CN103776944B - 一种检测烟丝和卷烟烟气中nnal和nna的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种检测烟丝或卷烟烟气中NNAL和NNA的方法。配制含有NNAL、NNA和NNA-甲基-d3的混合标准溶液，采用内标法分别建立NNAL和NNA的标准溶液工作曲线；然后向样品中加入NNA-甲基-d3溶液，加入萃取溶液，室温震荡，取上清液，进行HPLC-MS-MS检测。该方法具有检测限低、稳定性好、快速准确等优点，检测结果受主观判断因素影响小，易于推广应用。

Description

一种检测烟丝和卷烟烟气中NNAL和NNA的方法
技术领域
本发明属于烟草化学检验技术领域，具体涉及一种检测烟丝和卷烟烟气中NNAL和NNA含量的方法。
背景技术
烟草特有的亚硝胺（TSNAs）是烟草内源性生物碱与硝酸盐和亚硝酸盐通过亚硝化作用而产生的，只存在于烟草、烟草制品和卷烟烟气中。近年来，随着吸烟与健康问题受到人们的广泛关注，国内外对于烟气中各种有害化学成分的研究也日益深入。据报道，目前已经从烟叶或卷烟烟气中鉴定出8种烟草特有亚硝胺，包括:N-亚硝基降烟碱（NNN）、4-(甲基亚硝胺基)-1-（3-吡啶基）-1-丁酮（NNK）、N-亚硝基假木贼碱（NAB）、N-亚硝基新烟碱（NAT）、4-(甲基亚硝胺基)-1-（3-吡啶基）-1-丁醇（NNAL）、4-(甲基亚硝胺基)-4-（3-吡啶基）-1-丁醇（iso-NNAL）、4-(甲基亚硝胺基)-4-（3-吡啶基）丁酸（iso-NNAC）以及4-(甲基亚硝胺基)-4-（3-吡啶基）-1-丁醛（NNA）。发现较早且研究最深入的4种烟草特有亚硝胺是NNN、NNK、NAB和NAT,其分析检测方法也较成熟。目前，NNAL主要被作为NNK的生物标志物进行研究，而iso-NNAL、NNA和iso-NNAC的检测和研究极少。1987年，Brunnemann等才在鼻烟和卷烟烟丝中鉴定出iso-NNAL，但在卷烟烟气中没有发现该物质的存在。随着人们对烟草中特有亚硝胺含量的重视，烟草行业以及公共卫生行业等迫切需要建立一种能准确检测烟草或烟气中NNAL和NNA的方法。
但由于卷烟烟丝和每支卷烟烟气中烟草特有亚硝胺的含量很低，加之烟草萃取物和烟气基质复杂，所以烟丝和卷烟烟气中NNAL和NNA的检测非常困难，国内外许多相关行业都无法开展或未开展卷烟烟丝和卷烟烟气中NNAL和NNA的检测工作。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种检测烟丝和卷烟烟气中NNAL和NNA的方法，运用高效液相色谱-质谱-质谱联用方法，实现对NNAL和NNA含量的快速准确测定。
本发明的目的通过下述技术方案予以实现。
除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为重量百分数。
一种检测烟丝和卷烟烟气中NNAL和NNA的方法，其特征在于：首先配制含有NNAL、NNA和NNA-甲基-d3的混合标准溶液，采用内标法分别建立NNAL和NNA的标准溶液工作曲线；然后将检测样品置于具塞三角瓶中，加入NNA-甲基-d3溶液，加入甲酸铵水溶液，室温震荡，取上清液，进行HPLC-MS-MS检测。
该方法具体包括以下步骤：
（1）标准曲线建立：
以乙腈为溶剂，分别配制NNAL、NNA和NNA-甲基-d3标准品单标溶液；以乙腈为溶剂，配制含有NNAL、NNA和NNA-甲基-d3的混合标准溶液;以HPLC-MS-MS色谱图中NNA的浓度与NNA-甲基-d3的浓度之比为横坐标，以色谱图中NNA的定量离子对峰面积与NNA-甲基-d3的定量离子对峰面积之比为纵坐标，建立NNA的标准溶液工作曲线；以同样方法建立NNAL的标准溶液工作曲线；
（2）样品处理
①烟丝样品处理：准确称取烟丝于具塞三角瓶中，加入NNA-甲基-d3溶液，加入甲酸铵水溶液，室温震荡，取上清液，过水相滤膜，待用；
②烟气样品处理：烟支和剑桥滤片（CFP）在温度22℃、湿度60%的条件下平衡；使用前，每个剑桥滤片用抗坏血酸甲醇溶液处理，并在通风橱中风干后备用；用滤片捕集卷烟的主流烟气总粒相物进行检测；在捕集有主流烟气总粒相物的剑桥滤片中加入的NNA-甲基-d3溶液，加入萃取溶液，室温震荡，取上清液，过水相滤膜，待用；
（3）HPLC-MS-MS检测条件
