CN103948566A - 含18α-甘草酸的纳米粒制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种含18α-甘草酸的纳米粒，其中，18α-甘草酸纳米粒分散于纯化水中，18α-甘草酸纳米粒由18α-甘草酸、脂质材料和乳化剂组成，18α-甘草酸、脂质材料、乳化剂的重量比为（1～4）∶（1～15）∶（5～50）；纯化水的用量按每5～20mg乳化剂添加1ml纯化水计。该纳米粒通过将18α-甘草酸包封于脂质材料中，改善药物的体内吸收，提高生物利用度，同时具有缓释和靶向性，从而降低毒副作用，提高疗效。

Description

含18α-甘草酸的纳米粒制备方法和应用

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种抗肝损伤药物18α-甘草酸的新剂型，特别涉及一种18α-甘草酸、卵磷脂纳米粒抗肝损伤药物。

技术背景

18α-甘草酸（18α-Glycyrrhizic acid；18α-GL）是天然甘草酸（β体）的差相异构体，在甘草中含量极微小。早期研究发现，甘草酸的药理作用主要有抗炎作用，抗过敏作用，膜保护作用，镇咳作用，免疫调节和抗病毒作用等。临床上主要用于解毒、抗变态反应、抗溃疡、抗炎镇咳。现代药理研究证明甘草酸还具有保护肝细胞，抗病毒性肝炎，抑制肝纤维化，抗肿瘤，抑制艾滋病病毒增殖等作用。现已广泛用于病毒性肝病治疗，并且越来越多的医生尝试用于治疗肝纤维化，其抗艾滋病治疗也正在临床试验中。18α-GL制剂，如甘利欣，其主药甘草酸二铵中α体与β体甘草酸的比例约为7:2，临床大规模应用已有二十年，是目前治疗肝病的最有效药物之一。大量文献报道它对急性肝炎、慢性乙型病毒性肝炎、肝纤维化，甚至肝硬化均具有明显疗效，对病毒学指标亦有一定改善。

经过二十多年的临床应用，18α-GL的不良反应主要有高血压、低血钾、水肿等。甘草酸在体内水解为甘草次酸（GA），是因甘草次酸的类醛固酮作用所致。另由于甘草酸为高极性、亲水性大分子（分子量大于800），肠道很少吸收，血药浓度很低，而静脉给药虽有效，但因高极性大分子不宜与细胞膜上受体结合，需大剂量才能产生高效，这样势必加重不良反应。

纳米药物是十九世纪七十年代发展起来的新型药物制剂。随着纳米科技和制药技术的迅速发展，纳米药物的研究日益深入、扩大。纳米药物是将药物的微粒或将药物吸附包裹在载体中，制成纳米尺寸范围内的微粒，再以其为基础制成不同种类的剂型，以达到缓释、控释和靶向给药的作用。纳米药物在生物体内有着独特的吸收过程：当静脉、动脉或腹腔注射100-200nm的微粒系统，很快被网状内皮系统的巨噬细胞吞噬，最终到达肝脏Kupffer细胞的溶酶体中；小于100nm，大于50nm的微粒能进入肝实质细胞中。由此可见，纳米药物的主要靶向器官之一是肝脏，将抗肝损伤药物制成纳米制剂，与普通药物相比，将具有良好的缓释控释及靶向特性，能显著提高药物的生物利用度，延长药物作用时间，增加药物的稳定性，减少不良反应及用药剂量，更好地实现了控释和缓释效果。

18α-GL纳米粒，可使18α-GL发挥肝靶向性治疗作用，大大提高临床疗效，减少不良反应。

中国专利文献CN1586487，涉及一种甘草酸三元复合物纳米微粒的制备方法。利用离子凝胶化方法,以三聚磷酸钠、羧甲基纤维素钠作为聚阴离子和壳聚糖或季铵化的N-(2-羟基)丙基-3-三甲基氯化铵壳聚糖进行离子凝胶化反应,并通过甘草酸和壳聚糖的相互作用制备甘草酸三元复合物纳米微粒。通过控制壳聚糖的分子量、壳聚糖(季铵化的N-(2-羟基)丙基-3-三甲基氯化铵)、三聚磷酸钠和羧甲基纤维素钠以及甘草酸的浓度和比例可以得到不同粒径大小的纳米微粒。得到的甘草酸纳米微粒径可控、尺寸均一,该纳米微粒表面带有正电荷,利于表面修饰。方法简单易行,原料易得,制备过程重复性好,实用性强,并具有广泛的应用性。

