CN103841828B - 德尼布林二盐酸盐 - Google Patents

Abstract

MN-029二盐酸盐（MN-029·2HCl，结构式2）为有效的血管靶向剂。本发明集中于MN-029二盐酸盐的合成与表征以及其药学上可接受的制剂的制备。本文公开了将所述化合物及其制剂用在治疗疾病中的方法，对于疾病的进展，所述疾病依赖于由血管新生导致的新生血管的生成。

Description

德尼布林二盐酸盐

相关专利申请的交叉引用

本申请要求2011年7月29日递交的美国临时申请No.61/457,994的优先权，该美国临时申请的全部内容以引用的方式并入本文。

背景技术

本发明总体涉及小分子治疗学的领域，特别是涉及血管损伤剂或血管阻断剂，即氨基甲酸N-[6-[[4-[[(2S)-2-氨基-1-氧代丙基]氨基]苯基]硫基]-1H-苯并咪唑-2-基]甲酯二盐酸盐或德尼布林二盐酸盐（MN-029·2HCl）。由血管新生形成新生血管是许多疾病（如癌症、牛皮癣、风湿性关节炎、黄斑变性和动脉粥样硬化斑块）的产生和发展的关键病理学步骤。

在癌症领域，例如，肿瘤生长需要新生血管的形成来向生长中的肿瘤供应至关重要的营养和氧。所形成的血管组织还起到用于从肿瘤附近移走有毒的代谢副产物以及药物试剂的导管的作用。

因此，损伤或阻止新生血管的化合物可用在治疗上述疾病中。已知几种化合物及其药学上可接受的盐具有血管损伤性能。例如，这些试剂包括康普立停A1和康普立停A4（D.J.Chaplin等，BritishJ.Cancer27，S86-S88，1996）、康普立停A4磷酸盐（Dark等，CancerResearch57，1829-1834，1997）、康普立停A1磷酸盐（Holwell等，Proc.Amer.Assoc.CancerRes.41，1363，2000）、AC7700（Hori等，Jpn.J.CancerRes.90，1026-1038，1999）、秋水仙醇衍生物（Davis等，WO98/01977；和Davis等，WO00/40529）、苯并咪唑衍生物（Davis，WO00/41669）、黄酮乙酸（例如5,6-二甲基呫吨酮乙酸）（Zwi，Pathology，26，161-9，1994）、和秋水仙碱（Baguley等，EurJCancer27，482-7，1991）。

MN-029是已知的血管损伤剂，当前，该血管损伤剂正作为用于治疗癌症的候选治疗剂而测试。本发明集中于MN-029的二盐酸盐形式的探索，如在下文中的进一步的描述，该MN-029的二盐酸盐形式可用作治疗剂，且展示了某些超越MN-029的其他的盐形式的优点。本文描述MN-029的二盐酸盐形式的药学上可接受的组合物。本发明还涉及通过向有需要的对象施用本发明的MN-029的组合物或本发明的组合物与已知化学疗剂的组合、或结合放射和化学放射方案来治疗上述疾病的方法或本发明的组合物在治疗上述疾病中的用途。

发明内容

本发明针对MN-029的二盐酸盐以及其作为治疗剂的用途。在一个实施方式中，本发明提供了固体形式的MN-029二盐酸盐（MN-029·2HCl），可通过X射线粉末衍射（XRPD）迹线图样（或图谱）表征该MN-029二盐酸盐，所述迹线图样（或图谱）具有下列以2θ度数：15.01、20.98、21.49、22.52、23.15、24.27、25.80和26.57表示的峰。所要求保护的固体形式在其衍射图样中还显示了下列峰：11.10、15.9、18.03、21.25和27.43。

本发明的另一实施方式提供了一种包括MN-029二盐酸盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在这个实施方式的方面上，药物组合物被提供为冻干制剂。

本发明的又一实施方式提供了一种用于治疗哺乳动物中细胞增生性疾病的治疗方法，所述方法包括施用治疗有效量的作为血管靶向剂的MN-029二盐酸盐。细胞增生性疾病的示例包括但不受限于癌症、牛皮癣、风湿性关节炎、黄斑变性和动脉粥样硬化斑块。

本发明还提供了一种用于重建冻干的药物制剂的方法，所述冻干的药物制剂含有本发明的结构式2的化合物，所述方法包括向所述冻干的药物制剂加入有效量的药学上可接受的溶剂以制备溶液。该溶液适合于施用至需要治疗的病人。

附图说明

图1为MN-029的单盐酸盐形式和二盐酸盐形式的X射线粉末衍射图样。

图2为MN-029的单盐酸盐形式的偏振光显微图像。

图3为MN-029的二盐酸盐形式的偏振光显微图像。

图4为MN-029的单盐酸盐形式在水中的溶解度的曲线图和MN-029的二盐酸盐形式在水中和在柠檬酸溶液中的溶解度的曲线图。

图5为（A）MN-029的单盐酸盐和（B）MN-029的二盐酸盐的重量蒸汽吸附（GVS）等温线。

图6为进行了GVS的（A）MN-029的单盐酸盐样品和（B）MN-029的二盐酸盐样品的XRPD分析。

图7为（A）MN-029的单盐酸盐和（B）MN-029的二盐酸盐的差示扫描量热分析（DSC）和热重分析（TGA）。

图8为MN-029的二盐酸盐在水中的pH溶解度分布图。

图9为MN-029二盐酸盐在水中的pH。

图10为MN-029二盐酸盐在水中的克分子渗透压重量浓度。

图11为MN-029二盐酸盐在15%的羟丙基-β环糊精中的pH。

图12为MN-029二盐酸盐在15%的羟丙基-β环糊精中的克分子渗透压重量浓度。

具体实施方式

游离的氨基甲酸N-[6-[[4-[[(2S)-2-氨基-1-氧代丙基]氨基]苯基]硫基]-1H-苯并咪唑-2-基]甲酯的商品名是德尼布林或MN-029，其为市售的血管阻断剂（VDA），其结构在下文描述在结构式1中。

