CN103923082B - 4‑甲氧基‑5‑羟基铁屎米酮衍生物 - Google Patents

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CN103923082B CN201410175523.XA CN201410175523A CN103923082B CN 103923082 B CN103923082 B CN 103923082B CN 201410175523 A CN201410175523 A CN 201410175523A CN 103923082 B CN103923082 B CN 103923082B
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Abstract

本发明属于药物合成领域，公开了4‑甲氧基‑5‑羟基铁屎米酮衍生物，化合物结构如式I所示，其中，A选自C2‑8烷基或‑(CH2)n‑，n＝2,3,4或5；B选自卤素、含1个或多个N原子的3‑9元杂环基、‑NHR1或‑NR2R3；R1、R2、R3相同或不同，各自独立的选自C1‑6烷基。本发明还公开了4‑甲氧基‑5‑羟基铁屎米酮衍生物的制备方法及其在制备治疗肿瘤药物的应用。本发明通过对4‑甲氧基‑5‑羟基铁屎米酮的5位羟基进行结构修饰，提供一系列4‑甲氧基‑5‑羟基铁屎米酮衍生物，为进一步筛选抗肿瘤药物提供了思路。

Description

4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物
技术领域
本发明属于药物合成领域，具体涉及4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物及其制备方法，以及该类化合物在制备抗肿瘤药物方面的应用。
背景技术
苦木Picrasma quassioides(D.Don)Benn，又称苦树、苦楝树、熊胆树等，为苦木科苦木属植物，以苦味著称，故有“苦树”、“苦胆”之称，为落叶乔木，高可达10余米。分布于中国、印度北部、不丹、尼泊尔、朝鲜及日本，在我国主要分布在黄河流域以南各省区，其中广西和广东山区资源比较丰富，北方地区亦有分布，药源丰富。其性寒味苦，归肺、大肠经，具有清热祛湿、解毒消肿的功效，用于风热感冒、咽喉肿痛、温热泻痢、湿疹、毒蛇咬伤等。
苦木科苦树属植物苦木是一种重要的药用资源，具有较高的临床药用价值。对苦木化学成分和生物活性的最新研究表明，苦木中化学成分包括苦味素、生物碱、三萜等，生物活性有抗病原微生物、抗肿瘤、对心血管系统和消化系统的作用等。
生物碱为苦木中的主要化学成分，而4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮为苦木中含量最大的成分。4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮的结构式如下：
文献研究表明4-甲氧基-5羟基铁屎米酮有抗菌消炎的作用、对人鼻咽癌细胞有细胞毒性、对U937细胞和HepG2细胞有细胞毒性、对猪嗜中性粒细胞的磷酸二酯酶有抑制作用、对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎有明显的抑制作用。但未见对4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮的5位羟基进行结构修饰及其修饰产物活性的报道。
发明内容
本发明的目的是通过对4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮的5位羟基进行结构修饰，提供一系列4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物及其制备方法，以及该类化合物在制备抗肿瘤药物方面的应用。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
本发明提供了结构如式Ⅰ所示的4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物：
其中，A选自C2-8烷基或-(CH2)n-，n＝2,3,4或5；
B选自卤素、含1个或多个N原子的3-9元杂环基、-NHR1或-NR2R3；R1、R2、R3相同或不同，各自独立的选自H、C1-6烷基。
优选的，A选自C2-8烷基或-(CH2)n-，n＝2,3,4或5；
B选自Cl、Br、I、含1个或2个N原子的3-9元杂环基、-NHR1或-NR2R3；R1、R2、R3相同或不同，各自独立的选自H、C1-4烷基。
进一步优选的，A选自C2-3烷基、-CH2CHR4R5或-(CH2)n-，n＝2,3或4；R4选自甲基或乙基，R5选自甲基、乙基或正丁基；
B选自Cl、Br、I、含1个或2个N原子的3-7元杂环基、-NHR1或-NR2R3；R1、R2、R3相同或不同，各自独立的选自C1-3烷基。
更进一步优选的，A选自C2-3烷基、-CH2CHR4R5或-(CH2)n-，n＝2；R4选自甲基或乙基，R5选自甲基、乙基或正丁基；