中国专利文献CN1586488是一种制备壳聚糖甘草酸纳米粒子的方法。甘草酸具有抗病毒性肝炎、慢性肝炎作用以及破坏血管内艾滋病毒细胞的效果,目前临床使用的甘草酸制剂存在口服难吸收的问题。将溶于酸性水溶液的壳聚糖和溶于氨水溶液的甘草酸混合,通过在一定范围内的壳聚糖分子量、壳聚糖脱乙酰度、酸溶液浓度、氨水浓度、投料比等,在较温和的反应条件下合成了壳聚糖甘草酸纳米粒子水分散体系,将其冷冻干燥后即得到粉末状壳聚糖甘草酸纳米粒子。该方案壳聚糖甘草酸交联水分散体系是分散均匀、形状接近球形的纳米粒子。能在水中能够重新分散成纳米粒子,具有一定的靶向和缓释性能。具有方法简单、原料易得,产品口服后,与市售口服制剂相比,其肠道吸收效率和生物利用度有明显提高。

中国专利文献CN102327227A涉及一种制备载体为聚乙二醇-聚(γ-氨基-ε-己内酯)的甘草酸的纳米粒子的方法。以双亲水性嵌段共聚物甲氧基封端的聚乙二醇-聚(γ-氨基-ε-己内酯)作为载体,在一定pH值下,氨质子化的聚合物水溶液与带负电的亲水性模型药物甘草酸通过静电组装的方法获得目标物。目标物粒径及药物的释放速率均可调节。预示着聚乙二醇-聚(γ-氨基-ε-己内酯)体系有望作为一种模板,作为其它带有负电荷的亲水性药物以及基因的载体系统。

这三份专利文献，均是关于甘草酸（亦即：天然甘草酸，18β-甘草酸）通过物理和化学的方法与聚合物结合形成纳米粒子的制备方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种18α-甘草酸（18β-甘草酸的差向异构体）与脂质材料，通过物理包裹法制备纳米粒子方法。通过将18α-甘草酸包封于脂质材料中，改善药物的体内吸收，提高18α-GL生物利用度，同时具有缓释和肝靶向性，从而降低毒副作用，提高疗效。

本发明的另一目的在于提供该纳米粒在抗肝损伤中的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：

一种含18α-甘草酸纳米粒抗肝损伤药物，其中，18α-甘草酸纳米粒分散于纯化水中，18α-甘草酸纳米粒由18α-甘草酸、脂质材料和乳化剂组成，18α-甘草酸、脂质材料、乳化剂的重量比为（1～4）:（1～15）:（5～50）；纯化水的用量按每5～20mg乳化剂添加1ml纯化水计。优化地，该纳米粒的直径在50～300nm之间，Zeta电位在-28～-45之间，其原料及各原料的质量比为：

18α-甘草酸：1～4

脂质材料：1～15

表面活性剂：5～50

上述原料的质量百分比之和为100%，其余成分为纯化水。

优化地，所述脂质材料是单硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、山嵛酸甘油酯、和硬脂酸中的一种或两种以上任意比例组成混合物；表面活性剂是卵磷脂、泊洛沙姆188、吐温-80、PEG400、辛癸酸甘油酯、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、蓖麻油聚氧乙烯醚40、span80中的一种或两种以上任意比例混合组成的混合物，这些表面活性剂对人体低毒、安全、无刺激。

优化地，所述的有机溶剂选自氯仿、二氯甲烷、甲醇、无水乙醇、1,2-丙二醇、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、正己烷中的的一种或几种的混合物。

