CN103919831B - 一种促进骨折愈合的淫羊藿衍生物透皮吸收剂的制备方法和临床应用 - Google Patents
一种促进骨折愈合的淫羊藿衍生物透皮吸收剂的制备方法和临床应用 Download PDFInfo
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Abstract
取淫羊藿粉末乙醇用浸泡，加热回流提取得到含淫羊藿总黄酮提取物。淫羊藿总黄酮提取物再经羧甲基化制取衍生物。淫羊藿羧甲基化衍生物加羧甲基纤维素(或聚乙烯醇)2‑10g、甘油1g、蓖麻油1g、氮酮1‑2g。称取海藻酸钠共10g，加入水100ml，羧甲基纤维素2‑10g制备成透皮制剂。该制剂，制备方法简单，易溶于水，原料来源广，成本低廉，无副作用。
Description
技术领域
本发明属于医学临床用药，具体说是涉及一种适用于骨折、骨不连、股骨头坏死、骨质疏松的治疗与预防的药物。
背景技术
如何早期促进骨折愈合一直是骨伤科领域研究的重点课题，随着人们对骨折愈合机理认识的不断拓展，近年在探讨促进骨折愈合方法及机制方面的研究取得了令人瞩目的进展。自上世纪六十年代以来，中药促进骨折愈合的研究成果引起了国内外药学界的注意。
淫羊藿(Herba Epimedii)，别名仙灵脾、弃杖草、千两金、黄连祖，系小蘖科多年生草本植物心叶淫羊藿或箭属植物的地上部分，性甘、辛、温，无毒，入肝。
淫羊藿具有补肾助阳，强筋健骨，祛风除湿，洗疮杀虫，消瘰化痈之功效….淫羊藿苷作为其主要有效成分之一，近年来吸引了国内外众多学者的关注，并对其药理作用进行了深入而广泛的研究.迄今的结果发现淫羊藿苷的主要生理活性在于改善心脑血管系统功能、增强机体免疫力及调节内分泌，同时还具有抗肿瘤、抗病毒、抗缺氧，再氧合和健骨等作用.
对骨代谢的影响：淫羊藿具有促进骨骼生长，阻止钙质流失，预防骨质疏松的作用。淫羊藿可促进成骨细胞的增殖，实验研究表明，淫羊藿的抗骨质疏松作用部分是通过刺激成骨细胞增殖而实现的。淫羊藿总黄酮可通过保护性腺、抑制骨吸收和促进骨形成等途径，使机体骨代谢处于骨形成大于骨吸收的正平衡状态，抑制骨量丢失，防止骨质疏松的发生。淫羊藿提取液对分化成熟的破骨细胞无明显影响，但可抑制骨髓细胞诱导破骨细胞的形成，从而减少破骨细胞的产生，具有间接或直接增加骨形成的作用，这与古方记载的淫羊藿的强筋骨的作用相吻合。
发明内容
本发明的目的本发明的目的在于提供一种淫羊藿羧甲基衍生物透皮制剂的制备方法。是提供一种制备方法简单，易溶于水，原料来源广泛的治疗和预防骨折的药物。
本发明的优点是制备方法简单，易溶于水，原料来源广，成本低廉，无副作用。
本发明的淫羊藿羧甲基衍生物透皮制剂的制备方法，包括以下步骤：
提取方法：取淫羊藿粉末(过40目筛)100g，加10倍量70％乙醇，浸泡20h，加热回流提取2h，提取2次。过滤后合并2-3次滤液，滤液减压回收溶剂，浓缩，干燥。干燥物用甲醇溶解，活性碳脱杂质再除去甲醇溶剂，浓缩，干燥，得到淫羊藿素提取物。淫羊藿总黄酮提取率为3-4％，淫羊藿素的主要有效成分淫羊藿苷为黄酮类化合物。
淫羊藿羧甲基衍生物制备：
