成材料聚己内酯(PCL)的总溶质质量浓度为10％的混合溶液，并将混合溶液吸入静电纺用的纺丝液管。
b搭建静电纺的装置，将与需要制备的韧带长度的2倍周长的收集轮固定在可调速的导电旋转体上，收集轮与导电旋转体在同一轴线上，收集轮为电绝缘材料，收集轮的厚度为3mm，收集轮的两边分别黏附导电的金属圆盘，金属圆盘的半径比收集轮的半径大1mm，金属圆盘与导电旋转体连接并接地。
c静电纺制备韧带支架，将吸有复合溶液的静电纺用纺丝液管置于静电纺推泵中，静电纺丝液推出速度2ml/小时，收集轮的旋转速度为500转/min，静电纺的高压电源输出10kV的电压，纺丝液管的喷嘴与收集轮之间的距离为10cm，静电纺获得由直径为800nm的复合取向纤维组成的厚度为0.8mm的非织造膜后，将收集轮两边的金属圆盘更换比原金属圆盘半径大1mm的金属圆盘，继续静电纺，两金属圆盘之间的静电纺膜增厚1mm左右时，再次更换比原金属圆盘半径大1mm的金属圆盘，继续静电纺，以此更换收集轮两边的金属圆盘2次，获得厚度为2.5mm，宽度为3mm的静电纺非织造环。
d将步骤c获得的静电纺非织造环再在体积百分比为75％的乙醇蒸汽中熏蒸交联30小时，再经30℃、-0.1MPa的真空烘箱中脱附3天，得到韧带的厚度为2.5mm，韧带的宽度为3mm的韧带支架。
实施例三
a将六氟异丙醇为溶剂、质量浓度为20％的丝素蛋白溶液，与二甲基亚砜为溶剂质量浓度为15％的医用高分子合成材料组成质量比为1︰1的聚氨酯(PU)与聚己内酯(PCL)混合溶液混合，得到丝素蛋白与医用高分子合成材料氨酯(PU)与聚己内酯(PCL)的混合物的质量比为1/10，丝素蛋白与医用高分子合成材料氨酯(PU)与聚己内酯(PCL)的混合物的总溶质质量浓度为15％的混合溶液，并将混合溶液吸入静电纺用的纺丝液管。
b搭建静电纺的装置，将与需要制备的韧带长度的3倍周长的收集轮固定在可调速的导电旋转体上，收集轮与导电旋转体在同一轴线上，收集轮为电绝缘材料，收集轮的厚度为10mm，收集轮的两边分别黏附导电的金属圆盘，金属圆盘的半径比收集轮的半径大1mm，金属圆盘与导电旋转体连接并接地。
c静电纺制备韧带支架，将吸有复合溶液的静电纺用纺丝液管置于静电纺推泵中，静电纺丝液推出速度1ml/小时，收集轮的旋转速度为700转/min，静电纺的高压电源输出20kV的电压，纺丝液管的喷嘴与收集轮之间的距离为15cm，静电纺获得由直径为1000nm的复合取向纤维组成的厚度为0.8mm的非织造膜后，将收集轮两边的金属圆盘更换比原金属圆盘半径大1mm的金属圆盘，继续静电纺，两金属圆盘之间的静电纺膜增厚1mm左右时，再次更换比原金属圆盘半径大1mm的金属圆盘，继续静电纺，以此更换收集轮两边的金属圆盘5次，获得厚度为5mm，宽度为10mm的静电纺非织造环。
d静电纺非织造环再在质量百分比为25％的戊二醛溶液的蒸汽中熏蒸交联60小时，再经30℃、-0.1MPa的真空烘箱中常温脱附4天，得到韧带的厚度为5mm，韧带的宽度为10mm的韧带支架。
实施例四
a将水为溶剂、质量浓度为20％的丝素蛋白粉体分散液，与以水为溶剂，质量浓度为10％的医用高分子合成材料聚乙烯醇(PVA)溶液混合，得到丝素蛋白与医用高分子合成材料聚乙烯醇(PVA)的质量比为1/2，丝素蛋白与医用高分子合成材料聚乙烯醇(PVA)的总溶质质量浓度为15％的混合溶液，并将混合溶液吸入静电纺用的纺丝液管。
b搭建静电纺的装置，将与需要制备的韧带长度的1倍周长的收集轮固定在可调速的导电旋转体上，收集轮与导电旋转体在同一轴线上，收集轮为电绝缘材料，收集轮的厚度为15mm，收集轮的两边分别黏附导电的金属圆盘，金属圆盘的半径比收集轮的半径大1mm，金属圆盘与导电旋转体连接并接地。
c静电纺制备韧带支架，将吸有复合溶液的静电纺用纺丝液管置于静电纺推泵中，静电纺丝液推出速度4ml/小时，收集轮的旋转速度为50转/min，静电纺的高压电源输出30kV的电压，纺丝液管的喷嘴与收集轮之间的距离为30cm，静电纺获得由直径为800nm的复合取向纤维组成的厚度为1mm的非织造膜后，将收集轮两边的金属圆盘更换比原金属圆盘半径大1mm的金属圆盘，继续静电纺，两金属圆盘之间的静电纺膜增厚1mm左右时，再次更换比原金属圆盘半径大1mm的金属圆盘，继续静电纺，以此更换收集轮两边的金属圆盘10次，获得厚度为10mm，宽度为15mm的静电纺非织造环。
