CN103992240A

CN103992240A - 苯乙基苯丙酰胺类化合物及其应用

Info

Publication number: CN103992240A
Application number: CN201410169621.2A
Authority: CN
Inventors: 罗雄明; 尹浩; 田新朋; 李庆欣
Original assignee: South China Sea Institute of Oceanology of CAS
Current assignee: South China Sea Institute of Oceanology of CAS
Priority date: 2014-04-24
Filing date: 2014-04-24
Publication date: 2014-08-20
Anticipated expiration: 2034-04-24
Also published as: CN103992240B

Abstract

本发明公开了苯乙基苯丙酰胺类化合物及其应用。苯乙基苯丙酰胺类化合物micrometams A-E，其结构通式如式(1)所示：其中micrometams A:R₁＝H和R₂＝H；micrometams B:R₁＝H和R₂＝CH₂CH₂OCH₂CH₂OH；micrometams C:R₁＝OCH₃和R₂＝CH₂CH₂OCH₂CH₂OH；micrometams D:R₁＝OCH₃和R₂＝H；或micrometams E:R₁＝H和R₂＝OCH₃。本发明利用色谱分离技术从芸香科小芸木属的大管植物中分离得到5个新的苯乙基胺：micrometams A-E。它们能在芸香科(Rutaceae)黄皮族(Clauseneae)化学生态分类上应用、在制备抗卤虫制剂中应用和在制备吸附环境有机污染物二甘醇吸附制剂中应用。

Description

苯乙基苯丙酰胺类化合物及其应用

技术领域：

本发明具体涉及5个新颖的胺类化合物-苯乙基苯丙酰胺类化合物及其应用。

背景技术：

芸香科(Rutaceae)柑橘亚科(Aurantioideae)黄皮族(Clauseneae)中分成三个亚族(subtribe)：小芸木亚族【Micromelinae(Micromelum)】，黄皮亚族【Clauseninae(Glycosmis,Clausena,Murraya)】和Merrilliinae(Merrillia)。在把Murraya s.s.和Merrillia两个属放入芸香科(Rutaceae)柑橘亚科(Aurantioideae)柑橘族(Citreae)后，黄皮族(Clauseneae)只由Micromelum,Glycosmis,Clausena和Bergera四个属组成(Guerra,M.,dos Santos,K.G.B.,Silva,A.E.B.E,2000.Am.J.Bot.87,735-747；Samuel,R.,Ehrendorfer,F.,Chase,M.W.,Greger,H.,2001.Plant biol.3,77)，其中Glycosmis属中产硫胺和苯乙基胺，Clausena属中产苯乙基胺。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供从大管(Micromelum falcatum)中分离出新的具有抗卤虫，吸附环境有机污染物二甘醇和化学生态分类的应用意义的苯乙基胺—苯乙基苯丙酰胺类化合物。

本发明的5个新的苯乙基苯丙酰胺类化合物micrometams A-E，其结构通式如式(1)所示：

其中micrometams A:R₁＝H和R₂＝H；micrometams B:R₁＝H和R₂＝CH₂CH₂OCH₂CH₂OH；micrometams C:R₁＝OCH₃和R₂＝CH₂CH₂OCH₂CH₂OH；micrometams D:R₁＝OCH₃和R₂＝H；或micrometams E:R₁＝H和R₂＝OCH₃。

本发明的第二个目的是提供上述micrometams A、B、C、D或E在制备抗卤虫制剂中的应用。

本发明的第三个目的是提供上述micrometams A、B、C、D和E在芸香科(Rutaceae)黄皮族(Clauseneae)化学生态分类上的应用。

本发明的第四个目的是提供micrometams A或D在制备二甘醇吸附制剂中的应用。

本发明的第五个目的是提供大管(Micromelum falcatum)在制备micrometams A、B、C、D或E中的应用。

本发明利用色谱分离技术从芸香科小芸木属的大管植物中分离得到5个新的苯乙基胺：micrometams A-E。它们能在芸香科(Rutaceae)黄皮族(Clauseneae)化学生态分类上应用、在制备抗卤虫制剂中应用和在制备吸附环境有机污染物二甘醇吸附制剂中应用。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

以下实施例中苯乙基苯丙酰胺类化合物如通式(1)所示：

其中化合物1(micrometams A):R₁＝H和R₂＝H；化合物2(micrometams B):R₁＝H和R₂＝CH₂CH₂OCH₂CH₂OH；化合物3(micrometams C):R₁＝OCH₃和R₂＝CH₂CH₂OCH₂CH₂OH；化合物4(micrometams D):R₁＝OCH₃和R₂＝H；化合物5(micrometams E):R₁＝H和R₂＝OCH₃。