在下面示出了MN-029游离碱及其二盐酸盐的结构。

线路1

MN-029的游离碱（结构式1，登记号284019-34-7）、其单盐酸盐（登记号779356-64-8）和其双三氟乙酸盐（登记号931410-84-3）是已知的。然而，二盐酸盐是新颖的。因此，本发明集中于MN-029的二盐酸盐形式（MN-029·2HCl，结构式2）的制备、表征和用于治疗疾病的用途，所述疾病根源在于不受控制的细胞增殖和/或不想要的组织生长，如许多类型的实体瘤和癌症。

因此，根据一个实施方式，本发明利用不同的分析方法，包括但不受限于质子核磁共振光谱法（¹HNMR）、傅里叶变换红外光谱法（FT-IR）、光学显微镜法、差示扫描量热分析（DSC）、热重分析（TGA）和X射线粉末衍射（XRPD）图样，来表征MN-029·2HCl。因此，根据本发明的一方面，通过X射线粉末衍射光谱法（XRPD）表征本发明的MN-029·2HCl盐，根据以角度2θ表示的反射角，表示MN-029·2HCl的衍射的X射线峰特征。如在下文中进一步讨论的，利用CuKα₁作为X射线辐射源获得XRPD数据，且利用DiffracPlusEVA软件v11.0.0.2来分析和呈现所获得的数据。

在下文中，表1提供了对于MN-29的二盐酸盐所获得的2θ峰的列表，而出于比较的目的，表2提供了对于MN-029的单盐酸盐的2θ值的峰列表。

比较在表1和表2中的2θ值，显而易见的是，虽然某些峰的相对强度会变化，但相应的峰位置保持不变，进而可担当区分MN-029的二盐酸盐和相应的MN-029的单盐酸盐的标记。例如，在表1中的数据表明，下列2θ峰是MN-029二盐酸盐特有的：11.10、15.01、15.9、18.03、20.98、21.25、21.49、22.52、23.15、24.27、25.80、26.57和27.43。见下面的图1和表1。

表1

表2

角度/2θ°	强度/%
		17.47	84.6
17.89	23.6
		20.24	53.8
20.99	28.0
		21.51	23.3
22.61	40.9
		23.48	100.0
24.28	24.9
		24.84	58.4
25.80	87.2
		26.58	23.7
28.07	47.6
		28.93	61.8
30.83	26.6
		31.09	31.4
32.32	34.4
		32.60	33.5
33.92	28.3
		35.71	28.3
36.74	26.9
		37.49	23.6

德尼布林的作为血管损伤剂的活性使这种化合物成为用于治疗疾病状况的候选治疗剂，所述疾病状况对于疾病的生成和进展而言，需要由血管新生导致的新生血管的生成和进展。在本发明的上下文中，术语“血管阻断剂”或“血管损伤剂”或“血管靶向剂”可交换地使用，指的是能够损伤、切断、抑制脉管系统（例如癌症肿瘤）的生成或减缓其进展且能够引起中心坏死的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或前体药物。这样的疾病状态的示例包括但不受限于癌症、牛皮癣、风湿性关节炎、黄斑变性和动脉粥样硬化斑块。的确，已经报道了德尼布林可用作用于治疗晚期实体瘤的治疗剂。

然而，由于德尼布林（MN-029）的水溶性差，这种化合物的疗效在临床环境中已经受到了阻碍。然而，本发明通过提供MN-029的二盐酸盐，提高了水溶解度和生物利用度。为了评估MN-029·2HCl的改进的生理学性质是否实际上是由于MN-029的二盐酸盐与已知的MN-029的单盐酸盐相比的物理化学性质的不同而引起，本发明人利用各种分析方法进行了几种分析研究，以评估晶体形态的MN-029·2HCl和溶液中的MN-029·2HCl的稳定性、吸湿性、水溶解度和生物利用度。

表3例证了二盐酸盐的所测量的物理化学性质，且将其与相应的对于MN-029单盐酸盐的性质进行比较。然而，不受任何特定理论的限制，本发明人假定，MN-029·2HCl的物理化学性质的许多所观测到的差异可在提高MN-029·2HCl的生物利用度、疗效和生物分布的动力学上发挥作用。

不仅与单盐酸盐比较，还与被制备以确定每种盐的成为有效药物成分的潜能的三种其他的盐比较，MN-029的二盐酸盐的物理化学性质的有利本质呈现为得到证实。这些其它的盐形式为德尼布林的甲磺酸盐、丙二酸盐和硫酸盐。由于一种或多种原因，包括不稳定性、吸湿性和甚至在适度湿度下的潮解性，每种其它的盐形式被认为不适合于用在药物制剂中。相比之下，MN-029的二盐酸盐示出了在各种通常用在药物制剂中的溶剂中的较高的溶解度和稳定性，所述溶剂无一例外地包括水、缓冲剂（例如，柠檬酸盐缓冲剂）、聚乙二醇（PEG）、丙二醇、乙醇和吐温80。见图4。