B选自Cl、Br、I、含1个或2个N原子的3-7元杂环基、-NHR1或-NR2R3；R1、R2、R3相同或不同，各自独立的选自C1-3烷基。
最优选的，A选自乙基、正丙基、异丁基或-(CH2)n-，n＝2；
B选自Br、甲基哌嗪基、吗啡啉基、吡咯烷基或二乙胺基。
本发明所述的4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物选自：4-甲氧基-5-乙氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-丙氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-丁氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-异丁氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-仲丁氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-异戊氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-戊氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-溴乙氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-(甲基哌嗪基)乙氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-(吗啡啉基)乙氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-(吡咯烷基)乙氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-(二乙胺基)乙氧基)铁屎米酮。
本发明所述的4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物优选自：4-甲氧基-5-乙氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-丙氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-异丁氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-溴乙氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-(甲基哌嗪基)乙氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-(吗啡啉基)乙氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-(吡咯烷基)乙氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-(二乙胺基)乙氧基)铁屎米酮。
烷基表示直链或支链饱和烃基，例如C2-8烷基表示含有2-8个碳的直链或支链饱和烃基，烷基C1-6烷基包括甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、异戊基、2-戊基或正己基。
甲基哌嗪基指的是具有以下化学结构的基团：
吗啡啉基指的是具有以下化学结构的基团：
吡咯烷基指得是具有以下化学结构的基团：
本发明还提供了式Ⅰ所示的4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物的制备方法：
(1)、当A是C2-8烷基时，以4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮和溴代烷为原料，在催化剂作用下生成式Ⅰ化合物，
该制备方法中，所述的4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮和溴代烷物质的量之比为1:1.5～2.5；采用二甲基甲酰胺(DMF)作为反应溶剂，反应温度为60～85℃。
所述的溴代烷为单溴代C2-8烷烃，具体包括溴乙烷、1-溴丙烷、2-溴丙烷、溴正丁烷、溴代异丁烷、溴代仲丁烷、溴代异戊烷、1-溴-2-乙基丁烷或3-(溴乙基)庚烷。
所述的催化剂为碳酸钾。
(2)、当A是-(CH2)n-，n＝2,3,4或5，B为含1个或多个N原子的3-9元杂环基、-NHR1或-NR2R3时，先以4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮和二溴代烷为原料，在催化剂作用下生成式Ⅱ化合物，再以式Ⅱ化合物为中间体与含1个或多个N原子的3-9元杂环、伯胺或仲胺反应生成式Ⅰ化合物，
制备式Ⅱ化合物的步骤中，所述的4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮和二溴代烷物质的量之比为1:1.5～2.5；采用二甲基甲酰胺作为反应溶剂，反应温度为60～85℃。