液相条件：用C18色谱柱和甲酸铵水溶液-甲酸铵乙腈溶液对样品进行分离；
质谱条件：用正离子模式（ESI+）进行多反应检测（MRM）,分析物特征离子对如表1；
表1分析物特征离子对
化合物 分子量 定量离子对(m/z) 辅助定性离子对(m/z)
NNAL 209.1 210→180 210→149
NNA 207.1 208→178 208→206
NNAL-甲基-d3 210.1 211→181
（4）实际检测：使用优化后的液相色谱分离条件，对处理好的烟丝样品溶液或烟气样品溶液进行HPLC-MS-MS检测，使用标准溶液工作曲线计算烟丝样品溶液或烟气样品溶液中的NNAL和NNA浓度，进而换算得到烟丝样品或烟气样品中NNAL和NNA的含量。
与现有技术相比，本发明具有以下突出优点：
1.本发明使用HPLC-SPE-MS-MS法测定烟丝和烟气中NNAL和NNA，具有检测限低、稳定性好、快速准确等优点；
2.本发明方法的检测结果受主观判断因素影响小，易于推广应用。
附图说明
图1NNAL和NNA的结构式。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明作进一步的详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不限定本发明的保护范围。
实施例1卷烟样品NNAL和NNA释放量的测定
化学试剂准备：4-(-甲基亚硝氨基)-1-(3-吡啶基)-丁醇(NNAL)(racNNAL,CAS号76014-81-8),4-(甲基亚硝胺基)-4-（3-吡啶基）丁醛（NNA）(CAS号64091-90-3),4-(甲基-d3-亚硝氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁醛(NNA-甲基-d3)。
（1）标准曲线建立：
以乙腈为溶剂，分别配制浓度为1μg／mL的NNAL、NNA和NNA-甲基-d3标准品单标溶液，保留四位有效数字；以乙腈为溶剂，按表2配制含有NNAL、NNA和NNA-甲基-d3的混合标准溶液;以HPLC-MS-MS色谱图中NNA的浓度与NNA-甲基-d3的浓度之比为横坐标，以色谱图中NNA的定量离子对峰面积与NNA-甲基-d3的定量离子对峰面积之比为纵坐标，建立NNA的标准溶液工作曲线；以同样方法建立NNAL的标准溶液工作曲线；
表2NNAL、NNA和NNA-甲基-d3的混合标准溶液
（2）样品处理
烟支和剑桥滤片（CFP）在温度22℃、湿度60%的条件下平衡至少24h。使用前，每个剑桥滤片用20mg/mL的抗坏血酸甲醇溶液处理，并在通风橱中风干后备用。用吸烟机抽吸卷烟样品，每个滤片捕集20支卷烟的主流烟气总粒相物进行检测。在捕集有主流烟气总粒相物的剑桥滤片中加入20μL（1ng/mL）的NNA-甲基-d3溶液，加入10mL浓度为10mmol/L的甲酸铵水溶液，室温震荡20分钟，取上清液，过0.2μm水相滤膜，待检测。
（3）HPLC-MS-MS检测条件
液相条件：Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm i.d.×100mm，1.7μm)，流动相（A）:5mM甲酸铵水溶液，（B）:5mM甲酸铵乙腈溶液；梯度洗脱程序如下：0～1min：5%B，1～2min：5%～50%B，2～5min:50%，5～6min：50%～5%B，6～8min：5%B；色谱柱温度：50℃，进样量：5μL，流速为：0.25mL/min；
质谱条件：电喷雾电离；正离子模式（ESI+）；离子源温度：120℃；毛细管电压：3.2kv；气化室温度：350℃；脱溶剂气流速：800L/hr；气帘气：80L/hr；碰撞气：0.19mL/min；扫描时间：100ms；多反应检测（MRM）模式；
（4）实际检测：对烟气样品溶液进行HPLC-MS-MS检测，使用NNAL的标准溶液工作曲线和NNA的标准溶液工作曲线计算待测卷烟烟气样品溶液中的NNAL和NNA，进而换算出该卷烟样品的NNAL和NNA释放量分别为4.39ng/支和9.82ng/支。
实施例2烟丝样品中NNAL和NNA的测定
重复实施例1，进行标准曲线建立和样品检测，有以下不同点：准确称取2.0g烟丝于50mL具塞三角瓶中，加入20μL（1ng/mL）的NNA-甲基-d3溶液，加入10mL浓度为10mmol/L的甲酸铵水溶液，室温震荡20分钟，取上清液，过0.2μm水相滤膜，进行HPLC-MS-MS检测。使用NNAL的标准溶液工作曲线和NNA的标准溶液工作曲线计算烟丝样品中的NNAL和NNA，进而换算出检测烟丝样品中的NNAL和NNA含量分别为5.78ng/g和10.46ng/g。
