CN104023547A - 加拿大油菜加工过程中的dha保留 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及植物油和含有多不饱和脂肪酸的植物油产品。在一些实施方案中，本公开涉及新的油加工方法，其使得从含有一定量二十二碳六烯酸(DHA)的粗油样品生产的精制、脱色和脱臭(RBD)油中保留该含量的DHA。

Description

加拿大油菜加工过程中的DHA保留
优先权声明
本申请要求享受于2011年12月30日递交的题为《芥花油加工过程中的DHA保留》(DHA RETENTION DURING CANOLA PROCESSING)的美国临时专利申请系列号61/582,169的利益。
技术领域
本公开涉及衍生自植物的油(vegetable-derived oils)，特别涉及含有二十二碳六烯酸的种子油。一些实施方案涉及将含有二十二碳六烯酸的加拿大油菜籽(canola oilseed)加工成完全适合于食品生产中使用的精制、脱色和脱臭(RBD)的油。
背景
衍生自植物的油已经逐渐取代了动物油脂作为主要的膳食脂肪摄取来源。尽管不饱和脂肪(单不饱和脂肪和多不饱和脂肪)一般认为是有益的，但是饱和脂肪和反式脂肪则不是。饱和脂肪和反式脂肪会提高血液中不良LDL胆固醇的水平。因此，建议选择含饱和脂肪、反式脂肪和胆固醇低的食物作为健康膳食的一部分。为了推广更健康的生活习惯，美国农业部最近提倡饱和脂肪在日常热量摄入量中低于10％。然而，在大多数工业化国家中，饱和脂肪摄取量占总热量消费的大约15％-20％。
为了便于消费者知情，现今USDA发布的标识指南中要求，总饱和脂肪酸水平低于1.0g/14g可接受“低饱和脂肪”标识，低于0.5g/14g可被接受为“无饱和脂肪”标识。这意味着，植物油的饱和脂肪酸含量需要低于7％和3.5％才能被分别接受“低饱和脂肪”或“无饱和脂肪”标识。自这些指南的发布以来，消费者对“低饱和脂肪”和“无饱和脂肪”油已经飙升。迄今为止，该需求主要是通过芥花油(canola oil)来满足的，还有葵花油和红花油，但远不及芥花油。在所有植物油中芥花油饱和脂肪酸的水平是最低的。
油，无论是植物还是动物来源的，其特征均主要由油分子中碳和氢原子的数目以及脂肪酸链中包含的双键的数目和位置决定。大多数衍生自植物的油由不同量的棕榈酸(16:0)、硬脂酸(18:0)、油酸(18:1)、亚油酸(18:2)和亚麻酸(18:3)构成。常规上，棕榈酸和硬脂酸被称为是“饱和的”，因为它们的碳链被氢原子饱和，因此不具有双键；它们含有最大可能数目的氢原子。然而，油酸、亚油酸和亚麻酸是其中分别具有1、2和3个双键的18碳脂肪酸链。油酸通常被视为单不饱和脂肪酸，而亚油酸和亚麻酸被视为多不饱和脂肪酸。
一种特别感兴趣的不饱和脂肪酸是二十二碳六烯酸(DHA)(C22:6)。DHA是一种ω-3脂肪酸，是人脑和视网膜的主要结构组分。膳食DHA可以通过减少人类血液甘油三酯的水平而降低心脏病的风险，还可以用于治疗结肠癌和前列腺癌。DHA经常被推荐给怀孕或哺乳期母亲服用。而且，DHA水平低下还与阿尔茨海默病相关。在许多动物体内，DHA可以从见于植物中的α-亚麻酸(18:3)制造。然而，从野生型作物只能获得α-亚麻酸(18:3)。尽管α-亚麻酸本身具有营养用途，但是其在人体内的生物利用率不如DHA，并且认为它不会认为对健康的益处不如DHA。
油中的不饱和脂质可以被氧化成不良的氧化产物，其可能会给可食用的油和脂肪以及由其制成的产品带来不好的气味和/或味道。氧化速度受到多种因素的影响，包括氧气的存在、暴露于光和热、油中固有的或添加的抗氧化剂和促氧化剂的存在。氧化可以由于反复煎炸(诱致性氧化)和/或长时间保存(自发性氧化)而发生。天然油的组成不同，所以它们的氧化途径也不同。由于天然油的复杂性以及特定氧化反应的许多可能的反应途径，氧化反应尚没有得到完全理解。然而，已知有一些氧化反应是通过自由基链式多步反应级联(radical chain multi-step reaction cascade)进行的。油的氧化变质是一种普遍现象，并且限制了油的可用寿命。此外，从收获后被储存了较长时间的含油种子中获得的油，其氧化产物含量也比从新鲜收获的含油种子中获得的油更高。
在脂质氧化的第一步中，双键与氧反应形成烯丙基氢过氧化物(allylichydroperoxides)(也称作过氧化物)。因为它们来自氧化的第一步，氢过氧化物被认为是初级氧化产物。它们可以通过标准过氧化值试验常规地进行定量。高品质油，其相对味道温和并且气味较少，一般具有较低的过氧化值(PV)。交给食品加工者的食物油的PV经常要求低于特定的值，以确保所产生的食材具有高品质。过氧化物不稳定并且容易经历进一步的反应。低PV不是高品质油的唯一标志，因为油的PV可能达到某一高水平，然后随着过氧化物被进一步分解成次级氧化产物而下降。
次级氧化产物可以根据所产生的分子的大小被分成3类。尽管许多高分子量不饱和脂类本身不具有独特的味道，但是它们的分解化合物经常有强烈的味道，这会对油的品质和稳定性造成有害影响。一些次级氧化产物的分子量比原始的脂质低，因此比起始脂质和过氧化物更具挥发性。这些次级氧化产物(例如醛、含羰基化合物、酮基、醇、酸、酯、醚、碳氢化合物和内酯)在食用油工业中会造成问题。Gunstone(1999)“Reactions associated with doublebonds,”见《Fatty Acid and Lipid Chemistry》，Aspen Publishers、Gaithersburg、MD。这些次级氧化产物中的许多甚至在极低浓度下也能够尝出或闻到。
各种脂肪酸对氧化的敏感性取决于其不饱和程度。因此，具有3个碳-碳双键的亚麻酸的氧化速度是只含有1个双键的油酸的25倍，是具有2个双键的亚油酸的2倍。因此，在种子油的天然脂肪酸中，亚油酸和亚麻酸对味道和气味的影响最大。相反，高油酸(≥70％油酸)在储藏、煎炸和精制期间较不容易氧化，并且能够被加热到更高的温度而不发烟，这使它更适合用作烹饪油。在种子油的脂肪酸谱中，油酸超过70％(按重量)、亚麻酸低于3.5％(按重量)的商业售卖的加拿大油菜品种实例是诸品种，其由DowAgroSciences LLC(Indianapolis、IN)推向市场，这些品种产生“ω-9油”，一种非氢化、高油酸、低亚麻酸油。ω-9油目前被用于多种用途，包括深炸、煎炸(sautéing)、烘烤、喷射(spraying)，以及用于沙拉调味料中。
加工加拿大油菜籽(canola grain)用于产油的传统方法包括机械挤压种子，随后用溶剂从经过挤压的种子中提取油。将机械和溶剂提取的油组合起来形成粗油。粗油通过去磷脂(脱胶(degumming))；去游离脂肪酸(碱法精制(caustic refining))；去色素、金属和氧化产物(脱色)；和去散发气味的化合物(脱臭)纯化成商业产品。DHA含有6个双键，因此非常容易被氧化。在常规的种子油加工步骤(例如脱臭)中使用的高温，对于加工含有在种子油中天然存在的脂肪酸成分的种子油而言是足够的，甚至是优选的。然而，这些条件不适合加工含有反应活性高并且热不稳定的DHA分子的油。DHA在高温下会分解，并且它在种子油中的存在会给食用油生产带来问题。
发明公开
最近产生了经过遗传修饰的加拿大油菜植物和种子，其中含有可检测量的DHA(二十二碳六烯酸(C22:6、n-3))。WO2011/146524A1。然而，加工加拿大油菜籽产生植物油产品的传统方法不适合加工含有DHA的加拿大油菜籽。本文中描述用于加工含有可检测量的DHA的植物(例如加拿大油菜)的含油种子的方法。通过实施某些实施方案的方法，来自这样的含油种子的DHA可以保存在由该种子产生的植物油产品中。某些实施方案的方法可以用于生产满足传统芥花油规格的经加工的含DHA芥花油。在实施例中，这些经加工的含DHA芥花油具有良好的感觉和感官特征，从而可以方便这种健康油的市场销售和使用。
在实施方案中，用于加工含有可检测量DHA的含油种子的方法包括一步或多步常规种子油加工步骤，包括但不限于：制备、前加工、机械提取、溶剂提取、脱胶、中和/化学精制、脱色、脱臭和储存。在一些实施方案中，通过机械压榨从含有可检测量的DHA的含油种子中获得粗油，而不使用溶剂提取。在一些实施方案中，将通过机械压榨获得的粗油与通过对机械压榨过程中产生的压榨饼(press-cake)进行溶剂提取获得的粗油组合。机械压榨的油由于含有更少量的磷脂，所以具有比溶剂提取的油更高的DHA浓度。因此，在特定的实施方案中，对粗油的单独机械加工(不与溶剂提取的油合并)可能需要更少的步骤，并允许油作为“初榨油”(virgin)销售。
在特定的实施方案中，在含油种子加工的一个或多个步骤中采用相对低的温度。例如，在一些实例中，在脱臭过程中可以使用相对低的温度。在某些实施方案中，使用这样的低温可确保所得的油中DHA的保留高，而不会给油的品质或感官特征造成不利的影响。一些实施方案包含有关精制过程中对粗油的处理的具体细节。例如，粗油可以在精制过程中被“手工加料(handfed)”。
本文中还描述了包含根据本发明方法加工的含有DHA的植物油的油产品、食物产品和商品(commodity product)。
通过参考附图对多个实施方案进行详细的描述，前述的特征和其它特征将更为直观。
附图简述
图1是常规加拿大油菜籽加工步骤的例示，这些步骤可以用于生产芥花油粗油，后者可被进一步精制产生RBD芥花油。所图示的常规加工方法包括前处理(调理(conditioning)；压片(flaking)；和蒸煮(cooking))、机械提取(预压榨)和溶剂提取(溶剂提取；脱溶剂；溶剂蒸发)。
图2包括可用于进一步精制芥花油粗油产生RBD芥花油的常规加工步骤的例示。所图解的常规加工方法包括脱胶、化学精制、脱色和脱臭。在本发明的特定的实施方案中，脱臭步骤可以用非常规的低温和保持条件来完成，以允许DHA被保留在通过该加工方法精制的RBD油内。
图3包括在富含DHA的芥花油的含油种子加工步骤过程中观察到的DHA保留的图示。机械提取的油所含的DHA水平(大约1.3％)显著高于溶剂提取油(大约0.75％)。常规的脱臭步骤(包括在大约245℃蒸煮2小时)导致仅有32％的DHA保留。相比之下，使用非常规脱臭条件(在大约210℃蒸煮60分钟)的含油种子加工方法导致大约97％的DHA保留。
图4包括从在其含油种子中含有DHA的遗传修饰加拿大油菜的含油种子加工步骤过程中观察到的DHA保留的图示。见WO2011/146524A1。正如在DHA富集试验中观察到的，从遗传修饰的加拿大油菜获得的粗油和螺旋压榨油(expeller-oil)比溶剂提取油含有更多的DHA。而且，在常规油精制加工中加入非常规的脱臭步骤可大大提高DHA的保留。
图5是加拿大油菜和来自遗传修饰的加拿大油菜(GM)的含DHA芥花油的电子鼻(E-Nose)比较结果。图5(上)显示了所有数据在散点图(scatter plot)上的分布。图5(下)是RBD集群的展开图(expanded view)，显示了来自加拿大油菜和GM加拿大油菜的RBD油之间的紧密相似性。
实施本发明的模式
1.数种实施方案概览
本文中描述了一种改良的用于加工包含二十二碳六烯酸(DHA)的含油种子样品(例如加拿大油菜籽)或植物粗油样品的方法，其可用于生产含有DHA的RBD油产品。尽管本文中所述的方法对于生产不含DHA的RBD油不是必需的(并且可能是不利的)，但是这些方法基本上避免了用于生产RBD油的含DHA的含油种子或粗油样品中DHA的分解和/或损失。在本发明一些实施方案中包含的方法提供了一种成本高效的含油种子纯化方法，其易于产业化而用于最大限度地保留DHA，例如从含有可检测量的DHA的遗传修饰加拿大油菜产生的油产品中的DNA。通过本文中所述的方法生产的经加工油(例如芥花油)可以符合常规的芥花油规格，并可以具有良好的感官特性，从而便于含DHA油产品的市场化和/或应用。
II.缩写
DC    干燥机-冷却机
DCP   直流等离子体
DHA   二十二碳六烯酸
DI    去离子的
DT    蒸脱机(desolventizer-toaster)
DTDC  集成的蒸脱机-干燥机-冷却机
GC    气相色谱
ICP   感应耦合等离子体
NHP   非水合性磷脂
RBD   精制、脱色和脱臭的
TOC   总有机碳
