CN104027433A - 一种中药组合物及其制备方法与临床制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗蛋白尿为主要临床特征的慢性肾脏病的中药组合物及其制备方法与临床制剂,选用黄芪、当归、牛膝、川芎、白术、太子参、甘草、蝉蜕、白花蛇舌草、芡实、金樱子等多味中药材制成中药组合物及相应的临床制剂,现代药理学研究及临床试验表明,本发明的中药组合物及临床制剂治疗肾炎病的总有效率达到97%以上,具有益肾健脾,活血通络的功效,可用于尿蛋白为主要临床表现的慢性肾脏病的治疗,不仅减少了患者支出,而且疗效稳定,无毒副作用,适于长期服用。
Description
技术领域
本发明涉及中药领域,特别涉及一种治疗蛋白尿为主要临床特征的慢性肾脏病的中药组合物及其制备方法与临床制剂。
背景技术
2012年3月,由北京大学医学部肾脏病研究所课题组在著名的杂志《柳叶刀》上发表论文指出:通过多中心、大样本的研究,我国“慢性肾脏病”的发病率为10.8%,也就是说初步估算我国慢性肾脏病人数大约为一亿两千万。
根据世界卫生组织的统计,各国政府为慢性肾脏病患者进行的公共卫生投入逐年增加,同时患者本身也要忍受巨大病痛并承受巨额的经济支出。慢性肾炎导致的蛋白尿是慢性肾脏病患者的主要因素,在我国也是导致患者最终发展为慢性肾衰竭的首要因素。循证医学研究证实肾脏病理损害程度及肾功能下降程度是决定慢性肾脏病病人预后的主要因素。据统计在我国每年每100万人群中大约有100人进入肾衰竭期。这其中蛋白尿为主要临床指标的慢性肾炎患者病情得不到积极而有效的治疗是其中最为重要的环节。慢性肾脏病严重威胁人类健康而且增加整个社会的经济负担,不利于社会发展和人类进步。
肾脏是机体排泄代谢废物,维持水、电解质和酸碱平衡以及产生多种激素的重要器官。从而维持体内内环境稳定,使新陈代谢正常进行。以蛋白尿为主要蛋白的各种慢性肾脏病从现代医学的观点来看,主要是由机体本身在免疫介导情况下的炎性反应,各种原因导致抗原(如微生物感染)进入人体后,机体产生相应的抗体,结合成免疫复合物随着血液循环到达并沉积在肾脏的不同部位,造成的病理损伤,形成不同的肾炎类型。从发病病程来看临床上主要分为急性肾炎和慢性肾炎,慢性肾炎一般多起病隐匿,往往病情迁延不愈,患者时间多则半年以上,称为慢性肾炎。慢性肾炎临床多有蛋白尿、血尿及不同程度高血压和肾功能损坏,如果病情控制不佳会在数月或者数年后出现肾功能衰竭。而急性肾炎起病多由感染等因素造成,临床症状表现多见水肿明显、尿蛋白、尿少、血压增高及尿中红细胞增多。如果病情不能及时纠正,肾功能进行性下降同样可能导致肾脏功能衰竭而出现尿毒症。
中医学认为肾的生理功能主要包括主生长发育、主生殖、主水液代谢、主骨藏精生髓化血、主纳气及濡养温煦脏腑等方面。慢性肾脏病的发生是内外因两方面决定的,内因是主因,外因是诱因。临床上常见虚实夹杂,标本同病。本虚指肺、脾、肾功能失调及气、血、精的亏虚,但肾气不足为其根本。常见的标诱因有外感、情志、瘀血等,但以瘀血内阻影响最大。气血虚损久必伤肾,湿热留着肾府则腰痛;影响肾之封藏,则精气下泄,尿中出现蛋白。病变迁延日久,耗气伤阴。肾络的瘀阻可由多种原因引起,但以脏腑功能紊乱为主。慢性肾脏病病变过程中出现的血流动力学变化、内皮细胞的功能改变、炎症纤维细胞的活化以及细胞外基质成分过度积聚和肾间质纤维化的共同病理改变,均符合中医理论肾络瘀滞,瘀血阻络的特点。总之,慢性肾脏病病机复杂,总属本虚标实之证,脏腑功能紊乱,气血津液输布、运化障碍而产生瘀血与阴伤相互作用。肾虚为发病之本,瘀血内结是本病进展和加重的重要病理因素。
尿中蛋白及红细胞质的外泻主要是由于肾脏精气亏虚导致封藏不固,精气外泄,不能收藏五脏六腑之精气所导致。
中国专利CN102764338A公开了一种治疗肾脏疾病的药物组合物,由龙眼肉、枸杞、人参、冬虫夏草、桑葚、紫河车、肉桂七味中药制成。中国专利CN102727660A公开了一种治疗肾炎的中成药及其制备方法,该中成药以金银花、川军、人参、山药、牛膝、莲子、枸杞子、赤小豆、三七为原料制备而成。中国专利CN102670983A公开了一种治疗肾病的药物,其有效的原料包括:黑柄炭角菌、桦褐孔菌、树舌、木腰子、鸡肾参、羚羊角、海螵蛸、鳖甲、紫贝齿、牛黄、珍珠粉。中国专利CN03114205公开一种治疗肾炎的中药组合物,由仙灵牌、仙茅、巴戟、杜仲、芜丝子、鹿角霜、西洋参、石解、知母、黄柏、田七、丹参、当归、熟地、灵芝制成。中国专利CN 200710115279公开一种用于治疗慢性肾炎的中药组合物,该组合物由生地、龟板、山茱萸、丹皮、牛膝、黄芪、枸杞子、冬虫夏草、茯苓、麻黄、桑白皮、白术、防风、山药配制而成。中国专利CN200610011864公开一种治疗慢性肾炎的中药组合物,该中药组合物由人参、黄芪、白术、茯苓、泽泻、清半夏、羌活、独活、防风、柴胡、黄连、白芍、陈皮、炙甘草、生姜和大枣制成。中国专利CN200610165478公开一种用于慢性肾炎的中药组合物,由千斤拔、淫羊藿、补骨脂、冬虫夏草、红参、黄精、制首乌、地黄、鹰不扑、三七、大黄、黑豆、土茯苓、益母草、泽泻、白茅根制成。
