一种预防皮肤光老化功能制剂及其应用
技术领域
本发明涉及化妆品领域,具体涉及一种包含积雪草总三萜的预防皮肤光老化功能制剂及其应用。
背景技术
皮肤光老化是指皮肤反复暴露于太阳紫外线中而引起的皮肤过早老化。在日常生活中,随着环境的不断恶化、臭氧层不断减少,导致太阳光中照射地面的紫外线辐射量逐渐增强,从而使得人类皮肤光老化现象日益严重。从暴露程度来看,急性暴露在太阳光紫外线下一般可导致晒伤(红斑)、免疫系统的抑制、DNA损伤和结缔组织的降解;而长期慢性的紫外线照射则会造成程度更高的皮肤光老化,严重的进而引发皮肤癌。
研究表明,真皮层胶原蛋白含量的减少和结构的破坏,是导致皮肤老化的一个重要原因之一。I型胶原蛋白(CollagenI)是胶原纤维的主要生化成分,它由成纤维细胞分泌,于细胞外聚合成胶原原纤维,再经少量黏合成胶原纤维。而胶原纤维作为皮肤真皮的主要组成部分之一,其含量与皮肤皱纹、松弛等老化特征具有直接的关系。
当皮肤受到紫外线的照射后,产生高浓度的活性氧自由基(ReactiveOxygenSpecies,ROS),引起系列下游信号通路的激活--通过转录因子AP-1的作用来上调MMPs的表达(MMPs家族包括金属基质蛋白酶MMP-1(胶原蛋白酶),MMP-3(基质降解酶)和MMP-9(白明胶酶)),MMPs金属基质蛋白酶直接作用于胶原蛋白为主的细胞外蛋白基质成分,细胞外基质成分被降解,直接造成皮肤松弛、皱纹形成等光老化改变:MMP-1降解I、II和III型胶原蛋白,MMP-9降解IV、V胶原蛋白,而MMP-3则有更广泛的底物特异性,它可以降解多种类型的胶原蛋白及基质分子,如蛋白多糖、层粘连蛋白和纤维连接蛋白。另外,ROS还可以激活核因子kB(NuclearfactorkB,NF-kB)信号通路,刺激前炎症细胞因子(IL-1,TNF-α,IL-6)等基因的转录,引起皮肤组织炎症反应。
因此预防胶原蛋白及基质分子的降解以及促进胶原蛋白及基质的合成成为抗衰老护肤产品的配方开发的关键所在。
积雪草CentellaasiaticaL.为伞形科积雪草属植物,别名崩大碗、马蹄草、雷公根、老虎草等,在我国已经有两千多年的使用历史,主要用于清热利湿、消肿解毒、湿热黄疸、痈肿疮毒、跌打损伤等病症。现代药理学研究表明,积雪草提取物具有较强的中枢神经抑制作用及抗胃溃疡、抗癌、抗炎、增强记忆、改善心脑血管、促进伤口愈合等多种药理作用。积雪草中的三萜皂苷(积雪草苷、羟基积雪草苷)在促进皮肤成纤维细胞分泌胶原蛋白的作用,越来越受到关注,并已开始在化妆品中得到应用。
辅酶Q10(CoQ10)是一种醌环类化合物,具有长的异戊二烯侧链,易溶于氯仿、苯和四氯化碳,溶于丙酮、石油醚和乙醚,微溶于乙醇,不溶于水和甲醇。辅酶Q10的生物活性主要来自于其醌环的氧化还原特性和其侧链的理化性质,具有延缓衰老、保护皮肤的作用。随着年龄的增加,皮肤胶原蛋白抵御紫外线等氧化刺激物损伤的能力下降,而长期使用辅酶Q10能够有效防止皮肤光衰老,减少皱纹。
中国专利文献CN103520081B公开了一种调节皮肤免疫力、延缓皮肤老化的外用护肤品,其采用辅酶Q10包裹物、积雪草提取物、仙桃仙人掌茎提取物、红景天提取物、雪莲提取物、三七提取物、当归提取物包裹物等制成,具有调节免疫力、延缓皮肤老化的作用。但是,其并没有解决积雪草提取物难溶于水及油,生物利用度低的问题,且药用成分复杂,生产成本高。
发明内容
因此,本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中药物生物利用度低的缺陷,从而提供一种预防皮肤光老化功能制剂及应用。