按每100g淫羊藿提取物加入200-250ml(2mol／L)的氢氧化钠液体混合均匀，35℃下搅拌0.5h；然后按每100g淫羊藿提取物再加入一氯乙酸20g与氢氧化钠20g的混合物，在70-80℃条件下搅拌反应3h，反应产物用95％乙醇洗涤，沉淀24h，得到羧甲基淫羊藿提取物生成物，生成物干燥。
淫羊藿羧甲基化衍生物透皮制剂的制备：
1淫羊藿羧甲基化衍生物10g、羧甲基纤维素2-10g、甘油1g、蓖麻油1g、氮酮1-2g。称取淫羊藿羧甲基化衍生物共10g，加入水100ml，羧甲基纤维素2-10g，搅拌至澄明胶液。搅拌下依次加入氮酮1-2g、甘油1g、蓖麻油1g，混匀，用碳酸氢钠调节PH值为7-7.5左右，超声15min。使用时涂布于纱布上，覆盖在治疗部位。
2.淫羊藿羧甲基化衍生物10g、聚乙烯醇2-10g、甘油1g、蓖麻油1g、氮酮1-2g。称取淫羊藿羧甲基化衍生物共10g，加入水100ml，聚乙烯醇2-10g搅拌至澄明胶液。搅拌下依次加入氮酮1-2g、甘油1g、蓖麻油1g，混匀，用碳酸氢钠调节PH值为7-7.5左右，超声15min。使用时涂布于纱布上，覆盖在治疗部位。
所述的药物组合物，在制备促进人或动物骨折愈合的治疗中的应用。
为了进一步的验证本发明成品制剂的疗效，我们将上述具体制备方法1-3中制备的药物进行了相应的动物试验，现将结果报告如下。
试剂：骨形态发生蛋白-2(BMP-2)抗体购于北京博奥森生物技术有限公司
动物：昆明小鼠30只，体重18-22g，雄性。
方法：把30只体重20～30g，2～3月龄昆明小白鼠股骨骨制成骨折动物模型，分成A，B两组。A组每只每天用淫羊藿羧甲基化衍生物透皮制剂贴覆与骨折部位附近，B组小白鼠不处理，每组小鼠分别于7＼14＼21d各处死5只。取小白鼠股骨制病理切片。标本经10％甲醛固定后脱钙，免疫组化染色。结果两组差异显著，A组3-4周即可形成连续性骨痂，临床愈合，最短14天即可形成连续骨痂。
结果：BMP-2蛋白的免疫阳性产物表达于骨基质内和骨母细胞胞质内，呈棕黄色。采用半定量法判断BMP-2蛋白的表达情况：选10个高倍视野，显色的阳性反应细胞数<25％为+，25～50％为++，＞75％为+++，无明显阳性反应细胞为-。计数资料的统计学分析采用卡方检验。检验标准α=0.05。
术后7d,15d,21d两组BMP-2蛋白的表达情况比较显示两组小鼠有显著性差异，A组小鼠用淫羊藿羧甲基化衍生物透皮制剂治疗后，BMP-2蛋白的表达明显增高(P<0.05)。
表1术后7d,15d,21d两组BMP-2蛋白的表达情况比较(n=15)
具体实施方式
以下是本发明内容的具体实施例，用于阐述本申请文件中所要解决技术问题的技术方案。
实施例1
提取方法：取淫羊藿粉末(过40目筛)100g，加10倍量70％乙醇，浸泡20h，加热回流提取2h，提取2次。过滤后合并2-3次滤液，滤液减压回收溶剂，浓缩，干燥。干燥物用甲醇溶解，活性碳脱杂质再除去甲醇溶剂，浓缩，干燥，得到淫羊藿素提取物。淫羊藿总黄酮提取率为3-4％，淫羊藿的主要有效成分淫羊藿苷为黄酮类化合物。
按每100g淫羊藿提取物加入200-250ml(2mol／L)的氢氧化钠液体混合均匀，35℃下搅拌0.5h；然后按每100g淫羊藿提取物再加入一氯乙酸20g与氢氧化钠20g的混合物，在70-80℃条件下搅拌反应3h，反应产物用95％乙醇洗涤，沉淀24h，得到淫羊藿羧甲基化衍生物生成物，生成物干燥。
