CN103890170B - α‑淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 - Google Patents

α‑淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 Download PDF

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Abstract

本发明还涉及编码这些变体的多核苷酸；包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞；以及使用这些变体的方法。

Description

α-淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸
序列表的引用
本申请含有呈计算机可读形式的序列表，将该序列表通过引用结合在此。
发明背景
发明领域
本发明涉及α-淀粉酶变体、编码这些变体的多核苷酸、产生这些变体的方法，以及使用这些变体的方法。
相关技术说明
α-淀粉酶（E.C.3.2.1.1）构成催化淀粉、糖原以及相关多糖以及低聚糖的水解的一组酶。
α-淀粉酶在商业上用于各种用途，如在淀粉加工（例如，液化）的初始阶段中；在湿磨过程中；以及在从碳水化合物来源产生醇中。其还用作清洗剂或在洗涤剂基质中的辅助物；在纺织工业中用于淀粉退浆；用于烘焙应用中；用于饮料行业中；用于油田的钻探过程中；在回收过程中例如用于使纸去墨；以及用于动物饲料中。
例如用于淀粉液化的一些商业α-淀粉酶来源于地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis）或嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus）。已经开发野生型酶的蛋白质工程化变体来克服过程问题。然而，仍然需要具有改进特性的新颖α-淀粉酶，如在低pH、低钙以及高温下的较高稳定性。这类酶将允许淀粉液化过程在降低的pH下进行，从而对于化学品节省具有积极影响。
本发明的目标是提供在低pH下和/或在高温下，尤其在低钙浓度下具有增加稳定性的新颖α-淀粉酶变体。
发明内容
本发明人已经发现包括在对应于SEQ ID NO:1的位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变的α-淀粉酶变体在低pH下和/或在高温下，尤其在低钙浓度下，并且尤其在存在至少0.1%淀粉的情况下，例如，在存在0.9%或1%淀粉的情况下孵育时，具有增加的稳定性。
因此，本发明涉及包括在对应于SEQ ID NO:1的位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变的α-淀粉酶变体，其中该变体与以下具有至少60%并且小于100%的序列一致性：(i)SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一个的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1至483、SEQ ID NO:2的氨基酸1至483、SEQ ID NO:3的氨基酸1至485、SEQ ID NO:4的氨基酸1至482、SEQ ID NO:5的氨基酸1至484、SEQ IDNO:6的氨基酸1至483、SEQ ID NO:7的氨基酸1至485、SEQ ID NO:8的氨基酸1至485、SEQ IDNO:9的氨基酸1至485、SEQ ID NO:10的氨基酸1至485、SEQ ID NO:11的氨基酸1至485、SEQID NO:12的氨基酸1至480、SEQ ID NO:13的氨基酸1至483或SEQ ID NO:14的氨基酸1至481，并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
本发明还涉及编码这些变体的分离的多核苷酸，包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞；以及产生这些变体的方法。
本发明还涉及本发明的变体的用途并且涉及一种生产液化淀粉的方法以及一种生产发酵产物的方法。
附图简要说明
图1示出具有以下氨基酸序列的α-淀粉酶的比对：
SEQ ID NO:1是地衣芽孢杆菌α-淀粉酶。
SEQ ID NO:2是嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶。
SEQ ID NO:3是在应用微生物学杂志（J.Appl.Microbiology），1997,82:325-334（SWALL:q59222）中描述的芽孢杆菌α-淀粉酶TS-23。
SEQ ID NO:4是在WO2005/001064中描述的黄热芽孢杆菌（Bacillusflavothermus）α-淀粉酶AMY1048。
SEQ ID NO:5是在WO04/113511中描述为SEQ ID NO:21的芽孢杆菌α-淀粉酶TS-22。
SEQ ID NO:6是解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）α-淀粉酶。
SEQ ID NO:7是在WO95/26397中描述为SEQ ID NO1的芽孢杆菌碱性属种SP690淀粉酶。
SEQ ID NO:8是在WO95/26397中描述为SEQ ID NO2的盐敏芽孢杆菌（Bacillushalmapalus）α-淀粉酶。
SEQ ID NO:9是在WO00/60060中描述为SEQ ID NO4的芽孢杆菌碱性属种AA560淀粉酶。
SEQ ID NO:10是在WO200210356中描述为SEQ ID NO2的芽孢杆菌碱性属种A7-7淀粉酶。
SEQ ID NO:11是在冢本高（Tsukamoto）等人，1988，生物化学与生物物理研究通讯（Biochem.Biophys.Res.Commun.）151:25-33）中描述的芽孢杆菌碱性属种SP707淀粉酶。
SEQ ID NO:12是在EP1022334中描述为SEQ ID NO2的芽孢杆菌碱性属种K-38淀粉酶。
SEQ ID NO:13是在李（Lee）等人，2006，生物化学杂志（J.Biochem），139:997-1005中描述的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶。
SEQ ID NO:14是以前在例如WO2002/010355中披露的变体α-淀粉酶LE399。
定义
等位基因变体：术语“等位基因变体”意指占据同一染色体基因座的基因的两种或更多种可替代形式中的任一种。等位基因变异是通过突变自然地引起，并且可能在群体内导致多态现象。基因突变可以是沉默的（在编码的多肽中没有变化）或者可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。
α-淀粉酶：α-淀粉酶（E.C.3.2.1.1）是催化淀粉以及其他线性以及分支1,4糖苷键低聚糖以及多糖的水解的一组酶。本领域技术人员将知道如何确定α-淀粉酶活性。它可根据在实例中描述的程序例如通过PNP-G7测定来确定。在一方面，本发明的变体具有SEQ IDNO:1的成熟多肽的至少20%，例如至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少100%的α-淀粉酶活性。在另一方面，本申请的变体具有其亲本的至少20%，例如至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少100%的α-淀粉酶活性。
cDNA：术语“cDNA”意指可以通过反转录从得自真核或原核细胞的成熟的、已剪接的mRNA分子制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。起始的、初级的RNA转录物是mRNA的前体，它通过一系列的步骤加工，包括剪接，然后作为成熟的已剪接的mRNA出现。
编码序列：术语“编码序列”意指多核苷酸，它直接指定变体的氨基酸序列。编码序列的边界一般是通过以起始密码子（例如ATG、GTG或TTG）开始并以终止密码子（例如TAA、TAG或TGA）结束的一个开放阅读框来决定。编码序列可以是一个基因组DNA、cDNA、合成的DNA或其组合。
控制序列：术语“控制序列”意指对于表达编码本发明的变体的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列针对编码该变体的多核苷酸来说可以是原生的（即，来自相同基因）或者外源的（即，来自不同基因），或者相对于彼此是原生的或外源的。这些控制序列包括（但不限于）前导序列、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列和转录终止子。至少，控制序列包括启动子以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将这些控制序列与编码一种变体的多核苷酸的编码区连接的特异性限制酶切位点的目的，这些控制序列可以提供有多个接头。
表达：术语“表达”包括涉及到变体生产中的任何步骤，包括（但不局限于）转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰以及分泌。
表达载体：术语“表达载体”意指线性或环状DNA分子，该分子包括编码变体的多核苷酸并且该多核苷酸可操作地与提供用于其表达的控制序列相连接。
片段：术语“片段”意指从成熟多肽的氨基和/或羧基末端缺失一个或多个（例如，数个）氨基酸的多肽；其中该片段具有α-淀粉酶活性。在一方面，一个片段含有至少300个氨基酸残基、至少350个氨基酸残基、至少400个氨基酸残基、至少450个氨基酸残基、至少470个氨基酸残基或至少480个氨基酸残基。
宿主细胞：术语“宿主细胞”意指任何细胞类型，该细胞类型对于用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行转化、转染、转导等是易感的。术语“宿主细胞”涵盖了由于在复制过程中存在的突变而与亲本细胞不相同的亲本细胞的任何子代。
分离的：术语“分离的”意指处于自然界中不出现的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制实例包括(1)任何非天然存在的物质；(2)至少部分地从在自然界中与其缔合的一种或多种或全部天然存在的组分中除去的任何物质，包括（但不局限于）任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子；(3)相对于自然界中发现的那种物质通过人工加以修饰的任何物质；或者(4)通过相对于与其天然地缔合的其他组分增加该物质的量（例如，编码该物质的一个基因的多个拷贝；比与编码该物质的基因天然地缔合的启动子更强的启动子的使用）而修饰的任何物质。一种分离的物质可以存在于发酵液样品中。
成熟多肽：术语“成熟多肽”是指在翻译以及任何翻译后修饰，如N-末端处理、C-末端截断、糖基化、磷酸化等之后的呈其最终形式的多肽。领域内公知，宿主细胞可以产生由相同多核苷酸表达的两种或更多种不同成熟多肽（即，具有不同的C端和/或N端氨基酸）的混合物。成熟形式的一些α-淀粉酶例如一些细菌α-淀粉酶包括含有底物水解的活性位点的催化域以及用于结合碳水化合物底物（淀粉）的一个或多个碳水化合物结合模块（CBM）以及任选地将CBM与催化域连接的多肽，后一类型的区域通常称为“接头”。
核酸构建体：术语“核酸构建体”意指单链亦或双链的一种核酸分子，该核酸分子是从天然存在的基因中分离的，或者以一种否则将不存在于自然界中的方式被修饰成含有核酸的区段，或者是合成的，该核酸分子包含一个或多个控制序列。
可操作地连接：术语“可操作地连接”意指如下的配置，其中控制序列被放置在相对于多核苷酸的编码序列的适当位置处，使得控制序列指导编码序列的表达。
亲本或亲本α-淀粉酶：术语“亲本”或“亲本α-淀粉酶”意指进行变化以产生本发明的酶变体的α-淀粉酶。该亲本可以是天然存在的（野生型）多肽或其变体或片段。
序列一致性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联性通过参数“序列一致性”来说明。
出于本发明的目的，两个氨基酸序列之间的序列一致性是使用如EMBOSS程序包（EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件（European Molecular Biology Open SoftwareSuite），赖斯（Rice）等人，2000，遗传学趋势（Trends Genet.）16:276-277）的尼德尔（Needle）程序（优选地版本5.0.0或后来版本）中实施的内德勒曼-文施（Needleman-Wunsch）算法（内德勒曼（Needleman）和文施（Wunsch），1970，分子生物学杂志（J.Mol.Biol.）48:443-453）来确定。使用的参数是空位开放罚分10、空位扩展罚分0.5以及EBLOSUM62（BLOSUM62的EMBOSS版本）取代矩阵。使用尼德尔（Needle）标记为“最长一致性”的输出（使用-nobrief选项获得）被用作百分比一致性并且计算如下：
(一致的残基×100)/(比对长度-比对中的空位总数）
变体：术语“变体”意指在一个或多个（例如数个）位置处包括一种变化，即，一个取代、插入和/或缺失的具有α-淀粉酶活性的一种多肽。取代意指占据一个位置的氨基酸用不同氨基酸来置换；缺失意指除去占据一个位置的氨基酸；并且插入意指与占据一个位置的氨基酸相邻来添加一个或多个（例如，数个）氨基酸，例如1-5个氨基酸。在一方面，本发明的变体具有SEQ ID NO:1的成熟多肽的至少20%，例如至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少100%的α-淀粉酶活性。在另一方面，本申请的变体具有其亲本的至少20%，例如至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少100%的α-淀粉酶活性。α-淀粉酶活性可通过在实例中描述的PNP-G7测定来确定。
野生型α-淀粉酶：术语“野生型”α-淀粉酶意指由天然存在的微生物，如在自然界中发现的细菌、酵母或丝状真菌来表达的α-淀粉酶。
用于变体命名的规则
出于本发明的目的，使用在SEQ ID NO:1中披露的成熟多肽来确定另一种α-淀粉酶中的相应氨基酸残基。另一种α-淀粉酶的氨基酸序列与在SEQ ID NO:1中披露的成熟多肽进行比对，并且基于该比对，使用如EMBOSS程序包（EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件（European Molecular Biology Open Software Suite），赖斯（Rice）等人，2000，遗传学趋势（Trends Genet.）16:276-277）的尼德尔（Needle）程序（优选地版本5.0.0或后来版本）中实施的内德勒曼-文施（Needleman-Wunsch）算法（内德勒曼（Needleman）和文施（Wunsch），1970，分子生物学杂志（J.Mol.Biol.）48:443-453）来确定对应于SEQ ID NO:1中披露的成熟多肽中的任何氨基酸残基的氨基酸位置编号。使用的参数是空位开放罚分10、空位扩展罚分0.5以及EBLOSUM62（BLOSUM62的EMBOSS版本）取代矩阵。
另一个α-淀粉酶中的相应氨基酸残基的识别可通过使用若干计算机程序比对多个多肽序列来确定，这些程序包括但不限于，MUSCLE（通过对数预测来进行多重序列比较；版本3.5或后来版本；埃德加（Edgar），2004，核酸研究（Nucleic Acids Research）32：1792-1797），MAFFT（版本6.857或后来版本；加藤（Katoh）以及库玛（Kuma），2002，核酸研究（Nucleic Acids Research）30：3059-3066；加藤（Katoh）等人，2005，核酸研究（NucleicAcids Research）33：511-518；加藤（Katoh）以及都（Toh），2007，生物信息学（Bioinformatics）23：372-374；加藤（Katoh）等人，2009，Methods in MolecularBiology537:39-64；加藤（Katoh）以及都（Toh），2010，Bioinformatics26:1899- 1900），以及使用ClustalW的EMBOSS EMMA（1.83或后来版本；汤普森（Thompson）等人，1994，核酸研究（Nucleic Acids Research）22：4673-4680），使用其相应默认参数。
当其他酶与SEQ ID NO:1的成熟多肽分歧，使得传统基于序列的比较不能检测其关系（林达尔（Lindahl）和埃洛弗松（Elofsson），2000，分子生物学杂志（J.Mol.Biol.）295:613-615）时，可以使用其他成对序列比较算法。在基于序列的搜索中的更大灵敏度可以使用搜索程序来获得，这些搜索程序利用多肽家族的概率表示（特征曲线）来搜索数据库。例如，PSI-BLAST程序通过一个迭代数据库搜索过程来产生多个特征曲线并且能够检测关系疏远的同源物（阿特休尔（Atschul）等人，1997，核酸研究（Nucleic Acids Res.）25:3389-3402）。如果多肽的家族或超家族在蛋白结构数据库中具有一个或多个代表，则可以实现甚至更大的灵敏度。程序如GenTHREADER（琼斯（Jones），1999，分子生物学杂志（J.Mol.Biol.）287：797-815；麦高菲（McGuffin）和琼斯（Jones），2003，生物信息学（Bioinformatics）19：874-881）利用来自各种来源（PSI-BLAST、次级结构预测、结构比对轮廓以及溶剂化电位）的信息作为预测查询序列的结构折叠的神经网络的输入。类似地，高夫（Gough）等人，2000，分子生物学杂志（J.Mol.Biol.）313:903-919的方法可以用于将未知结构的序列与存在于SCOP数据库中的超家族模型比对。这些比对进而可以用于产生多肽的同源性模型，并且使用出于该目的而开发的多种工具可以评定这类模型的准确度。
对于已知结构的蛋白，数种工具和资源可用于检索并产生结构比对。例如，蛋白的SCOP超家族已经在结构上进行比对，并且那些比对是可访问的并且可下载的。两个或更多个蛋白质结构可以使用各种算法如距离比对矩阵（豪尔姆（Holm）和桑德（Sander），1998，蛋白质（Proteins）33:88-96）或组合扩展（辛德洛夫（Shindyalov）和伯恩（Bourne），1998，蛋白质工程（Protein Engineering）11:739-747）来比对，并且这些算法的实施可以另外用于查询具有所感兴趣的结构的结构数据库以发现可能的结构同源物（例如，豪尔姆（Holm）和派克（Park），2000，生物信息学（Bioinformatics）16:566-567）。
在描述本发明的变体中，以下所述的命名法适于引用方便。采用了已接受的IUPAC单个字母和三字母的氨基酸缩写。
取代。对于一个氨基酸取代，使用了以下命名法：原始氨基酸、位置、取代的氨基酸。因此，在位置226上的苏氨酸被丙氨酸取代被表示为“Thr226Ala”或者“T226A”。多个突变由加号（“+”）分开，例如“Gly205Arg+Ser411Phe”或者“G205R+S411F”，代表分别在位置205和位置411上甘氨酸（G）被精氨酸（R）并且丝氨酸（S）被苯丙氨酸（F）取代。在本申请的实例中，多个突变由空格分开，例如，G205R S411F代表G205R+S411F。
缺失。对于一个氨基酸缺失，使用了以下命名法：原始氨基酸、位置、*。因此，在位置195上的甘氨酸缺失被表示为“Gly195*”或者“G195*”。多个缺失由加号（“+”）分开，例如，“Gly195*+Ser411*”或“G195*+S411*”。
插入。对于一个氨基酸插入，使用了以下命名法：原始氨基酸、位置、原始氨基酸、插入的氨基酸。因此，在位置195上的甘氨酸之后插入赖氨酸被表示为“Gly195GlyLys”或者“G195GK”。多个氨基酸的插入被表示为[原始氨基酸、位置、原始氨基酸、插入的氨基酸#1、插入的氨基酸#2；等]。例如，在位置195上的甘氨酸之后插入赖氨酸和丙氨酸被表示为“Gly195GlyLysAla”或者“G195GKA”。
在这类情况下，通过将小写字母添加到在所插入的一个或多个氨基酸残基之前的氨基酸残基的位置编号中来对所插入的一个或多个氨基酸残基进行编号。在以上实例中，该序列因此将是：
亲本： 变体：
195 195195a195b
G G-K-A
多种变化。包括多种变化的变体由加号（“+”）分开，例如“Arg170Tyr+Gly195Glu”或者“R170Y+G195E”，代表在位置170和位置195上的精氨酸和甘氨酸分别被酪氨酸和谷氨酸取代。
不同变化。可以在一个位置上引入不同的变化时，这些不同的变化由一个逗号分开，例如“Arg170Tyr，Glu”代表在位置170上的精氨酸被酪氨酸或谷氨酸取代。因此，“Tyr167Gly,Ala+Arg170Gly,Ala”表示以下变体：
“Tyr167Gly+Arg170Gly”、“Tyr167Gly+Arg170Ala”、“Tyr167Ala+Arg170Gly”以及“Tyr167Ala+Arg170Ala”。
发明详述
本发明涉及包括在对应于SEQ ID NO:1的位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变的α-淀粉酶变体，其中该变体与以下具有至少60%并且小于100%的序列一致性：(i)SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一个的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1至483、SEQ ID NO:2的氨基酸1至483、SEQ ID NO:3的氨基酸1至485、SEQ ID NO:4的氨基酸1至482、SEQ ID NO:5的氨基酸1至484、SEQ ID NO:6的氨基酸1至483、SEQ ID NO:7的氨基酸1至485、SEQ ID NO:8的氨基酸1至485、SEQ ID NO:9的氨基酸1至485、SEQ ID NO:10的氨基酸1至485、SEQ ID NO:11的氨基酸1至485、SEQ IDNO:12的氨基酸1至480、SEQ ID NO:13的氨基酸1至483或SEQ ID NO:14的氨基酸1至481，并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
优选地，这些变体是分离的。
变体
本发明的变体包括在对应于SEQ ID NO:1的位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个（数个）位置处的改变。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置1的位置处用Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val进行的插入或取代，尤其用Phe、His、Tyr或Trp，优选地His或Trp进行的插入或取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置2的位置处用Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val进行的插入或取代，尤其用Phe、His、Tyr或Trp，优选地His或Trp进行的插入或取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置68的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Phe、Tyr或Trp，优选地用Trp进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置71的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Phe、His或Trp，优选地用Trp进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置126的位置处用Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Phe、His、Tyr或Trp，优选地用Trp进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置133的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Phe、Tyr或Trp，优选地用Tyr进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置142的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Phe、Tyr或Trp，优选地用Trp进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置144的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Phe、His、Tyr或Trp，优选地用Trp进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置156的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Val，尤其用Phe、His或Trp，优选地用Trp进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置158的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Val，尤其用Phe、His或Trp，优选地用Trp进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置176的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Leu进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置185的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Pro进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置201的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Tyr进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置205的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Tyr进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置213的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Thr进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置239的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Ala或Gln进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置279的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用His、Tyr或Trp，优选地用Trp进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置316的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Phe、Tyr或Trp，优选地用Trp进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置318的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Phe、His、Tyr或Trp，优选地用Trp进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置360的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Ser进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置416的位置处用Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Val进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置437的位置处用Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Phe、His、Tyr或Trp，优选地用Trp进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置450的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Phe、Tyr或Trp，优选地用Trp进行的取代。
该变体与以下具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但小于100%的序列一致性：(i)SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一个的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1至483、SEQ ID NO:2的氨基酸1至483、SEQ ID NO:3的氨基酸1至485、SEQ ID NO:4的氨基酸1至482、SEQ ID NO:5的氨基酸1至484、SEQ ID NO:6的氨基酸1至483、SEQ ID NO:7的氨基酸1至485、SEQ ID NO:8的氨基酸1至485、SEQ ID NO:9的氨基酸1至485、SEQ ID NO:10的氨基酸1至485、SEQ ID NO:11的氨基酸1至485、SEQ ID NO:12的氨基酸1至480、SEQ ID NO:13的氨基酸1至483或SEQ ID NO:14的氨基酸1至481。
在一个优选实施例中，该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或者至少99%，但小于100%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体与(i)SEQ ID NO:2的成熟多肽、(ii)包括缺失I181*+G182*的SEQ ID NO:2的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:2的氨基酸1-483或(iv)包括缺失I181*+G182*的SEQ ID NO:2的氨基酸1-483具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但小于100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该变体与(i)SEQ ID NO:3的成熟多肽、(ii)包括缺失T183*+G184*的SEQ ID NO:3的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:3的氨基酸1-485或(iv)包括缺失T183*+G184*的SEQ ID NO:3的氨基酸1-485具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但小于100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该变体与(i)SEQ ID NO:4的成熟多肽、(ii)包括缺失T180*+G181*的SEQ ID NO:4的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:4的氨基酸1-482或(iv)包括缺失T180*+G181*的SEQ ID NO:4的氨基酸1-482具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但小于100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该变体与(i)SEQ ID NO:5的成熟多肽、(ii)包括缺失T182*+G183*的SEQ ID NO:5的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:5的氨基酸1-484或(iv)包括缺失T182*+G183*的SEQ ID NO:5的氨基酸1-484具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但小于100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该变体与(i)SEQ ID NO:6的成熟多肽、(ii)包括缺失E178*+G179*的SEQ ID NO:6的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:6的氨基酸1-483或(iv)包括缺失E178*+G179*的SEQ ID NO:6的氨基酸1-483具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但小于100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该变体与(i)SEQ ID NO:7的成熟多肽、(ii)包括缺失T183*+G184*的SEQ ID NO:7的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:7的氨基酸1-485或(iv)包括缺失T183*+G184*的SEQ ID NO:7的氨基酸1-485具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但小于100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该变体与(i)SEQ ID NO:8的成熟多肽、(ii)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:8的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:8的氨基酸1-485或(iv)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:8的氨基酸1-485具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但小于100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该变体与(i)SEQ ID NO:9的成熟多肽、(ii)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:9的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:9的氨基酸1-485或(iv)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:9的氨基酸1-485具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但小于100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该变体与(i)SEQ ID NO:10的成熟多肽、(ii)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:10的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:10的氨基酸1-485或(iv)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:10的氨基酸1-485具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但小于100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该变体与(i)SEQ ID NO:11的成熟多肽、(ii)包括缺失H183*+G184*的SEQ ID NO:11的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:11的氨基酸1-485或(iv)包括缺失H183*+G184*的SEQ ID NO:11的氨基酸1-485具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但小于100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该变体与(i)SEQ ID NO:12的成熟多肽或(ii)SEQ ID NO:12的氨基酸1-480具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或者至少99%，但小于100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该变体与(i)SEQ ID NO:13的成熟多肽或(ii)SEQ ID NO:13的氨基酸1-483具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或者至少99%，但小于100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-483具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或者至少99%，但小于100%的序列一致性。
本发明的变体包括在对应于SEQ ID NO:1的位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个（例如数个）位置处的改变。在一个实施例中，该变体包括在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个位置处的改变。在另一个实施例中，该变体包括在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个位置处的改变。在另一个实施例中，该变体包括在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的三个位置处的改变。在另一个实施例中，该变体包括在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的四个位置处的改变。在另一个实施例中，该变体包括在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的多于四个位置、例如五个、六个、七个、八个、九个或十个位置处的改变。在另一个实施例中，该变体包括在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的多于10个位置、例如11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个或20个位置处的改变。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变。在另一个实施例中，该变体包括在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的三个或更多个位置处的改变。在另一个实施例中，该变体包括在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的四个或更多个位置处的改变。在另一个实施例中，该变体包括在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的五个或更多个位置处的改变。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ IDNO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在另一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ IDNO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在另一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的三个或更多个位置处的改变，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ IDNO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在另一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的三个或更多个位置处的改变，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ IDNO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在另一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的四个或更多个位置处的改变，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ IDNO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在另一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的四个或更多个位置处的改变，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ IDNO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在另一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的五个或更多个位置处的改变，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ IDNO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在另一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的五个或更多个位置处的改变，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ IDNO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，本发明的变体包括选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W。
在一个优选实施例中，本发明的变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在另一个优选实施例中，该变体包括选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在另一个实施例中，该变体包括选自下组的三个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。在另一个实施例中，该变体包括选自下组的四个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置2、68、133、142、156、158、176、185、201、205、213、279、360、416以及437中的任何位置的一个或多个位置处的改变。在另一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置2、68、133、142、156、158、176、185、201、205、213、279、360、416以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的改变。在另一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置2、68、133、142、156、158、176、185、201、205、213、279、360、416以及437中的任何位置的三个或更多个位置处的改变。在另一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置2、68、133、142、156、158、176、185、201、205、213、279、360、416以及437中的任何位置的四个或更多个位置处的改变。在另一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置2、68、133、142、156、158、176、185、201、205、213、279、360、416以及437中的任何位置的五个或更多个位置处的改变。在另一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置2、68、133、142、156、158、176、185、201、205、213、279、360、416以及437中的任何位置的六个或更多个位置处的改变。
在一个优选实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、F279W、Q360S、D416V以及R437W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性。
在另一个优选实施例中，该变体包括选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、F279W、Q360S、D416V以及R437W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ IDNO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性。
在另一个优选实施例中，该变体包括选自下组的三个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、F279W、Q360S、D416V以及R437W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ IDNO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性。