优化地，所述含18α-甘草酸纳米粒的制备方法，采用高压乳匀法制备，具体包括以下步骤：

（1）将18α-甘草酸、脂质材料，加入适量的有机溶剂中，恒温水浴加热，使其溶解，得到液态油相。

（2）将表面活性剂，加入适量的蒸馏水，搅拌，加热，使其溶解，得到水相。

（3）将（1）制得的油相缓慢加入搅拌中的水相中，继续加热浓缩，得到纳米初乳。

（4）将（3）得到的纳米初乳在搅拌下，缓慢滴加入适量冰水中，继续搅拌。

（5）将（4）制得的乳液超声后，均质，得到18α-甘草酸纳米粒。

优选的，所述步骤（1）中，加热温度为50～100℃，在步骤（4）中，蒸馏水置于冰水浴中，搅拌速度为800～2000r/min，在步骤（5）中，超声时间2～15min，均质压力150～500bar，均质次数2～5次。

优化地，所述含18α-甘草酸纳米粒的混悬液的制备方法，其特征在于：制得的混悬液中纳米粒的粒径为100～300nm，包封率大于75%。

一种18α-甘草酸、卵磷脂纳米粒抗肝损伤药物，可通过口服、注射给药，极大的提高了18α-甘草酸的生物利用度，减少药物在体内的首过效应，促进18α-甘草酸的胃肠道吸收，增强了18α-甘草酸的肝靶向分布，提高了治疗效果。

本发明的一种18α-甘草酸、卵磷脂纳米粒抗肝损伤药物，与现有技术相比，具有以下优点：

（1）本发明的一种18α-甘草酸、卵磷脂纳米粒的药物粒径在50～300nm之间，是将18α-甘草酸中加入脂质，滴加入有表面活性剂的蒸馏水中，得到均匀、透明的纳米乳体系。形成的纳米粒18α-甘草酸含量达到0.1%以上，包封率达到80%以上。

（2）本发明的18α-甘草酸、卵磷脂纳米粒分布均匀，体系透明、稳定性好，有较低的表面张力，具有良好的流动性。

（3）高压乳匀法的原理是通过高压推动液体通过微米级的狭缝，流体在短距离内迅速加速，产生较高的剪切力和空穴力，将颗粒破碎至纳米级。此方法在制备过程中可避免或减少有机溶剂的用量，提高制剂的安全性，降低环境污染，并已有相关设备满足工业化大生产的要求。（4）本发明制成纳米粒后可制成口服液直接服用、也可经胶囊包封或经冻干粉技术等处理。

具体实施方式

以下通过具体实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明的保护范围并不局限于此。下述各实施例中18α-甘草酸纳米粒的粒径、电位和包封率等指标的测定采用如下方法。

（1）测定18α-甘草酸纳米粒的粒径大小和电位

取纯化水稀释18α-甘草酸纳米粒，采用Zata-sizer Nano ZS90激光散射粒度仪测定其粒径和Zeta电位。

（2）测定18α-甘草酸纳米粒的包封率

取1.0ml18α-甘草酸纳米粒加无水乙醇适量，加热，破乳后，冷至室温，定容，0.22μm微孔滤膜过滤，采用高效液相色谱法测定滤液中药物浓度，计算药物总量（W_总）。

取1.0ml18α-甘草酸纳米粒加纯化水适量，混匀，超速离心，取上清液，经0.22μm微孔滤膜过滤，采用高效液相色谱法测定滤液中药物浓度，计算游离药物量（W_离）

实施例1

取600mg山嵛酸甘油酯，600mg18α-甘草酸于40ml无水乙醇中，75℃加热溶解，作为油相；取1000mg卵磷脂溶于30ml纯化水中，加热至75℃溶解，作为水相；在搅拌速度为

1200r/min条件下，将上述油相缓慢滴加至水相中，形成初乳，继续加热，浓缩至15ml，在2000r/min转速下，将初乳浓缩液缓慢滴加至置于冰水浴中的200ml纯化水中，继续搅拌2h后，超声10min，均质压力350bar，均质次数3次，即得18α-甘草酸纳米粒。

