CN103975853B - 一种彩色粗肋草吉祥组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种彩色粗肋草吉祥组织培养方法。步骤为，选取健壮无病虫害彩色粗肋草吉祥停止浇水几天后取样；用添加洗衣粉的水溶液进行漂洗，后用流水冲洗，分段后再用75％乙醇处理30秒，1‰的HgCl2进行消毒20分，无菌水冲洗；接种消毒好的无菌体培养，光照时长8h/d，获得外植体；用刀尖侧刺生长点，进行培养，光照时长8h/d；将抽高的芽高大于15mm的芽以单芽形式切下，接入生根培养基中培养，光照时长12h/d；所述培养条件为光强1500-2500lx，温度26±1℃，培养周期5-6周；移栽。采用本发明的方法，增殖率提升到4.0，生根率提升到95%以上，种植成活率在90%以上。
Description
技术领域
本发明涉及植株的组培方法，尤其涉及一种彩色粗肋草吉祥组织培养方法。
背景技术
吉祥,拉丁名Aglaonema‘Favonian’，天南星科，粗肋草属。叶椭圆形，渐尖，叶满粉红色夹杂绿色斑块或斑点。喜温暖湿润和半阴环境。不耐寒，怕强光暴晒，不耐干旱。用分株或扦插法繁殖，春至秋季为适期。由于该品种是彩叶品种，叶绿素含量较低，生长缓慢，扦插或分株繁殖周期长，用组织培养法繁殖又存在内生菌污染高，对激素较不敏感，增殖率低，生根难，易枯叶等难点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种简单、快速扩繁、成活率高、成本低的彩色粗肋草吉祥组织培养方法。
为实现上述目的，本发明提供一种彩色粗肋草吉祥组织培养方法，其特征在于，步骤为，
取材：4-6月份选取植株健壮无病虫害具有母本特性的彩色粗肋草吉祥作为母株，搬至干燥阴凉通风处停止浇水3-5天后，于下午三点后用干净的刀片或者剪刀将植株地上部分整株取下，去掉叶片；
消毒：将所取材料用添加0.5%洗衣粉的水溶液进行漂洗，洗衣粉洗干净即可，后用流水冲洗干净。在工作台上进行分段，每段有1-2芽，每段1.5-2公分；用75％乙醇处理30s，再用1‰的HgCl2进行消毒20min，期间不断震荡，用无菌水冲洗3-5次。
接种并培养：将消毒好的无菌体在无菌超净工作台上接种，每瓶制种、增殖培养基培养基只接种一个，培养条件为光强1500-2500lx，温度为26±1℃，培养周期5-6周，光照时长8h/d，获得外植体；
增殖培养：上述外植体的分化芽以丛芽方式增殖，每丛2-3芽，芽高度大于15mm可去顶留15mm，假茎粗度大于5mm，用刀尖侧刺生长点，以刺穿基部生长点为准，然后进行培养，培养条件为光强1500-2500lx，温度为26±1℃，培养周期5-6周，光照时长8h/d；
生根培养：将上述增殖培养后抽高的芽高大于15mm的芽以单芽形式切下，接入生根培养基中培养；培养条件为光强1500-2500lx，温度为26±1℃，培养周期5-6周，光照时长12h/d，生根率约95%；
移栽。
所述取材步骤中母本的株高为15-30cm。
所述接种并培养步骤中，在诱导培养基上连续继代1次以上进入增殖扩繁阶段。
所述接种并培养步骤中，在诱导培养基上连续继代4次进入增殖扩繁阶段。
所述移栽步骤为将生根培养的瓶苗经一周左右的炼苗，然后将生根植株从培养瓶中取出，洗去基部粘附的培养基，用50%的多菌灵800倍浸泡10分钟，捞起后稍晾，分别栽种到提前准备好的育苗盘中，育苗基质为0~10mm丹麦泥炭藓：珍珠岩=3：1的体积比，定植后淋一次透水，搭拱盖薄膜保湿，加盖遮光度为70%的荫网遮荫，移栽后每天定时揭膜透气，每天逐步增加透气时间，一个月后移去拱膜。
本发明在经历两年多试验的基础上，增殖率从1.6左右提升到4.0，生根率从30%提升到95%以上，种植成活率在90%以上。
附图说明
图1是彩色粗肋草吉祥的外植体图。
图2是彩色粗肋草吉祥的增值图。
图3是彩色粗肋草吉祥的生根图。
图4是彩色粗肋草吉祥长成小植株图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：彩色粗肋草吉祥组织培养
培养基：
诱导培养基（增殖培养基的成分同此）：改良MS+6BA3.0mg/L+2ip2.0mg/L+KT3.0mg/L+NAA0.1mg/L+三碘苯甲酸5.0mg/l+蔗糖40g/l，pH5.8，卡拉胶5.0；