所述的二溴代烷为1,2-二溴乙烷、1,3-二溴丙烷、1,4-二溴丁烷或1,5-二溴戊烷；所述的催化剂为碳酸钾。
以式Ⅱ化合物制备式Ⅰ化合物的步骤中，所述的式Ⅱ化合物和含1个或多个N原子的3-9元杂环、伯胺或仲胺物质的量之比为1:1.5～2.5；采用乙腈作为反应溶剂，反应温度为60～85℃。
所述的含1个或多个N原子的3-9元杂环包括N-甲基哌嗪、吗啡啉、吡咯烷等；所述的伯胺包括甲胺、乙胺、丙胺、1-氨基丁烷等；所述的仲胺包括二甲胺、二乙胺、甲乙胺、二丙胺、二丁胺等。
本发明化合物体外抑制肿瘤细胞活性实验的结果显示，化合物2、5、10-13对人肝癌细胞HepG2、结肠癌细胞HCT116的抑制作用明显优于4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮。其他化合物对人肝癌细胞HepG2、结肠癌细胞HCT116的抑制作用接近于4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮。
试验结果表明，本发明式I的化合物可作为制备治疗肿瘤药物的应用。
本发明还提供了一种用于治疗肿瘤的药用组合物，包括本发明提供式Ⅰ化合物和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
本发明的有益效果：本发明通过对4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮的5位羟基进行结构修饰，提供一系列4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物，经体外抑制肿瘤细胞活性实验的结果显示，制得的化合物对人肝癌细胞HepG2、结肠癌细胞HCT116的抑制作用明显优于或接近于4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮，为进一步筛选抗肿瘤药物提供了思路。在5位连有适当大小的烷基链能增强铁屎米酮类化合物的体外抗肿瘤活性。在5位引出一条具有含氮取代基的基团，也能显著增强铁屎米酮类化合物的体外抗肿瘤活性。
具体实施方式
实施例14-甲氧基-5-乙氧基铁屎米酮(化合物2)的制备
在25ml的三颈瓶中加入4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮50mg(0.19mmol)，碳酸钾75mg(0.54mmol)，无水DMF5mL，室温下滴加溴乙烷22μL(0.29mmol)，滴加完毕后用氮气保护，加热至80℃回流反应，TLC(薄层硅胶板)监测反应至完全，反应完成后降至室温，用15mL水和10mL的乙酸乙酯萃取，分离得到乙酸乙酯相和水相，水相再用乙酸乙酯萃取两次，合并乙酸乙酯相，再用饱和食盐水洗涤三次，乙酸乙酯相经无水硫酸钠干燥，减压蒸干溶剂，粗品经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯5:1洗脱)，得到浅黄色针晶化合物2(29mg，得率53％)。
m.p.162-164℃。ESI-MS m/z:295.1[M+H]+，分子式是C17H14N2O3，分子量是294。IRυmax(KBr)cm-1:2983,1663,1603,1587,1563。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ:8.82(1H,d,J＝5.0Hz,H-2),8.50(1H,d,J＝8.2Hz,H-8),8.36(1H,d,J＝7.4Hz,H-11),8.27(1H,d,J＝4.9Hz,H-1),7.76(1H,t,J＝7.3Hz,H-9),7.58(1H,t,J＝7.1Hz,H-10),4.35(3H,s,CH3-17),4.23(2H,q,J＝7.0Hz,CH2-18),1.39(3H,t,J＝7.0Hz,CH3-19)。
实施例24-甲氧基-5-丙氧基铁屎米酮(化合物3)的制备
在25ml的三颈瓶中加入4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮50mg(0.19mmol)、碳酸钾75mg(0.54mmol)，无水DMF5mL，室温下滴加1-溴丙烷35μL(0.38mmol)，滴加完毕后用氮气保护，加热至70℃回流反应，TLC监测反应至完全，反应完成后降至室温，用15mL水和10mL的乙酸乙酯萃取，分离得到乙酸乙酯相和水相，水相再用乙酸乙酯萃取两次，合并乙酸乙酯相，再用饱和食盐水洗涤三次，乙酸乙酯相经无水硫酸钠干燥，减压蒸干溶剂，粗品经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯5:1洗脱)，得到黄色固体化合物3(28mg，得率48％)，m.p.70-72℃。ESI-MS m/z:309.2[M+H]+，分子式为C18H16N2O3，分子量为308。IRυmax(KBr)cm-1:3128,2961,1654,1605,1587。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ:8.81(1H,d,J＝5.0Hz,H-2),8.48(1H,d,J＝8.2Hz,H-8),8.34(1H,d,J＝7.4Hz,H-11),8.25(1H,d,J＝4.9Hz,H-1),7.74(1H,t,J＝7.3Hz,H-9),7.56(1H,t,J＝7.1Hz,H-10),4.34(3H,s,CH3-17),4.12(2H,t,J＝6.6Hz,CH2-18),1.79(2H,m,CH2-19),1.04(3H,t,J＝7.4Hz,CH3-20)。
