CN103764144B - Pi3k抑制剂与mek抑制剂的协同组合 - Google Patents

Pi3k抑制剂与mek抑制剂的协同组合 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种药物组合，该药物组合包含用于同时给药、分开给药或序贯给药的(a)磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-4-基]噻唑-2-基}酰胺)或其药学上可接受盐、和(b)至少一种丝裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂或其药学上可接受盐、以及任选地至少一种药学上可接受载体；这种组合在治疗增生性疾病中的用途；以及治疗患有增生性疾病的受试对象的方法，该方法包括给予治疗有效量的这种组合。

Description

PI3K抑制剂与MEK抑制剂的协同组合
技术领域
本发明涉及一种药物组合，该药物组合包含(a)磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-4-基]-噻唑-2-基}酰胺)或其药学上可接受盐，和(b)选自6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺、(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯基氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺、PD0325901、PD-184352、RDEA119、GSK1120212、XL518、AS-701255、AS-701173、AS703026、RDEA436、E6201、RO4987655、JTP-74057、RG7167、或RG7420的至少一种丝裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂化合物或其药学上可接受盐，以及任选地至少一种药学上可接受载体；这种组合在增生性疾病(例如癌症)的治疗或预防中的用途；以及治疗患有增生性疾病(例如癌症)的受试对象的方法，该方法包括给予治疗有效量的这种组合。
背景技术
经由丝裂原活化蛋白(MAP)激酶途径和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/AKT途径的信号转导是由细胞外刺激所触发，并调节多种生物学过程(例如增殖、分化和细胞死亡)。在许多癌症中，这两种途径常常是由于上游分子的突变或过度表达而被活化。这两种途径彼此相互作用以调节肿瘤生长，因此它们是癌症治疗的潜在靶点。
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)包括脂质激酶家族，其催化磷酸酯向肌醇脂质D-3′位置的转移以产生磷酸肌醇-3-磷酸(PIP)、磷酸肌醇-3,4-二磷酸(PIP2)和磷酸肌醇-3,4,5-三磷酸(PIP3)，这些磷酸肌醇的磷酸酯相应地起信号转导级联反应中的第二信使的作用，这通过使含有血小板-白细胞C激酶底物(pleckstrin)同源结构域、FYVE、Phox和其它磷脂结合结构域的蛋白质进入经常位于质膜上的多种信号转导复合物中而实现(Vanhaesebroeck等人，Annu.Rev.Biochem70:535(2001)；Katso等人，Annu.Rev.CellDev.Biol.17:615(2001))。在两种1类PI3K中，1A类PI3K是异源二聚体，该异源二聚体是由结构上与可以是p85α、p55α、p50α、p85β或p55γ的调节亚单位相连的催化p110亚单位(α、β、δ亚型)所组成。1B类亚类具有一个家族成员，即由与两个调节亚基p101或p84中的一个相连的催化p110γ亚单位所组成的异源二聚体(Fruman等人，AnnuRev.Biochem.67:481(1998)；Suire等人，Curr.Biol.15:566(2005))。p85/55/50亚单位的模块结构域包含Src同源区(SH2)结构域，该结构域使在活化受体上的特定序列中的磷酸化酪氨酸残基与细胞质酪氨酸激酶相结合，从而导致1A类PI3K的活化和定位。1B类PI3K直接地被G蛋白偶联受体活化，该G蛋白偶联受体使不同的多种肽类配体与非肽类配体相结合(Stephens等人，Cell89:105(1997))；Katso等人，Annu.Rev.CellDev.Biol.17:615-675(2001))。因此，所产生的I类PI3K的磷脂产物将上游受体与下游细胞活性(包括增殖、生存、趋化性、细胞运输、运动性、代谢、炎症反应和过敏反应、转录和翻译)联系起来(Cantley等人，Cell64:281(1991)；Escobedo和Williams，Nature335:85(1988)；Fantl等人，Cell69:413(1992))。
