CN103884825A - 一种防治稻纹枯病药物的药效测定方法 - Google Patents
一种防治稻纹枯病药物的药效测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103884825A CN103884825A CN201410133494.0A CN201410133494A CN103884825A CN 103884825 A CN103884825 A CN 103884825A CN 201410133494 A CN201410133494 A CN 201410133494A CN 103884825 A CN103884825 A CN 103884825A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- medicine
- rice
- pesticide
- blade
- leaf
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 title claims abstract description 45
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 title claims abstract description 45
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims abstract description 32
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 title abstract 3
- 230000000361 pesticidal effect Effects 0.000 title abstract 3
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 title 1
- 241000209094 Oryza Species 0.000 claims abstract description 47
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 47
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 34
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims abstract description 18
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 76
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 28
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 claims description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 14
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 12
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 claims description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 6
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 6
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 4
- 241000612118 Samolus valerandi Species 0.000 claims description 3
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 3
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 claims description 3
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 claims description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 3
- 238000007747 plating Methods 0.000 claims description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 3
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 9
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 abstract 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 abstract 2
- 229920003266 Leaf® Polymers 0.000 description 29
- TWFZGCMQGLPBSX-UHFFFAOYSA-N carbendazim Chemical compound C1=CC=C2NC(NC(=O)OC)=NC2=C1 TWFZGCMQGLPBSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 12
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 239000005822 Propiconazole Substances 0.000 description 7
- STJLVHWMYQXCPB-UHFFFAOYSA-N propiconazole Chemical compound O1C(CCC)COC1(C=1C(=CC(Cl)=CC=1)Cl)CN1N=CN=C1 STJLVHWMYQXCPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 240000006677 Vicia faba Species 0.000 description 6
- 235000010749 Vicia faba Nutrition 0.000 description 6
- 235000002098 Vicia faba var. major Nutrition 0.000 description 6
- 239000006013 carbendazim Substances 0.000 description 6
- 241000813090 Rhizoctonia solani Species 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 3
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 241000243251 Hydra Species 0.000 description 1
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005372 Plexiglas® Polymers 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000004568 cement Substances 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 239000004495 emulsifiable concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- QRXWMOHMRWLFEY-UHFFFAOYSA-N isoniazide Chemical group NNC(=O)C1=CC=NC=C1 QRXWMOHMRWLFEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 208000037920 primary disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011112 process operation Methods 0.000 description 1
- 230000002787 reinforcement Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
Abstract
本发明公开了一种防治稻纹枯病药物的药效测定方法,利用一组简单便利的器具,在离体水稻叶片上测定药物对稻纹枯病发病的防治效果,该方法的步骤如下:1)水稻叶片的培育准备;2)器具准备;3)病菌的培养准备;4)防治药物的配备;5)测定用离体叶片的准备;6)药物施用;7)接种病菌;8)施药后或接种后的处置。本发明的优点是:1)接种发病较为稳定一致;药效结果重现性好,且查录容易量化;测试耗时短。2)可避免出现有效药物的漏选。3)离体叶片采样方便;室内操作;便于跟踪药物在发病扩展过程中的作用;测定过程操作简单易行,且局部条件控制方便;容易实现测定方法的标准化。
Description
技术领域
本发明涉及农业技术和生物技术。具体是一种防治稻纹枯病药物的药效测定方法。
背景技术
