CN103893228A - 从独活中制备蛇床子素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从独活中制备蛇床子素的方法，该方法包括以下步骤：⑴将干燥后的独活经粉碎、过筛，得到独活粉；⑵在独活粉中加入含纤维素酶的醋酸-醋酸钠缓冲液进行酶解，得到酶解液；⑶酶解液中加入乙醇溶液，经超声提取、离心后，得到上清液；⑷上清液经膜分离过滤后，得到样品原液；⑸样品原液直接过大孔吸附树脂，先用水洗至接近无色，弃去水洗液，再用体积浓度为15~50%的乙醇洗脱，弃去洗脱液A，继以体积浓度为60~80%的乙醇洗脱，收集洗脱液B；⑹将洗脱液B回收乙醇后，经浓缩、干燥至恒重，即得暗红色含蛇床子素的独活提取物。本发明简便、效率高。
Description
技术领域
本发明涉及一种蛇床子素的提取方法，尤其涉及从独活中制备蛇床子素的方法。
背景技术
独活为伞形科植物重齿毛当归(Angelica pubescens Maxim.f)的干燥根具有祛风除湿、通痹止痛之功效，"用于风寒湿痹，腰膝疼痛，少阴伏风头痛等病症"，目前为临床常用药，并被收载入我国药典。现代药理研究表明，独活具有广泛的药理作用，其不仅具有镇静、催眠、镇痛、抗炎等用于治疗风湿性关节炎的显著性作用，其对于心血管系统及激素、抗肿瘤等作用在近代的药理研究中亦日益显示出其独特的优势。独活中成分复杂，包括香豆素、挥发油、萜类、有机酸等。蛇床子素是独活中含量很高的一类成分，同时也是主要成分，因其分布较广且量比较大，因而近年来对它的研究开展越来越多。
根据文献报道表明，蛇床子素具有的镇静、镇痛、抗炎、抗超敏反应等与独活药材的作用如出一辙，种种迹象表明蛇床子素不仅仅是独活中含量最高的成分，多项药理研究也表明它也是独活部分药理作用的主要成分。
关于独活中蛇床子素的提取制备工艺研究，国内还未见有专利申请。文献报道中蛇床子素的提取一般采用传统的乙醇回流法，该方法简操作时间长，提取效率低，且使用大量有机溶剂，易燃、易爆、成本高，制得的独活提取物中残留有机溶剂对人体健康无益。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种简便、高效率的从独活中制备蛇床子素的方法。
为解决上述问题，本发明所述的从独活中制备蛇床子素的方法，包括以下步骤：
⑴将干燥后的独活经粉碎、过30~100目筛，得到独活粉；
⑵在所述独活粉中加入其质量的5~15倍、含2%~10%纤维素酶的醋酸-醋酸钠缓冲液，在温度为35~55 ℃的条件下酶解50~70 min，得到酶解液；
⑶所述酶解液中加入体积分数为30~65%的乙醇溶液，在提取温度为50~65℃的条件下超声提取2~3次，每次30~60 min，合并提取液，离心后，得到上清液；所述独活粉与所述乙醇溶液的料液比为0.02~0.06 g/mL ；
⑷所述上清液经膜分离过滤后，得到样品原液；
⑸所述样品原液直接过大孔吸附树脂，先用水洗至接近无色，弃去水洗液，再用体积浓度为15~50%的乙醇洗脱，弃去洗脱液A，继以体积浓度为60~80%的乙醇洗脱，收集洗脱液B；所述原液量为所述大孔吸附树脂对蛇床子素静态饱和吸附量的110%~135%；
⑹将洗脱液B回收乙醇后，经浓缩、干燥至恒重，即得暗红色含蛇床子素的独活提取物。
所述步骤⑵中醋酸-醋酸钠缓冲液的pH值为4.0~7.0。
所述步骤⑷中的膜分离采用截留分子量为1000~60000KD的聚砜膜或聚醚砜膜。
所述步骤⑸中大孔吸附树脂的塔柱径和柱高比为1：6~1：12。
所述步骤⑸中乙醇的流速为1.2~3.0 BV/h。
所述步骤⑹中浓缩的条件是指真空度为-0.06MPa~-0.1MPa，温度为40~55℃。
所述步骤⑹中干燥的条件是指温度为55℃~70℃。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明采用纤维素酶解和超声提取法两种技术联用，其中纤维素酶可去除无活性的纤维素、淀粉和胶质等，分解细胞壁成分，利于蛇床子素的溶出；超声波的空化作用加速植物有效成分的溶出，另外其产生的机械振动、乳化、破碎和催化效应等也会加速有效成分的扩散释放。因此，可以达到优势互补，有效破坏独活表皮细胞壁生物作用，使独活中的蛇床子素有效地溶出而不破坏其结构。经高效液相色谱法（HPLC）测定，采用本发明方法所得的独活提取物中蛇床子素含量为8%~25%，而纯化前独活中蛇床子素含量小于0.1%（参见图1、图2）。
