CN105917989A - 一种稻瘟病杀菌剂防治作用测定的简易方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种稻瘟病杀菌剂防治作用测定的简易方法，在普通实验室内，利用一套简单小器具配成一个封闭小空间，在该小空间内利用纯沙土作育苗土壤，配合专用育苗营养液，培育细小稻苗；在稻瘟病菌侵染细小稻苗过程中介入杀菌剂处理；实现简易快速检测杀菌剂防治作用的目的。实施方法的步骤如下：1)培育细小稻苗：2)配备杀菌剂药液：3)杀菌剂处理细小稻苗：4)稻苗表面药液凉干：5)接种稻瘟病菌及侵染培育：6)结果调查与计算防治效果。本发明的优点是：具备检测药物干扰病菌致病能力的功用；实现药物作用检测技术体系微型化，无需温室装备设施，试验条件容易实现技术标准化；技术简单，检测快速高效；容易实现药物鉴定检测批量化作业，可在药物早期研发工作中应用。

Description

一种稻瘟病杀菌剂防治作用测定的简易方法

技术领域

本发明涉及植物病理学技术和农药学技术，具体是一种稻瘟病杀菌剂防治作用测定的简易方法。

背景技术

稻瘟病是我国水稻生产的重大病害，大流行年曾造成我国损失稻粮150亿公斤。尽管目前对稻瘟病的认识已相当深入，但与该病害的防病控害密切有关的许多基础研究滞后，特别是抗病育种工作仍然薄弱，因而我国当前稻瘟病的防治仍主要依赖农药防治。农药大量应用引起的环保问题和抗药性问题，以及水稻生产的发展对提高农药效力的期望，都要求农药能不断地更新换代，而农药的更新换代又有赖于农药研发的加强与创新。

杀菌剂农药的研发趋势，是开发不容易产生抗药性的、高效低毒的环保型防治药物；其中很重要的研发目标，是挖掘和寻找对靶标生物的生长抑制作用弱、而对靶标生物侵染致病的干扰作用强的药物。要实现这种目标，改进和提高已有的筛选检测技术很关键。

当前的筛选检测技术主要是利用活体外测定的生物测定法，该方法是通过检测药物抑制靶标病原菌生长发育或生理代谢而实现，具有无需寄主生物参与、简便高效，技术成熟、甚至已发展了高通量的检测技术等的特色。不过很明显，该技术方法筛选的结果，往往是获得对靶标病原菌抑制作用强的药物；而抑制作用弱、但对靶标病原菌的侵染致病能力的干扰作用强的药物，却遭到淘汰。要获得能干扰靶标病原菌侵染致病能力的药物，必须采用另外的测定方法，也就是采用将测试药物作用于病原菌的侵染过程的方法。

针对稻瘟病体系来说，必须要将测试药物作用于稻瘟病菌的侵染过程，而要实现这样的试验过程，测定技术体系离不开寄主水稻材料的培育，离不开稻瘟病菌与寄主水稻的侵染互作。这种药物作用的测定技术目前主要有两套方法。

一套是在田间栽培的水稻上，利用自然发病的方式检测药物的作用。该方法需要在田间实施，因而需要较多的药物试样，往往仅适用于研发后期定型药物的药效鉴定。而在农药的研发早期，药物试样量往往很少，无法满足试验的要求。而且该方法的最大的弊病是田间自然发病不可控。

另一套是在温室培育的水稻苗上，进行人工发病的方式检测药物的作用。该方法需要使用温室这种大型的技术装备体系，试验过程的技术条件控制复杂，在批量试验测定时，人力物力财力等的耗费仍然较大。

这二套技术方法，都受限于寄主水稻培育需要庞大复杂的技术体系，占地耗时花费大，很难达到快速高效的技术要求，也很难在药物研发早期试验中应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种稻瘟病杀菌剂防治作用测定的简易方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

一种稻瘟病杀菌剂防治作用测定的简易方法，在普通实验室内，利用一套简单小器具配成一个封闭小空间，在该小空间内利用纯沙土作育苗土壤，配合专用育苗营养液，培育细小稻苗；在稻瘟病菌侵染细小稻苗过程中介入杀菌剂处理；实现简易快速检测杀菌剂防治作用的目的；测定方法的步骤如下：

1.培育细小稻苗

以干净纯沙土为育苗基质；以一套组合器具作育苗器具，包括育苗盆、小方盘、大方盘、玻璃罩；配以专用育苗营养液，其配比为：硝酸钾1.0g、磷酸二氢钾1.0g，水1000.0ml；实施细小稻苗的培育。

