CN204347031U - 一种同时快速检测饲料中9种有害物质的检测盘 - Google Patents
一种同时快速检测饲料中9种有害物质的检测盘 Download PDFInfo
- Publication number
- CN204347031U CN204347031U CN201520035069.8U CN201520035069U CN204347031U CN 204347031 U CN204347031 U CN 204347031U CN 201520035069 U CN201520035069 U CN 201520035069U CN 204347031 U CN204347031 U CN 204347031U
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- test strip
- detection
- antibody
- detection zone
- glass fibre
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本实用新型涉及一种同时快速检测饲料中9种有害物质的检测盘。该检测盘包括盘体，盘体由上盘体和下盘体固定连接而成，所述上盘体中央有一个圆形加样孔，加样孔底部设有一个圆形样品垫Ⅰ，所述下盘体分为3个区域，分别为检测区Ⅰ，检测区Ⅱ和检测区Ⅲ，所述的3个检测区分别用隔板隔开，其中检测区Ⅰ为霉菌毒素类检测区，检测区Ⅱ为瘦肉精类检测区，检测区Ⅲ为抗生素类检测区，每个检测区设有若干试纸条，所有检测试纸条共用样品垫Ⅰ，且围绕样品垫Ⅰ呈放射性环形阵列，每个检测试纸条的两侧用卡条固定。本实用新型能同时、批量检测待检样品中是否含有多种有毒有害残留，具有特异性好、灵敏度高、耗时短、可同时检9种物质的优点。
Description
技术领域
本实用新型属于食品安全检测领域，具体涉及一种能同时对饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、伏马毒素、呕吐毒素、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、氯霉素和呋喃唑酮进行快速检测的检测盘，可用于食品安全中有害物质的检测。
背景技术
霉菌毒素是农作物或动物性蛋白因霉菌而产生的有毒代谢产物，主要包括黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、伏马毒素和呕吐毒素等。食用受黄曲霉毒素B1污染的食品，会出现急性中毒。临床表现以黄疸为主，并有呕吐、厌食和发烧等症状。重症者在2~3周后出现腹水、下肢水肿，甚至死亡，死亡前出现胃肠道出血。玉米赤霉烯酮对人类具有生殖发育毒性、免疫毒性、肝脏毒性等。伏马毒素对人不仅是一种促癌物，而且完全是一种致癌物。人在误食被该呕吐毒素污染的粮谷类后可以产生广泛的毒性效应，如导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡。霉菌毒素几乎存在所有的人类食品原料和饲料原料中，它造成的危害是一个全球性的问题，因此，霉菌毒素的检测对人类健康具有重大意义。
盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺都是肾上腺类神经兴奋剂，又俗称“瘦肉精”，能促进瘦肉的生长和抑制动物脂肪的生长。但如果作为饲料添加剂，使用剂量是人用药剂量的10倍以上，才能达到提高瘦肉率的效果。它用量大、使用的时间长、代谢慢，所以在屠宰前到上市，在猪体内的残留量都很大。这个残留量通过食物进入人体，就使人体渐渐地中毒，积蓄中毒。如果一次摄入量过大，就会产生异常生理反应的中毒现象，因此而被禁用。但是，国内一些养猪户为了追求自身利益，提高猪肉的瘦肉率，在饲料中掺入盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等“瘦肉精”，从而导致肉类食品出现安全危机，直接影响到广大消费者的身体健康，因此对猪肉中盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺的含量是否超标进行检测具有非常重大的意义。
氯霉素通过抑制细菌蛋白合成而发挥抑菌作用，对大多数细菌有效。但其具有抑制骨髓造血功能、导致灰婴综合症等副作用，世界各国明令禁止使用。呋喃唑酮是人工合成的光谱抗生素，有非常好的抗菌作用，但近来的科学研究表明，该药可使实验动物发生癌症和基因突变，因此，国家规定禁止在食用动物中添加。以上表明，我们必须对食品中的氯霉素和呋喃唑酮进行检测。
目前，对上述几种有害残留的的诊断方法主要有气相色谱-质谱法（GC-MS）、高效液相色谱法（HPLC）等方法。但是由于气相色谱-质谱法、高效液相色谱法等需要的仪器价格高昂，检测过程繁琐、需要专业从事人员操作，不易于在基层的推广。因此，上述两种方法在使用中受到很大的限制。
实用新型内容
本实用新型的目的在于提供一种操作方便、快速、有效且能同时快速检测饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、伏马毒素、呕吐毒素、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、氯霉素和呋喃唑酮的检测盘。
为了实现上述目的，本实用新型采用如下技术方案：
一种同时快速检测饲料中9种有害物质的检测盘，包括盘体，所述盘体由上盘体和下盘体固定连接而成，所述上盘体中央有一个圆形加样孔，加样孔底部设有一个圆形样品垫Ⅰ，所述下盘体分为3个区域，分别为检测区Ⅰ，检测区Ⅱ和检测区Ⅲ，所述的3个检测区分别用隔板隔开，其中检测区Ⅰ为霉菌毒素类检测区，包括黄曲霉毒素B1检测试纸条、玉米赤霉烯酮检测试纸条、伏马毒素检测试纸条和呕吐毒素检测试纸条；检测区Ⅱ为瘦肉精类检测区，包括盐酸克伦特罗检测试纸条、沙丁胺醇检测试纸条和莱克多巴胺检测试纸条；检测区Ⅲ为抗生素类检测区，包括氯霉素检测试纸条和呋喃唑酮检测试纸条，所有检测试纸条共用样品垫Ⅰ，且围绕样品垫Ⅰ呈放射性环形阵列，每个检测试纸条的两侧用卡条固定。