实施例34-甲氧基-5-丁氧基铁屎米酮(化合物4)的制备
在25ml的三颈瓶中加入4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮50mg(0.19mmol)、碳酸钾75mg(0.54mmol)，无水DMF5mL，室温下滴加溴正丁烷34μL(0.32mmol)，滴加完毕后用氮气保护，加热至60℃回流反应，TLC监测反应至完全，反应完成后降至室温，用15mL水和10mL的乙酸乙酯萃取，分离得到乙酸乙酯相和水相，水相再用乙酸乙酯萃取两次，合并乙酸乙酯相，再用饱和食盐水洗涤三次，乙酸乙酯相经无水硫酸钠干燥，减压蒸干溶剂，粗品经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯5:1洗脱)，得到黄色固体化合物4(35mg，得率58％)，m.p.72-74℃。ESI-MS m/z:323.2[M+H]+,分子式为C19H18N2O3，分子量为322。IRυmax(KBr)cm-1:3127,2957,1658,1604,1560。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ:8.79(1H,d,J＝5.0Hz,H-2),8.46(1H,d,J＝8.1Hz,H-8),8.31(1H,d,J＝7.8Hz,H-11),8.22(1H,d,J＝5.0Hz,H-1),7.72(1H,t,J＝7.7Hz,H-9),7.54(1H,t,J＝7.6Hz,H-10),4.33(3H,s,CH3-17),4.14(2H,t,J＝6.5Hz,CH2-18),1.75(2H,m,CH2-19),1.51(2H,m,CH2-20),0.97(3H,t,J＝7.3Hz,CH3-21)。
实施例44-甲氧基-5-异丁氧基铁屎米酮(化合物5)的制备
在25ml的三颈瓶中加入4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮50mg(0.19mmol)、碳酸钾75mg(0.54mmol)，无水DMF5mL，室温下滴加溴代异丁烷37μL(0.34mmol)，滴加完毕后用氮气保护，加热至75℃回流反应，TLC监测反应至完全，反应完成后降至室温，用15mL水和10mL的乙酸乙酯萃取，分离得到乙酸乙酯相和水相，水相再用乙酸乙酯萃取两次，合并乙酸乙酯相，再用饱和食盐水洗涤三次，乙酸乙酯相经无水硫酸钠干燥，减压蒸干溶剂，
粗品经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯5:1洗脱)，得到黄色固体化合物5(26mg，得率46％)，m.p.52-54℃。ESI-MS m/z:323.2[M+H]+,分子式为C19H18N2O3，分子量为322。IRυmax(KBr)cm-1:3113,2954,1659,1606,1588。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ:8.77(1H,d,J＝5.0Hz,H-2),8.43(1H,d,J＝8.1Hz,H-8),8.27(1H,d,J＝7.8Hz,H-11),8.18(1H,d,J＝5.0Hz,H-1),7.70(1H,t,J＝7.7Hz,H-9),7.52(1H,t,J＝7.6Hz,H-10),4.33(3H,s,CH3-17),3.92(2H,d,J＝6.5Hz,CH2-18),2.07(1H,m,CH-19),1.04(6H,d,J＝6.7Hz,CH3-20,21)。
实施例54-甲氧基-5-仲丁氧基铁屎米酮(化合物6)的制备
在25ml的三颈瓶中加入4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮50mg(0.19mmol)、碳酸钾75mg(0.54mmol)，无水DMF5mL，室温下滴加溴代仲丁烷47μL(0.44mmol)，滴加完毕后用氮气保护，加热至80℃回流反应，TLC监测反应至完全，反应完成后降至室温，用15mL水和10mL的乙酸乙酯萃取，分离得到乙酸乙酯相和水相，水相再用乙酸乙酯萃取两次，合并乙酸乙酯相，再用饱和食盐水洗涤三次，乙酸乙酯相经无水硫酸钠干燥，减压蒸干溶剂，粗品经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯5:1洗脱)，得到黄色固体化合物6(29mg，得率51％)，m.p.76-78℃。