稻纹枯病是水稻的首要病害,每年可引起我国60亿多公斤的稻粮损失,由于与该病害防病控害有关的许多基础研究滞后,当前及相当一段时期内,该病害的防治仍主要依赖农药防治;当前的防治药剂主要是井冈霉素,由于用药单一,且井冈霉素与人类医学用抗菌素密切有关,因此生产上需要寻找替代药物和更多的可用药物;那么,加快加强防治药物的筛选鉴定显得非常必要;而高效便捷的测定方法对筛选鉴定工作无疑很有益。
根据药效测定时,药物作用对象病原菌所处的背景条件,药效测定方法可有如下3类主要方法:培养基生物测定法、活体植株测定法、和组织测定法。培养基生物测定法在培养基上测定药物对病原菌的抑制作用,该方法的严重不足是会漏选有效药物;活体植株测定法是在活体植物上测定药物对病害的作用效果,该方法的突出弊病是,费时耗力、及试验条件难控等;组织测定法是在离体的植物器官组织上测定药物对病害的作用效果,该方法可克服前面2类方法的弊病,因而成了近年备受重视的药效测定方法。
在稻纹枯病的药物筛选中,已有2种较为成熟的组织测定法,即离体蚕豆叶测定法和离体水稻叶鞘测定法,前者以离体蚕豆叶片为组织材料,测定药物对稻纹枯病菌侵染离体蚕豆叶片的防治效果,后者以离体水稻叶鞘为组织材料,测定药物对稻纹枯病菌侵染离体水稻叶鞘的防治效果。实际应用中,两者都存在某些弊病。
蚕豆叶测定法仍有可能漏选那些在蚕豆上无效、而在水稻上有效的药物,而且蚕豆叶较小,不利于进行药物的作用过程跟踪。水稻叶鞘测定法中,由于水稻各叶鞘属于外叶鞘包内叶鞘并相互环抱式生长,试验中取材叶鞘不够方便;接种发病的均匀性和稳定性欠佳等。
发明内容
本发明的目的是提供一种便捷的防治稻纹枯病药物的药效测定方法。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下:
一种防治稻纹枯病药物的药效测定方法,依据稻纹枯病菌也能侵染水稻离体叶片,且发病较为均匀和稳定的特性,利用一组简单便利的器具,进行离体叶片的接种发病和药物处理,测定药物对稻纹枯病发病的防治效果,测定方法的步骤如下:
1.水稻叶片的培育准备:按一般方法种植水稻植株,常规水肥管理,培育至6叶期后使用。
2.主要器具准备:主要器具包括大方盘、小方盘、玻璃罩、和玻璃板;用洁净剂将这些器具洗涤干净后备用。
3.病菌的培养准备:将测定用的病菌菌株移植到PSA平板培养基上,PSA培养基为:马铃薯200g、蔗糖20g、琼脂20g和水1000ml。在温度30℃条件下培养至菌落刚长满平板,取直径为6mm打孔器在平板菌落外周打取大小一致的菌丝琼脂圆块,以此菌丝块作为接种测定用的接种体。
4.防治药物的配备:用清水将防治药物溶解或稀释,并将有效成分调配成需要测定的浓度,并以空白清水作无药处理对照(CK)。
5.测定用离体叶片的准备:用干净剪刀采集步骤1准备的水稻植株上完全展开的正常叶片,置入盛装清水的干净容器中带回室内。取出步骤2备好的组件,将小方盘置于大方盘内的中间,取2个干净的普通橡皮筋分别套在玻璃板的上下两头,并将玻璃板置于小方盘内架成稳定的倾斜状态,然后往小方盘内注入清水。将采回的叶片基部朝下,平行插摆于玻璃板与橡皮筋之间,橡皮筋将叶片的两端夹稳,叶片基端插入小方盘内的清水层内,剪除超出玻璃板上缘的叶片尾部。
6.药物施用:用喷雾器将步骤4配备的待测药液喷到步骤5备好的叶片上,直至叶片上均匀布满雾滴为止。
7.接种病菌:用干净镊子挑取步骤3准备的菌丝块贴放于步骤5准备好的离体叶片上。
8.施药后或接种后的处置:取玻璃罩将小方盘以及盘内的离体叶片全部罩在大方盘上,并往大方盘内注入清水,使玻璃罩内部封闭并形成罩内稳定的高湿状态;然后将整套装置放于具备正常散射光的普通室内培养,培养温度维持在在26℃±1℃波动范围。
9.变动实施步骤测定药物防治效果的作用方式:通过改变步骤6与步骤7实施的先后次序,能实现测定药物对病害的防治作用方式,如下:
A.先实施步骤6再到步骤7;或先操作步骤7,在菌丝生长侵染之前操作步骤6;结果能体现药物防治的保护作用。
B.先实施步骤7,培养24小时发病后,再实施步骤6,结果能体现药物防治的治疗作用。
结果观察调查:一般接种病菌24小时后,无药物的对照处理出现清晰稳定的发病反应,有防治作用的药物处理,与对照处理相比发病程度减轻或不发病;发病程度可用病斑高度(或称病斑长度)的指标来衡量,病斑高度是指从接种点到病斑最前沿的距离;通过量化指标计算药物的防治效果(药效)。
防治效果(%)=(对照处理的病斑高度-药物处理的病斑高度)×100/对照处理的病斑高度
本发明的优点是:
1)接种发病较为稳定一致;药效表现直观清晰,结果重现性好,且查录容易量化。
2)可避免出现有效药物的漏选。
3)采用较长的叶片,便于跟踪药物在发病扩展过程中的作用。
4)测试耗时短,一般比叶鞘测定法提前1~2天。
6)离体叶片采样方便,测定过程操作简单易行。
7)室内操作,占空间少,局部条件控制方便,容易实现测定方法的标准化。
附图说明
图1是本发明药效测定用的配套器具。
图中,大方盘a,小方盘b,玻璃板c,玻璃罩d。
