CN103816164B - 积雪草酸衍生物a1在制备抗抑郁药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及积雪草酸衍生物A1在制备抗抑郁药物中的应用，所述的积雪草酸衍生物A1是3,23-O-异丙叉积雪草酸，本发明还提供了含有积雪草酸衍生物A1的药物组合物。本发明的积雪草酸衍生物A1，以及药物组合物是一种安全、高效、稳定、价廉的预防和治疗抑郁症的药物，具有较高的活性，优于积雪草酸和多塞平，而且生物利用度有了显著提升，具有很好的开发价值。

Description

积雪草酸衍生物A1在制备抗抑郁药物中的应用

技术领域

本发明涉及药物应用技术领域，具体地说，是关于积雪草酸衍生物A1在制备抗抑郁药物中的应用。

背景技术

抑郁症是一种常见而易被忽略的精神疾病。随着人们生活节奏的加快、社会压力的增加、心理承受力降低，患抑郁症的比率有增无减。据世界卫生组织公布，各种抑郁症患病占全球人口3％～5％。预计到2020年，抑郁症将成为全球的第二大常见疾病。因此，迫切需要安全、高效、低廉的抗抑郁药。

目前用于治疗抑郁症的药物主要有三环类抗抑郁剂和单胺氧化酶抑制剂如多塞平，选择性单胺氧化酶抑制剂如吗氯贝胺，5-羟色胺重吸收抑制剂如氟西汀，选择性NE再摄取抑制剂如瑞波西汀，5-HT和去甲肾上腺素再摄取双重抑制剂如文拉法辛，去甲肾上腺素和特异性5-HT能抗抑郁药如米氮平，但是均有不同程度的不良反应，如嗜睡、视物模糊、高血压、惊厥和性欲低下等，从而限制了其广泛使用。因此，寻找新型、不良反应作用小的抗抑郁药仍然势在必行。

积雪草总苷主要由积雪草苷(asiaticoside)和羟基积雪草苷(madecassoside)组成，是从伞形科植物积雪草(Centella asiatica)中提取分离得到的，对抑郁具有治疗作用(参见中国专利CN1387868A和CN1377649A)。而积雪草酸(asiatic acid)和羟基积雪草酸(madecassic acid)分别是积雪草苷和羟基积雪草苷的苷元，也是由伞形科植物积雪草中提取分离得到，我们申请并获得了积雪草酸及其衍生物在制备抗抑郁药物中的应用的专利授权(参见中国专利CN1543964C)。

我们研究发现积雪草酸虽然具有较好的抗抑郁作用，但是其生物利用度较差，缺乏进一步开发价值。因此，寻找抗抑郁活性较好、而且生物利用度更优的积雪草酸衍生物，具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种积雪草酸衍生物A1在制备抗抑郁药物中的应用。

本发明的另一目的是，提供一种含有积雪草酸衍生物A1的药物组合物及其在制备抗抑郁药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

积雪草酸衍生物A1在制备抗抑郁药物中的应用，所述的积雪草酸衍生物A1是3,23-O-异丙叉积雪草酸。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

一种抗抑郁组合物，包括治疗有效量的积雪草酸衍生物A1和药学上可接受的载体，所述的积雪草酸衍生物A1是3,23-O-异丙叉积雪草酸。

所述的3,23-O-异丙叉积雪草酸在药物组合物重量百分比为0.1～99.9％。

在筛选具有抗抑郁作用的天然活性成分过程中，发明人发现积雪草的化学成分中除挥发油和极性较大的苷类成分外，非挥发性脂溶性部分(积雪草酸和羟基积雪草酸)也具有很强的抗抑郁作用。同时，发明人对积雪草酸的一系列衍生物进行了大量研究，积雪草酸衍生物A1(3,23-O-异丙叉积雪草酸)具有抗抑郁活性，并在实施例中公布了实验数据和分析结果。

所说的积雪草酸衍生物A1的化学结构式见图1。

本发明所述及的积雪草酸衍生物A1还可以以组合物的形式施用于需要治疗的患者，所说的组合物包括治疗有效量的积雪草酸衍生物A1和医药学上可接受的载体；

所说的载体包括赋形剂，如淀粉、水等；润滑剂，如硬脂酸镁等；崩解剂，如微晶纤维素等；填充剂，如乳糖等；粘接剂，如预胶化淀粉、糊精等；

优选含有重量百分比为0.199.9％的积雪草酸衍生物A1；

积雪草酸衍生物的药物组合物A1可以采用本领域公知的方法制成各种剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、贴剂、喷雾剂、栓剂等，采取口服或非注射途径(如透皮吸收、粘膜透析)等给药途径进行抑郁症的治疗。

用于患者时，剂量为0.5～50mg／kg.d，该剂量通常根据患者的年龄和体重以及症状的状况决定。

本发明优点在于：本发明的积雪草酸衍生物A1，以及药物组合物是一种安全、高效、稳定、价廉的预防和治疗抑郁症的药物，具有较高的活性，活性优于积雪草酸和多塞平；更重要的是，生物利用度有了显著提升，具有很好的开发价值。

附图说明

附图1是积雪草酸衍生物A1的化学结构式图。

具体实施方式

实施例1

积雪草酸衍生物A1的制备

积雪草酸衍生物A1(3,23-O-异丙叉积雪草酸)由第二军医大学药学院有机化学教研室合成，纯度在98％以上。

化合物A1的合成

实验操作：将5g JXCS溶于30ml2,2-二甲氧基丙烷，加入0.5g对甲苯磺酸。室温反应过夜，蒸除溶剂，柱层析后，得产物4.7g。纯度：98％。

(4aS,6aR,6bS,8aS,11R,12S,14bR,16R,16aR)-4a,4b,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11，12,12a,14,14a,14b,15，16,16a-二十氢-16-羟基-2,2,4a,6b,11，12,14b-八甲基-4H-苉并[3，4-d][1，3]二氧六环基-8a-羧酸

实施例2

3,23-O-异丙叉积雪草酸片剂的制备

处方：

3,23-O-异丙叉积雪草酸  30g

淀粉          30g 

乳糖          40g 

羧甲基淀粉钠          5g 

淀粉浆(7％)          适量

硬脂酸镁      1％(1.25g)

工艺：

取处方量3,23-O-异丙叉积雪草酸，粉碎过100目筛，再将处方量的淀粉、乳糖粉碎过100目筛，混匀。将3,23-O-异丙叉积雪草酸、羧甲基淀粉钠加入混匀的淀粉和乳糖中，混匀。加入适量7％淀粉浆拌匀，经16目铁筛丝网制粒，60℃以下干燥，整粒，加入适量硬脂酸镁混匀，分析含量后压片。可制成1000片每片含3,23-O-异丙叉积雪草酸30mg的片剂。

实施例3

3,23-O-异丙叉积雪草酸胶囊剂的制备

处方：

3,23-O-异丙叉积雪草酸   30g

淀粉          160g 

淀粉硅胶          10g 

工艺：

取处方量3,23-O-异丙叉积雪草酸，粉碎过100目筛，加入处方量的淀粉、淀粉硅胶中，混匀，直接装入胶囊，可制成1000粒每粒含3,23-O-异丙叉积雪草酸30mg的胶囊剂。

实施例4

积雪草酸衍生物A1混悬剂的制备

处方：

3,23-O-异丙叉积雪草酸          300g 

羧甲基纤维素钠(CMC)            100g 

蒸馏水            加至100000ml

工艺：

取处方量3,23-O-异丙叉积雪草酸粉碎至200目，加入到已经溶胀好的处方量的CMC中，搅拌均匀，加入蒸馏水至100000ml，搅拌成混悬，即得每毫升含3,23-O-异丙叉积雪草酸3mg的混悬剂。

实施例5

积雪草酸衍生物A1(3,23-O-异丙叉积雪草酸)的药代动力学

药代动力学研究

将12只SD大鼠随机分为2组，每组6只，

A组：A1注射给药；

B组：A1灌胃给药；

注射给药剂量2mg／kg，药物浓度为1mg／mL；

灌胃给药剂量20mg／kg，药物浓度为1mg／mL。

分别于0，5，10，15，30，45，60min，2h，3h，4h，6h，8h，12h，24h眼眶取血0.5mL，置于1.5mL涂有肝素钠的EP管中，上下振摇3次，3500rpm离心5min取上清，至-20℃冰箱中 保存备用。

分析条件

1)色谱条件

资生堂3.0×100mm3.Oum C18进样量：5μL流速0.8柱后分流1∶1

流动相：ACN∶0.1％FA＝80∶20

2)质谱条件

Negative A1，SIM＝527.3Z3，SIM＝637.4

DG＝10L

Fragmentor＝100V

Nb＝40psig

样品处理方法

内标为Z3(浓度为284ng／mL)

用乙腈配制浓度依次为5ug／ml、2.5ug／ml、1ug／ml、0.5ug／ml、0.25ug／ml、0.1ug／ml的标准溶液，得到标准曲线1；

分别取标准曲线1中个浓度20ul加入100ul血浆样品后再加上180ul含有内标的乙腈溶液，涡旋30S，12000rpm、离心10min后取上清液进样分析。

试验结果

积雪草酸的生物利用度F＝AUC_ig·D_iv/AUC_iv·D_ig＝0.83*2／0.34*20＝24.41％。

积雪草酸衍生物A1的生物利用度F＝AUC_ig·D_iv/AUC_iv·D_ig＝44.05*2／5.923*20＝74.37％。

试验结论

积雪草酸的生物利用度为24.41％，而积雪草酸衍生物A1的生物利用度为74.37％，显著优于积雪草酸，具有更好的开发价值。差异具有统计学意义(P＜0.01)。

实施例6

3,23-O-异丙叉积雪草酸的抗抑郁作用实验

积雪草酸衍生物A1(3,23-O-异丙叉积雪草酸)的抗抑郁作用采用获得性小鼠绝望模型(小鼠悬尾实验和小鼠强迫游泳实验)进行检测和验证。

受试药物

名称：积雪草酸衍生物A1(3,23-O-异丙叉积雪草酸)

性状：白色粉末

提供单位：第二军医大学药学院有机化学教研室

溶媒：0.5％羧甲基纤维素钠(0.5％CMC-Na)溶液。

配制方法：用0.5％CMC-Na溶液配制成所需浓度的混悬液，临用前充分搅匀灌胃。

受试物浓度：1mg／ml、2mg／ml、4mg／ml。

动物

种属、品系、性别、体重、来源、合格证

ICR小鼠，雄性，体重16-18g，SPF级，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司[实验动物质量合格证号：SCXK(沪)2008-0016]。

饲养条件

所有小鼠，均自由觅食和饮水，在室温(23±2)℃，自然光照条件下饲养。

剂量设置

积雪草酸衍生物A1小鼠灌胃设置三个剂量组：10mg／kg，20mg／kg，40mg／kg。

试验对照

阴性对照：0.5％CMC-Na溶液

阳性对照：多塞平，剂量20mg／kg，积雪草酸20mg／kg

给药方法

给药途径：灌胃给药

给药体积：10ml／kg

给药次数：每天1次，连续7天

每组动物数：10只

试验主要步骤

1.小鼠悬尾实验

实验小鼠随机分为6组，每组10只。积雪草酸衍生物A1(3,23-O-异丙叉积雪草酸)3个剂量组，分别为20，40，80mg／kg，多塞平组剂量为40mg／kg，积雪草酸组剂量为40mg／kg，阴性对照组给予0.5％CMC-Na溶液。每天灌胃一次，灌胃量0.1ml／10g，连续给药7天。末次给药后1h，将动物尾端2厘米部位固定在一水平支撑物上，使动物成倒挂状态，支撑物放置于一敞口箱内，其头部离底面约5厘米。记录小鼠6分钟内后4分钟的不动时间，各组小鼠平行操作。

小鼠强迫游泳实验

实验小鼠随机分为6组，每组10只。积雪草酸衍生物A1(3,23-O-异丙叉积雪草酸)3个剂量组，分别为20，40，80mg／kg，多塞平组剂量为40mg／kg，积雪草酸组剂量为40mg／kg，阴性对照组给予0.5％CMC-Na溶液。每天灌胃一次，灌胃量0.1ml／10g，连续给药7天。末 次给药后1h，将小鼠单独放入高20厘米、直径14厘米的圆柱型玻璃缸中，缸内水深10厘米，水温23-25℃。从小鼠入水后记时6分钟，记录后4分钟内的累计不动时间，各组小鼠平行操作。

统计学处理 

试验数据用SPSS13.0软件进行处理，实验数据用±s表示，采用单因素方差分析(oNA-way ANOVA)检验。显著性水平a＝0.05。

试验结果

小鼠悬尾过程中出现行为绝望，表现不动状态，不动时间分别为121.6±17.9秒。与阴性对照组比较，3,23-O-异丙叉积雪草酸3个剂量组(20、40、80mg／kg)和多塞平，积雪草酸组均能够明显缩短小鼠悬尾不动时间，差异具有显著性意义(P＜0.05，P＜0.01)。3,23-O-异丙叉积雪草酸40mg／kg组的作用强于多塞平组(40mg／kg)和积雪草酸组(40mg／kg)。结果见表1。

表1、3,23-O-异丙叉积雪草酸对小鼠悬尾不动时间的影响

$(\stackrel{\‾}{x}\±\mathrm{SD},n=10)$

*p＜0.05；**p＜0.01

小鼠强迫游泳过程中出现行为绝望，表现不动状态，不动时间分别为137.3±25.6秒。与阴性对照组比较，3,23-O-异丙叉积雪草酸3个剂量组(20、40、80mg／kg)和多塞平，积雪草酸组均能够明显缩短小鼠强迫游泳不动时间，差异具有显著性意义(P＜0.05，P＜0.01)。3,23-O-异丙叉积雪草酸(40mg／kg)组的作用强于多塞平组(40mg／kg)和积雪草酸组(40mg／kg)。结果见表2。

表2、3,23-O-异丙叉积雪草酸对小鼠强迫游泳不动时间的影响

$(\stackrel{\‾}{x}\±\mathrm{SD},n=10)$

*p＜0.05；**p＜0.01

试验结论：积雪草酸衍生物A1(3,23-O-异丙叉积雪草酸)具有抗抑郁作用。

实施例7、3,23-O-异丙叉积雪草酸的利血平对抗实验

受试药物

名称：积雪草酸衍生物A1(3,23-O-异丙叉积雪草酸)

性状：白色粉末

提供单位：第二军医大学药学院有机化学教研室

溶媒：0.5％羧甲基纤维素钠(0.5％CMC-Na)溶液。

配制方法：用0.5％CMC-Na溶液配制成所需浓度的混悬液，临用前充分搅匀灌胃。

受试物浓度：1mg／ml、2mg／ml、4mg／ml。

动物

种属、品系、性别、体重、来源、合格证

ICR小鼠，雄性，体重16-18g，SPF级，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司[实验动物质量合格证号：SCXK(沪)2008-0016]。

饲养条件

所有小鼠，均自由觅食和饮水，在室温(23±2)℃，自然光照条件下饲养。

剂量设置

积雪草酸衍生物A1小鼠灌胃设置三个剂量组：10mg／kg，20mg／kg，40mg／kg。

试验对照

空白对照：灌胃0.5％CMC-Na溶液20ml／kg，不给予利血平

阴性对照：灌胃0.5％CMC-Na溶液20ml／kg，给予利血平。

阳性对照：多塞平，剂量20mg／kg，积雪草酸20mg／kg

给药方法

给药途径：灌胃给药

给药体积：10ml／kg

给药次数：每天1次，连续7天

每组动物数：10只

试验主要步骤

实验小鼠随机分为7组，每组10只。积雪草酸衍生物A1(3,23-O-异丙叉积雪草酸)3个剂量组，分别为20，40，80mg／kg，多塞平组剂量为40mg／kg，积雪草酸组剂量为40mg／kg，阴性对照组给予0.5％CMC-Na溶液。每天灌胃一次，灌胃量0.1ml／10g，连续给药7天。末次给药1h后，腹腔注射利血平4mg／kg，观察1h后15s内的眼睑下垂的情况。

拈抗率(％)＝(每组实验动物数—眼睑下垂的动物数)／每组实验动物数×100；

表3、3,23-O-异丙叉积雪草酸利血平对抗作用

从表3结果可以看出，3,23-O-异丙叉积雪草酸对利血平所致小鼠眼睑下垂具有拈抗作用。

试验结论：积雪草酸衍生物A1(3,23-O-异丙叉积雪草酸)具有抗抑郁作用。

实施例8

3,23-O-异丙叉积雪草酸的急性毒性研究

实验材料

ICR小鼠50只(由第二军医大学动物中心提供)，雌雄各半，体重18～25g，动物以颗粒饲料喂养，自由摄食和饮水。

3,23-O-异丙叉积雪草酸由实施例1制备，用0.25％CMC-Na配制成可灌胃的最大浓度125mg／mL的混悬液，灌胃体积40ml／kg。

实验方法

ICR小鼠按体重单次灌胃3,23-O-异丙叉积雪草酸6g／kg，观察给药后动物14天内的毒性反应及死亡情况。结果发现，小鼠单次灌胃给药后，小鼠活动滞缓，静卧少动，30-50分钟后即恢复正常。给药后14天内，小鼠未出现死亡，第15天，全部小鼠处死，解剖，肉眼检查各脏器，均未见明显病变。

实验结果

上述急性毒性实验结果表明，单次灌胃给药3,23-O-异丙叉积雪草酸的最大耐受量MTD不低于6g／Kg，说明3,23-O-异丙叉积雪草酸的急性毒性较低。

综上，本发明提供了一种积雪草酸衍生物A1及其组合物，有望用于预防和治疗抑郁症，具有较高的活性，优于积雪草酸和多塞平，而且生物利用度有了显著提升，具有很好的开发价值。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (1)

1.积雪草酸衍生物A1在制备抗抑郁药物中的应用，所述的积雪草酸衍生物A1是3,23-O-异丙叉积雪草酸。