为此,本发明提供一种预防皮肤光老化功能制剂,所述预防皮肤光老化功能制剂包含积雪草总三萜,积雪草总三萜由积雪草三萜皂苷与积雪草三萜酸组成,积雪草三萜皂苷与积雪草三萜酸质量比为1:1~5:1。
优选的,所述积雪草总三萜中积雪草三萜皂苷与积雪草三萜酸质量比为3:1~1:1。
优选的,所述积雪草三萜皂苷为积雪草苷与羟基积雪草苷中的一种或两种,积雪草三萜酸为积雪草酸与羟基积雪草酸中的一种或两种。
优选的,所述积雪草总三萜制成积雪草总三萜磷脂复合物。
优选的,所述积雪草总三萜磷脂复合物中积雪草总三萜与磷脂的质量比为1:2~1:5。
优选的,所述预防皮肤光老化功能制剂还包含辅酶Q10纳米乳液。
优选的,所述预防皮肤光老化功能制剂中辅酶Q10纳米乳液的质量百分比为40%~80%,积雪草总三萜磷脂复合物的质量百分比为2%~10%。
优选的,所述辅酶Q10纳米乳液粒径小于200nm,辅酶Q10纳米乳液中辅酶Q10的质量百分比为2.5%~10%。
本发明还提供一种预防皮肤光老化功能制剂在在抗衰老化妆品中的应用。
优选的,所述预防皮肤光老化功能制剂的质量百分比为0.1%~5%。
本发明技术方案,具有如下优点:
1.本发明提供的预防皮肤光老化功能制剂,通过对积雪草总三萜成分进行选择和配比,并运用磷脂复合技术制备积雪草总三萜磷脂复合物,既提高了积雪草总三萜的脂溶性,又能增强积雪草总三萜的透皮吸收,具有显著的抗光老化效果。
2.本发明提供的预防皮肤光老化功能制剂,积雪草总三萜磷脂复合物中积雪草三萜皂苷和积雪草三萜酸进行协同复配,相比单独使用三萜皂苷或三萜酸时,可以更有效提高其促进人皮肤成纤维细胞分泌I型胶原蛋白的合成。
3.本发明提供的预防皮肤光老化功能制剂,通过辅酶Q10纳米乳液与积雪草总三萜磷脂复合物复配使用,运用纳米技术辅酶Q10制备成粒径小于200nm的辅酶Q10纳米乳液,通过降低辅酶Q10的粒径显著提高了辅酶Q10抑制紫外线诱导角质细胞引起的金属基质蛋白酶及相关炎症因子的表达,从而更有效的抑制皮肤胶原蛋白的降解及皮肤炎症反应,同时还能促进辅酶Q10的透皮生物利用率。
因此,本发明提供的预防皮肤光老化功能制剂,能够防止胶原蛋白的降解及炎症反应,促进胶原蛋白的合成,并且运用了纳米技术及磷脂复合物技术相结合,显著提高了该制剂的生物效能,可应用于抗衰老化妆品中。
具体实施方式
实施例1积雪草总三萜磷脂复合物的制备
称取10g积雪草总三萜(积雪草三萜皂苷与积雪草三萜酸质量比为3:1)、30g大豆卵磷脂及150g无水乙醇放入烧杯中,在60℃条件下搅拌溶解,将所得到的积雪草总三萜磷脂乙醇溶液在40℃条件下减压蒸馏4h去除乙醇,形成积雪草总三萜磷脂复合物。
实施例2积雪草总三萜磷脂复合物的制备
称取10g积雪草总三萜(积雪草三萜皂苷与积雪草三萜酸质量比为4:1)、40g大豆卵磷脂及150g无水乙醇放入烧杯中,在60℃条件下搅拌溶解,将所得到的积雪草总三萜磷脂乙醇溶液在40℃条件下减压蒸馏4h去除乙醇,形成积雪草总三萜磷脂复合物。
实施例3积雪草总三萜磷脂复合物的制备
称取10g积雪草总三萜(积雪草三萜皂苷与积雪草三萜酸质量比为5:1)、50g大豆卵磷脂及150g无水乙醇放入烧杯中,在60℃条件下搅拌溶解,将所得到的积雪草总三萜磷脂乙醇溶液在40℃条件下减压蒸馏4h去除乙醇,形成积雪草总三萜磷脂复合物。
实施例4积雪草总三萜磷脂复合物的制备
