CN103830116B - 藁本内酯在制备预防皮肤光老化护肤品的用途及使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了藁本内酯在制备预防皮肤光老化护肤品的用途及使用方法，在制备护肤品时，是以藁本内酯为活性成分，将其制备成粒径小于200nm的藁本内酯纳米脂质体或纳米乳液，其质量百分比浓度为0.01%‑10%。通过UVB诱导皮肤角质细胞模型试验，考察了藁本内酯对UVB诱导皮肤角质细胞光老化关键基因的表达影响，试验结果表明，本发明可有效抑制胶原蛋白的降解及细胞炎症反应，达到预防皮肤光老化的效果；藁本内酯广泛存在于当归根挥发油或川芎根挥发油中，可以通过直接添加藁本内酯或间接含有藁本内酯的当归油或川芎油于预防皮肤光老化护肤品中。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及藁本内酯在制备预防皮肤光老化护肤品的用途及使用方法。
背景技术
皮肤光老化是指皮肤反复暴露于太阳紫外线中而引起的皮肤过早老化。急性暴露在太阳光紫外线可导致晒伤（红斑），免疫系统的抑制，DNA损伤和结缔组织的降解，长期慢性的紫外线照射会造成皮肤光老化，进而引发皮肤癌。随着环境的恶化、臭氧层的减少，太阳光中照射地面的紫外线辐射量逐渐增强，人类皮肤光老化现象日益严重，皮肤癌发生率逐年增加，严重威胁人类皮肤健康。
受体蛋白质酪氨酸磷酸酶-kappa（receptor protein tyrosine phosphatase-kappa，RPTP-κ）可以特定、直接去磷酸化表皮生长因子受体（Epidermal Growth FactorReceptor,EGFR），使EGFR和RPTP-κ之间的形成平衡。当皮肤受到紫外线的照射后，产生了高浓度的活性氧自由基(Reactive Oxygen Species,ROS)，使RPTP-κ氧化而失去活性，改变EGFR和RPTP-κ之间的平衡，导致EGFR磷酸化，引起系列下游信号通路的激活。EGFR参与调节细胞增殖、抗细胞凋亡、迁移和血管生成等多个生物过程，在维持皮肤正常功能发挥非常常重要的作用，但其调控异常会导致肿瘤发生，众多癌症研究结果证明了抑制EGFR可以治疗癌症。EGFR是否磷酸化决定了其是否处于活化功能状态，而EGFR既可以在配体结合的情况下被激活，也能够自我激活。EGFR的活化引起一系列的信号通路的激活（称为哺乳动物的紫外线反应），包括下游丝裂原活化蛋白激酶（MAP激酶），磷脂酰肌醇3-kinase/Akt（PI-3激酶/Akt）及磷脂酶C/蛋白激酶C（PLC/PKC）通路的激活。因此，这些信号转导途径的转录因子和它们的靶基因，包括诱导皮肤组织中转录因子激活蛋白含量（AP-1）和基质金属蛋白酶（MMPs）表达增高，特异性降解真皮中的主要由胶原蛋白和弹性纤维组成的细胞外基质，引发皮肤弹性丧失，色素沉着和皱纹的产生。RPTP-κ负调控EGFR信号传导，抑制EGFR失控而产生的癌变，具有抑制癌症的功能。因此，RPTP-κ在紫外线引起的皮肤光老化及皮肤癌的预防及治疗中发挥重要的作用。另外ROS还可以活化肿瘤坏死因子受体(Tumor NecrosisFactor Receptor,TNFR)和白细胞介素-1受体(Interleukin Receptor,IL-1R),激活核因子kB（Nuclear factor kB，NF-kB)信号通路，刺激前炎症细胞因子（IL-1，TNF-α，IL-6）等基因的转录，引起皮肤组织炎症反应。然而IL-1以及TNF-α等细胞因子的受体活化后，p38MAPK和JNK信号通路被激活，进而上调c-Jun表达，促进c-Jun与c-fos结合成转录因子AP-1调节MMPs表达。