表3

如表3所示，MN-029的二盐酸盐形式形成了长度达40μm的针状晶体颗粒，且表现出低的晶体团聚程度（见图3）。在任何团聚体完全被检测到的程度，这种团聚体具有80μm或更小的直径。在一个实施方式中，团聚直径大约为70μm，大约为60μm，大约为50μm，大约为40μm，大约为30μm，或大约为20μm。因此，与单盐酸盐比较，二盐酸盐未表现出单盐酸盐的不规则形状的晶体颗粒（直径达100μm），且未表现出对于单盐酸盐所观测到的明显的团聚，单盐酸盐具有直径达大约500μm的团聚体（见图2）。

根据本发明的MN-029二盐酸盐的样品的百分比计的结晶度优选为至少大约90%的晶体，更优选大约95%的晶体，更优选大约99%的晶体，最优选大约99%或100%的晶体。

图2和图3分别示出了MN-029的单盐酸盐和二盐酸盐的偏振光显微图像。从这些图中显而易见的是，MN-029的单盐酸盐具有不规则形状的晶体颗粒，单个晶体的直径达到或超过100μm。MN-029的单盐酸盐还具有较大的团聚倾向。典型地，如利用偏振光显微镜法观测到的，晶体团聚体的直径等于或大于500μm。

在MN-029的单盐酸盐和二盐酸盐的这些所观测到的单独晶体的尺寸和形态的差异和团聚行为的差异具有重要的生理学和制药学的处方寓意。例如，MN-029二盐酸盐晶体的晶体尺寸和形状的较高的均匀性和较小的尺寸提供了具有较快的、较一致的溶解动力学的较令人满意的最终的配方药剂。进而，改进的溶解动力学改善了药物的生物分布，可以提高药物的生物利用度，进而可以提高疗效。

对于MN-029·2HCl在体内的改进的生物分布和生物利用度的作用的支持为来自水溶解度研究的数据，该研究将MN-029二盐酸盐的pH分布图、溶解度、吸湿性和疏水：亲水分配系数（LogP）进行评估，且将其与单盐酸盐的相应参数进行比较。根据下文在表征部分中概述的步骤，获得MN-029的盐酸盐的溶解性测量。

简单地说，定量的高效液相色谱法（HPLC）用来确定水溶解度。X射线粉末衍射光谱法也被用来表征MN-029的单盐酸盐和二盐酸盐的热力学溶解度。每种盐形式在25℃的水中平衡24小时之后，将剩余固体物质与水溶液分离，然后测量水样品的pH。从MN-029二盐酸盐的小瓶中获得的固体剩余物的XRPD光谱表明了该固体物质为MN-029的单盐酸盐。这个结果可以表明，在实验的条件下，一些MN-029二盐酸盐可转化为相应的单盐酸盐，该单盐酸盐的可溶性较小、不容易溶解、即使在24小时的时段之后仍为悬浮的固体。表4示出了来自MN-029的单盐酸盐和二盐酸盐的水溶解度研究的数据。

表4

表4中的数据示出，MN-029·2HCl与相应的单盐酸盐相比，酸性较强，且其在水中的溶解度为相应的单盐酸盐的至少3倍。观测到，与MN-029的未被平衡的单盐酸盐的XRPD迹线比较，MN-029的单盐酸盐在25℃的水中平衡24小时之后获得的剩余物的XRPD分析示出，不存在谱图的变化。

不受任何特定理论限制，本发明人认为，二盐酸盐的增大的溶解度是由形成的溶液的较低的pH而增大的。即，MN-029的二盐酸盐的溶液的降低的pH提高了其水溶解度。为了测试这个推测，本发明人测量了MN-029二盐酸盐在含水柠檬酸中和不同pH值的柠檬酸盐缓冲液中的溶解度。通过向小瓶中的36.9mg和74.5mg的MN-029二盐酸盐加入10ml柠檬酸水溶液，来制备在含水柠檬酸中的二盐酸盐的两个样品。见表5。

表5

样品	柠檬酸的重量	水的体积	MN-029·2HCl的重量
				1	25.0mg	10ml	36.9mg
2	47.5mg	10ml	74.5mg

通过在25℃下振动而平衡12小时之后，对每个小瓶中的溶液的目测表明澄清无色的溶液，没有固体剩余物。因此，MN-029二盐酸盐在含水柠檬酸（4.75mg/ml）中的溶解度被计算为每毫升含水柠檬酸中有超过7.54mg的二盐酸盐。

为了研究MN-029二盐酸盐在柠檬酸盐缓冲液中的溶解度，二盐酸盐以多个小份被加入到10毫升的柠檬酸水溶液（3.87mg/ml）中。当不再有固体溶解时，即当获得饱和时，通过在25℃下振动，使小瓶中的溶液平衡大约24小时。在平衡之后，观测到，一些固体物质仍保持在小瓶中，表明MN-029二盐酸盐的溶液是饱和的。在过滤未溶解的固体之前，测量饱和溶液的pH。获得的滤液被相等地分到5个小瓶中。