所述的每种检测试纸条均由底板、样品垫Ⅱ、涂覆胶体金颗粒标记抗体的玻璃纤维膜、包被膜和吸水纸组成，其中，包被膜粘贴在底板上面，在该包被膜两端的上面分别粘贴涂覆胶体金颗粒标记抗体的玻璃纤维膜和吸水纸，在该涂覆胶体金颗粒标记抗体的玻璃纤维素膜远离包被膜的一端的上面粘贴样品垫Ⅱ，在所述包被膜的上面设有检测线和质控线，每种检测试纸条的吸水纸位于所述环形阵列的径向外端。
所述盘体材料为PVC材料，所述样品垫Ⅰ直径比加样孔直径大1mm。
黄曲霉毒素B1检测试纸条玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗黄曲霉毒素B1抗体，检测线上包被黄曲霉毒素B1-BSA偶联物；玉米赤霉烯酮检测试纸条玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗玉米赤霉烯酮抗体，检测线上包被玉米赤霉烯酮-BSA偶联物；伏马毒素检测试纸条玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗伏马毒素抗体，检测线上包被伏马毒素-BSA偶联物；呕吐毒素检测试纸条玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗呕吐毒素抗体，检测线上包被呕吐毒素-BSA偶联物；盐酸克伦特罗检测试纸条玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗盐酸克伦特罗抗体，检测线上包被盐酸克伦特罗-BSA偶联物；沙丁胺醇检测试纸条玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗沙丁胺醇抗体，检测线上包被沙丁胺醇-BSA偶联物；莱克多巴胺检测试纸条玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗莱克多巴胺抗体，检测线上包被莱克多巴胺-BSA偶联物；氯霉素检测试纸条玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗氯霉素抗体，检测线上包被氯霉素-BSA偶联物；呋喃唑酮检测试纸条玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗呋喃唑酮抗体，检测线上包被呋喃唑酮-BSA偶联物，上述所有检测试纸条质控线上均包被抗鼠抗体。
所述包被膜为硝酸纤维素膜。
以上用到的抗黄曲霉毒素B1抗体、抗玉米赤霉烯酮抗体、抗伏马毒素抗体、抗呕吐毒素抗体、抗盐酸克伦特罗抗体、抗沙丁胺醇抗体、抗莱克多巴胺抗体、抗氯霉素抗体和抗呋喃唑酮抗体均为高纯度的单克隆抗体，可用该领域内的常规方法制备而成。
本实用新型采用竞争性免疫层析法的原理，通过对金标记抗体pH值、浓度以及包被膜上抗原浓度的调整，使其能够产生特异性条带，从而满足检测机构、农户、基层以及个人对食品中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、伏马毒素、呕吐毒素、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、氯霉素和呋喃唑酮检测的需求。
本实用新型在对一份样品进行检测时，能同时检测出该样品是否含有黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、伏马毒素、呕吐毒素、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、氯霉素和呋喃唑酮。其具有特异性好、灵敏度高、检测速度快等优点，且不需要特殊仪器设备、操作简单，能广泛地用于农户、基层以及个人对于饲料中上述9中有毒有害残留的检测。
附图说明
图1为本实用新型所述检测盘上盘体的俯视图：图中1为上盘体，2为加样孔；
图2为本实用新型所述检测盘下盘体的俯视图：图中3为下盘体，4为样品垫Ⅰ，5为黄曲霉毒素B1检测试纸条，6为玉米赤霉烯酮检测试纸条，7为伏马毒素检测试纸条，8为呕吐毒素检测试纸条，9为盐酸克伦特罗检测试纸条，10为沙丁胺醇检测试纸条，11为莱克多巴胺检测试纸条，12为氯霉素检测试纸条，13为呋喃唑酮检测试纸条，14为隔板，15为卡条；
图3为图2中一种检测试纸条的侧面结构示意图，以黄曲霉毒素B1检测试纸条5做具体说明如下：图中16为底板，17为样品垫Ⅱ，18为涂覆胶体金颗粒标记抗黄曲霉毒素B1抗体的玻璃纤维膜，19为包被膜，20为吸水纸；
图4为图3的俯视图：图中21为质控线，22为检测线；
图5为图2中黄曲霉毒素B1检测试纸条的阳性结果示意图（即包被膜19表面的质控线21显红色，检测线22不显色）；
图6为图2中黄曲霉毒素B1检测试纸条的阴性结果示意图（即包被膜19表面的质控线21和检测线22均显红色）；
图7为图2中黄曲霉毒素B1检测试纸条的无效结果示意图（即包被膜19表面的质控线21和检测线22均不显色）。
具体实施方式
下面结合附图对本实用新型做进一步详细说明，但本实用新型的保护范围不限于此。
如图1、图2、图3、图4所示，一种同时快速测定饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、伏马毒素、呕吐毒素、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、氯霉素和呋喃唑酮的检测盘，该检测盘包括一圆形盘体，盘体材料为PVC材料，所述盘体由上盘体1和下盘体3固定连接而成，所述上盘体中央有一个圆形加样孔2，加样孔2底部设有一个圆形样品垫Ⅰ4，所述样品垫Ⅰ4比加样孔2直径大1mm，所述下盘体3分为3个区域，分别为检测区Ⅰ，检测区Ⅱ和检测区Ⅲ，所述的3个检测区分别用隔板14隔开，其中检测区Ⅰ为霉菌毒素类检测区，包括黄曲霉毒素B1检测试纸条5、玉米赤霉烯酮检测试纸条6、伏马毒素检测试纸条7和呕吐毒素检测试纸条8；检测区Ⅱ为瘦肉精类检测区，包括盐酸克伦特罗检测试纸条9、沙丁胺醇检测试纸条10和莱克多巴胺检测试纸条11；检测区Ⅲ为抗生素类检测区，包括氯霉素检测试纸条12和呋喃唑酮检测试纸条13，所有检测试纸条共用样品垫Ⅰ4，且围绕样品垫Ⅰ4呈放射性环形阵列，每个检测试纸条的两侧用卡条15固定。
