CN103834701A - 一种麦考酚酸的发酵工艺及培养基配比 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种麦考酚酸的发酵工艺及培养基配比。其特征是：(23±0.5)℃下培养190小时得孢悬液，孢悬液按2.5％接种量(24±0.5)℃摇瓶培养26小时得摇瓶种子液，摇瓶种子液按0.2％接种量(24±0.5)℃种子罐培养42小时得种子液，种子液按9.8％接种量(23±0.5)℃培养198小时得效价为13000～15000ug／ml麦考酚酸发酵液。由于采用上述技术方案，本发明解决了现有技术麦考酚酸发酵工艺及培养基配比中的缺陷：发酵总周期在21天以上且动力消耗较大以及麦考酚酸效价不高。因此，本发明提供的一种麦考酚酸的发酵工艺及培养基配比具有较大的工业化应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种工艺及配比，特别是一种麦考酚酸的发酵工艺及培养基配比。
背景技术
麦考酚酸是由青霉属菌株产生的抗真菌、抗肿瘤并具免疫抑制作用的抗生素。麦考酚酸的2-乙基酯类衍生物——吗替麦考酚酯是瑞士罗氏公司开发的第三代免疫抑制剂。10年(1995年-2005年)来，全球范围内已有超过59.3万例患者服用吗替麦考酚酯。2004年9月15日的新版《国家基本医疗保险和工伤保险药品目录》中，器官移植中使用的主要免疫抑制剂吗替麦考酚酯进入乙类目录。据IMS数据分析：2009年，吗替麦考酚酯、他克莫司、环孢素占据中国免疫抑制剂市场87％的份额。其中，吗替麦考酚酯的市场份额高达40％。麦考酚酸作为吗替麦考酚酯的前体化合物，研究及创新麦考酚酸的发酵工艺及培养基配比对于生产吗替麦考酚酯的企业来说十分重要。
工业上麦考酚酸的发酵工艺采用二级种子罐培养而后移种发酵罐，发酵总周期在21天以上，时间较长且动力消耗较大。另外，采用这种发酵工艺及培养基配比，放罐所得麦考酚酸的效价不到10000ug／ml，效价不高。
发明内容
本发明的目的就是为了解决上述现有技术存在的麦考酚酸发酵时间较长、动力消耗较大、效价不高而提供的一种麦考酚酸的发酵工艺及培养基配比。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
(1)将冷冻管孢悬液接种于斜面培养基，在(23±0.5)℃下培养190小时后，取1支斜面加入无菌水，制得孢悬液；
(2)将上述制得的孢悬液按摇瓶培养基2.5％的接种量接种于装有摇瓶培养基的种子摇瓶中，在(24±0.5)℃下培养26小时后得摇瓶种子液；
(3)将上述摇瓶种子液按种子罐培养基0.2％的接种量接种于装有种子罐培养基的种子罐中，在(24±0.5)℃下培养42小时后得种子液；
(4)将上述种子液按发酵罐培养基9.8％的接种量移入装有发酵罐培养基的发酵罐中，在(23±0.5)℃下培养198小时后放罐得麦考酚酸发酵液，所得麦考酚酸效价为13000～15000ug／ml；
(5)上述(1)中斜面培养基的组成及配比：葡萄糖1.5％(g／ml)、酵母浸出粉0.5％(g／ml)、麦芽浸出粉1％(g／ml)、碳酸钙0.2％(g／ml)、琼脂2％(g／ml)、微量元素0.1％(ml／ml)，溶剂为蒸馏水，pH值为6.8；
(6)上述(2)中摇瓶培养基的组成及配比：蔗糖2％(g／ml)、生豆粉0.95％(g／ml)、玉米浆粉0.8％(g／ml)、酵母浸出粉0.5％(g／ml)、磷酸二氢钾0.1％(g／ml)，硫酸镁0.1％(g／ml)，溶剂为蒸馏水，pH值为6.5；
(7)上述(3)中种子罐培养基的组成及配比：蔗糖3.5％(g／ml)、生米粉3％(g／ml)、酵母浸出粉0.96％(g／ml)、磷酸二氢钾0.1％(g／ml)，硫酸镁0.1％(g／ml)，溶剂为饮用水，pH值为6.5；
(8)上述(4)中发酵罐培养基的组成及配比：蔗糖2l％(g／ml)、氨基乙酸1.26％(g／ml)、甲硫氨酸0.045％(g／rnl)、磷酸二氢钾0.6％(g／ml)、微量元素0.1％(ml／ml)，溶剂为饮用水，pH值为4.5；
(9)上述(5)和(8)中微量元素的组成及配比：FeSO4·7H2O3.52％(g／ml)、CuSO4·5H2O4.8％(g／ml)、ZnSO4·7H2O38.4％(g／ml)、MnSO4·H2O1.92％(g／ml)，溶剂为蒸馏水，pH值为自然。
本发明提供的一种麦考酚酸的发酵工艺及培养基配比，与现有技术相比，主要具有如下优点和有益成果：
(1)与现有技术麦考酚酸的发酵工艺采用二级种子罐培养使发酵总周期在21天以上相比，本发明经种子罐培养后直接进发酵罐培养得麦考酚酸发酵液，将发酵总周期缩短至19天，同时动力消耗降低30％左右；