PIP2和PIP3常常把Akt(病毒癌基因v-Akt的人同源物的产物)招募到细胞质膜，在细胞质膜中Akt起到对于生长和生存而言为重要的许多细胞内信号传导通路的节点的作用(Fantl等人，Cell,69:413-423(1992)；Bader等人，NatureRev.Cancer5:921(2005)；Vivanco和Sawyer，NatureRev.Cancer2:489(2002))。PI3K的异常调节(PI3K经常通过Akt的活化而提高存活率)是人类癌症中的最普遍发生事件之一，并且已被证明在多个水平下发生。在多种肿瘤中，肿瘤抑制基因PTEN(其使肌醇环3′位置的磷酸肌醇去磷酸化由此拮抗PI3K活性)的功能丧失。在其它肿瘤中，p110α亚型、PIK3CA以及Akt的基因被扩增，并且在若干人类癌症中已表明它们的基因产物的蛋白质表达增加。此外，在人类癌症中，已有人描述了用来上调p85-p110复合物的p85α的突变和转位。最后，在多种人类癌症中，已有人描述了在活化下游信号传导通路的PIK3CA中，以显著频率发生体细胞错义突变(Kang等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA102:802(2005)；Samuels等人，Science304:554(2004)；Samuels等人，CancerCell7:561-573(2005))。这些观察表明磷酸肌醇-3激酶以及该信号传导通路的上游和下游组分的失调节是与人类癌症和增生性疾病相关的最常见失调节中的一种(Parsons等人，Nature436:792(2005)；Hennessey等人，NatureRev.DrugDisc.4:988-1004(2005))。
此外，已知丝裂原活化蛋白(MAP)激酶级联反应的过度活化在细胞增殖和分化中发挥重要作用。当生长因子与其受体酪氨酸激酶结合时，可以活化该途径。此相互作用促进RAS与RAF相连，并且利用丝裂原活化蛋白激酶(MEK)来启动对ERK的磷酸化级联反应。MEK的磷酸化似乎增加其针对ERK的亲和力和催化活性以及对ATP的亲和力。
在大约1/3的人类癌症中，经常是通过导致异位蛋白质活化的突变而使MAP激酶途径失调节。该失调节相应地导致广泛的细胞变化，这些细胞变化与病因和癌症表型的维持有关，癌性表型包括但不限于：增殖促进和凋亡逃逸(Dhillon等人，癌基因(Oncogene)，2007,26:3279-3290)。已知对该途径的抑制对于增生性疾病是有利的。MEK是有吸引力的治疗靶点，因为用于MEK磷酸化的仅有的已知物质是MAP激酶、ERK1和ERK2。在具有RAS或RAF癌基因中的突变的肿瘤中，MEK常常被活化。已在胰腺癌、结肠癌、肺癌、肾癌和和卵巢癌原发性肿瘤样本中，发现了MEK/ERK的组成性活化。
在若干研究中已显示MEK的抑制在各种疾病中具有潜在的治疗获益，例如：(a)肿瘤和白血病：在肿瘤模型中的效能的证据(Nature-Medicine5(7)：810-816,1999;Tracet等人，AACR，2002年4月6-10日，Poster#5426；Tecle，H.蛋白激酶的IBC第2届国际会议，2002年9月9-10日，J.Clin.Invest.108(6),851-859,2001)，(b)疼痛：在疼痛模型中的效能的证据(J.Neurosci.22:478,2002；ActaPharmacolSin.26:7892005；ExpertOpinTherTargets.9:699,2005；Mol.Pain.2:2,2006)，(c)脑卒中：在脑卒中模型中的效能的证据：通过抑制MEK对缺血性脑损伤具有显著的神经保护作用(J.Pharmacol.Exp.Ther.304:172,2003;BrainRes.996:55,2004)，(d)糖尿病：在糖尿病并发症中的证据(Am.J.Physiol.Renal.286,F1202004)，(e)炎症：在炎症模型中的效能的证据(BiochemBiophy.Res.Com.268:647,2000)，和(f)关节炎：在实验性骨关节炎中的效能的证据(Arthritis&J.Clin.Invest.116:163.2006)。
PI3K途径与MAPK途径有着广泛的相互作用。这两种途径具有共同的上游活化子，它们均被致癌RAS活化并且当一个途径或另一个途径被抑制时似乎提供一些补偿性的信号转导。
尽管癌症患者有许多治疗选择，但对于可用于癌症有效长期治疗的有效安全的治疗剂以及新联合用药仍然存在着需要。现已出人意料地发现，有效量的p110α-特异性磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-(4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-4-基]噻唑-2-基)酰胺与有效量的至少一种本发明MEK抑制剂化合物，具体地6-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺或者(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺的组合，导致在增生性疾病(特别是癌症)治疗中的意外改善。当同时、顺序或分开给药时，该特异性磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂化合物与本发明MEK抑制剂化合物以协同方式相互作用，由此强烈地抑制细胞增殖。该意外的协同反应能够减小各化合物所需的给药剂量，从而减小治疗中各化合物的副作用并且增强长期临床效果。
发明内容