在另一个优选实施例中，该变体包括选自下组的四个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、F279W、Q360S、D416V以及R437W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ IDNO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置1的位置处的插入或取代，尤其是插入A1AH或A1AW或取代A1H或A1W，并组合在对应于位置2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置1的位置处的插入或取代，尤其是插入A1AH或A1AW或取代A1H或A1W，并组合在对应于位置2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置1的位置处的插入或取代，尤其是插入A1AH或A1AW或取代A1H或A1W，并组合在对应于位置2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置2的位置处的插入或取代，尤其是插入N2NH或N2NW或取代N2H或N2W，并组合在对应于位置1、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置2的位置处的插入或取代，尤其是插入N2NH或N2NW或取代N2H或N2W，并组合在对应于位置1、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置2的位置处的插入或取代，尤其是插入N2NH或N2NW或取代N2H或N2W，并组合在对应于位置1、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置68的位置处的取代，尤其是取代H68W，并组合在对应于位置1、2、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置68的位置处的取代，尤其是取代H68W，并组合在对应于位置1、2、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置68的位置处的取代，尤其是取代H68W，并组合在对应于位置1、2、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置71的位置处的取代，尤其是取代G71W，并组合在对应于位置1、2、68、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置71的位置处的取代，尤其是取代G71W，并组合在对应于位置1、2、68、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置71的位置处的取代，尤其是取代G71W，并组合在对应于位置1、2、68、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置126的位置处的取代，尤其是取代N126W，并组合在对应于位置1、2、68、71、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置126的位置处的取代，尤其是取代N126W，并组合在对应于位置1、2、68、71、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置126的位置处的取代，尤其是取代N126W，并组合在对应于位置1、2、68、71、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置133的位置处的取代，尤其是取代H133Y，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置133的位置处的取代，尤其是取代H133Y，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置133的位置处的取代，尤其是取代H133Y，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置142的位置处的取代，尤其是取代H142W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置142的位置处的取代，尤其是取代H142W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置142的位置处的取代，尤其是取代H142W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置144的位置处的取代，尤其是取代P144W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置144的位置处的取代，尤其是取代P144W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置144的位置处的取代，尤其是取代P144W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置156的位置处的取代，尤其是取代Y156W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置156的位置处的取代，尤其是取代Y156W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置156的位置处的取代，尤其是取代Y156W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置158的位置处的取代，尤其是取代Y158W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置158的位置处的取代，尤其是取代Y158W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置158的位置处的取代，尤其是取代Y158W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置176的位置处的取代，尤其是取代K176L，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置176的位置处的取代，尤其是取代K176L，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置176的位置处的取代，尤其是取代K176L，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置185的位置处的取代，尤其是取代E185P，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置185的位置处的取代，尤其是取代E185P，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置185的位置处的取代，尤其是取代E185P，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置201的位置处的取代，尤其是取代I201Y，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置201的位置处的取代，尤其是取代I201Y，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置201的位置处的取代，尤其是取代I201Y，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置205的位置处的取代，尤其是取代H205Y，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置205的位置处的取代，尤其是取代H205Y，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置205的位置处的取代，尤其是取代H205Y，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置213的位置处的取代，尤其是取代K213T，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置213的位置处的取代，尤其是取代K213T，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置213的位置处的取代，尤其是取代K213T，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置239的位置处的取代，尤其是取代S239A或S239Q，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置239的位置处的取代，尤其是取代S239A或S239Q，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置239的位置处的取代，尤其是取代S239A或S239Q，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置279的位置处的取代，尤其是取代F279W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置279的位置处的取代，尤其是取代F279W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置279的位置处的取代，尤其是取代F279W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置316的位置处的取代，尤其是取代H316W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置316的位置处的取代，尤其是取代H316W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置316的位置处的取代，尤其是取代H316W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置318的位置处的取代，尤其是取代L318W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置318的位置处的取代，尤其是取代L318W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置318的位置处的取代，尤其是取代L318W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置360的位置处的取代，尤其是取代Q360S，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置360的位置处的取代，尤其是取代Q360S，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置360的位置处的取代，尤其是取代Q360S，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置416的位置处的取代，尤其是取代D416V，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、R437W以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置416的位置处的取代，尤其是取代D416V，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置416的位置处的取代，尤其是取代D416V，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、R437W以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置437的位置处的取代，尤其是取代R437W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及H450W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置437的位置处的取代，尤其是取代R437W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置437的位置处的取代，尤其是取代R437W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及H450W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体包括在对应于位置450的位置处的取代，尤其是取代H450W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及R437W。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置450的位置处的取代，尤其是取代H450W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及R437W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体包括在对应于位置450的位置处的取代，尤其是取代H450W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及R437W，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体进一步包括在对应于SEQ ID NO:1的位置15、48、49、107、138、156、181、187、188、190、197、209、239、255、264、299、474以及475的一个或多个位置、例如两个或更多个位置或三个或更多个位置处的取代。
在一个优选实施例中，该变体进一步包括在对应于SEQ ID NO:1的位置15、48、49、107、138、156、181、187、188、190、197、209、239、255、264、299、474以及475的一个或多个位置、例如两个或更多个位置或三个或更多个位置处的取代，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，该变体进一步包括在对应于SEQ ID NO:1的位置15、48、49、107、138、156、181、187、188、190、197、209、239、255、264、299、474以及475的一个或多个位置、例如两个或更多个位置或三个或更多个位置处的取代，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置15的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Leu、Ser或Thr进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置48的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Ala进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置49的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val，尤其用Gly、His、Ile或Leu进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置107的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Ala进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置138的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr或Val，尤其用Phe或Tyr进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置156的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Tyr进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置181的位置处用Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Asp、Glu或Thr进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置187的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Asp进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置188的位置处用Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Ser或Thr进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置190的位置处用Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Phe进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置197的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Ile、Leu、Ser、Thr或Val进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置209的位置处用Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Val进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置239的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Ala、Asn、Asp、Gln、Glu或Met进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置255的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Gly或Pro进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置264的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Ser进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置299的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Arg进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置474的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Arg、Gln、Glu或Lys进行的取代。
在一个实施例中，变体包括在对应于位置475的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Arg、Gln、Glu或Lys进行的取代。
在一个优选实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个、例如两个或更多个或三个或更多个取代，该组由以下各项组成：M15T、M15S、M15L、G48A、T49L、T49I、G107A、W138Y、W138F、H156Y、A181T、A181E、A181D、S187D、N188S、N188T、N190F、M197S、M197T、M197V、M197L、M197I、A209V、S239Q、S239E、S239N、S239D、S239A、S239M、E255P、E255G、Q264S、G299R、G474K、G474R、G474E、G474Q、G475K、G475R、G475E以及G475Q。
在另一个优选实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个、例如两个或更多个或三个或更多个取代，该组由以下各项组成：M15T、M15S、M15L、G48A、T49L、T49I、G107A、W138Y、W138F、H156Y、A181T、A181E、A181D、S187D、N188S、N188T、N190F、M197S、M197T、M197V、M197L、M197I、A209V、S239Q、S239E、S239N、S239D、S239A、S239M、E255P、E255G、Q264S、G299R、G474K、G474R、G474E、G474Q、G475K、G475R、G475E以及G475Q，并且该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽，或(ii)SEQ IDNO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在另一个优选实施例中，该变体包括选自下组的一个或多个、例如两个或更多个或三个或更多个取代，该组由以下各项组成：M15T、M15S、M15L、G48A、T49L、T49I、G107A、W138Y、W138F、H156Y、A181T、A181E、A181D、S187D、N188S、N188T、N190F、M197S、M197T、M197V、M197L、M197I、A209V、S239Q、S239E、S239N、S239D、S239A、S239M、E255P、E255G、Q264S、G299R、G474K、G474R、G474E、G474Q、G475K、G475R、G475E以及G475Q，并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个优选实施例中，本发明的变体包括选自下组的一组取代，该组由以下各项组成：
A1H+N2W+K176L+E185P、
A1W+N2H+K176L+E185P、
N2H+H68W+H133Y+K176L+E185P、
N2H+H68W+Y156W+K176L+E185P、
N2H+H68W+Y158W+K176L+E185P、
N2H+H68W+K176L+E185P、
N2H+H68W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+D207V+V209D、
N2H+H68W+K176L+E185P+F279W、
N2H+H133Y+K176L+E185P+H316W+R437W、
N2H+H133Y+K176L+E185P+Q360S+R437W、
N2H+H142W+K176L+E185P+H316W+R437W、
N2H+H142W+K176L+E185P+Q360S+R437W、
N2H+P144W+K176L+E185P、
N2H+Y156W+Y158W+K176L+E185P+H316W+R437W、
N2H+Y156W+K176L+E185P+Q360S+R437W、
N2H+Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+D207V+V209D+H316W、
N2H+K176L+E185P、
N2H+K176L+E185P+H316W、
N2H+K176L+E185P+H316W+L318W+R437W、
N2H+K176L+E185P+H316W+Q360S+R437W、
N2H+K176L+E185P+H316W+R437W、
N2H+K176L+E185P+R437W、
N2H+K176L+E185P+Q360S+R437W、
N2H+K176L+E185P+H316W+Q360S+R437W、
N2H+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H68W+K176L+E185P、
H68W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H68W+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
G71W+K176L+E185P、
N126W+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H133Y+Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H133Y+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H142W+Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H142W+K176L+E185P、
H142W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H142W+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
P144W+K176L+E185P、
Y156W+Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
Y156W+Y158W+K176L+E185P+H316W+R437W、
Y156W+K176L+E185P+Q360S+R437W、
Y156W+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
Y158W+K176L+E185P、
Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+D207V+V209D+H316W、
Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+H316L+L318W+Q360S+D416V+R437W、
Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+H316W+Q360S+D416V+R437W、
Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
Y158W+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
K176L+E185P、
K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
K176L+E185P+I201Y+H205Y+R437W、
K176L+E185P+F279W、
K176L+E185P+H316W、
K176L+E185P+L318W、
K176L+E185P+H450W、
K176L+I201Y+H205Y+K213T+S239Q+Q360S+D416V+R437W、
K176L+I201Y+H205Y+K213T+H316W+Q360S+D416V+R437W、
K176L+I201Y+H205Y+K213T+L318W+Q360S+D416V+R437W、
K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+R437W、
K176L+I201Y+H205Y+K213T+D416V+R437W，以及
K176L+I201Y+H205Y+Q360S+D416V+R437W。
在另一个优选实施例中，本发明的变体包括选自下组的一组取代，该组由以下各项组成：
A1H+N2W+K176L+E185P、
A1W+N2H+K176L+E185P、
N2H+H68W+H133Y+K176L+E185P、
N2H+H68W+Y156W+K176L+E185P、
N2H+H68W+Y158W+K176L+E185P、
N2H+H68W+K176L+E185P、
N2H+H68W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+D207V+V209D、
N2H+H68W+K176L+E185P+F279W、
N2H+H133Y+K176L+E185P+H316W+R437W、
N2H+H133Y+K176L+E185P+Q360S+R437W、
N2H+H142W+K176L+E185P+H316W+R437W、
N2H+H142W+K176L+E185P+Q360S+R437W、
N2H+P144W+K176L+E185P、
N2H+Y156W+Y158W+K176L+E185P+H316W+R437W、
N2H+Y156W+K176L+E185P+Q360S+R437W、
N2H+Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+D207V+V209D+H316W、
N2H+K176L+E185P、
N2H+K176L+E185P+H316W、
N2H+K176L+E185P+H316W+L318W+R437W、
N2H+K176L+E185P+H316W+Q360S+R437W、
N2H+K176L+E185P+H316W+R437W、
N2H+K176L+E185P+R437W、
N2H+K176L+E185P+Q360S+R437W、
N2H+K176L+E185P+H316W+Q360S+R437W、
N2H+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H68W+K176L+E185P、
H68W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H68W+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
G71W+K176L+E185P、
N126W+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H133Y+Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H133Y+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H142W+Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H142W+K176L+E185P、
H142W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H142W+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
P144W+K176L+E185P、
Y156W+Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
Y156W+Y158W+K176L+E185P+H316W+R437W、
Y156W+K176L+E185P+Q360S+R437W、
Y156W+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
Y158W+K176L+E185P、
Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+D207V+V209D+H316W、
Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+H316L+L318W+Q360S+D416V+R437W、
Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+H316W+Q360S+D416V+R437W、
Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
Y158W+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
K176L+E185P、
K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
K176L+E185P+I201Y+H205Y+R437W、
K176L+E185P+F279W、
K176L+E185P+H316W、
K176L+E185P+L318W、
K176L+E185P+H450W、
K176L+I201Y+H205Y+K213T+S239Q+Q360S+D416V+R437W、
K176L+I201Y+H205Y+K213T+H316W+Q360S+D416V+R437W、
K176L+I201Y+H205Y+K213T+L318W+Q360S+D416V+R437W、
K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+R437W、
K176L+I201Y+H205Y+K213T+D416V+R437W，以及
K176L+I201Y+H205Y+Q360S+D416V+R437W。
并且该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。
在一个实施例中，该变体进一步包括紧接在对应于SEQ ID NO:1的位置180的位置之前的两个位置处的缺失，即，对应于SEQ ID NO:2的位置181和182的两个氨基酸的缺失。
在另一个实施例中，该变体进一步包括在对应于SEQ ID NO:1的位置177的位置之后并且在对应于SEQ ID NO:1的位置180的位置之前的两个氨基酸的缺失，即，SEQ ID NO:2的R179-G180-I181-G182肽中的两个氨基酸，或SEQ ID NO:3至11的任何一个中的同源氨基酸的缺失。
这些变体可以进一步包括一个或多个（例如，数个）额外变化，例如，一个或多个（例如，数个）额外取代。
这些额外氨基酸变化可具有一个微小的性质，即不显著影响蛋白质的折叠和/或活性的保守性氨基酸取代或者插入；典型地1至30个氨基酸的小缺失；小氨基或羧基末端扩展，例如氨基末端甲硫氨酸残基；高达20至25个残基的一个小接头肽；或者通过改变净电荷或另一种功能来促进纯化的一个小扩展，例如一个多组氨酸束（tract）、一个抗原表位或者一个结合域。
保守取代的实例处于以下组内：碱性氨基酸（精氨酸、赖氨酸以及组氨酸）、酸性氨基酸（谷氨酸和天冬氨酸）、极性氨基酸（谷氨酰胺和天冬酰胺）、疏水性氨基酸（亮氨酸、异亮氨酸以及缬氨酸）、芳族氨基酸（苯丙氨酸、色氨酸以及酪氨酸）以及小氨基酸（甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸以及甲硫氨酸）。通常不改变比活性的氨基酸取代在本领域中已知，并且例如由H.诺伊拉特（H.Neurath）和R.L.希尔（R.L.Hill），1979，蛋白质（The Proteins），学术出版社（Academic Press），纽约（New York）描述。常见的取代是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu以及Asp/Gly。
可替代地，这些氨基酸变化具有改变这些多肽的物理化学特性的这样一种性质。例如，氨基酸变化可以改进多肽的热稳定性、改变底物特异性、改变pH最佳值等。
在一种多肽中的必需氨基酸可以根据本领域已知的程序来识别，例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变（坎宁安（Cunningham）和威尔斯（Wells），1989，科学（Science）244:1081-1085）。在后一种技术中，在分子中的每个残基处引入单一丙氨酸突变，并且测试所得突变分子的α-淀粉酶活性以识别对分子的活性关键的氨基酸残基。还参见希尔顿（Hilton）等人，1996，生物化学杂志（J.Biol.Chem.）271:4699-4708。也可以结合假定接触位点氨基酸的突变，通过如核磁共振、结晶学、电子衍射、或光亲和标记等技术进行测定，来对结构进行物理学分析，从而确定酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见例如德沃斯（de Vos）等人，1992，科学（Science）255:306-312；史密斯等人，1992，分子生物学杂志（J.Mol.Biol.）224:899-904；沃德弗（Wlodaver）等人，1992，欧洲生物化学学会联盟简讯（FEBS Lett.）309:59-64。必需氨基酸的身份还可以通过与一个相关多肽进行比对来推断。
这些变体可以由300至700个，例如350至650个、400至600个、450至500个或470至490个氨基酸组成。
在一个优选实施例中，与SEQ ID NO:1的成熟多肽相比，该变体在高温、低钙以及低pH下、在存在至少0.1%淀粉的情况下、例如在存在0.9%或1%淀粉的情况下具有增加的热稳定性。
在本发明的上下文中，“高温”意指从70℃-120℃，优选地80℃-100℃，更优选地85℃-95℃的温度。
在本发明的上下文中，术语“低pH”意指从4-6，优选地4.2-5.5，更优选地4.5-5范围内的pH。
在本发明的上下文中，术语“低钙”意指低于60ppm，优选地40ppm，更优选地25ppm，甚至更优选地5ppm钙的游离钙水平。0.125mM CaCl2提供5ppm钙。
在一个实施例中，与SEQ ID NO:1的成熟多肽相比，在95℃以及pH4.8下与0.125mMCaCl2、0.1%淀粉一起孵育时，该变体具有增加的热稳定性。在另一个实施例中，与SEQ IDNO:1的成熟多肽相比，在95℃以及pH4.5下与0.125mM CaCl2、0.1%淀粉一起孵育时，该变体具有增加的热稳定性。
在另一个实施例中，与SEQ ID NO:1的成熟多肽相比，在95℃以及pH4.8下与0.125mM CaCl2、0.9%淀粉一起孵育时，该变体具有增加的热稳定性。在另一个实施例中，与SEQ ID NO:1的成熟多肽相比，在95℃以及pH4.5下与0.125mM CaCl2、0.9%淀粉一起孵育时，该变体具有增加的热稳定性。
在另一个实施例中，与SEQ ID NO:1的成熟多肽相比，在95℃以及pH4.8下与0.125mM CaCl2、1%淀粉一起孵育时，该变体具有增加的热稳定性。在另一个实施例中，与SEQ ID NO:1的成熟多肽相比，在95℃以及pH4.5下与0.125mM CaCl2、1%淀粉一起孵育时，该变体具有增加的热稳定性。
本领域技术人员知道如何确定酶的热稳定性。它可以通过确定残余活性半衰期来进行，如本申请的实例中所示。本领域技术人员将知道如何选择测定的相关条件，如孵育时间。
在一个优选实施例中，与SEQ ID NO:1的成熟多肽相比，该变体在高温、低钙以及低pH下、在存在至少0.1%淀粉的情况下、例如在存在0.9%或1%淀粉的情况下具有增加的残余活性半衰期。在一个优选实施例中，与SEQ ID NO:1的成熟多肽相比，在95℃以及pH4.8下与0.125mM CaCl2、0.1%淀粉一起孵育时，该变体具有增加的残余活性半衰期。在另一个优选实施例中，与SEQ ID NO:1的成熟多肽相比，在95℃以及pH4.5下与0.125mM CaCl2、0.1%淀粉一起孵育时，该变体具有增加的残余活性半衰期。在另一个优选实施例中，与SEQ IDNO:1的成熟多肽相比，在95℃以及pH4.8下与0.125mMCaCl2、0.9%淀粉一起孵育时，该变体具有增加的残余活性半衰期。在另一个优选实施例中，与SEQ ID NO:1的成熟多肽相比，在95℃以及pH4.5下与0.125mM CaCl2、0.9%淀粉一起孵育时，该变体具有增加的残余活性半衰期。在另一个优选实施例中，与SEQ ID NO:1的成熟多肽相比，在95℃以及pH4.8下与0.125mM CaCl2、1%淀粉一起孵育时，该变体具有增加的残余活性半衰期。在另一个优选实施例中，与SEQ ID NO:1的成熟多肽相比，在95℃以及pH4.5下与0.125mM CaCl2、1%淀粉一起孵育时，该变体具有增加的残余活性半衰期。
在一个优选实施例中，在95℃以及pH4.8下与0.125mM CaCl2、0.9%淀粉一起孵育时，变体具有至少5分钟、例如至少7分钟或至少10分钟的残余活性半衰期。在一个更优选实施例中，在95℃以及pH4.8下与0.125mM CaCl2、0.9%淀粉一起孵育时，变体具有至少15分钟，例如至少20分钟或至少30分钟的残余活性半衰期。在一个实施例中，在95℃以及pH4.8下与0.125mMCaCl2、0.9%淀粉一起孵育时，变体具有至少40分钟、例如至少50分钟或至少60分钟的残余活性半衰期。
在一个优选实施例中，在95℃以及pH4.5下与0.125mM CaCl2、0.9%淀粉一起孵育时，变体具有至少1分钟、例如至少2分钟或至少5分钟的残余活性半衰期。在一个更优选实施例中，在95℃以及pH4.5下与0.125mM CaCl2、0.9%淀粉一起孵育时，变体具有至少8分钟、例如至少10分钟或至少12分钟的残余活性半衰期。在一个实施例中，在95℃以及pH4.8下与0.125mMCaCl2、0.9%淀粉一起孵育时，变体具有至少15分钟、例如至少20分钟或至少25分钟的残余活性半衰期。
在一个优选实施例中，与亲本酶相比，该变体在高温、低钙以及低pH下、在存在至少0.1%淀粉的情况下、例如在存在0.9%或1%淀粉的情况下具有增加的热稳定性。
在另一个优选实施例中，与亲本酶相比，该变体在高温、低钙以及低pH下、在存在至少0.1%淀粉的情况下、例如在存在0.9%或1%淀粉的情况下具有增加的残余活性半衰期。
在一个实施例中，与亲本酶相比，在95℃以及pH4.8下与0.125mMCaCl2、0.1%淀粉一起孵育时，变体具有增加的热稳定性，例如，增加的残余活性半衰期。在另一个实施例中，与亲本酶相比，在95℃以及pH4.5下与0.125mM CaCl2、0.1%淀粉一起孵育时，变体具有增加的热稳定性，例如，增加的残余活性半衰期。
在一个实施例中，与亲本酶相比，在95℃以及pH4.8下与0.125mMCaCl2、0.9%淀粉一起孵育时，变体具有增加的热稳定性，例如，增加的残余活性半衰期。在另一个实施例中，与亲本酶相比，在95℃以及pH4.5下与0.125mM CaCl2、0.9%淀粉一起孵育时，变体具有增加的热稳定性，例如，增加的残余活性半衰期。
在一个实施例中，与亲本酶相比，在95℃以及pH4.8下与0.125mMCaCl2、1%淀粉一起孵育时，变体具有增加的热稳定性，例如，增加的残余活性半衰期。在另一个实施例中，与亲本酶相比，在95℃以及pH4.5下与0.125mM CaCl2、1%淀粉一起孵育时，变体具有增加的热稳定性，例如，增加的残余活性半衰期。
在其他实施例中，与亲本酶相比，变体具有改进的催化效率、改进的催化速率、改进的化学稳定性、改进的氧化稳定性、改进的比活性、存储条件下的改进的稳定性、改进的底物结合、改进的底物切割、改进的底物特异性、改进的底物稳定性、改进的表面特性、改进的热活性或改进的热稳定性。
亲本α-淀粉酶
变体优选地是选自下组的亲本α-淀粉酶的变体，该组由以下各项组成：
(a)与以下具有至少60%序列一致性的多肽：(i)SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一个的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1至483、SEQ IDNO:2的氨基酸1至483、SEQ ID NO:3的氨基酸1至485、SEQ ID NO:4的氨基酸1至482、SEQ IDNO:5的氨基酸1至484、SEQ ID NO:6的氨基酸1至483、SEQ ID NO:7的氨基酸1至485、SEQ IDNO:8的氨基酸1至485、SEQ ID NO:9的氨基酸1至485、SEQ ID NO:10的氨基酸1至485、SEQID NO:11的氨基酸1至485、SEQ ID NO:12的氨基酸1至480、SEQ ID NO:13的氨基酸1至483、或SEQ ID NO:14的氨基酸1至481；或
(b)SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一个的成熟多肽的片段，该片段具有α-淀粉酶活性。
在一个实施例中，该亲本α-淀粉酶与以下具有至少65%，例如至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性：(i)SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一个的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1至483、SEQ ID NO:2的氨基酸1至483、SEQ ID NO:3的氨基酸1至485、SEQ ID NO:4的氨基酸1至482、SEQ ID NO:5的氨基酸1至484、SEQ ID NO:6的氨基酸1至483、SEQ ID NO:7的氨基酸1至485、SEQ ID NO:8的氨基酸1至485、SEQ ID NO:9的氨基酸1至485、SEQ ID NO:10的氨基酸1至485、SEQ ID NO:11的氨基酸1至485、SEQ ID NO:12的氨基酸1至480、SEQ ID NO:13的氨基酸1至483或SEQ ID NO:14的氨基酸1至481。