2、本发明与现有技术相比，产品中蛇床子素的含量大为提高，生产成本低廉，工艺路线简单，适合工业化生产应用，可进一步促进独活提取物作为药物、保健品等多功能产品的产业化开发。
3、本发明生产成本低廉，工艺路线简单，所用提取溶剂的毒性较小，提取周期短，效率高，适合工业化生产应用。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。
图1为纯化前独活中蛇床子素提取物的高效液相色谱图。
图2为本发明所得的独活蛇床子素提取物的高效液相色谱图。
具体实施方式
实施例1 从独活中制备蛇床子素的方法，包括以下步骤：
⑴将干燥后的独活经粉碎、过40目筛，得到独活粉。
⑵在独活粉中加入其质量的5倍、含3%纤维素酶的pH值为4.0的醋酸-醋酸钠缓冲液，在温度为40℃的条件下酶解55 min，得到酶解液。
⑶酶解液中加入体积分数为35%的乙醇溶液，在提取温度为55℃的条件下超声提取2次，每次40 min，合并提取液，离心后，得到上清液。
其中：独活粉与乙醇溶液的料液比为0.03 g/mL。
⑷上清液经截留分子量为1000KD的聚砜膜或聚醚砜膜进行膜分离过滤后，得到样品原液。
⑸样品原液直接过X-8大孔吸附树脂，先用4倍柱床体积的水以2 BV/h的流速洗至接近无色，弃去水洗液，再用体积浓度为20%的乙醇以1.5 BV/h的流速洗脱，弃去洗脱液A，继以体积浓度为65%的乙醇以2.0 BV/h的流速洗脱，收集洗脱液B。
其中：原液量为大孔吸附树脂对蛇床子素静态饱和吸附量的110%；大孔吸附树脂的塔柱径和柱高比为1：6。
⑹将洗脱液B回收乙醇，在真空度为-0.06MPa、温度为40℃的条件下浓缩后，在温度为55℃下干燥至恒重，即得暗红色含蛇床子素的独活提取物。
实施例2 从独活中制备蛇床子素的方法，包括以下步骤：
⑴将干燥后的独活经粉碎、过50目筛，得到独活粉。
⑵在独活粉中加入其质量的10倍、含5%纤维素酶的pH值为5.0的醋酸-醋酸钠缓冲液，在温度为45℃的条件下酶解60 min，得到酶解液。
⑶酶解液中加入体积分数为45%的乙醇溶液，在提取温度为60℃的条件下超声提取3次，每次50 min，合并提取液，离心后，得到上清液。
其中：独活粉与乙醇溶液的料液比为0.04 g/mL。
⑷上清液经截留分子量为30000KD的聚砜膜或聚醚砜膜进行膜分离过滤后，得到样品原液。
⑸样品原液直接过X-8大孔吸附树脂，先用4倍柱床体积的水以2 BV/h的流速洗至接近无色，弃去水洗液，再用体积浓度为40%的乙醇以1.5 BV/h的流速洗脱，弃去洗脱液A，继以体积浓度为70%的乙醇以2.0 BV/h的流速洗脱，收集洗脱液B。
其中：原液量为大孔吸附树脂对蛇床子素静态饱和吸附量的135%；大孔吸附树脂的塔柱径和柱高比为1：12。
⑹将洗脱液B回收乙醇，在真空度为-0.1MPa、温度为55℃的条件下浓缩后，在温度为70℃下干燥至恒重，即得暗红色含蛇床子素的独活提取物。
实施例3 从独活中制备蛇床子素的方法，包括以下步骤：
⑴将干燥后的独活经粉碎、过60目筛，得到独活粉。
⑵在独活粉中加入其质量的15倍、含5%纤维素酶的pH值为6.5的醋酸-醋酸钠缓冲液，在温度为50℃的条件下酶解65 min，得到酶解液。
⑶酶解液中加入体积分数为50%的乙醇溶液，在提取温度为65℃的条件下超声提取2次，每次55 min，合并提取液，离心后，得到上清液。
其中：独活粉与乙醇溶液的料液比为0.05 g/mL。
⑷上清液经截留分子量为60000KD的聚砜膜或聚醚砜膜进行膜分离过滤后，得到样品原液。
⑸样品原液直接过X-8大孔吸附树脂，先用4倍柱床体积的水以2 BV/h的流速洗至接近无色，弃去水洗液，再用体积浓度为50%的乙醇以1.5BV/h的流速洗脱，弃去洗脱液A，继以体积浓度为75%的乙醇以2.0 BV/h的流速洗脱，收集洗脱液B。
其中：原液量为大孔吸附树脂对蛇床子素静态饱和吸附量的125%；大孔吸附树脂的塔柱径和柱高比为1：10。
⑹将洗脱液B回收乙醇，在真空度为-0.07MPa、温度为45℃的条件下浓缩后，在温度为60℃下干燥至恒重，即得暗红色含蛇床子素的独活提取物。
实施例4 从独活中制备蛇床子素的方法，包括以下步骤：