每种检测试纸条均由底板16、样品垫Ⅱ17、涂覆胶体金颗粒标记抗体的玻璃纤维膜18、包被膜19和吸水纸20组成，其中，包被膜19粘贴在底板16上面，在该包被膜19两端的上面分别粘贴涂覆胶体金颗粒标记抗体的玻璃纤维膜18和吸水纸20，在该涂覆胶体金颗粒标记抗体的玻璃纤维素膜18远离包被膜19的一端的上面粘贴样品垫Ⅱ17，在所述包被膜19的上面设有检测线22和质控线21，每种检测试纸条的吸水纸20位于所述环形阵列的径向外端，9种检测试纸条质控线21上均包被抗鼠抗体，所述包被膜19为硝酸纤维素膜。
黄曲霉毒素B1检测试纸条5中玻璃纤维膜18为涂覆胶体金颗粒标记抗黄曲霉毒素B1抗体，检测线22上包被黄曲霉毒素B1-BSA偶联物，玉米赤霉烯酮检测试纸条6中玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗玉米赤霉烯酮抗体，检测线上包被玉米赤霉烯酮-BSA偶联物，伏马毒素检测试纸条7中玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗伏马毒素抗体，检测线上包被伏马毒素-BSA偶联物，呕吐毒素检测试纸条8中玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗呕吐毒素抗体，检测线上包被呕吐毒素-BSA偶联物，盐酸克伦特罗检测试纸条9中玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗盐酸克伦特罗抗体，检测线上包被盐酸克伦特罗-BSA偶联物，沙丁胺醇检测试纸条10中玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗沙丁胺醇抗体，检测线上包被沙丁胺醇-BSA偶联物，莱克多巴胺检测试纸条11中玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗莱克多巴胺抗体，检测线上包被莱克多巴胺-BSA偶联物，氯霉素检测试纸条12中玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗氯霉素抗体，检测线上包被氯霉素-BSA偶联物，呋喃唑酮检测试纸条13中玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗呋喃唑酮抗体，检测线上包被呋喃唑酮-BSA偶联物。
本实用新型所述检测盘采用间接竞争法，每种纸条均采用两条带显色的胶体金层析法制备，显带颜色为红色线条，具体制备工艺如下：
（一） 黄曲霉毒素B1检测试纸条5的制备：
（1）胶体金溶液的制备：将双蒸水置磁力搅拌器上搅拌加热至沸腾，按终浓度为万分之二的量迅速加入浓度为1%的氯金酸溶液，煮沸5分钟；再按所加入氯金酸溶液1.8倍的体积量加入浓度为1%的柠檬酸三钠溶液，煮沸10分钟后，冷却至室温，用双蒸水定容至氯金酸终浓度为万分之二，常温避光保存备用。
（2）金标抗体玻璃纤维膜的制备：用5M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至7.5，按8μg抗体/毫升胶体金溶液的比例浓度加入抗黄曲霉毒素B1的单克隆抗体，混匀，静置5分钟；再按5%体积量加入浓度为10%的BSA溶液，混匀，静置5分钟；10000rpm离心30分钟，弃上清，沉淀用标记洗涤液洗涤一次，离心后弃上清，沉淀用十分之一初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解，然后按每毫升溶液铺10平方厘米的量涂覆在玻璃纤维膜上，真空干燥3小时后，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
（3）硝酸纤维素包被膜的制备：在硝酸纤维素膜上喷涂黄曲霉毒素B1-BSA偶联物及抗鼠IgG抗体，并呈两条线平行排列，分别形成所述的检测线和质控线，37℃烘干处理2小时，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
检测线：调试喷膜仪，喷液量为1μl/cm，用包被缓冲液稀释黄曲霉毒素B1-BSA偶联物，浓度为0.5mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。
质控线：调试喷膜仪，喷液量为1μl/cm，用包被缓冲液稀释抗鼠IgG多克隆抗体，浓度为1.0mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。
包被膜上所划两条线应细致均匀，相邻两线间隔0.4cm。
（4）大板组条：大板组条各组分规格（长×宽）：底板：30cm×7.6cm；样品垫Ⅱ：30cm×3.0cm；金标记抗体玻璃纤维膜：30cm×0.7cm；硝酸纤维素包被膜：30cm×2.0cm；吸水纸：30cm×3.2cm。
各组分按如下方法进行组条：将硝酸纤维素包被膜的底面粘贴在底板上，在该包被膜两端的上面粘贴金标记抗体玻璃纤维膜和吸水纸，在该玻璃纤维素膜远离包被膜的一端的上面粘贴样品垫Ⅱ，组成大板。组装车间的湿度要控制在30%以下。
（5）切条：用切条机将大板切成单份，每份宽度为4毫米，随机抽检，灵敏度能检出室内质控品，无非特异性条带。
（二） 玉米赤霉烯酮检测试纸条6的制备：
（1）胶体金溶液的制备：同黄曲霉毒素B1胶体金溶液的制备。
（2）金标抗体玻璃纤维膜的制备：用5M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至7.5，按7μg抗体/毫升胶体金溶液的比例浓度加入抗玉米赤霉烯酮的单克隆抗体，混匀，静置5分钟；再按5%体积量加入浓度为10%的BSA溶液，混匀，静置5分钟；10000rpm离心30分钟，弃上清，沉淀用标记洗涤液洗涤一次，离心后弃上清，沉淀用十分之一初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解，然后按每毫升溶液铺10平方厘米的量涂覆在玻璃纤维膜上，真空干燥3小时后，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