在一个实施例中，该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽或(ii)SEQ IDNO:1的氨基酸1-483具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:2的成熟多肽、(ii)包括缺失I181*+G182*的SEQ ID NO:2的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:2的氨基酸1-483或(iv)包括缺失I181*+G182*的SEQ ID NO:2的氨基酸1-483具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:3的成熟多肽、(ii)包括缺失T183*+G184*的SEQ ID NO:3的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:3的氨基酸1-485或(iv)包括缺失T183*+G184*的SEQ ID NO:3的氨基酸1-485具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:4的成熟多肽、(ii)包括缺失T180*+G181*的SEQ ID NO:4的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:4的氨基酸1-482或(iv)包括缺失T180*+G181*的SEQ ID NO:4的氨基酸1-482具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:5的成熟多肽、(ii)包括缺失T182*+G183*的SEQ ID NO:5的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:5的氨基酸1-484或(iv)包括缺失T182*+G183*的SEQ ID NO:5的氨基酸1-484具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:6的成熟多肽、(ii)包括缺失E178*+G179*的SEQ ID NO:6的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:6的氨基酸1-483或(iv)包括缺失E178*+G179*的SEQ ID NO:6的氨基酸1-483具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:7的成熟多肽、(ii)包括缺失T183*+G184*的SEQ ID NO:7的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:7的氨基酸1-485或(iv)包括缺失T183*+G184*的SEQ ID NO:7的氨基酸1-485具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:8的成熟多肽、(ii)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:8的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:8的氨基酸1-486或(iv)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:8的氨基酸1-486具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:9的成熟多肽、(ii)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:9的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:9的氨基酸1-485或(iv)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:9的氨基酸1-485具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:10的成熟多肽、(ii)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:10的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:10的氨基酸1-485或(iv)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:10的氨基酸1-485具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:11的成熟多肽、(ii)包括缺失H183*+G184*的SEQ ID NO:11的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:11的氨基酸1-485或(iv)包括缺失H183*+G184*的SEQ ID NO:11的氨基酸1-485具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:12的成熟多肽或(ii)SEQID NO:12的氨基酸1-480具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:13的成熟多肽或(ii)SEQID NO:13的氨基酸1-483具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
在另一个实施例中，该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽或(ii)SEQID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
在一个实施例中，亲本α-淀粉酶包括或由SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14的任何一个的成熟多肽组成。
在一个实施例中，亲本α-淀粉酶包括或由SEQ ID NO:1的氨基酸1至483、SEQ IDNO:2的氨基酸1至483、SEQ ID NO:3的氨基酸1至485、SEQ ID NO:4的氨基酸1至482、SEQ IDNO:5的氨基酸1至484、SEQ ID NO:6的氨基酸1至483、SEQ ID NO:7的氨基酸1至485、SEQ IDNO:8的氨基酸1至485、SEQ ID NO:9的氨基酸1至485、SEQ ID NO:10的氨基酸1至485、SEQID NO:11的氨基酸1至485、SEQ ID NO:12的氨基酸1至480、SEQ ID NO:13的氨基酸1至483或SEQ ID NO:14的氨基酸1至481组成。
在另一个实施例中，该亲本α-淀粉酶是SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一个的成熟多肽的片段，其中该片段具有α-淀粉酶活性。
在一个实施例中，该变体与亲本α-淀粉酶具有至少60%，例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%，诸如至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但小于100%的序列一致性。
在一个实施例中，在本发明的变体中的取代总数是2至20个，例如2至10个和2至5个，例如2、3、4、5、6、7、8、9或者10个取代。
该亲本可以是其中一个多肽的一个区域融合在另一个多肽的一个区域的N-末端或C-末端的一种杂交多肽。
该亲本可以是其中另一个多肽融合在本发明的多肽的N-末端或者C-末端的一种融合多肽或者可切割的融合多肽。通过将编码另一种多肽的一种多核苷酸融合到本发明的一种多核苷酸上产生了一种融合多肽。用于产生融合多肽的技术在领域内是已知的，并包括连接编码这些多肽的编码序列，从而使它们在框内且融合多肽的表达处于相同启动子和终止子的控制下。还可以使用其中通过翻译后产生融合多肽的内含肽技术（库珀（Cooper）等人，1993，欧洲分子生物学杂志（EMBO J.）12:2575-2583；道森（Dawson）等人，1994，科学（Science）266:776-779）来构建融合多肽。
一个融合多肽可以在两个多肽之间进一步包含一个切割位点。在分泌该融合蛋白时，该位点被切割从而释放这两个多肽。切割位点的实例包括（但不局限于）在以下文献中披露的位点：马丁（Martin）等人，2003，工业微生物与生物技术杂志（J.Ind.Microbiol.Biotechnol.）3:568-576；斯维特娜（Svetina）等人，2000，生物技术杂志（J.Biotechnol.）76:245-251；拉斯穆森-威尔逊（Rasmussen-Wilson）等人，1997，应用环境微生物学（Appl.Environ.Microbiol.）63:3488-3493；沃德（Ward）等人，1995，生物技术（Biotechnology）13:498-503；以及孔特雷拉斯（Contreras）等人，1991，生物技术（Biotechnology）9:378-381；伊顿（Eaton）等人，1986，生物化学（Biochemistry）25:505-512；柯林斯-拉西（Collins-Racie）等人，1995，生物技术（Biotechnology）13:982-987；卡特（Carter）等人，1989，蛋白质：结构、功能以及遗传学（Proteins:Structure,Function,and Genetics）6:240-248；以及史蒂文斯（Stevens），2003，药物发现世界（Drug DiscoveryWorld）4:35-48。
该亲本可以从任何属类的微生物中获得。出于本发明的目的，如在此结合一种给定的来源使用的术语“从......中获得”应意指由一种多核苷酸编码的亲本是由该来源或者由其中已经插入来自该来源的多核苷酸的一种菌株产生。在一个方面，该亲本是胞外分泌的。
该亲本可以是细菌α-淀粉酶。例如，亲本可以是革兰氏阳性细菌多肽，如芽孢杆菌（Bacillus）、梭状芽孢杆菌（Clostridium）、肠球菌（Enterococcus）、土芽孢杆菌（Geobacillus）、乳酸杆菌（Lactobacillus）、乳球菌（Lactococcus）、大洋芽孢杆菌（Oceanobacillus）、葡萄球菌（Staphylococcus）、链球菌（Streptococcus）或链霉菌属（Streptomyces）α-淀粉酶，或革兰氏阴性细菌多肽，如弯曲杆菌（Campylobacter）、大肠杆菌（E.coli）、黄质菌属（Flavobacterium）、梭杆菌（Fusobacterium）、螺杆菌（Helicobacter）、泥杆菌属（Ilyobacter）、奈瑟氏菌（Neisseria）、假单胞菌（Pseudomonas）、沙门氏菌（Salmonella），或脲原体（Ureaplasma）α-淀粉酶。
在一个方面，该亲本是嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚硬芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌或苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）α-淀粉酶。
应理解，对于上述种类，本发明涵盖了完全和不完全状态以及其他分类学上的等效物，例如无性型，不管它们所已知的种类名称是什么。本领域的技术人员将容易识别适当等效物的身份。
这些种类的菌株对于公众来说是易于在多个培养物保藏中心获得的，例如美国典型培养物保藏中心（American Type Culture Collection）（ATCC）、德国微生物与菌种保藏中心（Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH）（DSMZ）、荷兰国际微生物菌种保藏中心（Centraalbureau Voor Schimmelcultures）（CBS）、以及美国农业研究菌种保藏中心（Agricultural Research Service Patent Culture Collection）、北方地区研究中心（Northern Regional Research Center）（NRRL）。
该亲本可以从其他来源鉴别并获得，这些其他来源包括从自然界（例如，土壤、堆肥、水等）分离的微生物或者使用上述探针直接从天然材料（例如，土壤、堆肥、水等）获得的DNA样品。用于直接地从天然生活环境分离微生物和DNA的技术是本领域中众所周知的。然后可以通过类似地筛选另一种微生物的一个基因组DNA或cDNA库或混合的DNA样品来获得编码一个亲本的一种多核苷酸。一旦已经用一个或多个探针检测到编码一个亲本的一种多核苷酸，则可以通过利用对本领域的普通技术人员来说已知的多种技术来分离或克隆该多核苷酸（参见，例如上文的萨拉布鲁克（Sambrook）等人，1989）。
变体的制备
本发明还涉及用于获得具有α-淀粉酶活性的变体的方法，这些方法包括：(a)向亲本α-淀粉酶引入在对应于SEQ ID NO:1的位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变；并且(b)回收该变体。
可以使用本领域已知的任何诱变程序来制备这些变体，例如定点诱变、合成基因构建、半合成基因构建、随机诱变、改组、等。
定点诱变是其中在编码该亲本的一个多核苷酸内的一个或多个限定的位点处引入一个或多个（例如，数个）突变的一种技术。
通过涉及含有所希望的突变的寡核苷酸引物的使用的PCR可以体外实现定点诱变。还可以通过以下方式在体外进行定点诱变：涉及由一种限制性内切酶在包含编码该亲本的多核苷酸的质粒的一个位点处进行切割的盒式诱变，和随后连接一种包含该多核苷酸中的突变的寡核苷酸。通常，消化该质粒的限制性内切酶与该寡核苷酸是相同的，以允许该质粒的粘性末端与插入片段彼此连接。参见例如舍雷尔（Scherer）和戴维斯（Davis），1979，美国国家科学院学报（Proc.Natl.Acad.Sci.USA）76:4949-4955；以及巴顿（Barton）等人，1990，核酸研究（Nucleic Acids Res.）18:7349-4966。
还可以通过本领域已知的方法体内实现定点诱变。参见例如美国专利申请公布第2004/0171154号；斯托里其（Storici）等人，2001，自然生物技术（Nature Biotechnol.）19:773-776；卡伦（Kren）等人，1998，自然医学（Nat.Med.）4:285-290；以及卡利萨诺（Calissano）和马里诺（Macino），1996，真菌遗传学简讯（Fungal Genet.Newslett.）43:15-16。
在本发明中，可以使用任何定点诱变程序。存在可用于制备变体的很多可商购的试剂盒。
合成基因构建需要体外合成一种设计的多核苷酸分子以编码一种所感兴趣的多肽。基因合成可利用许多技术来进行，如田（Tian）等人（2004，自然（Nature）432:1050-1054）描述的基于多重微芯片的技术以及其中寡核苷酸在光可编程的微流控芯片上合成并且组装的类似技术。
使用已知的诱变、重组和/或改组方法、随后进行一个相关的筛选程序可以做出单一或多种氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试，该相关的筛选程序例如由瑞德哈尔-奥尔森（Reidhaar-Olson）&萨奥尔（Sauer），1988，科学241:53-57；鲍依（Bowie）&萨奥尔，1989，美国国家科学院院刊86:2152-2156；WO95/17413；或者WO95/22625所描述的那些。可使用的其他方法包括易错PCR、噬菌体展示（例如洛曼（Lowman）等人，1991，生物化学（Biochemistry）30:10832-10837；美国专利号5,223,409；WO92/06204）以及区域定向诱变（德贝郡（Derbyshire）等人，1986，基因（Gene）46:145；内尔（Ner）等人，1988，DNA7:127）。
诱变/改组方法可以与高通量的自动化筛选方法进行组合以检测由宿主细胞表达的克隆的诱变的多肽的活性（内斯（Ness）等人，1999，自然：生物技术（NatureBiotechnology）17:893-896）。编码活性多肽的诱变的DNA分子可以从这些宿主细胞中回收并使用本领域的标准方法来快速测序。这些方法允许快速确定单独的氨基酸残基在多肽中的重要性。
通过组合合成基因构建、和/或定点诱变、和/或随机诱变、和/或改组的多个方面来实现半合成基因构建。半合成构建典型地是，利用合成的多核苷酸片段的一个过程结合PCR技术。因此，基因的限定区域可以从头合成，而其他区域可以使用位点特异性诱变引物来放大，而还有其他区域可以经受易错PCR或非易错PCR扩增。然后可以对多核苷酸子序列进行改组。
多核苷酸
本发明还涉及编码本发明的变体的分离的多核苷酸。
核酸构建体
本发明还涉及包含编码本发明的一种变体的、可操作地连接至一个或多个控制序列上的一种多核苷酸的核酸构建体，该一个或多个控制序列在与控制序列相容的条件下指导编码序列在一种适合的宿主细胞中的表达。
可以按多种方式来操纵该多核苷酸以提供一种变体的表达。在插入载体之前对多核苷酸操作的适当性和必需性取决于表达载体。用于利用重组DNA方法来修饰多核苷酸的技术在本领域是熟知的。
控制序列可以是一个启动子，即由一个宿主细胞识别用于表达该多核苷酸的一种多核苷酸。启动子包含介导该变体的表达的转录控制序列。启动子可以是在宿主细胞内示出转录活性的任何多核苷酸，包括突变型启动子、截短型启动子以及杂交型启动子，并且可以从编码与宿主细胞同源亦或异源的细胞外或细胞内多肽的基因中获得。
引导本发明的核酸构建体在细菌宿主细胞中的转录的合适启动子的实例是从以下获得的启动子：解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因（amyQ）、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因（amyL）、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因（penP）、嗜热脂肪芽孢杆菌麦芽糖淀粉酶基因（amyM）、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因（sacB）、枯草芽孢杆菌xylA以及xylB基因、苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因（阿盖塞（Agaisse）以及勒尔克吕（Lereclus），1994，分子微生物学（Molecular Microbiology）13:97-107）、大肠杆菌lac操纵子、大肠杆菌trc启动子（埃贡（Egon）等人，1988，基因（Gene）69:301-315）、天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolor）琼脂糖酶基因（dagA），以及原核β-内酰胺酶基因（维拉-卡马洛夫（Villa-Kamaroff）等人，1978，美国国家科学院学报（Proc.Natl.Acad.Sci.USA）75:3727-3731），以及tac启动子（德波尔（DeBoer）等人，1983，美国国家科学院学报（Proc.Natl.Acad.Sci.USA）80:21-25）。另外的启动子描述于吉伯（Gilbert）等人，1980，科学美国人（Scientific American）242:74-94的“来自重组细菌的有用蛋白质（Useful proteins from recombinant bacteria）”；以及萨拉布鲁克（Sambrook）等人，1989，同上文中。串联启动子的实例披露在WO99/43835中。
引导本发明的核酸构建体在丝状真菌宿主细胞中的转录的合适启动子的实例是从以下基因获得的启动子：构巢曲霉（Aspergillus nidulans）乙酰胺酶、黑曲霉（Aspergillus niger）中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉（Aspergillus awamori）葡糖淀粉酶（glaA）、米曲霉（Aspergillus oryzae）TAKA淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）胰蛋白酶样蛋白酶（WO96/00787）、镰孢霉（Fusarium venenatum）淀粉葡萄糖苷酶（WO00/56900）、镰孢霉达里娅（Daria）（WO00/56900）、镰孢霉奎因（Quinn）（WO00/56900）、米黑根毛霉菌（Rhizomucor miehei）脂肪酶、米黑根毛霉菌天门冬氨酸蛋白酶、里氏木霉（Trichodermareesei）β-葡萄糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶IV、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉β-木糖苷酶以及NA2-tpi启动子（来自其中未翻译前导序列已经由来自曲霉丙糖磷酸异构酶基因的未翻译前导序列置换的曲霉中性α-淀粉酶基因的修饰启动子；非限制实例包括来自其中未翻译前导序列已经由来自构巢曲霉或米曲霉丙糖磷酸异构酶基因的未翻译前导序列置换的黑曲霉中性α-淀粉酶基因的修饰启动子）；以及其突变型、截短型以及杂交型启动子。
在一个酵母宿主中，有用的启动子是从以下各项的基因中获得：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）烯醇酶（ENO-1）、酿酒酵母半乳糖激酶（GAL1）、酿酒酵母乙醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶（ADH1、ADH2/GAP）、酿酒酵母磷酸丙糖异构酶（TPI）、酿酒酵母金属硫蛋白（CUP1）以及酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶。酵母宿主细胞的其他有用启动子由罗曼沃斯（Romanos）等人，1992，酵母（Yeast）8:423-488所描述。
控制序列也可以是转录终止子，它被宿主细胞识别以终止转录。该终止子序列可操作地连接至编码该变体的多核苷酸的3’-末端。可以使用在宿主细胞中具有功能的任何终止子。
优选的用于细菌宿主细胞的终止子是由克劳氏芽孢杆菌（Bacillus clausii）碱性蛋白酶（aprH）、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶（amyL）及大肠杆菌核糖体RNA（rrnB）的基因获得。
丝状真菌宿主细胞的优选终止子是从以下各项的基因中获得的：构巢曲霉邻氨基苯甲酸合成酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡萄糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶以及尖孢镰刀菌胰蛋白酶样蛋白酶。
用于酵母宿主细胞的优选终止子从酿酒酵母烯醇化酶、酿酒酵母细胞色素C（CYC1）和酿酒酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶的基因得到。用于酵母宿主细胞的其他有用终止子由罗曼沃斯等人，1992，同上文所描述。
该控制序列还可以是一个基因的启动子下游和编码序列上游的、增加该基因表达的一个mRNA稳定区域。
适用的mRNA稳定区域的实例是从以下获得的：苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因（WO94/25612）和枯草芽孢杆菌SP82基因（化（Hue）等人，1995，细菌学杂志（Journal ofBacteriology）177:3465-3471）。
该控制序列还可以是一个前导序列，一种对宿主细胞翻译很重要的非翻译mRNA区域。前导序列可操作地连接至编码该变体的多核苷酸的5’-末端。在宿主细胞中起作用的任何前导序列都可以使用。
用于丝状真菌宿主细胞的优选前导序列是从米曲霉TAKA状淀粉酶基因和构巢曲霉丙糖磷酸异构酶基因获得的。
用于酵母宿主细胞的适合的前导序列是由酿酒酵母烯醇化酶（ENO-1）、酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α-因子以及酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸（ADH2/GAP）的基因获得。
该控制序列还可以是一种多腺苷酸化序列，即可操作地连接至该变体编码序列的3’-末端并且当转录时由宿主细胞识别成将多腺苷酸残基添加到所转录的mRNA上的一个信号的一种序列。可以使用在宿主细胞中起作用的任何多腺苷酸化序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选多腺苷酸化序列是从以下各项的基因中获得的：构巢曲霉邻氨基苯甲酸合成酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡萄糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶、以及尖孢镰刀菌胰蛋白酶样蛋白酶。
可用于酵母宿主细胞的多腺苷酸化序列在郭（Guo）和谢尔曼（Sherman），1995，分子细胞生物学（Mol.Cellular Biol.）15:5983-5990中有过描述。
控制序列还可以是编码连接至一个变体的N-末端上的一个信号肽并指导该变体进入细胞的分泌途径的一个信号肽编码区域。该多核苷酸的编码序列的5’-端可以固有地包含在翻译阅读框内与编码该变体的编码序列的区段天然地连接的一个信号肽编码序列。或者，编码序列的5’-端可含有对于该编码序列为外源的一个信号肽编码序列。在编码序列并不天然包含信号肽编码序列的情况下可能需要外源的信号肽编码序列。可替代地，一种外源信号肽编码序列可简单地替换该天然的信号肽编码序列以便提高该变体的分泌。然而，可以使用指导所表达的变体进入宿主细胞的分泌途径中的任何信号肽编码序列。
用于细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从以下各项的基因中获得的信号肽编码序列：芽孢杆菌NCIB11837麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽胞杆菌α-淀粉酶、嗜热脂肪芽胞杆菌中性蛋白酶（nprT、nprS、nprM）以及枯草芽孢杆菌prsA。西蒙纳（Simonen）&帕尔瓦（Palva），1993，微生物学评论（Microbiological Reviews）57:109-137描述了另外的信号肽。
丝状真菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从以下各项的基因中获得的信号肽编码序列：黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉TAKA淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉葡聚糖内切酶V、疏棉状腐质霉脂肪酶以及米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶。
用于酵母宿主细胞的有用信号肽是从酿酒酵母α-因子基因和酿酒酵母转化酶基因获得的。其他有用的信号肽编码序列是由罗曼沃斯（Romanos）等人，1992，同上文所描述。
控制序列还可以是编码位于一个变体的N-末端的一种前肽的一种前肽编码序列。生成的多肽被称为前体酶（proenzyme）或多肽原（或者在一些情况下被称为酶原（zymogen））。多肽原通常为无活性的并能够通过前肽的催化切割或自身催化切割而从多肽原转化为活性多肽。该前肽编码序列可以从以下各项的基因中获得：枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶（aprE）、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶（nprT）、嗜热毁丝菌（Myceliophthorathermophila）漆酶（WO95/33836）、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶以及酿酒酵母α因子。
在信号肽序列和前肽序列都存在的情况下，该前肽序列定位成紧邻该变体的N-末端并且该信号肽序列定位成紧邻该前肽序列的N-末端。
还令人希望的可以是添加相对于宿主细胞的生长来调控该变体的表达的调控序列。调控系统的实例是响应于一种化学或物理刺激而引起该基因的表达开启或关闭的那些，包括一种调控化合物的存在。原核系统的调节系统包括lac、tac和trp操纵系统。在酵母中可使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中，可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶启动子、米曲霉TAKA启动淀粉酶启动子及米曲霉葡糖淀粉酶启动子。调控序列的其他实例为允许基因扩增的调控序列。在真核体系中，这些调控序列包括，在甲氨蝶呤的存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因、以及在重金属下扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况下，编码该变体的多核苷酸将与该调控序列可操作地连接。
表达载体
本发明还涉及包含编码本发明的变体的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。不同的核苷酸和控制序列可以接合在一起以产生一个重组表达载体，这一重组表达载体可以包含一个或多个便利的限制酶切位点以允许在这些位点处插入或取代编码该变体的多核苷酸。可替代地，通过将该多核苷酸或者包含该多核苷酸的一种核酸构建体插入到用于表达的一个适当的载体中可以表达该多核苷酸。在产生表达载体时，将编码序列定位于载体中，这样使得编码序列与用于表达的适当控制序列可操作地连接。
重组表达载体可以是能够方便地进行重组DNA程序并能使多核苷酸表达的任何载体（例如，质粒或病毒）。载体的选择一般取决于载体与引入此载体的宿主细胞之间的相容性。载体可以是线性或闭合的环状质粒。
载体可以是自主复制型载体，即作为染色体外实体而存在、其复制独立于染色体复制的载体，例如，质粒、染色体外元件、微型染色体或人工染色体。载体可包括任何用以保证自我复制的要素。或者，载体可以是，在被引入宿主细胞时整合到基因组中并与其整合的染色体一起复制的一种载体。此外，可以使用单个载体或质粒，或一起包含有待引入宿主细胞基因组中的总DNA的两个或更多个载体或质粒，或转座子。
载体优选包含一个或多个允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的可选择性标记。可选择性标记是一种基因，其产物有助于产生针对杀生物剂或病毒的抗性、针对重金属的抗性、对营养缺陷型的原养性（prototrophy to auxotrophs），等等。
细菌可选择性标记的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因、或者赋予抗生素抗性（例如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素、或四环素抗性）的标记。用于酵母宿主细胞的适合的标记包括（但不局限于）ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1、以及URA3。用于在一个丝状真菌宿主细胞中使用的选择性标记包括（但不局限于）amdS（乙酰胺酶）、argB（鸟氨酸氨甲酰基转移酶）、bar（草胺膦乙酰转移酶）、hph（潮霉素磷酸转移酶）、niaD（硝酸还原酶）、pyrG（乳清苷-5’-磷酸脱羧酶）、sC（硫酸腺苷基转移酶）、以及trpC（邻氨基苯甲酸合成酶）、连同其等效物。优选在曲霉菌细胞中使用的是构巢曲霉或米曲菌amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）bar基因。
载体优选包括允许载体整合到宿主细胞的基因组或允许载体在细胞中独立于基因组而自主复制的一个或多个元件。
对于整合到该宿主细胞基因组中，该载体可以依靠编码该变体的多核苷酸序列或者通过同源或非同源重组整合到该基因组中的该载体的任何其他元件。或者，载体可以含有用于指导通过同源重组整合到宿主细胞基因组中染色体的一个或多个准确位置的额外多核苷酸。为增加在精确位置的整合可能性，整合元件应当包含足量的核酸，例如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对、以及800至10,000个碱基对，它们对相应的靶序列具有高度的序列一致性，以增强同源重组的可能性。整合元件可以是任何与宿主细胞基因组中的靶序列同源的序列。此外，整合元件也可以是非编码或编码多核苷酸。另一方面，载体可通过非同源重组整合到宿主细胞的基因组中。
对自主复制来说，载体可进一步包含能使载体在所讨论的宿主细胞中自主复制的一个复制起点。复制起点可以是在细胞中起作用的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点”或“质粒复制子”是指使得质粒或载体能在体内复制的多核苷酸。
细菌复制起点的例子是允许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、pACYC177和pACYC184的复制起点，以及允许在芽孢杆菌中复制的pUB110、pE194、pTA1060和pAMβ1的复制起点。
可用于在酵母宿主细胞中使用的复制起点的实例是2微米复制起点、ARS1、ARS4、ARS1和CEN3的组合、以及ARS4和CEN6的组合。
在丝状真菌细胞中有用的复制起点的实例是AMA1以及ANS1（格姆斯（Gems）等人，1991，基因（Gene）98:61-67；卡伦（Cullen）等人，1987，核酸研究（Nucleic Acids Res.）15:9163-9175；WO00/24883）。AMA1基因的分离以及包括该基因的质粒或载体的构建可以根据在WO00/24883中公开的方法完成。
可以将本发明的多核苷酸的多于一个的拷贝插入到一个宿主细胞中以增加变体的产生。多核苷酸拷贝数的增加可通过如下方法获得：将至少一个额外拷贝的序列整合入宿主细胞基因组，或包括可与多核苷酸一起扩增的选择性标记基因，其中可通过在合适的选择剂（selectable agent）存在下培养细胞来选择含有选择性标记基因的扩增拷贝的细胞，并且由此来选择含有多核苷酸的额外拷贝的细胞。
用以连接以上描述的这些元件以构建本发明的重组表达载体的程序是本领域的普通技术人员众所周知的（参看例如萨姆布鲁克（Sambrook）等人，1989，同上文）。
宿主细胞
本发明还涉及重组宿主细胞，这些重组宿主细胞包含编码本发明的变体的、可操作地连接至一个或多个控制序列的一种多核苷酸，该一个或多个控制序列指导本发明的变体的产生。将包含一种多核苷酸的一个构建体或载体引入到一个宿主细胞中，这样使得该构建体或载体被维持作为一个染色体整合体或作为一个自主复制的染色体外载体，如早先所述。术语“宿主细胞”涵盖了由于在复制过程中存在的突变而与亲本细胞不相同的亲本细胞的任何子代。宿主细胞的选择在很大程度上将取决于编码该变体的基因及其来源。
宿主细胞可以是在重组产生一个变体中有用的任何细胞，例如原核细胞或真核细胞。
原核宿主细胞可以是任何格兰氏阳性细菌或格兰氏阴性细菌。格兰氏阳性细菌包括（但不局限于）芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌（Clostridium）、肠球菌（Enterococcus）、地芽孢杆菌（Geobacillus）、乳酸杆菌（Lactobacillus）、乳球菌（Lactococcus）、大洋芽孢杆菌（Oceanobacillus）、葡萄球菌（Staphylococcus）、链球菌（Streptococcus）以及链霉菌（Streptomyces）。格兰氏阴性细菌包括（但不局限于）弯曲杆菌（Campylobacter）、大肠杆菌、黄杆菌（Flavobacterium）、梭杆菌（Fusobacterium）、螺杆菌（Helicobacter）、泥杆菌（Ilyobacter）、奈瑟氏菌（Neisseria）、假单胞菌（Pseudomonas）、沙门氏菌（Salmonella）以及脲原体（Ureaplasma）。
细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌细胞，包括（但不局限于）嗜碱芽孢杆菌（Bacillus alkalophilus）、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌（Bacillus brevis）、环状芽孢杆菌（Bacillus circulans）、克劳氏芽孢杆菌（Bacillus clausii）、凝结芽孢杆菌（Bacilluscoagulans）、坚强芽孢杆菌（Bacillus firmus）、灿烂芽胞杆菌（Bacillus lautus）、迟缓芽孢杆菌（Bacillus lentus）、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）、短小芽胞杆菌（Bacillus pumilus）、嗜热脂肪芽胞杆菌、枯草芽孢杆菌、以及苏云金芽孢杆菌细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链球菌细胞，包括（但不局限于）似马链球菌（Streptococcus equisimilis）、酿脓链球菌（Streptococcus pyogenes）、乳房链球菌（Streptococcus uberis）、以及马链球兽瘟亚种（Streptococcus equisubsp.Zooepidemicus）细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌细胞，包括（但不局限于）产色链霉菌（Streptomyces achromogenes）、阿维链霉菌（Streptomyces avermitilis）、天蓝色链霉菌、灰色链霉菌（Streptomyces griseus）、以及变铅青链霉菌（Streptomyces lividans）细胞。
将DNA引入芽孢杆菌细胞中可通过以下来实现：原生质体转化（参见例如，张（Chang）以及科恩（Cohen），1979，分子遗传学和基因组学（Mol.Gen.Genet.）168:111-115）、感应细胞转化（参见例如，扬（Young）以及斯皮宰曾（Spizizen），1961，细菌学杂志（J.Bacteriol.）81:823-829，或杜拜努（Dubnau）以及大卫杜夫-阿贝尔森（Davidoff-Abelson），1971，分子生物学杂志（J.Mol.Biol.）.56:209-221）、电穿孔（参见例如，茂川（Shigekawa）以及道尔（Dower），1988，生物技术（Biotechniques）6:742-751）、或偶联（参见例如，克勒（Koehler）以及索恩（Thorne），1987，细菌学杂志（J.Bacteriol.）169:5271-5278）。将DNA引入大肠杆菌细胞中可通过以下来实现：原生质体转化（参见例如哈纳汗（Hanahan），1983，分子生物学杂志（J.Mol.Biol.）166:557-580）或电穿孔（参见例如道尔（Dower）等人，1988，核酸研究（Nucleic Acids Res.）16:6127-6145）。将DNA引入链霉菌属细胞中可通过以下来实现：原生质体转化、电穿孔（参见例如贡等人，2004，Folia微生物学（Folia Microbiol.）（布拉格（Praha））49:399-405）、偶联（参见例如，马佐迪耶（Mazodier）等人，1989，细菌学杂志（J.Bacteriol.）171:3583-3585）、或转导（参见例如，伯克（Burke）等人，2001，美国国家科学院学报（Proc.Natl.Acad.Sci.USA）98:6289-6294）。将DNA引入假单胞菌细胞中可通过以下来实现：电穿孔（参见例如，蔡（Choi）等人，2006，微生物学方法杂志（J.Microbiol.Methods）64:391-397），或偶联（参见例如，皮内多（Pinedo）以及斯梅茨（Smets），2005，应用环境微生物学（Appl.Environ.Microbiol.）71:51-57）。将DNA引入链球菌细胞中可通过以下来实现：天然感应（参见例如，佩里（Perry）以及藏满（Kuramitsu），1981，感染与免疫（Infect.Immun.）32:1295-1297）、原生质体转化（参见例如，凯特（Catt）以及乔力克（Jollick），1991，微生物学（Microbios）68:189-207）、电穿孔（参见例如，巴克利（Buckley）等人，1999，应用环境微生物学（Appl.Environ.Microbiol.）65:3800-3804）或偶联（参见例如，克莱威尔（Clewell），1981，微生物学评论（Microbiol.Rev.）45:409-436）。然而，可以使用在本领域已知的任何方法将DNA引入到一个宿主细胞中。
该宿主细胞还可以是一个真核细胞，例如一个哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、或真菌细胞。
该宿主细胞可以是一种真菌细胞。如在此使用的“真菌”包括子囊菌门（Ascomycota）、担子菌门（Basidiomycota）、壶菌门（Chytridiomycota）、以及接合菌门（Zygomycota）、连同卵菌门（Oomycota）和全部有丝分裂孢子真菌（如由霍克斯沃思（Hawksworth）等人在安斯沃思和拜斯比真菌词典（Ainsworth and Bisbyh真菌（如由霍克斯沃思（CAB Internatio），第8版，1995，国际应用生物科学中心（CAB International），大学出版社（University Press），英国剑桥（Cambridge,UK）中进行定义的）。
该真菌宿主细胞可以是一种酵母细胞。如在此使用的“酵母”包括产子囊酵母（ascosporogenous yeast）（内孢霉目（Endomycetale））、产担子酵母（basidiosporogenousyeast）、以及属于半知菌类（Fungi Imperfecti）（芽生菌（Blastomycete））的酵母。由于酵母的分类在将来可能有变化，出于本发明的目的，酵母应如酵母生物学和活动性（Biologyand Activities of Yeast）（斯金纳（Skinner）、帕斯莫尔（Passmore）、以及达文波特（Davenport）编辑，应用细菌学学会讨论会（Soc.App.Bacteriol.Symposium）系列第9期，1980）所述地进行定义。
酵母宿主细胞可以是假丝酵母（Candida）、汉逊酵母（Hansenula）、克鲁维酵母（Kluyveromyces）、毕赤酵母（Pichia）、酵母属（Saccharomyces）、裂殖酵母（Schizosaccharomyces）、或者亚罗酵母（Yarrowia）细胞，例如一种乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）、卡尔斯伯酵母（Saccharomycescarlsbergensis）、酿酒酵母、糖化酵母（Saccharomyces diastaticus）、道格拉氏酵母（Saccharomyces douglasii）、克鲁维氏酵母（Saccharomyces kluyveri）、诺地酵母（Saccharomyces norbensis）、卵形酵母（Saccharomyces oviformis）、或解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）细胞。
该真菌宿主细胞可以是一种丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括所有丝状形式的细分真菌门和卵菌门（如由霍克斯沃思（Hawksworth）等人，1995，同上所定义）。丝状真菌通常是以由壳多糖、纤维素、葡聚糖、壳聚糖、甘露聚糖、及其他复合多糖组成的菌丝壁为特征。营养体生长是通过菌丝延长，并且碳代谢是专性需氧的。与此不同，酵母例如酿酒酵母的营养生长是通过单细胞菌体的出芽进行并且碳代谢可以是发酵的。
丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢属（Acremonium）、曲霉菌属、短梗霉属（Aureobasidium）、烟管菌属（Bjerkandera）、拟蜡菌属（Ceriporiopsis）、金孢子菌属（Chrysosporium）、鬼伞属（Coprinus）、革盖菌属（Coriolus）、隐球菌属（Cryptococcus）、网孢菌属（Filibasidium）、镰刀菌属（Fusarium）、腐质霉属（Humicola）、稻瘟病菌属（Magnaporthe）、毛霉菌（Mucor）、毁丝霉属（Myceliophthora）、新美鞭菌属（Neocallimastix）、脉孢菌属（Neurospora）、拟青霉属（Paecilomyces）、青霉菌属（Penicillium）、平革菌属（Phanerochaete）、白腐菌属（Phlebia）、梨囊鞭菌属（Piromyces）、侧耳属（Pleurotus）、裂褶菌属（Schizophyllum）、踝节菌属（Talaromyces）、嗜热子囊菌属（Thermoascus）、梭孢壳属（Thielavia）、弯颈霉属（Tolypocladium）、栓菌属（Trametes）、或木霉属（Trichoderma）细胞。
例如，丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉（Aspergillus awamori）、臭曲霉（Aspergillus foetidus）、烟曲霉（Aspergillus fumigatus）、日本曲霉（Aspergillusjaponicus）、构巢曲霉（Aspergillus nidulans）、黑曲霉（Aspergillus niger）、米曲霉（Aspergillus oryzae）、黑刺烟管菌（Bjerkandera adusta）、干拟蜡菌（Ceriporiopsisaneirina）、Ceriporiopsis caregiea、Ceriporiopsis gilvescens、Ceriporiopsispannocinta、Ceriporiopsis rivulosa、Ceriporiopsis subrufa、虫拟腊菌（Ceriporiopsis subvermispora）、Chrysosporium inops、嗜角质金孢子菌（Chrysosporium keratinophilum）、Chrysosporium lucknowense、Chrysosporiummerdarium、毡金孢子菌（Chrysosporium pannicola）、Chrysosporium queenslandicum、热带金孢子菌（Chrysosporium tropicum）、Chrysosporium zonatum、灰盖鬼伞（Coprinuscinereus）、毛革盖菌（Coriolus hirsutus）、杆孢状镰孢（Fusarium bactridioides）、禾谷镰孢（Fusarium cerealis）、库威镰孢（Fusarium crookwellense）、大刀镰孢（Fusariumculmorum）、禾本科镰孢（Fusarium graminearum）、禾赤镰孢（Fusarium graminum）、异孢镰孢（Fusarium heterosporum）、合欢木镰孢（Fusarium negundi）、尖镰孢（Fusariumoxysporum）、多枝镰孢（Fusarium reticulatum）、粉红镰孢（Fusarium roseum）、接骨木镰孢（Fusarium sambucinum）、肤色镰孢（Fusarium sarcochroum）、拟分枝孢镰孢（Fusariumsporotrichioides）、硫色镰孢（Fusarium sulphureum）、圆镰孢（Fusarium torulosum）、拟丝孢镰孢（Fusarium trichothecioides）、镶片镰孢（Fusarium venenatum）、特异腐质霉（Humicola insolens）、疏棉状腐质霉（Humicola lanuginosa）、米黑毛霉（Mucor miehei）、嗜热毁丝霉（Myceliophthora thermophila）、粗糙链孢霉（Neurospora crassa）、产紫青霉（Penicillium purpurogenum）、黄孢平革菌（Phanerochaete chrysosporium）、福射射脉菌（Phlebia radiata）、刺芹侧耳（Pleurotus eryngii）、土生梭孢霉（Thielaviaterrestris）、长绒毛栓菌（Trametes villosa）、变色栓菌（Trametes versicolor）、哈茨木霉（Trichoderma harzianum）、康宁木霉（Trichoderma koningii）、长枝木霉（Trichodermalongibrachiatum）、里氏木霉（Trichoderma reesei）或绿色木霉（Trichoderma viride）细胞。