⑴将干燥后的独活经粉碎、过30目筛，得到独活粉。
⑵在独活粉中加入其质量的12倍、含2%纤维素酶的pH值为4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液，在温度为35℃的条件下酶解70 min，得到酶解液。
⑶酶解液中加入体积分数为30%的乙醇溶液，在提取温度为50℃的条件下超声提取2次，每次60 min，合并提取液，离心后，得到上清液。
其中：独活粉与乙醇溶液的料液比为0.02 g/mL。
⑷上清液经截留分子量为10000KD的聚砜膜或聚醚砜膜进行膜分离过滤后，得到样品原液。
⑸样品原液直接过大孔吸附树脂，先用水洗至接近无色，弃去水洗液，再用体积浓度为15%的乙醇以3.0 BV/h的流速洗脱，弃去洗脱液A，继以体积浓度为60%的乙醇以3.0 BV/h的流速洗脱，收集洗脱液B。
其中：原液量为大孔吸附树脂对蛇床子素静态饱和吸附量的120%；大孔吸附树脂的塔柱径和柱高比为1：8。
⑹将洗脱液B回收乙醇，在真空度为-0.08MPa、温度为42℃的条件下浓缩后，在温度为65℃下干燥至恒重，即得暗红色含蛇床子素的独活提取物。
实施例5 从独活中制备蛇床子素的方法，包括以下步骤：
⑴将干燥后的独活经粉碎、过100目筛，得到独活粉。
⑵在独活粉中加入其质量的8倍、含10%纤维素酶的pH值为7.0的醋酸-醋酸钠缓冲液，在温度为55℃的条件下酶解50 min，得到酶解液。
⑶酶解液中加入体积分数为65%的乙醇溶液，在提取温度为65℃的条件下超声提取3次，每次30 min，合并提取液，离心后，得到上清液。
其中：独活粉与乙醇溶液的料液比为0.06 g/mL。
⑷上清液经截留分子量为30000KD的聚砜膜或聚醚砜膜进行膜分离过滤后，得到样品原液。
⑸样品原液直接过大孔吸附树脂，先用水洗至接近无色，弃去水洗液，再用体积浓度为45%的乙醇以1.2 BV/h的流速洗脱，弃去洗脱液A，继以体积浓度为80%的乙醇以1.2 BV/h的流速洗脱，收集洗脱液B。
其中：原液量为大孔吸附树脂对蛇床子素静态饱和吸附量的130%；大孔吸附树脂的塔柱径和柱高比为1：10。
⑹将洗脱液B回收乙醇，在真空度为-0.09MPa、温度为52℃的条件下浓缩后，在温度为68℃下干燥至恒重，即得暗红色含蛇床子素的独活提取物。
Claims (7)
1.从独活中制备蛇床子素的方法，包括以下步骤：
⑴将干燥后的独活经粉碎、过30~100目筛，得到独活粉；
⑵在所述独活粉中加入其质量的5~15倍、含2%~10%纤维素酶的醋酸-醋酸钠缓冲液，在温度为35~55 ℃的条件下酶解50~70 min，得到酶解液；
⑶所述酶解液中加入体积分数为30~65%的乙醇溶液，在提取温度为50~65℃的条件下超声提取2~3次，每次30~60 min，合并提取液，离心后，得到上清液；所述独活粉与所述乙醇溶液的料液比为0.02~0.06 g/mL ；
⑷所述上清液经膜分离过滤后，得到样品原液；
⑸所述样品原液直接过大孔吸附树脂，先用水洗至接近无色，弃去水洗液，再用体积浓度为15~50%的乙醇洗脱，弃去洗脱液A，继以体积浓度为60~80%的乙醇洗脱，收集洗脱液B；所述原液量为所述大孔吸附树脂对蛇床子素静态饱和吸附量的110%~135%；
⑹将洗脱液B回收乙醇后，经浓缩、干燥至恒重，即得暗红色含蛇床子素的独活提取物。
2.如权利要求1所述的从独活中制备蛇床子素的方法，其特征在于：所述步骤⑵中醋酸-醋酸钠缓冲液的pH值为4.0~7.0。
3.如权利要求1所述的从独活中制备蛇床子素的方法，其特征在于：所述步骤⑷中的膜分离采用截留分子量为1000~60000KD的聚砜膜或聚醚砜膜。
4.如权利要求1所述的从独活中制备蛇床子素的方法，其特征在于：所述步骤⑸中大孔吸附树脂的塔柱径和柱高比为1：6~1：12。
5.如权利要求1所述的从独活中制备蛇床子素的方法，其特征在于：所述步骤⑸中乙醇的流速为1.2~3.0 BV/h。
6.如权利要求1所述的从独活中制备蛇床子素的方法，其特征在于：所述步骤⑹中浓缩的条件是指真空度为-0.06MPa~-0.1MPa，温度为40~55℃。
7.如权利要求1所述的从独活中制备蛇床子素的方法，其特征在于：所述步骤⑹中干燥的条件是指温度为55℃~70℃。
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