生根培养基：1/2改良MS+NAA0.2mg/L+IBA1.0mg/L+AC0.5g/L+蔗糖30g/L，pH5.8，卡拉胶6.0；
表1改良MS配方表
| 药品名称 | 用量（mg/l） |
| KNO3 | 1300-1900 |
| NH4NO3 | 1200-1650 |
| MgSO4.7H2O | 370 |
| KH2PO4 | 170 |
| NaH2PO4 | 170 |
| CaCl2.2H2O | 220 |
| MnSO4.4H2O | 22.3 |
| ZnSO4.7H2O | 8.6 |
| H3BO3 | 6.2 |
| KI | 0.83 |
| CuSO4.5H2O | 0.025 |
| CoCl2.6H2O | 0.025 |
| FeSO2.7H2O | 27.8 |
| Na2—EDTA.2H2O | 37.3 |
| 甘氨酸 | 2.0 |
| 盐酸硫胺素（维生素B1） | 0.1 |
| 盐酸吡哆醇（维生素B6） | 0.5 |
| ⅣB烟酸 | 0.5 |
| 肌醇 | 100 |
表21/2改良MS配方表
| 药品名称 | 用量（mg/l） |
| KNO3 | 650-950 |
| NH4NO3 | 600-825 |
| MgSO4.7H2O | 185 |
| KH2PO4 | 85 |
| NaH2PO4 | 85 |
| CaCl2.2H2O | 220 |
| MnSO4.4H2O | 22..3 |
| ZnSO4.7H2O | 8.6 |
| H3BO3 | 6.2 |
| KI | 0.83 |
| CuSO4.5H2O | 0.025 |
| CoCl2.6H2O | 0.025 |
| FeSO2.7H2O | 27.8 |
| Na2—EDTA.2H2O | 37.3 |
| 甘氨酸 | 2.0 |
| 盐酸硫胺素（维生素B1） | 0.1 |
| 盐酸吡哆醇（维生素B6） | 0.5 |
| ⅣB烟酸 | 0.5 |
| 肌醇 | 100 |
实验步骤：
1无菌体的获得
1.1取材：彩色粗肋草吉祥盆栽（购自广州缤纷公司），株高15-30cm为佳。待春季回温后，材料恢复生长，长势旺盛时（约4-6月份）进行选材，选取植株健壮无病虫害具有母本特性的作为母株，搬至干燥阴凉通风处停止浇水3-5天后可取材。下午三点后再去取材，用干净的刀片或者剪刀将植株地上部分整株取下，去掉叶片后带回实验室。
1.2消毒：材料用添加0.5%洗衣粉的水溶液进行漂洗，洗衣粉洗干净即可，后用流水冲洗干净。在工作台上进行分段，每段有1-2芽，每段1.5-2公分；用75％乙醇处理30s，再用1‰的HgCl2进行消毒20min，期间不断震荡，用无菌水冲洗3-5次。
1.3接种并培养：将消毒好的无菌体在无菌超净工作台上接种，为提高制种成活率减少交叉污染，每瓶培养基（诱导培养基）只接种一个，成活率约50%。
培养条件为光强1500-2500lx，温度为26±1℃，培养周期5~6周，光照时长8h/d，外植体获得率约50%，见图1的外植体；在诱导培养基上连续继代4次后，增殖率可达3.0以上，进入增殖扩繁阶段。
1.4增殖培养：
培养后芽的切割方法：上述外植体的分化芽以丛芽方式增殖，每丛2-3芽，芽高度大于15mm可去顶留15mm，假茎粗度大于5mm，用刀尖侧刺生长点，以刺穿基部生长点为准，然后进行培养，培养条件为光强1500-2500lx，温度为26±1℃，培养周期5~6周，光照时长8h/d，增殖率约4.0。见图2。
1.5生根培养：
生根苗切割方法：将上述增殖培养后抽高的芽以单芽形式切下（芽高大于15mm，芽高小于15mm的小芽继续以团块方式转入增殖培养），接入生根培养基中培养。
培养条件为光强1500-2500lx，温度为26±1℃，培养周期5~6周，光照时长12h/d，生根率约95%。见图3。
1.6移栽：
将生根培养的瓶苗经一周左右的炼苗，然后将生根植株从培养瓶中取出，洗去基部粘附的培养基，用50%的多菌灵800倍浸泡2分钟，捞起后稍晾，分别栽种到提前准备好的育苗盘中，育苗基质为丹麦泥炭藓(0~10mm)：珍珠岩=3：1（体积比），定植后淋一次透水，搭拱盖薄膜保湿，加盖遮光度为70%的荫网遮荫，移栽后每天定时揭膜透气，每天逐步增加透气时间，一个月后移去拱膜，进行常规管理，小植株在移栽15d后开始生长，移栽成活率达90%以上。见图4。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (5)