可以通过涉及原生质体形成、原生质体转化和细胞壁再生的方法以本身已知的方式来转化真菌细胞。转化曲霉以及木霉属宿主细胞的合适程序描述于EP238023，埃尔顿（Yelton）等人，1984，美国国家科学院学报（Proc.Natl.Acad.Sci.USA）81:1470-1474以及克里斯滕森（Christensen）等人，1988，生物技术（Bio/Technology）6:1419-1422中。用于转化镰刀菌属种类的适合方法是由马拉戴尔（Malardier）等人，1989，基因（Gene）78:147-156，及WO96/00787所描述。酵母可以使用以下各文献中所描述的程序转化：贝克尔（Becker）和古伦特（Guarente），艾本尔森J.N.（Abelson,J.N.）和塞蒙M.I.（Simon,M.I.）编辑，酵母遗传学与分子生物学指南（Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology），酶学方法（Methods in Enzymology），第194卷，第182-187页，纽约学术出版社有限公司；埃托（Ito）等人，1983，细菌学杂志（J.Bacteriol.）153:163；及辛伦（Hinnen）等人，1978，美国国家科学院院刊（Proc.Natl.Acad.Sci.USA）75:1920。
制备方法
本发明还涉及产生变体的方法，这些方法包括：(a)在适合于该变体的表达的条件下培养本发明的一种宿主细胞；并且(b)回收该变体。
使用本领域已知的方法在适合于产生该变体的一种营养培养基中培养这些宿主细胞。例如，可以通过在一种适合的培养基中并在允许该变体表达和/或分离的条件下进行摇瓶培养、或者在实验室或工业发酵罐中进行小规模或大规模发酵（包括连续发酵、分批发酵、分批给料发酵或固态发酵）来培养该细胞。培养可通过本领域已知的程序在含有碳和氮源以及无机盐的一种适合的营养培养基中进行。适合的培养基从商业供应商处可获得或者可根据公开的组成（例如，在美国典型培养物保藏中心目录中）来制备。如果该变体被分泌到该营养培养基中，则该变体可直接从该培养基中回收。如果该变体没有分泌，则它可从细胞裂解液中回收。
可以使用本领域已知的对变体特异的多种方法检测该变体。例如，可以使用一种酶测定来确定该变体的活性。
可以使用本领域已知的方法来回收该变体。例如，可以通过多种常规程序从该营养培养基中回收该变体，这些常规程序包括（但不局限于）收集、离心、过滤、萃取、喷雾干燥、蒸发、或沉淀。
可以通过本领域已知的多种程序来纯化该变体以获得大致上纯的变体，这些程序包括（但不局限于）色谱法（例如，离子交换色谱、亲和色谱、疏水作用色谱、色谱聚焦、以及大小排除色谱）、电泳程序（例如，制备型等电点聚焦）、有差别的溶解（例如，硫酸铵沉淀）、SDS-PAGE、或者萃取（参见，例如蛋白纯化（Protein Purification），詹森（Janson）&赖登（Ryden）编辑，VCH出版社（VCH Publishers），纽约，1989）。
在一个替代方面，没有回收该变体，而是将表达该变体的本发明的一种宿主细胞用作该变体的一个来源。
组合物
本发明还涉及包含一种α-淀粉酶变体以及至少一种额外酶的组合物。额外酶可选自下组，该组由以下各项组成：β-淀粉酶、纤维素酶（β-葡萄糖苷酶、纤维二糖水解酶以及内切葡聚糖酶）、葡糖淀粉酶、半纤维素酶（例如木聚糖酶）、异淀粉酶、异构酶、脂肪酶、植酸酶、蛋白酶、普鲁兰酶、和/或在商业过程中结合α-淀粉酶使用的其他酶。额外酶还可以是第二α-淀粉酶。这类酶在淀粉处理、糖转化、醇以及其他有用最终产物的发酵、商业洗涤剂以及净化助剂、去污、织物处理或退浆等等的领域中是已知的。
用途
本发明的变体具有允许各种工业应用的有价值特性。具体地说，变体可用于洗涤剂，尤其洗衣洗涤剂组合物以及餐具洗涤剂组合物、硬表面清洗组合物，以及用于使纺织品、织物或服装退浆、生产纸浆以及纸张、啤酒制造、乙醇生产以及淀粉转化过程。
α-淀粉酶变体可用于淀粉过程，尤其淀粉转化、特别是淀粉液化（参见例如，美国专利号3,912,590、EP252730以及EP063909、WO99/19467以及WO96/28567，这些专利全部通过引用结合在此）。还涵盖用于淀粉转化目的的组合物，除了本发明的变体以外，这些组合物还可包括AMG、普鲁兰酶以及其他α-淀粉酶。
此外，这些变体尤其适用于从淀粉或全谷粒中生产甜味剂以及乙醇（参见，例如，美国专利号5,231,017，该专利通过引用结合在此），如燃料乙醇、饮用乙醇以及工业乙醇。
这些变体还可用于使纺织品、织物以及服装退浆（参见例如，WO95/21247、美国专利号4,643,736以及EP119920，这些专利通过引用结合在此）、啤酒制造或酿造、以及纸浆和纸张生产或相关过程。
淀粉处理
天然淀粉由室温下不溶于水的微观颗粒组成。加热一种水性淀粉浆液时，颗粒膨胀并且最后破裂，将淀粉分子分散至溶液中。在此“凝胶化（gelatinization）”过程中，粘度有显著地增加。由于典型工业过程中的固体水平为30%-40%，因此不得不稀释或“液化”淀粉以使其能够被适当加工。在当前商业做法中，这种粘度降低主要通过酶法降解来实现。
常规淀粉转化过程如液化以及糖化过程描述于例如美国专利号3,912,590、EP252730以及EP063909中，这些专利通过引用结合在此。
在一个实施例中，转化方法将淀粉降解为较低分子量的碳水化合物成分，如糖或脂肪替代物，该方法包括一个脱支步骤。
当将淀粉转化为糖时，淀粉被解聚。这类解聚过程由例如一个预处理步骤以及两个或三个连续过程步骤组成，即，液化过程、糖化过程并且取决于所需最终产物，任选的异构化过程。
当所需的最终糖产物是例如高果糖糖浆时，葡萄糖糖浆可被转化为果糖。糖化过程之后，将pH值增加至6-8范围内的值，例如pH7.5，并且通过离子交换除去钙。然后，使用例如一种固定化葡萄糖异构酶将葡萄糖糖浆转化成高果糖糖浆。
发酵产物的生产
总体上，从全谷粒来生产醇（乙醇）可分成4个主要步骤：研磨、液化、糖化以及发酵。
谷粒经过研磨以便打开结构并且允许进一步处理。所使用的两个过程是湿式或干式研磨。在干式研磨中，将完整谷粒研磨并且用于该过程的其余部分中。湿式研磨可很好地分离胚芽（germ）和粗粉（淀粉颗粒和蛋白质），除少数情况外湿式研磨在平行生产糖浆时的多个位置使用。
在液化过程中，淀粉颗粒通过水解来溶解成DP大部分高于4的麦芽糊精。水解可通过酸处理来进行或由α-淀粉酶来酶法进行。酸水解有限地使用。原材料可以是研磨的全谷粒或来自淀粉处理的侧流。
在典型酶法液化期间，长链淀粉通过α-淀粉酶来降解成分支以及线性的较短单元（麦芽糊精）。酶法液化通常以三步热浆液方法进行。浆液加热至60℃-95℃（例如，77℃-86℃、80℃-85℃或83℃-85℃）之间并且添加一种或多种酶。液化过程在85℃下进行1-2小时。pH总体上在5.5与6.2之间。为了确保这些条件下最佳的酶稳定性，加入1mM钙（以便提供约40ppm游离的钙离子）。如此处理之后，液化淀粉具有的一个“葡萄糖当量”（DE）将为10-15。
随后，浆液在95℃-140℃，例如105℃-125℃之间喷射蒸煮、冷却至60℃-95℃并且添加更多酶以获得最终水解。液化方法在pH4.5-6.5、典型地在5与6之间的pH进行。研磨并且液化的谷粒又称为醪液（mash）。
在糖化酶如葡糖淀粉酶的存在下，将液化的含淀粉的材料糖化。糖化过程可持续12小时至120小时（例如，12至90小时、12至60小时以及12至48小时）。
然而，通常，在30至65℃、典型地约60℃的温度下进行一个预糖化步骤约30分钟至2小时（例如，30至90分钟），随后在被称为同时糖化和发酵（SSF）的发酵期间进行一个完全糖化。pH通常在4.2-4.8之间，例如，pH4.5。在一个同时糖化和发酵（SSF）过程中，没有糖化的保持阶段，而实际上是，酵母和酶一起添加。
在典型糖化过程中，通过添加葡糖淀粉酶以及脱支酶，如异淀粉酶（美国专利号4,335,208）或普鲁兰酶，来将液化期间产生的麦芽糊精转化成葡萄糖。添加葡糖淀粉酶以及脱支酶之前使温度降低至60℃。糖化过程进行24-72小时。
在添加糖化酶之前，使pH降低至低于4.5，同时维持高温（高于95℃），以便使液化α-淀粉酶失活。此过程减少了称为“潘糖前体”的短低聚糖的形成，这种短低聚糖不能通过脱支酶来适当水解。正常地，约0.2%-0.5%的糖化产物是分支三糖潘糖（Glc pα1-6Glc pα1-4Glc），它不能由普鲁兰酶降解。如果糖化过程中仍然存在得自液化步骤的活性淀粉酶（即未变性），潘糖的量可以高至1%-2%，这非常不合乎需要，因为它显著降低了糖化产率。
可发酵的糖类（例如，糊精类、单糖类，尤其葡萄糖）由酶法糖化产生。这些可发酵的糖类可进一步纯化且/或转化成有用的糖产物。另外，这些糖可在微生物发酵过程中用作发酵进料来产生最终产物，如醇（例如，乙醇以及丁醇）、有机酸（例如，丁二酸以及乳酸）、糖醇（例如，甘油）、抗坏血酸中间物（例如，葡萄糖酸盐、2-酮基-D-葡萄糖酸盐、2,5-二酮基-D-葡萄糖酸盐以及2-酮基-L-古洛糖酸）、氨基酸（例如，赖氨酸）、蛋白质（例如，抗体及其片段）。
在一个实施例中，液化过程步骤期间获得的可发酵的糖用于产生醇，并且尤其是乙醇。在乙醇生产中，通常使用一个SSF过程，其中糖化酶以及发酵生物（例如，酵母）一起添加，并且然后在30℃-40℃温度下进行。
发酵中所使用的生物取决于所需最终产物。典型地，如果乙醇是所需最终产物，则将酵母用作发酵生物。在一些优选实施例中，产乙醇微生物是酵母，并且尤其是酵母属如酿酒酵母菌株（美国专利号4,316,956）。各种酿酒酵母是可购得的并且这些包括（但不局限于）FALI（弗莱希曼酵母（Fleischmann's Yeast））、SUPERSTART（奥泰公司（Alltech））、FERMIOL（帝斯曼公司（DSM Specialties））、RED STAR（乐斯福公司（Lesaffre））以及Angel醇酵母（天使酵母公司（Angel Yeast Company），中国（China））。这些方法中所使用的启始酵母的量是在合适时间内有效产生商业上有效量乙醇的量（例如，在小于72小时内从具有25%-40%之间DS的一种底物产生至少10%乙醇）。酵母细胞总体上以约104至约1012、并且优选地从约107至约1010活酵母计数/mL发酵液的量来供应。在将酵母添加至醪液之后，使它典型地经受发酵约24-96小时，例如，35-60小时。温度在约26℃-34℃之间，典型地约32℃，并且pH是从pH3-6，例如，约pH4-5。
除了发酵微生物（例如，酵母）以外，发酵还可包括营养物以及额外酶，这些额外酶包括植酸酶。酵母在发酵中的使用在本领域中是熟知的。
在另外的实施例中，如本领域中已知的，适当发酵微生物的使用可产生发酵最终产物，包括例如甘油、1,3-丙二醇、葡萄糖酸盐、2-酮基-D-葡萄糖酸盐、2,5-二酮基-D-葡萄糖酸盐、2-酮基-L-古洛糖酸、丁二酸、乳酸、氨基酸及其衍生物。更具体地说，当乳酸是所需最终产物时，可使用一种乳酸杆菌属种（干酪乳杆菌（L.casei））；当甘油或1,3-丙二醇是所需最终产物时，可使用大肠杆菌；并且当2-酮基-D-葡萄糖酸盐、2,5-二酮基-D-葡萄糖酸盐以及2-酮基-L-古洛糖酸是所需最终产物时，柠檬泛菌可用作发酵微生物。以上列举的列表只是实例并且本领域技术人员知道可用于获得所需最终产物的许多发酵微生物。
用于由含未凝胶化淀粉的材料生产发酵产物的方法
本发明涉及在含淀粉的材料没有凝胶化（即，没有蒸煮）的情况下从含淀粉的材料生产发酵产物的方法。可在不使包含含淀粉材料以及水的水性浆液液化的情况下生产发酵产物如乙醇。在一个实施例中，本发明的一种方法包括：在低于初始凝胶化温度下、优选地在α-淀粉酶和/或产碳水化合物源的酶的存在下将（例如研磨的）含淀粉的材料（例如颗粒状淀粉）糖化，以产生可以通过一种适合的发酵生物发酵成发酵产物的多种糖。在此实施例中，所需发酵产物例如乙醇是从未凝胶化的（即，未蒸煮）、优选地经过研磨的谷粒如玉米中产生的。因此，在第一方面，本发明涉及从含淀粉的材料生产发酵产物的方法，这些方法包括：使用一种产碳水化合物源的酶以及一种发酵生物，在低于所述含淀粉的材料的初始凝胶化温度的一个温度下将含淀粉的材料同时糖化和发酵。在一个实施例中，还存在一种蛋白酶。蛋白酶可以是任何酸性真菌蛋白酶或金属蛋白酶。发酵之后，可以任选地例如通过蒸馏来回收发酵产品（例如乙醇）。典型地，在发酵期间存在一种或多种淀粉酶如葡糖淀粉酶、和/或其他产碳水化合物源的酶、和/或α-淀粉酶。葡糖淀粉酶以及其他产碳水化合物源的酶的实例包括使原料淀粉水解的葡糖淀粉酶。α-淀粉酶的实例包括酸性α-淀粉酶如酸性真菌α-淀粉酶。发酵生物的实例包括酵母例如，酿酒酵母的菌株。术语“初始凝胶化温度”指淀粉的凝胶化发生的最低温度。通常，在水中加热的淀粉在约50℃与75℃之间开始凝胶化；凝胶化的准确温度依赖于具体的淀粉，并能够由本领域的技术人员容易地确定。因此，初始凝胶化温度可根据植物种类、植物种类的具体品种、以及生长条件而变化。在本发明的上下文中，一种给定的含淀粉材料的初始凝胶化温度是使用古林斯坦（Gorinstein）和李（Lii），1992，淀粉Starch/44(12):461-466所描述的方法，使5%的淀粉颗粒丧失双折射的温度。在开始该方法之前，可以制备具有10-55w/w%干固体（DS）、优选25-45w/w%干固体、更优选30-40w/w%干固体的一种含淀粉的材料（例如颗粒状淀粉）的浆液。该浆液可以包括水和/或工艺用水，如釜馏物（逆流）、洗涤器水、蒸发器冷凝物或馏出物、由蒸馏得到的侧流汽提器水，或来自其他发酵产物工厂的工艺用水。由于本发明的方法是在低于该初始凝胶化温度下进行的并且因此没有发生显著的粘度增加，所以如果希望的话，可以使用高水平的釜馏物。在一个实施例中，水性浆液含有约1至约70vol.%、优选地15-60vol.%、尤其是从约30至50vol.%的水和/或工艺用水，如釜馏物（逆流）、洗涤器水、蒸发器冷凝物或馏出物、由蒸馏得到的侧流汽提器水，或来自其他发酵产物工厂的工艺用水，或其组合等。含淀粉的材料可优选地通过干式或湿式研磨来减少粒径至0.05至3.0mm，优选地0.1-0.5mm而制备。在经受本发明的一种方法之后，含淀粉的材料中至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或优选地至少99%的干固体被转化成一种可溶的淀粉水解产物。本发明此方面的一种方法是在低于初始凝胶化温度的一个温度下进行的，意味着温度典型地在30℃-75℃之间、优选地45℃-60℃之间的范围内。在一个优选实施例中，该方法在从25℃至40℃，如28℃至35℃，如30℃至34℃，优选地约32℃的温度下进行。在一个实施例中，执行该方法以使得糖水平，如葡萄糖水平保持于低水平，如低于6w/w%，如低于约3w/w%，如低于约2w/w%，如低于约1w/w%，如低于约0.5w/w%，或低于0.25w/w%，如低于约0.1w/w%。通过简单地采用调整量的酶和发酵生物就可以实现这样的低水平的糖。本领域普通技术人员可容易地确定有待使用的酶和发酵生物的剂量/数量。还可以选择酶和发酵生物的所采用的量以在发酵液中维持低麦芽糖浓度。例如，麦芽糖水平可保持低于约0.5w/w%，如低于约0.2w/w%。本发明的方法可以在从约3与7之间、优选地从pH3.5到6、或更优选地从pH4到5的pH下进行。在一个实施例中，发酵进行6至120小时，尤其24至96小时。
由含凝胶化淀粉的材料生产发酵产物的方法
在这一方面，本发明涉及由含淀粉的材料生产发酵产物、尤其是乙醇的方法，这些方法包括：一个液化步骤，以及依序地或同时地进行的糖化和发酵步骤。因此，本发明涉及从含淀粉的材料来生产发酵产物的方法，这些方法包括以下步骤：
(a)在一种α-淀粉酶变体存在下，使含淀粉的材料液化，或；
(b)使用一种产碳水化合物源的酶来使步骤(a)中获得的液化材料糖化；
(c)使用一种发酵生物进行发酵。
在一方面，一种普鲁兰酶如家族GH57普鲁兰酶也用于液化步骤中。在一个实施例中，在液化之前、期间和/或之后，添加一种蛋白酶，如酸性真菌蛋白酶或金属蛋白酶。在一个实施例中，金属蛋白酶来自一种嗜热子囊菌属（Thermoascus）菌株，例如，金黄色嗜热子囊菌（Thermoascus aurantiacus）菌株，尤其是金黄色嗜热子囊菌CGMCC No.0670。在一个实施例中，产碳水化合物源的酶是从以下菌株获得的葡糖淀粉酶：曲霉菌属菌株例如黑曲霉或泡盛曲霉，踝节菌属（Talaromyces）菌株，尤其爱默生踝节菌属（Talaromycesemersonii）；或阿太菌属（Athelia）菌株，尤其罗氏阿太菌（Athelia rolfsii）；栓菌属（Trametes）菌株，例如，瓣环栓菌（Trametes cingulata）；厚孢孔菌（Pachykytospora）属类菌株，例如，纸质厚孢孔菌（Pachykytospora papyracea）菌株；或白桩菇属（Leucopaxillus）属类菌株，例如，大白桩菇（Leucopaxillus giganteus）；或隔孢伏革菌属（Peniophora）属类菌株，例如，红边隔孢伏革菌（Peniophora rufomarginata）属种菌株；或其混合物。糖化步骤(b)以及发酵步骤(c)可依序或同时进行。当该方法作为一个依序糖化和发酵过程来进行时，一种普鲁兰酶和/或金属蛋白酶可在糖化和/或发酵期间添加，并且当步骤(b)与(c)同时进行时（SSF过程），在发酵之前或期间添加。普鲁兰酶和/或金属蛋白酶还可有利地在液化之前（预液化处理），即在步骤(a)之前或期间，和/或在液化之后（液化后处理），即在步骤(a)之后添加。普鲁兰酶最有利地在液化之前或期间，即在步骤(a)之前或期间添加。发酵产物，如尤其是乙醇，可以可任选地在发酵之后，例如通过蒸馏来回收。发酵生物优选地是酵母，优选地是酿酒酵母菌株。在一个具体实施例中，本发明的方法在步骤(a)之前进一步包括以下步骤：
x)优选地通过研磨（例如，使用锤磨机）来减小含淀粉的材料的粒径；
y)形成包含该含淀粉的材料和水的一种浆液。
在一个实施例中，粒径是小于#7筛号，例如#6筛号。#7筛号通常用于常规现有技术过程中。水性浆液可含有10-55，例如25-45以及30-40的w/w%干固体（DS）的含淀粉的材料。将浆液加热至高于凝胶化温度并且可添加一种α-淀粉酶变体以开始液化（稀释）。在一个实施例中，在步骤(a)中经受α-淀粉酶之前可以喷射蒸煮该浆液以进一步使该浆液凝胶化。在一个实施例中，液化可作为一个三步骤热浆液方法来进行。在pH4-6、优选地4.5-5.5下，将浆液加热至60℃-95℃之间、优选地70℃-90℃之间、如优选地80℃-85℃之间，并且任选地连同普鲁兰酶和/或蛋白酶、优选地金属蛋白酶一起添加α-淀粉酶变体以开始液化（稀释）。在一个实施例中，然后，可将浆液在95℃-140℃、优选地100℃-135℃、如105℃-125℃之间的温度下喷射蒸煮约1-15分钟、优选地约3-10分钟、尤其约5分钟。浆液冷却至60℃-95℃并且添加更多α-淀粉酶变体以及任选地普鲁兰酶变体和/或蛋白酶、优选地金属蛋白酶，以完成水解（二次液化）。通常在pH4.0-6、特别是在从4.5至5.5之间的pH下进行液化过程。可使用本领域熟知的条件来进行糖化步骤(b)。例如，全部糖化过程可以持续从约24到约72小时，然而，通常仅在介于30℃到65℃之间的温度下，典型地约60℃下进行典型地40-90分钟的预糖化，随后在一个同时糖化和发酵过程（SSF过程）中，在发酵期间进行完全糖化。糖化典型地在从20℃-75℃、优选地从40℃-70℃，典型地约60℃的温度下并且在4与5之间的pH下、一般在约pH4.5下进行。在发酵产物，尤其是乙醇的生产中最广泛使用的方法是同时糖化和发酵（SSF）方法，在该方法中，该糖化不存在保持阶段，意味着发酵生物（如酵母）和酶可以一起添加。SSF可典型地在从25℃至40℃、如从28℃至35℃、如从30℃至34℃、优选地约32℃的一个温度下进行。在一个实施例中，发酵进行6至120小时，尤其24至96小时。
啤酒制造
α-淀粉酶变体还可用于啤酒制造过程以及类似发酵中；α-淀粉酶典型地将在醪液形成（mashing）过程期间添加。该过程大致上类似于如上所述的研磨、液化、糖化以及发酵过程。
以釜馏物处理淀粉浆
研磨的含淀粉的材料与水以及回收的稀釜馏物合并以产生水性浆液。浆液可包含15至55%ds w/w之间（例如20%至50%、25%至50%、25%至45%、25%至40%、20%至35%以及30%-36%ds）。在一些实施例中，回收的稀釜馏物（逆流）在约10至70%v/v（例如10%至60%、10%至50%、10%至40%、10%至30%、10%至20%、20%至60%、20%至50%、20%至40%以及还有20%至30%范围内）。
一旦经过研磨的含淀粉的材料与水以及逆流合并，浆液中的pH未调整。此外，在将一种植酸酶以及任选地一种α-淀粉酶添加至浆液之后，pH未调整。在一个实施例中，浆液的pH是在约pH4.5至小于约6.0范围内（例如pH4.5至5.8、pH4.5至5.6、pH4.8至5.8、pH5.0至5.8、pH5.0至5.4、pH5.2至5.5以及pH5.2至5.9）。取决于添加至浆液的稀釜馏物的量以及包含稀釜馏物的材料的类型，浆液的pH可在约pH4.5与5.2之间。例如，稀釜馏物的pH可在pH3.8与pH4.5之间。
在乙醇生产期间，可添加酸以降低啤酒池中的pH，以减少在蒸馏之前的微生物污染的风险。
在一些实施例中，将一种植酸酶添加至浆液。在其他实施例中，除了植酸酶以外，将一种α-淀粉酶添加至浆液。在一些实施例中，将一种植酸酶以及一种α-淀粉酶依序添加至浆液。在其他实施例中，同时添加一种植酸酶以及一种α-淀粉酶。在一些实施例中，将包含一种植酸酶以及任选地一种α-淀粉酶的浆液孵育（预处理）约5分钟至约8小时（例如，5分钟至6小时、5分钟至4小时、5分钟至2小时以及15分钟至4小时）的时间。在其他实施例中，在约40至115℃（例如，45至80℃、50至70℃、50至75℃、60至110℃、60至95℃、70至110℃、70至85℃以及77至86℃）范围内的一个温度下孵育浆液。
在其他实施例中，在比含淀粉的材料的淀粉凝胶化温度低约0至约30℃（例如，0至25℃、0至20℃、0至15℃、0至10℃以及0至5℃）的温度下孵育浆液。在一些实施例中，温度是低于约68℃、低于约65℃、低于约62℃、低于约60℃以及低于约55℃。在一些实施例中，温度是高于约45℃、高于约50℃、高于约55℃以及高于约60℃。在一些实施例中，在低于淀粉凝胶化温度的温度下孵育包含植酸酶以及α-淀粉酶的浆液被称为主要（1°）液化。
在一个实施例中，经过研磨的含淀粉的材料是玉米或高粱。浆液包含25至40%DS，pH在4.8至5.2范围内，并且浆液与植酸酶以及任选地α-淀粉酶在60至75℃范围内的温度下孵育5分钟至2小时。
当前，据信用于液化过程的可购得的微生物α-淀粉酶总体上不能足够稳定地在高于约80℃的温度下、在小于pH5.6的pH水平下使用全谷粒从干式研磨过程中产生液化淀粉底物。许多可购得的α-淀粉酶的稳定性在低pH下降低。
在另外的液化步骤中，在约4.0至5.5的pH下，孵育或预处理的含淀粉的材料经历比含淀粉材料的淀粉凝胶化温度（例如，70℃至120℃、70℃至110℃以及70℃至90℃）高的温度增加，如约0至约45℃，持续约2分钟至约6小时的一段时间（例如，2分钟至4小时、90分钟、140分钟以及90至140分钟），更优选地1小时与2小时之间。温度可通过常规高温喷射蒸煮系统来增加一段较短时间，例如，1至15分钟。然后，淀粉可进一步在从约75℃至95℃（例如，80℃至90℃以及80℃至85℃）范围内的温度下水解约15至150分钟（例如，30至120分钟）的时间。在一个优选实施例中，pH在这些过程步骤期间未调整，并且液化醪液的pH在约pH4.0至pH5.8（例如pH4.5至5.8、pH4.8至5.4以及pH5.0至5.2）范围内。在一些实施例中，将第二剂量的热稳定的α-淀粉酶添加至二次液化步骤，但是在其他实施例中没有额外剂量的α-淀粉酶。
可在孵育以及液化步骤之后进行本领域中熟知的糖化以及发酵步骤。
蒸馏
任选地，在发酵之后，可例如通过蒸馏以及任选地随后进行一个或多个过程步骤来萃取醇（例如，乙醇）。
在一些实施例中，通过在此提供的方法来生产的乙醇的产率是至少8%、至少10%、至少12%、至少14%、至少15%、至少16%、至少17%以及至少18%（v/v）以及至少23%v/v。根据在此提供的方法来获得的乙醇可用作例如燃料乙醇、饮用乙醇，即可饮用的酒精，或工业乙醇。
副产物
来自发酵的剩余物是酒糟，它典型地用于液体或干燥形式的动物饲料。在另外的实施例中，最终产物可包括可用作例如动物饲料的发酵副产物如干酒糟（DDG）以及含可溶物的干酒糟（DDGS）。
关于如何完成液化、糖化、发酵、蒸馏以及回收乙醇的进一步细节是本领域技术人员熟知的。
根据在此提供的方法，糖化以及发酵可同时或单独地进行。
纸浆以及纸张生产
α-淀粉酶变体还可用于从淀粉增强废纸以及纸板来生产木质纤维素材料如纸浆、纸张以及纸板，尤其当再浆化在高于7的pH下发生以及当淀粉酶经由增强淀粉的降解来促进废弃材料的分解时。α-淀粉酶变体尤其适用于从淀粉涂布的印刷纸来生产造纸纸浆的过程。该过程可如WO95/14807描述来进行，包括以下步骤：
a)使纸张分解以产生纸浆，
b)在步骤a)之前、期间或之后用淀粉降解酶处理，并且
c)在步骤a)以及b)之后，从纸浆中分离油墨颗粒。
α-淀粉酶变体还可适用于对淀粉改性，其中酶改性的淀粉与碱性填充剂如碳酸钙、高岭土以及粘土一起用于造纸。通过使用α-淀粉酶变体，有可能在填充剂存在下将淀粉改性，从而允许一种更简单的整合过程。
纺织品、织物以及服饰的退浆
α-淀粉酶变体还可非常适用于纺织品、织物或衣服退浆。在纺织加工工业中，传统上使用α-淀粉酶作为退浆过程中的助剂，以促进在织造过程中作为纬纱上的保护涂层的含淀粉胶料的去除。织造之后彻底去除胶料涂层对于确保后续过程（其中所述织物被擦洗、漂白和染色）中的最佳效果是至关重要的。酶法淀粉分解是优选的，因为它不对纤维材料产生任何有害的作用。为了减少加工成本并增加研磨机处理量，有时将退浆过程与擦洗和漂白步骤结合。在这类情况下，非酶助剂如碱或氧化剂典型用于分解淀粉，因为传统α-淀粉酶并不与高pH水平以及漂白剂非常相容。由于使用具有相当腐蚀性的化学品，因此淀粉胶料的非酶分解导致一些纤维损伤。因此，希望使用α-淀粉酶变体，因为它们在碱性溶液中具有改进的性能。在使含纤维素的织物或纺织品退浆时，α-淀粉酶变体可单独或与纤维素酶组合使用。
退浆以及漂白过程在本领域中是熟知的。例如，这类过程描述于例如WO95/21247、美国专利号4,643,736、EP119920中，这些文献通过引用结合在此。
清洁过程和洗涤剂组合物
α-淀粉酶变体可作为用于各种清洗或洗涤过程，包括洗衣以及洗碗的洗涤剂组合物的组分来添加。例如，这些变体可用于WO96/23874以及WO97/07202中描述的洗涤剂组合物中。
α-淀粉酶变体可以常规使用的浓度来并入洗涤剂中。例如，本发明的变体可使用常规计量水平的洗涤剂以对应于0.00001-10mg（以纯的、活性酶类蛋白质来计算）α-淀粉酶/升洗涤液/洗碗液的量来并入。
该洗涤剂组合物可以例如配制成手洗或机洗洗衣洗涤剂组合物，其中包括适用于污染织物的预处理的洗衣添加剂组合物以及加入了漂洗剂的织物软化剂组合物，或配制成用于在一般家用硬表面清洁操作中使用的洗涤剂组合物，或配制成用于手洗或机洗餐具操作的洗涤剂组合物。
洗涤剂组合物可进一步包括一种或多种其他酶，如脂肪酶、过氧化物酶、蛋白酶、另一种淀粉水解酶，例如另一种α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、麦芽糖淀粉酶、CGT酶、纤维素酶、甘露聚糖酶（如MannawayTM，来自诺维信（Novozymes），丹麦（Denmark））、果胶酶、果胶裂合酶、角质酶和/或漆酶。
一般说来，所选择的一种或多种酶的特性应与所选择的洗涤剂相容（即最佳pH，与其他酶的和非酶的成分的相容性等），并且这一种或多种酶应以有效量存在。
这一种或多种洗涤剂酶可以通过添加包含一种或多种酶的独立添加剂，或通过添加包含所有这些酶的一种组合添加剂而被包含于洗涤剂组合物中。可配制一种洗涤剂添加剂，例如独立添加剂或组合添加剂，例如颗粒、液体、浆液等。优选洗涤剂添加剂配制品是颗粒，尤其是非粉尘颗粒；液体，尤其是稳定化液体；或浆液。
可以产生非粉尘颗粒，如美国专利号4,106,991以及4,661,452中所披露，并且这些颗粒可任选地通过在本领域中已知的方法来涂布。蜡样涂布材料的例子有平均分子量1000至20000的聚（环氧乙烷）产品（聚乙二醇，PEG)；具有从16至50个环氧乙烷单位的乙氧基化壬基酚；其中的醇具有从12至20个碳原子且其中有15至80个环氧乙烷单位的乙氧基化脂肪醇；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯和甘油二酯和甘油三酯。GB1483591中给出了适合于通过流化床技术应用的成膜涂布材料的实例。液体酶制剂可以例如依照现成的方法通过添加多元醇如丙二酶、糖或糖醇、乳酸或硼酸得以稳定。受保护的酶可根据EP238216中披露的方法制备。
洗涤剂组合物可以是任何方便的形式，例如棒状、片状、粉末、颗粒、糊或液体。液体洗涤剂可以是水性的，典型地含有多达约70%的水和0%至约30%的有机溶剂，或者是非水性的。
洗涤剂组合物包含一种或多种表面活性剂，所述表面活性剂可以是非离子型的（包括半极性）和/或阴离子型的和/或阳离子型的和/或两性型的。这些表面活性剂典型地以按重量计0.1%到60%的水平存在。
当包含在所述洗涤剂中时，洗涤剂通常包含从约1%到约40%的阴离子表面活性剂，如直链烷基苯磺酸盐、α-烯烃磺酸盐、烷基硫酸盐（脂肪醇硫酸盐）、醇乙氧基硫酸盐、仲链烷磺酸盐、α-磺基脂肪酸甲酯、烷基-或烯基琥珀酸或皂。
当包含在所述洗涤剂中时，洗涤剂通常包含从约0.2%到约40%的非离子表面活性剂，例如醇乙氧基化物、壬基酚乙氧基化物、烷基多苷、烷基二甲基胺氧化物、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺、脂肪酸单乙醇酰胺、多羟基烷基脂肪酰胺、或葡糖胺的N-酰基N-烷基衍生物（“葡糖酰胺”）。
所述洗涤剂可以包含0%至约65%的洗涤剂助洗剂或络合剂例如沸石、二磷酸盐、三磷酸盐、膦酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、次氮基三乙酸、乙二胺四乙酸、二亚乙基三胺五乙酸、烷基-或烯基琥珀酸、可溶性硅酸盐、或层状硅酸盐（例如购自赫司特公司（Hoechst）的SKS-6）。
洗涤剂还可以包含一种或多种聚合物。实例为羧甲基纤维素、聚(乙烯吡咯烷酮)、聚(乙二醇)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯基吡啶-N-氧化物)、聚(乙烯基咪唑)、聚羧酸酯如聚丙烯酸酯、马来酸/丙烯酸共聚物、以及甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物。
洗涤剂可以含有漂白体系，该漂白体系可以包括一种H2O2源，例如过硼酸盐或过碳酸盐，该H2O2源可以与一种成过酸漂白活性剂例如四乙酰乙二胺或壬酰基羟苯磺酸盐结合。或者，漂白体系中可以含有例如酰胺、酰亚胺或砜类型的过氧酸。
洗涤剂组合物中的一种或多种酶可以通过诸如以下的常规稳定剂稳定：例如，多元醇如丙二醇或丙三醇、糖或糖醇、乳酸、硼酸、或硼酸衍生物如芳族硼酸酯、或苯基硼酸衍生物如4-甲酰基苯基硼酸，并且所述组合物可以按例如WO92/19708和WO92/19709中所述配制。
所述洗涤剂还可以包含其他的常规洗涤剂成分，例如织物调理剂，包括粘土、泡沫促进剂、泡沫抑制剂、防腐蚀剂、污垢悬浮剂、抗污物再沉淀剂、染料、杀菌剂、光学增白剂、水溶助长剂、晦暗抑制剂、或香料。
洗涤剂组合物可包含对应于0.01-100mg酶类蛋白质每升洗涤液、优选地0.055mg酶类蛋白质每升洗涤液、尤其0.1-1mg酶类蛋白质每升洗涤液的量的任何酶。
另外，可以将在此描述的一种或多种变体酶掺入WO97/07202中所披露的洗涤剂配制品中，该文献在此引入作为参考。
本发明进一步通过以下实施例来定义：
实施例1.包括在对应于SEQ ID NO:1的位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变的α-淀粉酶变体，其中该变体与以下具有至少60%并且小于100%的序列一致性：(i)SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一个的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1至483、SEQ ID NO:2的氨基酸1至483、SEQ ID NO:3的氨基酸1至485、SEQ ID NO:4的氨基酸1至482、SEQ ID NO:5的氨基酸1至484、SEQ ID NO:6的氨基酸1至483、SEQ ID NO:7的氨基酸1至485、SEQ ID NO:8的氨基酸1至485、SEQ ID NO:9的氨基酸1至485、SEQ ID NO:10的氨基酸1至485、SEQ ID NO:11的氨基酸1至485、SEQ IDNO:12的氨基酸1至480、SEQ ID NO:13的氨基酸1至483或SEQ ID NO:14的氨基酸1至481，并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
实施例2.如实施例1所述的变体，该变体是分离的α-淀粉酶变体。
实施例3.如实施例1-2中任一项所述的变体，其中该变体包括：
在对应于位置1的位置处用Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val进行的插入或取代，尤其用His、Phe、Trp或Tyr，优选地His或Trp进行的插入或取代；
在对应于位置2的位置处用Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val进行的插入或取代，尤其用His、Phe、Trp或Tyr，优选地His或Trp进行的插入或取代；
在对应于位置68的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Phr、Trp或Tyr，优选地用Trp进行的取代；
在对应于位置71的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用His、Phe、Trp或Tyr，优选地用Trp进行的取代；
在对应于位置126的位置处用Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用His、Phe、Trp或Tyr，优选地用Trp进行的取代；
在对应于位置133的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Phe、Trp或Tyr，优选地用Tyr进行的取代；
在对应于位置142的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Phe、Trp或Tyr，优选地用Trp进行的取代；
在对应于位置144的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用His、Phe、Trp或Tyr，优选地用Trp进行的取代；
在对应于位置156的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Val，尤其用His、Phe或Trp，优选地用Trp进行的取代；
在对应于位置158的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Val，尤其用His、Phe或Trp，优选地用Trp进行的取代；
在对应于位置176的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Leu进行的取代；
在对应于位置185的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Pro进行的取代；
在对应于位置201的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Tyr进行的取代；
在对应于位置205的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Tyr进行的取代；
在对应于位置213的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Thr进行的取代；
在对应于位置239的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Ala或Gln进行的取代；
在对应于位置279的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用His、Trp或Tyr，优选地用Trp进行的取代；
在对应于位置316的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Phe、Trp或Tyr，优选地用Trp进行的取代；
在对应于位置318的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用His、Phe、Trp或Tyr，优选地用Trp进行的取代；
在对应于位置360的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Ser进行的取代；
在对应于位置416的位置处用Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Val进行的取代；
在对应于位置437的位置处用Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用His、Phe、Trp或Tyr，优选地用Trp进行的取代；或
在对应于位置450的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Phe、Trp或Tyr，优选地用Trp进行的取代。
实施例4.如实施例1-3中任一项所述的变体，其中该变体与以下各项具有至少65%、例如至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或者至少99%，但小于100%的序列一致性：(i)SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一个的成熟多肽，或(ii)SEQ IDNO:1的氨基酸1至483、SEQ ID NO:2的氨基酸1至483、SEQ ID NO:3的氨基酸1至485、SEQ IDNO:4的氨基酸1至482、SEQ ID NO:5的氨基酸1至484、SEQ ID NO:6的氨基酸1至483、SEQ IDNO:7的氨基酸1至485、SEQ ID NO:8的氨基酸1至485、SEQ ID NO:9的氨基酸1至485、SEQ IDNO:10的氨基酸1至485、SEQ ID NO:11的氨基酸1至485、SEQ ID NO:12的氨基酸1至480、SEQID NO:13的氨基酸1至483或SEQ ID NO:14的氨基酸1至481。
实施例5.如实施例1-3中任一项所述的变体，其中该变体与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或者至少99%，但小于100%的序列一致性。
实施例6.如实施例1-3中任一项所述的变体，其中该变体与(i)SEQ ID NO:2的成熟多肽、(ii)包括缺失I181*+G182*的SEQ ID NO:2的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:2的氨基酸1-483或(iv)包括缺失I181*+G182*的SEQ ID NO:2的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但是小于100%的序列一致性。
实施例7.如实施例1-3中任一项所述的变体，其中该变体与(i)SEQ ID NO:3的成熟多肽、(ii)包括缺失T183*+G184*的SEQ ID NO:3的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:3的氨基酸1-485或(iv)包括缺失T183*+G184*的SEQ ID NO:3的氨基酸1-485具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但是小于100%的序列一致性。
实施例8.如实施例1-3中任一项所述的变体，其中该变体与(i)SEQ ID NO:4的成熟多肽、(ii)包括缺失T180*+G181*的SEQ ID NO:4的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:4的氨基酸1-482或(iv)包括缺失T180*+G181*的SEQ ID NO:4的氨基酸1-482具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但是小于100%的序列一致性。
实施例9.如实施例1-3中任一项所述的变体，其中该变体与(i)SEQ ID NO:5的成熟多肽、(ii)包括缺失T182*+G183*的SEQ ID NO:5的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:5的氨基酸1-484或(iv)包括缺失T182*+G183*的SEQ ID NO:5的氨基酸1-484具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但是小于100%的序列一致性。
实施例10.如实施例1-3中任一项所述的变体，其中该变体与(i)SEQ ID NO:6的成熟多肽、(ii)包括缺失E178*+G179*的SEQ ID NO:6的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:6的氨基酸1-483或(iv)包括缺失E178*+G180*的SEQ ID NO:6的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但是小于100%的序列一致性。
实施例11.如实施例1-3中任一项所述的变体，其中该变体与(i)SEQ ID NO:7的成熟多肽、(ii)包括缺失T183*+G184*的SEQ ID NO:7的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:7的氨基酸1-485或(iv)包括缺失T183*+G184*的SEQ ID NO:7的氨基酸1-485具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但是小于100%的序列一致性。
实施例12.如实施例1-3中任一项所述的变体，其中该变体与(i)SEQ ID NO:8的成熟多肽、(ii)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:8的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:8的氨基酸1-485或(iv)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:8的氨基酸1-485具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但是小于100%的序列一致性。
实施例13.如实施例1-3中任一项所述的变体，其中该变体与(i)SEQ ID NO:9的成熟多肽、(ii)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:9的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:9的氨基酸1-485或(iv)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:9的氨基酸1-485具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但是小于100%的序列一致性。
实施例14.如实施例1-3中任一项所述的变体，其中该变体与(i)SEQ ID NO:10的成熟多肽、(ii)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:10的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:10的氨基酸1-485或(iv)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:10的氨基酸1-485具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但是小于100%的序列一致性。
实施例15.如实施例1-3中任一项所述的变体，其中该变体与(i)SEQ ID NO:11的成熟多肽、(ii)包括缺失H183*+G184*的SEQ ID NO:11的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:11的氨基酸1-485或(iv)包括缺失H183*+G184*的SEQ ID NO:11的氨基酸1-485具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，但是小于100%的序列一致性。
实施例16.如实施例1-3中任一项所述的变体，其中该变体与(i)SEQ ID NO:12的成熟多肽或(ii)SEQ ID NO:12的氨基酸1-480具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或者至少99%，但小于100%的序列一致性。
实施例17.如实施例1-3中任一项所述的变体，其中该变体与(i)SEQ ID NO:13的成熟多肽或(ii)SEQ ID NO:13的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或者至少99%，但小于100%的序列一致性。
实施例18.如实施例1-3中任一项所述的变体，其中该变体与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或者至少99%，但小于100%的序列一致性。
实施例19.如实施例1-18中任一项所述的变体，该变体是选自下组的一种亲本α-淀粉酶的一种变体，该组由以下各项组成：
(a)与以下具有至少60%序列一致性的多肽：(i)SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一个的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1至483、SEQ IDNO:2的氨基酸1至483、SEQ ID NO:3的氨基酸1至485、SEQ ID NO:4的氨基酸1至482、SEQ IDNO:5的氨基酸1至484、SEQ ID NO:6的氨基酸1至483、SEQ ID NO:7的氨基酸1至485、SEQ IDNO:8的氨基酸1至485、SEQ ID NO:9的氨基酸1至485、SEQ ID NO:10的氨基酸1至485、SEQID NO:11的氨基酸1至485、SEQ ID NO:12的氨基酸1至480、SEQ ID NO:13的氨基酸1至483、SEQ ID NO:14的氨基酸1至481；或