III.术语
加拿大油菜：“加拿大油菜(Canola)”是指油菜(rapeseed)[芸苔属植物(Brassica spp.)]，其芥酸(C22:1)含量最多为2％重量(与种子的总脂肪酸含量相比)，并且可产生(在压碎后)含有小于30微摩尔(μmol)每克脱脂(无油)粕的葡萄糖异硫氰酸盐(glucosinolate)的风干粕(meal)。这些类型的油菜基于其可食用性而区别于这些物种的更加常规的品种。芥花油被认为是一种优秀的可食用油，因为它们含有低水平的饱和脂肪酸。
尽管油菜籽粕的蛋白质相对较高，但其高纤维含量降低了其可消化性以及用作动物饲料的价值。与大豆粕相比，普通菜籽粕含有更高的膳食纤维值。由于其高膳食纤维，加拿大油菜籽粕的可代谢能量(ME)比大豆粕低大约20％。因此，该粕的价值比其它含油种子粕，例如大豆粕要低，特别是在猪和家禽的饲料中。Rakow(2004a)Canola meal quality improvement through the breeding ofyellow-seeded varieties—an historical perspective、AAFC Sustainable ProductionSystems Bulletin。此外，在一些加拿大油菜粕中存在的葡萄糖异硫氰酸盐也降低了其价值，因为这些化合物对家畜的生长和繁殖具有有害作用。
加拿大油菜品种部分地用其种皮颜色进行区分。种皮颜色一般分成两种主要类型：黄色和黑色(或暗棕色)。还可见这些颜色的不同深浅，例如红棕色和黄褐色。种皮颜色越浅的加拿大油菜品种被广泛地观察到具有越薄的种皮，因此比深色种皮品种具有更少的纤维和更多的油和蛋白质。Stringam等.(1974)Chemical and morphological characteristics associated with seed coat color inrapeseed、见Proceedings of the4th International Rapeseed Congress、Giessen、Germany、99-108页；Bell and Shires(1982)Can.J.Animal Science62:557-65；Shirzadegan和(1985)Fette Seifen Anstrichmittel87:235-7；Simbaya等.(1995)J.Agr.Food Chem.43:2062-6；Rakow(2004b)Yellow-seededBrassica napus canola for the Canadian canola Industry、AAFC SustainableProduction Systems Bulletin。这一点在直观上是有道理的，因为如果不需要能量用于产生种皮纤维成分，那么加拿大油菜可以花费更多的能量用于产生蛋白质和油。还有人报道黄色种子的加拿大油菜品种具有低葡萄糖异硫氰酸盐含量。Rakow等.(1999b)Proc.10th Int.Rapeseed Congress、Canberra、Australia、Sep.26-29、1999、Poster#9。因此，人们寻求开发黄色种子的加拿大油菜品种作为提高加拿大油菜粕饲料价值的可能手段。Bell(1995)Meal andby-product utilization in animal nutrition、见Brassica oilseeds、production and utilization.Kimber和McGregor编辑、Cab International、Wallingford、Oxon、OX108DE、UK、301-37页；Rakow(2004b)、见前文；Rakow&Raney(2003)。
已经显示，与欧洲油菜(B.napus)(例如芜菁(B.rapa)和芥菜(B.juncea))紧密近缘的黄色种子形式的芸苔属物种的种子和次生的粕具有较低水平的纤维。黄色种子欧洲油菜种质的开发已经证明，通过整合来自近缘芸苔属物种的控制种子着色的基因，可以降低欧洲油菜中的纤维。然而，在目前可得的黄色种子品种中黄色种皮的遗传涉及多个隐性等位基因，这使得将来自近缘芸苔属物种的控制种子着色的基因整合到有价值的含油种子芸苔品种(例如加拿大油菜品种)中变得复杂。而且，由于在黄色种皮从其他芸苔属物种例如芥菜(juncea)和埃塞俄比亚芥(carinata)渐渗(introgressed)时染色体配对不良所导致的“豆荚卷曲”(pod curling)也是在整合黄色种皮颜色过程中通常会遇到的问题。
油含量：如本文中所使用的，“油含量”是指植物或植物部分(例如种子)中油的一种特征。在一些实施方案中，油含量被表示为全干种子的百分比。在一些实施方案中，特定的种子油含量是特定的种子品种的特征，并可用于区分特定品种的植物与属于相同物种的其他植物。油含量可通过使用各种分析技术加以测量，例如但不限于：NMR、NIR、FAME分析和索氏提取。
在特定的实施方案中，特征性的油含量可以包括对“百分比油酸”和/或“百分比亚麻酸”的描述。如本文中所使用的，“百分比油酸”是指通过FAME分析确定的油酸占总种子油的百分比。如本文中所使用的，“百分比亚麻酸”是指通过FAME分析确定的亚麻酸占总种子油的百分比。
FAME分析可以用于测量样品中的总脂肪酸中特定脂肪酸的百分比组成。对于种子油，可以通过从种子提取油样品，产生油样品中存在的脂肪酸的甲酯，和使用气相色谱分析样品中各种脂肪酸的比例，来确定该百分比。如此确定的油含量可以是品种的区别性特征。
多不饱和脂肪酸：如本文中所使用的，术语“多不饱和脂肪酸”或“PUFA”是指碳链长度为至少16个碳，至少18个碳，至少20个碳，或22个或更多个碳，并具有至少3个或更多个双键、4个或更多个双键、5个或更多个双键、或6个或更多个双键的脂肪酸，其中所有双键均为顺式构型。
长链多不饱和脂肪酸：如本文中所使用的，术语“长链多不饱和脂肪酸”或“LC-PUFA”是指含有3个或更多个双键、碳链长度为18以上，碳链长度为20以上的脂肪酸；或具有至少3个以上双键，4个以上双键，5个以上双键，或6个以上双键，碳链长度为22个以上的脂肪酸。ω-6系列的LCPUFA包括，但不仅限于：γ-亚麻酸(C18:3)；二-高-γ-亚麻酸(c20:3n6)；花生四烯酸(c20:4n-6)；肾上腺酸(也叫二十二碳四烯酸或DTA)(c22:4n-6)和二十二碳五烯酸(c22:5n-6)。ω-3系列的LCPUFA包括，但不仅限于：α-亚麻酸(C18:3)；二十碳三烯酸(c20:3n-3)；二十碳四烯酸(c20:4n-3)；二十碳五烯酸(c20:5n-3)；二十二碳五烯酸(c22:5n-3)和二十二碳六烯酸(c22:6n-3)。LC-PUFA还包括具有超过22个碳和4个或更多个双键的脂肪酸，例如但不限于，C28:8(n-3)。
物理精制：如本文中所使用的，术语“物理精制”是指如下的加工过程，其中粗油或脱胶油中的游离脂肪酸通过蒸发除去，而不是像碱法精制加工中那样被中和并作为皂料(soap)除去。
皂化：如本文中所使用的，术语“皂化”是指作为脂肪酸脂的甘油三酯被碱(例如苛性钠NaOH)水解，形成羧酸盐。
IV.含油种子加工
实施方案包括用于生产含有至少一种PUFA的精制油(例如RBD油)的方法。特定的实施方案包括产生含有DHA和/或EPA的油。在一些实施方案中，该方法可包括通过例如提取(例如压榨)从产PUFA的遗传修饰植物(例如加拿大油菜)回收油，并加工来自遗传修饰植物种子的油。因此，特定的实施方案包括提供遗传修饰的植物，其中该遗传修饰植物产生在相同物种的野生型植物中不会发现的类型或量的PUFA。在一些实施方案中，本发明的方法可以包括从通过添加一种或多种PUFA而被补充或强化的油样品添加或精制油。
在一些实施方案中，用于生产含有至少一种PUFA的油的方法可包括从产生DHA和/或EPA的遗传修饰芸苔属物种植物获得粗种子油。这些粗种子油可以包含，例如，这样的脂肪酸含量，其包括：占重量的大约70％或更高的油酸(C18:1)，和/或包括大约4％或更低的量的亚麻酸(C18:3)。这些用于人类消费的油一般被认为是健康的，并且被认为与具有更高亚麻酸含量的油相比，具有更高的稳定性以供食品工业(foodservice)和消费性包装商品(consumerpackage goods)应用。这些油还可以减少对氢化的需要，并且与食品中包含的其它油相比，具有营养上的优势。含有至少一种PUFA的油(例如可以根据本发明一些实施方案所生产的)的氧化稳定性可以通过添加抗氧化剂和/或本领域已知的其它添加剂加以提高。
在一些实施方案中，用于回收油的遗传修饰植物可以包含一种或多种PUFA，包括，例如但不限于，EPA(二十碳五烯酸(C20:5，n-3))，DHA(二十二碳六烯酸(22:6，n-3))，DPA(二十二碳五烯酸(C22:5，n-6或n-3))，ARA[二十碳四烯酸或花生四烯酸(arachidotlic acid)(C20:4，n-6)]，GLA(C18:3、n-6)、ALA(C18:3、n-3)、SDA(C18:4、n-3)，和前述的任意组合。在一些实施方案中，用于回收油的遗传修饰植物可以是经过遗传修饰从而重组表达PUFA合成酶系统和PPT酶的植物。在特定的实施方案中，这种植物可以被遗传修饰，从而进一步表达辅助蛋白(例如ACoAS、GPAT、LPAAT、DAGAT或ACC酶)，用于提高该遗传修饰植物的PUFA(或PUFA合成酶的其他生物活性产物)的产生和/或积累。可用于本发明一些实施方案的遗传修饰植物的实例包括在PCT国际专利公开No.WO2011/146524A1中描述的产LC-PUFA植物。
在一些实施方案中，用于加工RBD油产品的含油种子可以由高等植物产生，既包括双子叶植物也包括单子叶植物。在实施方案中，含油种子由可消费植物(例如用于产油的作物)产生。在特定的实施方案中，产生含油种子的植物可以是，例如但不限于：加拿大油菜(Brassica napus)；油菜籽(B.napus)；印度芥菜(B.juncea)；埃塞俄比亚芥(B.carinata)；萝卜(B.rapa)；甘蓝(B.oleracea)；大豆(Glycine max)；亚麻籽/亚麻(Linum usitatissimum)；玉米(Zea mays)；红花(Carthamus tinctorius)；向日葵(Helianthus annuus)；烟草(Nicotiana tabacum)；拟南芥，巴西坚果(Betholettia excelsa)；蓖麻(Gossypium spp.)；椰子(Cocusnucifera)；芫荽(Coriandrum sativum)；棉(Gossypium spp.)；花生(Arachishypogaea)；希蒙得木(Simmondsia chinensis)；油棕(Elaeis gdineeis)；橄榄(Oleaeurpaea)；水稻(Oryza sativa)；笋瓜(Cucurbita maxima)；大麦(Hordeum vulgare)；小麦(Triticum aestivum)；和浮萍(Lemnaceae sp.)。含油种子植物的任何或全部基因型和栽培种均可在某些实施例中使用，基因型和栽培种的选择由从业者自由裁量。
本发明的实施方案包括可有效保持油样品中的PUFA(例如DHA和EPA)的特定的油加工和/或精制方法。经过加工或精制的油可以通过多种油精制加工方法的任一种常规地获得，包括例如但不限于：超临界流体提取、压榨、溶剂提取和前述的组合。本发明实施方案的方法是指在这些本领域技术人员已知的常规方法学中的系统、加工和加工步骤。例如，在通过溶剂提取获得的油中，油/溶剂混合物称作“混合油”(miscella)，在除去溶剂后仍保留的脂质称作“粗油”。压榨或榨出的油称作“压榨油”。如前文提示的，可以通过顺次应用前述的系统和方法对油进行加工。例如，芥花油可以如下获得：首先通过压榨加拿大油菜籽获得榨出粗油和压榨饼。随后可以用己烷进行溶剂提取来移出压榨饼中剩余的油，产生混合油。在从混合油除去溶剂之后，获得溶剂提取的粗油。然后可以将榨出粗油和溶剂提取粗油合并，获得未精制的芥花油。