实施例3卷烟主流烟气总粒相物中NNAL和NNA的测定
重复实施例1，进行标准曲线建立和样品检测，有以下不同点：在标准抽吸条件下抽吸20支卷烟，在捕集有主流烟气总粒相物的剑桥滤片中加入20μL（1ng/mL）的NNA-甲基-d3溶液，再加入14mL的二氯甲烷振荡（45min,160rpm）萃取。将萃取液蒸干后用500μL二氯甲烷复溶，加入1mL0.1mol/L HCl溶液，涡旋混匀后静置分层，将上层水相转移至干净玻璃瓶，加入120μL1mol/LNaOH溶液后上样到分别用2mL甲醇、2mL水活化好的Waters Oasis HLB固相萃取小柱上进行净化，用2mL5%甲醇水溶液淋洗，最后用2mL甲醇进行洗脱。将洗脱液蒸干后用100μL甲醇/5mM甲酸铵（5/95）溶解后进行HPLC-MS-MS分析。使用NNAL的标准溶液工作曲线和NNA的标准溶液工作曲线计算待测烟气中的NNAL和NNA，进而换算出该卷烟样品的NNAL和NNA释放量分别为3.17ng/支和8.17ng/支。
需要指出，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种检测烟丝和卷烟烟气中NNAL和NNA的方法，其特征在于：首先配制含有NNAL、NNA和NNA-甲基-d3的混合标准溶液，采用内标法分别建立NNAL和NNA的标准溶液工作曲线；然后将检测样品置于具塞三角瓶中，加入NNA-甲基-d3溶液，加入甲酸铵水溶液，室温震荡，取上清液，进行UPLC-MS-MS检测；液相色谱条件为：采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱；流动相A为:5mM甲酸铵水溶液，B为：5mM甲酸铵乙腈溶液；梯度洗脱程序如下：0～1min：5％B，1～2min：5％～50％B，2～5min:50％B，5～6min：50％～5％B，6～8min：5％B。
2.根据权利要求1所述的检测烟丝和卷烟烟气中NNAL和NNA的方法，其特征在于该方法具体包括以下步骤：
(1)标准曲线建立：
以乙腈为溶剂，分别配制NNAL、NNA和NNA-甲基-d3标准品单标溶液；以乙腈为溶剂，配制含有NNAL、NNA和NNA-甲基-d3的混合标准溶液；以UPLC-MS-MS色谱图中NNA的浓度与NNA-甲基-d3的浓度之比为横坐标，以色谱图中NNA的定量离子对峰面积与NNA-甲基-d3的定量离子对峰面积之比为纵坐标，建立NNA的标准溶液工作曲线；以同样方法建立NNAL的标准溶液工作曲线；
(2)样品处理
①烟丝样品处理：准确称取烟丝于具塞三角瓶中，加入NNA-甲基-d3溶液，加入甲酸铵水溶液，室温震荡，取上清液，过水相滤膜，待用；
②烟气样品处理：烟支和剑桥滤片在温度22℃、湿度60％的条件下平衡；使用前，每个剑桥滤片用抗坏血酸甲醇溶液处理，并在通风橱中风干后备用；用滤片捕集卷烟的主流烟气总粒相物进行检测；在捕集有主流烟气总粒相物的剑桥滤片中加入NNA-甲基-d3溶液，加入萃取溶液，室温震荡，取上清液，过水相滤膜，待用；
(3)UPLC-MS-MS检测条件
液相条件：用C18色谱柱和甲酸铵水溶液‐甲酸铵乙腈溶液对样品进行分离；
质谱条件：用正离子模式进行多反应监测,分析物特征离子对如表1；
表1 分析物特征离子对
化合物 分子量 定量离子对(m/z) 辅助定性离子对(m/z) NNAL 209.1 210→180 210→149 NNA 207.1 208→178 208→206 NNAL‐甲基‐d3 210.1 211→181
(4)实际检测：对处理好的烟丝样品溶液或烟气样品溶液进行UPLC-MS-MS检测，使用标准溶液工作曲线计算烟丝样品溶液或烟气样品溶液中的NNAL和NNA浓度，进而换算得到烟丝样品或烟气样品中NNAL和NNA的含量。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106645442B (zh) * 2016-09-23 2019-05-24 瀚盟测试科技（天津）有限公司 烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的uplc-ms/ms检测方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1972884A (zh) * 2004-05-24 2007-05-30 英美烟草(投资)有限公司 对亚硝胺类化合物有选择性的分子印迹聚合物及使用该聚合物的方法