上述通式(1)中R₁＝H和R₂＝H的化合物分子式为C18H19O4N，化学命名为MicrometamA，无色油状物，简称化合物1；R₁＝H和R₂＝CH₂CH₂OCH₂CH₂OH的化合物分子式为C22H27O6N，化学命名为Micrometam B，无色油状物，简称化合物2；R₁＝OCH₃和R₂＝CH₂CH₂OCH₂CH₂OH的化合物分子式为C23H29O7N，化学命名为Micrometam C，无色油状物，简称化合物3；R₁＝OCH₃和R₂＝H的化合物分子式为C19H21O5N，化学命名为Micrometam D，无色油状物，简称化合物4；R₁＝H和R₂＝OCH₃的化合物分子式为C19H21O4N，化学命名为Micrometam E，无色油状物，简称化合物5。

实施例1：通式(1)中R₁＝H和R₂＝H的化合物1(micrometams A)的制备

以干燥大管(Micromelum falcatum)根茎5.5kg为原料，粉碎后分别用体积分数95％和体积分数50％的乙醇水溶液提取，浓缩提取液，合并粗提物得到516.4g，将粗提物悬溶于2500ml水中，依次用等量的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇各萃取3次，浓缩得石油醚提取物36.4g、乙酸乙酯提取物62.7g和正丁醇提取物27.2g；将乙酸乙酯提取物进行常压硅胶柱层析，以石油醚-丙酮溶剂系统从体积比9:1到3:7梯度洗脱；进行TLC(GF₂₅₄)分析，获得13个馏分Fr.A-M，馏分Fr.E(3.40g，石油醚-丙酮体积比6:4洗脱物)，用200-300目硅胶填柱，氯仿-丙酮体积比75:25洗脱，获得40个组分。对获得的40个组分用TLC点板(展开剂：氯仿-丙酮体积比3：1)，在RF值0.3处发现样品，该样品用Sephadex LH-20(3×70cm,ca.12mL each,洗脱剂MeOH，流速2mL/min)洗脱产生65.0mg的化合物1。

该化合物1的高分辨质谱HRESI-MS m/z314.1382(C₁₈H₂₀O₄N⁺[M+H]⁺,计算值：314.1387)结合¹³C-NMR(DEPT)谱，推断其分子式为C₁₈H₁₉O₄N。通过HSQC,HMBC二维谱，化合物1的¹H-NMR和¹³C-NMR数据得到完全归属(表1和表2)。化合物UV谱图吸收带有λ_max223,282与309nm和化合物IR谱图吸收带有ν_max3425(羟基),1650(酰胺基),和1602,1594,1532cm^-1(苯环)。其¹H-NMR谱数据显示2个A₂B₂苯环系统(δ_H7.23(2H,d,J＝8.5Hz),6.77(2H,d,J＝8.5Hz),6.83(2H,d,J＝8.5Hz),7.39(2H,d,J＝8.5Hz)),1个甲基(δ_H3.01(s,N-CH₃))，1个亚甲基(δ_H3.64(1H,d,J＝6.5Hz),3.80(1H,d,J＝6.5Hz))，2个次甲基(δ_H7.37(1H,d,15.5Hz),6.70(1H,d,15.5Hz))和1个甲氧基(δ_H4.82(1H,t,6.5Hz))。¹³C-NMR(DEPT)表明化合物1具有1个甲基(δ_C36.1(N-CH₃)),1个亚甲基((δ_C58.7),11个次甲基(δ_C128.6,128.6,116.7,116.7,116.4,116.4,130.7,130.7,143.3,115.7and73.2)和5个季碳(δ_C170.3,134.3,158.4,160.5and128.2)。这些数据暗示化合物1可能是苯乙基胺。在HMBC谱中，δ_H7.37(H-4)与δ_C170.3(C-2),115.7(C-3),128.2(C-5),130.7(C-6)和130.7(C-10)相关，δ_H6.70(H-3)与170.3(C-2),143.3(C-4)和128.2(C-5)的相关表明存在苯乙基胺。从δ_H4.82(H-12)到δ_C58.7(C-11),134.3(C-13),128.6(C-14)and128.6(C-18)相关，从δ_H3.64,3.80(H-11)到δ_C73.2(C-12)和134.3(C-13)的相关，表明苯乙基的存在。化合物1命名为micrometam A，其结构式如通式(1)所示，其中R₁＝H和R₂＝H。