本发明涉及一种药物组合；该药物组合包含(a)磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-4-基]噻唑-2-基}酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐，和(b)选自6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)、(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(化合物C)、PD0325901、PD-184352、RDEA119、GSK1120212、XL518、AS-701255、AS-701173、AS703026、RDEA436、E6201、RO4987655、JTP-74057、RG7167、或RG7420的至少一种丝裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂或其药学上可接受盐，以及任选地至少一种药学上可接受载体，其用于同时、分开或序贯给药，特别用于治疗或预防增生性疾病。
在本发明的一个优选实施方式中，组合伴侣是(a)PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-4-基]-噻唑-2-基}酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐，和(b)选自6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)或(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(化合物C)的至少一种MEK抑制剂化合物或其药学上可接受盐。
在本发明的另一个优选实施方式中，组合伴侣是(a)PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-4-基]-噻唑-2-基}-酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐，和(b)至少一种MEK抑制剂化合物6-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)或其药学上可接受盐。
本发明还涉及一种组合制剂或药物组合物，其包含(a)PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-吡啶-4-基]-噻唑-2-基}-酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐，和(b)选自6-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)、(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(化合物C)、PD0325901、PD-184352、RDEA119、GSK1120212、XL518、AS-701255、AS-701173、AS703026、RDEA436、E6201、RO4987655、JTP-74057、RG7167、或RG7420的至少一种MEK抑制剂或者其药学上可接受盐，以及任选地至少一种药学上可接受载体。在一个实施方式中，本发明涉及一种组合制剂，该组合制剂包含(a)一个或多个单位剂型的组合伴侣(a)，和(b)一个或多个单位剂型的组合伴侣(b)。
本发明尤其涉及一种药物组合，该药物组合包含(a)PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-吡啶-4-基]-噻唑-2-基}-酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐，和(b)选自6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)、(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(化合物C)、PD0325901、PD-184352、RDEA119、GSK1120212、XL518、AS-701255、AS-701173、AS703026、RDEA436、E6201、RO4987655、JTP-74057、RG7167、或RG7420的至少一种MEK抑制剂或其药学上可接受盐，以及任选地至少一种药学上可接受载体，其可用于治疗或预防有此需要的受试对象中的增生性疾病。
本发明还涉及一种药物组合，该药物组合包含(a)PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-4-基]-噻唑-2-基}-酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐，和(b)选自6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)、(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(化合物C)、PD0325901、PD-184352、RDEA119、GSK1120212、XL518、AS-701255、AS-701173、AS703026、RDEA436、E6201、RO4987655、JTP-74057、RG7167、或RG7420的至少一种MEK抑制剂或其药学上可接受盐，以及任选地至少一种药学上可接受载体，其用于治疗或预防有此需要的受试对象中的增生性疾病的药物组合物或药物的制备。
