CN103772505B

CN103772505B - 一种抗体试剂保存液

Info

Publication number: CN103772505B
Application number: CN201310694149.XA
Authority: CN
Inventors: 杨明; 宋相伟; 王冬倩; 杨洪存; 李凌波; 李秋生; 冯立岗; 李旺; 贾天冰; 万俊波; 乔健; 夏坤; 孙启和; 徐飞飞; 庄贾明
Original assignee: CHANGCHUN BOXUN BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: CHANGCHUN BOXUN BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2013-12-18
Filing date: 2013-12-18
Publication date: 2014-10-15
Anticipated expiration: 2033-12-18
Also published as: CN103772505A

Abstract

本发明公开了一种抗体试剂保存液，包括氯化钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、硫酸卡那霉素、牛血清白蛋白、SOD等成分。保存液中各组分合理配比，有利于抗体的保存，特别是用于血型检测的单克隆抗体，使其在常温下保存期更长，最长可达2年。本发明能够提供抗体试剂保存的适宜环境，同时解决了抗体试剂室温不易长期保存的问题。应用本发明保存的抗体试剂用于微柱凝胶免疫检测试剂卡的生产中，使得微柱凝胶免疫检测试剂卡能够实现常温长期保存，有利于凝胶免疫检测试剂卡的广泛应用。

Description

一种抗体试剂保存液

技术领域

本发明公开一种抗体试剂保存液，用于生物制品的保护，属于生物技术领域。

背景技术

抗体保存得当与否，直接决定了抗体的活性和使用效果。对于大多数抗体而言，一般需要在-20℃长期保存，很难实现常温长期保存，同时反复冻融会导致抗体变性和多聚体形成，从而降低抗体的活性。在大多数情况下，抗体在 4℃条件下可保存一至两周，并避免了反复冻融对抗体活性的损害。但是抗体在稀释至工作浓度后应避免在 4℃ 条件下保存超过一天。同时蛋白质在高浓度下保存时一般不易降解，因此在抗体溶液中加入一定量的蛋白质作为稳定剂有利于抗体的保存。为了防止微生物污染，可将叠氮钠加入抗体制备品中，但是叠氮化钠属于有毒药品，使用过程中应注意防护。现在广泛应用的抗体保存液一般为1%牛血清白蛋白和ph值7.0左右缓冲液配制而成，使得抗体保存期限明显延长。

超氧化物歧化酶（SOD）是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。SOD是1938年Marn等人首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起，人们对其的研究已经有70多年的历史了。1969年McCord等重新发现这种蛋白，并且发现了他们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为超氧化物歧化酶。SOD是中国卫生部批准的具有抗衰老、免疫调节、调节血脂、抗辐射、美容功能的物质之一；美国注册专利号为（CN1152337A）认定SOD用于预防和治疗大脑局部出血、溃疡、消除炎症、心律失常、浮肿、中毒、风湿、类风湿、风湿性关节炎、放射性损伤、药物中毒等症；欧洲注册专利号为（499621）认定SOD用于预防和治疗癌症及术后放、化疗带来的脑损伤，抑制癌细胞再形成或扩散；日本注册专利号为（4327541,4312533）认定SOD用于治疗器官移植后抗免疫反应具有奇效，用于治疗大脑局部出血导致神经坏死，防止半身不遂的治疗药物。综上，SOD目前国内外主要内容将其用于治疗和美容方面，可能由于本发明应用领域不是市场热捧领域并且本发明应用范围和经济效益不如其他领域，故而在本发明所涉及的领域没有人研究和关注。

用于血型检测的抗A、抗B、抗D等单克隆抗体的室温长期保存直接决定了用其生产的微柱凝胶免疫检测试剂卡的使用效期。本发明创造性的将SOD应用于抗体保护中，能够提高抗体保存过程中的抗氧化能力，使得抗体保存期限明显延长。同时再加入SOD之后，与牛血清白蛋白协同发挥作用，使得抗体保存期限明显延长，并且使得牛血清白蛋白的用量明显减少。解决了抗A、抗B、抗D等单克隆抗体室温长期保存的问题，使得抗体室温保存可达2年。从而解决了微柱凝胶免疫检测试剂卡室温长期保存的难题，使得微柱凝胶免疫检测试剂卡得意广泛应用，从而满足临床检测需要。

发明内容

本发明通过一种抗体试剂保存液，的目的是为了解决抗A、抗B、抗D等单克隆抗体室温长期保存的问题，从而解决了微柱凝胶免疫检测试剂卡生产的难题，使得微柱凝胶免疫检测试剂卡的生产得以实现并且使其室温保存效期达到一年，仍能够满足临床检测需要，而提供一种抗体保存时间长、性价比更高的抗体试剂保存液。