通过机械压榨和/或溶剂提取获得的植物粗油是脂质的混合物，脂质包括例如但不限于：三酰基甘油、磷脂、甾醇、生育酚，和游离脂肪酸。粗油还含有痕量金属和其它化合物。为了产生供进一步使用(例如消费)的油产品，经常需要对粗油进行进一步的加工/精制。常规的油加工方法、以及本发明一些实施方案的加工方法，可以包括一个或多个加工步骤，包括例如但不限于：前处理、机械压榨、溶剂提取、脱胶、精制(中和)、脱色和脱臭。在油加工平台中可以任选地包括的其它步骤包括脱蜡、氢化、部分氢化、酯化、酯交换、转酯化、分级和水解。
某些含油种子可以通过顺次应用这些步骤来进行加工。例如，芥花油可以如下获得：首先通过压榨含油种子获得榨出粗油和压榨饼。随后可以用己烷进行溶剂提取来移出压榨饼中剩余的油，产生混合油。在从混合油除去溶剂之后，可获得溶剂提取的粗油。然后将榨出粗油和溶剂提取油合并，获得未精制的芥花油。油加工平台中的步骤可以独立进行或者以集成或部分集成方式进行。
i.前处理/准备
在一些实施方案中，在从植物收集含油种子之后，但在从含油种子提取粗油之前，可以使含油种子经历一个或多个前处理步骤。尽管含油种子可能包含大约20％-大约50％量的油，但是完整种子中的油被紧密结合在细胞内，所以或者必须用强力将油移出，或者使之更容易与溶剂接触以方便溶剂提取。实施前处理可以是为了适当地准备含油种子以便进行油提取(溶剂法或机械法)，以及在一些实例中，为了从种仁或肉中除去外壳和/或其它材料。因此，特定的实施例可以包括一个或多个前处理步骤，例如但不限于：清洗；分离污染材料；调合(tempering)；除皮(scaling)；碾压(cracking)(例如利用槽纹滚筒或研磨器)；调制/蒸煮(conditioning/cooking)；抽吸(aspirating)；干燥；脱壳/剥皮(dehulling/decortictating)；热脱壳；压片(flaking)；和储藏。
清洗方法有诸多变化，这取决于所用的特定含油种子和样品的初始品质。对于特定样品，建议，例如，除去植物茎、杆、叶和外来材料。外来材料可能分解，并导致储藏的种子堆发热，从而降低油的品质。一些实例中的清洗方法可以包括使用被设计用于除去混入金属的磁铁，设计用于除去大而重的材料的筛粒机(scalper)，和/或设计用于除去细小材料和过大材料的大小分拣器(sizingscreener)。在特定实例中还可以采用抽吸(aspiration)，以除去较轻的外来材料。包括组合使用旋转或振动的粗筛(coarse screen)、卷筒(reel)和抽吸的清洁过程通常称为“筛粒(scalping)”，并且这些过程可以包含在本发明的特定的实施方案中。清洁和筛粒装置的供应商包括Buhler(Plymouth、MN)、Carter-Day(Fridley、MN)、和Kice Metal Products(Wichita、KS)。
为了方便油提取或其它处理步骤，建议在提取之前控制含油种子中的水分水平。因此，可以在前处理过程中干燥含油种子。可以使用大的垂直开放板框式谷物干燥机(Large、vertical、open-flame grain dryer)干燥种子。谷物干燥机的实例可以包含多个含油种子的柱(columns)，这些柱缓慢地向下迁移通过该装置；其中，柱的上部用于干燥，下部用于冷却。也建议将种子中的湿度提高到特定的水平。例如，可以混合含油种子和水，并让它们达到平衡。
压片和碾碎可以用来破坏含油种子的细胞壁，使种子油更容易被接近。压片可用于产生厚度为例如大约0.25-0.37mm(例如0.30mm)的薄肉片(meatflakes)。可以在一些实例中用于在提取之前压片或碾碎含油种子的装置实例包括，但不限于：轧片机(flaking mill)；压碎机(cracking mill)(可从例如Buhler、CPM Roskamp(Waterloo、IA)获得)；研磨机(例如咖啡研磨机)；和双辊压片轧辊(例如可以从Bauermeister Inc.(Memphis、TN)获得的光面辊)。可以对某些压片和/或碾碎设备的设置进行调节，从而产生期望厚度的种子部分(seed part)。在特定实例中，在前处理过程中用咖啡研磨机碾碎含油种子。
还可以在前处理过程中蒸煮或加温含油种子，以使蛋白质变性，释放油，和/或使酶失活。例如，油菜籽含有一种酶称芥子酶(myrosinase)，其催化葡萄糖异硫氰酸盐水解产生不想要的化合物，例如异硫氰酸盐和腈。可以在多级蒸煮机(cooker)中蒸煮油菜籽，使芥子酶失活。例如，可以在不到5分钟内将油菜籽预加热到20-50℃，然后与120℃的流通蒸汽接触。葵花籽一般不需要高温下蒸煮。碾碎并脱壳的大豆可以调制到大约65℃-大约90℃的温度，保留时间为例如大约20-30分钟，并用蒸汽调节湿度。加拿大油菜的葡萄糖异硫氰酸盐水平比常规的油菜籽大大降低，因此加拿大油菜可以在更低的温度下蒸煮来防止异硫氰酸盐和腈的形成(例如低于100℃)。在特定的实施例中，碾碎或压片的加拿大油菜籽在前处理过程中在大约75℃-大约95℃(例如大约85℃)的温度下蒸煮大约5分钟-大约60分钟(例如大约20分钟)。
蒸煮、调理和调合也可以用来使含油种子具有一定的弹性，以便于细胞破坏、油滴凝聚和蛋白质聚集，从而提高压片性能和提取效率。调理可以例如在配备内部蒸汽盘管(internal steam coil)的转鼓中或在浅盘蒸煮器(tray cooker)中进行。可以使用机械转臂搅动种子材料并提供均匀的加热。
在准备好含油种子之后，便可以从压片或含油种子材料中提取粗油。经过研磨或压片的含油种子可以直接提取(例如对于含油量较低的颗粒，例如大豆)，或者可以在提取之前机械压榨(例如对于高含油量的颗粒，例如加拿大油菜和葵花)。可以使用本领域已知的某些技术提高油的提取和/或准备好的材料的物理精制，包括例如但不限于：使已制备谷物材料中的酯酶失活；ALCONTM处理(Lurgi GmbH)；和使用膨胀器(expander)。
ii.机械提取
在实施方案中，可以对含油种子材料进行机械压榨来从含油种子材料中提取油样品。这种机械性油提取可包括，例如但不限于，如下步骤：蒸煮；压榨；挤出；沉降(settling)；饼蒸煮(cake cooking)；饼尺寸分选(cake sizing)；饼研磨(cake grinding)；修整(finishing)；和油过滤。在常规的机械提取过程中，含油种子经历极度的高温和压力，机械地强迫油离开含油细胞。在本发明特定的实施方案的一些实例中，可以机械压榨含PUFA的含油种子但不必极度加热。可用于特定实施例的机械压榨机的非限制性实例包括，但不限于：螺旋压榨机(screw press)，例如可以从Anderson International Corp.(Cleveland、OH)和Simon-Rosedowns(Hull、UK)获得的压榨机；和Press20A型压榨机(Skeppsta、Sweden)。在一些实例中，机械压榨可以从含油种子材料(例如含油种子的压片或研磨件)中提取至少大约60％(例如至少大约70％，至少大约80％，和至少大约90％)的油。相反，从机械提取产生的压榨饼可以含有大约15％-19％残油。
在一些实例中，机械提取可以包括将经过蒸煮的含油种子材料引入到机械压榨机中，在那里通过施加极端机械压力而移除可以获得的油(例如全部油的大约60％或更多)。机械压榨操作获得的油一般含有高浓度的粕渣(meal fine)，粕渣可以在筛槽(screening tank)中除去，随后在将粗油传递至精制步骤之前，进行压力叶片或盘和板框式过滤。在一些实例中，可以在过滤之前向机械提取的油中添加助滤剂(filter aid)(例如量为大约1％)。在一些实例中，用滤纸过滤机械提取的油，例如在置于收集容器或瓶上面的漏斗中。
在机械提取处理结束时，得到的饼通常紧实并且较硬，而提取出的种子油已借助在机械压力下通过排油栏(drainage bar)得到收集。在压榨操作之后，可以破碎和冷却压榨饼，并进行溶剂提取，用于最终的油移除。
iii.溶剂提取
在一些实施方案中，对含油种子材料(例如通过机械压榨产生的压榨饼)可以进行溶剂提取，以便从材料中移出并获得油。一般地，为了进行溶剂提取，可以使含油种子材料和溶剂以特定的溶剂对含油种子材料比(例如大约2:1-大约3:1)混合，并与溶剂保持接触特定的保留时间。然后可以收集由此获得的溶剂提取粗油并储存(例如在氮气下储存)直至进一步加工。溶剂提取可以包括如下的步骤/过程，包括例如但不限于：提取；脱溶剂/烘烤(toasting)；蒸馏；溶剂分离；混合油精制；和液相回收。可用于从含油种子材料提取油的溶剂包括，例如但不限于：己烷、异丙醇和超临界CO2。
更高的温度可以提高油的可提取性，因此从业者一般期望在常规的溶剂提取过程中保持尽可能高的温度。Bailey’s Industrial Oil&Fat Products、(2005)6thedition、Vol.5、chapter5.1.5(“solvent extraction”)、John Wiley&Sons、Hoboken、NJ。在本发明特定的实施方案的一些实例中，在从含有至少一种PUFA的含油种子材料中溶剂提取油过程中，可以使用相对较低的温度。
在一些实施方案中，溶剂提取包括利用提取器(例如逆流提取器、旋转提取器、和深床提取器)。一般地，当待提取材料进入提取器时，其与处于接近全油浓度的混合油接触。在此第一次清洗之后，混合油(其可能含有例如大约25％-大约30％的油)离开提取器进行溶剂蒸馏和回收。在经过数个清洗阶段后，对提取的材料(其可能含有例如大约25％-大约35％残余溶剂)进行脱溶剂，例如可以在蒸脱机(DT)或蒸发器中进行。可用于特定实例的提取器的一个非限制实例是SoxhletTM提取器(Ace Glass、Vineland、NJ)。可用于特定实例对提取材料进行脱溶剂的蒸发器的一个非限制实例是旋转蒸发器，例如Buchi RotavaporRE111TM(Buchi、Switzerland)。
一旦离开提取器，可以使混合油通过一系列蒸馏设备，以分离油和回收溶剂。该过程通常包括一系列降膜蒸发器(falling film evaporator)和蒸馏器。例如，第一效应蒸发器使用从DT释放的蒸汽和溶剂蒸汽，可以将混合油从大约28％浓缩到大约80％或更高。所释放的蒸汽可以被浓缩并发送到工作储罐(worktank)中，用于水-溶剂分离。然后，混合油可以传递到第二级蒸发器，后者通常在大气或真空条件下工作，在那里混合油浓度被提高到例如大约95％-大约98％油。最后，混合油可以进入油气提塔(oil stripper)或蒸馏器，其在低压(例如大约50mm Hg abs或更低)下工作，除去大多数剩余的挥发成分(volatiles)。
iv.脱胶
植物油加工，特别是高磷植物油(例如大豆油、玉米油和葵花油)的加工，通常包括一个称作脱胶的处理除去磷脂和卵磷脂(统称为“胶”)。脱胶还会从粗油样品中除去其它杂质，例如碳水化合物和蛋白质，并将油准备好进行化学精制和物理精制。脱胶可以包括如下的步骤/过程，包括例如但不限于：酸化；过滤；混合；水化；(离心)分离；过氧化物脱色；和干燥。如本领域已知的，水脱胶可用于除去对水相的亲和性大于油相的可水合的磷脂。然而，特定的处理一般要求高效除去不可水合的磷脂(NHP)。
在一些实例中，使用酸脱胶技术准备用于化学精制的油样品。酸脱胶可以通过向粗油样品(例如可以从机械和/或溶剂提取中回收的)中添加少量的酸(例如磷酸)，随后添加少量的水(清洗)，并分离含有磷脂的富含水的胶相(gumphase)。最终的产物是脱胶油。
在特定实例中，可以使用特定的酸处理和其它过程获得更低磷的脱胶油。这些过程是本领域技术人员已知的，它们利用磷脂酸中的钙、镁和铁盐对油相的亲和性超过水相，因此必须通过特定的处理从油中除去这一事实。用磷酸、柠檬酸或其它试剂在合适的温度、时间和在适当搅拌的条件下对油进行前处理，随后如上所述地进行水洗步骤，可以高效地除去含有磷脂的组分。在特定实例中，二氧化硅吸附过程也可以高效地沉淀这些磷脂。
已经开发出了酸脱胶方法的许多变化形式，以提高从这些处理获得的脱胶油的一致性。例如，一种开发用于加拿大油菜的方法包括在酸前处理之后并在离心之前引入少量的稀苛性碱。进一步，可以使用干法脱胶作为低磷脂油物理精制的前处理，作为水脱胶的可替代选项。该干法处理可以整合到脱色操作中，通常涉及引入酸，其在脱色过程中和被沉淀的磷脂一起被除去。