具体操作是，将育苗盆置于小方盘内，取沙土平装填满育苗盆，取育苗营养液注入小方盘内，直至全部沙土湿润，并在小方盘内保留浅层营养液：取已经催芽萌动的水稻种子，播埋于湿润的沙土内，然后，取玻璃罩将小方盘罩于大方盘内，再往大方盘内倒入薄层清水，使玻璃罩内形成一密闭小空间，稻种在该小空间内生长发育。将该整套育苗装置放置在普通实验室内明亮的平台上培育3天，室内温度维持28℃。

2.配备杀菌剂药液

用清水将待测杀菌剂配成药液，并将有效成分调配成需要测定的浓度，以空白清水作无药处理对照。

3.杀菌剂处理细小稻苗

将步骤1培育3天后的细小稻苗转移至隔离箱/室，打开玻璃罩，用喷雾器将步骤2配备的杀菌剂药液均匀喷雾至细小稻苗上，直至稻苗表面布满细小雾滴为止。

4.稻苗表面药液凉干

步骤3施药完毕后，静置一段时间，直至稻苗表面药液水分消失变干。

5.接种稻瘟病菌及侵染培育

按常规方法培养制备稻瘟病菌分生孢子，配成孢子液，用喷雾器将孢子液喷雾到步骤4操作完毕的稻苗上，直至稻苗表面布满细小雾滴为止，然后罩回玻璃罩，转回原来育苗的平台，在原来的育苗条件下继续培育，稻瘟病菌发动侵染并导致稻苗发病。

6.结果调查与计算防治效果

步骤5的细小稻苗继续培育5天后，清水对照处理的稻苗已表现清晰的发病反应。有防治作用的药物处理，与对照处理相比病情变轻或不发病；病情轻重用病情级数表示。

防治效果(％)＝100×(对照处理病情级数-药物处理病情级数)/对照处理病情级数

本发明的优点是：

1)由于药物作用于稻瘟病菌与水稻互作过程，具备检测药物干扰病菌致病能力的功用；

2)实现药物作用检测技术体系微型化，无需温室装备设施，试验条件容易实现技术标准化；

3)技术简单，检测快速高效。

4)容易实现药物鉴定检测批量化作业，可在药物早期研发工作中应用。

附图说明

图1是本发明育苗器具及工作示意图。图中，A是育苗盆装满沙土及播种后，置在小方盘内，小方盘置于大方盘内。B是用玻璃罩将小方盘罩在大方盘内。

具体实施方式

下面结合附图与实施例对本发明作进一步描述。

本发明在常规实验室内实施，其要点是，利用一套简单小器具配成一个封闭小空间，在该小空间内利用纯沙土作育苗土壤，配合专用育苗营养液，将水稻种子培育成细小稻苗；在细小稻苗上处理杀菌药物和接种稻瘟病菌，稻瘟病菌在侵染致病过程中，受到药物的抑制或干扰，导致发病减轻，从而体现杀菌剂的防治作用。

所用的一套器具包括大方盘、小方盘、玻璃罩、和育苗盆。其中育苗盆最好采用当前水稻生产上通用的底部穿孔的育秧盆，用刀具将育秧盆裁切成适合置放于小方盘为宜；玻璃罩为方形有机玻璃罩，大小以刚好将小方盘罩在大方盘内为宜，如图1所示；必要时，可将育苗盆细切成更小的盆块，以利于一个罩内设计多个药物处理。

育苗土壤基质采用纯沙土而不用肥力较高的耕作土，原因是，纯沙土与耕作土培育的细小稻苗株型有别，纯沙土培育的细小稻苗株形较矮，更适合本发明方法的工作开展；而且纯沙土近于无肥力，使得基质的肥力条件一致性好，容易实现基质土壤和肥力条件标准化。实际操作可选用普通建筑用的干净细沙。

配套营养液的功用是促进稻瘟病发病并表现明显的坏死反应。

营养液的施放方法的是，在育苗盆平整装满沙土后，将营养液注入小方盘内，营养液通过育苗盆穴的底孔自行渗透湿润全部沙土，在小方盘内保持一薄层营养液，使得盆穴内的沙土处于湿润又不至于被水浸的理想状态。