本发明提供的一种抗体试剂保存液，是由以下原料按质量体积比制成的：

氯化钠 0.7～0.9%；磷酸氢二钾 3.5%；磷酸二氢钠 3.9%；硫酸卡那霉素0.1～0.5%；牛血清白蛋白0.5～0.8%；SOD 0.1～0.5%。

本发明所述的抗体试剂保存液的制备方法，其特征在于：

按比例称取氯化钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、硫酸卡那霉素、牛血清白蛋白、SOD 加蒸馏水溶解定容后，调整Ph值至 6.80～7.05即得。

本发明现有技术相比具有以下积极效果：

作为复方制剂含有氯化钠作为渗透压稳定剂保持溶液的合理渗透压；磷酸氢二钾和磷酸氢二钠作为缓冲系统为溶液提供合理的缓冲；硫酸卡那霉素作为抗微生物剂，保证溶液不被微生物污染；牛血清白蛋白最为蛋白稳定剂，为抗体长期保存提供适当的保护；最后本发明创造性的将SOD应用于抗体保护中，SOD是抗氧化剂，能够提高抗体保存过程中的抗氧化能力，使得抗体保存期限明显延长。同时再加入SOD之后，与牛血清白蛋白协同发挥作用，使得抗体保存期限明显延长，并且使得牛血清白蛋白的用量明显减少。

本发明应用于微柱凝胶免疫检测试剂卡生产中抗A、抗B、抗D等单克隆抗体的保存。

附图说明：

图1：本发明保存的抗A、抗B、抗D单克隆抗体用于微柱凝胶免疫检测卡（ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体））生产当时检测结果示意图。

图2：用牛血清白蛋白保存的抗A、抗B、抗D单克隆抗体用于微柱凝胶免疫检测卡（ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体））生产当时检测结果示意图。

图3：用SOD保存的抗A、抗B、抗D单克隆抗体用于微柱凝胶免疫检测卡（ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体））生产当时检测结果示意图。

图4：本发明保存的抗A、抗B、抗D单克隆抗体用于微柱凝胶免疫检测卡（ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体））室温保存0.5年后检测结果示意图。

图5：用牛血清白蛋白保存的抗A、抗B、抗D单克隆抗体用于微柱凝胶免疫检测卡（ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体））室温保存0.5年后检测结果示意图。

图6：用SOD保存的抗A、抗B、抗D单克隆抗体用于微柱凝胶免疫检测卡（ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体））室温保存0.5年后检测结果示意图。

图7：本发明保存的抗A、抗B、抗D单克隆抗体用于微柱凝胶免疫检测卡（ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体））室温保存1年后检测结果示意图。

图8：用牛血清白蛋白保存的抗A、抗B、抗D单克隆抗体用于微柱凝胶免疫检测卡（ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体））室温保存1年后检测结果示意图。

图9：用SOD保存的抗A、抗B、抗D单克隆抗体用于微柱凝胶免疫检测卡（ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体））室温保存1年后检测结果示意图。

图10：本发明保存的抗A、抗B、抗D单克隆抗体用于微柱凝胶免疫检测卡（ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体））室温保存2年后检测结果示意图。

图11：用牛血清白蛋白保存的抗A、抗B、抗D单克隆抗体用于微柱凝胶免疫检测卡（ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体））室温保存2年后检测结果示意图。

图12：用SOD保存的抗A、抗B、抗D单克隆抗体用于微柱凝胶免疫检测卡（ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体））室温保存2年后检测结果示意图。

具体实施方式

实施例1

a. 用分析天平精确称量氯化钠7g；磷酸氢二钾0.35g；磷酸二氢钠0.4g；硫酸卡那霉素1g；牛血清白蛋白5g；SOD 1g。

b. 加入适量蒸馏水将上述药品充分溶解，定容至1000ml，用NaOH或HCL调整Ph至 6.80。

实施例2

a. 用分析天平精确称量氯化钠8.5g；磷酸氢二钾0.35g；磷酸二氢钠0.4g；硫酸卡那霉素3g；牛血清白蛋白7g；SOD 3g。

b. 加入适量蒸馏水将上述药品充分溶解，定容至1000ml，用NaOH或HCL调整Ph至 6.90。

实施例3

a. 用分析天平精确称量氯化钠9g；磷酸氢二钾0.35g；磷酸二氢钠0.4g；硫酸卡那霉素5g；牛血清白蛋白8g；SOD 5g。

b. 加入适量蒸馏水将上述药品充分溶解，定容至1000ml，用NaOH或HCL调整Ph至 7.05。

试验例

将实施例1～3的保存液以及对照组（对照组1：只加牛白作为保护剂；对照组:2：只加SOD作为保护剂）保存的抗A、抗B、抗D单克隆抗体用于微柱凝胶免疫检测卡（ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体））生产，并将生产的ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体）放置于室温，不同时间进行检测，检测结果表明本发明保存的抗体生产的试剂卡，在室温能够保存2年检测结果仍然合格，而对照组则在半年时检测结果就已经不合格了（参见图1~12），可见本发明保存抗体的效果明显，使得抗体室温保存时间大大延长4倍。