ESI-MS m/z:323.2[M+H]+，分子式为C19H18N2O3，分子量为322。IRυmax(KBr)cm-1:3116,2970,1661,1604,1586。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ:8.83(1H,d,J＝5.0Hz,H-2),8.51(1H,d,J＝8.2Hz,H-8),8.37(1H,d,J＝7.8Hz,H-11),8.27(1H,d,J＝5.0Hz,H-1),7.76(1H,t,J＝8.1Hz,H-9),7.58(1H,t,J＝7.6Hz,H-10),4.54(1H,m,CH-19),4.34(3H,s,CH3-17),1.80-1.60(2H,m,CH2-20),1.28(3H,d,J＝6.2Hz,CH3-18),1.00(3H,t,J＝7.5Hz,CH3-21)。
实施例64-甲氧基-5-异戊氧基铁屎米酮(化合物7)的制备
在25ml的三颈瓶中加入4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮50mg(0.19mmol)、碳酸钾75mg(0.54mmol)，无水DMF5mL，室温下滴加溴代异戊烷45μL(0.38mmol)，滴加完毕后用氮气保护，加热至65℃回流反应，TLC监测反应至完全，反应完成后降至室温，用15mL水和10mL的乙酸乙酯萃取，分离得到乙酸乙酯相和水相，水相再用乙酸乙酯萃取两次，合并乙酸乙酯相，再用饱和食盐水洗涤三次，乙酸乙酯相经无水硫酸钠干燥，减压蒸干溶剂，粗品经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯5:1洗脱)，得到黄色固体化合物7(27mg，得率42％)，m.p.68-70℃。ESI-MS m/z:337.2[M+H]+，分子式为C20H20N2O3，分子量为336。IRυmax(KBr)cm-1:3127,2956,1666,1604,1586。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ:8.76(1H,d,J＝5.0Hz,H-2),8.42(1H,d,J＝8.1Hz,H-8),8.26(1H,d,J＝7.6Hz,H-11),8.18(1H,d,J＝5.0Hz,H-1),7.70(1H,t,J＝7.8Hz,H-9),7.51(1H,t,J＝7.5Hz,H-10),4.33(3H,s,CH3-17),4.16(2H,t,J＝6.7Hz,CH2-18),1.89-1.85(1H,m,CH-20),1.66(2H,q,J＝6.7Hz,CH2-19),0.97(6H,d,J＝6.6Hz,CH3-21,22)。
实施例74-甲氧基-5-(2-戊氧基)铁屎米酮(化合物8)的制备
在25ml的三颈瓶中加入4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮50mg(0.19mmol)、碳酸钾75mg(0.54mmol)，无水DMF5mL，室温下滴加2-溴戊烷52μL(0.42mmol)，滴加完毕后用氮气保护，加热至85℃回流反应，TLC监测反应至完全，反应完成后降至室温，用15mL水和10mL的乙酸乙酯萃取，分离得到乙酸乙酯相和水相，水相再用乙酸乙酯萃取两次，合并乙酸乙酯相，再用饱和食盐水洗涤三次，乙酸乙酯相经无水硫酸钠干燥，减压蒸干溶剂，粗品经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯5:1洗脱)，得到黄色固体化合物8(24mg，得率39％)，m.p.64-66℃。ESI-MS m/z:337.2[M+H]+,分子式为C20H20N2O3，分子量为336。IRυmax(KBr)cm-1:3127,2957,1670,1604,1585.
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ:8.81(1H,d,J＝4.8Hz,H-2),8.49(1H,d,J＝8.0Hz,H-8),8.34(1H,d,J＝7.3Hz,H-11),8.25(1H,d,J＝5.0Hz,H-1),7.74(1H,t,J＝7.8Hz,H-9),7.56(1H,t,J＝7.6Hz,H-10),4.60(1H,m,CH-19),4.33(3H,s,CH3-17),1.83-1.58(2H,m,CH2-20),1.53-1.42(2H,m,CH2-21),1.27(3H,d,J＝6.0Hz,CH3-18),0.94(3H,t,J＝7.2Hz,CH3-22)。
实施例84-甲氧基-5-(2-溴乙氧基)铁屎米酮(化合物9)的制备