上述中药组合物具有补益肾精、使用方便等特点,但是上述中药组合物的方剂当中使用人参、冬虫夏草等名贵药物,由于方剂较大导致药物组合物中有效成分含量较少,不仅造成药源的浪费、患者支出的增加,而且药效不高;药物组合物中植物性药材、动物性药材以及矿物类药物在制备中药组合物时因炮制方法不同,有效成分在制备过程中极易损失,中药组合物的质量控制难以掌握。
因此,提供一种疗效确切、制备方式合理、制剂的质量容易控制而且药材来源丰富且价格低廉的中药组合物及其制备方法与临床制剂具有现实意义。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种疗效肯定、药源经济充足、效果显著的治疗蛋白尿为主要临床特征的慢性肾脏病的中药组合物及其制备方法与临床制剂。
为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:
一种治疗蛋白尿为主要临床特征的慢性肾脏病的中药组合物,由如下重量份数的原料药制成:
优选的,所述的中药组合物,由如下重量份数的原料药制成:
从中医学角度来看,尿蛋白是人体精微下注、精气外泄的病理产物,属中医学“精(气)”,“精微”范畴。肾主闭藏精气,肾气充足则能调节机体“精(气)”充养全身器官。肾脏功能失调,则精微下注,精气外泄,形成尿蛋白。因此,在理论上应以“肾”为主而论治肾炎。其病机主要是病变初始,肾脏亏虚导致闭藏精气失司而致肾不藏精,精气外泄;随着病变深入,精气耗损导致气不帅血出现血脉运行不利。血脉瘀滞引起脉络闭阻加重而致病变深入,因此在肾炎病变过程中注重益肾固精与活血化瘀的联合运用才能在治疗上取得理想的疗效。肾小球脉络微细,符合中医经络学说中“孙络”的范畴,络脉微细易于瘀阻,病变过程中瘀阻更甚因而将活血祛瘀的理念贯穿治疗始终,本发明选用黄芪、当归、牛膝、川芎、白术、太子参、甘草、蝉蜕、白花蛇舌草、芡实、金樱子等多味中药材制成中药组合物来治疗蛋白尿。
其中,黄芪为豆科草本植物蒙古黄芪、膜荚黄芪的根,具有补气固表、利水退肿、托毒排脓、生肌等功效。现代研究表明,黄芪含皂甙、蔗糖、多糖、多种氨基酸、叶酸及硒、锌、铜等多种微量元素,有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。
当归为伞形科植物当归的干燥根,既能补血,又能活血,既可通经,又能活络。
牛膝为苋科植物牛膝的根,主治腰膝酸痛、下肢痿软、血滞经闭、痛经、产后血瘀腹痛、症瘕、胞衣不下、热淋、血淋、跌打损伤、痈肿恶疮、咽喉肿痛。
川芎为伞形科植物川芎的根茎,主治月经不调、经闭痛经、产后瘀滞腥痛、症瘕肿块、胸胁疼痛、头痛眩晕、风寒湿痹、跌打损伤、痈疽疮疡。
白术为菊科多年生草本植物的根茎,具有补气健脾、燥湿利水等功效。现代研究表明,能呈现明显而持久的利尿作用,能促进电解质,尤其是钠的排出,不影响垂体后叶激素的抗利尿作用,故其作用机理可能是既有排泄Na+、Cl-作用,又有增高尿中CO2含量、pH值及增加K+排泄,减少NH3+排泄的特点。单味白术能使TH细胞明显增加,提高TH/TS比值,纠正T细胞亚群分布紊乱状态,可使低下的IL-2水平显著提高,并能增加T淋巴细胞表面IL-2R的表达。说明白术可提高免疫力,延长淋巴细胞寿命,增强机体清除自由基的能力,具有明显的抗氧化作用。
太子参为石竹科多年生草本植物异叶假繁缕的块根,具有补气生津等功效。现代研究表明,太子参的化学成分包括:甙类、糖类、氨基酸类、油脂类、磷脂类、环肽类、挥发油等成分。主要药理作用包括:太子参对机体具有“适应原”样作用,能增强机体对有害刺激的防御能力,增强人体内的物质代谢;能明显增加胸腺DNA、RNA和脾脏DNA含量,并能增加外周血白细胞数,对细胞免疫功能低下具有显著的提高作用。
甘草为豆科多年生草本植物甘草的根及根茎,具有补脾益气、缓和药性等功效。现代分析发现甘草含主要成分有三萜类化合物(甘草甜素亦甘草酸盐,甘草次酸等)、黄酮类化合物(甘草黄碱酮、异甘草黄铜、甘草素等)及甘草多糖类化合物等三大类。甘草药理作用广泛,主要包括肾上腺皮质激素样作用。甘草能使健康人和多种动物尿和钠排出减少,钾排出增加。小剂量甘草素、甘草次酸等可使肾上腺重量增加,具有抗黄疸作用和免疫抑制剂作用,糖皮质激素(可的松)样作用;大剂量时糖皮质激素样作用不明显,只呈现盐皮质激素样作用。甘草能提高机体的内分泌调节能力,起到扶正固本的治疗作用等。另外还有广泛非特异的调节免疫力和抗炎、抗菌等作用。