(b)SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一个的成熟多肽的片段，该片段具有α-淀粉酶活性。
实施例20.如实施例19所述的变体，其中该亲本α-淀粉酶与以下各项具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性：(i)SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13中的任何一个的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1至483、SEQ ID NO:2的氨基酸1至483、SEQ ID NO:3的氨基酸1至485、SEQ ID NO:4的氨基酸1至482、SEQ ID NO:5的氨基酸1至484、SEQ ID NO:6的氨基酸1至483、SEQ ID NO:7的氨基酸1至485、SEQ ID NO:8的氨基酸1至485、SEQ ID NO:9的氨基酸1至485、SEQ ID NO:10的氨基酸1至485、SEQ ID NO:11的氨基酸1至485、SEQ ID NO:12的氨基酸1至480、SEQ ID NO:13的氨基酸1至483、SEQ IDNO:14的氨基酸1至481。
实施例21.如实施例19所述的变体，其中该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
实施例22.如实施例19所述的变体，其中该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:2的成熟多肽、(ii)包括缺失I181*+G182*的SEQ ID NO:2的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:2的氨基酸1-483或(iv)包括缺失I181*+G182*的SEQ ID NO:2的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
实施例23.如实施例19所述的变体，其中该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:3的成熟多肽、(ii)包括缺失T183*+G184*的SEQ ID NO:3的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:3的氨基酸1-485或(iv)包括缺失T183*+G184*的SEQ ID NO:3的氨基酸1-485具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
实施例24.如实施例19所述的变体，其中该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:4的成熟多肽、(ii)包括缺失T180*+G181*的SEQ ID NO:4的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:4的氨基酸1-482或(iv)包括缺失T180*+G181*的SEQ ID NO:4的氨基酸1-482具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
实施例25.如实施例19所述的变体，其中该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:5的成熟多肽、(ii)包括缺失T182*+G183*的SEQ ID NO:5的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:5的氨基酸1-484或(iv)包括缺失T182*+G183*的SEQ ID NO:5的氨基酸1-484具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
实施例26.如实施例19所述的变体，其中该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:6的成熟多肽、(ii)包括缺失E178*+G179*的SEQ ID NO:6的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:6的氨基酸1-483或(iv)包括缺失E178*+G179*的SEQ ID NO:6的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
实施例27.如实施例19所述的变体，其中该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:7的成熟多肽、(ii)包括缺失T183*+G184*的SEQ ID NO:7的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:7的氨基酸1-485或(iv)包括缺失T183*+G184*的SEQ ID NO:7的氨基酸1-485具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
实施例28.如实施例19所述的变体，其中该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:8的成熟多肽、(ii)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:8的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:8的氨基酸1-485或(iv)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:8的氨基酸1-485具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
实施例29.如实施例19所述的变体，其中该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:9的成熟多肽、(ii)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:9的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:9的氨基酸1-485或(iv)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:9的氨基酸1-485具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
实施例30.如实施例19所述的变体，其中该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:10的成熟多肽、(ii)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:10的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:10的氨基酸1-485或(iv)包括缺失D183*+G184*的SEQ ID NO:10的氨基酸1-485具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
实施例31.如实施例19所述的变体，其中该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:11的成熟多肽、(ii)包括缺失H183*+G184*的SEQ ID NO:11的成熟多肽、(iii)SEQ ID NO:11的氨基酸1-485或(iv)包括缺失H183*+G184*的SEQ ID NO:11的氨基酸1-485具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
实施例32.如实施例19所述的变体，其中该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:12的成熟多肽或(ii)SEQ ID NO:12的氨基酸1-480具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
实施例33.如实施例19所述的变体，其中该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:13的成熟多肽或(ii)SEQ ID NO:13的氨基酸1-483具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
实施例34.如实施例19所述的变体，其中该亲本α-淀粉酶与(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1-481具有至少60%、例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性。
实施例35.如实施例19所述的变体，其中该亲本α-淀粉酶包括或由以下各项组成：(i)SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一个的成熟多肽，或(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸1至483、SEQ ID NO:2的氨基酸1至483、SEQ ID NO:3的氨基酸1至485、SEQ ID NO:4的氨基酸1至482、SEQ ID NO:5的氨基酸1至484、SEQ ID NO:6的氨基酸1至483、SEQ ID NO:7的氨基酸1至485、SEQ ID NO:8的氨基酸1至485、SEQ ID NO:9的氨基酸1至485、SEQ ID NO:10的氨基酸1至485、SEQ ID NO:11的氨基酸1至485、SEQ ID NO:12的氨基酸1至480、SEQ ID NO:13的氨基酸1至483或SEQ ID NO:14的氨基酸1至481。
实施例36.如实施例19所述的变体，其中该亲本α-淀粉酶是SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一个的成熟多肽的片段，其中该片段具有α-淀粉酶活性。
实施例37.如实施例1至36中任一项所述的变体，其中该变体由300至700个，例如350至650个、400至600个、450至500个或470至490个氨基酸组成。
实施例38.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于SEQ ID NO:1的位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450的任何位置的两个或更多个位置处的改变。
实施例39.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于SEQ ID NO:1的位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450的任何位置的三个或更多个位置处的改变。
实施例40.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于SEQ ID NO:1的位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450的任何位置的四个或更多个位置处的改变。
实施例41.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于SEQ ID NO:1的位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450的任何位置的五个或更多个位置处的改变。
实施例42.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于SEQ ID NO:1的位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450的任何位置的六个或更多个位置处的改变。
实施例43.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于SEQ ID NO:1的位置2、68、133、142、176、185、201、205、213、360、416以及437的任何位置的两个或更多个位置处的改变。
实施例44.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于SEQ ID NO:1的位置2、68、133、142、176、185、201、205、213、360、416以及437的任何位置的三个或更多个位置处的改变。
实施例45.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于SEQ ID NO:1的位置2、68、133、142、176、185、201、205、213、360、416以及437的任何位置的四个或更多个位置处的改变。
实施例46.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于SEQ ID NO:1的位置2、68、133、142、176、185、201、205、213、360、416以及437的任何位置的五个或更多个位置处的改变。
实施例47.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于SEQ ID NO:1的位置2、68、133、142、176、185、201、205、213、360、416以及437的任何位置的六个或更多个位置处的改变。
实施例48.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于SEQ ID NO:1的位置68、176、185、201、205、213、360、416以及437的任何位置的两个或更多个位置处的取代。
实施例49.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于SEQ ID NO:1的位置68、176、185、201、205、213、360、416以及437的任何位置的三个或更多个位置处的取代。
实施例50.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于SEQ ID NO:1的位置68、176、185、201、205、213、360、416以及437的任何位置的四个或更多个位置处的取代。
实施例51.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于SEQ ID NO:1的位置68、176、185、201、205、213、360、416以及437的任何位置的五个或更多个位置处的取代。
实施例52.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于SEQ ID NO:1的位置68、176、185、201、205、213、360、416以及437的任何位置的六个或更多个位置处的取代。
实施例53.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例54.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例55.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的三个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例56.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的四个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例57.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的五个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例58.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的六个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例59.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例60.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例61.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的三个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例62.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的四个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例63.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的五个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例64.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的六个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例65.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例66.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例67.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的三个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例68.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的四个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例69.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的五个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例70.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的六个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例71.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置1的位置处的插入。
实施例72.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括插入A1AH。
实施例73.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括插入A1AW。
实施例74.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置1的位置处的取代。
实施例75.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代A1H。
实施例76.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代A1W。
实施例77.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置2的位置处的插入。
实施例78.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括插入N2NH。
实施例79.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括插入N2NW。
实施例80.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置2的位置处的取代。
实施例81.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代N2H。
实施例82.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代N2W。
实施例83.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置68的位置处的取代。
实施例84.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H68W。
实施例85.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置71的位置处的取代。
实施例86.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代G71W。
实施例87.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置126的位置处的取代。
实施例88.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代N126W。
实施例89.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置133的位置处的取代。
实施例90.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H133Y。
实施例91.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置142的位置处的取代。
实施例92.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H142W。
实施例93.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置144的位置处的取代。
实施例94.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代P144W。
实施例95.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置156的位置处的取代。
实施例96.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代Y156W。
实施例97.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置158的位置处的取代。
实施例98.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代Y158W。
实施例99.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置176的位置处的取代。
实施例100.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K176L。
实施例101.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置185的位置处的取代。
实施例102.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代E185P。
实施例103.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置201的位置处的取代。
实施例104.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代I201Y。
实施例105.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置205的位置处的取代。
实施例106.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H205Y。
实施例107.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置213的位置处的取代。
实施例108.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K213T。
实施例109.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置239的位置处的取代。
实施例110.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代S239A。
实施例111.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代S239Q。
实施例112.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置279的位置处的取代。
实施例113.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代F279W。
实施例114.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置316的位置处的取代。
实施例115.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H316W。
实施例116.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置318的位置处的取代。
实施例117.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代L318W。
实施例118.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置360的位置处的取代。
实施例119.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代Q360S。
实施例120.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置416的位置处的取代。
实施例121.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代D416V。
实施例122.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置437的位置处的取代。
实施例123.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代R437W。
实施例124.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置450的位置处的取代。
实施例125.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H450W。
实施例126.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的一组取代，该组由以下各项组成：
A1H+N2H、
A1H+N2W、
A1H+H68W、
A1H+G71W、
A1H+N126W、
A1H+H133Y、
A1H+H142W、
A1H+P144W、
A1H+Y156W、
A1H+Y158W、
A1H+K176L、
A1H+E185P、
A1H+I201Y、
A1H+H205Y、
A1H+K213T、
A1H+S239A、
A1H+S239Q、
A1H+F279W、
A1H+H316W、
A1H+L318W、
A1H+Q360S、
A1H+D416V、
A1H+R437W、
A1H+H450W、
A1W+N2H、
A1W+N2W、
A1W+H68W、
A1W+G71W、
A1W+N126W、
A1W+H133Y、
A1W+H142W、
A1W+P144W、
A1W+Y156W、
A1W+Y158W、
A1W+K176L、
A1W+E185P、
A1W+I201Y、
A1W+H205Y、
A1W+K213T、
A1W+S239A、
A1W+S239Q、
A1W+F279W、
A1W+H316W、
A1W+L318W、
A1W+Q360S、
A1W+D416V、
A1W+R437W、
A1W+H450W、
N2H+H68W
N2H+G71W、
N2H+N126W、
N2H+H133Y、
N2H+H142W、
N2H+P144W、
N2H+Y156W、
N2H+Y158W、
N2H+K176L、
N2H+E185P、
N2H+I201Y、
N2H+H205Y、
N2H+K213T、
N2H+S239A、
N2H+S239Q、
N2H+F279W、
N2H+H316W、
N2H+L318W、
N2H+Q360S、
N2H+D416V、
N2H+R437W、
N2H+H450W、
N2W+H68W
N2W+G71W、
N2W+N126W、
N2W+H133Y、
N2W+H142W、
N2W+P144W、
N2W+Y156W、
N2W+Y158W、
N2W+K176L、
N2W+E185P、
N2W+I201Y、
N2W+H205Y、
N2W+K213T、
N2W+S239A、
N2W+S239Q、
N2W+F279W、
N2W+H316W、
N2W+L318W、
N2W+Q360S、
N2W+D416V、
N2W+R437W、
N2W+H450W、
H68W+G71W、
H68W+N126W、
H68W+H133Y、
H68W+H142W、
H68W+P144W、
H68W+Y156W、
H68W+Y158W、
H68W+K176L、
H68W+E185P、
H68W+I201Y、
H68W+H205Y、
H68W+K213T、
H68W+S239A、
H68W+S239Q、
H68W+F279W、
H68W+H316W、
H68W+L318W、
H68W+Q360S、
H68W+D416V、
H68W+R437W、
H68W+H450W、
G71W+N126W、
G71W+H133Y、
G71W+H142W、
G71W+P144W、
G71W+Y156W、
G71W+Y158W、
G71W+K176L、
G71W+E185P、
G71W+I201Y、
G71W+H205Y、
G71W+K213T、
G71W+S239A、
G71W+S239Q、
G71W+F279W、
G71W+H316W、
G71W+L318W、
G71W+Q360S、
G71W+D416V、
G71W+R437W、
G71W+H450W、
N126W+H133Y、
N126W+H142W、
N126W+P144W、
N126W+Y156W、
N126W+Y158W、
N126W+K176L、
N126W+E185P、
N126W+I201Y、
N126W+H205Y、
N126W+K213T、
N126W+S239A、
N126W+S239Q、
N126W+F279W、
N126W+H316W、
N126W+L318W、
N126W+Q360S、
N126W+D416V、
N126W+R437W、
N126W+H450W、
H133Y+H142W、
H133Y+P144W、
H133Y+Y156W、
H133Y+Y158W、
H133Y+K176L、
H133Y+E185P、
H133Y+I201Y、
H133Y+H205Y、
H133Y+K213T、
H133Y+S239A、
H133Y+S239Q、
H133Y+F279W、
H133Y+H316W、
H133Y+L318W、
H133Y+Q360S、
H133Y+D416V、
H133Y+R437W、
H133Y+H450W、
H142W+P144W、
H142W+Y156W、
H142W+Y158W、
H142W+K176L、
H142W+E185P、
H142W+I201Y、
H142W+H205Y、
H142W+K213T、
H142W+S239A、
H142W+S239Q、
H142W+F279W、
H142W+H316W、
H142W+L318W、
H142W+Q360S、
H142W+D416V、
H142W+R437W、
H142W+H450W、
P144W+Y156W、
P144W+Y158W、
P144W+K176L、
P144W+E185P、
P144W+I201Y、
P144W+H205Y、
P144W+K213T、
P144W+S239A、
P144W+S239Q、
P144W+F279W、
P144W+H316W、
P144W+L318W、
P144W+Q360S、
P144W+D416V、
P144W+R437W、
P144W+H450W、
Y156W+Y158W、
Y156W+K176L、
Y156W+E185P、
Y156W+I201Y、
Y156W+H205Y、
Y156W+K213T、
Y156W+S239A、
Y156W+S239Q、
Y156W+F279W、
Y156W+H316W、
Y156W+L318W、
Y156W+Q360S、
Y156W+D416V、
Y156W+R437W、
Y156W+H450W、
Y158W+K176L、
Y158W+E185P、
Y158W+I201Y、
Y158W+H205Y、
Y158W+K213T、
Y158W+S239A、
Y158W+S239Q、
Y158W+F279W、
Y158W+H316W、
Y158W+L318W、
Y158W+Q360S、
Y158W+D416V、
Y158W+R437W、
Y158W+H450W、
K176L+E185P、
K176L+I201Y、
K176L+H205Y、
K176L+K213T、
K176L+S239A、
K176L+S239Q、
K176L+F279W、
K176L+H316W、
K176L+L318W、
K176L+Q360S、
K176L+D416V、
K176L+R437W、
K176L+H450W、
E185P+I201Y、
E185P+H205Y、
E185P+K213T、
E185P+S239A、
E185P+S239Q、
E185P+F279W、
E185P+H316W、
E185P+L318W、
E185P+Q360S、
E185P+D416V、
E185P+R437W、
E185P+H450W、
I201Y+H205Y、
I201Y+K213T、
I201Y+S239A、
I201Y+S239Q、
I201Y+F279W、
I201Y+H316W、
I201Y+L318W、
I201Y+Q360S、
I201Y+D416V、
I201Y+R437W、
I201Y+H450W、
H205Y+K213T、
H205Y+S239A、
H205Y+S239Q、
H205Y+F279W、
H205Y+H316W、
H205Y+L318W、
H205Y+Q360S、
H205Y+D416V、
H205Y+R437W、
H205Y+H450W、
K213T+S239A、
K213T+S239Q、
K213T+F279W、
K213T+H316W、
K213T+L318W、
K213T+Q360S、
K213T+D416V、
K213T+R437W、
K213T+H450W、
S239A+F279W、
S239A+H316W、
S239A+L318W、
S239A+Q360S、
S239A+D416V、
S239A+R437W、
S239A+H450W、
S239Q+F279W、
S239Q+H316W、
S239Q+L318W、
S239Q+Q360S、
S239Q+D416V、
S239Q+R437W、
S239Q+H450W、
F279W+H316W、
F279W+L318W、
F279W+Q360S、
F279W+D416V、
F279W+R437W、
F279W+H450W、
H316W+L318W、
H316W+Q360S、
H316W+D416V、
H316W+R437W、
H316W+H450W、
L318W+Q360S、
L318W+D416V、
L318W+R437W、
L318W+H450W、
Q360S+D416V、
Q360S+R437W、
Q360S+H450W、
D416V+R437W、
D416V+H450W，以及
R437W+H450W。
实施例127.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置1的位置处的改变，尤其是插入A1AH或A1AW或取代A1H或A1W，并组合在对应于位置2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例128.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置1的位置处的改变，尤其是插入A1AH或A1AW或取代A1H或A1W，并组合在对应于位置2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变，尤其是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例129.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置2的位置处的改变，尤其是插入N2NH或N2NW或取代N2H或N2W，优选是取代N2H，并组合在对应于位置1、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例130.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置2的位置处的改变，尤其是插入N2NH或N2NW或取代N2H或N2W，优选是取代N2H，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、213、360、416以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例131.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置2的位置处的改变，尤其是插入N2NH或N2NW或取代N2H或N2W，优选是取代N2H，并组合在对应于位置68、133、142、156、158、279以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例132.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置2的位置处的改变，尤其是插入N2NH或N2NW或取代N2H或N2W，优选是取代N2H，并组合在对应于位置1、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变，尤其是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例133.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置2的位置处的改变，尤其是插入N2NH或N2NW或取代N2H或N2W，优选是取代N2H，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、213、360、416以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例134.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置2的位置处的改变，尤其是插入N2NH或N2NW或取代N2H或N2W，优选是取代N2H，并组合在对应于位置68、133、142、156、158、279以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例135.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置68的位置处的取代，尤其是取代H68W，并组合在对应于位置1、2、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例136.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置68的位置处的取代，尤其是取代H68W，并组合在对应于位置176、185、201、205、213、360、416以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例137.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置68的位置处的取代，尤其是取代H68W，并组合在对应于位置2、133、142、156、158、279以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例138.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置68的位置处的取代，尤其是取代H68W，并组合在对应于位置1、2、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变，尤其是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例139.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置68的位置处的取代，尤其是取代H68W，并组合在对应于位置176、185、201、205、213、360、416以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例140.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置68的位置处的取代，尤其是取代H68W，并组合在对应于位置2、133、142、156、158、279以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例141.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置71的位置处的取代，尤其是取代G71W，并组合在对应于位置1、2、68、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例142.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置71的位置处的取代，尤其是取代G71W，并组合在对应于位置1、2、68、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例143.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置126的位置处的取代，尤其是取代N126W，并组合在对应于位置1、2、68、71、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例144.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置126的位置处的取代，尤其是取代N126W，并组合在对应于位置1、2、68、71、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例145.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置133的位置处的取代，尤其是取代H133Y，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例146.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置133的位置处的取代，尤其是取代H133Y，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、213、360、416以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例147.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置133的位置处的取代，尤其是取代H133Y，并组合在对应于位置2、68、142、156、158、279以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例148.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置133的位置处的取代，尤其是取代H133Y，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变，尤其是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例149.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置133的位置处的取代，尤其是取代H133Y，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、213、360、416以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例150.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置133的位置处的取代，尤其是取代H133Y，并组合在对应于位置2、68、142、156、158、279以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例151.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置142的位置处的取代，尤其是取代H142W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例152.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置142的位置处的取代，尤其是取代H142W，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、213、360、416以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例153.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置142的位置处的取代，尤其是取代H142W，并组合在对应于位置2、68、133、156、158、279以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例154.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置142的位置处的取代，尤其是取代H142W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变，尤其是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例155.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置142的位置处的取代，尤其是取代H142W，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、213、360、416以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例156.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置142的位置处的取代，尤其是取代H142W，并组合在对应于位置2、68、133、156、158、279以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例157.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置144的位置处的取代，尤其是取代P144W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例158.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置144的位置处的取代，尤其是取代P144W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例159.