(2)与现有技术麦考酚酸的培养基配比相比，在现有技术麦考酚酸的发酵工艺下，所得麦考酚酸的效价不到10000ug/ml，本发明采用的麦考酚酸发酵工艺及培养基配比所得麦考酚酸效价为13000～15000ug／ml；
(3)与现有技术麦考酚酸发酵工艺及培养基配比相比，本发明采用的麦考酚酸发酵工艺及培养基配比可使麦考酚酸的批产量提高20％～40％。
麦考酚酸发酵总周期的缩短、动力消耗的降低、效价的提高以及麦考酚酸批产量的提高，极大地降低了麦考酚酸的生产成本，提高了企业的经济效益，同时也为患者带来更实惠的用药。因此，本发明提供的一种麦考酚酸的发酵工艺及培养基配比具有较大的工业化应用前景。
具体实施方式
下面通过实施例进一步详细说明本发明，但不以任何方式限制本发明的保护范围。
(1)将1支冷冻管孢悬液接种于3支斜面培养基，在23℃下培养190小时后，取1支斜面加入35ml无菌水，制得孢悬液；
(2)将上述制得的孢悬液2.5ml接种于装有100ml摇瓶培养基的种子摇瓶中，在24℃下培养26小时后得摇瓶种子液；
(3)将上述摇瓶种子液全部(100ml左右)接种于装有50L种子培养基的种子罐中，在24℃下培养42小时后得种子液；
(4)将上述种子液全部(50L左右)移入装有510L发酵罐培养基的发酵罐中，在23℃下培养198小时后放罐得麦考酚酸发酵液，所得麦考酚酸效价为14536ug／ml。
Claims (9)
1.一种麦考酚酸的发酵工艺及培养基配比，包括以下步骤：
(1)将冷冻管孢悬液接种于斜面培养基，在(23±0.5)℃下培养190小时后，取1支斜面加入无菌水，制得孢悬液；
(2)将上述制得的孢悬液按摇瓶培养基一定比例的接种量接种于装有摇瓶培养基的种子摇瓶中，在(24±0.5)℃下培养26小时后得摇瓶种子液；
(3)将上述摇瓶种子液按种子罐培养基一定比例的接种量接种于装有种子罐培养基的种子罐中，在(24±0.5)℃下培养42小时后得种子液；
(4)将上述种子液按发酵罐培养基一定比例的接种量移入装有发酵罐培养基的发酵罐中，在(23±0.5)℃下培养198小时后放罐得麦考酚酸发酵液，所得麦考酚酸效价为13000～15000ug／ml。
2.如权利要求书1所述的一种麦考酚酸的发酵工艺及培养基配比，其特征在于，所述步骤(1)中斜面培养基的组成及配比：葡萄糖1.5％(g／ml)、酵母浸出粉0.5％(g／ml)、麦芽浸出粉1％(g／ml)、碳酸钙0.2％(g／ml)、琼脂2％(g／ml)、微量元素0.1％(ml／ml)，溶剂为蒸馏水，pH值为6.8。
3.如权利要求书1所述的一种麦考酚酸的发酵工艺及培养基配比，其特征在于，所述步骤(2)中一定比例的接种量为：2.5％的接种量。
4.如权利要求书1所述的一种麦考酚酸的发酵工艺及培养基配比，其特征在于，所述步骤(2)中摇瓶培养基的组成及配比：蔗糖2％(g／ml)、生豆粉0.95％(g／ml)、玉米浆粉0.8％(g／ml)、酵母浸出粉0.5％(g／ml)、磷酸二氢钾0.1％(g／ml)，硫酸镁0.1％(g／ml)，溶剂为蒸馏水，pH值为6.5。
5.如权利要求书1所述的一种麦考酚酸的发酵工艺及培养基配比，其特征在于，所述步骤(3)中一定比例的接种量为：0.2％的接种量。
6.如权利要求书1所述的一种麦考酚酸的发酵工艺及培养基配比，其特征在于，所述步骤(3)中种子罐培养基的组成及配比：蔗糖3.5％(g／ml)、生米粉3％(g／ml)、酵母浸出粉0.96％(g／ml)、磷酸二氢钾0.1％(g／ml)，硫酸镁0.1％(g／ml)，溶剂为饮用水，pH值为6.5。
7.如权利要求书1所述的一种麦考酚酸的发酵工艺及培养基配比，其特征在于，所述步骤(4)中一定比例的接种量为：9.8％的接种量。
8.如权利要求书1所述的一种麦考酚酸的发酵工艺及培养基配比，其特征在于，所述步骤(4)中发酵罐培养基的组成及配比：蔗糖21％(g／ml)、氨基乙酸1.26％(g／ml)、甲硫氨酸0.045％(g/ml)、磷酸二氢钾0.6％(g／ml)、微量元素0.1％(ml／ml)，溶剂为饮用水，pH值为4.5。
9.如权利要求书2和8所述的微量元素0.1％(ml／ml)，其特征在于，所述的微量元素的组成及配比：FeSO4·7H2O3.52％(g/ml)、CuSO4·5H2O4.8％(g／ml)、ZnSO4·7H2O38.4％(g/ml)、MnSO4·H2O1.92％(g／ml)，溶剂为蒸馏水，pH值为自然。
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