CN103952149B - 一种二氯化-1,1′-二甲基-4,4′-联吡啶的荧光检测试剂及检测方法 - Google Patents
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Abstract
一种二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂及检测方法，它涉及联吡啶除草剂的荧光检测试剂及方法。它是要解决现有的对百草枯的荧光检测方法中存在的检测物质难于获得、操作繁琐的技术问题。本发明的试剂是以荧光染料CXT为荧光分子探针。是由水、缓冲溶液和荧光染料CXT组成的溶液。定性检测是通过荧光检测试剂加入待测试样前后是否出现CXT的荧光猝灭来判断的；定量检测是通过标准曲线法来检测的。本发明荧光染料CXT作为荧光分子探针，可用于湖水及污水等实际环境水样品中的DBPD除草剂的检测。
Description
技术领域
本发明涉及联吡啶除草剂的荧光检测试剂及方法。
背景技术
除草剂对环境和人体健康有很大的影响，其种类多、产量大，一直是备受关注的热点。其中比较典型的联吡啶类除草剂为百草枯(DBPD)，又名克无踪、对草快，化学名为l，1-二甲基4，4-联吡啶阳离子盐，其分子式为C12H14N2，其结构式为：
该除草剂易溶于水，在碱性条件下易水解，在酸性及中性溶液中稳定，具有较强的除草性能，被广泛应用于农业生产，最终将被释放到环境中，引起环境问题。
现有的对百草枯的检测方式有紫外分光光度法、高效液相色谱法、色谱-质谱分析法等，这些检索方法存在步骤多、操作繁琐、试剂或设备成本高等缺点。因此，需要开发简便、低成本、高灵敏度、快速、选择性好的检测方法。
除草剂对环境和人体健康有很大的影响，其种类多、产量大，一直是备受关注的热点。其中比较典型的一类为联吡啶类除草剂。该类物质易溶于水，在碱性条件下易水解，在酸性及中性溶液中稳定，具有较强的除草性能，被广泛应用于农业生产，最终将被释放到环境中，引起环境问题。因此，建立方便、有效的联吡啶类除草剂的检测方法，对于生物、环境及医学等都有着重要的意义。
除草剂可以利用紫外分光光度法、高效液相色谱法、拉曼光谱法、电化学法、色谱-质谱分析法以及荧光光谱法等检测方法，其中采用荧光光谱法检测百草枯的方法中，是以葫芦脲、阴离子型冠醚类化合物、CdTe/CdS量子点等与百草枯相互作用，达到检测百草枯的目的，但是以上的检测试剂难于获得，而且检测方法步骤多、操作繁琐。
发明内容
本发明是要解决现有的对百草枯的荧光检测方法存在的检测物质难于获得、操作繁琐的技术问题，而提供一种二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂及检测方法。
本发明的一种用于二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂是以荧光染料CXT为荧光分子探针。
荧光染料CXT，其化学名称为4,4'-双[(4-羟乙胺基-6-苯胺基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]-二苯乙烯-2,2'-二磺酸钠，其分子结构如下式1。
本发明的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂是由水、缓冲溶液和荧光染料CXT组成的溶液，该溶液的pH值大于5，荧光染料CXT的浓度为1.0×10-6mol/L～1.0×10-5mol/L。
其中的缓冲溶液为醋酸-醋酸钠缓冲溶液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液或磷酸氢二钾-氢氧化钠缓冲溶液。
利用上述的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂进行定性检测的方法，按以下步骤进行：
一、用荧光光谱仪检测二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂的荧光强度，记录荧光强度值A0；
二、将待测试样加入到荧光检测试剂中，混合均匀后，用荧光光谱仪检测荧光强度，记录荧光强度值A1；
三、比较荧光强度值A0和荧光强度值A1，如果产生了荧光猝灭，则可判断试样中含有二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶。
其中，荧光猝灭是指荧光强度值A1比荧光强度值A0值降低20％以上。
利用上述的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂进行定量检测的方法，按以下步骤进行：
一、按二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的浓度从低到高，将二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶加入到二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶荧光检测试剂中，用荧光光谱仪检测它们的荧光强度，以二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的浓度为横作标，以荧光强度为纵作标，绘制标准曲线；
二、将待测试样加入到荧光检测试剂中，混合均匀后，用荧光光谱仪检测荧光强度， 记录荧光强度值A1；