（3）硝酸纤维素包被膜的制备：在硝酸纤维素膜上喷涂玉米赤霉烯酮-BSA偶联物及抗鼠IgG抗体，并呈两条线平行排列，分别形成所述的检测线和质控线，37℃烘干处理2小时，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
检测线：调试喷膜仪，喷液量为1μl/cm，用包被缓冲液稀释玉米赤霉烯酮-BSA偶联物，浓度为0.7mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。
质控线：调试喷膜仪，喷液量为1μl/cm，用包被缓冲液稀释抗鼠IgG多克隆抗体，浓度为1.0mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。
（4）大板组条：同黄曲霉毒素B1大板组条。
（5）切条：同黄曲霉毒素B1切条。
（三） 伏马毒素检测试纸条7的制备：
（1）胶体金溶液的制备：同黄曲霉毒素B1胶体金溶液的制备。
（2）金标抗体玻璃纤维膜的制备：用5M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至7.5，按7.5μg抗体/毫升胶体金溶液的比例浓度加入抗伏马毒素的单克隆抗体，混匀，静置5分钟；再按5%体积量加入浓度为10%的BSA溶液，混匀，静置5分钟；10000rpm离心30分钟，弃上清，沉淀用标记洗涤液洗涤一次，离心后弃上清，沉淀用十分之一初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解，然后按每毫升溶液铺10平方厘米的量涂覆在玻璃纤维膜上，真空干燥3小时后，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
（3）硝酸纤维素包被膜的制备：在硝酸纤维素膜上喷涂伏马毒素-BSA偶联物及抗鼠IgG抗体，并呈两条线平行排列，分别形成所述的检测线和质控线，37℃烘干处理2小时，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
检测线：调试喷膜仪，喷液量为1μl/cm，用包被缓冲液稀释伏马毒素-BSA偶联物，浓度为0.8mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。
质控线：调试喷膜仪，喷液量为1μl/cm，用包被缓冲液稀释抗鼠IgG多克隆抗体，浓度为1.0mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。
（4）大板组条：同黄曲霉毒素B1大板组条。
（5）切条：同黄曲霉毒素B1切条。
（四） 呕吐毒素检测试纸条8的制备：
（1）胶体金溶液的制备：同黄曲霉毒素B1胶体金溶液的制备。
（2）金标抗体玻璃纤维膜的制备：用5M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至7.5，按8μg抗体/毫升胶体金溶液的比例浓度加入抗呕吐毒素的单克隆抗体，混匀，静置5分钟；再按5%体积量加入浓度为10%的BSA溶液，混匀，静置5分钟；10000rpm离心30分钟，弃上清，沉淀用标记洗涤液洗涤一次，离心后弃上清，沉淀用十分之一初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解，然后按每毫升溶液铺10平方厘米的量涂覆在玻璃纤维膜上，真空干燥3小时后，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
（3）硝酸纤维素包被膜的制备：在硝酸纤维素膜上喷涂呕吐毒素-BSA偶联物及抗鼠IgG抗体，并呈两条线平行排列，分别形成所述的检测线和质控线，37℃烘干处理2小时，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
检测线：调试喷膜仪，喷液量为1μl/cm，用包被缓冲液稀释呕吐毒素-BSA偶联物，浓度为0.8mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。
质控线：调试喷膜仪，喷液量为1μl/cm，用包被缓冲液稀释抗鼠IgG多克隆抗体，浓度为1.0mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。
（4）大板组条：同黄曲霉毒素B1大板组条。
（5）切条：同黄曲霉毒素B1切条。
（五） 盐酸克伦特罗检测试纸条9的制备：
（1）胶体金溶液的制备：同黄曲霉毒素B1胶体金溶液的制备。
（2）金标抗体玻璃纤维膜的制备：用5M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至7.5，按10μg抗体/毫升胶体金溶液的比例浓度加入抗盐酸克伦特罗的单克隆抗体，混匀，静置5分钟；再按5%体积量加入浓度为10%的BSA溶液，混匀，静置5分钟；10000rpm离心30分钟，弃上清，沉淀用标记洗涤液洗涤一次，离心后弃上清，沉淀用十分之一初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解，然后按每毫升溶液铺10平方厘米的量涂覆在玻璃纤维膜上，真空干燥3小时后，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
（3）硝酸纤维素包被膜的制备：在硝酸纤维素膜上喷涂盐酸克伦特罗-BSA偶联物及抗鼠IgG抗体，并呈两条线平行排列，分别形成所述的检测线和质控线，37℃烘干处理2小时，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
检测线：调试喷膜仪，喷液量为1μl/cm，用包被缓冲液稀释盐酸克伦特罗-BSA偶联物，浓度为0.6mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。
质控线：调试喷膜仪，喷液量为1μl/cm，用包被缓冲液稀释抗鼠IgG多克隆抗体，浓度为1.0mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。