蝉蜕为蝉科昆虫黑蚱蝉羽化时的蜕壳,具有疏散风热、息风明目等功效。研究发现蝉蜕中含有大量的氨基酸类成分和大量蛋白质、甲壳素、可溶性钙及24种微量元素。研究表明蝉蜕具有免疫抑制及抗过敏作用。蝉蜕对非特异性免疫有抑制作用,对IV型变态反应及机体细胞免疫功能也有明显抑制作用。近年来应用研究表明其在肾脏内科及神经内科多种疾病治疗中的效果良好。
白花蛇舌草为茜草科一年生草本植物,具有清热利湿、解毒消痈等功效。研究表明,白花蛇舌草具有增强免疫系统功能和抗氧化作用,主要具有增强机体特异性免疫功能和非特异性免疫功能的作用。实验证实,白花蛇舌草能明显提高组织SOD的活性,降低MDA的含量,具有很好的抗氧化作用。白花蛇舌草多糖可通过提高SOD活力和清除氧自由基及抗脂质过氧化的作用来抵抗衰老而延长寿命。
芡实为睡莲科一年生水生草本植物芡的成熟种仁,具有补脾祛湿,益肾固精的功效。芡实的化学成分主要为碳水化合物和蛋白质,功效成分包括黄酮类、环肽类、甾醇类、脂类、脑苷脂类等。芡实的药理研究较少,主要集中在抗氧化和改善脏器缺血两方面。
金樱子为蔷薇科常绿攀缘灌木植物的成熟假果或者去除瘦果的成熟花托,具有固精缩尿、涩肠止泻的功效。金樱子中富含多糖和黄酮类物质,营养极丰富,有柠檬酸、苹果酸、鞣质、维生素及20余种氨基酸、18种矿物质,还含树脂、皂甙、多酚类化合物等成分,尤以维生素C和糖的含量高。金樱子具有抗衰老作用,其存在的抗氧化物质可以缓解和控制自由基对细胞的损伤。研究表明,金樱子多糖具有显著的抗氧化作用。进一步研究证明,金樱子含大量的锌、铜、铁元素和仙鹤草素成分,提高体内微量元素水平有利于肾炎的治疗。另一方面金樱子水提物可减少排尿次数、增加每次排尿的尿量。
本发明中所述的黄芪、当归、牛膝、川芎、白术、太子参、甘草、蝉蜕、白花蛇舌草、芡实、金樱子是本领域技术人员公知的,可以通过商业途径从医药商店购买得到或通过现有技术中公开的方法栽培、采收得到,其规格符合国家或行业标准即可。同时所用药材均无毒,长期服用药物依赖性小,且价格低廉,适合普通消费者使用。
本发明还提供了制备所述中药组合物的方法。
具体的,一种制备上述治疗蛋白尿为主要临床特征的慢性肾脏病的中药组合物的方法,包括下述步骤:
步骤1:取1~100质量份当归、2~200质量份川芎经水蒸气蒸馏收集挥发油和蒸馏后残液,取第一药渣加水经第一煎煮,过滤后收集第一滤液,所述第一滤液与所述蒸馏后残液混合后浓缩得第一清膏,所述第一清膏在60~80℃下相对密度为1.10~1.20;
步骤2:取2~600质量份黄芪、1~100质量份牛膝、1~100质量份白术、1~200质量份太子参、1~200质量份甘草、1~100质量份蝉蜕、2~400质量份白花蛇舌草、2~600质量份芡实、2~600质量份金樱子经60~95vol%乙醇加热回流,收集提取液后浓缩得第二清膏,取第二药渣加水经第二煎煮,过滤后收集第二滤液,浓缩得第三清膏,所述第二清膏和第三清膏在60~80℃下相对密度为1.10~1.20;
步骤3:取所述的第一清膏、第二清膏与所述的第三清膏混合,制得浸膏;
步骤4:取所述浸膏与所述挥发油混合,即得。
优选的,步骤1中,所述水蒸气蒸馏为水蒸气蒸馏1~2次,每次2~10h。
优选的,步骤2中,所述的乙醇回流为回流1~3次,每次1~5h。
加水煎煮的加水量是一个很重要的问题,加水量的多少,直接影响有效成分的含量。药多水少,会造成“煮不透,煎不尽”,有效成分浸出不完全,稍一蒸发药汁即干涸,药物有效成分可因局部高热而被破坏;药少水多,虽能增加有效成分的溶出量,但汤药液量过大,不利于后期浓缩处理。
优选的,步骤1中,以g:mL计,所述第一煎煮为所述第一药渣与水的质量体积比为1:6~12。
优选的,步骤2中,以g:mL计,所述第二煎煮为所述第二药渣与水的质量体积比为1:6~12。
本发明提供的中药组合物的制备方法中,收集挥发油与上述浸膏合并制得本发明的中药组合物,最大限度地保留了中药材中的药物活性成分。
本发明还提供了上述制备方法制备的中药组合物。
本发明还进一步提供了所述中药组合物的临床制剂。本领域技术人员可以根据不同患者的需求将本发明所述中药组合物加入制备不同剂型时所需的各种药学上常规的辅料,如崩解剂、润滑剂、乳化剂、粘合剂等,以常规中药制剂方法,经常规加工直接或间接的加入药学上的可接受的辅料制成常用制剂如片剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、丸剂、口服液和糖浆剂等。
优选的,所述中药组合物的临床制剂为颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液,易于服用,针对性强,疗效明显。
本发明的药物组合物的使用剂量和使用方法取决于诸多因素,包括患者的年龄、体重、性别、自然健康状况、营养状况、化合物的活性强度、服用时间、代谢速率、病程严重程度以及诊治医师的主观判断。本领域的技术人员根据上述因素可以容易地决定药物组合物的使用剂量和使用方法。