在一些实施方案中，含有DHA或EPA的油样品(例如可以通过压力提取提供的)可以通过如下的过程脱胶：其中将油样品与水(例如大约0.5％-2％水)和包含游离草酸和/或磷酸(或其合适的盐)的酸水溶液以基于油重量的量混合。在一些实例中，脱胶可以通过如下过程进行：过程包括向油样品添加大约0.1％-0.3％的磷酸(例如大约0.1％的85％磷酸)(基于油的重量)。在常规的脱胶过程中，随后可在大约75℃-大约95℃的温度下搅拌油-水-酸混合物，保持时间为大约20分钟-1小时，借此使油样品脱胶。在本发明特定的实施方案的一些实例中，含PUFA的油样品可以被加热到大约40℃-大约70℃(例如大约50℃)，并可以添加大约2％水(温度为大约80℃-大约100℃)。然后，可搅拌油-水混合物大约10分钟-大约30分钟(例如大约20分钟)。
在磷脂和卵磷脂通过酸脱胶被分离成水相后，可以对该油-水混合物进行离心，以除去胶和其它杂质，并获得脱胶油。充分离心使水相和油相分离。油相可以通过例如倾滤(decanting)或移液(pipetting)与水相分离。
v.精制/中和
“精制”是指旨在通过引入碱，并通过离心分离重相不可溶材料，来中和油样品(例如脱胶油)中存在的游离脂肪酸的过程。精制也可以实现磷脂、发色体和其它杂质的除去。精制包括物理和化学操作二者。一般地，化学精制可以通过向脱胶油中添加少量碱性物质，并对碱性油离心以除去含有皂化脂肪酸(肥皂)盐的皂脚相(soapstock phase)，并获得精制油来进行。
精制可以在开放批处理系统(open batch system)或在连续处理操作中进行，并且可以和脱胶联合进行。物理精制操作一般与脱胶、脱色和脱臭操作合并在单个系统中(例如集成的蒸汽精制系统)。
一些实施方案利用化学苛性碱精制处理。苛性碱精制可包括如下步骤/过程，包括例如但不限于：加热；苛性碱与粗油或脱胶油混合；(离心)分离；保持；添加清洗水；和干燥。苛性碱精制与可选择的物理方法相比具有多种优势。例如，如果脱胶操作没有完成或者无效，那么苛性碱精制将除去大部分的磷脂。类似地，如果存在大量的金属(特别是钙和/或镁)，它们可以在该过程中除去。苛性碱精制还可一般地用于不同类型的含油种子；即设计用于一种油的系统可以一般地对另外的油产生令人满意的结果。
在一些实例中，苛性碱精制处理可以包括注射冷的粗脱胶油与一定量的前处理酸(例如磷酸)，以帮助除去不可水合的磷脂。例如，在加拿大油菜中，可以通过紧邻苛性碱添加之前的区域混合器和以及第二区域混合器将酸添加到油中，这可以减少精制损失并改善油的颜色。使用的任何酸的量最好是尽可能小，因为它必须用碱中和。给定批次粗油中的不能水合的磷的量可以用在线DCP/ICP分析设备进行测量。或者，从业者可以根据他们的经验估计磷水平，并提供比除去预期量的磷所需的量更多的量，以便补偿微小的偏差。
在一些实例中，苛性碱精制处理可以包括加热粗油或脱胶油(例如大约40℃-大约70℃(例如大约60℃))。然后，向油中添加定量的温度受控的稀苛性碱溶液(例如苛性钠)，其中限定的量可以通过例如测量或估算油中脂肪酸的水平加以确定。稀苛性碱溶液的准备可以通过将一批重苛性碱和软化水准备成已知的特定重量和温度(例如16-24B°)来实现。也可以使用一系列测量溶液的流动和密度的质量-流设备来制备中和溶液。该方法在如下的系统中是期望的，在该系统中该方法可以与ICP和计算机控制系统集成。
要使用的中和溶液的量是基于用于中和游离脂肪酸的苛性碱的理论量，加上任意的过量用于除去其它杂质。一般而言，为了除去游离脂肪酸和其它杂质而必须使用的过量苛性碱的量优选尽可能小，以便使中性脂质的皂化最小化。例如但不限于，向脱胶油中添加的氢氧化钠的量为大约2％-大约20％过量(例如大约12.5％)(根据油的重量)。在确定待使用的中和溶液的量时，从业者应当考虑前处理酸会影响游离脂肪酸滴定试验，因此应当相应地调整所算出的过量。
在一些实例中，在油与定量的温度受控的稀苛性碱溶液混合后搅动或搅拌油-苛性碱溶液，例如使用在线高剪切混合器或搅拌或静止搅拌设备来搅动或搅拌油-苛性碱溶液。游离脂肪酸的皂化几乎是即刻发生的，但是可能需要一定的保留时间，使任何过量的苛性碱和水使磷脂水化和与色素反应。在某些实施例中，在保留期间可提供机械搅拌混合，但是理想地的是监视和/或控制该搅拌，以避免产生在离心时不会分离的稳定乳状液。合适的保留时间一般取决于所处理的油的类型和品质。例如，大豆油可能需要5分钟或更长时间以完成保留，而玉米油则需要更短的保留时间。Farr(1987)“Effects of SoybeanHandling and Storage on Product Quality in Soybean Extraction and OilProcessing,”展示在Food Protein Research&Development Center、Texas A&MUniversity、67-10页。
在一些实例中，可以对油-苛性碱溶液加热(例如加热到大约75℃-大约80℃)，以降低粘性以及更完全地分离肥皂和油。在典型的常规苛性碱精制过程中，加热油-苛性碱溶液到大约75℃-大约80℃。在本发明特定的实施方案的一些实例中，加热油-苛性碱溶液到大约40℃-大约70℃(例如大约65℃)。已经观察到，如果油没有经历由蒸汽提供的高温梯度，分离效率会受损。Bailey’s Industrial Oil&Fat Products、(2005)、前文、5.1.7章(“caustic refining”)。因此，常规的苛性碱精制过程通常采用蒸汽。
在一些实例中，在保留混合之后(以及任何加热之后)将油-苛性碱溶液离心，以分离肥皂与油。油可以在分离之后通过例如倾滤或移液与肥皂分离。
在一些实例中，离心之后，重相皂脚进入酸化系统，或者在一些情况下，被引回到粕流中。对于从离心产出的轻相精制油，可以加热、与热水(例如大约10-15％)混合进行清洗，然后混合。为了使肥皂的吸附最大化，建议使油-水混合物经历进一步的保留混合，其中同样进行充分但轻柔的搅拌，以避免乳化。可以在清洗水中添加磷酸，以减少精制油中残余的肥皂，并且使油和水相之间更好地分开。
在特定实例中，轻相精制油-水混合物可以经历第二次(水洗)离心。该第二次离心可以大大减少残余的肥皂(例如降低因子达10:1或者更高)，使油中剩余的残存肥皂浓度小于每百万50份。在该第二次水洗离心之后，可以将油送至真空干燥器，在那里除去残余的水分。作为替代，残余水分可以携带到脱色处理中，因为残余水分可以提高某些脱色剂的吸附效率。从水洗离心移出之后，油一般已冷却，此时可以完成充氮(nitrogen blanketing)。在备选的实例中，省略水洗步骤，在随后的脱色处理过程中，可以利用水合二氧化硅或其它材料吸附肥皂和残余的磷。
vi.脱色
脱色是在油精制过程中采用的吸附性清洁处理。尽管脱色在常规上用于降低食用油的颜色，但是现代吸附脱色技术可用于从油中除去任何不想要的化合物，因此可用于提供一系列的质量上的好处。因此，可以根据技术人员的裁量来选择吸附剂和特定的过程，以优化各种杂质的吸附。例如，脱色可用于除去在脱胶和中和后残余的磷脂。磷脂和在苛性碱精制过程中产生的残余肥皂也可以通过脱色吸附过程加以除去。如果它们没有被除去，这些肥皂可能在脱臭过程中导致聚合。氧化产物，无论是初级的(过氧化物)还是次级的(茴香胺)，也可以在脱色过程中被除去。进一步，痕量金属(例如铁和铜)可以在脱色过程中被除去。尽管脱臭处理中的柠檬酸螯合可以减少这些金属的催化氧化潜力，但是仍然建议在过程中尽可能早地除去它们。根据前述，脱色有效性的指标可以是如下的一种或多种：颜色、残余肥皂含量、磷含量、过氧化物含量和茴香胺含量。
在一些实施方案中，脱色程序可以包括，例如但不限于：除气；酸预处理/调理；引入漂白剂(例如，漂白粘土)；二氧化硅处理；漂白剂保留时间(例如大约30分钟)；真空脱色；和过滤/去除粘土和吸附材料。在特定实例中，脱色过程可以包括加热将油与固体漂白粘土一起加热(例如达到大约90℃-大约110℃，例如大约95℃的温度)，以除去杂质，包括发色体和残余肥皂，并过滤，以提供精制、脱色(RB)油。脱色可以在开放批处理系统或在连续处理操作中实施。
漂白粘土(bleach clay)通常来自粘土矿床(clay mineral deposit)，并且已经过干燥、研磨、过筛并可能用酸活化。漂白粘土通常是非常细的粉，例如其中大约90％的粘土颗粒的直径小于大约80μm，和/或其中基本上全部的粘土颗粒直径小于大约200μm。一种常见的适于酸活化的漂白粘土类型是Bentonite，其包含称作蒙脱石(Montmorillonite)的硅酸铝。有若干公司提供漂白粘土，包括例如：Sud-Chemie Inc.(Munich，Germany)、LaPorte Absorbents(Cheshire，UK)、和Engelhard Corp.(Beachwood，OH)。某些实例中可以使用的漂白粘土的无限制实例包括Sud Chemie的Tonsil126FF和Englehard的Gr160漂白粘土。
在一些实施方案中，脱色可以包括油样品(例如化学精制油)的除气。例如，可以在真空下加热油样品以使油除气。在特定实例中，可以加热油到大约40℃-大约70℃(例如大约50℃)的温度，用于除气。在一些实施方案中，油在脱色前可以用酸预处理(“干法脱胶”)。例如，可以添加柠檬酸溶液(例如重量百分比为0.2％的50％柠檬酸)。
食用油的主要色素是叶绿素(绿色)和类胡萝卜素(橙色)。类胡萝卜素通常在脱臭(和/或氢化)过程中被除去，而叶绿素在脱色过程中被除去。对于高叶绿素种子(例如加拿大油菜)的脱色，通常使用更大剂量的漂白粘土，而且可以通过添加活性炭或其它试剂来加强。在经过充分的保留期之后，可以在浆料罐中向油加入粘土和/或其它脱色剂。这些试剂可以加入油的滑流(slip-stream)中，其中所得的浆料可以导回主油流中，或者可以引入到设计用于容纳全部油流(例如在氮气下)的罐中保持数分钟。或者，可以将脱色材料直接引入脱色容器中，而不必在单独的浆料容器中对油进行预浆化。进一步，可以将常规的保留脱色器替换成这样的装置：其中通过一系列管道为粘土-油浆料提供保留时间。
在一些实施方案中，可以在添加漂白粘土之前向油中添加二氧化硅，以除去肥皂和磷脂。可在一些实例中使用的二氧化硅的一个非限制实例是大约0.5％(以油的重量计)TrysilTM(Grace Davidson、Columbia、MD)。二氧化硅可以连续添加到浆料系统中的油中，该浆料系统处于大气条件，并具有来自水洗步骤的残余水分。对于干法脱胶系统，可以向油中添加水和一定量的预处理酸，以增加水分含量。在与二氧化硅反应之后，在添加漂白粘土之前，可以在真空(例如大约1mm Hg、大约5mm Hg、大约10mm Hg、和中间值)下除去水分，其中漂白粘土可以被预先装载在滤器上。
在脱色容器或罐中还可以引入其他材料，例如为芥花油引入活性炭，和/或其它油和助滤剂。可以将油在与脱色剂接触的条件下搅拌(例如使用蒸汽搅动或机械搅拌)达一定的保留时间，然后可以将其输送到至少一个脱色滤器中，用于除去固体和吸附的材料。在本发明特定的实施方案的一些实例中，可以在大约90℃-大约110℃(例如大约95℃)的温度及真空下，将油在与脱色剂接触的条件下搅动大约15分钟-1小时(例如大约30分钟)。
在保留期之后，可以使用闪蒸器(flash vessel)除去油中的水分。可以过滤脱色油除去痕量固体，然后油可以被冷却和储存(例如在氮气下)。在一些实例中可以向脱色油添加抗氧化剂，以抑制氧化。
vii.脱臭
在实施方案中，对通过上文记载的加工步骤产生的RB油可以实施脱臭步骤。大多数粗植物油含有天然组分，除非将这些组分除去，否则它们会使得从其产生的RB油有令人反感的气味和味道。这些组分包括令人反感的发味体(flavor bodies)以及造成不良气味和颜色的氢化产物，它们都可以在脱臭器中除去。脱臭还直接增加所得油产品的货架期并改善其色泽。已经过精制、脱色和脱臭的油称作精制、脱色和脱臭油(RBD油)。
在一些实施方案中，含PUFA的油样品可以通过如下的方法进行脱臭，该方法包括，例如但不限于：除气；加热；真空加热；向油中注入(或喷射)蒸汽；冷却；闪蒸；过滤；馏出液回收；和获得脱臭油。油的蒸汽压和影响油的气味、颜色和稳定性的挥发性材料的蒸汽压之间存在非常大的差异，因此可以将这些挥发性的材料在低压(例如大约1mm Hg-大约4mm Hg)下从油中选择性蒸发出去。任何可以蒸发这些挥发性物质但不会破坏油的方法均可用作本发明实施方案中的脱臭过程。脱臭可以作为，例如但不限于，批处理、连续处理和半连续处理实施。