实施例2：通式(1)中R₁＝H和R₂＝CH₂CH₂OCH₂CH₂OH的化合物2的制备

如实施例1的方法，获得13个馏分Fr.A-M，馏分Fr.E(3.40g,石油醚-丙酮体积比6:4洗脱物)，用200-300目硅胶填柱，氯仿-丙酮体积比75:25洗脱，获得40个组分。对获得的40个组分用TLC点板(展开剂：氯仿-丙酮体积比3：1)，在RF值0.2处发现样品，该样品用高效液相半制备柱(250×10mm i.d.5μm,洗脱液MeOH/H₂O50：50洗脱，流速3mL/min)进一步纯化，产生12.0mg的化合物2(保留时间t_R13.5min)。化合物2的解析参照化合物1，具体数据归属见表1和表2。化合物2命名为micrometam B，其结构式如通式(1)所示，其中R₁＝H和R₂＝CH₂CH₂OCH₂CH₂OH。

实施例3：通式(1)中R₁＝OCH₃和R₂＝CH₂CH₂OCH₂CH₂OH的化合物3的制备

如实施例2的方法，获得13个馏分Fr.A-M，馏分Fr.E(3.40g,石油醚-丙酮体积比6:4洗脱物)，用200-300目硅胶填柱，氯仿-丙酮体积比75:25洗脱，获得40个组分。对获得的40个组分用TLC点板(展开剂：氯仿-丙酮体积比3：1)，在RF值0.15处发现样品，该样品用高效液相半制备柱(250×10mm i.d.5μm,洗脱液MeOH/H₂O40：60洗脱，流速3mL/min)进一步纯化，产生7.7mg的化合物3(保留时间t_R11.6min)。化合物3的解析参照化合物1，具体数据归属见表1和表2。化合物3命名为micrometam C，其结构式如通式(1)所示，其中R₁＝OCH₃和R₂＝CH₂CH₂OCH₂CH₂OH。

实施例4：通式(1)中R₁＝OCH₃和R₂＝H的化合物4的制备

如实施例1的方法中，馏分Fr.E(3.40g,石油醚-丙酮体积比6:4洗脱物)，用200-300目硅胶填柱，氯仿-丙酮体积比75:25洗脱，获得40个组分。对获得的40个组分用TLC点板(展开剂：氯仿-丙酮体积比3：1)，在RF值0.40处发现样品，该样品用Sephadex LH-20(3×70cm,ca.12mLeach,洗脱剂MeOH洗脱，流速2mL/min)产生4.3mg的化合物4。化合物4的解析参照化合物1，具体数据归属见表1和表2。化合物4命名为micrometam D，其结构式如通式(1)所示，其中R₁＝OCH₃和R₂＝H。

实施例5：通式(1)中R₁＝H和R₂＝OCH₃的化合物5的制备

如实施例2的方法，获得13个馏分Fr.A-M，馏分Fr.E(3.40g,石油醚-丙酮体积比6:4洗脱物)，用200-300目硅胶填柱，氯仿-丙酮体积比75:25洗脱，获得40个组分。对获得的40个组分用TLC点板(展开剂：氯仿-丙酮体积比7：3)，在RF值0.25处发现样品，该样品用高效液相半制备柱(250×10mm i.d.5μm,洗脱液MeOH/H₂O50:50比例洗脱，流速3mL/min)进一步纯化，产生7.2mg的化合物5(保留时间t_R17.2min)。化合物5的解析参照化合物1，具体数据归属见表1和表2。化合物5命名为micrometam E，其结构式如通式(1)所示，其中R₁＝H和R₂＝OCH₃。

表1.化合物1-5的氢谱数据(500MHz,CD₃OD)

表2.化合物1-5的碳谱数据(125MHz,CD₃OD)

^*化合物1-5的氢谱和碳谱都是以四甲基硅烷(TMS)为内标，分别在500MHz和125MHz的核磁共振仪上测定，溶剂都是CDCl₃，化学位移以ppm为单位，耦合常数J，单位为Hz。

实施例6：细胞毒活性试验－卤虫生物致死法

海虾卵的孵化：取海虾卵100mg置于500ml烧杯中，加入人工海水400ml，用一小充气泵缓缓充气，室温孵化24h，除去卵壳及未孵化的卵，海虾幼虫继续培养24h，备用。