通过转录因子AP-1的作用来调控MMPs的表达，MMPs金属基质蛋白酶直接作用于胶原蛋白为主的细胞外蛋白基质成分,细胞外基质成分被降解，直接造成皮肤松弛、皱纹形成等光老化改变。MMPs家族包括金属基质蛋白酶MMP-1(胶原蛋白酶)，MMP-3（基质降解酶）和MMP-9（白明胶酶）。MMP-1降解I、II和III型胶原蛋白，MMP-9降解IV、V胶原蛋白，而MMP-3则有更广泛的底物特异性，它可以降解多种类型的胶原蛋白及基质分子，如蛋白多糖、层粘连蛋白和纤维连接蛋白。
因此，通过活性物干预，调控EGFR、IL-1R及TNFR活性，抑制AP-1信号通路（MMP1、MMP3及MMP9）及NF-kB（TNF-α、IL-6及IL-1）信号通路的表达，抑制胶原蛋白的降解及细胞炎症反应，进而达到预防皮肤光老化的效果。
藁本内酯是当归、川芎等传统中药的主要有效成分之一，具有较强的药理作用，是一个极具开发价值的化合物，也是目前评价当归、川芎等药材及制剂质量的重要依据之一。根据文献报道，藁本内酯具有以下药理作用：1）、对心脑血管、循环系统及免疫功能等均有较强的药理作用；2）、对动脉粥样硬化、脉管炎和脑血栓等心脑血管疾病有防治作用，并有很强的解痉、平喘、镇定作用；3）、具有良好的改善微循环作用，可用于防治与微循环障碍有关的疾病；4）、抑制平滑肌增殖，并对平滑肌有明显松弛作用，可用于治疗眼睛疲劳等。
发明内容
本发明的目的是提供一种藁本内酯的新用途及其使用方法，特别是提供其在制备预防皮肤光老化的护肤品中的新用途及其使用方法。
本发明提供的藁本内酯的新用途是在制备预防皮肤光老化护肤品中的应用。
本发明所述的藁本内酯用于制备预防皮肤光老化护肤品的使用方法，其特征在于：以藁本内酯为活性成分，将其制备成粒径小于200nm的藁本内酯纳米脂质体或纳米乳液；所述的藁本内酯在预防皮肤光老化护肤品中的质量百分比浓度为0.01%-10%。
优选地，本发明所述的藁本内酯在预防皮肤光老化护肤品中的质量百分比浓度为0.1%-5%。
本发明所述的藁本内酯为中药当归根或川芎根提取物单体成分，在制备预防皮肤光老化的护肤品的应用中，可以直接添加藁本内酯，也可以添加含有藁本内酯的当归根提取物当归油或川芎根提取物川芎油。
本发明所述的制备预防皮肤光老化的护肤品所用的藁本内酯，通过调控UVB诱导皮肤角质细胞的EGFR、IL-1R及TNFR活性，抑制细胞中AP-1信号通路中MMP1、MMP3及MMP9和NF-kB信号通路中TNF-α、IL-6及IL-1mRNA的表达，抑制胶原蛋白的降解及细胞炎症反应，达到预防皮肤光老化的作用。
本发明提供的预防皮肤光老化的藁本内酯，来源于中药挥发油，，试验结果表明，藁本内酯可有效抑制胶原蛋白的降解及细胞炎症反应，达到预防皮肤光老化的效果，其优点是：①来源于天然，安全无刺激，且水溶性高；②具有有效的抑制UVB诱导皮肤角质细胞的光老化效应，可广泛用于抗光老化的皮肤护理产品；③藁本内酯脂质体或纳米乳液可以提高藁本内酯的皮肤渗透性，增强皮肤生物利用率。
具体实施方式
本发明提供了一种藁本内酯在制备预防皮肤光老化的护肤品中的应用，在制备预防皮肤光老化的护肤品中，本发明是以藁本内酯为活性成分，将其制备为粒径小于200nm的藁本内酯纳米脂质体或纳米乳液；所述的藁本内酯在预防皮肤光老化护肤品中的质量百分比浓度为0.01%-10%；藁本内酯在预防皮肤光老化护肤品中的优选质量百分比浓度为0.1%-5%。