在一些实例中，脱臭系统可以包括使RB油除气(例如在大约60℃-大约90℃的温度下)。除气可能是加热油之前必须进行的，因为当含有氧气的油暴露于加热表面时，大多数种子油会沉积聚合物。在特定实例中，在油通过除气器之后，油可以通过一个油-油交换器。然后，可将油加热到脱臭温度。
脱臭一般包括一种或多种迫使不期望的挥发性物质进入蒸汽状态的条件。例如，脱臭通常涉及在高温和低压下使油薄膜暴露于载气。可以引入解吸气(stripping gas)(例如蒸汽)用于搅动油，藉此使RB油样品中的全部油均暴露于表面条件。然后，解吸气将挥发性物质从脱臭器运载到蒸汽回收系统中。在特定的实施方案中，油样品的喷射(sparging)可以包括首先在真空下加热油样品到大约100℃的温度，然后将蒸汽以例如大约1％(油重量/小时)的速度喷射通过油。
本发明的实施方案可避免脱臭油中PUFA含量的特别急剧的降低，该降低可以特异性地归因于常规上用于蒸发挥发性物质的极端热条件。在常规的脱臭过程中，在极高的温度下(接近油的烟点；例如大约235-260℃)将载气导入油中，导入气体的时间长达数小时(例如大约90分钟)。在本发明的特定的实施方案中，在脱臭过程中引入到油样品中的载气的温度可以是例如大约200℃；大约202℃；大约204℃；大约206℃；大约208℃；大约210℃；大约212℃；大约214℃；大约216℃；大约218℃；大约220℃；和大约225℃。在一些实例中，导入的载气的温度是大约210℃。在本发明特定的实施方案中，向油样品中导入载气的时间可以为，例如，大约20分钟；大约25分钟；大约30分钟；大约35分钟；大约40分钟；大约45分钟；大约50分钟；大约55分钟；大约60分钟；大约70分钟；大约75分钟；大约80分钟；大约85分钟；和大约90分钟。在一些实例中，导入载气大约60分钟。
在被提升到脱臭温度之后，通常在脱臭容器中将油剧烈搅动指定的时间，直至大部分的挥发性物质被除去，并且所有热脱色均完成。然后对所得的油进行冷却。在油被冷却时，可以向油中引入少量的螯合剂(例如柠檬酸)和/或一种或多种抗氧化剂。在脱臭加工过程中除去的挥发性物质通常在蒸汽洗涤器(vapor scrubber)中浓缩和回收。剩余的挥发性气体(包括解吸流和其它挥发性更高的化合物)通常在真空系统中浓缩。一旦真空被打破，RBD油通常被保存在氮气和其它惰性气体下。
本领域已知有多种常规的脱臭方法。脱臭过程的实例包括，例如但不限于，如下文献中描述的脱臭技术：O.L.Brekke,“Deodorization,”见Handbook of Soy Oil Processing and Utilization,Erickson,D.R.等编辑.American SoybeanAssociation and the American Oil Chemists'Society,155-191页；和Bailey's Industrial Oil and Fat Products,第5版,第2卷(537-540页)和第4卷(339-390页)，Hui编辑，John Wiley and Sons,Inc。其它脱臭处理包括，但不限于，在美国专利6,172,248和6,511,690；和美国专利公开No.2005/0014237A1中描述的那些。
V.包含含PUFA植物油的产品
某些实施方案包括含有至少一种PUFA(例如DHA和/或EPA)的食物产品、增补剂(supplement)、治疗产品或营养药品(“油产品”)。特定的实施方案的油产品可以用于根据本发明实施方案的方法生产的油产品所适合的任何用途。一般地，用某些实施方案的方法生产的油可以在多种多样的烹饪和非烹饪应用中，例如在润滑油、润滑油添加剂、金属工作液、液压流体和防火液压液中，代替例如矿物油、酯、脂肪酸或动物脂肪。在特定的实施方案中，包含至少一种PUFA的油产品可以用于非烹饪或膳食过程和组合物中。通过某些实施方案的方法生产的油还可以并且可选择地用作改性油生产过程中的材料。用于改性油的技术实例包括分馏(fractionation)、氢化、改变油中油酸或亚麻酸的含量，和其它本领域技术人员已知的改性技术。
含有至少一种PUFA的油产品的非烹饪用途的非限制实例包括工业、化妆品和医学应用，以及任何用含有至少一种PUFA的油代替矿物油、酯、脂肪酸或动物脂肪的应用。使用含有至少一种PUFA的油产品用于化妆品的实例包括，用作化妆品组合物中的润肤剂；用作矿脂替代物；用作肥皂的组成部分(comprising part)，或者用作肥皂生产过程中的材料；用作口服溶液的组成部分；用作抗衰老组合物(ageing treatment composition)的组成部分；和用作皮肤或毛发泡沫气雾剂制备物的组成部分。含有至少一种PUFA的油产品的医学应用包括，例如但不限于，在抗感染的保护屏障中的应用。而且，ω-9脂肪酸高的油可用于提高移植体的存活。美国专利6,210,700。
在一些实施方案中，含有至少一种PUFA的油产品可以从下组中选出：食物、膳食增补剂、药物制剂、人化动物奶、婴儿配方食品、保健品、和功能食品。合适的药物制剂包括，例如但不限于：抗炎制剂；化疗剂；活性赋形剂(activeexcipient)；骨质疏松症药物；抗抑郁药；抗惊厥药；抗幽门螺杆菌药物；用于治疗神经退行性疾病的药物；用于治疗肝退行性疾病的药物；抗生素；和降胆固醇制剂。在一些实施方案中，含有至少一种PUFA的油产品可以用于治疗从下组选出的病症：炎症、急性炎症、胃肠道紊乱、癌症、恶病质、心脏再狭窄、神经退行性病症、肝退行性病症、血脂病症、骨质疏松、骨关节炎、自身免疫性疾病、先兆子痫、早产、年龄相关的黄斑病变、肺病症，和过氧化物酶体病症。
在一些实施方案中，含有至少一种PUFA的油产品可以是食品或功能食品。合适的食品包括，例如但不限于：精致烘焙品(fine bakery ware)；面包和卷(bread and rolls)；早餐谷物(breakfast cereal)；加工和未加工的奶酪；调味品(例如番茄酱和蛋黄酱)；乳制品(例如牛奶、酸奶和印度酥油)；布丁；明胶甜点；碳酸饮料；茶；粉状饮料预混物；鱼类加工产品；基于果汁的饮料；口香糖；硬糖果；冷冻乳制品；肉类加工产品；果仁和基于果仁的涂抹料(nut andnut-based spread)；面食；家禽加工产品；肉汤和酱；土豆片和其他条或脆片；巧克力和其他糖果；汤和汤料；基于大豆的产品(例如乳制品、饮料、乳脂、和增白剂)；基于植物油的涂抹料；和基于的植物的饮料。
在一些实施方案中，含有至少一种PUFA的油产品可以是动物的饲料或粉组合物(或用于饲料或粉组合物的添加剂)。术语“动物”包括所有动物，包括人。可给予含有至少一种PUFA的油产品的动物的非限制实例是非反刍动物(例如猪、家禽或鱼)和反刍动物(例如牛、绵羊和马)。术语“饲料”或“饲料组合物”是指任何适合于或者意图被动物摄取的化合物、制备物、混合物或组合物。
下面提供的实施例用于举例说明特定的特征和/或实施方案。这些实施例不应被认为对特定特征的公开或所例证的实施方案具有限制。
实施例
通过对产生DHA的遗传修饰加拿大油菜进行机械压榨和溶剂提取获得含有DHA的芥花油，并通过向常规芥花油添加DHA获得含有DHA的芥花油。从GM加拿大油菜机械压榨得到的油含有0.28％DHA，溶剂提取的油含有0.21％DHA。将这些提取油级分合并产生含有DHA的GM芥花油粗油。对GM芥花油和用DHA添加芥花油在各种条件下进行加工。在对常规油而言不优选的降低温度下(例如大约210-220℃，60min)对含DHA油进行脱臭的过程所产生的油含有0.24％DHA并具有理想的感觉和感官特征。当使用标准脱臭条件(235-260℃90min)处理时，油仅含有0.17％的DHA。
实施例1：材料和方法
(Dow Agrosciences LLC、Indianapolis、IN)是一种不产生DHA的标准加拿大油菜品种。将含油种子用咖啡研磨机精细研磨，并与Martek DHA-S粗油(Martek、Columbia、MD)混合。加拿大油菜种子用Martek油加标以达到1.2％w/w的DHA目标水平。将掺混后的样品在Hobart混合器(Hobart、Troy、OH)中混合过夜，并用不同的含油种子加工方法进行加工。图1和2提供了加拿大油菜籽和粗油加工步骤的流程图。每个单独的加工步骤在下文中有更详细的描述。DHA掺混的加拿大油菜籽的加工用不同批次的加拿大油菜籽重复三次，以检查重复性。
含油种子压榨  为了从加拿大油菜籽提取油，将种子在实验室中加温至室温。与常规的加拿大油菜籽加工步骤不同，将加拿大油菜籽在咖啡研磨机中研磨而不是压片。然后将研磨过的种子在炉中加热到85℃±10℃20分钟来进行蒸煮。加热处理之后，将研磨过的种子用压榨机Type-20A Press(Skeppsta、Sweden)进行压榨。将该螺旋榨出的粗植物油与1％助滤剂(基于提取油的重量)形成浆液，并用锥形烧瓶、布氏漏斗和Whatman#4滤纸过滤。然后将经过澄清的榨出油冷藏或冷冻保存，后来与溶剂提取油合并。
溶剂提取  对于来自含油种子压榨步骤的压榨机获得的压榨饼进行溶剂提取，以除去和收集剩余的残油。将压榨饼置于纤维素滤纸筒(cellulosethimble)，再把滤纸筒放到SoxhletTM提取器(Ace Glass、Vineland、NJ)中。使用己烷作为提取溶剂，使SoxhletTM提取器系统在大约70℃工作7-8小时。将溶剂提取后的压榨饼从纤维素滤纸筒移出，用气体脱溶剂(air-desolventized)后弃置。使用旋转蒸发器(Buchi Rotavapor RE111TM、Switzerland)对提取油和己烷混合物(混合油)进行旋转蒸发，以除去己烷。然后将该溶剂提取的油与榨出油合并，产生低酸粗芥花油。
脱胶  通过酸脱胶过程从低酸粗芥花油除去磷脂。在该过程中，将粗油转移到玻璃反应器中，并在温和搅动下加热到50℃±5℃。之后，向粗油添加0.1％(基于油的重量)的85％磷酸，并将混合物在50℃±5℃再温和搅动30分钟。保持30分钟后，向油中添加2％(基于油的重量)预热到50℃±5℃的去离子水。将油在50℃±5℃搅拌下再保持15-20分钟。经过保持时间之后，将油转移到离心瓶中，4,200rpm离心10分钟。通过倾析回收油，并弃去磷脂。
化学精制  在将芥花油脱胶之后，对其进行精制以除去游离脂肪酸。在该步骤中，将脱胶油置于玻璃反应器中，并在温和搅拌下加热到60℃±5℃。之后，基于其游离脂肪酸含量向油中添加12.5％苛性碱。苛性碱量的计算使用“Edible Oil&Fats Products:Processing Technology,”见Bailey’s Industrial Oil& Fats Products、第5版、第4卷、316页中的公式。将油加热，并在65℃±5℃下温和搅拌保持15分钟。经过保持时间后，将油转移到离心瓶中，4,200rpm离心10分钟。然后倾析出油用于进一步的加工，弃去被中和成肥皂的游离脂肪酸。
脱色  对将经过精制的芥花油进行脱色。以除去残留的肥皂、发色体(叶绿素)、氧化产物(醛和酮)和痕量金属。在脱色处理过程中，将精制油置于玻璃反应器中，并在温和搅拌下真空加热到50℃±5℃15分钟使油除气。之后，用氮气打破真空，向油中添加0.2％(基于油的重量)的50％柠檬酸。将油在50℃±5℃温和搅拌下再保持15分钟。然后，向油中加入0.5％(基于油的重量)的TrysilTM(Grace Davidson,Columbia,MD)。在温和搅拌下将油真空加热到60℃±5℃并保持30分钟。之后，向油中添加1-2％(基于油的重量)的漂白粘土Tonsil126FF(Sud Chemie、Munich、Germany)，然后在真空和温和搅拌下将油加热到95℃±5℃30分钟。经过30分钟的保持时间之后，将油冷却到50℃±5℃，用氮气打破真空，用锥形瓶、布氏漏斗和Whatmann#4滤纸过滤油。