向每个小瓶中的滤液加入不同体积的1M的氢氧化钠，以便将滤液的pH升高至预定的pH值。见表6。观测到，碱的加入使固体从溶液中沉淀析出。通过在25℃下振动使反应混合物平衡，在这之后，过滤固体剩余物，对于存在的溶解的化合物，通过HPLC分析所获得的滤液。

表6

样品	pH	溶解度（游离碱对应物，mg/ml）
			1	0.96	2.9
2	2.03	1.6
			3	3.23	0.039
4	5.57	<0.001
			5	8.55	悬浮液太稠而不能过滤

表6和图4示出了这个研究的结果。如通过滤液的HPLC分析的数据表明，MN-029二盐酸盐的溶解度依赖于pH。例如，在较低的pH值观测到最大的溶解度，随着溶液pH的增大，溶解度降低。表6中的数据的比较表明，在大约5.5的pH下，MN-029的二盐酸盐的溶解度大约为在大约1.0的pH值下的MN-029的二盐酸盐的溶解度的1/3000。

而且，如图4中的溶解度曲线所示，MN-029二盐酸盐的溶解度大于相应的单盐酸盐。而且，MN-029的二盐酸盐表现出在含水柠檬酸或柠檬酸盐缓冲液中的溶解度大于在水中的溶解度。

MN-029二盐酸盐可以以两种包含苯并咪唑环氮原子的互变异构的形式存在。见线路2。

MN-029具有伯氨基、仲氨基和叔氨基。因此，这些氨基的pKa应在水溶解度、稳定性和药代动力学中发挥作用。因此，本发明人将丙氨酰基和环氮原子的预测的pKa与它们的测量的pKa值比较，意外地发现对于苯并咪唑氮原子的测量的pKa值和预测的pKa值之间存在明显的差异。因此，如线路3所示，对于咪唑基的酸性>N-H基，在预测的pKa值和测量的pKa值之间存在大约6倍的差异。然而，对于碱性较强的环氮（–N=），在观测到的pKa值和预测的pKa值之间的差异为30倍。即，对于未质子化的环氮的碱性的测量值比预测值低的多。相比之下，对于丙氨酰基的氨基，在预测的pKa值和测量的pKa值之间没有观测到明显的差异。

碱性的这种差异会是有利的。例如，二盐酸盐性能是良好的，被发现至少与单盐酸盐一样稳定。此外，重力蒸汽吸附（GVS）等温线（图5）表明，MN-029的单盐酸盐和二盐酸盐都不是明显地吸湿的。然而，如对应于暴露于不同程度湿度下的样品的重量百分比变化的数据所示（表7），二盐酸盐示出较小的重量变化，这表明MN-029的二盐酸盐不如单盐酸盐吸湿。

表7

对于单盐酸盐和二盐酸盐，GVS等温线表明，增大湿度时所吸附的水分易于脱附，具有少许的或没有迟滞现象。而且，如通过对进行了GVS分析的样品的XRPD分析所测量的（见图6），MN-029的单盐酸盐和二盐酸盐均没有示出任何明显的相变。

对于MN-029的二盐酸盐的较大的热稳定性的其他证据来自MN-029单盐酸盐和MN-029二盐酸盐的差示扫描量热分析（DSC）和热重分析（TGA）。见图7。在DSC迹线中看到的吸热峰对应于样品的严重降解。然而，基于DSC吸热峰，对于MN-029的单盐酸盐或二盐酸盐，不存在从固相到液相的变化（熔化事件）的迹象。事实上，MN-029的单盐酸盐和MN-029的二盐酸盐在大约相同的温度下降解，其中，相比于MN-029的二盐酸盐，MN-029的单盐酸盐在稍微较高的温度下降解。见图7。当温度从大约25℃室温上升至大约110℃时，两个样品的降解伴随着非结合的溶剂的一些损失。单盐酸盐损耗溶剂的大约0.9%w/w，而二盐酸盐损耗非结合的溶剂的大约0.4%w/w。

药物的分布系数强烈地影响药物可多么容易地到达其在身体中的目标靶点、药物一旦到达其靶点将具有多强的作用、以及药物将以活性形式在身体中保持多久。分配系数（LogP）是用在药物化学中评定给定分子的“类药性”的一个标准。分配系数为未离子化的化合物在两种溶液、通常在辛醇和水之间的浓度比。logP值也被认为是化合物的亲油性的量度。

从制药学角度看，logP对药物的ADME性质（吸收、分布、代谢及排泄）具有强烈的影响。因此，化合物的疏水性是其“类药性”程度的主要决定因素。例如，当开发适合于口服递送的制剂时，考虑药物是否将首先通过在肠上皮中的脂质双层（称为转细胞运输的过程）是重要的。为了有效运输，药物必须是足够疏水的以分配到脂质双层中，然而，药物的疏水性不能使得，一旦药物在双层中，其将不再一次分配出来。同样地，疏水性在确定药物在吸收后分布在身体内何处上发挥主要的作用，因而，在药物多快地被代谢和排泄上发挥重要的作用。

大多数药物具有理想的logP值，任何与这个理想值的偏差导致吸收降低，药物到作用位置的运输减慢，因而生物活性下降。表8示出了对于MN-029二盐酸盐的分配系数的预测值和测量值。通过电位滴定法，利用SiriusGlpKa仪器，采用辛醇：调整了离子强度的水的三个比例，来采集数据，以生成LogP值、LogP_离子值和LogD值，利用RefinementPro软件V.1.0分析原始数据。利用ACDV.软件和SyracuseKOWWINV.1.67软件获得LogP的预测值。