下面将通过实施例对本发明进行详细描述，但是，下列实施例仅用于说明本发明而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。
实施例1：藁本内酯抗光老化试验
将一支购买的人角化细胞复苏后，扩增培养，生长3代，取直径6cm的培养皿中一半的细胞传至24孔培养板，剩下的细胞保种冻存。待24孔培养板中细胞贴壁生长密度达到60%后，分组为阴性对照组、阳性对照组（全反式维甲酸）及实验组（0.5%藁本内酯溶液），分别在阳性对照组及实验组加入药物，共同培养24hr，24hr后，部分对照组及实验组吸去培养基加入Trizol500ul用于提取总RNA分析，吹打转移到离心管冻至-20℃，另一部分对照组及试验组，移去培养基，再加入PBS，UVB紫外处理，剂量为30mj/cm2，最后再还原为阴性对照组、阳性对照组及实验组的条件继续培养，8hr后各加Trizol500ul用于提取总RNA分析。通过Real-time PCR技术定量AP-1、NF-κB信号通路中c-fos、c-jun、IL-β1、IL-6、IL-8、
TNF-α、MMP1、MMP3、MMP9等mRNA的表达量的变化，如表1。
表1藁本内酯抑制UVB诱导细胞因子mRNA基因表达的影响
由表1可知，0.5%的藁本内酯可以有效的抑制UVB诱导角质细胞因子的表达，具有预防皮肤光老化的效果。
实施例2：抗光老化乳液的制备
本实施例中，乳液配方如下：
(A)：
(B)：
硬脂酰谷氨酸钠 0.20%
去离子水 to100%
(C)：
黄原胶 0.50%
甘油 6.00%
(D)：
双（羟甲基）咪唑烷基脲 0.30%
羟苯甲酯 0.20%
羟苯丙酯 0.10%
制备方法：分别将A、B相加热到80-85度使其完全溶解，然后A相加入B相进行均质，同时将混合均匀的C相加入，均质5-10min,均质结束后在水浴锅中边搅拌边保温30min，然后降温至50度以下时将D相中其他物质加入，搅拌均匀，冷却至室温即得。
实施例3：抗光老化保湿水的制备
本实施配方如下：
制备方法：依次将上述原料加入灭菌去离子水中，边加入边搅拌，直至透明即得。
实施例4：抗光老化乳液的制备：
(A)：
(B)：
1，3-丁二醇 3.00%
丙烯酸二甲基牛磺酸铵/vp共聚物 0.50%
(C)：
聚二甲基硅氧烷交联聚合物 1.00%
聚二甲基硅氧烷 3.00%
(D)：
丙烯酰胺/丙烯酰基二甲基牛磺酸钠聚合物/异十六烷/聚山梨醇酯80 0.9%
(E)：
甘油 3.00%
去离子水 to100%
(F)：
制备方法：将A相和E相分别加热到80-90度，然后把A加入B中进行均质，同时将B、C和D加入，均质5-10min,均质完成后边搅拌边保温30min，降温至50度时分别将F相其他原料加入，搅拌均匀，降温至室温即得。
实施例5：抗光老化纳米乳液的制备
制备方法:将上述组分一次加入水中即可。
Claims (1)
1.藁本内酯作为唯一活性成分在制备预防皮肤光老化的护肤品中的应用，其特征在于：以藁本内酯为活性成分，将其制备成粒径小于200nm的藁本内酯纳米脂质体或纳米乳液；所述的藁本内酯在预防皮肤光老化护肤品中的质量百分比浓度为0.1％-5％；通过抑制胶原蛋白的降解及细胞炎症反应，达到预防皮肤光老化的作用。
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