淫羊藿羧甲基化衍生物透皮制剂的制备：
淫羊藿羧甲基化衍生物10g、羧甲基纤维素2-10g、甘油1g、蓖麻油1g、氮酮1-2g。称取淫羊藿羧甲基化衍生物共10g，加入水100ml，羧甲基纤维素2-10g，搅拌至澄明胶液。搅拌下依次加入氮酮1-2g、甘油1g、蓖麻油1g，混匀，用碳酸氢钠调节PH值为7-7.5左右，超声15min。使用时涂布于纱布上，覆盖在治疗部位。
实施例2
取淫羊藿粉末(过40目筛)100g，加10倍量70％乙醇，浸泡20h，加热回流提取2h，提取2次。过滤后合并2-3次滤液，滤液减压回收溶剂，浓缩，干燥。干燥物用甲醇溶解，活性碳脱杂质再除去甲醇溶剂，浓缩，干燥，得到淫羊藿素提取物。淫羊藿总黄酮提取率为3-4％，淫羊藿的主要有效成分淫羊藿苷为黄酮类化合物。
按每100g淫羊藿提取物加入200-250ml(2mol／L)的氢氧化钠液体混合均匀，35℃下搅拌0.5h；然后按每100g淫羊藿提取物再加入一氯乙酸20g与氢氧化钠20g的混合物，在70-80℃条件下搅拌反应3h，反应产物用95％乙醇洗涤，沉淀24h，得到淫羊藿羧甲基化衍生物生成物，生成物干燥。
淫羊藿全乙酰化衍生物透皮制剂的制备：
淫羊藿羧甲基化衍生物10g、聚乙烯醇2-10g、甘油1g、蓖麻油1g、氮酮1-2g。称取淫羊藿羧甲基化衍生物共10g，加入水100ml，聚乙烯醇2-10g搅拌至澄明胶液。搅拌下依次加入氮酮1-2g、甘油1g、蓖麻油1g，混匀，用碳酸氢钠调节PH值为7-7.5左右，超声15min。使用时涂布于纱布上，覆盖在治疗部位。
Claims (1)
1.一种促进骨骼愈合的淫羊藿羧甲基衍生物透皮制剂的制备方法，其特征在于：取过40目筛的淫羊藿粉末100g，加10倍量70％乙醇，浸泡20h，加热回流提取2h，提取2次，过滤后合并2次滤液，滤液减压回收溶剂，浓缩，干燥，干燥物用甲醇溶解，活性碳脱杂质再除去甲醇溶剂，浓缩，干燥，得到淫羊藿素提取物；按每100g淫羊藿提取物加入200-250ml的2mol/L氢氧化钠溶液混合均匀，35℃下搅拌0.5h，然后按每100g淫羊藿提取物再加入20g一氯乙酸与20g氢氧化钠的混合物，在70-80℃条件下搅拌反应3h，反应产物用95％乙醇洗涤，沉淀24h，得到淫羊藿羧甲基化衍生物生成物，生成物干燥；取干燥后淫羊藿羧甲基化衍生物10g，加入水100ml，羧甲基纤维素2-10g，搅拌至澄明胶液，搅拌下依次加入氮酮1-2g、甘油1g、蓖麻油1g，混匀，用碳酸氢钠调节pH值为7-7.5，超声15min。
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| 羧甲基化红枣多糖制备及其活性;焦中高等;《食品科学》;20111231;第32卷(第17期);第176-180页 * |
| 羧甲基槲皮素的体外抑菌活性研究;隋阳等;《当代化工》;20130331;第42卷(第3期);第272-277页 * |
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