表8

ACD预测的LogP	=	1.27
			Syracuse预测的LogP	=	2.30
测量的LogP	=	2.64
			测量的LogP离子（阳离子）	=	0.93
测量的LogD7.4	=	2.10

在晶体样品中，MN-029的游离碱（母体）与单盐酸盐的化学计量比、或MN-029的游离碱与MN-029的二盐酸盐的化学计量比通过标准电位滴定法，在SiriusGlpKa仪器上而确定。通过pH大约2至11的大约50%的甲醇共溶剂，滴定样品，利用RefinementPro软件1.0版精化数据。对于强酸性抗衡离子或强碱性抗衡离子，在精化中的酸度误差或碱度误差被用来估计化学计量。对于pKa范围在3至10的酸性抗衡离子或碱性抗衡离子，化学计量由抗衡离子相对于母体的浓度系数来计算。

在MN-029·2HCl盐中，母体与抗衡离子的化学计量比的范围是从大约1：1.8至1：2.0。在一个实施方式中，母体与抗衡离子的化学计量比为1：1.87。出于这个说明书的目的，“母体”指的是MN-029化合物，“抗衡离子”指的是氯化物抗衡离子。相应地，对于MN-029的单盐酸盐，母体与抗衡离子的化学计量比为1：1.03。这些结果符合预测值，且进一步提供了关于MN-029的单盐酸盐和二盐酸盐的特性的证实。

药物组合物和剂量

本发明的MN-029·2HCl盐被认为是有效的血管阻断剂。因此，认为其能够破坏新生的血管，而留下不受影响的正常的、成熟的血管。因此，该化合物或其组合物有效地作为针对疾病的治疗剂，在所述疾病中，由血管新生形成新生血管是疾病（如癌症、牛皮癣、风湿性关节炎、黄斑变性和动脉粥样硬化斑块）的产生和发展的关键病理学步骤。

因此，在一个实施方式中，本发明提供了包含线路1所示的MN-029的二盐酸盐和药学上可接受的载体的药物组合物。在一些实施方式中，根据药物复合的认可惯例，组合物还含有一种或多种额外的治疗剂、药学上可接受的赋形剂、稀释剂、佐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、保存剂、着色剂、缓冲剂、风味赋予剂。

本发明的化合物可作为唯一的疗法实施，或与其他治疗和治疗剂联合实施。通过同时给药另外的治疗剂，可进行共给药，即，在给药包含本发明的化合物的药剂之前、期间或之后，给药第二药剂。例如，对于治疗实体瘤，可以与放射治疗联合或与其他的抗肿瘤物质联合来给药本发明的化合物。示例性抗肿瘤化合物包括但不受限于：有丝分裂抑制剂，例如长春花碱、紫杉醇和多西紫杉醇；烷化剂，例如顺铂、卡铂和环磷酰胺；抗代谢物，例如5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷和羟基脲；嵌合剂，例如阿霉素和博莱霉素；酶，例如天冬酰胺酶（aspariginase）；局部异构酶抑制剂，例如依托泊苷、拓扑替康和伊立替康；胸苷酸合成酶抑制剂，例如雷替曲塞；生物应答调节剂，例如干扰素；抗体，例如依决洛单抗和抗EGFr、HER2受体或VEGF受体的抗体；抗激素，例如它莫西芬。

对于疾病的预防和治疗，化合物可作为就预期的给药途径和标准药学实践所选的药物组合物给药。这种药物形式可采取适合于口服、口腔含化给药、鼻腔给药、局部给药、直肠给药或肠胃外给药的方式，且可通过常规方式利用常规赋形剂来制备。例如，对于肠胃外注射（包括静脉注射、皮下注射、肌肉注射、血管注射或输液），组合物可采取例如无菌溶液、悬浮液或乳剂的形式。

适合于单位剂型的药物组合物包含在本发明的范围内，该单位剂型包含具有结构式II的化合物、其药学上可接受的立体异构体、前体药物、溶剂化物、水化物或互变异构体、和药学上可接受的载体。

适于口服使用的本发明的组合物可根据本领域已知的用于制造药物组合物的任何方法来制备。例如，本发明的化合物的液体制剂含有一种或多种选自甜味剂、增味剂、着色剂、增溶剂和保存剂的试剂，以便提供MN-029?2HCl的药学上清雅可口的制剂。

对于片剂组合物，与无毒的药学上可接受的赋形剂混合的有效成分用于制造片剂。这种赋形剂的示例包括但不受限于：惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；成粒剂和崩解剂，如玉米淀粉或藻酸；粘结剂，如淀粉、明胶或阿拉伯树胶；和润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可不被包衣，或利用任何已知的包衣技术包衣，以延迟在胃肠道（GI道）中的崩解和吸收，以便在期望的时间段中提供持续的治疗作用。例如，延迟时间的包衣材料（如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯）可被采用来将片剂包衣。

用于口服使用的制剂也可被呈现为硬明胶胶囊或软明胶胶囊，在硬明胶胶囊中，有效成分与惰性固体稀释剂（如碳酸钙、磷酸钙或高岭土）混合，在软明胶胶囊中，有效成分与水或油介质（如花生油、液体石蜡或橄榄油）混合。