称取10g积雪草总三萜(积雪草三萜皂苷与积雪草三萜酸质量比为4:1)、20g大豆卵磷脂及150g无水乙醇放入烧杯中,在60℃条件下搅拌溶解,将所得到的积雪草总三萜磷脂乙醇溶液在40℃条件下减压蒸馏4h去除乙醇,形成积雪草总三萜磷脂复合物。
实施例5辅酶Q10纳米乳液的制备
称取2g大豆卵磷脂、81g甘油和12g的去离子水在60℃搅拌形成均一混合液,然后向混合液中加入60℃的2.5g辅酶Q10搅拌,且12000rmp的高剪切均质机剪切3min形成均一的辅酶Q10乳液,最后将该乳液在250bar压力条件下经过高压均质机循环1次处理即得到大粒径辅酶Q10纳米乳液(经激光粒度仪测定其粒约为344nm),然后继续将该大粒径辅酶Q10纳米乳液继续在750bar压力条件下经过高压均质机再循环1次即可得到中等粒径的辅酶Q10纳米乳液(经激光粒度仪测定其粒约为185nm),最后将该中等粒径的辅酶Q10纳米乳液继续在800bar压力条件下经过高压均质机再循环3次即可得到小粒径的辅酶Q10纳米乳液(经激光粒度仪测定其粒约为77nm)。
实施例6预防皮肤光老化功能制剂的制备
称取2g积雪草总三萜磷脂复合物(积雪草三萜皂苷与积雪草三萜酸质量比为2:1)、80g辅酶Q10纳米乳液(辅酶Q10的质量含量为2.5%,粒径为77nm)以及18g去离子水加入250ml烧瓶中,13000rmp条件下高速剪切2min,然后再通过高压均质机800bar均质3个循环,形成预防皮肤光老化功能制剂。
实施例7预防皮肤光老化功能制剂的制备
称取10g积雪草总三萜磷脂复合物(积雪草三萜皂苷与积雪草三萜酸质量比为3:1)、45g辅酶Q10纳米乳液(辅酶Q10的质量含量为5%,粒径为86nm)以及45g去离子水加入250ml烧瓶中,13000rmp条件下高速剪切2min,然后再通过高压均质机800bar均质3个循环,形成预防皮肤光老化功能制剂。
实施例8预防皮肤光老化功能制剂的制备
称取8g积雪草总三萜磷脂复合物(积雪草三萜皂苷与积雪草三萜酸质量比为2:1)、60g辅酶Q10纳米乳液(辅酶Q10的质量含量为2.5%,粒径为77nm)以及32g去离子水加入250ml烧瓶中,13000rmp条件下高速剪切2min,然后再通过高压均质机800bar均质3个循环,形成预防皮肤光老化功能制剂。
实施例9预防皮肤光老化功能制剂的制备
称取5g积雪草总三萜磷脂复合物(积雪草三萜皂苷与积雪草三萜酸质量比为5:1)、60g辅酶Q10纳米乳液(辅酶Q10的质量含量为10%,粒径为84nm)以及35g去离子水加入250ml烧瓶中,13000rmp条件下高速剪切2min,然后再通过高压均质机800bar均质3个循环,形成预防皮肤光老化功能制剂。
实施例10含有预防皮肤光老化功能制剂抗衰老化妆品配方
化妆品配方一:将预防皮肤光老化功能制剂以常规技术,添加常规辅料制成抗衰老霜,其中所述预防皮肤光老化功能制剂中辅酶Q10纳米乳液质量含量为80%,积雪草总三萜磷脂复合物质量含量为2%,且积雪草三萜皂苷和三萜酸的质量比为3:1。
化妆品配方二:将预防皮肤光老化功能制剂以常规技术,添加常规辅料制成抗衰老乳液,其中所述预防皮肤光老化功能制剂中辅酶Q10纳米乳液质量含量为60%、积雪草总三萜磷脂复合物质量含量为6%,且积雪草三萜皂苷和三萜酸的质量比为5:1。
化妆品配方三:将预防皮肤光老化功能制剂以常规技术,添加常规辅料制成抗衰老精华液,其中所述预防皮肤光老化功能制剂中辅酶Q10纳米乳液质量含量为40%、积雪草总三萜磷脂复合物质量含量为10%,且积雪草三萜皂苷和三萜酸的质量比为2:1。
实验例1积雪草三萜皂苷刺激胶原蛋白合成
(1)实验方法:正常的人皮肤成纤维细胞分别以适宜的密度接种于细胞培养板,用0.25%胰蛋白酶消化细胞,然后用含体积百分比为10%的胎牛血清的DMEM培养液配成单细胞悬液,以每孔1×105个接种于96孔板或细胞培养皿(30mm)中,贴壁过夜,弃上清液。然后加入不含胎牛血清的DMEM培养基,饥饿培养24h,同步化处理各组细胞,于5%CO2、37℃温箱中培养。
实验分未经处理的空白对照组,以及5个处理组,分别为处理组1的积雪草苷50ug/ml,处理组2的羟基积雪草苷50ug/ml,处理组3的积雪草苷25ug/ml和羟基积雪草苷25ug/ml,处理组4的积雪草苷25ug/ml和积雪草酸25ug/ml,处理组5的积雪草苷25ug/ml和羟基积雪草酸25ug/ml,5个处理组都用不含胎牛血清的DMEM培养基进行配制。细胞饥饿处理后,分别添加活性成分进行处理,并设置对照组,分别设置6个复孔,培养48h后,上清液离心,按照I型前胶原蛋白含量检测试剂盒(ProcollagenTypeIC-Peptide(PIP)EIAKit)说明书,检测上清液中I型前胶原蛋白含量。
(2)实验结果:基于定量结果,以空白对照组培养液中I型前胶原蛋白的含量定义为100%。添加活性成分进行细胞培养时,处理组1的I型前胶原蛋白的含量为139.45±4.75%,处理组2的含量为140.97±3.89%,处理组3的含量为146.18±5.01%,处理组4的含量为226.32±4.65%,处理组5的含量为212.75±3.01%。
与单独或组合使用积雪草苷和羟基积雪草苷相比,添加积雪草酸或羟基积雪草酸后,能显著提高I型前胶原蛋白分泌的促进作用。
实验例2积雪草三萜皂苷刺激胶原蛋白合成
(1)实验方法:按照实验例1中细胞培养的方法进行试验,实验分未经处理的空白对照组,以及5个处理组,分别为处理组1的积雪草酸30ug/ml,处理组2的羟基积雪草酸30ug/ml,处理组3的积雪草酸15ug/ml和羟基积雪草酸15ug/ml,处理组4的积雪草酸15ug/ml和积雪草苷15ug/ml,处理组5的积雪草酸15ug/ml和羟基积雪草苷15ug/ml。5个处理组都用不含胎牛血清的DMEM培养基进行配制。细胞饥饿处理后,分别添加活性成分进行处理,并设置对照组,分别设置6个复孔,培养48h后,上清液离心,按照I型前胶原蛋白含量检测试剂盒(ProcollagenTypeIC-Peptide(PIP)EIAKit)说明书,检测上清液中I型前胶原蛋白含量。
(2)实验结果:基于定量结果,以空白对照组培养液中I型前胶原蛋白的含量定义为100%。添加活性成分进行细胞培养时,处理组1的I型前胶原蛋白的含量为121.34±3.01%,处理组2的含量为126.18±4.10%,处理组3的含量为124.551±3.15%,处理组4的含量为193.32±3.41%,处理组5的含量为187.75±4.27%。与单独或组合使用积雪草酸和羟基积雪草酸相比,添加积雪草苷或羟基积雪草苷后,能显著提高I型前胶原蛋白分泌的促进作用。因此,三萜酸的积雪草酸或羟基积雪草酸,与三萜皂苷的积雪草苷或羟基积雪草苷复配使用,能显著提高三萜皂苷对I型前胶原蛋白分泌的促进作用。
实验例3积雪草三萜皂苷与积雪草三萜酸质量比
(1)实验方法按照实验例1中细胞培养的方法进行试验,实验分未经处理的空白对照组,以及5个处理组,分别为处理组1的积雪草酸10ug/ml和羟基积雪草苷20ug/ml,处理组2积雪草酸5ug/ml和羟基积雪草苷25ug/ml,处理组3的积雪草酸6ug/ml和羟基积雪草苷24ug/ml,处理组4的积雪草酸15ug/ml和积雪草苷15ug/ml,处理组5的羟基积雪草酸7.5ug/ml和羟基积雪草苷22.5ug/ml。5个处理组都用不含胎牛血清的DMEM培养基进行配制。细胞饥饿处理后,分别添加活性成分进行处理,并设置对照组,分别设置6个复孔,培养48h后,上清液离心,按照I型前胶原蛋白含量检测试剂盒(ProcollagenTypeIC-Peptide(PIP)EIAKit)说明书,检测上清液中I型前胶原蛋白含量。
(2)实验结果:基于定量结果,以空白对照组培养液中I型前胶原蛋白的含量定义为100%。添加活性成分进行细胞培养时,处理组1的I型前胶原蛋白的含量为180.76±2.79%,处理组2的含量为142.31±3.46%,处理组3的含量为156.62±3.81%,处理组4的含量为189.32±4.41%,处理组5的含量为162.47±3.31%。I型前胶原蛋白分泌的量随着添加积雪草酸或羟基积雪草酸的含量的下降而逐渐下降。
实验例4辅酶Q10纳米乳液的抗光老化效果
将一支购买的人角化细胞复苏后,扩增培养,生长3代,取直径6cm的培养皿中一半的细胞传至24孔培养板,剩下的细胞保种冻存。待24孔培养板中细胞贴壁生长密度达到60%后,分组为阴性对照组、大粒径实验组(125μg/ml的344nm辅酶Q10纳米乳液)、中粒径实验组(125μg/ml的185nm辅酶Q10纳米乳液)及小粒径实验组(125μg/ml的77nm辅酶Q10纳米乳液),分别在阴性对照组及实验组加入空白纳米乳液及相应浓度的不同粒径的辅酶Q10纳米乳液,与细胞共同培养24hr。24hr后,移去培养基,再加入PBS,UVB紫外处理,剂量为40mj/cm2,最后各组还原光照前培养条件的条件继续培养,24hr后各加Trizol500μl用于提取总RNA分析。通过Real-timePCR技术定量AP-1、NF-κB信号通路中c-fos、IL-6、IL-8、TNF-α、MMP1、MMP3等mRNA的表达量的变化,如表1。
表1不同粒径的辅酶Q10对UVB诱导细胞因子mRNA基因表达的影响n=3
小粒径实验组Vs阴性对照组ap<0.05,bp<0.001,cp<0.001,dp<0.05,ep<0.05;
中粒径实验组Vs阴性对照组bp<0.001,cp<0.05,dp<0.05,ep<0.05;
大粒径实验组Vs阴性对照组dp<0.05,ep<0.05;
由表1可知,辅酶Q10纳米乳液抑制UVB诱导角质相关细胞因子的表达随着粒径的减少而增强,粒径为344nm辅酶Q10纳米乳液对UVB诱导角质细胞MMP-1、MMP-3及IL-6的mRNA的表达无明显抑制作用,粒径为185nm辅酶Q10纳米乳液对UVB诱导角质细胞MMP-3、IL-6、TNF-α及c-Fos的mRNA的表达具有明显抑制作用,粒径为77nm辅酶Q10纳米乳液对UVB诱导角质细胞MMP-1、MMP-3、IL-6、TNF-α及c-Fos的mRNA的表达具有明显抑制作用,提示辅酶Q10纳米乳液的粒径小于200nm后才具有显著抑制AP-1、NF-κB信号通路中c-fos、IL-6、IL-8、TNF-α、MMP1、MMP3等mRNA的表达,也就是才能抑制UVB诱导角质细胞引起的胶原蛋白的降解及炎症反应,即具有有效的预防光老化作用。
显然,上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例,而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。