在100ml的三颈瓶中加入4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮200mg(0.75mmol)，K2CO3313mg(2.27mmol)，用无水10ml DMF溶解，室温下滴加1,2-二溴乙烷98μL(1.14mmol)，滴加完毕后用氮气保护，加热至70℃回流反应，TLC监测，反应8小时，用15mL水和10mL的乙酸乙酯萃取，分离得到乙酸乙酯相和水相，水相再用乙酸乙酯萃取两次，合并乙酸乙酯相，再用饱和食盐水洗涤三次，乙酸乙酯相经无水硫酸钠干燥，蒸除乙酸乙酯，粗品用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯5:1洗脱)，得黄色固体化合物9(223mg，得率79％)，m.p.76-78℃。ESI-MS m/z:373.1[M+H]+，分子式为C17H13BrN2O3，分子量为372。IRυmax(KBr)cm-1:3128,2958,1668,1560。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ：8.85(1H,d,J＝5.0Hz,H-2),8.52(1H,d,J＝8.2Hz,H-8),8.39(1H,d,J＝7.7Hz,H-11),8.31(1H,d,J＝5.0Hz,H-1),7.79(1H,t,J＝7.3Hz,H-9),7.59(1H,t,J＝7.6Hz,H-10),4.50(2H,t,J＝5.8Hz,CH2-18),4.40(3H,s,CH3-17),3.86(2H,t,J＝5.9Hz,CH2-19)。
实施例94-甲氧基-5-(2-(甲基哌嗪基)乙氧基)铁屎米酮(化合物10)的制备
以实施例8制的的4-甲氧基-5-(2-溴乙氧基)铁屎米酮(化合物9)做为中间体，在25ml的三颈瓶中加入4-甲氧基-5-(2-溴乙氧基)铁屎米酮20mg(0.05mmol)，用5ml乙腈溶解，室温滴加N-甲基哌嗪9μL(0.08mmol)，加热至75℃回流反应，TLC监测，反应8小时，反应完毕后，减压蒸除溶剂，残余物经硅胶柱层析(乙酸乙酯：甲醇5:1洗脱)，得黄色固体化合物10(15mg，得率74％)，m.p.80-82℃。ESI-MS m/z:393.3[M+H]+,分子式为C22H24N4O3，分子量为392。IRυmax(KBr)cm-1:3132,1655,1565。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ:8.76(1H,d,J＝5.1Hz,H-2),8.54(1H,d,J＝8.2Hz,H-8),8.24(1H,d,J＝7.8Hz,H-11),8.15(1H,d,J＝5.1Hz,H-1),7.74(1H,t,J＝7.2Hz,H-9),7.56(1H,t,J＝7.2Hz,H-10),4.44(3H,s,CH3-17),4.41(2H,t,J＝5.3Hz,CH2-18),2.95(2H,t,J＝5.2Hz,CH2-19),2.76(4H,brs,CH2-1’,4’),2.55(4H,brs,CH2-2’,3’),2.29(3H,s,CH3-20)。
实施例104-甲氧基-5-(2-(吗啡啉基)乙氧基)铁屎米酮(化合物11)的制备
以实施例8制的的4-甲氧基-5-(2-溴乙氧基)铁屎米酮(化合物9)做为中间体，在25ml的三颈瓶中加入4-甲氧基-5-(2-溴乙氧基)铁屎米酮20mg(0.05mmol)，用5ml乙腈溶解，室温滴加吗啡啉8μL(0.09mmol)，加热至80℃回流反应，TLC监测，反应8小时，反应完毕后，减压蒸除溶剂，残余物经硅胶柱层析(乙酸乙酯：甲醇5:1洗脱)得到黄色固体化合物11(14mg，得率72％)，m.p.54-56℃。ESI-MS m/z:380.3[M+H]+,分子式为C21H21N3O4，分子量为379。IRυmax(KBr)cm-1:3127,1655,1605,1560。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ:8.63(1H,d,J＝5.1Hz,H-2),8.34(1H,d,J＝8.1Hz,H-8),8.03(1H,d,J＝7.7Hz,H-11),7.95(1H,d,J＝5.1Hz,H-1),7.61(1H,t,J＝7.7Hz,H-9),7.43(1H,t,J＝7.3Hz,H-10),4.41(3H,s,CH3-17),4.37(2H,t,J＝5.4Hz,CH2-18),3.63(4H,t,J＝4.6Hz,CH2-2’,3’),2.89(2H,t,J＝5.4Hz,CH2-19),2.66(4H,d,J＝4.2Hz,CH2-1’,4’)。
实施例114-甲氧基-5-(2-(吡咯烷基)乙氧基)铁屎米酮(化合物12)的制备
以实施例8制的的4-甲氧基-5-(2-溴乙氧基)铁屎米酮(化合物9)做为中间体，在25ml的三颈瓶中加入4-甲氧基-5-(2-溴乙氧基)铁屎米酮20mg(0.05mmol)，用5ml乙腈溶解，室温滴加吡咯烷7μL(0.08mmol)，加热至70℃回流反应，TLC监测，反应8小时，反应完毕后，减压蒸除溶剂，残余物经硅胶柱层析(乙酸乙酯：甲醇5:1洗脱)得到黄色固体化合物12(14mg，得率75％)，m.p.58-60℃。ESI-MS m/z:364.2[M+H]+,分子式为C21H21N3O3，分子量为363。IRυmax(KBr)cm-1:3128,2957,1663,1604,1585.