对于含水悬浮液，本发明的化合物与适于维持稳定的悬浮液的赋形剂混合。这种赋形剂的例子包括但不受限于羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯树胶。

口服悬浮液还可含有分散剂或润湿剂，例如，天然存在的磷脂（如卵磷脂）、或氧化烯与脂肪酸的缩合产物（如硬脂酸聚氧乙烯酯）、或氧化乙烯与长链脂肪醇的缩合产物（如十七乙烯氧基十六醇）。其他示例性的分散剂或润湿剂包括通过氧化乙烯与脂肪酸和已糖醇或己糖醇酐的部分酯反应而获得的缩合产物，如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯或聚乙烯失水山梨醇单油酸酯。含水悬浮液还可含有一种或多种保存剂（如乙基对羟基苯甲酸酯或正丙基对羟基苯甲酸酯）、一种或多种着色剂、一种或多种增味剂、和一种或多种甜味剂（如蔗糖或糖精）。

可加入如上文提出的那些甜味剂、和增味剂，以提供可口的口服制剂。可通过加入抗氧化剂（如抗坏血酸）来保存这些组合物。

适合于通过加入水制备含水悬浮液的可分散的粉剂和颗粒剂与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种保存剂混合，而提供活性成分。适宜的分散剂或润湿剂和悬浮剂通过上文已提及的那些而例证。还可存在另外的赋形剂，例如甜味剂、增味剂和着色剂。

糖浆剂和酏剂可通过甜味剂（例如，甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖）配制。这样的制剂还可含有缓和剂、保存剂、和增味剂和着色剂。

药物组合物可以是无菌注射剂的形式。利用例如作为药学上可接受的缓冲液的无毒的肠胃外可接受的稀释液或溶剂、用于注射的无菌水、或其他已知的药学上可接受的溶剂，来制备无菌注射剂。在可接受的载体中，可采用的溶剂为药学上可接受的缓冲液、用于注射的无菌水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，注射剂可包括缓冲剂、增溶剂和其他药学上可接受的赋形剂，如脂肪酸、抗氧化剂、增味剂、保存剂和掩味剂。

适合于配制本发明的MN-029二盐酸盐的药学上可接受的载体包括但不受限于水、醇（如C2-10的脂肪醇或C3-8的环醇）、明胶、阿拉伯树胶、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、滑石、植物油、聚亚烷基二醇、凡士林、生理上可接受的缓冲剂（如柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂）。本发明的MN-029二盐酸盐的制剂还可含有但不受限于：羟丙基-β-环糊精、聚乙二醇-400（PEG400）和吐温80。一种或多种与药学上可接受的佐剂（如保存剂、稳定剂、润湿剂和乳化剂）结合的适当量的载体可被用来配制本发明的MN-029二盐酸盐。

因此，根据一个实施方式，通过用药学上可接受的溶剂载体重建包含MN-029*2HCl、其互变异构体、或互变异构体的混合物、和药学上可接受的赋形剂的冻干粉，来制备本发明的MN-029二盐酸盐的药物组合物。被加入以重建冻干粉的溶剂的量必须足以完全溶解粉剂，且产生澄清的溶液。根据所用的载体和药物在制剂中的浓度，重建成的制剂的最终体积可在大约2ml至大约10ml的范围内。

根据另一个实施方式，利用作为增溶剂的羟丙基-β-环糊精、作为缓冲剂的无水柠檬酸、作为pH调节剂的盐酸或氢氧化钠、和作为溶剂的无菌水，将MN-029·2HCl配制成注射剂。见表9。根据所用的载体和药物在制剂中的浓度，肠胃外制剂的最终体积可大于5ml。在一个实施方式中，肠胃外制剂的最终体积在大约1ml至大约10ml的范围内，例如，最终体积为大约2ml、大约3ml、大约4ml、大约5ml、大约6ml、大约7ml、大约8ml、大约9ml或大约10ml。

表9

^a相当于5.0mg/mL的作为游离碱的MN-029。

在上表9中所示的制剂的pH值为5.0，渗透压为365mOsm/kg，这点对于肠胃外给药是可兼容的，且在2℃至８℃之间的存储温度下，稳定时期大于2年。

本发明的化合物对于预防或治疗疾病所需的剂量将根据给药途径、病情的种类和严重程度、以及化合物将被单独递送还是与另一种药用活性剂联合递送而变化。因此，准确的剂量将通过实施医师来确定，但通常，日剂量范围可以是0.001mg/kg至10mg/kg，优选0.1mg/kg至6mg/kg。在一个实施方式中，以3mg/kg的剂量，例如，以3.5mg/kg、4.0mg/kg、4.5mg/kg、5.0mg/kg、5.5mg/kg、6mg/kg、6.5mg/kg、7.0mg/kg、7.5mg/kg、8.0mg/kg、8.5mg/kg、9.0mg/kg、9.5mg/kg、10mg/kg、10.5mg/kg、11mg/kg、11.5mg/kg、12mg/kg、12.5mg/kg、13mg/kg、13.5mg/kg、14mg/kg、14.5mg/kg或15mg/kg的剂量，注射MN-029二盐酸盐。