三、根据荧光强度值A1和在标准曲线上查得二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的浓度值，从而获得待测试样中二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的含量。
荧光染料CXT是一种性能优异、具有很强增白效果的纤维素纤维用增白剂，该增白剂一直被大量用于洗涤剂行业及纺织行业，适用于棉纤维的增白。本发明将荧光增白剂CXT作为检测百草枯除草剂的一种荧光探针分子，是这种荧光增白剂CXT的一种创新的应用。
本发明中的荧光染料CXT能够与百草枯除草剂(DBPD)在弱酸性缓冲溶液中形成稳定复合物，使CXT的荧光猝灭。基于这种结合导致的荧光变化，建立了一种单一选择性荧光检测联吡啶类除草剂百草枯的新方法。该荧光染料CXT探针与低浓度DBPD除草剂就能形成稳定复合物，使CXT的荧光猝灭；并且不受其它常见除草剂，例如N-(膦酰基甲基)甘氨酸(Glyphosate)、2,4-D、4,6-双异丙胺基-2-甲硫基-1,3,5-三嗪(Prometryn)的影响，具有高选择性。而且只要在pH值大于5时，CXT能够用于联吡啶类除草剂的检测。而且荧光检测时的响应时间约为2分钟，本发明的荧光检测试剂具有高选择性、高灵敏性、响应快。同时作为荧光探针的荧光染料CXT是一种常用荧光增白剂，具有来源广泛，价格低，使用安全，低污染等优点。利用该类物质建立新的检测方法，具有较强的实用价值。
采用荧光光谱法，先用测试不同浓度的DBPD荧光强度，绘制标准工作曲线，然后实际检测时，用实测的荧光强度推算出DBPD的具体的实际含量，达到定量检测的目的。
本发明的这种结合的荧光变化建立的检测方法，实现了对二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶除草剂的实时、快速、灵敏及选择性检测。可用于湖水及污水等实际环境水样品中的DBPD除草剂的检测。
附图说明
图1是实施例一的试验2中溶液荧光强度随pH值的变化曲线图；
图2是实施例一的试验3中荧光强度随着时间变化的关系曲线图。
图3是实施例一的试验5中的荧光光谱图。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式的一种二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂是以荧光染料CXT为荧光分子探针。
本实施方式中所述的荧光染料CXT，其化学名称为4,4'-双[(4-羟乙胺基-6-苯胺基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]-二苯乙烯-2,2'-二磺酸钠，其分子结构如下式1。
具体实施方式二：本实施方式的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂是由荧光染料CXT和缓冲溶液组成，其中缓冲溶液是以水为溶剂配制而成的，缓冲溶液的pH值为5～7。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式二不同的是缓冲溶液为醋酸-醋酸钠缓冲溶液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液或磷酸氢二钾-氢氧化钠缓冲溶液。其它与具体实施方式二相同。
由于本方法需要在弱酸性溶液中进行，因此需要控制溶液的pH，因此需要缓冲溶液来稳定pH值，保证溶液pH值的稳定。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式二或三不同的是荧光染料CXT的浓度为1.0×10-6mol/L～1.0×10-5mol/L。其它与具体实施方式二或三相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式二至四之一不同的是缓冲溶液的浓度为5.0×10-3～5.0×10-2mol/L。其它与具体实施方式二至四之一相同。
具体实施方式六：利用具体实施方式一至五之一所述的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂进行定性检测的方法，按以下步骤进行：
一、用荧光光谱仪检测二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂的荧光强度，记录荧光强度值A0；
二、将待测试样加入到荧光检测试剂中，混合均匀后，用荧光光谱仪检测荧光强度，记录荧光强度值A1；
三、比较荧光强度值A0和荧光强度值A1，如果产生了荧光猝灭，则可判断试样中含有二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式六不同的是荧光光谱仪的激发波长为340nm，荧光强度值A0、A1为最大发射波长447nm处的值；其它与具体实施方式六相同。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式六或七不同的是所述的荧光猝灭是指荧光强度值A1比荧光强度值A0值降低20％以上。其它与具体实施方式六或七相同。
具体实施方式九：利用具体实施方式一至五之一所述的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂进行定量检测的方法，按以下步骤进行：