A图是用小金属片把玻璃板c临时架成稳定的倾斜状态;B图是不用金属片而直接用玻璃胶和一小块玻璃将玻璃板c粘接成固定的倾斜状态;C图是用玻璃罩d将小方盘b以及盘上的玻璃板c罩在大方盘a上的侧面观;D图是在C图的玻璃板c上放置水稻叶片后的正面观。
图2是本发明在配套器具中的玻璃板上放置离体叶片及接种病菌后的正面观。
图3是本发明药效测定结果示意图。
图中,A图是无药物处理的对照发病表现;B图是无药物处理和未接种病菌的空白对照;C图是施药处理的叶片发病轻的表现;D图是施药处理的叶片不发病的表现。
具体实施方式
下面结合附图与实施例对本发明作进一步描述。
本发明利用稻纹枯病菌可侵染离体水稻叶片发病的特性,使用一组便利的配套器具,在离体稻叶上测试防治药物对病菌侵染致病的防治作用。所用的配套器具如图1所示,主要组件为大方盘、小方盘,倾斜放置的玻璃板、和玻璃罩;2个方盘为贮水用,玻璃板为承载叶片用,玻璃罩起封闭保湿用。使用时,由于叶片在玻璃板上被固定并整齐展开,如图2所示,对叶片实施接种和施药操作非常方便;而且玻璃罩的打开与罩回均未触及罩内的试验材料,因而可以根据需要反复开闭玻璃罩实施接种或施药操作。本发明用的离体叶片在温度为26℃±1℃条件下,一般可维持7天以上的正常绿叶,试验无需额外添加保鲜剂处理。
如图2所示的叶片经接种稻纹枯病菌后,在26℃±1℃温度范围内培养,无药处理的对照叶片,一般接种24小时后开始发病,病斑沿着菌丝生长的方向不断扩展,并形成较为清晰一致的坏死病斑,如图3的A图所示;而未接种病菌的叶片保持正常的绿叶,如图3的B图所示;经过接种病菌并施药处理的叶片表现为发病轻或不发病,如图3的C图和D图所示。
发病程度可用病斑高度(或称病斑长度)的量化指标来衡量,病斑高度是指从接种点到病斑最前沿的距离;药物的防治效果(药效)可按如下公式计算:
防治效果(%)=(对照处理的病斑高度-药物处理的病斑高度)×100/对照处理的病斑高度
实施例1
应用本发明一种防治稻纹枯病药物的药效测定方法,以水稻品种中优679和稻纹枯病菌菌株Rs-1为材料,测定药物井冈霉素以不同有效浓度防治稻纹枯病的防治效果,按如下步骤实施操作:
1.水稻叶片的培育准备:按一般方法栽培水稻品种中优679,常规水肥管理,生长至6叶期后使用。
2.主要器具准备:测试用的主要器具包括:如图1所示的大方盘a、小方盘b、玻璃板c、玻璃罩d等组件。本实施例器具的用材与大小:大方盘a为长×宽×高=40×30×3cm的普通方盘;小方盘b为长×宽×高=29×22×3cm的普通方盘;玻璃板c为24×24cm的普通玻璃板;玻璃罩d为长×宽×高=31×25×20cm的有机玻璃罩;图1的A图中的薄金属片,折钩后长度为15cm。用洁净剂将这些组件洗涤干净后备用;
3.病菌的培养准备:将菌株Rs-1移植到PSA平板培养基上,PSA培养基为:马铃薯200g、蔗糖20g、琼脂20g和水1000ml。在温度30℃条件下培养至菌落刚长满平板,取直径为6mm打孔器在平板菌落外周打取大小一致的菌丝琼脂圆块,以此菌丝块作为接种测定用的接种体。
4.防治药物的配备:用清水将防治药物20﹪的井冈霉素水溶粉剂(浙江钱江生物化学股份有限公司的产品)溶解,并将施用药液的有效成分浓度调配为3个施用浓度:104.2μg/ml,6.1μg/ml,1.2μg/ml;其中104.2μg/ml为一般田间应用浓度;而另2个浓度6.1μg/ml和1.2μg/ml是处于防治效果易变的浓度范围;以空白清水处理作无药处理对照(CK)。
5.测定用离体叶片的准备:用干净剪刀采集步骤1准备的水稻植株上完全展开的正常叶片,置入盛装清水的大烧杯中带回室内。取出步骤2备好的组件,将小方盘置于大方盘内的中间,取2个干净的普通橡皮筋分别套在玻璃板的上下两头,并将玻璃板以倾斜状态置于小方盘内,如图1的B图所示,或者按图1的A图方式用金属片临时架成稳定的倾斜状态,然后往小方盘内注入深厚清水(约占小方盘深度的75%)。将采回的叶片基部朝下,平行插摆于玻璃板与橡皮筋之间,橡皮筋将叶片的两端夹稳,叶片基端插入小方盘内的清水层内,然后将超出玻璃板上缘的尾部叶片剪除,如图2所示。
6.药物施用:用手持喷雾器将步骤4配备的测试药液喷到步骤5备好的叶片上,直至叶片上均匀布满雾滴为止。
7.接种病菌:用干净镊子挑取步骤3准备的菌丝块贴放于步骤6操作完备的离体叶片上,如图2所示。
8.施药后和接种后的处置:取玻璃罩将小方盘以及盘内的离体叶片全部罩在大方盘上,并往大方盘内注入薄层清水,使玻璃罩内部封闭并形成罩内稳定的高湿状态;然后将整套装置放于具备正常散射光的普通室内培养,培养温度维持在26℃±1℃波动范围。
结果:接种培养3天后,无药处理对照叶片发病病斑高度达11.13cm,而施用井冈霉素药液处理的叶片发病减轻,表现出有防治效果,在生产使用浓度下(104.2μg/ml),显示出高效的防治作用(93.80%);当药液有效浓度减少,防治效果跟着下降(见表1)。本实施例的防治药物井冈霉素是在病菌侵染之前施用,因而结果体现的是井冈霉素的保护作用。
表1用本发明的方法测定药物井冈霉素在不同浓度下的防治效果
实施例2