（4）大板组条：同黄曲霉毒素B1大板组条。
（5）切条：同黄曲霉毒素B1切条。
（六） 沙丁胺醇检测试纸条10的制备：
（1）胶体金溶液的制备：同黄曲霉毒素B1胶体金溶液的制备。
（2）金标抗体玻璃纤维膜的制备：用5M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至7.5，按10μg抗体/毫升胶体金溶液的比例浓度加入抗沙丁胺醇的多克隆抗体，混匀，静置5分钟；再按5%体积量加入浓度为10%的BSA溶液，混匀，静置5分钟；10000rpm离心30分钟，弃上清，沉淀用标记洗涤液洗涤一次，离心后弃上清，沉淀用十分之一初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解，然后按每毫升溶液铺10平方厘米的量涂覆在玻璃纤维膜上，真空干燥3小时后，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
（3）硝酸纤维素包被膜的制备：在硝酸纤维素膜上喷涂沙丁胺醇-BSA偶联物及抗鼠IgG抗体，并呈两条线平行排列，分别形成所述的检测线和质控线，37℃烘干处理2小时，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
检测线：调试喷膜仪，喷液量为1μl/cm，用包被缓冲液稀释沙丁胺醇-BSA偶联物，浓度为0.9mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。
质控线：调试喷膜仪，喷液量为1μl/cm，用包被缓冲液稀释抗鼠IgG多克隆抗体，浓度为1.0mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。
（4）大板组条：同黄曲霉毒素B1大板组条。
（5）切条：同黄曲霉毒素B1切条。
（七） 莱克多巴胺检测试纸条11的制备：
（1）胶体金溶液的制备：同黄曲霉毒素B1胶体金溶液的制备。
（2）金标抗体玻璃纤维膜的制备：用5M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至7.5，按10μg抗体/毫升胶体金溶液的比例浓度加入抗莱克多巴胺的单克隆抗体，混匀，静置5分钟；再按5%体积量加入浓度为10%的BSA溶液，混匀，静置5分钟；10000rpm离心30分钟，弃上清，沉淀用标记洗涤液洗涤一次，离心后弃上清，沉淀用十分之一初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解，然后按每毫升溶液铺10平方厘米的量涂覆在玻璃纤维膜上，真空干燥3小时后，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
（3）硝酸纤维素包被膜的制备：在硝酸纤维素膜上喷涂莱克多巴胺-BSA偶联物及抗鼠IgG抗体，并呈两条线平行排列，分别形成所述的检测线和质控线，37℃烘干处理2小时，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
检测线：调试喷膜仪，喷液量为1μl/cm，用包被缓冲液稀释莱克多巴胺-BSA偶联物，浓度为0.7mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。
质控线：调试喷膜仪，喷液量为1μl/cm，用包被缓冲液稀释抗鼠IgG多克隆抗体，浓度为1.0mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。
（4）大板组条：同黄曲霉毒素B1大板组条。
（5）切条：同黄曲霉毒素B1切条。
（八） 氯霉素检测试纸条12的制备：
（1）胶体金溶液的制备：同黄曲霉毒素B1胶体金溶液的制备。
（2）金标抗体玻璃纤维膜的制备：用5M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至7.5，按10μg抗体/毫升胶体金溶液的比例浓度加入抗氯霉素的单克隆抗体，混匀，静置5分钟；再按5%体积量加入浓度为10%的BSA溶液，混匀，静置5分钟；10000rpm离心30分钟，弃上清，沉淀用标记洗涤液洗涤一次，离心后弃上清，沉淀用十分之一初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解，然后按每毫升溶液铺10平方厘米的量涂覆在玻璃纤维膜上，真空干燥3小时后，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
（3）硝酸纤维素包被膜的制备：在硝酸纤维素膜上喷涂氯霉素-BSA偶联物及抗鼠IgG抗体，并呈两条线平行排列，分别形成所述的检测线和质控线，37℃烘干处理2小时，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
检测线：调试喷膜仪，喷液量为1μl/cm，用包被缓冲液稀释氯霉素-BSA偶联物，浓度为0.9mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。
质控线：调试喷膜仪，喷液量为1μl/cm，用包被缓冲液稀释抗鼠IgG多克隆抗体，浓度为1.0mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。
（4）大板组条：同黄曲霉毒素B1大板组条。
（5）切条：同黄曲霉毒素B1切条。
（九） 呋喃唑酮检测试纸条13的制备：
（1）胶体金溶液的制备：同黄曲霉毒素B1胶体金溶液的制备。
（2）金标抗体玻璃纤维膜的制备：用5M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至7.5，按10μg抗体/毫升胶体金溶液的比例浓度加入抗呋喃唑酮的单克隆抗体，混匀，静置5分钟；再按5%体积量加入浓度为10%的BSA溶液，混匀，静置5分钟；10000rpm离心30分钟，弃上清，沉淀用标记洗涤液洗涤一次，离心后弃上清，沉淀用十分之一初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解，然后按每毫升溶液铺10平方厘米的量涂覆在玻璃纤维膜上，真空干燥3小时后，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