1.一种彩色粗肋草吉祥组织培养方法，其特征在于，步骤为，
取材：4-6月份选取植株健壮无病虫害具有母本特性的彩色粗肋草吉祥作为母株，搬至干燥阴凉通风处停止浇水3-5天后，于下午三点后用干净的刀片或者剪刀将植株地上部分整株取下，去掉叶片；
消毒：将所取材料用添加0.5%洗衣粉的水溶液进行漂洗，洗衣粉洗干净即可，后用流水冲洗干净；在工作台上进行分段，每段有1-2芽，每段1.5-2公分；用75％乙醇处理30s，再用1‰的HgCl2进行消毒20min，期间不断震荡，用无菌水冲洗3-5次；
接种并培养：将消毒好的无菌体在无菌超净工作台上接种至诱导培养基，每瓶培养基只接种一个，培养条件为光强1500-2500lx，温度为26±1℃，培养周期5-6周，光照时长8h/d，获得外植体；
增殖培养：上述外植体的分化芽以丛芽方式增殖，每丛2-3芽，芽高度大于15mm时去顶留15mm，假茎粗度大于5mm，用刀尖侧刺生长点，以刺穿基部生长点为准，然后进行培养，培养条件为光强1500-2500lx，温度为26±1℃，培养周期5-6周，光照时长8h/d；所使用培养基为增殖培养基；
生根培养：将上述增殖培养后抽高的芽高大于15mm的芽以单芽形式切下，接入生根培养基中培养；培养条件为光强1500-2500lx，温度为26±1℃，培养周期5-6周，光照时长12h/d；
移栽；
所述诱导培养基或增殖培养基配方为：改良MS+6BA3.0mg/L+2ip2.0mg/L+KT3.0mg/L+NAA0.1mg/L+三碘苯甲酸5.0mg/l+蔗糖40g/l，pH5.8，卡拉胶5.0；
生根培养基配方为：1/2改良MS+NAA0.2mg/L+IBA1.0mg/L+AC0.5g/L+蔗糖30g/L，pH5.8，卡拉胶6.0；
所述改良MS配方：KNO31300-1900mg/l；NH4NO31200-1650mg/l；MgSO4·7H2O370mg/l；KH2PO4170mg/l；NaH2PO4170mg/l；CaCl2·2H2O220mg/l；MnSO4·4H2O22.3mg/l；ZnSO4·7H2O8.6mg/l；H3BO36.2mg/l；KI0.83mg/l；CuSO4·5H2O0.025mg/l；CoCl2·6H2O0.025mg/l；FeSO2·7H2O27.8mg/l；Na2—EDTA·2H2O37.3mg/l；甘氨酸2.0mg/l；盐酸硫胺素0.1mg/l；盐酸吡哆醇0.5mg/l；烟酸0.5mg/l；肌醇100mg/l；
1/2改良MS配方：KNO3650-950mg/l；NH4NO3600-825mg/l；MgSO4·7H2O185mg/l；KH2PO485mg/l；NaH2PO485mg/l；CaCl2·2H2O220mg/l；MnSO4·4H2O22.3mg/l；ZnSO4·7H2O8.6mg/l；H3BO36.2mg/l；KI0.83mg/l；CuSO4·5H2O0.025mg/l；CoCl2·6H2O0.025mg/l；FeSO2·7H2O27.8mg/l；Na2—EDTA·2H2O37.3mg/l；甘氨酸2.0mg/l；盐酸硫胺素0.1mg/l；盐酸吡哆醇0.5mg/l；烟酸0.5mg/l；肌醇100mg/l；
2.权利要求1所述彩色粗肋草吉祥组织培养方法，其特征在于，所述取材步骤中母本的株高为15-30cm。
3.权利要求1所述彩色粗肋草吉祥组织培养方法，其特征在于，所述接种并培养步骤中，在诱导培养基上连续继代1次以上进入增殖扩繁阶段。
4.权利要求3所述彩色粗肋草吉祥组织培养方法，其特征在于，所述接种并培养步骤中，在诱导培养基上连续继代4次进入增殖扩繁阶段。
5.权利要求1所述彩色粗肋草吉祥组织培养方法，其特征在于，所述移栽步骤为将生根培养的瓶苗经一周左右的炼苗，然后将生根植株从培养瓶中取出，洗去基部粘附的培养基，用50%的多菌灵800倍浸泡10分钟，捞起后稍晾，分别栽种到提前准备好的育苗盘中，育苗基质为10mm丹麦泥炭藓：珍珠岩=3：1体积比的混合物，定植后淋一次透水，搭拱盖薄膜保湿，加盖遮光度为70%的荫网遮荫，移栽后每天定时揭膜透气，每天逐步增加透气时间，一个月后移去拱膜。
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