应用本发明一种防治稻纹枯病药物的药效测定方法,以水稻品种中优679和稻纹枯病菌菌株Rs-2为材料,测定药物丙环唑以不同浓度防治稻纹枯病的防治效果,按实施例1的步骤1至步骤8操作实施,但与实施例1不同的是:
步骤3培养准备的菌株是Rs-2。
步骤4配备的防治药物是25﹪的丙环唑乳油(江苏丰登农药有限公司产品),有效成分浓度调配为3个施用浓度:187.5μg/ml,55.2μg/ml,5.0μg/ml;其中187.5μg/ml为一般田间应用浓度;而另2个浓度55.2μg/ml和5.0μg/ml是丙环唑处于防治效果易变的浓度范围;以空白清水处理作无药处理对照(CK)。
结果:接种培养3天后,无药处理对照叶片发病的病斑高度达11.94cm,而施用丙环唑药液处理的叶片发病减轻,表现出有防治效果,在生产使用浓度下(187.5μg/ml),显示出高效的防治作用(99.16%);当药液有效浓度减少,防治效果跟着下降(见表2)。本实施例的防治药物丙环唑是在病菌侵染之前施用,因而结果体现的是丙环唑的保护作用。
表2用本发明的方法测定药物丙环唑在不同浓度下的防治效果
实施例3
应用本发明一种防治稻纹枯病药物的药效测定方法,以水稻品种中优679和稻纹枯病菌菌株Rs-3为材料,测定药物多菌灵以不同浓度防治稻纹枯病的防治效果,按实施例1的步骤1至步骤8操作实施,但与实施例1不同的是:
步骤3培养准备的菌株是Rs-3;
步骤4的配备防治药物是50﹪多菌灵可湿性粉剂(上海升联化工有限公司的产品),有效成分浓度调配为3个施用浓度:833.3μg/ml,35.0μg/ml,15.0μg/ml;其中833.3μg/ml为一般田间应用浓度;而另2个浓度35.0μg/ml和15.0μg/ml是多菌灵处于防治效果易变的浓度范围;以空白清水处理作无药处理对照(CK)。
结果:接种培养3天后,无药处理对照叶片发病的病斑高度达9.7cm,而施用多菌灵药液处理的叶片发病减轻,表现出有防治效果,在生产使用浓度下(833.3μg/ml),显示出高效的防治作用(100%);当药液有效浓度减少,防治效果跟着下降(见表3)。本实施例的防治药物多菌灵是在病菌侵染之前施用,因而结果体现的是多菌灵的保护作用。
表3用本发明的方法测定药物多菌灵在不同浓度下的防治效果
实施例4
应用本发明一种防治稻纹枯病药物的药效测定方法,以水稻品种中优679和稻纹枯病菌菌株Rs-1为材料,测定药物井冈霉素对稻纹枯病防治效果的治疗作用,按实施例1的步骤1至步骤8操作实施,但与实施例1不同的是:
步骤4配备井冈霉素有效成分的浓度为187μg/ml(一般田间应用浓度)。
步骤6与步骤7的次序与实施例1的相反,药物施用是在接种病菌1天后,已发病(病斑高度为1.53cm)的情况下施用。
结果:接种培养3天(施药2天)后,无药处理对照叶片发病的病斑高度达10.83cm,而井冈霉素药液处理的叶片发病病斑高度为3.86cm,扣除施药前的病斑高度后计算防治效果为74.95%。本实施例的防治药物井冈霉素是在病菌侵染发病之后施用,因而结果能体现井冈霉素的治疗作用。
Claims (1)
1.一种防治稻纹枯病药物的药效测定方法,其特征在于,利用一组简单便利的器具,在离体水稻叶片上进行接种发病和药物处理,测定药物对稻纹枯病的防治效果,方法的步骤如下:
1)水稻叶片的培育准备:按一般方法种植水稻植株,常规水肥管理,培育至6叶期后使用;
2)器具准备:器具包括大方盘、小方盘、玻璃罩、和玻璃板;用洁净剂将这些器具洗涤干净后备用;
3)病菌的培养准备:将测定用的病菌菌株移植到PSA平板培养基上,PSA培养基为:马铃薯200g、蔗糖20g、琼脂20g和水1000ml,在温度30℃条件下培养至菌落刚长满平板,取直径为6mm打孔器在平板菌落外周打取大小一致的菌丝琼脂圆块,以此菌丝块作为接种测定用的接种体;
4)防治药物的配备:用清水将防治药物溶解或稀释,并将有效成分调配成需要测定的浓度,并以空白清水作无药处理对照(CK);
5)测定用离体叶片的准备:用干净剪刀采集步骤1)准备的水稻植株上完全展开的正常叶片,置入盛装清水的干净容器中带回室内;取出步骤2)备好的组件,将小方盘置于大方盘内的中间,取2个干净的普通橡皮筋分别套在玻璃板的上下两头,并将玻璃板置于小方盘内架成稳定的倾斜状态,然后往小方盘内注入清水;将采回的叶片基部朝下,平行插摆于玻璃板与橡皮筋之间,橡皮筋将叶片的两端夹稳,叶片基端插入小方盘内的清水层内,剪除超出玻璃板上缘的叶片尾部;
6)药物施用:用喷雾器将步骤4)配备的待测药液喷到步骤5)备好的叶片上,直至叶片上均匀布满雾滴为止;
7)接种病菌:用干净镊子挑取步骤3)准备的菌丝块贴放于步骤5)准备好的离体叶片上;
8)施药后或接种后的处置:取玻璃罩将小方盘以及盘内的离体叶片全部罩在大方盘上,并往大方盘内注入清水,使玻璃罩内部封闭并形成罩内稳定的高湿状态;然后将整套装置放于具备正常散射光的普通室内培养,培养温度维持在26℃±1℃波动范围;
9)变动实施步骤测定药物防治效果的作用方式:通过改变步骤6)与步骤7)实施的先后次序,能实现测定药物对病害的防治作用方式,如下:
A.先实施步骤6)再到步骤7);或先操作步骤7),在菌丝生长侵染之前操作步骤6);结果能体现药物防治的保护作用;
B.先实施步骤7),培养24小时发病后,再实施步骤6),结果能体现药物防治的治疗作用;
结果观察调查:一般接种病菌24小时后,无药物的对照处理出现清晰稳定的发病反应,有防治作用的药物处理,与对照处理相比发病程度减轻或不发病;发病程度可用病斑高度(或称病斑长度)的量化指标来衡量,病斑高度是指从接种点到病斑最前沿的距离;通过量化指标计算药物的防治效果(药效);
防治效果(%)=(对照处理的病斑高度-药物处理的病斑高度)×100/对照处理的病斑高度。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410133494.0A CN103884825B (zh) | 2014-03-29 | 2014-03-29 | 一种防治稻纹枯病药物的药效测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410133494.0A CN103884825B (zh) | 2014-03-29 | 2014-03-29 | 一种防治稻纹枯病药物的药效测定方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103884825A true CN103884825A (zh) | 2014-06-25 |
CN103884825B CN103884825B (zh) | 2015-08-05 |
Family
ID=50953835
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410133494.0A Expired - Fee Related CN103884825B (zh) | 2014-03-29 | 2014-03-29 | 一种防治稻纹枯病药物的药效测定方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN103884825B (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104655800A (zh) * | 2014-12-30 | 2015-05-27 | 中国农业科学院柑桔研究所 | 模拟室外的柑桔蚜虫生物活性测定和药效测定方法及其应用 |
CN105506057A (zh) * | 2016-01-26 | 2016-04-20 | 浙江省农业科学院 | 一种利用水稻离体叶片进行纹枯病接种和抗性评价的方法 |
CN105917989A (zh) * | 2016-05-24 | 2016-09-07 | 广西大学 | 一种稻瘟病杀菌剂防治作用测定的简易方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1687774A (zh) * | 2005-05-19 | 2005-10-26 | 中国农业大学 | 一种测定杀菌剂对黄瓜霜霉病菌毒力的方法 |
CN101993822A (zh) * | 2010-09-08 | 2011-03-30 | 广西大学 | 一种接种诱导植物离体器官发病的装置及其应用方法 |
CN103026966A (zh) * | 2012-12-17 | 2013-04-10 | 天津市农业生物技术研究中心 | 一种利用离体叶片鉴定番茄黄化曲叶病毒抗性的方法 |
-
2014
- 2014-03-29 CN CN201410133494.0A patent/CN103884825B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1687774A (zh) * | 2005-05-19 | 2005-10-26 | 中国农业大学 | 一种测定杀菌剂对黄瓜霜霉病菌毒力的方法 |
CN101993822A (zh) * | 2010-09-08 | 2011-03-30 | 广西大学 | 一种接种诱导植物离体器官发病的装置及其应用方法 |
CN103026966A (zh) * | 2012-12-17 | 2013-04-10 | 天津市农业生物技术研究中心 | 一种利用离体叶片鉴定番茄黄化曲叶病毒抗性的方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
孙祖雄 等: "几种药剂防治水稻纹枯病田间药效试验", 《广西农学报》, vol. 28, no. 5, 30 October 2013 (2013-10-30), pages 12 - 14 * |
郭道君: "稻纹枯病菌的耐药生物学研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》, 15 March 2014 (2014-03-15) * |