实施例160.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置156的位置处的取代，尤其是取代Y156W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例161.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置156的位置处的取代，尤其是取代Y156W，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、213、360、416以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例162.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置156的位置处的取代，尤其是取代Y156W，并组合在对应于位置2、68、133、142、158、279以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例163.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置156的位置处的取代，尤其是取代Y156W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变，尤其是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例164.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置156的位置处的取代，尤其是取代Y156W，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、213、360、416以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例165.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置156的位置处的取代，尤其是取代Y156W，并组合在对应于位置2、68、133、142、158、279以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例166.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置158的位置处的取代，尤其是取代Y158W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例167.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置158的位置处的取代，尤其是取代Y158W，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、213、360、416以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例168.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置158的位置处的取代，尤其是取代Y158W，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、279以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、F279W以及R437W。
实施例169.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置158的位置处的取代，尤其是取代Y158W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变，尤其是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例170.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置158的位置处的取代，尤其是取代Y158W，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、213、360、416以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例171.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置158的位置处的取代，尤其是取代Y158W，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、279以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、F279W以及R437W。
实施例172.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置176的位置处的取代，尤其是取代K176L，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例173.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置176的位置处的取代，尤其是取代K176L，并组合在对应于位置68、185、201、205、213、360、416以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例174.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置176的位置处的取代，尤其是取代K176L，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、158、279以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例175.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置176的位置处的取代，尤其是取代K176L，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变，尤其是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例176.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置176的位置处的取代，尤其是取代K176L，并组合在对应于位置68、185、201、205、213、360、416以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例177.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置176的位置处的取代，尤其是取代K176L，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、158、279以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例178.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置185的位置处的取代，尤其是取代E185P，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例179.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置185的位置处的取代，尤其是取代E185P，并组合在对应于位置68、176、201、205、213、360、416以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例180.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置185的位置处的取代，尤其是取代E185P，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、158、279以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例181.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置185的位置处的取代，尤其是取代E185P，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变，尤其是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例182.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置185的位置处的取代，尤其是取代E185P，并组合在对应于位置68、176、201、205、213、360、416以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例183.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置185的位置处的取代，尤其是取代E185P，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、158、279以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例184.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置201的位置处的取代，尤其是取代I201Y，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例185.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置201的位置处的取代，尤其是取代I201Y，并组合在对应于位置68、176、185、205、213、360、416以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例186.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置201的位置处的取代，尤其是取代I201Y，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、158、279以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例187.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置201的位置处的取代，尤其是取代I201Y，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变，尤其是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例188.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置201的位置处的取代，尤其是取代I201Y，并组合在对应于位置68、176、185、205、213、360、416以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例189.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置201的位置处的取代，尤其是取代I201Y，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、158、279以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例190.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置205的位置处的取代，尤其是取代H205Y，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例191.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置205的位置处的取代，尤其是取代H205Y，并组合在对应于位置68、176、185、201、213、360、416以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例192.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置205的位置处的取代，尤其是取代H205Y，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、158、279以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例193.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置205的位置处的取代，尤其是取代H205Y，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变，尤其是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例194.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置205的位置处的取代，尤其是取代H205Y，并组合在对应于位置68、176、185、201、213、360、416以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例195.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置205的位置处的取代，尤其是取代H205Y，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、158、279以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例196.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置213的位置处的取代，尤其是取代K213T，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例197.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置213的位置处的取代，尤其是取代K213T，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、360、416以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、Q360S、D416V以及R437W。
实施例198.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置213的位置处的取代，尤其是取代K213T，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、158、279以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例199.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置213的位置处的取代，尤其是取代K213T，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变，尤其是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例200.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置213的位置处的取代，尤其是取代K213T，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、360、416以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、Q360S、D416V以及R437W。
实施例201.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置213的位置处的取代，尤其是取代K213T，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、158、279以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例202.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置239的位置处的取代，尤其是取代S239A或S239Q，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例203.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置239的位置处的取代，尤其是取代S239A或S239Q，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例204.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置279的位置处的取代，尤其是取代F279W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例205.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置279的位置处的取代，尤其是取代F279W，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、213、360、416以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例206.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置279的位置处的取代，尤其是取代F279W，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、158以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W以及R437W。
实施例207.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置279的位置处的取代，尤其是取代F279W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变，尤其是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例208.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置279的位置处的取代，尤其是取代F279W，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、213、360、416以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437。
实施例209.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置279的位置处的取代，尤其是取代F279W，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、158以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W以及R437W。
实施例210.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置316的位置处的取代，尤其是取代H316W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代、尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例211.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置316的位置处的取代，尤其是取代H316W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、318、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例212.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置318的位置处的取代，尤其是取代L318W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例213.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置318的位置处的取代，尤其是取代L318W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、360、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、Q360S、D416V、R437W以及H450W。
实施例214.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置360的位置处的取代，尤其是取代Q360S，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V、R437W以及H450W。
实施例215.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置360的位置处的取代，尤其是取代Q360S，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、213、416以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、D416V以及R437W。
实施例216.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置360的位置处的取代，尤其是取代Q360S，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、158、279以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例217.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置360的位置处的取代，尤其是取代Q360S，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、416、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变，尤其是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、D416V、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V、R437W以及H450W。
实施例218.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置360的位置处的取代，尤其是取代Q360S，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、213、416以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、D416V以及R437W。
实施例219.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置360的位置处的取代，尤其是取代Q360S，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、158、279以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例220.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置416的位置处的取代，尤其是取代D416V，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、R437W以及H450W。
实施例221.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置416的位置处的取代，尤其是取代D416V，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、213、360以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S以及R437W。
实施例222.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置416的位置处的取代，尤其是取代D416V，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、158、279以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例223.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置416的位置处的取代，尤其是取代D416V，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、437以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变，尤其是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、R437F、R437H、R437Y、R437W、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、R437W以及H450W。
实施例224.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置416的位置处的取代，尤其是取代D416V，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、213、360以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S以及R437W。
实施例225.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置416的位置处的取代，尤其是取代D416V，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、158、279以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W、F279W以及R437W。
实施例226.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置437的位置处的取代，尤其是取代R437W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416以及450中的任何位置的一个或多个位置处的改变，尤其是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的一个或多个改变，该组由以下各项组成A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及H450W。
实施例227.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置437的位置处的取代，尤其是取代R437W，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、213、360以及416中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S以及D416V。
实施例228.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置437的位置处的取代，尤其是取代R437W，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、158以及279中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W以及F279W。
实施例229.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置437的位置处的取代，尤其是取代R437W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416以及450中的任何位置的两个或更多个位置处的改变，尤其是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AF、A1AY、A1AW、A1H、A1F、A1Y、A1W、N2NH、N2N2F、N2NY、N2NW、N2H、N2F、N2Y、N2W、H68F、H68Y、H68W、G71F、G71H、G71Y、G71W、N126F、N126H、N126Y、N126W、H133F、H133Y、H133W、H142F、H142Y、H142W、P144F、P144H、P144Y、P144W、Y156F、Y156H、Y156W、Y158F、Y158H、Y158W、K176L、E185P、I201F、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279Y、F279W、H316F、H316Y、H316W、L318F、L318H、L318Y、L318W、Q360S、D416V、H450F、H450Y以及H450W，优选是选自下组的两个或更多个改变，该组由以下各项组成：A1AH、A1AW、A1H、A1W、N2NH、N2NW、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及H450W。
实施例230.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置437的位置处的取代，尤其是取代R437W，并组合在对应于位置68、176、185、201、205、213、360以及416中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S以及D416V。
实施例231.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置437的位置处的取代，尤其是取代R437W，并组合在对应于位置2、68、133、142、156、158以及279中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：N2H、H68W、H133Y、H142W、Y156W、Y158W以及F279W。
实施例232.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置450的位置处的取代，尤其是取代H450W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416以及437中的任何位置的一个或多个位置处的取代，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及R437W。
实施例233.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括在对应于位置450的位置处的取代，尤其是取代H450W，并组合在对应于位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416以及437中的任何位置的两个或更多个位置处的取代，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及R437W。
实施例234.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H68W以及K176L并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例235.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H68W以及K176L并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例236.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H68W以及E185P并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：K176L、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例237.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H68W以及E185P并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：K176L、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例238.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H68W以及I201Y并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：K176L、E185P、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例239.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H68W以及I201Y并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：K176L、E185P、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例240.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H68W以及H205Y并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：K176L、E185P、I201Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例241.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H68W以及H205Y并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：K176L、E185P、I201Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例242.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H68W以及K213T并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：K176L、E185P、I201Y、H205Y、Q360S、D416V以及R437W。
实施例243.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H68W以及K213T并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：K176L、E185P、I201Y、H205Y、Q360S、D416V以及R437W。
实施例244.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H68W以及Q360S并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、D416V以及R437W。
实施例245.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H68W以及Q360S并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、D416V以及R437W。
实施例246.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H68W以及D416V并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S以及R437W。
实施例247.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H68W以及D416V并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S以及R437W。
实施例248.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H68W以及R437W并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S以及D416V。
实施例249.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H68W以及R437W并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S以及D416V。
实施例250.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K176L以及E185P并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例251.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K176L以及E185P并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、I201Y、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例252.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K176L以及I201Y并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、E185P、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例253.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K176L以及I201Y并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、E185P、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例254.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K176L以及H205Y并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、I201Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、E185P、I201Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例255.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K176L以及H205Y并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、I201Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、E185P、I201Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例256.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K176L以及K213T并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、E185P、I201Y、H205Y、Q360S、D416V以及R437W。
实施例257.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K176L以及K213T并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、E185P、I201Y、H205Y、Q360S、D416V以及R437W。
实施例258.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K176L以及Q360S并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、D416V以及R437W。
实施例259.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K176L以及Q360S并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、D416V以及R437W。
实施例260.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K176L以及D416V并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S以及R437W。
实施例261.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K176L以及D416V并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S以及R437W。
实施例262.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K176L以及R437W并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S以及D416V。
实施例263.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K176L以及R437W并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、Q360S以及D416V。