一、按二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的浓度从低到高，将二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶加入到二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶荧光检测试剂中，用荧光光谱仪检测它们的荧光强度，以二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的浓度为横作标，以荧光强度为纵作标，绘制标准曲线；
二、将待测试样加入到荧光检测试剂中，混合均匀后，用荧光光谱仪检测荧光强度，记录荧光强度值A1；
三、根据荧光强度值A1和在标准曲线上查得二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的浓度值，从而获得待测试样中二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的含量。
用以下试验验证本发明的有益效果：
实施例一：本实施例一的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂是由荧光染料CXT和HAc-NaAc缓冲溶液组成，其中缓冲溶液是以水为溶剂配制而成的，缓冲溶液的pH值为6.0，缓冲溶液的浓度为1.0×10-2mol/L，CXT的浓度为5.0×10-6mol/L。配制方法是：将荧光染料CXT加入到HAc-NaAc缓冲溶液中形成的。
试验1：利用实施例一的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂进行定性检测的方法，按以下步骤进行：
一、用荧光光谱仪检测二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂的荧光强度，记录荧光强度值A0；
二、向荧光检测试剂中分别加入二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶(DBPD)、2,4–D、N-(膦酰基甲基)甘氨酸(Glyphosate)、4,6-双异丙胺基-2-甲硫基-1,3,5-三嗪(Prometryn)除草剂，除草剂的浓度均为5.0×10-5mol/L，混合均匀后，得到DBPD试样、2,4–D试样、Glyphosate试样和Prometryn试样，用荧光光谱仪检测各试样的荧光强度，检测时激发波长为340nm，记录最大发射波长为447nm处的荧光强度值A1，将A0及A1列在表1中：
表1试验1中的荧光强度值A0和A1
三、比较荧光强度值A0和荧光强度值A1，仅有DBPD试样产生了荧光猝灭，验证了 本方法的有效性。其它除草剂对溶液荧光光谱影响不明显。
试验2：本试验是为了证明CXT能够用于pH值大于5时DBPD的检测，具体操作如下：先准备两个试样，试样1：浓度为5.0×10-6mol/L的CXT水溶液；试样2：向浓度为5.0×10-6mol/L的CXT水溶液中加入DBPD，DBPD的浓度为5.0×10-5mol/L。用HCl或NaOH溶液调节试样1和试样2的pH值，检测时荧光光谱的激发波长为340nm，测定随pH值的变化，溶液在最大发射波长为447nm处荧光强度，得到的溶液荧光强度随pH值的变化曲线图如图1所示，其中a为CXT水溶液荧光强度随pH值的变化曲线；b为CXT水溶液中加入DBPD后的荧光强度随pH值的变化曲线。从图1可以看出，在pH值大于5时，CXT能与DBPD结合，导致溶液荧光发生显著猝灭。CXT能够用于pH值大于5时DBPD的检测。
试验3：测定实施例一的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂的响应时间，具体按以下步骤进行：
向实施例一的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂中加入DBPD，立即进行荧光光谱检测，其中DBPD的浓度为5.0×10-5mol/L，检测时激发波长为340nm，最大发射波长为447nm，测定荧光强度随着时间变化情况，得到荧光强度随着时间变化的关系曲线如图2，从图2可以看出，溶液的荧光强度先是随时间明显降低，当时间超过2min后，荧光强度趋于稳定。表明CXT对DBPD的响应快。图2中纵坐标表示最大发射波长处(447nm)的荧光强度，横坐标表示时间(t/min)。
试验4、测定实施例一的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂对DBPD与其它除草剂共存时的检测情况，具体如下：
一、用荧光光谱仪检测二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂的荧光强度，记录荧光强度值A0；
二、向荧光检测试剂中分别加入二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶(DBPD)和2,4–D、(DBPD)和N-(膦酰基甲基)甘氨酸(Glyphosate)、DBPD和4,6-双异丙胺基-2-甲硫基-1,3,5-三嗪(Prometryn)，除草剂DBPD的浓度均为5.0×10-5mol/L，其他除草剂的浓度也为5.0×10-5mol/L，混合均匀后，得到DBPD+Glyphosate试样、DBPD+Prometryn试样和、DBPD+2,4–D试样，用荧光光谱仪检测各试样的荧光强度，检测时激发波长为340nm，记录最大发射波长为447nm处的荧光强度值A1，将A0及A1列在表2中：
表2试验4中的荧光强度值A0和A1