所给药的剂量还可根据患者的体表面积（BSA）来计算。因此，本发明包含注射制剂，该注射制剂给予活性药物成分MN-029的10mg/m²至400mg/m²的游离碱对应物。优选地，药物制剂将给予活性药物成分MN-029的50mg/m²至200mg/m²（如大约100mg/m²、120mg/m²、140mg/m²、146mg/m²、180mg/m²、200mg/m²、220mg/m²、240mg/m²、260mg/m²、280mg/m²或300mg/m²）的游离碱对应物。

适宜的剂量可作为一天一次单次剂量、或者可替选地作为全天的分次剂量，可选择地与食物一起，来进行给药。根据另一个实施方式，接受治疗的患者或对象接收日剂量的作为药学上可接受的制剂的MN-029*2HCl。可替选地，适宜的剂量作为一周一次单次剂量给药。根据这个实施方式的一方面，一周一次的剂量可被给药连续3至5周，然后停药1至2周，在此之后，一周一次的给药继续进行另外的连续3至5周。这种给药安排被维持一段持续时间，该持续时间由实施医师认为是适宜的且必要的。

实验

MN-029·2HCl的制备和表征

A.MN-029二盐酸盐的合成

可通过常规步骤，由MN-029的游离碱来制备本发明的MN-029·2HCl盐。例如，将MN-029游离碱悬浮在水中或水和适当的有机溶剂的混合物中，然后利用冰浴冷却悬浮液。向这个悬浮液中滴加两当量的浓盐酸。酸的加入促进了溶解，结果是溶液变得澄清。然后，在真空内，将反应混合物浓缩以析出MN-029·2HCl。通过过滤收集所获得的固体物质，然后干燥。

B.MN-029二盐酸盐的表征

通过XRPD表征固体物质。在西门子D5000衍射仪上，利用CuKα辐射（40kV，40mA）、θ-θ测角仪、自动的发散狭缝和接收狭缝、第二石墨单色器和闪炼计数器，来采集X射线粉末衍射图样。利用认证的刚玉标准（NIST1976）来检验仪器的性能。

处于环境条件下的样品利用收到的粉末制备成平板试样。大约35mg的样品被轻轻地装入被切割成抛光的零背景（5I0）的硅片中的空腔中。在分析期间，样品在其自身平面中旋转。数据采集的细节是：2θ范围2°至42°；步长0.05°2θ；每步4秒。在利用仪器评价软件（EVA）去除Kα2分量之后，利用CuKα1（λ=1.5406埃）记录衍射数据。利用WfN-INDEX，通过ITO法进行粉末图样的标引，利用WIN-METRIC精化原始晶格常数。

在替选的实施方式中，BrukerAXS/西门子D5000可变温度衍射仪（VTX）用于非环境条件下的XRPD分析。简单地说，处于非环境条件下的样品被装入配备有Pt100热电偶的不锈钢腔样品架中。利用与BrukerAXS/西门子D5000衍射仪连接的AntonPaarTTK450可变温度照相机来采集低温数据。用于低温扫描的仪器条件与上文所述的用于平板样品的条件相似。利用DiffracPlusXRDCommander软件v2.3.1进行所有XRPD分析。

在利用EVA去除Kα2分量之后，利用CuKα1（λ=1.5406埃）记录衍射数据，利用WININDEX，通过ITO法进行粉末图样的标引，利用WIN-METRIC精化原始晶格常数。

在又一实施方式中，在BrukerAXSC2GADDS衍射仪上，利用CuKα辐射（40kV，40mA）、自动化的XYZ平台、用于自动样品定位的激光视频显微镜和HiStar二维面积检测器，来采集X射线粉末衍射图样。X射线光学器件包括与0.3mm的针孔型准直仪联接的单一Gobel多层镜。光束发散度，即X射线束在样品上的有效尺寸大约为4111m。采用θ-θ型连续扫描模式，样品-检测器的距离为20cm，该距离使有效的2θ范围为3.2°至29.7°。典型地，样品将在X射线束下暴露120秒。

处于环境条件下的样品利用收到的粉末制备成平板试样，该粉末未经研磨。大约1mg至2mg的样品轻轻地压在载玻片上，以获得平的表面。处于非环境条件下的样品被安装在具有导热化合物的硅片上。然后，在数据采集开始之前，以大约20℃.min.^-1将样品加热到适宜的温度，随后，样品被恒温保持大约1分钟。

根据上文提出的参数所采集的XRPD数据具有小于±0.1°2θ的误差幅度。其他的分析技术，如¹H核磁共振光谱法和傅里叶变换红外光谱学法，也被用来表征MN-029·2HCl样品。

C.水溶解度研究

通过将足够的化合物悬浮在0.25mL的水中，以给出化合物的母体游离形式的大于或等于10mg/mL的最大的最终浓度，来确定水溶解度。在25℃下，使悬浮液平衡24小时，然后测量pH。过滤悬浮液，将滤液稀释101倍。参照标准溶液，通过HPLC量化。注入不同体积的标准的、稀释的和未稀释的溶液，通过对在与标准溶液中的理论峰相同时间出现的峰进行积分，来计算溶解度。

D.MN-029二盐酸盐根据pH的溶解度

制备缓冲液，使pH范围涵盖2至7。将重量为大约5毫克至10毫克的药物加入到HPLC小瓶中，该HPLC小瓶中加入有1.00mL适当缓冲液。使溶液简单地涡旋，然后在定轨摇床上摇动5天。由于在最初的通过MN-029的不同盐形式的制剂研究期间，已观测到平衡是缓慢的，故进行长时间的摇动。