本发明还涉及PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-吡啶-4-基]-噻唑-2-基}-酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐，连同选自6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)、(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(化合物C)、PD0325901、PD-184352、RDEA119、GSK1120212、XL518、AS-701255、AS-701173、AS703026、RDEA436、E6201、RO4987655、JTP-74057、RG7167、或RG7420的至少一种MEK抑制剂或其药学上可接受盐的用途，该用途是用于治疗或预防增生性疾病的药物组合物或药剂的制备。
本发明涉及一种患有增生性疾病的受试对象的治疗方法，该治疗方法包括向所述受试对象给予一种药物组合，该药物组合包含处于联合有效治疗增生性疾病的量的(a)PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-4-基]噻唑-2-基}酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐，和(b)选自6-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)、(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(化合物C)、PD0325901、PD-184352、RDEA119、GSK1120212、XL518、AS-701255、AS-701173、AS703026、RDEA436、E6201、RO4987655、JTP-74057、RG7167或RG7420的至少一种MEK抑制剂或其药学上可接受盐，以及任选地至少一种药学上可接受载体。
本发明还提供一种包含一种组合作为治疗剂的商业包装品，所述组合包含：(a)PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-吡啶-4-基]-噻唑-2-基}酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐，和(b)选自6-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)、(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(化合物C)、PD0325901、PD-184352、RDEA119、GSK1120212、XL518、AS-701255、AS-701173、AS703026、RDEA436、E6201、RO4987655、JTP-74057、RG7167、或RG7420的至少一种MEK抑制剂或其药学上可接受盐，连同说明书，其为了用于增生性疾病的发展延迟或治疗而同时、分开或序贯给药。
附图说明
图1示出了在NCI-H2122非小细胞肺癌细胞系中(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-4-基]-噻唑-2-基}-酰胺)(化合物A)与6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)的组合在50%抑制下的等效线图。
图2示出了用于在NCI-H2122非小细胞肺癌细胞系中(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-4-基]-噻唑-2-基}-酰胺)(化合物A)与6-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)的组合在50%抑制下的等效线图，该图是用于从单独的研究中获得高分辨率数据。
具体实施方式
本发明涉及一种药物组合，该药物组合包含(a)磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-吡啶-4-基]-噻唑-2-基}酰胺)(在下文中称为“化合物A”)或其药学上可接受盐，和(b)选自6-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺、(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺、PD0325901、PD-184352、RDEA119、GSK1120212、XL518、AS-701255、AS-701173、AS703026、RDEA436、E6201、RO4987655、JTP-74057、RG7167、或RG7420的至少一种丝裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂化合物或其药学上可接受盐，以及任选地至少一种药学上可接受载体，用于同时、分开或序贯给药，特别是用于治疗或预防增生性疾病。
除非另有明确说明，本文中使用的一般术语被定义成具有以下含义：
除非另有说明，本文中使用的术语“包含”和“包括”具有开放和非限制性意义。
