CN103798301A - 一种具有抗菌作用的中药复方总黄酮及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种中药复方总黄酮的制备方法,用该方法制备得到的中药复方总黄酮具有抗菌作用。本发明也公开了中药复方总黄酮的抗菌用途。所述中药复方总黄酮还可作为具有抗菌剂添加到家用产品、消毒用品或化妆品中。
Description
技术领域
本发明涉及天然药物化学、家用产品、消毒用品、化妆品领域,具体涉及一种用于抗金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌的中药复方总黄酮及其制备方法。
背景技术
目前国内外多数抗菌添加剂以合成化合物为主,随着天然、安全与环保要求的提出,天然植物添加剂越来越为人们所青睐。但天然抗菌添加剂的开发较少,不能满足消费者要求,特别是中草药复方抗菌添加剂的开发,则少之又少。
本发明提出一种提取中药复方总黄酮的新方法,根据该方法提取得到的中药复方总黄酮能够抑制、杀灭多种致病菌。所述中药复方总黄酮是一种天然植物的提取物,因而对人体无害。本发明方法制备得到的中药复方总黄酮提取物还可作为功能添加剂添加到家用产品、消毒用品或化妆品中。
发明内容
本发明目的在于提供一种具有广谱抗菌作用的复方提取物。具体说,本发明提供了一种具有抗金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌作用的中药复方总黄酮。所述复方总黄酮提取物也可作为抗菌成分加入到家用产品、消毒用品、化妆品中使用。
本发明提供了一种中药复方总黄酮的提取方法,所述方法包括以下步骤:
a)取以下配比用量的中药材,用极性溶剂提取,得到粗提物,
b)将所述粗提物复溶,大孔树脂吸附,洗脱,浓缩干燥后得到中药复方总黄酮。
在一些实施方式中,上述步骤a)中的极性溶剂选自:甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、乙酸乙酯或多元醇。在一些实施方式中,上述步骤a)的提取方法可以是回流提取、浸渍或渗漉。
在其他实施方式中,上述步骤b)中的大孔树脂是非极性到中等极性的吸附树脂。例如,大孔树脂可以是D101型、DM130型或DM301型大孔树脂。
本发明还涉及按照本发明方法制备得到的中药复方总黄酮。
本发明还涉及中药复方总黄酮在抗金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌的中的用途。在一些实施方式中,所述中药复方总黄酮是按照本发明提取方法制备得到的提取物。
本发明还涉及中药复方总黄酮作为具有抗金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌作用的添加剂在家用产品、消毒用品或化妆品中的用途,所述中药复方总黄酮是本发明提取方法制备得到的提取物。
本发明还涉及一种家用产品、消毒用品或化妆品,其包含按照本发明提取方法制备得到的中药复方总黄酮以及可接受的辅料。
制取本发明复方总黄酮的一般工艺流程如下:
取生枳壳20~60重量份,青皮15~40重量份,柴胡10~35重量份,厚朴10~30重量份,黄芩5~25重量份,充分混合,放置于提取器中。加入适量的溶剂,采用溶剂提取法进行提取。待提取结束后,回收溶剂得到粗提物。然后,将粗提物用水复溶至一定浓度,大孔树脂吸附,水洗除杂,乙醇洗脱有效成分。回收乙醇,浓缩干燥得固体粉末,即为中药复方总黄酮。再根据需要将固体粉末溶解于所需溶剂中,即可得一定浓度的中药复方总黄酮溶液。
提取溶剂可以是中、高极性的有机溶剂,如不同浓度的乙醇、不同浓度的甲醇,丙酮等;提取方法可以是回流提取、浸渍、渗漉等方法。大孔树脂可以是非极性到中等极性吸附树脂,如D101型、DM130型、DM301型大孔树脂等。
上述中药复方中,生枳壳理气宽胸、行滞消积,《药性论》:“枳壳主肠风痔疾,心腹气结……”,《日华子》:“枳壳治反胃,霍乱泻痢,消食……”;青皮疏肝破气,消积化滞,《本草纲目》:“青皮治胸膈气逆、肋痛……”,《新增治疔汇要》:“青皮解疔毒”;柴胡解表退热,疏肝解郁,升举阳气,《本经》:“柴胡主心腹,去肠胃结气,饮食积聚,寒热邪气……”;厚朴行气导滞,燥湿,降逆平喘,《本经》:“主中风伤寒,头痛,寒热惊悸……去三虫”,《别录》:“疗霍乱及腹痛胀满……”;黄芩清热泻火,燥湿解毒,《本经》:“黄芩主诸热黄疸,肠澼,泄痢……”,《别录》:“疗痰热,胃中热,小腹绞痛,消谷,利小肠”。
文献中均未提及可以采用本发明所述的生枳壳、青皮、柴胡、厚朴和黄芩质量配比的中药材来提取总黄酮,也未提及按照所述配比提取得到的复方提取物具有杀菌或抑菌作用。本发明首次提出了利用大孔树脂的两步法提取复方总黄酮的方法。该方法提取得到的中药复方总黄酮经证实具有广谱杀菌作用,能够显著杀灭金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌,且效果显著优于常规方法提取物。总黄酮含量也测定表明,采用本发明所述的中药材质量配比,根据本发明的提取方法制备得到的提取物中总黄酮含量大大富集。
具体实施方式
本发明提供了一种两步法提取中药复方总黄酮的方法。该方法首先采用溶剂提取法提取得到中药复方粗提物,第二步利用大孔树脂吸附,得到本发明的中药复方总黄酮。
本发明首次发现了根据上述两步法提取得到的中药复方总黄酮具有抗菌作用。因此,所述中药复方总黄酮也可作为功效添加剂加入到家用产品、消毒用品或化妆品中。
文献中均未涉及中药复方总黄酮具有抗菌作用,也未提及将其作为功能添加剂加入家用产品、消毒用品或化妆品中。因此,本发明首次提出中药复方总黄酮具有抗菌作用,可以作为功能添加剂加入家用产品、消毒用品或化妆品中。
在一些实施方式中,中药复方总黄酮的使用浓度可以是5毫克/毫升或更高,6毫克/毫升或更高,7毫克/毫升或更高,8毫克/毫升或更高,9毫克/毫升或更高,10毫克/毫升或更高,12毫克/毫升或更高,16毫克/毫升或更高,18毫克/毫升或更高。在一些实施方式中,中药复方总黄酮的使用浓度可以是5-150毫克/毫升,6-150毫克/毫升,7-150毫克/毫升,8-150毫克/毫升,9-150毫克/毫升,10-150毫克/毫升,12-150毫克/毫升,16-150毫克/毫升,18-150毫克/毫升。在一些实施方式中,中药复方总黄酮的使用浓度可以是5-100毫克/毫升,6-100毫克/毫升,7-100毫克/毫升,8-100毫克/毫升,9-100毫克/毫升,10-100毫克/毫升,12-100毫克/毫升,16-100毫克/毫升,18-100毫克/毫升。在一些实施方式中,中药复方总黄酮的使用浓度可以是5-75毫克/毫升,6-75毫克/毫升,7-75毫克/毫升,8-75毫克/毫升,9-75毫克/毫升,10-75毫克/毫升,12-75毫克/毫升,16-75毫克/毫升,18-75毫克/毫升。在一些实施方式中,中药复方总黄酮的使用浓度可以是5-50毫克/毫升,6-50毫克/毫升,7-50毫克/毫升,8-50毫克/毫升,9-50毫克/毫升,10-50毫克/毫升,12-50毫克/毫升,16-50毫克/毫升,18-50毫克/毫升。
可以将中药复方总黄酮按照0.001-50重量%的比例加到各种家用产品、消毒用品或化妆品中。例如,在消毒用品中,中药复方总黄酮的用量可以是0.001-20重量%。在化妆品中,中药复方总黄酮的用量可以是0.01-1重量%。
下面结合具体的实施例进一步阐述本发明。但是,应该明白,这些实施例仅用于说明本发明而不构成对本发明范围的限制。下列实施例中未注明具体条件的试验方法,通常按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。除非另有说明,所有的百分比和份数按重量计。下面各实施例中使用的中药材(包括生枳壳、青皮、柴胡、厚朴和黄芩)均购于上海华宇药业。
实施例1:
用于提取复方总黄酮的生药材及质量配比如下:
在制取时,工艺流程如下:
取配比用量下药材纯正的中草药组合适量,混合均匀,放入提取器中,加入15倍量60%乙醇回流1小时;收集提取液,药渣再用10倍量60%乙醇回流提取一次;合并两次提取液,过滤、回收乙醇至无醇味,浓缩干燥得中药复方粗提物。
中药复方粗提物加水复溶至生药浓度0.25g/ml,为上样液,大孔树脂为D101型(天津市海光化工有限公司),上样流速为1柱体积/小时(BV/h)。以2BV/h流速水洗,至基本无色。以2BV/h流速、共6BV的80%乙醇洗脱有效成分,回收乙醇,浓缩干燥得固体粉末,为中药复方总黄酮粉末。
实施例2:
用于提取复方总黄酮的生药材及质量配比如下:
在制取时,工艺流程如下:
取配比用量下药材纯正的中草药组合适量,混合均匀,放入提取器中,加入20倍量甲醇浸渍24小时;收集提取液,药渣再用15倍量甲醇浸渍24小时;合并两次提取液,过滤、回收甲醇,浓缩干燥得中药复方粗提物。
中药复方粗提物加水复溶至生药浓度0.25g/ml,为上样液,大孔树脂为DM130型(天津市海光化工有限公司),上样流速为1柱体积/小时(BV/h)。以2BV/h流速水洗,至基本无色。以2BV/h流速、共6BV的80%乙醇洗脱有效成分,回收乙醇,浓缩干燥得固体粉末,为中药复方总黄酮粉末。
实施例3:
用于提取复方总黄酮的生药材及质量配比如下:
在制取时,工艺流程如下:
取配比用量下药材纯正的中草药组合适量,混合均匀,放入提取器中,加入40倍量丙酮渗漉提取,提取液过滤,回收丙酮,浓缩干燥得中药复方粗提物。
中药复方粗提物加水复溶至生药浓度0.25g/ml,为上样液,大孔树脂为D301型(天津市海光化工有限公司),上样流速为1柱体积/小时(BV/h)。以2BV/h流速水洗,至基本无色。以2BV/h流速、共6BV的80%乙醇洗脱有效成分,回收乙醇,浓缩干燥得固体粉末,为中药复方总黄酮粉末。
实施例4:最小抑菌浓度-最小杀菌浓度(MIC-MBC)实验
1.样品制备
常规方法提取物:采用本领域常规方法提取,具体步骤如下。按实施例1的配比,取药材纯正的中草药组合适量,混合均匀,放入提取器中,加入15倍量水煎煮1小时;收集提取液,药渣再用10倍量水煎煮1小时;合并两次提取液,过滤、浓缩干燥得常规方法提取物。
本发明的中药复方总黄酮:按实施例1的工艺获得。
取常规方法提取物6g于40ml的无菌水,搅拌溶解完全即得质量浓度为150mg/ml的常规方法提取物受试原液。取中药复方总黄酮粉末6g于40ml的60%乙醇,搅拌溶解完全即得质量浓度为150mg/ml的中药复方总黄酮受试原液;同时以60%乙醇为溶剂对照。
2.实验方法
受试样液的制备:以提供的样品液为原液,分别取适量原液与双倍肉汤培养基及无菌去离子水混匀,分别制成5ml含50%、25%、12.5%、6.2%、3.1%受试样液的单倍肉汤培养基。同时以样品所使用的溶剂2.5ml与双倍肉汤培养基混匀,为溶剂对照;以无菌去离子水作阴性对照。
试验菌接种:分别将细菌、真菌菌悬液调整至106CFU/ml、105CFU/ml,以移液器吸取50μl菌悬液至已制备好的受试样液等各试管中,同时单倍肉汤培养基试管中未加菌悬液为空白对照。各试管振荡混匀后,30℃160rpm振荡培养18h左右,待阴性对照试(无菌去离子)管呈浑浊生长后,取出各试管。
MIC结果判别:肉眼观察各样品试管是否澄清或浑浊,当无菌去离子水对照管有菌生长(混浊),空白对照管无细菌生长(澄清),试验组无菌生长的最高稀释度所对应的样液浓度为该样品对受试菌的MIC。
MBC结果判别:取MIC实验后的样液1ml,分别浇注细菌/真菌培养基培养后,观察平皿上的菌落总数,以++++表明平板上菌落生长覆盖整个培养基表面,无法计数,认为该浓度下的样品无抑菌效果;+++表明平板上菌落生长覆盖1/2个培养基表面,认为该浓度下的样品无抑菌效果;++表明平板上菌落生长覆盖1/4个培养基表面,认为该浓度下的样品具有一定的抑菌功效;+表示有零星菌落生长,认为该浓度下的样品具有一定的抑菌功效;—表示无菌落生长,认为该浓度下的样品具有显著的抑菌杀菌功效。
3.实验结果
表1显示了常规方法提取物和中药复方总黄酮的杀菌效果比较。
表1
表2显示了常规方法提取物和中药复方总黄酮的MBC。
表2
结果表明,中药复方总黄酮具有广谱抗金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌的作用,在9.38mg/ml的浓度下仍能杀灭这三种细菌。而传统提取得到的常规方法提取物仅对金黄色葡萄球菌有一定的杀菌作用,MBC为75.0mg/ml,但对大肠杆菌、白色念珠菌无效。可见,按照上述中药配比及特定的工艺提取得到的中药复方总黄酮具有显著的抗菌作用,效果大大优于传统提取物。
实施例5:总黄酮含量比较
1.实验方法
总黄酮含量的测定采用紫外分光光度法,本方法以芦丁为标准品,甲醇为溶剂,称取一定量的提取物粉末溶于适量甲醇作为受试样品溶液,通过三氯化铝显色,395nm下检测吸光度。并以等浓度样品溶液为空白对照,扣除样品空白紫外吸收。根据标准曲线以及稀释倍数计算出总黄酮质量。
总黄酮含量=(总黄酮质量/提取物固体质量)×100%
2.实验结果
表3显示了常规方法提取物、中药复方总黄酮的黄酮含量比较。
表3
实验表明,通过本发明提取方法提取得到的中药复方总黄酮中的总黄酮含量高达14.9%,而常规方法提取物只有0.30%。比较可知,本发明提取方法得到的中药复方总黄酮是常规方法提取物的49.7倍,黄酮含量得以大大富集。
Claims (10)
1.一种中药复方总黄酮的提取方法,所述方法包括以下步骤:
a)取以下配比用量的中药材,用极性溶剂提取,得到粗提物,
b)将所述粗提物复溶,大孔树脂吸附,洗脱,浓缩干燥后得到中药复方总黄酮。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤a)中的极性溶剂选自:甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、乙酸乙酯或多元醇。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤a)的提取方法可以是回流提取、浸渍或渗漉。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤b)中的大孔树脂是非极性到中等极性的吸附树脂。
5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,所述大孔树脂选自:D101型、DM130型或DM301型大孔树脂。
6.按照权利要求1-5中任一项所述方法制备得到的中药复方总黄酮。
7.中药复方总黄酮在抗金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌的中的用途。
8.如权利要求7所述的用途,其中,所述中药复方总黄酮是按照权利要求1-5中任一项所述方法制备的提取物。
9.中药复方总黄酮作为具有抗金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌作用的添加剂在家用产品、消毒用品或化妆品中的用途,所述中药复方总黄酮是按照权利要求1-5中任一项所述方法制备的提取物。
10.一种家用产品、消毒用品或化妆品,其包含如权利要求1-5中任一项所述方法制备得到的中药复方总黄酮以及可接受的辅料。
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