本发明选用雄性SD大鼠为实验动物进行蛋白尿为主要表现的慢性肾脏病动物模型实验,全部动物在治疗前、治疗过程中和治疗后肝功能指标(谷丙转氨酶)、肾功能指标(血清肌酐)均在正常范围。结果显示本发明药物对于试验大鼠的肝肾功能无不良影响,无毒副作用,能够明显减少阿霉素肾病大鼠尿蛋白排泄量,保护试验大鼠肾小管功能,抑制肾脏组织硬化的进展;通过对系膜基质指数和胶原-4,肾脏组织基质代谢酶的观察分析,从细胞因子、组织代谢酶和系膜基质在肾小球中的比例可以证实,本发明药物可以有效抑制肾脏组织纤维化的进展,是一种理想的治疗慢性肾小球肾炎的药物。
本发明经临床疗效观察,在40例脾肾亏虚、血脉瘀阻证候的慢性肾脏病患者中,用本发明所述中药组合物治疗,治疗显效率为70%,有效率为97.5%。表明本发明所述治疗蛋白尿为主要临床特征的慢性肾脏病的中药组合物疗效显著。在所由治疗的患者中没有一例出现不良反应,表明本发明所述中药组合物对人体安全无毒。
本发明得到国家自然科学基金面上项目(81273723)和苏州市科技局中西医结合科研基金(SYSD2011148)的科研经费支持,所提供的中药组合物及中药制剂治疗肾炎病的总有效率达到97%以上,具有益肾健脾,活血通络的功效,可用于尿蛋白为主要临床表现的慢性肾脏病患者的治疗,不仅减少了患者支出,而且疗效稳定,无毒副作用,适于长期服用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术效果,下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的有关本发明的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据不同的实施例获得其他的附图。
图1为大鼠肾组织HE染色光镜图片,其中图1(A)表示治疗组,图1(B)表示对照组;
图2为大鼠肾组织MMP-9免疫组织化学图片,其中图2(A)表示治疗组,图2(B)表示对照组;
图3为大鼠肾组织Col-Ⅳ免疫组织化学图片,其中图3(A)表示治疗组,图3(B)表示对照组;
图4为大鼠肾组织TIMP-1免疫组织化学图片,其中图4(A)表示治疗组,图4(B)表示对照组。
具体实施方式
本发明公开了一种中药组合物、制备方法及中药制剂,本领域技术人员可以借鉴本发明内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明中。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本发明所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
为了进一步理解本发明,下面结合实施例对本发明进行详细说明。
实施例1 中药组合物的制备
按下列比例称取原料:
黄芪10g、当归20g、牛膝10g、川芎20g、白术5g、太子参3g、甘草9g、蝉蜕3g、白花蛇舌草15g、芡实30g、金樱子30g。
制备方法:
步骤1:当归、川芎水蒸气蒸馏3h提取挥发油,蒸馏后的水液收集,药渣加5倍量水煎煮提取3次,每次2小时,滤过,滤液合并前述蒸馏后水液,常压或减压状态下浓缩成清膏,清膏在75℃下测定相对密度为1.2;
步骤2:黄芪、牛膝、白术、太子参、甘草、蝉蜕、白花蛇舌草、芡实、金樱子加入10倍量体积百分比为75%乙醇加热80℃回流提取3次,每次1小时,滤过,合并乙醇提取液,提取液回收乙醇后浓缩成清膏,清膏在75℃下测定相对密度为1.2,药渣加5倍量水提取3次,每次1.5小时,滤过,滤液常压或减压浓缩成清膏,清膏在80℃下测定相对密度为1.2;
步骤3:合并步骤1与步骤2所得的清膏,混匀,真空干燥,得到浸膏粉;
步骤4:将步骤3所得的浸膏粉加入步骤1所得的挥发油,即得。
实施例2 中药组合物的制备
按下列比例称取原料:
黄芪10g、当归30g、牛膝20g、川芎200g、白术1g、太子参1g、甘草20g、蝉蜕5g、白花蛇舌草50g、芡实60g、金樱子60g。
制备方法:
步骤1:当归、川芎水蒸气蒸馏4h提取挥发油,蒸馏后的水液收集,药渣加8倍量水煎煮提取1次,每次1小时,滤过,滤液合并前述蒸馏后水液,常压或减压状态下浓缩成清膏,清膏在70℃下测定相对密度为1.3;
步骤2:黄芪、牛膝、白术、太子参、甘草、蝉蜕、白花蛇舌草、芡实、金樱子加入6倍量体积百分比为85%乙醇加热90℃回流提取1次,每次2小时,滤过,合并乙醇提取液,提取液回收乙醇后浓缩成清膏,清膏在70℃下测定相对密度为1.3,药渣加8倍量水提取1次,每次2小时,滤过,滤液常压或减压浓缩成清膏,清膏在70℃下测定相对密度为1.30;