使用的水稻种子按常规方法浸种和催芽，至露白并可见胚根形成萌动为宜。通常一个盆穴播一粒种子，也可一穴播几粒种子。

播种后罩上玻璃罩并往大方盘加注清水后，玻璃罩内形成一个封闭的小空间，稻种在该小空间内生长发育，中途除了实施药物处理和病菌接种操作外，无需任何其它如通气、补肥或浇水等的技术操作。

已经发现，当细小稻苗的第一完全叶伸出2～3cm时，最适合试验使用。通常播种3天后，稻苗符合这样的技术状态。

多种药物测试时，采用喷雾方式的施药操作容易产生药物间的交叉沾染，因而在施药时不宜在育苗之处打开玻璃罩直接喷药，而应采取隔离措施，如将稻苗材料转入隔离箱(或隔离苍室)内施药，避免药物间的交叉沾染。

施药后，不宜马上接种稻瘟病菌，需要等到药液水分干燥后再进行病菌接种，一般静置等待1小时后，稻苗表面已经自然干燥。

病菌接种的孢子浓度按常规接种用的孢子浓度，不过，孢子浓度偏浓更有利于发病。

通常接种病菌5天后，无药物处理的稻苗已表现清晰的坏死反应，适合进行结果调查；通过逐株记录稻苗上的病级反应，可以计算药物处理和无药处理的平均病级，并对比计算得到防治效果；病情级数可按病斑大小或坏死面积大小来划分。

试验场地为自然明亮的普通实验室，将试验材料置于近窗口的普通平台上即可，注意避免直射阳光，因其容易引起玻璃罩内升温。将育苗器具叠加放置能提高室内空间的利用率。试验全程室内以28℃恒温状态为宜，一般常规空调就能满足该技术要求；室内湿度为自然湿度，无需控制。

该技术方法无需使用温室设施，因而重要的试验条件，如温度、光照、水分和湿度等无需庞大复杂的调控技术体系；通过将试验材料集成于一个微小而封闭的小玻璃罩内，也能节省大量的日常护理工作；加上土壤和肥力条件容易统一标准，使得该技术体系在实践上容易实现标准化作业。试验占用空间小、全程耗时短、总体技术简单而容易操作，则非常有利于药物测试工作的批量化作业。实际上形成了杀菌剂防治作用的活体测定技术体系微型化。

实施例1

应用本发明一种稻瘟病杀菌剂防治作用测定的简易方法，以品种宜香优7633为水稻材料，接种稻瘟病菌菌株Mg2013-1，测试杀菌剂稻瘟灵对稻瘟病的防治作用，按如下步骤实施操作：

1.培育细小稻苗

以干净纯沙土为育苗基质；以一套组合器具作育苗器具，包括育苗盆、小方盘、大方盘、玻璃罩；配以专用育苗营养液，其配比为：硝酸钾1.0g、磷酸二氢钾1.0g，水1000.0ml；实施细小稻苗的培育。

具体操作是，将育苗盆置于小方盘内，取沙土平装填满育苗盆，取育苗营养液注入小方盘内，直至全部沙土湿润，并在小方盘内保留浅层营养液：取已经催芽萌动的水稻品种宜香优7633种子，播埋于湿润的沙土内，然后，取玻璃罩将小方盘罩于大方盘内，再往大方盘内倒入薄层清水，使玻璃罩内形成一密闭小空间，稻种在该小空间内生长发育。将该整套育苗装置放置在普通实验室内明亮的平台上培育3天，室内温度维持28℃。

2.配备杀菌剂药液

按药剂40％稻瘟灵乳液说明书，用清水将该药剂配成生产用浓度的药液，以空白清水作无药处理对照。

3.杀菌剂处理细小稻苗

将步骤1培育3天后的细小稻苗转移至隔离室，打开玻璃罩，用小喷雾器将步骤2配备的杀菌剂药液均匀喷雾至细小稻苗上，直至稻苗表面布满细小雾滴为止。

4.稻苗表面药液凉干

步骤3施药完毕后，静置1小时，至稻苗表面药液水分消失变干。

5.接种稻瘟病菌及侵染培育

按常规方法培养制备稻瘟病菌菌株Mg2013-1的分生孢子，配成孢子液，用喷雾器将孢子液喷雾到步骤4操作完毕的稻苗上，直至稻苗表面布满细小雾滴为止，然后罩回玻璃罩，转回原来育苗的平台，在原来的育苗条件下继续培育，稻瘟病菌发动侵染并导致稻苗发病。