（3）硝酸纤维素包被膜的制备：在硝酸纤维素膜上喷涂呋喃唑酮-BSA偶联物及抗鼠IgG抗体，并呈两条线平行排列，分别形成所述的检测线和质控线，37℃烘干处理2小时，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
检测线：调试喷膜仪，喷液量为1μl/cm，用包被缓冲液稀释呋喃唑酮-BSA偶联物，浓度为0.7mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。
质控线：调试喷膜仪，喷液量为1μl/cm，用包被缓冲液稀释抗鼠IgG多克隆抗体，浓度为1.0mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。
（4）大板组条：同黄曲霉毒素B1大板组条。
（5）切条：同黄曲霉毒素B1切条。
以上（一）至（九）中9种检测试纸条用到的10%BSA溶液、标记洗涤液、金标抗体保存液和包被缓冲液的具体组分配比如下：
A 10%BSA溶液：每1000mL超纯水中含牛血清白蛋白100g。
B 标记洗涤液：每1000mL超纯水中含牛血清白蛋白4g，聚乙二醇8000 2g，聚乙烯吡咯烷酮2g，蔗糖2g，Tris 1.211g，并调节pH至8.1。
C 金标抗体保存液：每1000mL超纯水中含牛血清白蛋白25g，聚乙二醇8000 5g，Tris 10.2g，氢氧化钠2.5g，吐温-207.5mL，并调节pH至8.5。
D包被缓冲液：每1000mL超纯水中含牛血清白蛋白0.01g，十二水合磷酸氢二钠30.072g，磷酸二氢钾2.176g。
（十） 组装检测盘
将以上9种检测试纸条按次序放置检测区内，在9种试纸条样品垫的交汇处放上样品垫Ⅰ，盖上检测盘上盘体，检测盘即组装完毕。将一个检测盘、一包干燥剂和一根塑料滴管装在铝箔袋内，用封口机密封，密封完毕后放入试剂盒中，常温干燥保存。
本实用新型采用高纯度的黄曲霉毒素B1-BSA偶联物、玉米赤霉烯酮-BSA偶联物、伏马毒素-BSA偶联物、呕吐毒素-BSA偶联物、盐酸克伦特罗-BSA偶联物、沙丁胺醇-BSA偶联物、莱克多巴胺-BSA偶联物、氯霉素-BSA偶联物、呋喃唑酮-BSA偶联物、抗黄曲霉毒素B1抗体、抗玉米赤霉烯酮抗体、抗伏马毒素抗体、抗呕吐毒素抗体、抗盐酸克伦特罗抗体、抗沙丁胺醇抗体、抗莱克多巴胺抗体、抗氯霉素抗体和抗呋喃唑酮抗体。本检测盘采用竞争性免疫层析法的原理样本中的待检样在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线上待检物-BSA偶联物的结合。
检测盘的使用：从铝箔袋中取出检测盘；将样本的编号标记在检测盘上；用滴管滴入6-8滴或用加样器取300-400ul样本于检测盘的加样孔2中；反应5-10分钟后，观察所出现的显示线判定结果。
黄曲霉毒素B1检测试纸条的结果判定：当样品中含有黄曲霉毒素B1时，黄曲霉毒素B1与金标记的抗黄曲霉毒素B1抗体发生反应，结合形成抗原抗体免疫复合物，从而抑制了检测线22上的黄曲霉毒素B1-BSA偶联物与金标记抗体的结合，检测线22上不显色，检测结果为黄曲霉毒素B1阳性（如图5所示）；当待测样品中未含有黄曲霉毒素B1时，金标记的抗黄曲霉毒素B1抗体与包被膜19上的黄曲霉毒素B1-BSA偶联物发生反应，结合形成抗原抗体免疫复合物，使得金标记的抗黄曲霉毒素B1单抗滞留在包被膜19的检测区上，此时检测线22上形成红色带，检测结果为黄曲霉毒素B1阴性（如图6所示）；质控区如有红色带形成标志该试纸条的检测结果有效，否则，该试纸条的检测结果无效（如图7所示）。玉米赤霉烯酮检测试纸条、伏马毒素检测试纸条、呕吐毒素检测试纸条、盐酸克伦特罗检测试纸条、沙丁胺醇检测试纸条、莱克多巴胺检测试纸条、氯霉素检测试纸条和呋喃唑酮检测试纸条的判定结果同黄曲霉毒素B1检测试纸条的判定结果。
本实用新型在对一份样品进行检测时，能同时检测出该样品是否含有黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、伏马毒素、呕吐毒素、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、氯霉素和呋喃唑酮。其具有特异性好、灵敏度高、检测速度快等优点，且不需要特殊仪器设备、操作简单，能广泛地用于农户、基层以及个人对于饲料中上述9中有毒有害残留的检测。
Claims (5)
1. 一种同时快速检测饲料中9种有害物质的检测盘，包括盘体，所述盘体由上盘体和下盘体固定连接而成，其特征在于，所述上盘体中央有一个圆形加样孔，加样孔底部设有一个圆形样品垫Ⅰ，所述下盘体分为3个区域，分别为检测区Ⅰ，检测区Ⅱ和检测区Ⅲ，所述的3个检测区分别用隔板隔开，其中检测区Ⅰ为霉菌毒素类检测区，包括黄曲霉毒素B1检测试纸条、玉米赤霉烯酮检测试纸条、伏马毒素检测试纸条和呕吐毒素检测试纸条；检测区Ⅱ为瘦肉精类检测区，包括盐酸克伦特罗检测试纸条、沙丁胺醇检测试纸条和莱克多巴胺检测试纸条；检测区Ⅲ为抗生素类检测区，包括氯霉素检测试纸条和呋喃唑酮检测试纸条，所有检测试纸条共用样品垫Ⅰ，且围绕样品垫Ⅰ呈放射性环形阵列，每个检测试纸条的两侧用卡条固定。
2. 根据权利要求1所述的同时快速检测饲料中9种有害物质的检测盘，其特征在于，所述的每种检测试纸条均由底板、样品垫Ⅱ、涂覆胶体金颗粒标记抗体的玻璃纤维膜、包被膜和吸水纸组成，其中，包被膜粘贴在底板上面，在该包被膜两端的上面分别粘贴涂覆胶体金颗粒标记抗体的玻璃纤维膜和吸水纸，在该涂覆胶体金颗粒标记抗体的玻璃纤维素膜远离包被膜的一端的上面粘贴样品垫Ⅱ，在所述包被膜的上面设有检测线和质控线，每种检测试纸条的吸水纸位于所述环形阵列的径向外端。
3. 根据权利要求1所述的同时快速检测饲料中9种有害物质的检测盘，其特征在于，所述盘体材料为PVC材料，所述样品垫Ⅰ直径比加样孔直径大1mm。