三、比较荧光强度值A0和荧光强度值A1，可知，当DBPD与其它除草剂共存时，其它常见除草剂均不明显干扰DBPD的检测，其荧光强度与溶液中仅存在DBPD时相似。表明，CXT对DBPD的荧光检测不受其它常见除草剂的影响。
试验5、测定实施例一的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂对DBPD敏感性，具体如下：
向实施例一的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂中加入DBPD，DBPD浓度为CXT浓度的0–10倍时，测定其荧光，激发波长为340nm，最大发射波长为447nm。得到的荧光光谱图如图3所示，图中箭头所指的方向为DBPD浓度升高的方向，从图3可以看出随着DBPD的浓度的增大，溶液在447nm处的荧光峰强度逐渐降低。对数据进行分析可知，当DBPD浓度在0～5.0×10-5mol/L范围内，溶液的荧光强度与DBPD浓度呈现良好的线性关系(R2＝0.9951)，其线性回归方程为y＝-2.3567x+222.68。
对空白样进行20次平均测定，按3σ/K(σ为空白标准偏差，K为回归方程斜率)，计算检出限为27nmol/L，线性范围为2.7×10-8～5.0×10-5mol/L。表明本检测方法可以提高灵敏检测DBPD。
试验6：本试验是用实施例一的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂在实际环境水样品中的应用，具体步骤如下：
一、按DBPD的浓度从低到高，将DBPD加入到实施例一的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂中，用荧光光谱仪检测它们的荧光强度，以DBPD的浓度为横作标，以荧光强度为纵作标，绘制标准曲线；
二、将湖水用定性滤纸过滤，然后用离心分离机以12000rpm分离，向该处理后的湖水中加入DBPD，得到DBPD水溶液。向实施例一的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂在分别加入DBPD水溶液，使其中DBPD的浓度分别为10.0、20.0、30.0、40.0和50.0μM。在340nm激发下，记录447nm荧光发射强度。通过与定量标准曲线对比，得到DBPD的实际检测浓度，计算回收率在99.1％-103.1％之间。
该试验表明该方法可应用于实际环境水样品中的DBPD检测。
试验7：本试验是用实施例一的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂在实际环境水样品中的应用，具体步骤如下：
一、按DBPD的浓度从低到高，将DBPD加入到实施例一的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂中，用荧光光谱仪检测它们的荧光强度，以DBPD的浓度为横作标，以荧光强度为纵作标，绘制标准曲线；
二、将污水用定性滤纸过滤，然后用离心分离机以12000rpm分离。向该处理后的污水中加入DBPD，得到DBPD水溶液。向实施例一的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂在分别加入DBPD水溶液，使其中DBPD的浓度分别为10.0、20.0、30.0、40.0和50.0μM。在340nm激发下，记录447nm荧光发射强度。通过与定量标准曲线对比，得到DBPD的实际检测浓度，计算回收率在97.1％-100.1％之间。
本试验表明该方法可应用于污水样品中的DBPD检测。
实施例二、本实施例二的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂是将荧光染料CXT加入到磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液中形成的，其中缓冲溶液是以水为溶剂配制而成的，缓冲溶液的pH值为6.5，缓冲溶液的浓度为1.0×10-2mol/L，CXT的浓度为5.0×10-6mol/L。
试验1、利用实施例二的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂进行定量检测的方法，按以下步骤进行：
一、用荧光光谱仪检测二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂的荧光强度，记录荧光强度值A0；
二、向荧光检测试剂中分别加入二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶(DBPD)、2,4–D、N-(膦酰基甲基)甘氨酸(Glyphosate)、4,6-双异丙胺基-2-甲硫基-1,3,5-三嗪(Prometryn)除草剂，除草剂的浓度均为5.0×10-5mol/L，混合均匀后，得到DBPD试样、2,4–D试样、Glyphosate试样和Prometryn试样，用荧光光谱仪检测各试样的荧光强度，检测时激发波长为340nm，记录最大发射波长为447nm处的荧光强度值A1，将A0及A1列在表3中：
表3试验1中的荧光强度值A0和A1
三、比较荧光强度值A0和荧光强度值A1，仅有DBPD试样产生了荧光猝灭，验证了本方法的有效性。其它除草剂对溶液荧光光谱影响不明显。表明本检测方法可在常见除草剂中选择性检测DBPD。