脱臭  然后，对RB油进行脱臭，以除去氧化产物和有气味的化合物。这是如下实现的：通过将油置于能够被真空加热到非常高的温度并能够用蒸汽喷射油的玻璃反应器中。将油置于该容器中，并真空加热到100℃±5℃。当油达到100℃±5℃时，将蒸汽以1％(油重/小时)的速度喷射通过油。作为对照，使用常规脱臭方法，加热油到235℃±5℃，并在进行蒸汽喷射的同时保持该温度达90分钟。使用其它脱臭温度和保持时间获得的数据如表1所示。发现较低的温度和较短的喷射时间可提供出人预料的DHA含量保留。当加热油到大约210℃±5℃，同时用蒸汽喷射大约60分钟时，观察到最大的DHA保留。其它测试的温度和保留时间包括：(1)加热到245℃±5℃同时喷射大约120分钟；(2)加热到210℃±5℃同时喷射大约30分钟；和(3)加热到225℃±5℃同时喷射大约30分钟。在所有方法中，油随后被冷却到大约100℃±5℃，在该点停止蒸汽喷射，并用氮气破坏真空。
使用下面的测试确定使用该改良的加拿大油菜籽加工方法保留了多少DHA，并表征使用该方法生产的油的品质。
DHA浓度的FAME原料油(bulk oil)分析  执行FAME分析，定量来自油样品的DHA的量。通过在12x75mm试管中将20mg原料油与1.0mL己烷混合，准备用于FAME分析的油样品。涡旋振荡试管，将250μL稀释油等分到装有750μL己烷和40μL1％甲醇钠甲醇溶液的2mL压盖式钳口样品瓶(crimp-top vial)中。给瓶加盖，温和涡旋振荡10秒钟，在GC分析之前在室温下温育60分钟。
接着，将1μL样品注入装备有火焰电离检测器(FID)的Agilent6890GC(Agilent Technologies、Santa Clara、CA)中。甲酯参考标准品购自Nu-Chek-Prep公司(Elysian、MN)，用于鉴定被稀释到相同浓度作为样品的每个油样品中的脂肪酸峰。使用的柱子是0.25-mm ID和0.25-μm膜厚度的DB-2360m柱(Agilent Technologies)。炉温设定为190℃，并在整个运行过程中保持该温度。入口分流比(inlet split ratio)为1:25，入口温度为280℃。氢载气设定为3.0mL/min流速0.3分钟，随后以0.5mL/min斜升(ramp)至4.0mL/min并保持15.5分钟，随后以0.5mL/min的速度下降到3.5mL/min，并保持5.0分钟，从而总运行时间为24分钟。检测器温度设定在300℃，恒定组成的载气为20mL/min，燃料氢气流30mL/min，氧化剂流400mL/min。
使用Waters公司(Milford、MS)的EmpowerTM软件计算和报告每个测试样品的百分比面积和浓度。FAME峰通过与参考标准化合物的保留时间进行比较加以鉴定。每个样品的相对脂肪酸组成通过用FAME峰的总面积除以各个峰面积加以计算。
水分含量  为了分析加拿大油菜籽的水分含量，在分析之前，使用从超市购买的通用咖啡研磨机研磨含油种子。Denver Instrument IR-35水分分析仪(Bohemia、NY)的参数被设定为干燥温度130℃，自动分析时间25分钟。打开分析仪的盖子，将6.00±0.05克经过研磨的种子材料放在称重盘(weighingpan)上，并根据制造商推荐的操作规程对经过研磨的种子材料进行分析。
含油种子含量  使用Swedish管(Swedish tubes)实施溶剂提取用于确定含油种子或生物质中的油含量的方法。开始，称量3.00±0.1克加拿大油菜样品。向Swedish管(Carlson&Beauloye、San Diego、CA)添加3个不锈钢球和30mL己烷。将加拿大油菜籽样品转移到Swedish管中。使用#2氯丁橡胶瓶塞(stopper)密封Swedish管。将Swedish管置于EberachTM震荡器6015型(FisherScientific、Hampton、NH)中，并高速震荡1.5小时。将平底烧瓶称重精确至小数点后第四位，并记录重量。将由布氏漏斗(Fisher Scientific)和#113或#114Whatmann GF/C滤纸(Fisher Scientific)构成的真空过滤装置置于布氏烧瓶顶部。将粉碎的含油种子材料置于该过滤装置中，并通过真空过滤。使用旋转蒸发器蒸发己烷，其中不让水浴温度超过40℃。将含有粉碎的含油种子材料的平底烧瓶置于设定为35℃的真空炉中，将烧瓶干燥至少30分钟。将含有粉碎的含油种子材料的平底烧瓶称重精确至小数点后第四位，含油种子材料的油含量用公式1计算。
(1)％油含量＝(A-B)x100/W，其中
A＝烧瓶和粗油/脂肪的重量(克)
B＝烧瓶的重量(克)
W＝样品的重量(克)
颜色分析  使用LovibondTM PFX880(Wilkens-Anderson，Chicago，IL)分析来自加拿大油菜籽的脂肪和油的颜色。颜色分析使用标题为“AOCS RY”的LovibondTM格式化的色彩分析表(formatted color analysis scale)完成，分析的路径大小(path size)为2.5cms。为了确认分光光度计操作正常并获得正确的测量结果，将一个一致性滤片(conformance filter)置于机器中。当产生一个0.3R+/-0.2R和1/1Y+/-0.2Y读数时，则可确认分光光度计正常工作。对油脂样品进行测量。粗油、脱胶油和精制油的颜色读数通过将油放置在2.5cms玻璃小室中获取。脱色油、冬化油(winterized oil)和RBD油的颜色读数通过将油置于13.34cm玻璃小室中，并将路径尺寸变为13.34cms而获得。结果颜色被确定为0-20红和0-70黄的范围。RBD芥花油的规格是最大1红和10黄。
游离脂肪酸测定  使用Brinkmann808TitrandoTM自动滴定系统(Brinkmann Corporation，Dallas，TX)测定油样品中的游离脂肪酸。对AOCS官方方法(Official Method)Ca5a-40进行了修改以完成分析。称取样品7.05+0.05g粗/脱胶油，28.2+0.2g精制/脱色/冬化油，或56.4+0.2g脱臭油，置于含有小搅拌子的250mL烧杯中。将油样品均匀混合并完全液化；在加热板上加热，确保混合完全完成。接着，向粗/脱胶/精制/脱色/冬化油样品添加75mL中和的乙醇，而向脱臭油样品添加50mL中和的乙醇。下一步是添加0.25NNaOH(对于粗/脱胶油)或0.1N NaOH(对于未精制/脱色/冬化/脱臭油)到808TitrandoTM单位(unit)上。用DI水清洗pH计。然后，将乙醇和油混合物置于808TitrandoTM单位的合适搅拌盘上。将808TitrandoTM单位的滴定管头(tip)和pH计降低到溶液中。用TiamoTM软件(Metrohm、Milwaukee、WI)确定游离脂肪酸滴定值，并选择“12”的搅动速度设定，以便获得均匀的油混合物而不产生分层。自动计算游离脂肪酸含量，报告为：％油酸，％月桂酸和％棕榈酸。为每个样品完成3次实验。
对-茴香胺值测定  种子油中醛(二次氧化产物)的量用AOCS方法Cd18-90的修改方法加以测定。测量0.5-5.0+0.001gm的油样品。用异辛烷溶解油样品，并稀释到25mL，然后涡旋振荡混匀。用分光光度计在λ＝350nm测量异辛烷/油溶液的吸光度，并与异辛烷对照溶液进行比较。该吸光度记录为“Ab”。准备0.25g/100mL对-茴香胺的新鲜冰醋酸溶液。将5mL异辛烷/油混合物置于试管中，并添加1mL所述对茴香胺溶液。将试管封盖，并震荡溶液。室温温育10分钟后，用分光光度计在λ＝350nm测量异辛烷-脂肪/茴香胺溶液的吸光度，并与异辛烷/茴香胺对照溶液进行比较。吸光度记录为“Ab”。对茴香胺值用公式2计算。
其中
m是以克为单位的测试部分的质量。
过氧化值测定  用AOCS方法Cd8b-90的修改规程来测定油的过氧化值。所有物质均以每1,000g样品中氧化碘化钾的过氧化物的毫当量为单位来测定。最开始，在装有小搅拌子的250mL烧杯中称量油样品。将烧杯置于搅拌台上，添加50mL乙酸-异辛烷溶液(3:2v/v)溶解样品。接着，向样品中添加0.5mL饱和碘化钾溶液。将样品搅拌1分钟，然后向烧杯中添加30mL DI水。剧烈混合样品，直至所有试剂均完全混合。接着，向烧杯添加0.5mL10％十二烷基磺酸钠和0.5mL淀粉指示剂溶液。将烧杯转移到滴定搅拌台上，用0.02N硫代硫酸钠滴定溶液，使用Pt电极。使电极和滴定管头降低到样品的溶剂相中。使用TiamoTM软件(Metrohm、Milwaukee、WI)确定样品滴定水平。操作重复执行三次，确定样品的平均值，以及标准差和协方差值。
油稳定性  在RancimatTM(Metrohm、Riverview、FL)上在110℃根据制造商推荐的操作规程分析亚系列的样品。将3克等份的每种样品置于有标签的反应容器中，并在每个小瓶中插入一个空气入口和盖子。将收集容器用70mLMilli-Q水填充，并放在RancimatTM上。然后，将管子从所述反应容器接到收集容器。一旦达到110℃的设定温度，即把小瓶插入到加热块中，并开启RancimatTM的20mL/min气流。仪器监视收集容器中电导率的增加，并从电导率曲线的拐点确定油的氧化稳定性指数(OSI)断点(breakpoint)。然后，将OSI换算成标准AOM值，如Anwar et al.(2003)J.Am.Oil Chem.Sci.80(2):151-5所述。
生育酚分析  生育酚是在植物油中天然存在的抗氧化剂。开发了利用UPLC的高通量生育酚分析方法，以定量纯化的芥花油中存在的生育酚水平。分析生育酚含量的方法利用Waters AcquityTMUPLC，其使用BEH Shield C182.1x150mm、1.7μm粒度(Waters)。UPLC要求0.5mL/min的等度流(isocraticflow)，使用由95％乙腈与5％水构成的溶液占99.5％、和由70％IPA与30％MeOH构成的溶液占0.5％的溶液。
实施例2：转基因加拿大油菜籽中的DHA
加拿大油菜籽样品(单个种子或大宗样品)在己烷中用钢球研磨机匀浆，己烷中含有十七烷酸甘油三酯(Nu-Chek prep)作为三酰基甘油内参。在匀浆前，添加0.25M新鲜制备的甲酸钠(Sigma-Aldrich、St.Louis、MO)甲酸溶液。在40℃下恒定震荡进行提取。借助甲基化替代物C17脂肪酸的回收率来验证回收率。将FAME(脂肪酸甲酯)的提取重复三次，在分析之前将己烷层汇集在一起。通过在第四次提取/衍生化中检查内源FAME的存在，确认反应的完全性。所得的FAME通过GC-FID使用来自SGE的毛细管柱BPX70(15m x0.25mmx0.25pM)进行分析。通过保留时间鉴定每个FAME，并通过注射来自MatreyaLLC(Pleasant Gap，PA)的菜籽油参考混合物作为校准标准并添加适当的长链多不饱和脂肪酸(Nu-Chek Prep，Elysian MN)，进行定量。
对T1种子进行GC-FAME分析后，相应于来自7种含有PUFA合成酶基因SzACS-2和HetI的转基因加拿大油菜事件的种子的FAME提取物被发现含有相应于DHA和DPA(n-6)的峰(在下面表1中列出)。表1显示，含DHA的加拿大油菜籽的数目不同(从插入加拿大油菜基因组中的转基因系列的不同拷贝的分离可以预期到这一点)，并且在单个种子中观察到的最大DHA含量也不同。
表1.来自7个含有PUFA合成酶基因SzACS-2和HetI的转基因加拿大油菜事件的T1种子的LC-PUFA含量
a.含有可检测DHA的种子数/所分析的来自T1群体的种子总数
b.所有DHA阳性种子的平均DHA含量(总脂质的％)
c.所有DHA阳性种子的平均PUFA含量(总脂质的％)
d.DHAn-3/总LC-PUFA(DHA+DPAn-6)的平均％比值
e.在单个种子中观察到的最高DHA含量
将来自事件5197[14]-032.002的T1种子种植在温室中，并在4-5叶期从96株植物获取叶片样品用于DNA分析，以确定每个T1分离子植物中转基因的拷贝数。这通过pat基因的水解探针测定法来实施，并鉴定了3种不同类型的分离子；21个纯合子，45个杂合子，和30个阴性植物(null plant)。使全部的纯合子和31个阴性植物在温室中生长至成熟并收获种子。每株纯合和阴性植物的平均T2种子产量分别为7.36g和8.61g。
