CN104016953A - 一类二萜化合物的制备方法及其在抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一类二萜化合物的制备方法及其在抗肿瘤药物中的应用。本发明提供了从北部湾柳珊瑚Anthogorgia caerulea中提取分离得到2个新的二萜化合物，它们的结构如式(1)所示，分别命名为Anthogonoid A(1)和Simplexin J(2)。化合物1-2的活性测试结果表明，化合物1和2对人宫颈癌细胞HeLa，人乳腺癌细胞MCF-7，小鼠黑色瘤细胞B16，人肝癌细胞HepG2具有明显的生长抑制活性。本发明的二萜化合物具有抑制多种恶性肿瘤细胞生长的活性，因此在制备抗肿瘤药物方面有良好的前景，为开发利用我国海洋药用资源提供了科学依据。

Description

一类二萜化合物的制备方法及其在抗肿瘤药物中的应用

技术领域

本发明涉及海洋天然药物技术领域，是一种从海洋动物柳珊瑚中分离得到具有抗肿瘤活性的二萜化合物AnthogonoidA和Simplexin J及其制备方法和用途。 

背景技术

恶性肿瘤是威胁人类健康的重大疾病，发病率居十种重大疾病的第二位，而且随着各种因素的影响其发病率依然呈上升趋势。目前，全球20％的新发癌症病人在中国，24％的癌症死亡病人在中国。由于目前临床使用治疗癌症药物呈现出抗药性、药耐药性和药效时间依赖性以及有明显的毒副作用等缺点，寻找结构新颖的药物已成为亟需解决的问题。 

从海洋天然产物中寻找预防和治疗危害人类健康等重大疾病的活性成分是海洋新药研发的热点。在过去的几十年里，海洋天然产物研究发展非常迅猛，共有1万多个海洋天然产物被发现。目前走在海洋药物开发研究领域前列的美国、日本等科技发达国家已从海洋生物中发现并提取出了4000多种具有医用价值的生物活性物质，在抑菌、抗病毒、抗癌和抗心血管药物方面已取得了明显的成效，显示出海洋药物研究利用具有十分广阔的前景。 

珊瑚是海洋无脊椎动物，属于腔肠动物门，种类繁多，有6000多种，约占海洋生物总种类(不包含海洋微生物)的22.4％，主要有八放珊瑚亚纲中的柳珊瑚、软珊瑚和六放珊瑚亚纲中的石珊瑚、角珊瑚等。柳珊瑚在我国有悠久的药用历史，历代本草如《唐本草》、《本草拾遗》、《本草纲目》和《海药本草》等均有记载。柳珊瑚在我国南海和东海均有分布，特别是南海地处热带亚热带，蕴藏着十分丰富的柳珊瑚资源。柳珊瑚是中药配伍的重要组成部分，也是寻找海洋来源活性先导化合物的重要资源。从柳珊瑚中寻找预防和治疗危害人类健康的重大疾病的天然产物是开发海洋来源抗肿瘤新药的重要途径之一。 

Anthogotgia caerulea为一种分布于中国北部湾海域的柳珊瑚，但迄今为止，未见从中获得具有抗肿瘤活性的二萜类化合物Anthogonoid A和Simplexin J的报道。 

发明内容

本发明的目的是提供如式(1)所示的二萜类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。 

化合物1的活性测试结果表明，化合物1和2对人宫颈癌细胞HeLa，人乳腺癌细胞MCF-7，小鼠黑色瘤细胞B16，人肝癌细胞HepG2具有明显的生长抑制活性，可以用于制备抗肿瘤药物。 

本发明目的是提供如式(1)所示的化合物1和2在制备抗肿瘤药物中的应用。 

本发明目的是提供一种抗肿瘤药物，其特征在于，包括有效量的作为活性成分的如式(1)所示的化合物1和2或其他药学上可以接受的载体。 

本发明的二萜类化合物1和2是新化合物，对肿瘤细胞具有明显的抑制作用，可以用于制备抗肿瘤药物，以治疗恶性肿瘤。本发明为开发新的抗肿瘤药物提供了备选化合物，对开发中国海洋药物资源具有重要的意义。 

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。 

实施例1 

(1)制备本发明二萜类化合物Anthogonoid A和Simplexin J 

将柳珊瑚Anthogorgia caerulea新鲜样品5.3kg剪碎后在室温下浸泡，浸泡顺序为酒精→酒精-二氯甲烷(1∶1／V∶V)→酒精，每次浸泡一周，浸泡液减压(0.09MPa，40℃)浓缩以后，将浓缩液合并，得提取后浸膏。 

将提取后得到的浸膏用一倍体积纯水混匀，用等体积的乙酸乙酯相对浸膏萃取三次，得到乙酸乙酯相，对萃取液进行减压浓缩，得乙酸乙酯萃取物24.82g，同时回收试剂。 

将乙酸乙酯萃取物与粉末状硅胶混合，通风干燥后研磨成粉末状，用湿柱法装入正相硅胶柱内，选择使用CHCl₃-Me₂CO体系(CHCl₃∶Me₂CO=10∶0，9∶1，8∶2，7∶3／V∶V)和CHCl₃-MeOH系统(CHCl₃∶MeOH=10∶1，10∶2，10∶3，0∶10／V∶V)依次梯度洗脱，每个极性段的洗脱液体积为4倍有效柱体积，一共收集了35个流份。通过薄层色谱法检测引导，按照薄层色谱显示的结果，合并其中成分相近的流份，得到了7个分离部位(A-G)。 