本实施例的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂对于pH值大于5时能够用 于DBPD的检测，响应时间为2分钟。对DBPD的荧光检测不受其它除草剂的影响。随着DBPD的浓度的增加，溶液在447nm处的荧光峰强度逐渐降低。当DBPD浓度在0～5.0×10-5mol/L范围内，溶液的荧光强度与DBPD浓度呈现良好的线性关系(R2＝0.9951)，其线性回归方程为y＝-2.0067x+212.68，检出限为31nmol/L，线性范围为3.1×10-8～5.0×10-5mol/L。可高灵敏地检测DBPD。
试验2、本试验是用实施例二的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂在实际环境水样品中的应用，具体步骤如下：
一、按DBPD的浓度从低到高，将DBPD加入到实施例二的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂中，用荧光光谱仪检测它们的荧光强度，以DBPD的浓度为横作标，以荧光强度为纵作标，绘制标准曲线；
二、将湖水用定性滤纸过滤，然后用离心分离机以12000rpm分离，向该处理后的湖水中加入DBPD，得到DBPD水溶液。向实施例二的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂在分别加入DBPD水溶液，使其中DBPD的浓度分别为10.0、20.0、30.0、40.0和50.0μM。在340nm激发下，记录447nm荧光发射强度。通过与定量标准曲线对比，得到DBPD的实际检测浓度，计算回收率在98.1％-102.1％之间。
该试验表明该方法可应用于实际环境水样品中的DBPD检测。
试验3：本试验是用实施例二的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂在实际环境水样品中的应用，具体步骤如下：
一、按DBPD的浓度从低到高，将DBPD加入到实施例二的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂中，用荧光光谱仪检测它们的荧光强度，以DBPD的浓度为横作标，以荧光强度为纵作标，绘制标准曲线；
二、将污水用定性滤纸过滤，然后用离心分离机以12000rpm分离。向该处理后的污水中加入DBPD，得到DBPD水溶液。向实施例二的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂在分别加入DBPD水溶液，使其中DBPD的浓度分别为10.0、20.0、30.0、40.0和50.0μM。在340nm激发下，记录447nm荧光发射强度。通过与定量标准曲线对比，得到DBPD的实际检测浓度，计算回收率在96.1％-107.1％之间。
本试验表明该方法可应用于污水样品中的DBPD检测。
实施例三、本实施例三的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂是由荧光染料CXT和磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液组成，其中缓冲溶液是以水为溶剂配制而成的，缓冲溶液的pH值为6.0，缓冲溶液的浓度为0.2mol/L，CXT的浓度为5.0×10-6mol/L。配制 方法是：将荧光染料CXT加入到HAc-NaAc缓冲溶液中形成的。
试验1：利用实施例三的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂进行定性检测的方法，按以下步骤进行：
一、用荧光光谱仪检测二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂的荧光强度，记录荧光强度值A0；
二、向荧光检测试剂中分别加入二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶(DBPD)、2,4–D、N-(膦酰基甲基)甘氨酸(Glyphosate)、4,6-双异丙胺基-2-甲硫基-1,3,5-三嗪(Prometryn)除草剂，除草剂的浓度均为5.0×10-5mol/L，混合均匀后，得到DBPD试样、2,4–D试样、Glyphosate试样和Prometryn试样，用荧光光谱仪检测各试样的荧光强度，检测时激发波长为340nm，记录最大发射波长为447nm处的荧光强度值A1，将A0及A1列在表4中：
表4试验1中的荧光强度值A0和A1
三、比较荧光强度值A0和荧光强度值A1，仅有DBPD试样产生了荧光猝灭，验证了本方法的有效性。其它除草剂对溶液荧光光谱影响不明显。
本实施例的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂对于pH值大于5时能够用于DBPD的检测，响应时间为2分钟。对DBPD的荧光检测不受其它除草剂的影响。随着DBPD的浓度的增加，溶液在447nm处的荧光峰强度逐渐降低。当DBPD浓度在0～5.5×10-5mol/L范围内，溶液的荧光强度与DBPD浓度呈现良好的线性关系(R2＝0.9948)，其线性回归方程为y＝-2.4267x+232.68；，检出限为26nmol/L，线性范围为2.6×10-8～5.5×10-5mol/L。可高灵敏地检测DBPD。
试验2、本试验是用实施例三的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂在实际环境水样品中的应用，具体步骤如下：