金梅松 等: "浙江省水稻纹枯病菌对井岗霉素的抗药性测定", 《浙江农业学报》, vol. 9, no. 3, 31 December 1997 (1997-12-31), pages 127 - 130 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104655800A (zh) * | 2014-12-30 | 2015-05-27 | 中国农业科学院柑桔研究所 | 模拟室外的柑桔蚜虫生物活性测定和药效测定方法及其应用 |
CN105506057A (zh) * | 2016-01-26 | 2016-04-20 | 浙江省农业科学院 | 一种利用水稻离体叶片进行纹枯病接种和抗性评价的方法 |
CN105917989A (zh) * | 2016-05-24 | 2016-09-07 | 广西大学 | 一种稻瘟病杀菌剂防治作用测定的简易方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN103884825B (zh) | 2015-08-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JPH09500268A (ja) | 植物病原体を制御するためのStreptomycesWYEC108の使用 | |
CA2924786C (en) | Hydroponic method utilizing beneficial micro-organisms | |
CN105557347B (zh) | 辣椒灰霉病抗病性鉴定的苗期接种方法 | |
CN102808015B (zh) | 一种植物离体茎杆接种鉴定菌核病抗性的方法 | |
CN103884825B (zh) | 一种防治稻纹枯病药物的药效测定方法 | |
CN102742605A (zh) | 一株银杏内生球毛壳菌防治植物病原真菌的应用 | |
CN101914474B (zh) | 一种外生菌根辅助细菌短小芽孢杆菌及其应用 | |
Anoop et al. | Evaluation of antagonistic potential of indigenous Trichoderma isolates against Pythium aphanidermatum (Edson) fitz. causing rhizome rot in turmeric (Curcuma longa L.) | |
CN103981128B (zh) | 一株粪产碱杆菌菌株Bxo-4及其应用 | |
CN103436465A (zh) | 一种粪产碱菌株 | |
CN102960369B (zh) | 粒状淡紫拟青霉生物杀线虫剂的制备方法 | |
CN102994444A (zh) | 一种金钱松细胞的悬浮培养方法 | |
Yadav | Antagonistic activity of Trichoderma sp. and evaluation of various agro wastes for mass production | |
CN108660088A (zh) | 棉花内生细菌yupp-10及其在棉花黄萎病防治中的应用 | |
CN105695334B (zh) | 一种新的棘孢木霉及其用途 | |
Slykhuis | Studies on Fusarium culmorum blight of crested wheat and brome grass seedlings | |
CN108157092A (zh) | 一种水稻生育期病害防治的方法 | |
CN105296416B (zh) | 毛脉酸模悬浮细胞与其内生真菌共培养体系建立的方法 | |
CN107841474A (zh) | 一种池生代尔夫特菌及其在水稻稻曲病防治中的应用 | |
CN102742606A (zh) | 一株银杏内生球毛壳菌防治植物病原真菌的应用 | |
CN109924062A (zh) | 一种东方栓菌的快速人工栽培方法 | |
CN104120084B (zh) | 一种黄绿绿僵菌mfyy090714及其应用 | |
CN104498366B (zh) | 一种扁座壳孢菌的规模化生产发酵培养基及发酵培养方法 | |
CN105838659B (zh) | 一种中国被毛孢固体发酵产分生孢子的培养基和方法 | |
KR100760526B1 (ko) | 비카베린을 생산하는 후자리움 옥시스포룸 ef119 균주,비카베린 또는 ef119 균주를 포함하는 식물병 방제용미생물 제제 및 이를 이용하여 식물병을 방제하는 방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20150805 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |