CN103865849B - 用于克罗诺菌冷热损伤修复的前增菌液体培养基 - Google Patents

用于克罗诺菌冷热损伤修复的前增菌液体培养基 Download PDF

Info

Publication number
CN103865849B
CN103865849B CN201410080751.9A CN201410080751A CN103865849B CN 103865849 B CN103865849 B CN 103865849B CN 201410080751 A CN201410080751 A CN 201410080751A CN 103865849 B CN103865849 B CN 103865849B
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacterium
cronobacter
sodium
liquid body
substratum
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201410080751.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103865849A (zh
Inventor
叶应旺
李辉
凌娜
韩永佳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hefei University of Technology
Original Assignee
Hefei University of Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hefei University of Technology filed Critical Hefei University of Technology
Priority to CN201410080751.9A priority Critical patent/CN103865849B/zh
Publication of CN103865849A publication Critical patent/CN103865849A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103865849B publication Critical patent/CN103865849B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及用于克罗诺菌冷热损伤修复的前增菌液体培养基。前增菌液体培养基包括蛋白胨、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、蔗糖、丙酮酸钠、氯化镁和水。通过大量的食源性致病菌验证该培养基修复效果，结果表明生长效果和生理生化指标修复效果较现有的BPW、EE、TSB等前增菌培养基均具有较大程度的提高，能克服克罗诺菌在食品检验检疫过程中出现漏检缺陷，提高克罗诺菌的检出率，且能有效抑制沙门氏菌等非目标菌的生长繁殖。本发明适用于各类食品中克罗诺菌的快速修复，对预防和控制由食源性克罗诺菌感染导致食源性疾病的发生与传播具有重要意义。

Description

用于克罗诺菌冷热损伤修复的前增菌液体培养基
技术领域
本发明属于食品微生物检验技术领域，具体涉及一种克罗诺菌冷热损伤修复前增菌液体培养基。
背景技术
克罗诺菌（Cronobacter），是一种重要食源性致病菌，属肠杆菌科的革兰氏阴性杆菌，能导致新生婴幼儿脑膜炎、致死性结肠炎和菌血症等，流行病数据调查表明婴幼儿配方奶粉是其感染的主要传播媒介。
食品加工过程中，经过高热、低冷、干燥、杀菌等加工工艺单元，易导致克罗诺菌损伤。因此，食品微生物检验过程中，现有的前增菌培养基对损伤细菌修复效果不好或者含有选择性抑制剂而导致损伤细菌无法生长或者生理生化反应发生很大变化，造成食品中克罗诺菌检验出现假阴性结果，导致被克罗诺菌污染的食品进入消费市场，而这些损伤细菌一旦通过食物进入人体，在合适条件下可以复活，进而引起克罗诺菌感染食源性疾病的流行暴发。
发明内容
为了防止食品检验检疫过程中出现克罗诺菌漏检，提高食品中克罗诺菌的检出率，避免损伤克罗诺菌通过食物进入人体导致食源性疾病的暴发，本发明提供一种用于克罗诺菌冷热损伤修复的前增菌液体培养基。
用于克罗诺菌（Cronobacter）冷热损伤修复的前增菌液体培养基由下列重量的物质组成：
蛋白胨12～15g、磷酸二氢钾1.5～3.5g、十二水磷酸氢二钠8～10g、氯化钠5g、蔗糖100～120g、丙酮酸钠0.8～1.2g、氯化镁0.8～1.2g、水1000ml。
所述前增菌液体培养基由下列重量的物质组成：
蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠9g、氯化钠5g、蔗糖120g、丙酮酸钠1.0g，氯化镁1.0g、水1000ml。
所述前增菌液体培养基由下列重量的物质组成：
蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠9g、氯化钠5g、蔗糖100g、丙酮酸钠0.8g、氯化镁0.8g、水1000ml。
所述前增菌液体培养基由下列重量的物质组成：
蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠9g、氯化钠5g、蔗糖110g、丙酮酸钠1.2g、氯化镁1.2g、水1000ml。
本发明配方中各成份的作用说明如下：
1.在缓冲蛋白胨水（BPW）中加入蔗糖的作用在于：蔗糖能抑制培养克罗诺菌时样品中杂菌的生长和繁殖。研究表明克罗诺菌可以利用蔗糖作为碳源，而很多肠道致病菌无法利用蔗糖作为碳源；
2.本发明使用的丙酮酸钠是三羧酸循环的中间代谢物丙酮酸的钠盐，可以为损伤细菌提供能量，有效弥补环境损伤过程中糖酵解过程中酶的失活，进而导致的糖代谢障碍。另外，在细菌受冷热损伤过程中，易导致重要金属离子如Mg2+流出细胞，导致相关酶失活，进而抑制重要生理生化与代谢过程如DNA复制等，加入氯化镁（MgCl2）是为了克服镁离子（Mg2+）的流失导致克罗诺菌的生长障碍。
本发明与现有BPW、肠杆菌增菌肉汤（EE）及胰蛋白胨肉汤（TS）B培养基相比较具有以下方面的优点：
1.生长修复效果好
用克罗诺菌标准菌株人工污染奶粉（无菌奶粉），在高温（58℃，5min）和低温（-18℃，10h）损伤处理人工污染样品，取10ml人工污染样品接种至BPW、EE、TSB和本发明培养基37℃培养8h中，通过梯度稀释记录不同培养基的菌落总数，结果发现本发明培养基菌落生长数量显著高于其他培养基，表明该培养基的增菌效果好，修复效率高；相同接种量的情况下，37oC培养8h，菌落数量较BPW、TSB和EE增菌液增加10～100倍；
2.生化指标变化小
用克罗诺菌标准菌株（ATCC28544和ATCC51329）和分离菌株（11株奶粉分离株）人工污染奶粉（无菌奶粉），在低温损伤处理人工污染样品，取10ml人工污染样品接种至BPW、EE、TSB和本发明培养基中，37℃培养8h中，用无菌接种环挑取不同前增菌菌悬液接种到营养琼脂培养基中，采用API-20e生化试剂条检测菌株生理生化指标变化，实验结果发现其他前增菌培养基修复克罗诺菌生化指标变化较大，而本发明培养基修复后，克罗诺菌的生化反应指标变化小，较BPW、EE和TSB培养基生化指标变化率降低10%以上；
3.具有较好的选择性
该培养基具有较好地抑制样品中杂菌生长，将克罗诺菌和沙门氏菌制备混合菌悬液，然后分别进行热和冷处理，加入到本发明培养基中，过夜摇床培养。取不同稀释度的混合菌液涂布培养于含有5-溴-4-氯-3-吲哚-D-ɑ-葡萄糖苷的营养琼脂平板上，培养8h，观察菌落生长，发现95%以上菌落为蓝绿色克罗诺菌的菌落。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步地说明。
实施例1
用于克罗诺菌（Cronobacter）冷热损伤修复的前增菌液体培养基由下列重量的物质组成：蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）9.0g、氯化钠5g、蔗糖120g、丙酮酸钠1.0g，氯化镁1.0g、水1000ml；
接种过夜克罗诺菌菌悬液1.0μL到缓冲蛋白胨水（BPW）、肠杆菌增菌肉汤(EE)、胰蛋白胨肉汤（TSB）中，37oC120rpm摇床培养8h，取出培养基，将培养基做十倍稀释测定菌落总数，结果显示该修复培养基较BPW增加50倍，较EE和TSB增加10倍。
实施例2
用于克罗诺菌（Cronobacter）冷热损伤修复的前增菌液体培养基由下列重量的物质组成：蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）9.0g、氯化钠5g、蔗糖100g、丙酮酸钠0.8g、氯化镁0.8g、水1000ml；
接种过夜克罗诺菌菌悬液1.0μL到缓冲蛋白胨水（BPW）、肠杆菌增菌肉汤(EE)、胰蛋白胨肉汤（TSB）中，37oC120rpm摇床培养8h，取出培养基，将培养基做十倍稀释测定菌落总数（三个重复），结果显示该修复培养基较BPW增加45倍，较EE和TSB增加10倍。
实施例3
用于克罗诺菌（Cronobacter）冷热损伤修复的前增菌液体培养基由下列重量的物质组成：蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）9g、氯化钠5g、蔗糖110g、丙酮酸钠1.2g、氯化镁1.2g、水1000ml；
接种过夜克罗诺菌菌悬液1.0μL到缓冲蛋白胨水（BPW）、肠杆菌增菌肉汤(EE)、胰蛋白胨肉汤（TSB）中，37oC120rpm摇床培养8h，取出培养基，将培养基做十倍稀释测定菌落总数，结果显示该修复培养基较BPW增加65倍，较EE和TSB增加10倍。
实施例4
用于克罗诺菌（Cronobacter）冷热损伤修复的前增菌液体培养基由下列重量的物质组成：蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）9g、氯化钠5g、蔗糖110g、丙酮酸钠1.2g、氯化镁1.2g、水1000ml；
接种克罗诺菌和沙门氏菌的菌悬液各1.0μL至缓冲蛋白胨水（BPW）、肠杆菌增菌肉汤(EE)、胰蛋白胨肉汤（TSB）中，37oC120rpm摇床培养8h，取出培养基，将培养基做十倍稀释测定菌落总数，涂布于克洛诺菌固体显色培养基表面，37oC恒温培养18h，结果显示培养基表面95%的菌落均为蓝绿色的克罗诺菌菌落。表明该培养基对部分杂菌还有较好的抑制作用。