除非本文中另有说明或者与上下文明显矛盾，在描述本发明的上下文中(特别是在所附权利要求的上下文)，术语“一个”和“一种”和“该”以及类似的描述应被理解成包括单数和复数的两种情况。在将复数形式用于化合物、盐类等的情况下，也表示单一的化合物、盐等。
本文中定义的术语“组合”或“药物组合”是指在一个单位剂型中的固定组合、非固定组合或者用于合并给药的各组分的药盒；其中化合物A或其药学上可接受盐、和至少一种MEK抑制剂化合物或其药学上可接受盐可在同一时刻同时、独立给药或在允许该组合伴侣显示协助作用(例如协同作用)的时间区间内分开给药。术语“固定组合”表示活性成分，例如化合物A和组合伴侣，均以单一实体或单一剂量的形式同时向患者给药。术语“非固定组合”表示活性成分，例如本发明的化合物和组合伴侣，均在无特定时间限制的情况下，同时地（simultaneously）、同时地（concurrently）或顺序地以单独实体形式向患者给药，其中这种给药在患者体内提供治疗有效水平的这两种化合物。后者的“非固定组合”也适用于混合物疗法，例如三种以上活性成分的给药。
本文中定义的术语“磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂”是指一种靶向、减少或抑制PI3-激酶的化合物。已表明，PI3-激酶活性针对许多激素和生长因子(包括胰岛素、血小板来源的生长因子、胰岛素样生长因子、表皮生长因子、集落刺激因子、和肝细胞生长因子)刺激作出响应而增加，并且PI3-激酶活性参与到和细胞生长和细胞转化有关的过程中。
本文中定义的术语“MEK抑制剂”是指一种靶向、减少或抑制MAP激酶(MEK)的激酶活性的化合物。MEK抑制剂的靶点包括但不限于ERK。MEK抑制剂的间接靶点包括但不限于细胞周期蛋白D1。
本文中定义的术语“药物组合物”是指含有至少一种给予受试对象(例如哺乳动物或人)的治疗剂，从而预防或治疗影响哺乳动物的特定疾病或病情的混合物或溶液。
本文中定义的术语“药学上可接受的”是指在合理医学判断的范围内，适合于与受试对象(例如哺乳动物或人)的组织接触，没有过度的毒性、刺激过敏反应并且其它问题并发症与合理的效益/风险比相称的化合物、材料、组合物和/或剂型。
本文中使用的术语“联合给药”或“组合给药”被定义成包括将所选择治疗剂向单个患者的给药，并且意图包括其中各制剂不必经由相同的给药途径或者在相同时间给药的治疗方案。
本文中使用的术语“治疗（treating）”或“治疗（treatment）”包括减轻、减少或缓解受试对象中的至少一种症状或者引起疾病发展延迟的治疗。例如，治疗可以是疾病的一种或数种症状的减轻或者疾病(例如癌症)的完全根治。在本发明的含义内，术语“治疗”还表示阻止、延迟发病(即，在疾病临床表现之前的时间段)以及/或者降低疾病发展或恶化的风险。本文中使用的术语“保护”表示预防、延迟或治疗或者适当时，同时预防、延迟和治疗受试对象中疾病的发展或持续或加重。
本文中使用的术语“预防（″prevent″、″preventing″或″prevention″）”包括对于与被预防的状态、疾病或病症相关或者由它们所引起的至少一个症状的预防。
本文中使用的术语“联合治疗有效”或者“联合治疗效果”表示治疗剂可以在待治疗温血动物(特别是人)中，在其更倾向的时间区间内分开地(以按时间顺序错开的方式，特别是以顺序特定的方式)给药，但仍然显示（优选地协同的）相互作用(联合治疗效果)。尤其可以通过跟踪血液水平(证明至少在某个时间区间内两种化合物均存在于待治疗人的血液中)来判断是否如此。
术语“药学上有效量”或“临床有效量”的治疗剂组合是足以提供超越被该组合所治疗的疾病的基线临床上可观察体征和症状的可观察到的改善的量。
本文中使用的术语“协同作用”是指两种治疗剂诸如，例如式(I)的化合物(例如化合物A)与至少一种本发明MEK抑制剂化合物的作用，其产生大于各药物单独给药效果的简单相加的效果(例如减缓增生性疾病(特别是癌症或其症状)的症状进展)。例如，可以利用合适的方法例如Sigmoid-Emax方程(Holford，N.H.G.和Scheiner,L.B.,Clin.Pharmacokinet.6：429-453(1981))、Loewe相加作用的方程(Loewe,S.和Muischnek,H.,Arch.Exp.PatholPharmacol.114:313-326(1926))和中值效应方程(Chou,T.C.和Talalay,P.,Adv.EnzymeRegul.22:27-55(1984))来计算协同作用。可以将上面提及的各方程应用于实验数据，以便生成有助于评价药物组合效果的相应图表。与上面提及的这些方程相关的相应图表分别是浓度效应曲线、等效线图曲线和联合指数曲线。
本文中使用的术语“受试对象”或“患者”包括能够患上癌症或直接或间接地与癌症有关联的任何疾病、或者遭受其痛苦的动物。受试对象的例子包括哺乳动物，例如人、犬、牛、马、猪、绵羊、山羊、猫、小鼠、兔、大鼠和转基因非人动物。在优选的实施方式中，受试对象是人，例如患有癌症、处于患有癌症风险中、或者潜在能够患有癌症的人。
术语“大约”或“大致”应具有在给定值或范围的10%内、更优选5%内的含义。