4. 根据权利要求2所述的同时快速检测饲料中9种有害物质的检测盘，其特征在于，黄曲霉毒素B1检测试纸条玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗黄曲霉毒素B1抗体，检测线上包被黄曲霉毒素B1-BSA偶联物；玉米赤霉烯酮检测试纸条玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗玉米赤霉烯酮抗体，检测线上包被玉米赤霉烯酮-BSA偶联物；伏马毒素检测试纸条玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗伏马毒素抗体，检测线上包被伏马毒素-BSA偶联物；呕吐毒素检测试纸条玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗呕吐毒素抗体，检测线上包被呕吐毒素-BSA偶联物；盐酸克伦特罗检测试纸条玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗盐酸克伦特罗抗体，检测线上包被盐酸克伦特罗-BSA偶联物；沙丁胺醇检测试纸条玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗沙丁胺醇抗体，检测线上包被沙丁胺醇-BSA偶联物；莱克多巴胺检测试纸条玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗莱克多巴胺抗体，检测线上包被莱克多巴胺-BSA偶联物；氯霉素检测试纸条玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗氯霉素抗体，检测线上包被氯霉素-BSA偶联物；呋喃唑酮检测试纸条玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗呋喃唑酮抗体，检测线上包被呋喃唑酮-BSA偶联物，上述所有检测试纸条质控线上均包被抗鼠抗体。
5. 根据权利要求2所述的同时快速检测饲料中9种有害物质的检测盘，其特征在于，所述包被膜为硝酸纤维素膜。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201520035069.8U CN204347031U (zh) | 2015-01-19 | 2015-01-19 | 一种同时快速检测饲料中9种有害物质的检测盘 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201520035069.8U CN204347031U (zh) | 2015-01-19 | 2015-01-19 | 一种同时快速检测饲料中9种有害物质的检测盘 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN204347031U true CN204347031U (zh) | 2015-05-20 |
Family
ID=53230292
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201520035069.8U Expired - Fee Related CN204347031U (zh) | 2015-01-19 | 2015-01-19 | 一种同时快速检测饲料中9种有害物质的检测盘 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN204347031U (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105954514A (zh) * | 2016-06-21 | 2016-09-21 | 郑州中道生物技术有限公司 | 口蹄疫和伪狂犬病二联快速检测试纸条及其制备方法 |
| CN106442978A (zh) * | 2016-10-08 | 2017-02-22 | 北京国科华仪科技有限公司 | 一种y型双通道荧光免疫层析试纸条及其制备方法 |
| CN107727842A (zh) * | 2017-11-13 | 2018-02-23 | 山东省环境保护科学研究设计院 | 一种瘦肉精全组分残留联检试纸卡的制备及应用 |
| CN108802354A (zh) * | 2018-01-12 | 2018-11-13 | 丰能医药科技（上海）有限责任公司 | 尿液检测试剂 |
| CN109613272A (zh) * | 2019-01-10 | 2019-04-12 | 江苏三联生物工程有限公司 | 一种用于猪肉中兽药残留检测的蛋白芯片及其制备方法 |
| CN109613269A (zh) * | 2019-01-10 | 2019-04-12 | 江苏三联生物工程有限公司 | 一种用于牛奶中兽药残留检测的蛋白芯片及其制备方法 |
| CN110412282A (zh) * | 2019-07-26 | 2019-11-05 | 北京健平金星生物科技有限公司 | Vegf多肿瘤标记物的荧光免疫层析联合检测试剂盒 |
-
2015
- 2015-01-19 CN CN201520035069.8U patent/CN204347031U/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105954514A (zh) * | 2016-06-21 | 2016-09-21 | 郑州中道生物技术有限公司 | 口蹄疫和伪狂犬病二联快速检测试纸条及其制备方法 |
| CN106442978A (zh) * | 2016-10-08 | 2017-02-22 | 北京国科华仪科技有限公司 | 一种y型双通道荧光免疫层析试纸条及其制备方法 |
| CN107727842A (zh) * | 2017-11-13 | 2018-02-23 | 山东省环境保护科学研究设计院 | 一种瘦肉精全组分残留联检试纸卡的制备及应用 |
| CN108802354A (zh) * | 2018-01-12 | 2018-11-13 | 丰能医药科技（上海）有限责任公司 | 尿液检测试剂 |
| CN108802354B (zh) * | 2018-01-12 | 2021-04-16 | 丰能医药科技（上海）有限责任公司 | 尿液检测方法 |