Claims (4)

1.用于克罗诺菌冷热损伤修复的前增菌液体培养基，其特征在于：所述克罗诺菌(Cronobacter)的前增菌液体培养基由下列物质组成：蛋白胨12～15g、磷酸二氢钾1.5～3.5g、十二水磷酸氢二钠8～10g、氯化钠5g、蔗糖100～120g、丙酮酸钠0.8～1.2g、氯化镁0.8～1.2g、水1000ml。
2.根据权利要求1所述的前增菌液体培养基，其特征在于：所述前增菌液体培养基由下列物质组成：蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠9g、氯化钠5g、蔗糖120g、丙酮酸钠1.0g，氯化镁1.0g、水1000ml。
3.根据权利要求1所述的前增菌液体培养基，其特征在于：所述前增菌液体培养基由下列物质组成：蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠9g、氯化钠5g、蔗糖100g、丙酮酸钠0.8g、氯化镁0.8g、水1000ml。
4.根据权利要求1所述的前增菌液体培养基，其特征在于：所述前增菌液体培养基由下列物质组成：蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠9g、氯化钠5g、蔗糖110g、丙酮酸钠1.2g、氯化镁1.2g、水1000ml。
CN201410080751.9A 2014-03-07 2014-03-07 用于克罗诺菌冷热损伤修复的前增菌液体培养基 Active CN103865849B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410080751.9A CN103865849B (zh) 2014-03-07 2014-03-07 用于克罗诺菌冷热损伤修复的前增菌液体培养基

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410080751.9A CN103865849B (zh) 2014-03-07 2014-03-07 用于克罗诺菌冷热损伤修复的前增菌液体培养基

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103865849A CN103865849A (zh) 2014-06-18
CN103865849B true CN103865849B (zh) 2016-03-02

Family

ID=50904861

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410080751.9A Active CN103865849B (zh) 2014-03-07 2014-03-07 用于克罗诺菌冷热损伤修复的前增菌液体培养基