步骤3:合并步骤1与步骤2所得的清膏,混匀,真空干燥,得到浸膏粉;
步骤4:将步骤3所得的浸膏粉加入步骤1所得的挥发油,即得。
实施例3 中药组合物的制备
按下列比例称取原料:
黄芪30g、当归40g、牛膝50g、川芎50g、白术20g、太子参10g、甘草20g、蝉蜕10g、白花蛇舌草30g、芡实30g、金樱子30g。
制备方法:
步骤1:当归、川芎水蒸气蒸馏2h提取挥发油,蒸馏后的水液收集,药渣加7倍量水煎煮提取1次,每次1小时,滤过,滤液合并前述蒸馏后水液,常压或减压状态下浓缩成清膏,清膏在70℃下测定相对密度为1.1;
步骤2:黄芪、牛膝、白术、太子参、甘草、蝉蜕、白花蛇舌草、芡实、金樱子加入8倍量体积百分比为90%乙醇加热80℃回流提取2次,每次1小时,滤过,合并乙醇提取液,提取液回收乙醇后浓缩成清膏,清膏在60℃下测定相对密度为1.1,药渣加6倍量水提取2次,每次1小时,滤过,滤液常压或减压浓缩成清膏,清膏在70℃下测定相对密度为1.1;
步骤3:合并步骤1与步骤2所得的清膏,混匀,真空干燥,得到浸膏粉;
步骤4:将步骤3所得的浸膏粉加入步骤1所得的挥发油,即得。
实施例4 中药组合物的制备
按下列比例称取原料:
黄芪100g、当归200g、牛膝100g、川芎200g、白术50g、太子参30g、甘草90g、蝉蜕3g、白花蛇舌草150g、芡实90g、金樱子90g。
制备方法:
步骤1:当归、川芎水蒸气蒸馏6h提取挥发油,蒸馏后的水液收集,药渣加9倍量水煎煮提取2次,每次2小时,滤过,滤液合并前述蒸馏后水液,常压或减压状态下浓缩成清膏,清膏在70℃下测定相对密度为1.2;
步骤2:黄芪、牛膝、白术、太子参、甘草、蝉蜕、白花蛇舌草、芡实、金樱子加入8倍量体积百分比为95%乙醇加热90℃回流提取1次,每次2小时,滤过,合并乙醇提取液,提取液回收乙醇后浓缩成清膏,清膏在80℃下测定相对密度为1.1,药渣加10倍量水提取2次,每次1小时,滤过,滤液常压或减压浓缩成清膏,清膏在80℃下测定相对密度为1.1;
步骤3:合并步骤1与步骤2所得的清膏,混匀,真空干燥,得到浸膏粉;
步骤4:将步骤3所得的浸膏粉加入步骤1所得的挥发油,即得。
实施例5 中药组合物的制备
按下列比例称取原料:
黄芪500g、当归60g、牛膝40g、川芎50g、白术20g、太子参10g、甘草15g、蝉蜕30g、白花蛇舌草25g、芡实300g、金樱子300g。
制备方法:
步骤1:当归、川芎水蒸气蒸馏5h提取挥发油,蒸馏后的水液收集,药渣加9倍量水煎煮提取2次,每次3小时,滤过,滤液合并前述蒸馏后水液,常压或减压状态下浓缩成清膏,清膏在60℃下测定相对密度为1.2;
步骤2:黄芪、牛膝、白术、太子参、甘草、蝉蜕、白花蛇舌草、芡实、金樱子加入10倍量体积百分比为70%乙醇加热80℃回流提取2次,每次2小时,滤过,合并乙醇提取液,提取液回收乙醇后浓缩成清膏,清膏在60℃下测定相对密度为1.1,药渣加8倍量水提取3次,每次1小时,滤过,滤液常压或减压浓缩成清膏,清膏在60℃下测定相对密度为1.2;
步骤3:合并步骤1与步骤2所得的清膏,混匀,真空干燥,得到浸膏粉;
步骤4:将步骤3所得的浸膏粉加入步骤1所得的挥发油,即得。
实施例6 中药组合物的制备
按下列比例称取原料:
黄芪150g、当归200g、牛膝10g、川芎90g、白术50g、太子参30g、甘草90g、蝉蜕50g、白花蛇舌草60g、芡实30g、金樱子30g。
制备方法:
步骤1:当归、川芎水蒸气蒸馏8h提取挥发油,蒸馏后的水液收集,药渣加11倍量水煎煮提取3次,每次1小时,滤过,滤液合并前述蒸馏后水液,常压或减压状态下浓缩成清膏,清膏在80℃下测定相对密度为1.2;
步骤2:黄芪、牛膝、白术、太子参、甘草、蝉蜕、白花蛇舌草、芡实、金樱子加入10倍量体积百分比为70%乙醇加热90℃回流提取3次,每次2小时,滤过,合并乙醇提取液,提取液回收乙醇后浓缩成清膏,清膏在80℃下测定相对密度为1.2,药渣加10倍量水提取1次,每次2小时,滤过,滤液常压或减压浓缩成清膏,清膏在80℃下测定相对密度为1.2;
步骤3:合并步骤1与步骤2所得的清膏,混匀,真空干燥,得到浸膏粉;
步骤4:将步骤3所得的浸膏粉加入步骤1所得的挥发油,即得。
实施例7 片剂的制备
按下列比例称取原料:
黄芪500g、当归100g、牛膝100g、川芎200g、白术50g、太子参100g、甘草200g、蝉蜕300g、白花蛇舌草150g、芡实300g、金樱子300g。
制备方法:
步骤1:当归、川芎水蒸气蒸馏4h提取挥发油,蒸馏后的水液收集,药渣加10倍量水煎煮提取3次,每次2小时,滤过,滤液合并前述蒸馏后水液,常压或减压状态下浓缩成清膏,清膏在70℃下测定相对密度为1.10;