实施例264.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代E185P以及I201Y并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例265.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代E185P以及I201Y并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、H205Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例266.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代E185P以及H205Y并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、I201Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、I201Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例267.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代E185P以及H205Y并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、I201Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、I201Y、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例268.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代E185P以及K213T并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、I201Y、H205Y、Q360S、D416V以及R437W。
实施例269.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代E185P以及K213T并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、I201Y、H205Y、Q360S、D416V以及R437W。
实施例270.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代E185P以及Q360S并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、D416V以及R437W。
实施例271.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代E185P以及Q360S并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、D416V以及R437W。
实施例272.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代E185P以及D416V并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、Q360S以及R437W。
实施例273.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代E185P以及D416V并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、Q360S以及R437W。
实施例274.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代E185P以及R437W并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、Q360S以及D416V。
实施例275.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代E185P以及R437W并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、I201Y、H205Y、K213T、Q360S以及D416V。
实施例276.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代I201Y以及H205Y并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例277.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代I201Y以及H205Y并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、K213T、Q360S、D416V以及R437W。
实施例278.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代I201Y以及K213T并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、H205Y、Q360S、D416V以及R437W。
实施例279.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代I201Y以及K213T并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、H205Y、Q360S、D416V以及R437W。
实施例280.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代I201Y以及Q360S并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、H205Y、K213T、D416V以及R437W。
实施例281.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代I201Y以及Q360S并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、H205Y、K213T、D416V以及R437W。
实施例282.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代I201Y以及D416V并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、H205Y、K213T、Q360S以及R437W。
实施例283.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代I201Y以及D416V并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、H205Y、K213T、Q360S以及R437W。
实施例284.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代I201Y以及R437W并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、H205Y、K213T、Q360S以及D416V。
实施例285.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代I201Y以及R437W并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、H205Y、K213T、Q360S以及D416V。
实施例286.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H205Y以及K213T并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、Q360S、D416V以及R437W。
实施例287.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H205Y以及K213T并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、Q360S、D416V以及R437W。
实施例288.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H205Y以及Q360S并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、K213T、D416V以及R437W。
实施例289.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H205Y以及Q360S并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、K213T、D416V以及R437W。
实施例290.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H205Y以及D416V并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、K213T、Q360S以及R437W。
实施例291.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H205Y以及D416V并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、K213T、Q360S以及R437W。
实施例292.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H205Y以及R437W并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、K213T、Q360S以及D416V。
实施例293.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代H205Y以及R437W并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、K213T、Q360S以及D416V。
实施例294.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K213T以及Q360S并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、D416V以及R437W。
实施例295.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K213T以及Q360S并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、D416V以及R437W。
实施例296.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K213T以及D416V并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、Q360S以及R437W。
实施例297.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K213T以及D416V并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、Q360S以及R437W。
实施例298.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K213T以及R437W并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、Q360S以及D416V。
实施例299.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代K213T以及R437W并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S、D416V以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、Q360S以及D416V。
实施例300.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代Q360S以及D416V并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、R437W以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T以及R437W。
实施例301.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代Q360S以及D416V并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、R437W以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T以及R437W。
实施例302.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代Q360S以及R437W并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T以及D416V。
实施例303.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代Q360S以及R437W并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、D416V以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T以及D416V。
实施例304.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代D416V以及R437W并组合选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S以及H450W，尤其是选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T以及Q360S。
实施例305.如实施例1至37中任一项所述的变体，该变体包括取代D416V以及R437W并组合选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：A1H、A1W、N2H、N2W、H68W、G71W、N126W、H133Y、H142W、P144W、Y156W、Y158W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T、S239A、S239Q、F279W、H316W、L318W、Q360S以及H450W，尤其是选自下组的两个或更多个取代，该组由以下各项组成：H68W、K176L、E185P、I201Y、H205Y、K213T以及Q360S。
实施例306.如实施例1至305中任一项所述的变体，该变体进一步包括在对应于SEQ ID NO:1的位置15、48、49、107、138、156、181、187、188、190、197、209、239、255、264、299、474以及475的任何位置的一个或多个位置处的取代。
实施例307.如实施例306所述的变体，其中该变体包括：
在对应于位置15的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Leu、Ser或Thr进行的取代；
在对应于位置48的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Ala进行的取代；
在对应于位置49的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val，尤其用Gly、His、Ile或Leu进行的取代；
在对应于位置107的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Ala进行的取代；
在对应于位置138的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr或Val，尤其用Phe或Tyr进行的取代；
在对应于位置156的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Tyr进行的取代；
在对应于位置181的位置处用Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Asp、Glu或Thr进行的取代；
在对应于位置187的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Asp进行的取代；
在对应于位置188的位置处用Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Ser或Thr进行的取代；
在对应于位置190的位置处用Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Phe进行的取代；
在对应于位置197的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Ile、Leu、Ser、Thr或Val进行的取代；
在对应于位置209的位置处用Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Val进行的取代；
在对应于位置239的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Ala、Asn、Asp、Gln、Glu、Met或Cys进行的取代；
在对应于位置255的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Gly或Pro进行的取代；
在对应于位置264的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Ser进行的取代；
在对应于位置299的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Arg进行的取代；
在对应于位置474的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Arg、Gln、Glu或Lys进行的取代；或
在对应于位置475的位置处用Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其用Arg、Gln、Glu或Lys进行的取代。
实施例308.如实施例306至307中任一项所述的变体，该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下各项组成：M15T、M15S、M15L、G48A、T49L、T49I、G107A、W138Y、W138F、H156Y、A181T、A181E、A181D、S187D、N188S、N188T、N190F、M197S、M197T、M197V、M197L、M197I、A209V、S239Q、S239E、S239N、S239D、S239A、S239M、S239C、E255P、E255G、Q264S、G299R、G474K、G474R、G474E、G474Q、G475K、G475R、G475E以及G475Q。
实施例309.如实施例1至308中任一项所述的变体，该变体包括或由选自下组的一组取代组成，该组由以下各项组成组成：
A1H+N2W+K176L+E185P、
A1W+N2H+K176L+E185P、
N2H+H68W+H133Y+K176L+E185P、
N2H+H68W+Y156W+K176L+E185P、
N2H+H68W+Y158W+K176L+E185P、
N2H+H68W+K176L+E185P、
N2H+H68W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+D207V+V209D、
N2H+H68W+K176L+E185P+F279W、
N2H+H133Y+K176L+E185P+H316W+R437W、
N2H+H133Y+K176L+E185P+Q360S+R437W、
N2H+H142W+K176L+E185P+H316W+R437W、
N2H+H142W+K176L+E185P+Q360S+R437W、
N2H+P144W+K176L+E185P、
N2H+Y156W+Y158W+K176L+E185P+H316W+R437W、
N2H+Y156W+K176L+E185P+Q360S+R437W、
N2H+Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+D207V+V209D+H316W、
N2H+K176L+E185P、
N2H+K176L+E185P+H316W、
N2H+K176L+E185P+H316W+L318W+R437W、
N2H+K176L+E185P+H316W+Q360S+R437W、
N2H+K176L+E185P+H316W+R437W、
N2H+K176L+E185P+R437W、
N2H+K176L+E185P+Q360S+R437W、
N2H+K176L+E185P+H316W+Q360S+R437W、
N2H+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H68W+K176L+E185P、
H68W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H68W+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
G71W+K176L+E185P、
N126W+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H133Y+Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H133Y+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H142W+Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H142W+K176L+E185P、
H142W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
H142W+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
P144W+K176L+E185P、
Y156W+Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
Y156W+Y158W+K176L+E185P+H316W+R437W、
Y156W+K176L+E185P+Q360S+R437W、
Y156W+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
Y158W+K176L+E185P、
Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+D207V+V209D+H316W、
Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+H316L+L318W+Q360S+D416V+R437W、
Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+H316W+Q360S+D416V+R437W、
Y158W+K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
Y158W+K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
K176L+E185P、
K176L+E185P+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
K176L+E185P+I201Y+H205Y+R437W、
K176L+E185P+F279W、
K176L+E185P+H316W、
K176L+E185P+L318W、
K176L+E185P+H450W、
K176L+I201Y+H205Y+K213T+S239Q+Q360S+D416V+R437W、
K176L+I201Y+H205Y+K213T+H316W+Q360S+D416V+R437W、
K176L+I201Y+H205Y+K213T+L318W+Q360S+D416V+R437W、
K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
K176L+I201Y+H205Y+K213T+Q360S+R437W、
K176L+I201Y+H205Y+K213T+D416V+R437W，以及
K176L+I201Y+H205Y+Q360S+D416V+R437W。
实施例310.如实施例1至309中任一项所述的变体，该变体进一步包括直接在SEQID NO:1的位置180之前的两个位置处的缺失。
实施例311.如实施例1-310中任一项所述的变体，其中取代的总数是2-20，例如，2-10或2-5，如2、3、4、5、6、7、8、9或10个取代。
实施例312.如实施例1至311中任一项所述的变体，该变体与SEQ ID NO:1的成熟多肽相比，在高温、低钙以及低pH下、在存在至少0.1%淀粉的情况下、例如在存在0.9%或1%淀粉的情况下孵育时，具有增加的热稳定性。
实施例313.如实施例1至311中任一项所述的变体，该变体与SEQ ID NO:14的成熟多肽相比，在高温、低钙以及低pH下、在存在至少0.1%淀粉的情况下、例如在存在0.9%或1%淀粉的情况下孵育时，具有增加的热稳定性。
实施例314.如实施例1至311中任一项所述的变体，该变体与其亲本相比，在高温、低钙以及低pH下、在存在至少0.1%淀粉的情况下、例如在存在0.9%或1%淀粉的情况下孵育时，具有增加的热稳定性。
实施例315.如实施例1至311中任一项所述的变体，该变体与SEQ ID NO:1的成熟多肽相比，在95℃以及pH4.8下与0.125mM CaCl2、0.9%淀粉一起孵育时，具有增加的残余活性半衰期。
实施例316.如实施例1至311中任一项所述的变体，该变体与SEQ ID NO:14的成熟多肽相比，在95℃以及pH4.8下与0.125mM CaCl2、0.9%淀粉一起孵育时，具有增加的残余活性半衰期。
实施例317.如实施例1至311中任一项所述的变体，该变体与其亲本相比，在95℃以及pH4.8下与0.125mM CaCl2、0.9%淀粉一起孵育时，具有增加的残余活性半衰期。
实施例318.如实施例1至311中任一项所述的变体，该变体与SEQ IDNO:1的成熟多肽相比，在95℃以及pH4.5下与0.125mM CaCl2、0.9%淀粉一起孵育时，具有增加的残余活性半衰期。
实施例319.如实施例1至311中任一项所述的变体，该变体与SEQ IDNO:14的成熟多肽相比，在95℃以及pH4.5下与0.125mM CaCl2、0.9%淀粉一起孵育时，具有增加的残余活性半衰期。
实施例320.如实施例1至311中任一项所述的变体，该变体与其亲本相比，在95℃以及pH4.5下与0.125mM CaCl2、0.9%淀粉一起孵育时，具有增加的残余活性半衰期。
实施例321.一种包含如实施例1至320中任一项的变体以及表面活性剂的洗涤剂组合物。
实施例322.一种包含如实施例1至320中任一项所述的变体以及一种或多种酶的组合物，这些酶选自下组，该组由以下各项组成：β-淀粉酶、纤维素酶（β-葡萄糖苷酶、纤维二糖水解酶以及内切葡聚糖酶）、葡糖淀粉酶、半纤维素酶（例如，木聚糖酶）、异淀粉酶、异构酶、脂肪酶、植酸酶、蛋白酶以及普鲁兰酶。
实施例323.如实施例1至320中任一项所述的变体用于洗涤和/或洗碗的用途。
实施例324.如实施例1至320中任一项所述的变体用于使纺织品退浆的用途。
实施例325.如实施例1至320中任一项所述的变体用于产生烘焙产物的用途。
实施例326.如实施例1至320中任一项所述的变体用于液化含淀粉的材料的用途。
实施例327.一种生产液化淀粉的方法，该方法包括用如实施例1至320中任一项所述的变体来液化一种含淀粉的材料。
实施例328.一种生产发酵产物的方法，该方法包括
(a)用如实施例1至320中任一项所述的变体来液化一种含淀粉的材料，以产生一种液化醪液；
(b)将该液化醪液糖化，以产生可发酵的糖；并且
(c)使这些可发酵的糖在一种发酵生物存在下发酵。
实施例329.如实施例328所述的方法，其中步骤(a)在pH4-5下进行。
实施例330.一种生产发酵产物的方法，该方法包括将一种淀粉底物与如实施例1至320中任一项所述的变体、一种葡糖淀粉酶以及一种发酵生物接触。
实施例331.一种编码如实施例1至320中任一项所述的变体的分离的多核苷酸。
实施例332.一种包含如实施例331所述的多核苷酸的核酸构建体。
实施例333.一种包含如实施例331所述的多核苷酸的表达载体。
实施例334.一种包含如实施例331所述的多核苷酸的宿主细胞。
实施例335.一种生产一种α-淀粉酶变体的方法，包括：
a.在适合于表达该变体的条件下培养如实施例334所述的宿主细胞；并且
b.回收该变体。
实施例336.一种用于获得α-淀粉酶变体的方法，该方法包括(a)向亲本α-淀粉酶中引入在对应于SEQ ID NO:1的位置1、2、68、71、126、133、142、144、156、158、176、185、201、205、213、239、279、316、318、360、416、437以及450中的任何位置的一个或多个位置处的取代；并且(b)回收该变体。
本发明进一步通过以下实例进行描述，这些实例不应被解释成限制本发明的范围。
实例
测量淀粉分解活性（α-淀粉酶活性）的测定
PNP-G7测定：
α-淀粉酶活性通过使用PNP-G7底物的方法来确定。PNP-G7是4,6-亚乙基(G7)-p-硝基苯基(G1)-α,D-麦芽七糖苷的缩写，它是可由内淀粉酶如α-淀粉酶切割的一种嵌段低聚糖。切割之后，试剂盒中所包括的α-葡萄糖苷酶进一步消化水解底物以释放自由PNP分子，该分子具有黄颜色并且因而可通过可见分光光度法在λ=405nm（400-420nm）下测量。含有PNP-G7底物以及α-葡萄糖苷酶的试剂盒由罗氏/日立（Roche/Hitachi）（目录号11876473）制造。试剂：
来自此试剂盒的G7-PNP底物含有22mM4,6-亚乙基-G7-PNP以及52.4mM HEPES（2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]-乙磺酸），pH7.0。
α-葡萄糖苷酶试剂含有52.4mM HEPES、87mM NaCl、12.6mM MgCl2、0.075mM CaCl2、>4kU/Lα-葡萄糖苷酶。
通过将1mlα-葡萄糖苷酶试剂与0.2ml G7-PNP底物混合来制成底物工作溶液。此底物工作溶液在使用之前立即制成。
稀释缓冲液：50mM EPPS、0.01%（w/v）Triton X100（聚乙二醇p-(1,1,3,3-四甲基丁基)-苯基醚（C14H22O(C2H4O)n（n=9-10）））、1mM CaCl2，pH7.0。过程：
将有待分析的淀粉酶样品稀释于稀释缓冲液中以确保稀释样品中的pH是7。将20μl稀释酶样品转移至96孔微量滴定板并且添加80μl底物工作溶液来进行测定。将溶液混合并且在室温预孵育1分钟并且在OD405nm下在5分钟内每20秒测量吸收。
在一组给定条件下，时间相关吸收曲线的斜率（每分钟的吸光度）与所讨论的α-淀粉酶的比活性（活性/mg酶）成正比例。淀粉酶样品应稀释至其中斜率低于0.4吸光度单位/分钟的水平。
Phadebas活性测定：
α-淀粉酶活性还可通过使用Phadebas底物（例如来自麦戈尔生命科学（MagleLife Sciences），隆德（Lund），瑞典（Sweden））的方法来确定。Phadebas片剂包括互联淀粉聚合物，这些聚合物呈不溶于水的球状微球形式。将一种蓝色染料共价结合至这些微球。微球中的互联淀粉聚合物以与α-淀粉酶活性成比例的速度降解。当α-淀粉酶降解了淀粉聚合物时，释放的蓝色染料是可溶于水的并且染料浓度可通过在620nm下测量吸光度来确定。蓝色的浓度与样品中的α-淀粉酶活性成比例。
将有待分析的淀粉酶样品稀释于具有所需pH的稀释缓冲液中。将一个底物片剂悬浮于5mL活性缓冲液中并且在磁力搅拌器上混合。在混合底物期间，将150μl转移至微量滴定板（MTP）或PCR-MTP。将30μl稀释淀粉酶样品添加至150μl底物并且混合。37℃下孵育15分钟。通过添加30μl1M NaOH并且混合来停止反应。在4000x g下离心MTP5分钟。将100μl转移至新MTP并且测量620nm下的吸光度。
淀粉酶样品应稀释以使得620nm下的吸光度在0与2.2之间。
测定：
为了确定残余淀粉酶活性，使用Ultra淀粉酶测定试剂盒（E33651，英杰公司（Invitrogen），拉霍亚（La Jolla），加州（CA），美国（USA））。
底物是一种玉米淀粉衍生物，DQTM淀粉，它是用FL染料标记以使得荧光被淬灭的玉米淀粉。含有大约1mg冻干底物的一个小瓶溶解于100微升50mM乙酸钠（pH4.0）中。将小瓶涡旋20秒并且在室温下、黑暗中保持，并偶尔混合直到溶解为止。然后添加900微升100mM乙酸盐、0.01%（w/v）X100、0.125mM CaCl2，pH5.5，充分涡旋并且在室温下、黑暗中储存直到准备使用为止。通过以10倍稀释于残余活性缓冲液（100mM乙酸盐、0.01%（w/v）X100、0.125mM CaCl2，pH5.5）中来制备储备底物工作溶液。孵育之后立即将酶在100mM乙酸盐、0.01%（W/v）X100、0.125mM CaCl2，pH5.5中稀释至10-20ng酶类蛋白质/ml的浓度。
为了测定，在一个黑色384孔微量滴定板中，将25微升底物工作溶液与25微升稀释酶混合10秒。在每个孔中在25℃于15分钟内每分钟测量荧光强度（激发：485nm，发射：555nm）并且将Vmax计算作为荧光强度相对于时间的曲线的斜率。曲线应是线性的，并且调整了残余活性测定以使得稀释参考酶溶液在活性测定的线性范围内。
参考α-淀粉酶及其变体
参考α-淀粉酶是LE399（以前在例如WO2002/010355中披露）。LE399包括来自解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶（SEQ ID NO:6）的氨基酸1-37以及来自地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶（SEQ ID NO:1）的氨基酸40-483，其中具有以下取代G48A T49I G107A H156Y A181T N190FI201F A209V Q264S。
所测试的变体是LE399的变体，因此如下表中列出的每个变体的取代是与LE399相比的取代。位置编号是根据SEQ ID NO:1。
LE399在N-末端中比SEQ ID NO:1短两个氨基酸，即在LE399中，没有对应于SEQ IDNO:1的位置1和2的氨基酸。表中表示为*2aH的改变是指在LE399的N-末端V之前插入H。SEQID NO:1中的类似改变是氨基酸N2用H来取代，即N2H（或者，缺失氨基酸A1并组合氨基酸N2用H取代，即A1*N2H）。同样地，表中表示为*2aH*2bW的改变是指在VLE399的N-末端之前插入HW。SEQ ID NO:1中的类似改变是取代A1H N2W。
实例1
α-淀粉酶变体与0.9%淀粉在pH4.5下的热稳定性
确定一种参考α-淀粉酶及其α-淀粉酶变体的热稳定性，方法是通过将参考α-淀粉酶以及变体在pH4.5以及90℃或95℃的温度下与0.125mM CaCl2以及0.9%淀粉（玉米淀粉）一起孵育，随后使用底物（Ultra淀粉酶测定试剂盒，E33651，分子探针（Molecular Probes））来确定残余活性。
使纯化的酶样品在酶稀释缓冲液（10mM乙酸盐、0.01%Triton X100、0.125mMCaCl2，pH5.0）中稀释至5和10ppm（微克/毫升）的工作浓度。将二十微升酶样品转移至96孔PCR MTP并且将180微升稳定性缓冲液（150mM乙酸盐、0.01%Triton X100、0.125mM CaCl2，pH4.5，+/-0.9%淀粉）添加至每个孔并且混合。测定是使用两种浓度的酶来重复两次进行。在90℃或95℃孵育之前，取出20微升并且储存在冰上作为无应力的对照样品。孵育是在PCR机器（pH4.5，90℃/95℃，0.125mM CaCl2，+/-0.9%淀粉）上进行。选择孵育时间（分钟）以使得残余活性在6%-84%之间。如果残余活性在此区间以外，那么它由>或<来指示。
孵育之后，将样品在残余活性缓冲液（100mM乙酸盐、0.01%TritonX100、0.125mMCaCl2，pH5.5）中稀释至10-20ng酶类蛋白质/ml并且将25微升稀释酶转移至黑色384孔MTP。使用底物通过将25微升底物溶液（100微克/毫升）添加至每个孔来确定残余活性。使用485-P nm下的激发滤光器以及555nm下的发射滤光器（荧光读取器是Polarstar，BMG）在25℃于15分钟内每分钟测定荧光。对于每个设置，将残余活性相对于无应力的对照样品标准化。
假定指数式衰减，那么使用方程T1/2(min)=T(min)*LN(0.5)/LN(%RA/100)来计算半衰期时间（T1/2(min)），其中T是以分钟为单位的测定孵育时间，并且%RA是在测定中确定的%残余活性。
使用此测定设置，半衰期时间被测定作为参考α-淀粉酶及其变体的热稳定性的度量，如表1和2中所示。
参考淀粉酶在pH4.5、0.125mM CaCl2、+/-0.9%淀粉下、在90℃下孵育5分钟（表1）。
表1
pH4.5，0.125mM CaCl2，90℃，持续5或15分钟，在0.9%淀粉中
pH4.5，0.125mM CaCl2，90℃，在缓冲液中，持续5或8分钟
表2
pH4.5，0.125mM CaCl2，95℃，在0.9%淀粉中，持续30或50分钟
pH4.5，0.125mM CaCl2，95℃，在缓冲液中，持续30分钟
实例2
α-淀粉酶变体与0.9%淀粉在pH4.8下的热稳定性
确定一种参考α-淀粉酶及其α-淀粉酶变体的热稳定性，方法是通过将参考α-淀粉酶以及变体在pH4.8以及90℃或95℃的温度下与0.125mM CaCl2+/-0.9%淀粉（玉米淀粉）一起孵育，随后使用底物（Ultra淀粉酶测定试剂盒，E33651，分子探针（Molecular Probes））来确定残余活性。
使纯化的酶样品在酶稀释缓冲液（10mM乙酸盐、0.01%Triton X100、0.125mMCaCl2，pH5.0）中稀释至5和10ppm（微克/毫升）的工作浓度。将二十微升酶样品转移至96孔PCR MTP并且将180微升稳定性缓冲液（150mM乙酸盐、0.01%Triton X100、0.125mM CaCl2，pH4.8，+/-0.9%淀粉）添加至每个孔并且混合。测定使用两种浓度的酶来重复两次进行。在90℃或95℃孵育之前，取出20微升并且储存在冰上作为无应力的对照样品。孵育在PCR机器（pH4.8，90℃/95℃，0.125mM CaCl2，+/-0.9%淀粉）上进行。选择孵育时间（分钟）以使得残余活性在6%-84%之间。如果残余活性在此区间以外，那么它由>或<来指示。
孵育之后，将样品在残余活性缓冲液（100mM乙酸盐、0.01%TritonX100、0.125mMCaCl2，pH5.5）中稀释至10-20ng酶类蛋白质/ml并且将25微升稀释酶转移至黑色384孔MTP。使用底物通过将25微升底物溶液（100微克/毫升）添加至每个孔来确定残余活性。使用485-P nm下的激发滤光器以及555nm下的发射滤光器（荧光读取器是Polarstar，BMG）在25℃于15分钟内每分钟测定荧光。对于每个设置，将残余活性相对于无应力的对照样品标准化。
假定指数式衰减，那么使用方程T1/2(min)=T(min)*LN(0.5)/LN(%RA/100)来计算半衰期时间（T1/2(min)），其中T是以分钟为单位的测定孵育时间，并且%RA是在测定中确定的%残余活性。
使用此测定设置，半衰期时间被测定作为参考α-淀粉酶及其变体的热稳定性的度量，如表3至5中所示。
表3
条件：
pH4.8，0.125mM CaCl2，95℃，在0.9%淀粉中，持续8分钟
pH4.8，0.125mM CaCl2，90℃在缓冲液中，持续12分钟
表4
条件：
pH4.8，0.125mM CaCl2，90℃，在0.9%淀粉中，持续90分钟
pH4.8，0.125mM CaCl2，90℃在缓冲液中，持续40分钟
表5
条件：
pH4.8，0.125mM CaCl2，95℃，在0.9%淀粉中，持续40、70或90分钟
pH4.8，0.125mM CaCl2，95℃在缓冲液中，持续15或50分钟
实例3
α-淀粉酶变体在pH4.5下的改进的液化性能
建立中试规模液化以实现淀粉液化，并且建立新铜试剂（Neocuproine）测定以测量葡萄糖当量（DE），从而评估液化性能。
在罐中制备具有最终5.5ppm钙浓度以及34%-35%干固体含量（DS）的淀粉浆液。
淀粉浆液的制备：
将大约60L蒸馏水添加至200L浆液罐。接通搅拌器并且启动集尘系统以用于移除淀粉细粉。将两袋50-lb的淀粉（90.39%DS）添加至搅拌用水。添加所有淀粉之后，使用一个搅拌桨来使沉淀的淀粉移动并且保持整个浆液混合。浆液混合物的密度用比重计在2L量筒中测量。逐步添加蒸馏水使密度降低至近似1.155g/mL，接近35%DS。
将pH以及电导率探针浸没在混合浆液中。用1M HCl或2M NaOH将pH调整至pH4.5（变体）或pH5.5（Liquozyme X）。淀粉含有16ppm钙，因而浆液中的最终钙浓度是5.5ppm以及34%-35%DS。电导率为约250μS/cm。
仅在使浆液流经喷射器之前，添加适当剂量的酶。
变体以4.69微克/克DS来给予并且Liquozyme X（参考）以75NU(T)/g DS来给予：
具有已知活性（KNU(T)/g）的酶按NU(T)/g DS来给予（稀释度是重量/体积）：
具有已知蛋白质浓度（ug EP/mL）的酶按ug酶类蛋白质/g DS来给予（稀释度是体积/体积）：
将浆液泵送至喷射器并且在约105℃下保持5分钟以作为初级液化。10分钟（近似2个保留时间）之后，获得样品。
然后，在95℃-97℃下将液化淀粉转移至油浴持续另外15、30、45、60、75以及90分钟以作为次级液化。
初级液化以及次级液化之后，将淀粉水解至麦芽糊精中，在此期间释放出还原糖。
铜离子被还原糖还原并且与新铜试剂反应形成一种有色的复合物，该复合物给出液化物中还原糖的含量。将此值作为葡萄糖当量（DE）报告，以作为液化度的指示。DE值越高，实现的液化越先进。
通过添加近似250mL DDI水以及400μl1M HCl来制备每个样品的容量瓶（500mL）。对于每个液化样品，将烧瓶称皮重并且将近似0.50g样品添加至烧瓶，记录重量。根据RI分析，确定90min样品的固体含量。重复两次进行DE测量。
用DDI水使烧瓶达到适当体积并且添加搅拌棒。在倒转多次来混合之后，将烧瓶放置在多点磁性搅拌板上。
葡萄糖当量（DE）的方法
如下所述来测定葡萄糖当量（DE）。
将来自烧瓶的200μl上述样品放置于15ml锥形管中。分别添加0.8ml试剂A和B（根据以下编写的组成来制成）。
试剂A：
在量瓶中，将40g Na2CO3、16g甘氨酸、0.45g CuSO4.5H2O添加至800mlMQ水并且将最终体积补足至1000ml。等分至多个50ml管中并且包裹于铝箔中并保持于黑暗中。
试剂B：
将1.2g新铜试剂添加至1000ml MQ水。等分至多个50ml管中并且包裹在铝箔中并保持于黑暗中。
对于标准以及空白（仅水）也进行类似添加。将它们全部放在烧瓶座中。煮沸样品12分钟。通过将所有样品放置于冰水上来即可停止反应。冷却样品之后，添加3.2ml Milli-Q水。混合样品之后，在450nm下测量OD，从葡萄糖标准的OD读数来建立标准曲线。
标准曲线的斜率以及截距用于计算液化样品的还原端浓度。标准曲线的R2用于评估DE方法的质量。空白用于确定新铜试剂是否需要更换。
所有吸光度通过减去空白来校正：
从校准曲线来计算样品中的糊精还原端的浓度。通过对DE12表进行内插将RI值转化成当量%DS。计算样品DE：
表6中的结果显示与pH5.5下的Liquozyme X相比，所有变体在pH4.5下给出更高平均DE值，表明了更有效并且更先进的液化。
表6
与pH5.5下的Liquozyme X（参考）相比，在约250μS/cm、5.5ppm钙以及34%-35%DS下，pH4.5下的α-淀粉酶变体的改进的葡萄糖当量（DE）。所有变体是Liquozyme X的变体。所有结果是至少两个测定的平均值。
实例4
在pH4.5以及pH4.8下的α-淀粉酶变体的改进的小规模液化性能
建立小规模液化测定以实现淀粉液化，并且建立新铜试剂测定以测量葡萄糖当量（DE），从而评估液化性能。
称取低钙淀粉（90.32%DS）并且与DDI水混合以制备33.25%DS的40g浆液。添加钙以使得总钙含量是5ppm（5mg/L）。假设一种稀释酶以及CaCl2密度1.0g/mL，此体积计算如下：
随后添加酶。假设酶密度是1.0g/mL：
具有已知活性（KNU(T)/g）的酶按NU(T)/g DS来给予：
具有已知蛋白质浓度（μg EP/mL）的酶按ug酶类蛋白质/g DS来给予：
经常，酶添加将使pH升高大约0.1。淀粉浆液的初始pH接近4.78。必要时用1M HCl将pH调整至pH4.8或用NaOH调整至pH4.5。电导率用1M NaCl调整至200μS/cm。最后，添加DDI水以使得浆液的最终固体含量是32%。然后使用中继吸移管（repeater pipette）将3.3mL淀粉浆液等分至每个小瓶。将小瓶加盖并且安置于JKem振荡器（shaker block）中。
在约12分钟内，将振荡器加热至初级步骤的目标温度。将小瓶同时安置于加热器中并且开始振荡。淀粉浆液用时1分钟达到105.5℃的目标温度。6分钟之后，手动开启阀以允许冷却液穿过加热器使温度降低至95℃并且将温度控制器调整至95℃。淀粉浆液中的该温度用时约1分钟来在次级液化步骤中稳定。反应在95℃下继续90分钟。每15分钟移除一个小瓶以进行DE测量，如上所述。
表7
在小规模液化测定中，在pH4.8、200μS/cm、5ppm钙以及4.69μg酶类蛋白质/g DS的酶剂量下，与Liquozyme X（参考）相比，变体的改进的葡萄糖当量（DE）。所有变体是Liquozyme X的变体。所有结果是至少两个测定的平均值。
表8
在小规模液化测定中，在pH4.8、200μS/cm、5ppm钙以及3.127μg酶类蛋白质/g DS的酶剂量下，与Liquozyme X（参考）相比，变体的改进的葡萄糖当量（DE）。所有变体是Liquozyme X的变体。所有结果是至少两个测定的平均值。
表9
在小规模液化测定中，在pH4.5、200μS/cm、5ppm钙以及4.69μg酶类蛋白质/g DS的酶剂量下，与Liquozyme X（参考）相比，变体的改进的葡萄糖当量（DE）。所有变体是Liquozyme X的变体。所有结果是至少两个测定的平均值。
在此描述的和要求的本发明并非是要用在此公开的特定方案来限定范围，因为这些方案的用意是要作为本发明若干方面的说明。任何等效的方案都旨在处于本发明的范围之内。实际上，除了本文显示和描述的那些，根据前面的描述，本发明的多种修改对于本领域技术人员是显而易见的。这些修改也意在属于所附权利要求的范围内。当出现冲突时，将以本公开内容（包括定义）为准。