事件5197[14]-032.002在温室中生长的T1植物的T2种子的长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)含量，通过GC-FAME分析对8-12个种子进行大宗提取(bulkextraction)加以确定，如前所述。21株阴性分离子植物也生长至成熟，作为对照。在任何阴性分离子的种子中没有检测到LC-PUFA。，20个转基因系在大宗种子分析中产生的DHA为0.28％-0.90％。含有DHA的种子还含有0.09-0.34％的DPA(n-6)。总PUFA(DHA+DPA)中DHA的平均比例为77％。
表2中显示了来自4个产生超过0.7％DHA的株系的种子的脂肪酸组成，并与来自4个阴性分离子株系的种子进行比较。
表2.来自事件5197[14]-032.002的4个转基因株系和4个阴性分离子株系的大宗T2种子的脂肪酸组成
将来自含有最高水平DHA的5197[14]-032.002的10个纯合子系的T2种子汇集在一起，产生60g种子。还收集了10个阴性分离子株系的种子，得到47g种子，用作阴性对照。2009年5月将种子种植在北塔科他州(North Dakota)的两个地点，在每个地点包含8块含转基因种子地块，6块阴性分离子种子地块，和2块商业对照(845CL)地块。在开花过程中，用隔离笼(isolation cage)覆盖所有的转基因植物地块和4个阴性分离子地块。剩余的两个阴性分离子地块和845CL地块不覆盖。在9月根据普通做法收割并收获地块。在地点1，从转基因植物平均每地块获得0.95kg种子，从阴性植物获得0.99kg。在地点2，从转基因植物获得平均每地块0.64g种子，从阴性植物获得0.73g。对来自每个地块的种子进行GC-FAME脂质分析，确定大田生长的种子中LC-PUFA的水平。
地点1中转基因植物T3种子的10粒种子大宗分析获得的平均DHA含量为0.19％，地点2为0.26％。最高的DHA含量为0.38％(0.03％EPA)。n-3LC-PUFA/总PUFA的平均％比为73％。
还在温室中种植了大田试验中使用的每个T2系的样品。T3温室种子的10粒种子大宗分析获得的平均DHA含量为0.22％，单个植物具有最多达0.8％DHA。这与在大田中产生的DHA量一致。
使用这些含DHA的GM加拿大油菜生产含DHA的含油种子，用于开发可以保留从其产生的精制油产品中的DHA的油加工方法。
实施例3：经过修饰的含油种子加工导致DHA保留
图3图解了从新近开发的用于加工富含DHA的加拿大油菜籽的方法中产生的DHA保留的百分比。表3列举了使用不同含油种子加工方法获得的加工油的品质测量结果。
表3.从富集试验获得的加拿大油菜RBD油的品质
由于ω-3加拿大油菜籽的量有限，最开始进行富集试验，用以确定加工步骤对油品质的影响。这通过用从Martek Biosciences获得的粗DHA-S油混合经过研磨的加拿大油菜籽来实现。将该混合材料用常规的含油种子加工方法进行处理。对于从富集研究中产生的油，在不同温度和保持条件下进行脱臭。提出这样的假设，即由于改良的加拿大油菜籽加工方法导致的富含DHA的加拿大油菜籽中DHA保留的提高也会导致来自产生ω-3脂肪酸的转基因加拿大油菜籽的DHA保留提高。
作为该分析的结果，测量了提取油的DHA含量，并确定压榨粗油的DHA含量(～1.3％DHA)显著高于溶剂提取油(～.75％DHA)。此外，在脱臭步骤过程中的常规加工条件下，DHA发生了显著的降解。对该步骤进行修改，导致更大浓度的DHA保留。常规加拿大油菜籽加工方法中用于脱臭步骤的标准条件导致32％DHA保留。相比之下，在新开发的经过修改的加拿大油菜籽加工方法的脱臭步骤的条件下，令人惊讶地导致97％的DHA保留。使用常规加拿大油菜籽加工方法时发现的DHA高损失最可能来自DHA分子在极端温度下的热降解。前述结果显示，涉及更低温度的脱臭条件的修改，本身就能够显著增加RBD油中保留的DHA量。
含有DHA生物合成基因的转基因加拿大油菜籽的含油种子加工试验将在实施例2中描述的转基因加拿大油菜(ω-3)种植在两块分离的田地中。将从两块田中收获的加拿大油菜籽以1:1比例混合。从加拿大油菜籽提取粗油，使用气相色谱方法测得的DHA含量为油的总脂肪酸的0.26％。使用如上所述的用于加拿大油菜的含油种子加工步骤处理谷物。油在两组条件下脱臭：常规的加拿大油菜籽加工方法(235℃90min)和经过修改的加拿大油菜籽加工方法(210℃60min)。图4显示，96％的DHA被保留在用经过修改的加拿大油菜籽加工条件脱臭的油中，而仅有65％的DHA被保留在用常规加拿大油菜籽加工条件加工过的样品中。
从加拿大油菜中提取加拿大油菜籽油，并同时用标准和低温条件进行脱臭(操作规程如前所述)。用转基因ω-3芥花油进行品质测量，并与富集的芥花油进行比较。表4比较了不同油的品质测量结果。用经过修改的加拿大油菜籽加工条件(210℃60min)脱臭方法产生的ω-3油的油品质测量结果与芥花油规格相近。
表4.和ω-3芥花油的油品质
两种油样品的活性氧法(AOM)均在低温脱臭条件下变得更高，提示更高的稳定性。更高的稳定性可能归因于油样品在更温和脱臭条件下的更高的生育酚含量。ω-3芥花油的AOM在所有条件下均比芥花油更低。这突出显示了DHA分子的化学反应性和不稳定性。
实施例4：经过修饰的含油种子加工产生正常的嗅觉特征
图5和图6显示，RBDω-3芥花油的通过电子鼻测量的嗅觉特征与商业RBD芥花油和空气空白对照仅有微小差异。Analytic TechnologiesAlpha MOS Fox4000系统(Alpha MOS、Hanover、Md)装备有18个金属氧化物传感器，使其具有广泛的气味检测能力。通过电子鼻(E-鼻)检测了从测试油样品散发的数百种(即使不是数千种)化合物的复杂混合物的气味。由E-鼻产生的数据可以用于鉴定和区分来自货架期稳定性研究的气味和不规则气味。
用于测量样品的分析条件在表5中描述。为了分析油，使用5.0mL加热针筒(syringe)向电子鼻中注射1.0gm样品。温育炉具有6个加热位置，可供2、10、或20mL小瓶用，加热范围是35-200℃，增加量为1度。此外，温育器具有一个定轨震荡器，用于在加热时混合样品。系统使用TOC气体压缩机，为系统产生合成干燥气流。每周运行一个诊断样品组，以确保传感器处于正常运转工作状态，每周进行自动检测，以确保自动采样器和室内温度正常发挥功能。
表5.Alpha MOSTM(Toulouse、FR)系统的分析条件
对如下样品完成了电子鼻分析：不含DHA的芥花油、含有0.5％DHA的芥花油、含有1.0％DHA的芥花油、不含DHA的商品(commodity)芥花油、含有0.5％DHA的商品芥花油，和含有1.0％DHA的商品芥花油。将5-10g样品保存在130°F的清洁玻璃瓶中。在60天、30天和开始时间点(即0天)从这些样品中移出等份，并用电子鼻进行分析。
结果表明，油具有的可检测气味极少，并且油具有良好的感觉和感官特征。图5显示，RBDω-3芥花油产生的电子鼻结果与RBD芥花油相似。图6是图5的放大主成分分析(PCA)图。图6的放大图显示，在两种不同脱臭温度下加工的RBDω-3芥花油之间的差异略微宽于在两种不同脱臭温度下加工的RBD芥花油之间的差异。

Claims (20)

1.一种用于加工包含二十二碳六烯酸(DHA)的粗植物油样品的方法，该方法包括：
在低于约220℃的温度下将粗油样品脱臭产生脱臭油，其中粗油样品中的DHA的量基本被保留在脱臭油中。
2.根据权利要求1的方法，其中在选自下组的温度下将所述粗油样品脱臭：约200℃；约202℃；约204℃；约206℃；约208℃；约210℃；约212℃；约214℃；约216℃；和约218℃。
3.根据权利要求2的方法，其中将所述粗油样品在约210℃的温度下脱臭。
4.根据权利要求1的方法，其中将所述粗油样品脱臭少于90分钟。
5.根据权利要求4的方法，其中将所述粗油样品脱臭选自下组的时间：约20分钟；约25分钟；约30分钟；约35分钟；约40分钟；约45分钟；约50分钟；约55分钟；约60分钟；约70分钟；约75分钟；约80分钟；和约85分钟。
6.根据权利要求5的方法，其中将所述粗油样品脱臭约60分钟。
7.根据权利要求1的方法，其中所述粗油样品中的DHA有超过约95％被保留在脱臭油中。
8.根据权利要求1的方法，其中所述粗油样品包含来自含油种子的机械提取油。
9.根据权利要求8的方法，其中所述粗油样品还包含来自含油种子的溶剂提取油。
10.根据权利要求8的方法，其中通过包括对经研磨的含油种子进行机械压榨的过程从含油种子中机械提取油。
11.根据权利要求1的方法，其中所述粗油样品包含来自芸苔属植物(Brassica sp)的油。
12.根据权利要求11的方法，其中所述芸苔属植物是加拿大油菜。
13.根据权利要求12的方法，其中所述加拿大油菜是在其组织中合成DHA的遗传修饰的加拿大油菜。
14.根据权利要求1的方法，其中该方法包括：
将所述粗油样品脱胶以从该油样品中除去磷脂；
将所述粗油样品中和以从该油样品中除去游离脂肪酸；和
将所述粗油样品脱色以从该油样品中除去叶绿素。
15.根据权利要求14的方法，其中该方法包括从含油种子提取粗油样品。
16.通过根据权利要求1的方法生产的含DHA的油。
17.根据权利要求16的含DHA的油，其中该油具有小于1红(按照0-20红的分级)且小于10黄(按照0-70黄的分级)的颜色。
18.根据权利要求16的含DHA的油，其中该油具有芥花油的基本上所有的感觉特征和感官特征。
19.根据权利要求16的含DHA的油，其中该油产品包含抗氧化剂。
20.一种含油产品，其包含权利要求16的油。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106497676A (zh) * 2016-10-26 2017-03-15 华南理工大学 一种pufa甘油酯的脱臭方法

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102006054481A1 (de) * 2006-11-18 2008-05-21 Eppendorf Ag Vakuumkonzentrator und Verfahren zur Vakuumkonzentration
CN103439366A (zh) * 2013-08-24 2013-12-11 浙江大学 一种电子鼻检测食用植物油反复加热的方法
CA2967131A1 (en) 2014-11-14 2016-05-19 Basf Plant Science Company Gmbh Materials and methods for increasing the tocopherol content in seed oil
WO2017023734A1 (en) * 2015-07-31 2017-02-09 Cargill, Incorporated Preparation of oxidatively stable oil with long chain omega-3 fatty acids
CN105419398A (zh) * 2015-12-19 2016-03-23 仇颖超 一种花椒籽脂肪酸改性重质碳酸钙的制备方法
CA3029448A1 (en) * 2016-07-07 2018-01-11 Adven Industries, Inc. Methods for enhancing efficiency of bitumen extraction from oilsands using activated carbon containing additives
US10441896B2 (en) * 2018-01-26 2019-10-15 Nakatomi Trading, LLC Method and apparatus for extraction of oil from plants
TW201934735A (zh) * 2018-01-31 2019-09-01 日商Ｊ 制油股份有限公司 油炸調理食用油脂組成物之甲氧苯胺值上升及生育酚類減少的抑制方法
DK3757635T3 (da) 2018-02-20 2023-11-27 Sumitomo Electric Industries Fremgangsmåde til fremstilling af optisk fiber