依照Solis的改良法，取96孔细胞培养板，每孔加200μl含10-15个海虾幼虫的人工海水液，制成测试培养板。空白对照组和每个浓度的样品组各设三个平行孔，空白对照组加5μl样品溶剂(DMSO)，样品组加5μl所需浓度的样品液(每个测试样品浓度为20mg/ml)，三个样品终浓度分别为500、50、5μg/ml。室温培养24h后，在双目解剖镜下检测计数海虾死亡个体数目。

海虾生物致死活性用校正死亡率表示，按下列公式计算：

校正死亡率＝(对照组存活率－处理组存活率)/对照组存活率×100％

将三个浓度及其对应的校正死亡率输入SPSS计算软件，计算LC₅₀。通过计算得出化合物1-5的LD₅₀值为18.5,155.3,187.2,26.7and39.8μg/ml(表3)。

表3化合物1-5的抗卤虫活性数据(LD₅₀)

实施例7：新化合物1-5在化学生态学上的应用

化学分类学意义

芸香科柑橘亚科小芸木属Micromelum归属于黄皮族，黄皮族长期存在化学生态分类混乱的问题，以致研究与果树栽培、培养等利用方面存在分类学混乱。自我们从小芸木属植物大管Micromelum falcatum中分离得到5个新的苯乙基胺后，该问题得到了圆满解决。具体解答如下：黄皮族早期分三个亚族Micromelinae(Micromelum),Clauseninae(Glycosmis,Clausena,Murraya)and Merrilliinae(Merrillia)。后来把Murraya s.s.和Merrillia两个属移到Citreae s.l.族中，黄皮族只包括四个属，为Micromelum,Glycosmis,Clausena和Bergera。在Glycosmis(Glycosmis macrophylla(Blume)Miquel,G.chlorosperma(Bl.)Sprengel,G.pseudoracemosa(Guill.)Swingle,G.mauritiana(Lam.)Tanaka和G.cyanocarpa(Bl.)Spreng)属中，存在硫胺和苯乙基胺。在Clausena(Clausena indica(Dalz.)Oliver和C.lansium(Lour.)Skeels)属中,存在lansamides A-C，lansamide I和SB-204900等。目前从Micromelum falcatum中分离到的5个新苯乙基胺，表明Micromelum属更类似于Glycosmis和Clausena，而与Bergera亲缘关系更远。

实施例8：化合物1和4与环境有机毒素二甘醇的反应

二甘醇(Diglycol)是一种具有有机毒性的化合物，结构式为HO-CH2CH2-O-CH2CH2-OH。二甘醇对人、动物均具有毒性，摄取过量时可损害肝脏和肾脏，严重者可引发死亡。二甘醇曾经导致一些大规模中毒事件，如1937年，美国发生的磺胺酏剂事故，有107人在服用以二甘醇作溶剂的磺胺酏剂后死亡；1990年,孟加拉过曾经有339个儿童在服用受二甘醇污染的对乙酰氨基酚糖浆后出现肾衰竭，其中大部份死亡；1996年，海地有85个儿童因服用含有二甘醇的对乙酰氨基酚糖浆而死亡；2006年，中国黑龙江省齐齐哈尔第二制药有限公司生产的亮菌甲素注射液含有高浓度的二甘醇，最少有11人因注射该注射液而死亡。

取化合物1和4各2mg做为前体，取2个50mL烧杯，把化合物1和4分别放入50mL烧杯中，分别加入1ml二甘醇(HO-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)，再各自加入20ml5M的硫酸催化，水浴锅中70摄氏度恒温条件下反应，用搅拌机搅拌12个小时，停止反应，分离制备得到化合物2和3。高效液相色谱HPLC检测(150×4.6mm i.d.5μm,洗脱液MeOH/H₂O10：90到90：10的比例梯度洗脱，流速1mL/min)，二甘醇量约减少千分之一点五，同时发现生成化合物2和3。

Claims

1.苯乙基苯丙酰胺类化合物micrometams A-E，其结构通式如式(1)所示：

2.权利要求1所述的化合物micrometams A、B、C、D或E在制备抗卤虫制剂中的应用。

3.权利要求1所述的化合物micrometams A、B、C、D和E在芸香科(Rutaceae)黄皮族(Clauseneae)化学生态分类上的应用。

4.权利要求1所述的化合物micrometams A或D在制备二甘醇吸附制剂中的应用。

5.大管(Micromelum falcatum)在制备权利要求1所述的化合物micrometams A、B、C、D或E中的应用。