由先前的缓冲液制备具有15%的HPBCD的缓冲液。将重量为1.5克的HPBCD加入到若干10mL容积的烧瓶中的每个烧瓶中。HPBCD被溶解在适当的缓冲液中，且通过该适当的缓冲液而稀释到一定体积。将重量为15毫克至20毫克的MN-029二盐酸盐加入到去了皮重的HPLC小瓶中。向二盐酸盐加入1.00mL的每种缓冲液，使溶液简单地涡旋，以溶解盐。将溶液在定轨摇床上放置5天。在表10中示出了溶解度结果，在图8中示出了在HPBCD不存在时药物的pH溶解度分布图。

表10

如表10中的数据所示，MN-029二盐酸盐在水缓冲液中的溶解度在pH为2时大约为6mg/mL，但在pH超过3时明显降低。含有HPBCD提高了溶解度，否定了溶解度依赖pH。例如，在15%的HPBCD存在下，在所测试的pH范围（pH2至pH6.9）中，MN-029二盐酸盐的溶解度大于20mg/mL。

E.MN-029二盐酸盐的克分子渗透压重量浓度和pH

通过称重MN-029二盐酸盐，加入到10mL容积的烧瓶中，来制备溶液。通过涡旋将药物溶解在水中，通过水将样品稀释到一定体积。根据这个步骤制成1mg/mL、2mg/mL、4mg/mL、6mg/mL和8mg/mL的溶液。在pH测量和克分子渗透压重量浓度测量之前，使样品在室温下静置过夜。

除了8mg/mL的溶液，所有的样品都是澄清的，该8mg/mL的溶液最初是澄清的，但经静置过夜而析出。如表10和图9和图10所示，随着药物浓度增大，pH以几乎线性的方式下降，而随着浓度一直到6mg/mL，克分子渗透压重量浓度线性地增大。

还对MN-029二盐酸盐在15%的羟丙基-β-环糊精（HPBCD）溶液中的溶液进行了pH和克分子渗透压重量浓度测量。制备5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL和30mg/mL的溶液，用于分析。通过称出适当量的化合物，将其加入到加入有1.00mL的15%的HPBCD的HPLC小瓶中，利用简单地涡旋，来制备溶液。尽管溶液在混合时是澄清的，但它们仍被在定轨摇床上摇动整夜，以确保平衡。在整夜的摇动之后，所有溶液仍是澄清的。浓度为15%的HPBCD足以溶解MN-029二盐酸盐，直到MN-029二盐酸盐的浓度达到30mg/mL。如表11和图11和图12所示，随着MN-029二盐酸盐浓度的增大，pH几乎线性地下降，而克分子渗透压重量浓度线性地增大。为清楚起见，在pH曲线（图9和图11）上的虚线将数据点连接，而在克分子渗透压重量浓度曲线（图10和图12）上的虚线是数据的线性回归，该数据被外推回到零药物浓度。

表11

利用ACDpKa预测软件v.9计算预测的pKa值。在SiriusGlpKa仪器上，利用D-PAS附件，采集真实的pKa值。在25℃下，在水溶液中通过UV（紫外线），在甲醇水混合物中通过电位测定法，来进行测量。通过0.15M的KCl水溶液调节滴定介质的离子强度。通过Yashuda-Shedlovsky外推法，在甲醇水混合物中得到的值被修正至0%共溶剂。利用RefinementPro软件v.1.0精化数据。实验性地或理论性地检测到MN-029二盐酸盐的互变异构体之间，pKa无差异。

Claims (7)

1.一种具有结构式2的化合物：

结构式2-MN-029*2HCl

所述化合物为固体形式，具有利用CuKα作为辐射源而获得的X射线粉末衍射图样，所述X射线粉末衍射图样显示了下列以2θ度数：15.01、20.98、21.49、22.52、23.15、24.27、25.80和26.57表示的峰。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述X射线粉末衍射图样还显示了下列以2θ度数：11.10、15.9、18.03、21.25和27.43表示的峰。

3.一种含有具有结构式2的化合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物：

结构式2-MN-029*2HCl，所述化合物为固体形式，具有利用CuKα作为辐射源而获得的X射线粉末衍射图样，所述X射线粉末衍射图样显示了下列以2θ度数：15.01、20.98、21.49、22.52、23.15、24.27、25.80和26.57表示的峰。

4.根据权利要求3所述的药物组合物，所述药物组合物为冻干制剂。

5.权利要求1所述的化合物的在制备治疗哺乳动物中细胞增生性疾病的药物中的用途，所述用途包括给药有效量的德尼布林二盐酸盐。

6.根据权利要求5所述的用途，其中，所述细胞增生性疾病选自癌症、牛皮癣、风湿性关节炎、黄斑变性和动脉粥样硬化斑块。

7.一种重建冻干的药物制剂的方法，所述冻干的药物制剂含有具有结构式2的化合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂，

结构式2-MN-029*2HCl

所述化合物为固体形式，具有利用CuKα作为辐射源而获得的X射线粉末衍射图样，所述X射线粉末衍射图样显示了下列以2θ度数：15.01、20.98、21.49、22.52、23.15、24.27、25.80和26.57表示的峰；且

所述方法包括向所述冻干的药物制剂加入有效量的药学上可接受的溶剂以提供溶液。