组份C(1.27g)通过凝胶柱色谱(Sephadex LH-20)纯化处理，溶剂采用氯仿-甲醇(1∶1，V∶V)作为洗脱液，得到六个组份(C1-C6)，组份C4通过HPLC采用甲醇和水进行分离(MeOH∶H₂O= 55∶45，V∶V)，得到化合物1(5.7mg)。组份E(2.03g)通过凝胶柱色谱(Sephadex LH-20)纯化处理，溶剂采用氯仿-甲醇(1∶1，V∶V)作为洗脱液，得到五个组份(E1-E5)，组份E3通过HPLC采用甲醇和水进行分离(MeOH∶H₂O=25∶75，V∶V)，得到化合物2(7.9mg)。 

(2)化合物Anthogonoid A和Simplexin J的结构解析 

经核磁共振检测分析，确定本发明化合物AnthogonoidA和Simplexin J的化学结构，理化性质和波谱数据为： 

Anthogonoid A(1)：黄色油状；；(c0.13，MeOH)；¹H(CDCl₃，600MHz)和¹³C(CDCl₃，150MHz)NMR数据见表1；HRMS-ESI：m／z445.2204[M+Na]⁺。 

Jimplexin J(2)：黄色油状；(c0.12，MeOH)；¹H(CDCl₃，600MHz)和¹³C(CDCl₃，150MHz)NMR数据见表1；HRMS-ESI：m／z521.2725[M+Na]⁺. 

表1.Anthogonoid A和Simplexin J的¹H(600MHz)和¹³C NMR(150MHz)数据 

(3)化合物Anthogonoid A和Simplexin J对肿瘤细胞生长抑制活性测试 

采用MTT法测试单体化合物Anthogonoid A和Simplexin J对人宫颈癌细胞HeLa，人乳腺癌细胞MCF-7，小鼠黑色瘤细胞B16，人肝癌细胞HepG2等细胞株的生长抑制作用，计算活性单体化合物的IC₅₀值，初步评价活性单体化合物的抗肿瘤作用。 

主要操作步骤：收集对数生长期靶标肿瘤细胞，接种于96孔培养板，每孔细胞数为1.0×10⁵／100μl，置于5％CO₂培养箱培养，次日去掉培养基，加入不同浓度单体化合物100μl (单体化合物浓度采用对倍稀释)，阴性对照组不加药物，48h后，每孔加入MTT10μl，继续培养4h，再每孔加入DMSO100μl终止反应，常温放置1h，用酶标仪检测各孔在570nm处的吸光度A值，计算细胞生长抑制率，计算公式如下： 

生长抑制率(％)=[(A阴性-A实验)／(A阴性-A空白)]×100％ 

测试结果如表2所示，Anthogonoid A和Simplexin J对抑制上述四种肿瘤细胞的IC₅₀值在1-10μg／ml之间，效果优于阳性对照5-氟尿嘧啶说明化合物1在肿瘤治疗药物领域有很大的开发价值。 

表2Anthogonoid A和Simplexin J对四种肿瘤细胞的抑制活性(IC₅₀) 

Claims (4)

1.一类二萜化合物，其结构式如式(1)所示，

其中化合物1命名为AnthogonoidA，化合物2命名为Simplexin J。

2.一种权利要求1所述的二萜化合物AnthogonoidA和Simplexin J的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)将北部湾柳珊瑚Anthogorgia caerulea斩碎，用有机溶剂提取，得到的提取液浓缩得到粗提取物，所述的有机溶剂是甲醇、乙醇、二氯甲烷、甲醇和二氯甲烷的混合物或者乙醇和二氯甲烷的混合物；

(2)将步骤(1)得到的粗提取物悬浮于水，用乙酸乙酯或二氯甲烷萃取，收集乙酸乙酯或二氯甲烷层；

(3)将上述氯仿或乙酸乙酯或二氯甲烷层进行常压硅胶柱层析，以氯仿-丙酮、氯仿-甲醇溶剂系统为洗脱剂，得到7个组份(A-G)。组份C通过凝胶柱色谱纯化处理，溶剂采用氯仿-甲醇(1：1，V：V)作为洗脱液，得到六个组份(C1-C6)，组份C4通过高效液相色谱采用甲醇和水进行分离，得到化合物1。组份E(2.03g)通过凝胶柱色谱纯化处理，溶剂采用氯仿-甲醇作为洗脱液，得到五个组份(E1-E5)，组份E3通过HPLC采用甲醇和水进行分离，得到化合物2。

3.根据权利要求1或2所述的二萜类化合物Anthogonoid A和Simplexin J在制备抗肿瘤药物中的应用。

4.一种抗肿瘤药物，其特征在于包括有效量的作为活性成分的权利要求1所述的二萜类化合物和药学上可以接受的载体。