6.结果调查与计算防治效果

步骤5的细小稻苗继续培育5天后，清水对照处理的稻苗已表现清晰的发病反应，调查病情级数为2.38级；而杀菌剂稻瘟灵处理的稻苗的病情级数为0.03级，计算防治效果为98.74％，结果能反映出稻瘟灵的高效防治作用。

实施例2

应用本发明一种稻瘟病杀菌剂防治作用测定的简易方法，以品种宜香优7633为水稻材料，接种稻瘟病菌菌株Mg2013-1，测试杀菌剂三环唑对稻瘟病的防治作用，按实施例1的步骤1至步骤6操作实施：但与实施例1不同的是，本实施例的步骤2配备的杀菌剂是75％三环唑可湿性粉剂。在施药和接种病菌孢子5天后，清水对照处理的稻苗已表现清晰的发病反应，调查病情级数为2.38级；而杀菌剂三环唑处理的稻苗的病情级数为0.07级，计算防治效果为97.06％，结果能反映出三环唑的高效防治作用。

实施例3

应用本发明一种稻瘟病杀菌剂防治作用测定的简易方法，以品种宜香优7633为水稻材料，接种稻瘟病菌菌株Mg2013-1，测试杀菌剂嘧菌酯对稻瘟病的防治作用，按实施例1的步骤1至步骤6操作实施：但与实施例1不同的是，本实施例的步骤2配备的杀菌剂是25％嘧菌酯悬浮剂。在施药和接种病菌孢子5天后，清水对照处理的稻苗已表现清晰的发病反应，调查病情级数为2.38级；而杀菌剂嘧菌酯处理的稻苗的病情级数为0.02级，计算防治效果为99.16％，结果能反映出嘧菌酯的高效防治作用。

Claims (1)

1.一种稻瘟病杀菌剂防治作用测定的简易方法，其特征在于，在普通实验室内，利用一套简单小器具配成一个封闭小空间，在该小空间内利用纯沙土作育苗土壤，配合专用育苗营养液，培育细小稻苗；在稻瘟病菌侵染细小稻苗过程中介入杀菌剂处理；实现简易快速检测杀菌剂防治作用的目的；实施方法的步骤如下：

1)培育细小稻苗：以干净纯沙土为育苗基质；以一套组合器具作育苗器具，包括育苗盆、小方盘、大方盘、玻璃罩；配以专用育苗营养液，其配比为：硝酸钾1.0g、磷酸二氢钾1.0g，水1000.0ml；实施细小稻苗的培育；

具体操作是，将育苗盆置于小方盘内，取沙土平装填满育苗盆，取育苗营养液注入小方盘内，直至全部沙土湿润，并在小方盘内保留浅层营养液：取已经催芽萌动的水稻种子，播埋于湿润的沙土内，然后，取玻璃罩将小方盘罩于大方盘内，再往大方盘内倒入薄层清水，使玻璃罩内形成一密闭小空间，稻种在该小空间内生长发育；将该整套育苗装置放置在普通实验室内明亮的平台上培育3天，室内温度维持28℃；

2)配备杀菌剂药液：用清水将待测杀菌剂配成药液，并将有效成分调配成需要测定的浓度，以空白清水作无药处理对照；

3)杀菌剂处理细小稻苗：将步骤1)培育3天后的细小稻苗转移至隔离箱/室，打开玻璃罩，用喷雾器将步骤2)配备的杀菌剂药液均匀喷雾至细小稻苗上，直至稻苗表面布满细小雾滴为止；

4)稻苗表面药液凉干：步骤3)施药完毕后，静置一段时间，直至稻苗表面药液水分消失变干；

5)接种稻瘟病菌及侵染培育：按常规方法培养制备稻瘟病菌分生孢子，配成孢子液，用喷雾器将孢子液喷雾到步骤4)操作完毕的稻苗上，直至稻苗表面布满细小雾滴为止，然后罩回玻璃罩，转回原来育苗的平台，在原来的育苗条件下继续培育，稻瘟病菌发动侵染并导致稻苗发病；

6)结果调查与计算防治效果：步骤5)的细小稻苗继续培育5天后，清水对照处理的稻苗已表现清晰的发病反应；有防治作用的药物处理，与对照处理相比病情变轻或不发病；病情轻重用病情级数表示；

防治效果(％)＝100×(对照处理病情级数-药物处理病情级数)/对照处理病情级数。