Claims (17)

1.一种α-淀粉酶变体，在对应于SEQ ID NO:1的位置，与SEQ ID NO:14的成熟多肽或SEQ ID NO:14的氨基酸1至481相比，其氨基酸改变选自下组：
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W、
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+H133Y、
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+S239Q、
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+H316W、
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+L318W、
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+*2aH、
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+N126W、
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+H68W、
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+Y158W、
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+Y156W、
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+H142W、
*2aHY+158W+K176L+E185P+F201Y+H205Y+D207V+V209D+H316W、
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+E185P、
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+E185P+H142W、
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+E185P+H68W、
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+E185P+Y158W+H133Y、
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+E185P+Y158W+H142W、
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+E185P+Y158W+Y156W、
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+E185P+Y158W+H316W、
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+E185P+Y158W+H316L+L318W、
*2aH+H68W+K176L+E185P+F201Y+H205Y+D207V+V209D，以及
K176L+F201Y+H205Y+K213T+Q360S+D416V+R437W+E185P+Y158W。
2.一种包含根据权利要求1所述的变体以及表面活性剂的洗涤剂组合物。
3.一种包含根据权利要求1所述的变体以及一种或多种酶的组合物，这些酶选自下组，该组由以下各项组成：β-淀粉酶、纤维素酶、葡糖淀粉酶、半纤维素酶、异淀粉酶、异构酶、脂肪酶、植酸酶、蛋白酶以及普鲁兰酶。
4.一种权利要求3所述的组合物，其中所述纤维素酶是β-葡萄糖苷酶、纤维二糖水解酶或内切葡聚糖酶。
5.根据权利要求1所述的变体用于洗涤和/或洗碗的用途。
6.根据权利要求1所述的变体用于使纺织品退浆的用途。
7.根据权利要求1所述的变体用于产生烘焙产物的用途。
8.根据权利要求1所述的变体用于液化含淀粉的材料的用途。
9.一种生产液化淀粉的方法，该方法包括用根据权利要求1所述的变体来液化一种含淀粉的材料。
10.一种生产发酵产物的方法，该方法包括
(a)用根据权利要求1所述的变体来液化一种含淀粉的材料，以产生一种液化醪液；
(b)将该液化醪液糖化，以产生可发酵的糖；并且
(c)使这些可发酵的糖在一种发酵生物存在下发酵。
11.根据权利要求10所述的方法，其中步骤(a)在pH 4-5下进行。
12.一种生产发酵产物的方法，该方法包括将一种淀粉底物与根据权利要求1所述的变体、一种葡糖淀粉酶以及一种发酵生物接触。
13.一种编码根据权利要求1所述的变体的分离的多核苷酸。
14.一种包含根据权利要求13所述的多核苷酸的核酸构建体。
15.一种包含根据权利要求13所述的多核苷酸的表达载体。
16.一种包含根据权利要求13所述的多核苷酸的宿主细胞。
17.一种生产一种α-淀粉酶变体的方法，包括：
a.在适合于表达该变体的条件下培养根据权利要求16所述的宿主细胞；并且
b.回收该变体。
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Application publication date: 20140625

Assignee: Novoxin (China) Investment Co., Ltd.

Assignor: Novo Nordisk A/S

Contract record no.: 2019990000173

Denomination of invention: Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same

Granted publication date: 20180202

License type: Common License

Record date: 20190528

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