具体实施如下：

1. 本发明保存的抗A、抗B单克隆抗体用于微柱凝胶免疫检测卡（ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体））生产。

a．将效价≥128的抗A、抗B单克隆抗体与抗体保存液按照1:1比例进行混合，并搅拌均匀；

b．凝胶的制备：选择颗粒大小适中的葡聚糖凝胶。将葡聚糖凝胶干粉，用3倍体积的步骤一中的凝胶悬浮溶液浸泡24小时，待凝胶充分膨胀后，用凝胶悬浮溶液洗涤5次，然后再用蒸馏水洗涤5次。除去凝胶破损碎片和聚集的凝胶颗粒以及凝胶中过多的盐离子。收集得到颗粒大小均匀的、且完整呈球形凝胶颗粒。

c．特异性胶及中性胶的配制

特异性胶配制：分别取抗A单克隆抗体、抗B单克隆抗体和抗D单克隆抗体与已溶胀的葡聚糖凝胶按照1:1比例混合，间断搅拌均匀15～40分钟，即为半成品特异性胶。

中性胶配制：用生理氯化钠溶液与溶胀葡聚糖凝胶按照2: 1比例混合，间断搅拌均匀15～40分钟，即为半成品的中性胶。

d．半成品检定

1. 特异性检定

1.1材料

（1）试剂：ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体）。

（2）红细胞标本：健康人A1、A1B、A2、A2B、O、B、ODCe/Dce(OR1R1)、OdcE/DcE(OR2R2)；Odce/dce（R0r）ODCe/dce（R1r）Odce/dce（Or’r）Odce/dce（Orr）分别用生理盐水溶液配制成0.5%红细胞悬液。

（3）已知A型和B型血清用于反定型。

1.2试验

每型0.5%红细胞悬液加入一个卡的第一至第四支微管中各50μl；向第五、六支微管中加入已知A型和B型血清各50 μl，再向第五支微管中加入A型0.5%红细胞悬液50μl，第六支微管中加入B型0.5%红细胞悬液50 μl。用专用离心机离心5分钟，900 rpm 2分钟，1,500 rpm 3分钟，肉眼观察结果。

1.3结果判定

（1）阳性结果和阴性结果判定：

阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。

阴性结果：被检红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部。

（2）特异性结果判定，见表1。

表1 ABO、RhD血型检定微柱凝胶试剂特异性检测

2. 效价检定

按2010版中国药典抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体）制造及检定规程进行。

检测结果：抗A单克隆抗体效价≥128；抗B单克隆抗体效价≥128；抗D单克隆抗体效价≥128。

e．分装

按照每管24μl凝胶液进行分装。微管凝胶卡片排列的六支微柱管中，依次分别是抗A特异性胶，抗B特异性胶，抗D特异性胶，阴性对照中性胶，反定型（A型红细胞）中性胶，反定型（B型红细胞）中性胶。

f．封口

将制备的微柱凝胶卡上部微柱管口用拥有专利技术的铝箔封口机进行热力塑封。

g．成品检定

1. 外观

外观整洁，塑卡透明或微带乳光，凝胶呈均匀微颗粒状，无干裂、无气泡、上清清晰，抗A微管中上清略呈兰色，抗B略呈黄色，抗D略呈灰色，其他三个中性胶管中上清为白色。无浑浊，无异物。封装无破损。

2. 分装量的质量控制指标

检查方法：容量法

结果判定：

每卡装量均符合标示装量。

3. 密封密闭性质量控制指标

检查方法：质量法

结果判定：

①直立前后称重，重量相同，密封密闭合格。

②直立前后称重，重量减轻，密封密闭不合格。

检测结果合格

4. 特异性检定

同半成品检测方法。

5. 精密度测定

同一样本重复测定20次，结果一致。

结论：

根据附图1~12分析表明，本发明在室温能够保存2年检测结果仍然合格，而对照组则在半年时检测结果就已经不合格了（参见图1~12），可见本发明保存抗体的效果明显，使得抗体室温保存时间大大延长4倍。

Claims

1.一种抗体试剂保存液，其特征在于是由以下原料按质量体积比制成的：

氯化钠 0.7～0.9%；磷酸氢二钾 0.035%；磷酸二氢钠 0.04%；硫酸卡那霉素0.1～0.5%；牛血清白蛋白0.5～0.8%；SOD 0.1～0.5%；pH值为6.80～7.05。