d静电纺非织造环再在质量百分比为25％的戊二醛溶液的蒸汽中熏蒸交联72小时，再经30℃、-0.1MPa的真空烘箱中常温脱附4天，得到韧带的厚度为10mm，韧带的宽度为15mm的韧带支架。
实施例五：
a将六氟异丙醇为溶剂、质量浓度为15％的丝素蛋白溶液，与以N，N-二甲基甲酰胺为溶剂，质量浓度为200％的医用高分子合成材料聚氨酯(PU)溶液混合，得到丝素蛋白与医用高分子合成材料聚氨酯(PU)的质量比为1/1，丝素蛋白与医用高分子合成材料聚氨酯(PU)的总溶质质量浓度为18％的混合溶液，并将混合溶液吸入静电纺用的纺丝液管。
b搭建静电纺的装置，将与需要制备的韧带长度的1倍周长的收集轮固定在可调速的导电旋转体上，收集轮与导电旋转体在同一轴线上，收集轮为电绝缘材料，收集轮的厚度为10mm，收集轮的两边分别黏附导电的金属圆盘，金属圆盘的半径比收集轮的半径大1mm，金属圆盘与导电旋转体连接并接地。
c静电纺制备韧带支架，将吸有复合溶液的静电纺用纺丝液管置于静电纺推泵中，静电纺丝液推出速度3ml/小时，收集轮的旋转速度为800转/min，静电纺的高压电源输出25kV的电压，纺丝液管的喷嘴与收集轮之间的距离为20cm，静电纺获得由直径为600nm的复合取向纤维组成的厚度为1mm的非织造膜后，将收集轮两边的金属圆盘更换比原金属圆盘半径大1mm的金属圆盘，继续静电纺，两金属圆盘之间的静电纺膜增厚1mm左右时，再次更换比原金属圆盘半径大1mm的金属圆盘，继续静电纺，以此更换收集轮两边的金属圆盘7次，获得厚度为7mm，宽度为10mm的静电纺非织造环。
d静电纺非织造环再在体积百分比为75％的乙醇蒸汽中熏蒸交联50小时，再经30℃、-0.1MPa的真空烘箱中常温脱附3天，得到韧带的厚度为7mm，韧带的宽度为10mm的韧带支架。
Claims (1)
1.一种韧带支架的制备方法，包括丝素蛋白溶液或丝素蛋白粉体分散液及医用高分子合成材料溶液的配制，其特征在于：所述一种韧带支架的制备方法按以下步骤进行：
a取配置好的丝素蛋白溶液或丝素蛋白粉体分散液与医用高分子合成材料溶液相混合，得到丝素蛋白与医用高分子合成材料的质量比为1/20～1/1，丝素蛋白与医用高分子合成材料的总溶质质量浓度为7%～15%的混合溶液，并将混合溶液吸入静电纺用的纺丝液管；
b搭建静电纺的装置，将与需要制备的韧带长度的1～3倍周长的收集轮固定在可调速的导电旋转体上，收集轮与导电旋转体在同一轴线上，收集轮为电绝缘材料，收集轮的厚度为1mm-15mm，收集轮的两边分别黏附导电的金属圆盘，金属圆盘的半径比收集轮的半径大1mm，金属圆盘与导电旋转体连接并接地；
c静电纺制备韧带支架，将吸有复合溶液的静电纺用纺丝液管置于静电纺推泵中，静电纺丝液推出速度0.2ml/小时～4ml/小时，收集轮的旋转速度为50转/min～1000转/min，静电纺的高压电源输出5kV～30kV的电压，纺丝液管的喷嘴与收集轮之间的距离为5cm～30cm，静电纺获得由直径为500nm-10000nm的复合取向纤维组成的厚度为0.5mm-1.5mm的非织造膜后，将收集轮两边的金属圆盘更换比原金属圆盘半径大1mm的金属圆盘，继续静电纺，以此更换收集轮两边的金属圆盘1～10次，获得厚度为1mm-10mm，宽度为1mm-15mm的静电纺非织造环；
d将步骤c获得的静电纺非织造环在质量百分比为0.5～2%的京尼平溶液的蒸汽或体积百分比为75%的乙醇蒸汽或质量百分比为25%的戊二醛溶液的蒸汽中熏蒸交联20～72小时，再经30℃、-0.1MPa的真空烘箱中脱附2～4天，得到韧带的厚度为1mm-10mm，韧带的宽度为1mm-15mm的韧带支架。
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