CN103877023A - 一种氧化苦参碱主动靶向脂质体的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药技术领域，本发明公开了一种氧化苦参碱主动靶向脂质体的制备方法，本发明采用pH梯度法制备主动靶向氧化苦参碱脂质体，确定制备氧化苦参碱脂质体的最佳处方为：药脂比为1:10、磷脂与胆固醇的比例为3:1外加10%mol的Lac-PE、外水相pH值为6.8、孵育温度为60℃，在最佳处方条件下，平均包封率为55.48％。本发明的方法制备的氧化苦参碱主动靶向脂质体比较稳定。主动靶向脂质体的体外释药实验表明氧化苦参碱经糖基化脂质体包裹后具有缓释效果。透射电镜观察本发明的方法制备的氧化苦参碱主动靶向脂质体为小单室脂质体，平均粒径为80nm，符合脂质体要求。体外溶出实验表明氧化苦参碱经脂质体包裹后具有一定的缓释性。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种氧化苦参碱主动靶向脂质体的制备方法。
背景技术
氧化苦参碱(Oxymatrine.OM.Fig.1)是从中药苦豆子或苦参根中提取的喹诺里西啶类生物碱，无色骰子状结晶(丙酮)。熔点208℃，亦有报道熔点207～208℃(分解)。旋光度+47.7°(乙醇)。易溶于水，有强吸水性，水溶液呈强碱性，难溶于乙醚。含1分子结晶水的氧化苦参碱熔点77～78℃。氧化苦参碱存在于豆科植物苦参(SophoraflavescensAit.)的根，广豆根(S.subprostratachunetT.Chen)的根中。药理学研究表明氧化苦参碱具有显著的抗癌活性；对实验动物具有抗心律失常、升高白细胞、平喘作用；具有抗衰老、抗溃疡、保肝等作用。研究证明它能抑制乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）转染的2.2.15细胞分泌乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）和e抗原（HBeAg），有显著的抗乙型肝炎病毒作用，是目前治疗急、慢性乙型病毒肝炎的常用药物。以往用药为单纯的肌肉注射、静脉滴注或者口服治疗，疗效较肯定。但以往常用的苦参碱制剂在体内吸收分布广泛，半衰期短，对肝脏的靶向性低，有一定副作用等缺点。
脂质体是一种定向药物载体，属于靶向给药系统的一种新剂型。它可以将药物粉末或溶液包埋在直径为纳米级的微粒中，这种微粒具有类细胞结构，进入人体内主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。脂质体作为药物载体在恶性肿瘤的靶向给药治疗方面极具潜力。为克服脂质体作为载体的靶向分布不理想、稳定性较差的缺点，近年来开发了一些新型脂质体，如温度敏感型、PL敏感型、免疫、聚合膜脂质体。
发明内容
本发明提供了一种氧化苦参碱主动靶向脂质体的制备方法。
本发明采用如下技术方案：
本发明的氧化苦参碱主动靶向脂质体的制备方法的具体步骤如下：
（1）将磷脂酰乙醇胺50mg溶解于4ml氯仿-甲醇中，然后加入13ml碳酸氢钠缓冲液，在40℃条件下用旋转蒸发器除去有机溶剂，加入乳糖500mg及硼氢化钠250mg彻底混匀,在25℃恒温箱中温育400h；将反应液装入透析袋，磁力搅拌下室温透析3d，用硅酸柱纯化，洗脱液为氯仿-甲醇的梯度配比液最后用甲醇洗脱，收集3：7所得洗脱液，即为糖脂溶液，经冰冻干燥得白色粉末，低温冰箱保存备用；
（2）在20mL无水乙醇中加入胆固醇、磷脂和糖脂溶液，然后搅拌使其溶解，旋转减压蒸发除去乙醇，在瓶壁内形成均匀的脂质薄膜，继续抽干10min，磷脂膜缓缓加入0.05mol/L的柠檬酸缓冲液10mL，水浴60℃旋转洗膜10min，随后室温磁力搅拌1h，冰浴超声5min，0.2μm滤膜过滤两次,形成空白脂质体；
（3）量取2mL空白脂质体，依次加入含氧化苦参碱的磷酸缓冲液0.5mL，1mol/L的Na2HPO4溶液0.7mL，振摇下依次加入，水浴50℃孵育20min，即得氧化苦参碱主动靶向脂质体。
步骤（1）中，氯仿与甲醇的体积比为2:1。
步骤（1）中，碳酸氢钠缓冲液的浓度为0.2mol/l，pH为9.0。
步骤（1）中，氯仿-甲醇的梯度配比为9：1、7：3、5：5、3：7。
步骤（2）中，胆固醇和磷脂的摩尔比为1:4。
步骤（2）中，糖脂溶液的加入量为胆固醇和磷脂总摩尔量的10%。
步骤（2）中，旋转减压蒸发是在60℃水浴中进行。
本发明的积极效果如下：
本发明采用pH梯度法制备主动靶向氧化苦参碱脂质体，确定了制备氧化苦参碱脂质体的最佳处方。本发明的方法制备的氧化苦参碱主动靶向脂质体的平均包封率为55.48％。本发明的方法制备的氧化苦参碱主动靶向脂质体比较稳定。主动靶向脂质体的体外释药实验表明氧化苦参碱经糖基化脂质体包裹后具有缓释效果。
透射电镜观察本发明的方法制备的氧化苦参碱主动靶向脂质体为小单室脂质体，平均粒径为80nm，符合脂质体要求。体外溶出实验表明氧化苦参碱经脂质体包裹后具有一定的缓释性。
附图说明