步骤2:黄芪、牛膝、白术、太子参、甘草、蝉蜕、白花蛇舌草、芡实、金樱子加入11倍量体积百分比为80%乙醇加热回流提取3次,每次1小时,滤过,合并乙醇提取液,提取液回收乙醇后浓缩成清膏,清膏在70℃下测定相对密度为1.10,药渣加10倍量水提取3次,每次1小时,滤过,滤液常压或减压浓缩成清膏,清膏在70℃下测定相对密度为1.10;
步骤3:合并步骤1与步骤2所得的清膏,混匀,真空干燥,得到浸膏粉;
步骤4:将步骤3所得的浸膏粉加入步骤1所得的挥发油,加入辅料适量,制粒、压片、包衣、分装,即得本发明中药组合物片剂。
实施例8 胶囊剂的制备
按下列比例称取原料:
黄芪500g、当归300g、牛膝100g、川芎200g、白术500g、太子参30g、甘草900g、蝉蜕300g、白花蛇舌草200g、芡实600g、金樱子600g。
制备方法:
步骤1:当归、川芎水蒸气蒸馏8h提取挥发油,蒸馏后的水液收集,药渣加8倍量水煎煮提取2次,煎煮1小时,滤过,滤液合并前述蒸馏后水液,常压或减压状态下浓缩成清膏,清膏在70℃下测定相对密度为1.15;
步骤2:黄芪、牛膝、白术、太子参、甘草、蝉蜕、白花蛇舌草、芡实、金樱子加入9倍量体积百分比为80%乙醇加热回流提取3次,每次1小时,滤过,合并乙醇提取液,提取液回收乙醇后浓缩成清膏,清膏在70℃下测定相对密度为1.15,药渣加6倍量水提取3次,每次1小时,滤过,滤液常压或减压浓缩成清膏,清膏在70℃下测定相对密度为1.15;
步骤3:合并步骤1与步骤2所得的清膏,混匀,真空干燥,得到浸膏粉;
步骤4:将步骤3所得的浸膏粉加入步骤1所得的挥发油,加入辅料适量,制粒、装胶囊、分装,即得本发明中药组合物胶囊剂。
实施例9 颗粒剂的制备
按下列比例称取原料:
黄芪1000g、当归20g、牛膝1000g、川芎2000g、白术500g、太子参300g、甘草500g、蝉蜕350g、白花蛇舌草1500g、芡实3000g、金樱子3000g。
制备方法:
步骤1:当归、川芎水蒸气蒸馏6h提取挥发油,蒸馏后的水液收集,药渣加12倍量水煎煮提取2次,每次2小时,滤过,滤液合并前述蒸馏后水液,常压或减压状态下浓缩成清膏,清膏在70℃下测定相对密度为1.2;
步骤2:黄芪、牛膝、白术、太子参、甘草、蝉蜕、白花蛇舌草、芡实、金樱子加入10倍量体积百分比为80%乙醇加热回流提取3次,每次2小时,滤过,合并乙醇提取液,提取液回收乙醇后浓缩成清膏,清膏在70℃下测定相对密度为1.2,药渣加12倍量水提取2次,每次3小时,滤过,滤液常压或减压浓缩成清膏,清膏在70℃下测定相对密度为1.2;
步骤3:合并步骤1与步骤2所得的清膏,混匀,喷雾干燥,得到浸膏粉;
步骤4:将步骤3所得的浸膏粉加入步骤1所得的挥发油,加入辅料适量,制粒、干燥、整粒、分装,即得本发明中药组合物颗粒剂。
实施例10 丸剂的制备
按下列比例称取原料:
黄芪1000g、当归300g、牛膝100g、川芎200g、白术500g、太子参300g、甘草900g、蝉蜕300g、白花蛇舌草150g、芡实300g、金樱子300g。
制备方法:
步骤1:当归、川芎水蒸气蒸馏6h提取挥发油,蒸馏后的水液收集,药渣加10倍量水煎煮提取2次,每次2小时,滤过,滤液合并前述蒸馏后水液,常压或减压状态下浓缩成清膏,清膏在60℃下测定相对密度为1.2;
步骤2:黄芪、牛膝、白术、太子参、甘草、蝉蜕、白花蛇舌草、芡实、金樱子加入10倍量体积百分比为80%乙醇加热回流提取2次,每次3小时,滤过,合并乙醇提取液,提取液回收乙醇后浓缩成清膏,清膏在60℃下测定相对密度为1.2,药渣加10倍量水提取2次,每次3小时,滤过,滤液常压或减压浓缩成清膏,清膏在60℃下测定相对密度为1.2;
步骤3:合并步骤:1与步骤2所得的清膏,混匀,喷雾干燥,得到浸膏粉;
步骤4:将步骤3所得的浸膏粉加入步骤1所得的挥发油,加入辅料适量,制丸、打光、包衣、分装,即得本发明中药组合物丸剂。
实施例11 口服液的制备
按下列比例称取原料:
黄芪200g、当归1000g、牛膝100g、川芎200g、白术50g、太子参300g、甘草600g、蝉蜕300g、白花蛇舌草100g、芡实300g、金樱子1000g。
制备方法:
步骤1:当归、川芎水蒸气蒸馏6h提取挥发油,蒸馏后的水液收集,药渣加7倍量水煎煮提取2次,每次2小时,滤过,滤液合并前述蒸馏后水液,常压或减压状态下浓缩成清膏,清膏在60℃下测定相对密度为1.1;
步骤2:黄芪、牛膝、白术、太子参、甘草、蝉蜕、白花蛇舌草、芡实、金樱子加入6倍量体积百分比为80%乙醇加热回流提取3次,每次1小时,滤过,合并乙醇提取液,提取液回收乙醇后浓缩成清膏,清膏在60℃下测定相对密度为1.1,药渣加8倍量水提取3次,每次1小时,滤过,滤液常压或减压浓缩成清膏,清膏在60℃下测定相对密度为1.1;
步骤3:合并步骤:1与步骤2所得的清膏;
步骤4:将步骤3所得的清膏加入步骤1所得的挥发油,加入辅料适量,配置、分装,即得本发明中药组合物口服液。