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103865849B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SI3650033T1 (sl) 2015-06-15 2022-05-31 4D Pharma Research Limited Sestavki, ki obsegajo bakterijske seve
CN113416765B (zh) * 2021-08-12 2022-08-16 合肥工业大学 一种婴幼儿配方奶粉中克罗诺杆菌的检测方法
CN113584122B (zh) * 2021-08-12 2023-09-15 合肥工业大学 一种用于复苏干燥损伤的克罗诺杆菌和沙门氏菌的液体培养基

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101186894A (zh) * 2007-07-31 2008-05-28 深圳市计量质量检测研究院 阪崎肠杆菌选择性分离培养基
CN102286606A (zh) * 2011-08-03 2011-12-21 中国检验检疫科学研究院 克罗诺杆菌肉汤培养基及检测方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5903342B2 (ja) * 2012-06-29 2016-04-13 株式会社吉野工業所 塗布容器

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101186894A (zh) * 2007-07-31 2008-05-28 深圳市计量质量检测研究院 阪崎肠杆菌选择性分离培养基
CN102286606A (zh) * 2011-08-03 2011-12-21 中国检验检疫科学研究院 克罗诺杆菌肉汤培养基及检测方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A selective differential medium for Enterobacter sakazakii, a preliminary study;Carol Iversen等;《International Journal of Food Microbiology》;20041130;第96卷;133-139 *
食品中阪崎肠杆菌分析及其检测;张爱霞等;《中国乳品工业》;20051231;42-44 *
食品污染克罗诺杆菌(阪崎肠杆菌)的分离及鉴定;董晓晖等;《微生物学报》;20130504;429-436 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN103865849A (zh) 2014-06-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104611251B (zh) 一株具有广谱抑菌活性的乳酸菌及其应用
CN104630083A (zh) 一种卷曲乳杆菌及其在妇女保健产品中的应用
CN101497915B (zh) 用于快速检测金黄色葡萄球菌的试剂及其方法
CN103865849B (zh) 用于克罗诺菌冷热损伤修复的前增菌液体培养基
CN103614452B (zh) 一种复合培养基及其用于快速检测菌落总数的方法
CN107853538A (zh) 一种低温等离子体联合超声处理的非热杀菌方法
CN106834197B (zh) 一种乳杆菌vbnc态的诱导方法
El-Shanshoury et al. Isolation of Bdellovibrio sp. from wastewater and their potential application in control of Salmonella paratyphi in water
CN101851676B (zh) 沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌培养基及其制备方法和应用
CN104140957A (zh) 一株可裂解多重耐药铜绿假单胞菌的噬菌体及其治疗感染的应用
CN102146429B (zh) 溶藻弧菌选择性鉴别培养基
CN101911930B (zh) 一种用于胃活检组织标本幽门螺杆菌培养用运送液及其制备方法和应用
CN102286606A (zh) 克罗诺杆菌肉汤培养基及检测方法
CN106479944A (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN106701645A (zh) 具有免疫促生长作用的解淀粉芽孢杆菌b7及其应用方法
CN101555514A (zh) 拟态弧菌显色培养基
CN103911335B (zh) 约氏乳酸杆菌bs15及其在预防和治疗非酒精性脂肪肝中的应用
CN113584122B (zh) 一种用于复苏干燥损伤的克罗诺杆菌和沙门氏菌的液体培养基
CN102827795B (zh) 用于沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基及制备方法
CN106086159B (zh) 一种能够同时检测两种粪便污染指示菌的酶底物培养基及其应用
CN104845940B (zh) 沙门氏菌噬菌体制剂及其制备方法
CN104651472A (zh) 一种基于罗非鱼育种抗病性能的评价方法
Ge et al. Fermentation: an unreliable seed treatment for bacterial fruit blotch of watermelon
CN103275921A (zh) 一种提高乳杆菌耐胆盐能力的方法
CN106498023A (zh) 一种单增李斯特菌显色培养基及测试片

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant