CN103788176A - 一种arylomycin类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种新型的arylomycin类化合物，其结构式为：

Description

一种arylomycin类化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及新化合物，具体地说，是关于一种arylomycin类化合物及其制备方法和应用。 

背景技术

随着致病菌耐药性问题的日益严峻，临床上对新抗生素的需求也显得更为迫切。为了应对这一局面，人们一方面对已有抗生素进行改造，另一方面也加快了新型抗生素筛选的步伐。Alexandra等在2002年从Streptomyces sp.Tü6075分离得到了两组脂肽类化合物arylomycins，包括arylomycins A和arylomycins B（Schimana,Gebhardt et al.2002）。它们都属于六肽化合物，含有相同肽链（D-Me-Ser-D-Ala-Gly-L-Me-Hpg-L-Ala-L-Tyr），不同的是，arylomycinsB中的Tyr含有-NO₂取代基。 

本申请的发明人从小链霉菌（Streptomyces parvus）CGMCC No.4027的发酵液中分离到了arylomycin A2和arylomycin A4，结构如图1所示。随后针对该小链霉菌CGMCC No.4027次级代谢产物开展了一系列研究，以进一步发掘有意义的天然活性产物。 

发明内容

本申请的发明人在对小链霉菌（Streptomyces parvus）CGMCC No.4027的次级代谢产物的研究过程中，分离得到了一种化合物，经结构鉴定为一种新的arylomycin类化合物。 

因此，本发明的首要目的是提供一种新的arylomycin类化合物。 

本发明的第二个目的是提供所述arylomycin类化合物的制备方法。 

本发明的第三个目的是提供所述arylomycin类化合物的应用。 

本发明的arylomycin类化合物的结构式为： 

根据本发明，所述arylomycin类化合物是由小链霉菌CGMCC No.4027发酵制得。 

根据本发明的优选实施例，所述发酵的发酵培养条件为： 

发酵温度28～30℃，发酵时间4～6天； 

种子培养基：葡萄糖2%，甘油2%，可溶性淀粉6%，黄豆饼粉5%，磷酸二氢钾0.02%，七水合硫酸镁0.04%，pH 7.35～7.5； 

发酵培养基：黄豆饼粉2.2%，糊精3.6%，葡萄糖0.825%，异亮氨酸0.3%，六水和硫酸亚铁铵0.066%，pH 7.35～7.5。 

根据本发明的优选实施例，所述制备方法还包括将发酵液经中压层析制备和制备型HPLC精制的步骤。 

本发明的arylomycin类化合物具有抗菌活性，可用于制备抑制革兰氏阳性菌的药物。 

根据本发明的优选实施例，所述革兰氏阳性菌为革兰氏阳性球菌。 

根据本发明的优选实施例，所述革兰氏阳性球菌为藤黄八叠球菌与表皮葡萄球菌。 

本发明的Arylomycin类化合物经数据库搜索确认该化合物是首次发现。 

附图说明

图1为arylomycin A2和arylomycin A4的结构式。 

图2为本发明的化合物的制备液相色谱图。 

图3为本发明的化合物的液相色谱分析图。 

图4为本发明的化合物的高分辨质谱图。 

图5为本发明的化合物的紫外扫描谱图。 

图6为本发明的化合物的二级质谱谱图。 

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明做进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限制本发明的范围。 

本发明所用的菌种为小链霉菌（Streptomyces parvus），已于2010年7月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏地址为北京朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏号CGMCC No.4027。 

实施例1、化合物的制备 

1.1、发酵 

将S.parvus CGMCC No.4027菌种接种到高氏一号斜面培养基上，于28～30℃培养四天后，转入种子培养基（葡萄糖2%，甘油2%，可溶性淀粉6%，黄豆饼粉5%，磷酸二氢钾0.02%，七水合硫酸镁0.04%，pH 7.35～7.5）的三角瓶中，于28～30℃培养时间为44～48h。种子培养结束后再转入发酵培养基（黄豆饼粉2.2%，糊精3.6%，葡萄糖0.825%，异亮氨酸0.3%，六水和硫酸亚铁铵（Fe(NH₄)₂(SO₄)₂6H₂O）0.066%，pH 7.35～7.5）的三角瓶内，于28～30℃，培养4～6天。 

1.2、样品分离提取 

发酵结束后，将发酵液离心，6000rpm，4℃，30min。将上清液调节pH至4，于4℃静置2~3h，离心，6000rpm，4℃，30min。弃上清。将两次离心的下层沉淀用甲醇浸泡，于4℃静置2~3h，离心，12000rpm，4℃，30min，弃沉淀。 