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ:8.78(1H,d,J＝5.1Hz,H-2),8.55(1H,d,J＝8.3Hz,H-8),8.24(1H,d,J＝7.7Hz,H-11),8.16(1H,d,J＝4.9Hz,H-1),7.74(1H,t,J＝7.3Hz,H-9),7.56(1H,t,J＝7.6Hz,H-10),4.47(3H,s,CH3-17),4.42(2H,t,J＝5.5Hz,CH2-18),3.24(2H,t,J＝5.3Hz,CH2-19),3.02(4H,s,CH2-1’,3’),1.96(4H,s,CH2-1’,4’)。
实施例124-甲氧基-5-(2-(二乙胺基)乙氧基)铁屎米酮(化合物13)的制备
以实施例8制的的4-甲氧基-5-(2-溴乙氧基)铁屎米酮(化合物9)做为中间体，在25ml的三颈瓶中加入4-甲氧基-5-(2-溴乙氧基)铁屎米酮20mg(0.05mmol)用5ml乙腈溶解，滴加二乙胺9μL(0.09mmol)，加热至80℃回流反应，TLC监测，反应8小时，反应完毕后，减压蒸除溶剂，残余物经硅胶柱层析(乙酸乙酯：甲醇5:1洗脱)得到黄色固体化合物13(16mg，得率82％)，m.p.60-62℃。ESI-MS m/z:366.2[M+H]+,分子式为C21H23N3O3，分子量为365。IRυmax(KBr)cm-1:3128,3012,1658,1553。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ:8.87(1H,d,J＝5.1Hz,H-2),8.59(1H,d,J＝8.0Hz,H-8),8.31(1H,d,J＝8.0Hz,H-11),8.26(1H,d,J＝5.0Hz,H-1),7.78(1H,t,J＝8.4Hz,H-9),7.62(1H,t,J＝7.2Hz,H-10),4.55(3H,s,CH3-17),4.50(2H,t,J＝4.9Hz,CH2-18),3.67(2H,t,J＝5.0Hz,CH2-19),3.49(4H,q,J＝7.3Hz,CH2-1’,3’),1.48(6H,d,J＝7.3Hz,CH2-1’,4’)。
实施例13本发明化合物体外抑制肿瘤细胞活性实验(MTT法)
1、材料
(1)细胞株
人肝癌细胞HepG2、结肠癌细胞HCT116由中科院上海生化研究所提供，完全培养基为90％RPMI-1640+10％CS，于37℃、5％CO2、饱和湿度的培养箱中培养。
(2)受试药品溶液
化合物1(4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮)、化合物2-13用少量DMSO溶解，再用完全培养基稀释配制200μM的化合物溶液，再依次稀释2倍得到100,50,25,6.25,3.13,1.56μM的化合物溶液，4℃保存备用。
(3)主要试剂与耗材
细胞培养瓶(美国FALCON353014)
青、链霉素混合液(中国上海信则生物科技有限公司)
胰蛋白酶-EDTA消化液(中国上海雅心生物技术有限公司)
RPMI-1640培养基(美国GIBCO31800-105)
胎牛血清CS(中国杭州四季青生物工程材料有限公司)
PBS缓冲盐溶液：磷酸二氢钾(KH2PO4)0.27g，磷酸氢二钠(Na2HPO4)1.42g，氯化钠(NaCl)8g，氯化钾(KCl)0.2g，加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，最后定容到1L，高温高压灭菌后置于4摄氏度冰箱保存待用。
MTT(美国Amresco0793)
MTT溶液：精密称取MTT0.05g，加入10mL PBS缓冲盐溶液，加热超声助溶，充分溶解后，用直径0.22μm微孔滤膜过滤除菌，浓度为5mg/mL，4℃避光保存，两周内使用。
DMSO(溶解Formazan结晶)(中国上海久亿化学试剂有限公司20120322)
DMSO(溶解受试药品)(美国SIGMA D2650)
96孔细胞培养板(Corning Incorporated3599)
(4)主要仪器与设备
超净工作台(中国苏州净化SW-CJ-1FD)
CO2培养箱(日本SANYO XD-101)
生物倒置显微镜(日本OLYMPUS IX51)
台式低速离心机(中国上海医疗器械股份有限公司医疗设备厂80-2)
2.5μl、10μl、200μl、1000μl移液器(德国Eppendorf)
酶标仪(美国BioTek EL-x800)
涡旋振荡器(中国海门其林贝尔，XW-80A)
恒温水浴箱(中国常州国华电器有限公司，HH-4)
2、方法
(1)细胞培养
人肝癌细胞HepG2在含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液中，37℃、5％CO2保持饱和湿度培养，2-3天传代一次。
(2)MTT法检测细胞增殖
2.1取处于指数生长期状态良好的细胞一瓶，加入胰蛋白酶-EDTA消化液消化，使贴壁细胞脱落，配制成浓度为5×104个/ml的细胞悬液，96孔细胞培养板中每孔加入100μl细胞悬液(每孔5×103个细胞)；
2.296孔细胞培养板置于37℃，5％CO2培养箱中培养24小时；
2.3弃去培养液，PBS清洗2次，每孔加入200μL相应的含不同浓度受试药品溶液的完全培养基(RPMI-1640培养基含10％CS，1％青、链霉素混合液)；同时设立阴性对照组(只加完全培养基)；
2.496孔细胞培养板置于37℃，5％CO2培养箱中培养48小时；
2.5将96孔细胞培养板进行MTT染色，λ＝490nm，测定OD值；
A每孔加入20μL MTT溶液(5mg/ml)，在培养箱继续培养4小时；
B弃去培养基，每孔加入150μL DMSO溶解，摇床10分钟轻轻混匀；
Cλ＝490nm，酶标仪读出每孔的OD值，计算抑制率。
2.6计数各组别抑制率及药物IC50
抑制率(％)＝(阴性对照组OD值-实验组OD值)/阴性对照组OD值×100％
应用SPSS(Staffstical Package for the Social Science)17.0通过机率单位加权回归法(Bliss法)计算IC50。
3、结果
表1本发明化合物对人肝癌细胞HepG2增殖的影响
表2本发明化合物对人结肠癌细胞HCT116增殖的影响
本发明化合物体外抑制肿瘤细胞活性实验的结果(见表1和表2)显示，化合物2、5、10-13对人肝癌细胞HepG2、结肠癌细胞HCT116的抑制作用明显优于化合物1(即原药)。其他化合物对人肝癌细胞HepG2、结肠癌细胞HCT116的抑制作用接近于原药。
上述试验结果表明，式I的化合物可作为制备治疗肿瘤药物的应用。