药效试验的选择依据:
根据文献相关报道选用雄性SD大鼠为实验动物进行蛋白尿为主要表现的慢性肾脏病动物模型实验,本动物模型是目前公认的动物实验方法。应用尾静脉注射方法,使用阿霉素按照每公斤体重6mg计算,尾静脉一次性注射浓度为0.06wt%阿霉素注射液。制备阿霉素肾病动物模型进行实验观察,了解药物的安全性和治疗效果。这种方法是研究慢性肾脏病疗效最为常用的动物模型之一。
从治疗的疗效来看,阿霉素肾病大鼠最为主要的病变是肾小球损害和肾小管损害,尿蛋白的多少与肾小球病变程度成正相关。
从病理学指标来看,肾脏病变发展到最终导致肾脏纤维化产生并逐步出现肾功能衰竭,肾功能衰竭的发生从病理学的角度是组织纤维化。组织纤维化是由于组织成分如胶原、纤维连接蛋白等组成系膜基质的成分明显增加而超出正常水平。其中系膜基质指数是细胞基质占肾小球总面积的比例,而胶原-4是系膜基质中的主要成分之一。两者数值增加是病变进展的标志。也就是说系膜基质数值越大则病变程度越重。基质金属基质蛋白酶-9和基质金属蛋白酶组织型抑制物-1是调节基质代谢的主要细胞因子,其中基质金属基质蛋白酶-9可以降解细胞基质,减少系膜基质;而基质金属蛋白酶组织型抑制物-1则抑制基质金属基质蛋白酶-9的活性从而导致系膜基质降解减少,细胞基质增加,病变加重。
因此从病理学角度观察主要是包括以下几个方面:1、肾脏组织中肾小球系膜基质指数(系膜基质在肾小球所占比例);2、纤维连接蛋白的表达情况;3、肾脏组织中基质金属基质蛋白酶-9和基质金属蛋白酶组织型抑制物-1的表达情况。
表达数值使用棕色或者棕褐色着色面积作为阳性面积。应用计算机医学病理图象分析系统对肾脏组织切片的免疫组织化学染色的结果进行分析,在200倍光学显微镜下每个组织切片采集10个不重叠视野中的阳性染色面积,然后计算每个视野内的染色区域的平均光密度数值,然后将数据汇总,应用SPSS统计分析软件进行分析。
实施例12本发明提供的中药组合物或中药制剂的药效学实验
治疗组:阿霉素肾病大鼠灌胃治疗本发明实施例1至6提供的中药组合物或者实施例7至11提供的中药制剂,使用剂量按照人类与大鼠之间药物使用的比例关系计算药物使用的剂量,疗程中不使用其它治疗该病的药物及方法。
对照组:不服用本发明实施例1至6提供的中药组合物或者实施例7至11提供的中药制剂,疗程中也不使用其它治疗该病的药物及方法。
表1肾脏病变疗效结果
对尿蛋白的影响:通过尿蛋白定量的分析研究发现,治疗前两组之间差异无显著性(P>0.05),两组间蛋白尿出现的情况相似,说明两组间具有可比性。治疗后4周和8周比较,治疗组对尿蛋白治疗作用疗效显著,与未治疗组比较两组之间疗效差异统计学分析具有显著性(P<0.05)。
对血清谷丙转氨酶、肌酐等安全性指标的影响:通过统计学分析前述各项指标,治疗前、治疗后4周和治疗后8周肝功能指标(谷丙转氨酶)、肾功能指标(血清肌酐)均在正常范围。
从表1可知,全部动物在治疗前、治疗过程中和治疗后肝功能指标(谷丙转氨酶)、肾功能指标(血清肌酐)均在正常范围,说明药物干预未对实验动物模型的安全性造成明显危害。
由上述结果可以看出,本发明药物对于试验大鼠的肝肾功能无不良影响,无毒副作用,能够明显减少阿霉素肾病大鼠尿蛋白排泄量,保护试验大鼠肾小管功能,抑制肾脏组织硬化的进展,因此是一种理想的治疗慢性肾小球肾炎的药物。
本试验中病理学试验结果见表2,病理学图片如图1至图4所示。
表2病理学结果
对系膜基质指数和胶原-4的影响:通过阿霉素肾病大鼠不同治疗组的分析研究发现,治疗后的组间比较,治疗组减少系膜基质增生特别是胶原-4,对阿霉素肾病大鼠肾小球的治疗作用疗效显著,与未治疗组比较两组之间疗效差异统计学分析具有显著性(P<0.05)。
对肾脏组织基质代谢酶的影响:通过统计学分析治疗后比较治疗组对基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶组织型抑制物-1作用疗效显著,可以调节基质金属蛋白酶的调节作用,可以上调基质金属蛋白酶-9的同时抑制基质金属蛋白酶组织型抑制物-1在肾脏组织中的表达,与未治疗组比较两组之间疗效差异统计学分析具有显著性(P<0.05)。
由上述结果可以看出,本发明药物对于试验大鼠的肾脏组织学作用明显,从细胞因子、组织代谢酶和系膜基质在肾小球中的比例可以证实,治疗组药物可以有效抑制肾脏组织纤维化的进展,因此是一种理想的治疗慢性肾小球肾炎的药物。
实施例13本发明提供的中药组合物或中药制剂的临床药效试验