本发明的药物组合包含磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂(PI3K)化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-吡啶-4-基]噻唑-2-基}酰胺)(在下文中称为“化合物A”)。化合物A是式I的p110α-选择性磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂化合物。
化合物A最初描述于WO2010/029082中，其中描述了其游离碱形式的合成。例如，化合物A的合成描述于WO2010/029082(如实施例15)中，该专利的全部内容以参考的方式并入本文中。
当提及化合物A时，术语“盐”或“盐类”应被理解成是化合物A的盐，该盐可以单独地存在或者采用与式(I)的游离化合物的混合物的形式并且优选地是药学上可接受盐。这种盐，例如作为酸加成盐类，由具有碱性氮原子的式(I)化合物与优选地有机酸或无机酸形成，特别是药学上可接受盐。合适的无机酸类例如是氢卤酸类(例如盐酸)、硫酸、或磷酸。合适的有机酸类例如是羧酸类或磺酸类(诸如富马酸或甲磺酸)。为了分离或纯化的目的，也可能使用药学上不可接受的盐，例如苦味酸盐或高氯酸盐。为了治疗的用途，仅使用药学上可接受盐或者游离化合物(在适合的情况下，采用药物制剂的形式)，因此这些盐是优选的。鉴于采用游离形式的新化合物与采用其盐(包括可以，例如在新化合物的纯化或鉴定中用作中间体的那些盐)形式的新化合物之间的紧密关系，在合适和方便的情况下，在上文和下文中任何所提及的游离化合物也应被理解成也指代相应的盐类。化合物A的盐优选地是药学上可接受盐；形成药学上可接受盐的合适的抗衡离子在本领域是已知的。
本发明的药物组合物包含至少一种MEK抑制剂化合物，该化合物是选自6-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺、(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺、PD0325901、PD-184352、RDEA119、GSK1120212、XL518、AS-701255、AS-701173、AS703026、RDEA436、E6201、RO4987655、JTP-74057、RG7167、或RG7420或者其药学上可接受盐。
MEK抑制剂化合物6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)是式(II)的化合物
MEK抑制剂化合物6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)描述于PCT申请WO03/077914中，其制备方法描述于例如该专利申请的实施例18中。
除本文中揭示地，本发明中所使用的化合物可具有一个或多个不对称中心并且可以作为单独的(R)-或(S)-立体异构体的形式或者其混合物的形式而制造，如PCT申请WO03/077914中所描述。除非另有说明，本说明书和权利要求中对特定化合物的描述或命名意图包括其两种单独的对映异构体、非对映异构体混合物、外消旋体等。因此，本发明还包括所有的这种异构体，包括本发明化合物的非对映异构体混合物以及经拆分的对映异构体。可基于它们的理化性质差异，利用本领域技术人员已知的方法(例如利用层析法或分步结晶法)，将非对映异构体混合物分离成它们的单独的非对映异构体。通过将对映异构体混合物转变成非对映异构体混合物（其通过与适当的光学活性化合物(例如，醇)反应），分离非对映异构体并且将单独的非对映异构体转变(例如，水解)成相应的纯对映异构体，可以分离对映异构体。用于确定立体化学和分离立体异构体的方法在本领域是众所周知的(见《高等有机化学(AdvancedorganicChemistry)》第4章中的论述，第4版，J.March.JohnWileyandSons，纽约，1992年)。
MEK抑制剂化合物(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(化合物C)是式(III)的化合物
MEK抑制剂化合物(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(化合物C)描述于PCT申请WO2007/044084的实施例25-BB中，其制备方法描述于其中。
可用于本发明的组合的其它MEK抑制剂包括但不限于：PD0325901(辉瑞)(见PCT公开号WO02/06213)、PD-184352(辉瑞)、RDEA119(ArdeaBiosciences)、GSK1120212(GlaxoSmithKline)(见PCT公开号WO05/121142)、XL518(Exelexis)、AS-701255(MerckSerono)、AS-701173(MerckSerono)、AS703026(MerckSerono)、RDEA436(ArdeaBiosciences、E6201(Eisai)(见Goto等人，JournalofPharmacologyandExperimentalTherapeutics，3331(2)：485-495(2009))、RO4987655(Hoffmann-LaRoche)、JTP-74057、RG7167、和/或RG7420
优选地，用于本发明的组合中的MEK抑制剂化合物选自6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)、(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(化合物C)、或者其药学上可接受盐。