实施例2

取600mg三硬脂酸甘油酯，600mg18α-甘草酸于30ml无水乙醇中，80℃加热溶解，作为油相；取800mgPEG400溶于30ml纯化水中，加热至80℃溶解，作为水相；在搅拌速度为1500r/min条件下，将上述油相缓慢滴加至水相中，形成初乳，继续加热，浓缩至15ml，在1800r/min转速下，将初乳浓缩液缓慢滴加至置于冰水浴中的200ml纯化水中，继续搅拌2h后，超声15min，均质压力350bar，均质次数4次，即得18α-甘草酸纳米粒。

实施例3

取800mg单硬脂酸甘油酯，500mg18α-甘草酸于40ml氯仿中，50℃加热溶解，作为油相；取800mg泊洛沙姆溶于30ml纯化水中，加热至65℃溶解，作为水相；在搅拌速度为1200r/min条件下，将上述油相缓慢滴加至水相中，形成初乳，继续加热，浓缩至15ml，在2000r/min转速下，将初乳浓缩液缓慢滴加至置于冰水浴中的150ml纯化水中，继续搅拌2h后，超声10min，均质压力400bar，均质次数3次，即得18α-甘草酸纳米粒。

实施例4

取500mg单硬脂酸甘油酯，500mg18α-甘草酸于40ml无水乙醇中，70℃加热溶解，作为油相；取800mg PEG400、卵磷脂300mg溶于30ml纯化水中，加热至70℃溶解，作为水相；在搅拌速度为1500r/min条件下，将上述油相缓慢滴加至水相中，形成初乳，继续加热，浓缩至15ml，在2000r/min转速下，将初乳浓缩液缓慢滴加至置于冰水浴中的200ml纯化水中，继续搅拌2h后，超声10min，均质压力300bar，均质次数3次，即得18α-甘草酸纳米粒。

Claims (5)

1.一种含18α-甘草酸的纳米粒，其特征在于，18α-甘草酸纳米粒分散于纯化水中，18α-甘草酸纳米粒由18α-甘草酸、脂质材料和乳化剂组成，18α-甘草酸、脂质材料、乳化剂的重量比为（1~4）:（1~15）:（5~50）；纯化水的用量按每5~20mg乳化剂添加1ml纯化水计。

2.如权利要求1所述含18α-甘草酸的纳米粒，其特征在于，所述脂质材料选自单硬脂酸甘油酯、山嵛酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、硬脂酸中的一种或两种以上任意比例组成的混合物；所述的乳化剂选自卵磷脂、泊洛沙姆188、吐温-80、PEG400、辛癸酸甘油酯、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、蓖麻油聚氧乙烯醚40、span80中的一种或两种以上任意比例混合组成的混合物。

3.权利要求1或2所述含18α-甘草酸的纳米粒的制备方法，其特征在于，采用热溶-高压乳匀法制备，具体包括以下步骤：

（1）将按配方比例称取18α-甘草酸、脂质材料，加入适量的有机溶剂中，加热溶解，得到液态油相；

（2）按配方比例称取表面活性剂，加入适量的蒸馏水，搅拌，加热，得到水相；

（3）将（1）制得的油相缓慢滴加到水相中，搅拌，浓缩，得到纳米初乳；

（4）将（3）得到的纳米初乳在搅拌下，缓慢滴加入适量蒸馏水中，继续搅拌；

（5）将（4）制得的乳液超声后，均质，得到18α-甘草酸纳米粒。

4.如权利要求3所述含18α-甘草酸纳米粒的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，加热温度为50~100℃，在步骤（4）中，蒸馏水置于冰水浴中，搅拌速度为800~2000r/min，在步骤（5）中，超声时间2~15min，均质压力150~500bar，均质次数2~5次。

5.如权利要求1所述含18α-甘草酸纳米粒的制备方法，其特征在于：制得的混悬液中纳米粒的粒径为100~300nm，包封率大于75%。