CN103830214A

CN103830214A - 马齿苋生物碱单体化合物在制备抗肿瘤药物中的应用

Info

Publication number: CN103830214A
Application number: CN201410105531.7A
Authority: CN
Inventors: 赵庆春; 宋少江; 丁怀伟; 史国兵
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2013-02-22
Filing date: 2013-02-22
Publication date: 2014-06-04

Abstract

本发明公布了马齿苋生物碱单体化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其中所述马齿苋生物碱单体化合物是指橙黄胡椒酰胺。采用MTT[3-(4，5)-双甲基-2-噻唑-（2，5）-苯基溴化四氮唑蓝]法测定两种单体化合物对人肺腺癌细胞（A549）、人白血病细胞株（K562）的抑制活性。结果表明，这种单体化合物具有显著的抑制生长作用，因此说明橙黄胡椒酰胺这种单体化合物可以在制备抗肿瘤药物中应用。

Description

马齿苋生物碱单体化合物在制备抗肿瘤药物中的应用

技术领域：

本发明涉及一种马齿苋生物碱单体化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，属医药领域。

背景技术：癌症是危害人类健康的大敌。我国每年新发癌症病例约有160万人，每年死于癌症的约有130万人，全国因癌症而死亡的人数逐年上升，我国为肺癌、乳腺癌、肝癌等癌症的高发区域，癌症死亡率去居高不下。

在过去的半个世纪中，大量的科研力量致力于抗肿瘤药物的研究，同时也有一些有效的药物上市造福肿瘤患者，但是仍有许多急待解决的问题，如对肿瘤细胞的选择性抑制较差，一些抗肿瘤药物在治疗患者所患癌症的同时却引发新的肿瘤的形成。所以，目前寻找具有更高选择性、更低毒性的抗癌药物仍是研究的热点，所以本发明研究马齿苋生物碱单体化合物抗肿瘤活性旨在找出具有更好抗癌活性的新型药物。

马齿苋（portulaca oleracea L.）为马齿苋科马齿苋属植物，分布于全国各地，以及世界范围内的温带、亚热带、热带地区。资源丰富，来源广泛，无毒副作用。多以其干燥地上部分入药，性味酸、寒，具有清热解毒、凉血止血、止痢的功效，用于热毒血痢、湿疹、丹毒、蛇虫咬伤、便血、痔血和崩漏下血。近年来，国内外学者研究发现，马齿苋对人体具有多种药理作用，如抗癌、杀菌、降血脂、降血糖、抗动脉粥样硬化等。这些功效与其含有生物碱、去甲基肾上腺素、多糖、不饱和脂肪酸、黄酮类、强心苷和蒽醌苷等生物活性成分有关。

前期工作中，本课题组在马齿苋生物碱提取物中分离得到马齿苋酰胺B及橙黄胡椒酰胺，其中橙黄胡椒酰胺是首次在马齿苋植物中分离得到的单体化合物。其结构如下，但是到目前为止，这两种单体化合物的抗肿瘤活性及其作为抗癌药物的应用还未见文献报道。

发明内容：

本发明提供一种马齿苋生物碱单体化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，旨在寻找具有更好抗癌活性的新型药物。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

马齿苋生物碱单体化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：马齿苋生物碱单体化合物是指橙黄胡椒酰胺，其分子结构式分别为：

如上所述的马齿苋生物碱单体化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：橙黄胡椒酰胺对人肺腺癌细胞、人白血病细胞株均具有显著的抑制生长作用。

优点及效果：本发明采用MTT法测定从马齿苋中分离得到的马齿苋酰胺B及橙黄胡椒酰胺对人肺腺癌细胞（A549）、人白血病细胞株（K562）的抑制活性，结果表明两种单体化合物均具有显著的抑制生长作用，因此可以用于制备抗肿瘤的药物。本发明发掘了马齿苋酰胺B及橙黄胡椒酰胺新的药用前景，开拓了一个新的药用领域。

实施方式：

本发明通过以下实施例进一步详细说明本发明。

实施例1：马齿苋酰胺B及橙黄胡椒酰胺的提取分离及结构鉴定。

购买马齿苋药材（约100kg），用无水乙醇搅拌提取3次，每次1小时，回收乙醇，得黑色浸膏。在浸膏中加入10%硫酸溶解，过滤。用氨水调pH至10.0，加入饱和NaCl水溶液。二氯甲烷萃取，得二氯甲烷层，挥干得富含生物碱提取物浸膏。生物碱提取物浸膏经过反复硅胶色谱、Sephadex LH-20、ODS及制备液相等分离手段，结合理化性质和现代波谱学手段（UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR和2D-NMR）从中分离鉴定出两个单体化合物，分别是马齿苋酰胺B及橙黄胡椒酰胺。

实施例2：马齿苋酰胺B及橙黄胡椒酰胺体外抗肿瘤活性研究。

采用MTT法测定马齿苋酰胺B及橙黄胡椒酰胺对人肺腺癌细胞（A549）、人白血病细胞株（K562）的抑制活性。

（1）仪器与试剂：RPMI1640培养液、DMEM培养基购自Hyclone公司，胎牛血清为杭州四季青产品；CKX31型倒置显微镜（菲律宾奥林巴斯公司）；恒温CO2培养箱（美国Thermo公司）；5810R型台式高速低温离心机（德国Eppendorf公司）；全自动酶标仪（美国Biotek集团）。

（2）细胞培养：A549细胞培养于DMEM培养基（含10%胎牛血清），K562培养于1640培养基（含10%胎牛血清），37℃、含5%CO₂湿化恒温孵箱中培养。每2-3天传代一次。实验时取对数生长期细胞，0.4%台盼蓝鉴定细胞活性在98%以上。

（3）MTT法测定细胞活性：取对数生长期的A549、K562细胞，调整密度至1×10⁵/mL，接种于96孔板，100μL/孔，A549细胞培养12h后，K562细胞培养1h后，第一组，加入不同浓度的橙黄胡椒酰胺至终浓度分别为11.69、23.3、46.75、93.5、187、374μmol/L。第二组，加入不同浓度的马齿苋酰胺B至终浓度分别为8.79、17.5、35.17、70.3、140.7、281μmol/L。两组每个浓度设3个复孔，实验分为药物试验组（分别加入不同浓度的测试药）、阴性对照组（只加培养液和细胞，不加测试药），阳性对照组（加培养液和细胞，并加入阿霉素作为阳性对照药），调零组（只加培养液，不加细胞和测试药）。在37℃、5%CO2孵箱培养24h，每孔加5g/L的MTT20μL继续孵育4h，去上清液，然后每孔加入150μL DMSO振荡混匀15min，用酶标仪测定A490nm值，以A490nm间接反映存活细胞数量。据此可推测各浓度生物碱对细胞的抑制率。抑制率=(A对照组－A加药组)/A对照组×100%。各组实验均重复3次，实验数据用spass17.0统计分析。以阿霉素作为阳性对照。

测得的抑制率见表1所示：

表1

注:*p<0.01vs control，**p<0.001vs control.

结果表明：马齿苋酰胺B及橙黄胡椒酰胺均具有较好的抑制肿瘤生长活性，且在测定剂量范围内呈剂量依赖关系。

Claims

1.马齿苋生物碱单体化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：马齿苋生物碱单体化合物是指橙黄胡椒酰胺，其分子结构式分别为：

2.根据权利要求1所述的马齿苋生物碱单体化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：橙黄胡椒酰胺对人肺腺癌细胞、人白血病细胞株均具有显著的抑制生长作用。