在4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮的5位引入烷氧基或者溴代烷氧基使化合物的脂溶性增加，但在5位上并不是所有连有烷氧基或者溴代烷氧基的化合物的活性都增强，与化合物1相比，化合物5的抗肿瘤活性明显增强，化合物2、3、8、9的活性优于或者接近于化合物1，说明只有碳链的大小合适才能使其活性增强。在4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮的5位引入含氮基团，衍生物的水溶性增强，与化合物1相比，4个含氮衍生物化合物10-13的抗肿瘤活性均有显著提高，说明引入含氮活性基团能显著提高铁屎米酮类化合物的体外抗肿瘤活性。

Claims (8)

1.如式Ⅰ所示的4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物：
其中，A选自-(CH2)n-，n＝2,3,4或5；B选自卤素、含1个或多个N原子的3-9元杂环基或-NR2R3；R2、R3相同或不同，各自独立的选自H、C1-6烷基；
或4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物选自：4-甲氧基-5-乙氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-丙氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-丁氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-异丁氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-仲丁氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-异戊氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-戊氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-(甲基哌嗪基)乙氧基)铁屎米酮。
2.根据权利要求1所述的4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物，其特征在于A选自-(CH2)n-，n＝2,3,4或5；
B选自Cl、Br、I、含1个或2个N原子的3-9元杂环基或-NR2R3；R2、R3相同或不同，各自独立的选自H、C1-4烷基。
3.根据权利要求2所述的4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物，其特征在于A选自-(CH2)n-，n＝2,3或4；
B选自Cl、Br、I、含1个或2个N原子的3-7元杂环基或-NR2R3；R2、R3相同或不同，各自独立的选自C1-3烷基。
4.根据权利要求3所述的4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物，其特征在于A选自
-(CH2)n-，n＝2；
B选自Cl、Br、I、含1个或2个N原子的3-7元杂环基或-NR2R3；R2、R3相同或不同，各自独立的选自C1-3烷基。
5.根据权利要求4所述的4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物，其特征在于A选自-(CH2)n-，n＝2；
B选自Br、吗啡啉基、吡咯烷基或二乙胺基。
6.根据权利要求1所述的4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物，其特征在于所述的4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物选自：4-甲氧基-5-乙氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-丙氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-丁氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-异丁氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-仲丁氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-异戊氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-戊氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-溴乙氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-(甲基哌嗪基)乙氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-(吗啡啉基)乙氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-(吡咯烷基)乙氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-(二乙胺基)乙氧基)铁屎米酮。
7.根据权利要求6所述的4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物，其特征在于所述的4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物选自：4-甲氧基-5-乙氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-丙氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-异丁氧基铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-溴乙氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-(甲基哌嗪基)乙氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-(吗啡啉基)乙氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-(吡咯烷基)乙氧基)铁屎米酮，4-甲氧基-5-(2-(二乙胺基)乙氧基)铁屎米酮。
8.权利要求1-7任一项所述的4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮衍生物在制备治疗肿瘤药物的应用。
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