EP3586640A1 (en) 2018-06-21 2020-01-01 Nuseed Pty Ltd Dha enriched polyunsaturated fatty acid compositions
EP3809874A4 (en) * 2018-06-22 2022-03-23 Cargill, Incorporated RAPESEED WITH LOW SATURATED COMPOUNDS WITH DESIRABLE POTATO FRY HOLDING TIME

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2911526B2 (ja) * 1990-02-23 1999-06-23 森永乳業株式会社 乳幼児食品用油脂組成物
EP1354518A1 (en) * 2002-04-15 2003-10-22 Dapeng Li Kernel oil from plant kernel, process for extracting same, pharmaceutical composition and use thereof
CN101098628A (zh) * 2004-11-04 2008-01-02 孟山都技术公司 种子油组合物
US20100255157A1 (en) * 2004-11-04 2010-10-07 Monsanto Technology Llc Processes for preparation of oil compositions
WO2011054801A1 (en) * 2009-11-03 2011-05-12 Dsm Ip Assets B.V. Vegatable oil comprising a polyunsaturaded fatty acid having at least 20 carbon atoms
WO2011146524A1 (en) * 2010-05-17 2011-11-24 Dow Agrosciences Llc Production of dha and other lc-pufas in plants

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4036865A (en) * 1973-07-18 1977-07-19 Metallgesellschaft Aktiengesellschaft Semicontinuous process for deodorizing oils
DE69428539T2 (de) * 1994-11-05 2002-04-25 Nestle Sa Lipidzusammensetzung für Kosmetik
JP2735505B2 (ja) * 1995-03-31 1998-04-02 植田製油株式会社 ドコサヘキサエン酸含有油脂
JPH08311480A (ja) * 1995-05-18 1996-11-26 D H Ee Kodo Seisei Chushutsu Gijutsu Kenkyu Kumiai 高純度トリアシルグリセロールからなる油脂の製造方法及び高度不飽和脂肪酸含有油脂組成物
JP2815562B2 (ja) * 1995-11-13 1998-10-27 植田製油株式会社 高度不飽和脂肪酸含有油脂の精製方法
US6177114B1 (en) * 1996-10-31 2001-01-23 Carotina Sdn. Bhd. Refining of edible oil rich in natural carotenes and Vitamin E
US6210700B1 (en) 1997-01-14 2001-04-03 Novartis Nutrition Ag Enhancement of transplant graft survival through nutritional immunomodulation with omega-9 fatty acid dietary supplement therapy
US6172248B1 (en) 1998-11-20 2001-01-09 Ip Holdings, L.L.C. Methods for refining vegetable oils and byproducts thereof
KR100344907B1 (ko) * 1999-12-13 2002-07-20 네오메가(주) 정제 어유 제조방법
EP1178103A1 (en) * 2000-08-02 2002-02-06 Dsm N.V. Purifying crude pufa oils
MY138186A (en) * 2000-12-14 2009-05-29 Supervitamins Sdn Bhd Recovery of minor components and refining of vegetable oils and fats
US6511690B1 (en) 2001-02-01 2003-01-28 Carolina Soy Products, Inc. Soybean oil process
DK1239022T3 (da) * 2001-03-09 2009-07-20 Nestle Sa Olie indeholdende en eller flere langkædede flerumættede fedtsyrer hidrörende fra biomasse, fremgangsmåde til fremstilling, levnedsmiddel, næringsmiddelsammensætning, kosmetisk sammensætning eller farmaceutisk sammensætning indeholdende denne
ES2312513T3 (es) * 2002-09-04 2009-03-01 Nestec S.A. Procedimiento para la preparacion de un aceite conteniendo uno o unos acidos grasos poliinsaturados de cadena larga proviniendo de biomasa, alimento, composicion nutricional, cosmetica o farmaceutica conteniendo dicho aceite.
WO2005010136A2 (en) 2003-07-16 2005-02-03 Archer-Daniels-Midland Company Method for producing fats or oils
JP4496754B2 (ja) * 2003-10-22 2010-07-07 株式会社カネカ 油脂の精製方法
EP3543324B1 (de) * 2004-02-27 2022-11-30 BASF Plant Science GmbH Verfahren zur herstellung mehrfach ungesättigten fettsäuren in transgenen pflanzen
DE102005013779A1 (de) * 2005-03-22 2006-09-28 Basf Plant Science Gmbh Verfahren zur Herstellung von mehrfach ungesättigten C20- und C22-Fettsäuren mit mindestens vier Doppelbindungen in transgenen Pflanzen
US20070218183A1 (en) * 2006-03-14 2007-09-20 Bunge Oils, Inc. Oil composition of conjugated linoleic acid
TW200806184A (en) * 2006-04-11 2008-02-01 Martek Biosciences Corp Food products comprising long chain polyunsaturated fatty acids and methods for preparing the same
DE102006034313A1 (de) * 2006-07-21 2008-01-24 Basf Plant Science Gmbh Verfahren zur Herstellung von Arachidonsäure und/oder Eicosapentaensäure
EP1992233A1 (en) * 2007-05-11 2008-11-19 DSMIP Assets B.V. Stabilized marine oils and process of making them
WO2009029793A1 (en) * 2007-08-31 2009-03-05 Martek Biosciences Corporation Polyunsaturated fatty acid-containing solid fat compositions and uses and production thereof
AU2010317139A1 (en) * 2009-11-03 2012-05-24 Dsm Ip Assets B.V. Composition comprising cells and a polyunsaturated fatty acid having at least 20 carbon atoms (LC-PUFA)

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2911526B2 (ja) * 1990-02-23 1999-06-23 森永乳業株式会社 乳幼児食品用油脂組成物
EP1354518A1 (en) * 2002-04-15 2003-10-22 Dapeng Li Kernel oil from plant kernel, process for extracting same, pharmaceutical composition and use thereof
CN101098628A (zh) * 2004-11-04 2008-01-02 孟山都技术公司 种子油组合物
US20100255157A1 (en) * 2004-11-04 2010-10-07 Monsanto Technology Llc Processes for preparation of oil compositions
WO2011054801A1 (en) * 2009-11-03 2011-05-12 Dsm Ip Assets B.V. Vegatable oil comprising a polyunsaturaded fatty acid having at least 20 carbon atoms
WO2011146524A1 (en) * 2010-05-17 2011-11-24 Dow Agrosciences Llc Production of dha and other lc-pufas in plants

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106497676A (zh) * 2016-10-26 2017-03-15 华南理工大学 一种pufa甘油酯的脱臭方法

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Hill Studies on the quality of soybean oil: Extraction method, soybean type, and oxidative stability

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