将粗品浓缩后再经中压层析初步制备，条件如下： 

层析柱：C₁₈中压层析柱 

梯度洗脱条件：35%乙腈酸水、45%乙腈酸水、50%乙腈酸水（含0.05%甲酸的水）和100%乙腈 

收集50%乙腈酸水区段的洗脱液并浓缩。 

1.3、样品精制 

将1.2中获得的样品采用DIONEX P680双元泵制备液相系统精制，条件如下： 

制备柱：YMC CombiPreP ODS-A 5μm 20×250mm及预柱 

柱温：自然        检测器：DAD 

检测波长：210nm 

流速：7ml/min    进样量：200μl-1000μl 

流动相：0.05%的甲酸水:乙腈=1:3 

结果如图2所示，截取图中保留时间为16.04min的物质，用于后续分析和鉴定。 

1.4、精制样品的HPLC分析 

将1.3中获得的精制样品采用分析型Agilent 1100DAD双元泵液相系统分析纯度，条件如下： 

分析柱：安捷伦Zorbax SB-C₁₈柱5μm 4.6×250mm 

柱温：40℃            检测器：DAD 

流速：1.5ml/min       进样量：40μl 

检测波长：210nm 

梯度条件如下： 

结果如图3所示，经液相分析化合物的纯度大于95%，纯品的理化性质为：淡黄色粉末，易溶于甲醇，乙醇，水，乙腈。 

实施例2、化合物的结构鉴定 

将实施例1中获得的化合物经高分辨质谱（图4）、紫外吸收扫描（图5）、二级质谱（图6）和核磁共振（表1）鉴定其结构。 

表1、化合物1的核磁解析(DMSO-d₆,300k)* 

由图4可见，高分辨质谱结果表明化合物的精确分子量为867.4836。由图5可见，紫外吸收扫描结果显示该化合物的紫外特征吸收峰为200nm。进一步地，结合二级质谱和核磁共振的结果，确定化合物的分子式为C₄₅H₆₆N₆O₁₁， 得到了小链霉菌CGMCC No.4027的次级代谢产物的结构如下： 

由化合物的结构式可知，该化合物属于arylomycin类，经数据库搜索确认该化合物为新化合物。 

实施例3、化合物的抑菌活性 

以arylomycin A2、arylomycin A4、arylomycin A5作为参照，测定实施例1中获得的化合物对藤黄八叠球菌和表皮葡萄球菌的抗菌活性。 

测定方法如下：藤黄微球菌CMCC(B)28001和表皮葡萄球菌ATCC12228的菌悬液（5×10⁷/ml）各加100μl于25ml融化后温热状态的营养琼脂培养基，轻轻摇匀后倒平板，待培养基凝固后，将加有20μl样品（5mg/ml）的纸敏片置于表面，纸片直径10mm。载样平板于37℃培养20-24h，量取抑菌圈直径。结果如表2所示。 

表2、本发明的化合物的抑菌活性测定结果 

由表2的结果可见，化合物对藤黄八叠球菌和表皮葡萄球菌具有抗菌活性，抗菌效果略优于arylomycin A2、arylomycin A4、arylomycin A5。因此，本发明的arylomycin化合物可用于制备抑制革兰氏阳性菌的药物，这对于本领域的技术人员是显而易见的。 

Claims (7)

1.一种arylomycin类化合物，其特征在于，所述arylomycin类化合物的结构式为：

2.如权利要求1所述的arylomycin类化合物的制备方法，其特征在于，所述Arylomycin类化合物是由小链霉菌CGMCC No.4027发酵制得。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述发酵的发酵培养条件为：

发酵温度28～30℃，发酵时间4～6天；

种子培养基：葡萄糖2%，甘油2%，可溶性淀粉6%，黄豆饼粉5%，磷酸二氢钾0.02%，七水合硫酸镁0.04%，pH 7.35～7.5；

发酵培养基：黄豆饼粉2.2%，糊精3.6%，葡萄糖0.825%，异亮氨酸0.3%，六水和硫酸亚铁铵0.066%，pH 7.35～7.5。

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括将发酵液经中压层析制备和制备型HPLC精制的步骤。

5.如权利要求1所述的arylomycin类化合物的应用，其特征在于，用于制备抑制革兰氏阳性菌的药物。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述革兰氏阳性菌为革兰氏阳性球菌。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述革兰氏阳性球菌为藤黄八叠球菌与表皮葡萄球菌。

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