CN102012407A (zh) * 2010-10-11 2011-04-13 红塔烟草(集团)有限责任公司 一种烟草特有亚硝胺检测方法
CN102353741A (zh) * 2011-08-25 2012-02-15 湖南中烟工业有限责任公司 一种卷烟主流烟气中四种烟草特有亚硝胺含量的测定方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1972884A (zh) * 2004-05-24 2007-05-30 英美烟草(投资)有限公司 对亚硝胺类化合物有选择性的分子印迹聚合物及使用该聚合物的方法
CN102012407A (zh) * 2010-10-11 2011-04-13 红塔烟草(集团)有限责任公司 一种烟草特有亚硝胺检测方法
CN102353741A (zh) * 2011-08-25 2012-02-15 湖南中烟工业有限责任公司 一种卷烟主流烟气中四种烟草特有亚硝胺含量的测定方法

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Development of a method for the determination of 4-(Methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol in urine of nonsmokers and smokers using liquid chromatography/tandem mass spectrometry;Hou Hongwei et al;《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》;20120407;第63卷;第17-22页 *
Direct analysis of tobacco‑specific nitrosamine NNK and its metabolite NNAL in human urine by LC–MS/MS: evidence of linkage to methylated DNA lesions;Chiung‑Wen Hu et al;《ANALYTICAL TOXICOLOGY》;20130922;第88卷(第2期);第291-299页 *
Mainstream smoke of the waterpipe: Does this environmental matrix reveal as significant source of toxic compounds?;Jens Schubert et al;《Toxicology Letters》;20110910;第205卷(第3期);第279-284页 *
Simultaneous Determination of Five Tobacco-Specific Nitrosamines in Mainstream Cigarette Smoke by Isotope Dilution Liquid Chromatography/Electrospray Ionization Tandem Mass Spectrometry;Weijia Wu et al;《Analytical Chemistry》;20030816;第75卷(第18期);第4827-4832页 *
Thirdhand smoke causes DNA damage in human cells;Bo Hang et al;《Mutagenesis》;20130305;第28卷(第4期);第381-391页 *
不同类型及品种烟草特有亚硝胺含量的分析;余义文 等;《烟草化学》;20130420(第4期);第46-51,55页 *
烟草特有亚硝胺的研究进展;陈利平 等;《河南农业科学》;20121215;第41卷(第12期);第7-11页 *

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