| CN109613272A (zh) * | 2019-01-10 | 2019-04-12 | 江苏三联生物工程有限公司 | 一种用于猪肉中兽药残留检测的蛋白芯片及其制备方法 |
| CN109613269A (zh) * | 2019-01-10 | 2019-04-12 | 江苏三联生物工程有限公司 | 一种用于牛奶中兽药残留检测的蛋白芯片及其制备方法 |
| CN110412282A (zh) * | 2019-07-26 | 2019-11-05 | 北京健平金星生物科技有限公司 | Vegf多肿瘤标记物的荧光免疫层析联合检测试剂盒 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN204347031U (zh) | 一种同时快速检测饲料中9种有害物质的检测盘 | |
| McCasland et al. | Nitrate: Health effects in drinking water | |
| Whitney et al. | Enhanced uptake of calcium by transforming lymphocytes | |
| Björn-Rasmussen et al. | Food iron absorption in man. II. Isotopic exchange of iron between labeled foods and between a food and an iron salt | |
| Udomkun et al. | Occurrence of aflatoxin in agricultural produce from local markets in Burundi and Eastern Democratic Republic of Congo | |
| CN103575887B (zh) | 一种检测黄曲霉毒素b1的试纸卡及其应用 | |
| CN103513035B (zh) | 一种检测黄曲霉毒素m1的试纸条及方法 | |
| CN102455357A (zh) | 一种检测β-内酰胺酶的试剂盒及方法 | |
| CN203299203U (zh) | 一种快速检测盐酸克伦特罗和沙丁胺醇的胶体金试纸条 | |
| Kudirat et al. | Serum zinc level during and after acute painful episodes in children with sickle cell anemia at the aminu kano teaching hospital, Kano, Northern Nigeria | |
| CN103105490B (zh) | 一种检测四环素类药物的试剂盒及方法 | |
| CN103105491B (zh) | 一种检测β-内酰胺类和四环素类抗生素的试剂盒及方法 | |
| CN102565399A (zh) | 一种检测氢化可的松的方法及其专用酶联免疫试剂盒 | |
| Kolodziejczyk et al. | In vitro study of the antioxidative properties of the glucose derivatives against oxidation of plasma components | |
| Boshra et al. | Evaluation of ELISA and immunoaffinity fluorometric analytical tools of four mycotoxins in various food categories | |
| Pope | Effect of time, temperature and fortification level on the retention of ascorbic acid in fortified tomato juice | |
| CN100377716C (zh) | 一种克林霉素磷酸酯的溶液剂及其搽片的制备方法 | |
| Ali | Tetracycline hydrochloride | |
| US20210008202A1 (en) | Using Paper with Heightened KELEA to Enhance the Alternative Cellular Energy (ACE) Pathway | |
| Gide et al. | DETERMINATION OF AFLATOXIN M1 IN RAW MILK PRODUCE AT YOBE STATE UNIVERSITY FARM DAMATURU, NIGERIA | |
| CN115372526A (zh) | 一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法 | |
| Aron et al. | Post-harvest Practices Associated with Aflatoxins Contamination of Complementary Flours in Bahi District, Dodoma, Tanzania | |
| Yamamoto | The occurrence of materials cross‐reacting with anti‐A and‐B agglutinins in fruit or seed extracts of higher plants | |
| CN104215763A (zh) | 一种检测t-2毒素的试纸条及其应用 | |
| Durham | Physiologic effects of pesticide use |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20150520 Termination date: 20160119 |
|
| EXPY | Termination of patent right or utility model |