一、按DBPD的浓度从低到高，将DBPD加入到实施例三的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂中，用荧光光谱仪检测它们的荧光强度，以DBPD的浓度为横作标，以荧光强度为纵作标，绘制标准曲线；
二、将湖水用定性滤纸过滤，然后用离心分离机以12000rpm分离，向该处理后的湖水中加入DBPD，得到DBPD水溶液。向实施例三的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光 检测试剂在分别加入DBPD水溶液，使其中DBPD的浓度分别为10.0、20.0、30.0、40.0和50.0μM。在340nm激发下，记录447nm荧光发射强度。通过与定量标准曲线对比，得到DBPD的实际检测浓度，计算回收率在99.1％～107.1％之间。
该试验表明该方法可应用于实际环境水样品中的DBPD检测。
试验3：本试验是用实施例三的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂在实际环境水样品中的应用，具体步骤如下：
一、按DBPD的浓度从低到高，将DBPD加入到实施例三的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂中，用荧光光谱仪检测它们的荧光强度，以DBPD的浓度为横作标，以荧光强度为纵作标，绘制标准曲线；
二、将污水用定性滤纸过滤，然后用离心分离机以12000rpm分离。向该处理后的污水中加入DBPD，得到DBPD水溶液。向实施例三的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂中分别加入DBPD水溶液，使其中DBPD的浓度分别为10.0、20.0、30.0、40.0和50.0μM。在340nm激发下，记录447nm荧光发射强度。通过与定量标准曲线对比，得到DBPD的实际检测浓度，计算回收率在98.5％～102.1％之间。
表明该方法可应用于污水样品中的DBPD检测。
实施例四、本实施例四的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂是将荧光染料CXT加入到磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液中形成的，其中缓冲溶液是以水为溶剂配制而成的，缓冲溶液的pH值为6.8，缓冲溶液的浓度为0.05mol/L，CXT的浓度为5.0×10-6mol/L。
试验1、利用实施例四的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂进行定性检测的方法，按以下步骤进行：
一、用荧光光谱仪检测二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂的荧光强度，记录荧光强度值A0；
二、向荧光检测试剂中分别加入二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶(DBPD)、2,4–D、N-(膦酰基甲基)甘氨酸(Glyphosate)、4,6-双异丙胺基-2-甲硫基-1,3,5-三嗪(Prometryn)除草剂，除草剂的浓度均为CXT浓度的12倍，混合均匀后，得到DBPD试样、2,4–D试样、Glyphosate试样和Prometryn试样，用荧光光谱仪检测各试样的荧光强度，检测时激发波长为340nm，记录最大发射波长为447nm处的荧光强度值A1，将A0及A1列在表5中：
表5试验1中的荧光强度值A0和A1
三、比较荧光强度值A0和荧光强度值A1，仅有DBPD试样产生了荧光猝灭，验证了本方法的有效性。其它除草剂对溶液荧光光谱影响不明显。表明本检测方法可在常见除草剂中选择性检测DBPD。
本实施例的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂对于pH值大于5时能够用于DBPD的检测，响应时间为2分钟。对DBPD的荧光检测不受其它除草剂的影响。随着DBPD的浓度的增加，溶液在447nm处的荧光峰强度逐渐降低。当DBPD浓度在0～6.0×10-5mol/L范围内，溶液的荧光强度与DBPD浓度呈现良好的线性关系(R2＝0.9901)，其线性回归方程为y＝-2.1267x+202.68；，检出限为30nmol/L，线性范围为3.0×10-8～6.0×10-5mol/L。可高灵敏地检测DBPD。
试验2、本试验是用实施例四的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂在实际环境水样品中的应用，具体步骤如下：
一、按DBPD的浓度从低到高，将DBPD加入到实施例四的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂中，用荧光光谱仪检测它们的荧光强度，以DBPD的浓度为横作标，以荧光强度为纵作标，绘制标准曲线；
二、将湖水用定性滤纸过滤，然后用离心分离机以12000rpm分离，向该处理后的湖水中加入DBPD，得到DBPD水溶液。向实施例四的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂在分别加入DBPD水溶液，使其中DBPD的浓度分别为10.0、20.0、30.0、40.0和50.0μM。在340nm激发下，记录447nm荧光发射强度。通过与定量标准曲线对比，得到DBPD的实际检测浓度，计算回收率在98.2％-105.4％之间。
该试验表明该方法可应用于实际环境水样品中的DBPD检测。