病例选择:从中医学来看,分析慢性肾脏病蛋白尿患者的临床症候和病变发生的特点,临床上多数的患者其病因病机应该从脾肾亏虚、血脉瘀阻论治。因此我们根据国家药品及食品监督管理局2002年制定发布的《中药新药临床研究指导原则》中证候分类标准,选择具备脾肾亏虚、血脉瘀阻证候的慢性肾脏病患者病人40例,其中男性18例,女性22例,年龄最大者69岁,最小者17岁,平均36岁;病程最短的1个月,最长的10年,平均4.1年。从现代医学知识来看,蛋白尿是慢性肾脏病病变轻重及疗效判定的重要指标之一。对于全部病例患者治疗前后血常规、肝功能(谷丙转氨酶)、肾功能(血清肌酐、尿素氮)均在正常范围,说明治疗药物对人体毒副作用。患者治疗前尿蛋白定性(+)-(++++),平均24小时尿蛋白定量4.15±1.08克。
治疗方法:口服本发明方剂药物,一日2次,疗程1个月。一个月为1疗程,疗程中停用其它治疗该病的药物及方法。
疗效判定标准:
痊愈:水肿等症状及相关体征基本消失,尿蛋白检查持续阴性,24小时尿蛋白定量持续小于0.3克,肾功能正常。
显效:水肿等症状及相关体征基本消失,尿蛋白检查持续减少50%以上,肾功能正常或基本正常。
有效:水肿等症状及相关体征明显好转,尿蛋白检查持续减少一个“+”或24小时尿蛋白定量持续减少25%以上。
无效:临床表现与实验室检查均无明显改善或加重者。
试验结果:本试验的结果列于表3中。
表3疗效结果
总病例数 | 痊愈 | 显效 | 有效 | 无效 |
40 | 3 | 25 | 11 | 1 |
由上述结果可以看出,本发明提供的中药组合物及中药制剂对慢性肾炎的治疗显效率为70%,有效率为97.5%,具有益肾健脾,活血通络的功效,可用于慢性肾脏病蛋白尿的治疗,疗效稳定,无毒副作用,适合于长期服用,因此是一种理想的治疗慢性肾脏病蛋白尿患者的药物。
Claims (10)
1.一种治疗蛋白尿为主要临床特征的慢性肾脏病的中药组合物,其特征在于,由如下重量份数的原料药制成:
黄芪 2~600份
当归 1~100份
牛膝 1~100份
川芎 2~200份
白术 1~100份
太子参 1~200份
甘草 1~200份
蝉蜕 1~100份
白花蛇舌草2~400份
芡实 2~600份
金樱子 2~600份。
2.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,由如下重量份数的原料药制成:
黄芪 10~60份
当归 5~10份
牛膝 5~10份
川芎 2~20份
白术 5~10份
太子参 5~20份
甘草 5~20份
蝉蜕 5~10份
白花蛇舌草8~40份
芡实 2~60份
金樱子 2~60份。
3.一种治疗蛋白尿为主要临床特征的慢性肾脏病的中药组合物的制备方法,其特征在于,包括下述步骤:
步骤1:取1~100质量份当归、2~200质量份川芎经水蒸气蒸馏收集挥发油和蒸馏后残液,取第一药渣加水经第一煎煮,过滤后收集第一滤液,所述第一滤液与所述蒸馏后残液混合后浓缩得第一清膏,所述第一清膏在60~80℃下相对密度为1.10~1.20;
步骤2:取2~600质量份黄芪、1~100质量份牛膝、1~100质量份白术、1~200质量份太子参、1~200质量份甘草、1~100质量份蝉蜕、2~400质量份白花蛇舌草、2~600质量份芡实、2~600质量份金樱子经60~95vol%乙醇加热回流,收集提取液后浓缩得第二清膏,取第二药渣加水经第二煎煮,过滤后收集第二滤液,浓缩得第三清膏,所述第二清膏和第三清膏在60~80℃下相对密度为1.10~1.20;
步骤3:取所述的第一清膏、第二清膏与所述的第三清膏混合,制得浸膏;
步骤4:取所述浸膏与所述挥发油混合,即得。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于:步骤1中,所述水蒸气蒸馏为水蒸气蒸馏1~2次,每次2~10h。
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于:步骤2中,所述的乙醇回流为回流1~3次,每次1~5h。
6.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于:步骤1中,以g:mL计,所述第一煎煮为所述第一药渣与水的质量体积比为1:6~12。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于:步骤2中,以g:mL计,所述第二煎煮为所述第二药渣与水的质量体积比为1:6~12。
8.权利要求3~7任一项所述的制备方法制备的中药组合物。
9.一种治疗蛋白尿为主要临床特征的慢性肾脏病的临床制剂,其特征在于:所述的临床制剂由权利要求1、2或8所述的中药组合物和药学上可接受的辅料制成。
10.根据权利要求9所述的临床制剂,其特征在于:所述的临床制剂为颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
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