图1是本发明实施例1制备的氧化苦参碱主动靶向脂质体的透射电镜照片。
具体实施方式
下面的实施例是对本发明的进一步详细描述。
实施例1
1.1糖脂的合成和纯化
将磷脂酰乙醇胺50mg溶解于4ml2：1的氯仿-甲醇中，然后加入13ml,0.2mol/l、PH9.0的碳酸氢钠缓冲液，在40℃条件下用旋转蒸发器除去有机溶剂，加入乳糖500mg及硼氢化钠250mg彻底混匀,在25℃恒温箱中温育400h。将反应液装入透析袋，磁力搅拌下室温透析3d。应用硅酸柱纯化，洗脱液为氯仿-甲醇的梯度配比液（9：1、7：3、5：5、3：7）最后用甲醇洗脱。收集3：7所得洗脱液，即为糖脂溶液，经冰冻干燥得白色粉末，低温冰箱保存备用。1.2pH梯度法制备氧化苦参碱主动靶向脂质体
胆固醇和磷脂按1:4比例外加10%mol的糖脂溶液，用20mL无水乙醇溶解，旋转减压蒸发（水浴60℃）除去乙醇，在瓶壁内形成均匀的脂质薄膜，继续抽干10min。磷脂膜缓缓加入0.05mol/L的柠檬酸缓冲液10mL，水浴60℃旋转洗膜10min，随后室温磁力搅拌1h，冰浴超声5min，0.2μm滤膜过滤两次,形成空白脂质体。
精密量取2mL空白脂质体，依次加入含OM的PBS缓冲液0.5mL，1mol/L的Na2HPO4溶液0.7mL，振摇下依次加入，水浴50℃孵育20min，即得。
如图1所示：透射电镜观察本实施例制备的氧化苦参碱主动靶向脂质体为小单室脂质体，平均粒径为80nm，符合脂质体要求。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (7)
1.一种氧化苦参碱主动靶向脂质体的制备方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下：
（1）将磷脂酰乙醇胺50mg溶解于4ml氯仿-甲醇中，然后加入13ml碳酸氢钠缓冲液，在40℃条件下用旋转蒸发器除去有机溶剂，加入乳糖500mg及硼氢化钠250mg彻底混匀,在25℃恒温箱中温育400h；将反应液装入透析袋，磁力搅拌下室温透析3d，用硅酸柱纯化，洗脱液为氯仿-甲醇的梯度配比液最后用甲醇洗脱，收集3：7所得洗脱液，即为糖脂溶液，经冰冻干燥得白色粉末，低温冰箱保存备用；
（2）在20mL无水乙醇中加入胆固醇、磷脂和糖脂溶液，然后搅拌使其溶解，旋转减压蒸发除去乙醇，在瓶壁内形成均匀的脂质薄膜，继续抽干10min，磷脂膜缓缓加入0.05mol/L的柠檬酸缓冲液10mL，水浴60℃旋转洗膜10min，随后室温磁力搅拌1h，冰浴超声5min，0.2μm滤膜过滤两次,形成空白脂质体；
（3）量取2mL空白脂质体，依次加入含氧化苦参碱的磷酸缓冲液0.5mL，1mol/L的Na2HPO4溶液0.7mL，振摇下依次加入，水浴50℃孵育20min，即得氧化苦参碱主动靶向脂质体。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，氯仿与甲醇的体积比为2:1。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，碳酸氢钠缓冲液的浓度为0.2mol/l，pH为9.0。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，氯仿-甲醇的梯度配比为9：1、7：3、5：5、3：7。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，胆固醇和磷脂的摩尔比为1:4。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，糖脂溶液的加入量为胆固醇和磷脂总摩尔量的10%。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，旋转减压蒸发是在60℃水浴中进行。
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|---|---|---|---|---|
| CN104288185A (zh) * | 2014-10-31 | 2015-01-21 | 潘霞 | 一种治疗小儿湿疹的多糖核酸药物组合物的制备方法 |
| CN106075277A (zh) * | 2016-06-13 | 2016-11-09 | 山东中医药大学 | 一种氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊的制备方法 |
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| CN106075277A (zh) * | 2016-06-13 | 2016-11-09 | 山东中医药大学 | 一种氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊的制备方法 |
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