试验3：本试验是用实施例四的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂在实际环境水样品中的应用，具体步骤如下：
一、按DBPD的浓度从低到高，将DBPD加入到实施例四的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂中，用荧光光谱仪检测它们的荧光强度，以DBPD的浓度为横作标，以荧光强度为纵作标，绘制标准曲线；
二、将污水用定性滤纸过滤，然后用离心分离机以12000rpm分离。向该处理后的污水中加入DBPD，得到DBPD水溶液。向实施例四的二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂在分别加入DBPD水溶液，使其中DBPD的浓度分别为10.0、20.0、30.0、40.0 和50.0μM。在340nm激发下，记录447nm荧光发射强度。通过与定量标准曲线对比，得到DBPD的实际检测浓度，计算回收率在99.5％-106.1％之间。
本试验表明该方法可应用于污水样品中的DBPD检测。
Claims (8)
1.一种二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂，其特征在于该荧光检测试剂是以荧光染料CXT为荧光分子探针，其中荧光染料CXT，其化学名称为4,4'-双[(4-羟乙胺基-6-苯胺基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]-二苯乙烯-2,2'-二磺酸钠，其分子结构为：
该荧光检测试剂是由荧光染料CXT和缓冲溶液组成，缓冲溶液的pH值为5～7。
2.根据权利要求1所述的一种二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂，其特征在于缓冲溶液为醋酸-醋酸钠缓冲溶液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液或磷酸氢二钾-氢氧化钠缓冲溶液。
3.根据权利要求1或2所述的一种二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂，其特征在于荧光染料CXT的浓度为1.0×10-6mol/L～1.0×10-5mol/L。
4.根据权利要求1或2所述的一种二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂，其特征在于缓冲溶液的浓度为5.0×10-3～5.0×10-2mol/L。
5.利用权利要求1所述的一种二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂进行定性检测的方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：
一、用荧光光谱仪检测二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂的荧光强度，记录荧光强度值A0；
二、将待测试样加入到荧光检测试剂中，混合均匀后，用荧光光谱仪检测荧光强度，记录荧光强度值A1；
三、比较荧光强度值A0和荧光强度值A1，如果产生了荧光猝灭，则可判断试样中含有二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶。
6.根据权利要求5所述的利用二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂进行定性检测的方法，其特征在于荧光光谱仪的激发波长为340nm，荧光强度值A0、A1为最大发射波长447nm处的值。
7.根据权利要求5所述的利用二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂进行定性检测的方法，其特征在于荧光猝灭是指荧光强度值A1比荧光强度值A0值降低20％以上。
8.利用权利要求1所述的一种二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的荧光检测试剂进行定量检测的方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：
一、按二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的浓度从低到高，将二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶加入到二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶荧光检测试剂中，用荧光光谱仪检测它们的荧光强度，以二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的浓度为横作标，以荧光强度为纵作标，绘制标准曲线；
二、将待测试样加入到荧光检测试剂中，混合均匀后，用荧光光谱仪检测荧光强度，记录荧光强度值A1；
三、根据荧光强度值A1和在标准曲线上查得二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的浓度值，从而获得待测试样中二氯化-1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶的含量。
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