除非另有说明，涉及MEK抑制剂时，术语“盐”或“盐类”包括可存在于本发明化合物中的酸性和碱性基团的盐类。性质上呈碱性的本发明化合物能够与多种无机酸和有机酸形成种类广泛的盐类。可用于制备本发明的这样的碱性化合物的药学上可接受酸加成盐的酸是形成无毒的酸加成盐的酸，所述无毒的酸加成盐即为含有药学上可接受阴离子的盐类，诸如乙酸盐、苯甲酸盐、溴化物、氯化物、柠檬酸盐、富马酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、碘化物、乳酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、硝酸盐、草酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、和酒石酸盐。因为单个本发明化合物可含有多于1个的酸性或碱性基团，所以本发明化合物可在单个化合物中包含一盐、二盐或三盐。
在本发明化合物中存在酸性基团的情况下，可通过用碱性化合物(特别是无机碱)处理本发明化合物而形成盐。优选的无机盐类是与碱金属和碱土金属(例如锂、钠、钾、钡和钙)所形成的盐类。优选的有机碱盐类包括例如：铵、二苄基铵、苄基铵、2-羟基乙基铵、双(2-羟基乙基)铵、苯乙基苄胺、二苄基-乙二胺等盐。酸性基团的其它盐可包括例如：与普鲁卡因、奎宁和N-甲基葡糖胺形成的盐，以及与碱性氨基酸(例如甘氨酸、鸟氨酸、组氨酸、苯基甘氨酸、赖氨酸和精氨酸)形成的那些盐。特别优选的盐是本发明化合物的钠盐或钾盐。
就碱性基团而言，通过用酸性化合物(特别是无机酸)处理本发明化合物而形成盐。优选的此类型无机盐类可包括例如：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐等盐。优选的此类型有机盐类可包括例如：与乙酸、琥珀酸、柠檬酸、马来酸、富马酸、D-谷氨酸、羟基乙酸、苯甲酸、肉桂酸等有机酸所形成的盐。特别优选的此类型盐是本发明化合物B的盐酸盐或硫酸盐。
适合于本发明的化合物B和化合物C的其它药学上可接受盐包括PCT申请WO03/077914和PCT申请WO2007/044084中所公开的盐，这两篇专利申请的内容均以参考的方式并入本申请中。
除非另有说明或者正文中明确指出，可用于本发明药物组合物的治疗剂既包括这些化合物的游离碱，也包括这些化合物的所有药学上可接受盐。
用代码编号、通用名称或商品名称所确认化合物的结构可从现行版本的标准汇编“默克索引”或者从数据库例如PatentsInternational(IMSWorldPublications)中获得。其相应的内容以参考的方式并入本文中。
在上面所给出的专利申请引用的各情况下，与这些化合物有关的主题以参考的方式并入本申请中。用作本发明药物组合中的治疗剂的化合物可以分别以如引用文件中所描述方式进行制备和给药。亦在本发明范围内的是两种如上所述单独治疗剂的组合，即在本发明范围内的药物组合可包含三种以上的治疗剂。
一种药物组合，该组合包含(a)PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-4-基]噻唑-2-基}酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐，和(b)选自6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)、(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(化合物C)、PD0325901、PD-184352、RDEA119、GSK1120212、XL518、AS-701255、AS-701173、AS703026、RDEA436、E6201、RO4987655、JTP-74057、RG7167、或RG7420的至少一种MEK抑制剂化合物或其药学上可接受盐，以及任选地至少一种药学上可接受载体，在下文中将被称为本发明的组合。
在本发明的一个优选实施方式中，组合伴侣是(a)PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-吡啶-4-基]噻唑-2-基}酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐，和(b)选自6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)或(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(化合物C)的至少一种MEK抑制剂化合物或其药学上可接受盐。
在本发明的另一个优选实施方式中，组合伴侣是(a)PI3K抑制剂化合物((S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-4-基]噻唑-2-基}酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐，和(b)至少一种MEK抑制剂化合物6-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)或其药学上可接受盐。
本发明还涉及一种组合制剂或药物组合物，其包含(a)PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-4-基]噻唑-2-基}酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐，和(b)选自6-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺、(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺、PD0325901、PD-184352、RDEA119、GSK1120212、XL518、AS-701255、AS-701173、AS703026、RDEA436、E6201、RO4987655、JTP-74057、RG7167、或RG7420的至少一种MEK抑制剂或其药学上可接受盐，以及任选地至少一种药学上可接受载体。
在一个实施方式中，本发明涉及一种组合制剂，该组合制剂包含(a)一个或多个单位剂型的组合伴侣(a)、以及(b)一个或多个单位剂型的组合伴侣(b)。
本发明尤其涉及一种可用于治疗或预防有此需要的受试对象中的增生性疾病的本发明的组合。在该本发明的该实施方式中，本发明的组合是用于增生性疾病的治疗或预防，包括向受试对象给予联合治疗，该联合治疗包含有效量的PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-吡啶-4-基]-噻唑-2-基}酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐，和选自6-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺、(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺、PD0325901、PD-184352、RDEA119、GSK1120212、XL518、AS-701255、AS-701173、AS703026、RDEA436、E6201、RO4987655、JTP-74057、RG7167、或RG7420的至少一种MEK抑制剂化合物或其药学上可接受盐。优选地，以治疗有效剂量给予MEK抑制剂化合物，当联合给药时可提供有利效果。给药可以是同时给药或者序贯给药。
利用本发明的组合治疗或预防的增生性疾病主要是肿瘤和/或癌症。增生性疾病的例子包括：黑色素瘤、肺癌、结直肠癌(CRC)、乳腺癌、肾癌(例如肾细胞癌(RCC))、肝癌或肝细胞癌、急性髓细胞白血病(AML)、骨髓增生异常综合征(MDS)、非小细胞肺癌(NSCLC)、甲状腺癌、胰腺癌、食道癌、和神经纤维瘤病。
在本发明的一个实施方式中，增生性疾病是实体肿瘤。术语“实体肿瘤”特别表示黑色素瘤、甲状腺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌和通常GI（胃肠）道癌、宫颈癌、肾癌(诸如例如肾细胞癌(RCC))、肝癌或肝细胞癌、肺癌(特别是小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、头颈部癌、膀胱癌、前列腺癌、食道癌、或者卡波西氏肉瘤。本发明的组合抑制实体肿瘤的生长，而且也抑制液体肿瘤。此外，基于肿瘤类型和所使用的特定组合，可以获得肿瘤体积的减小。本文中所公开的组合也适于预防肿瘤的转移性扩散以及微转移的生长或发展。本文中公开的组合特别适合于不良预后患者，特别是具有转移性黑色素瘤或胰腺癌的这种不良预后患者的治疗。
待治疗的癌症可以具有PI3Kα的过度表达或扩增、PIK3CA的突变，以及/或者MAP信号转导途径中的遗传变异，诸如例如HRAS、KRAS、NRAS或BRAF突变或基因扩增。在一个实施方式中，待治疗的癌症具有KRAS突变，例如KRAS突变的胰腺癌、结肠癌、肺癌(例如非小细胞肺癌)或白血病。
在另一个实施方式中，增生性疾病是胰腺癌、结直肠癌、黑色素瘤、食道癌、或肺癌(特别是非小细胞肺癌)。
应当理解的是，本发明的组合根据本发明的可仅仅用于增生性疾病的治疗。
已发现包含PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-吡啶-4-基]-噻唑-2-基}酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐，以及选自6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺、(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺、PD0325901、PD-184352、RDEA119、GSK1120212、XL518、AS-701255、AS-701173、AS703026、RDEA436、E6201、RO4987655、JTP-74057、RG7167、或RG7420的至少一种MEK抑制剂化合物或其药学上可接受盐(具体地6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)或(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯基氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(化合物C))或其药学上可接受盐的联合治疗，导致与单药治疗相比在增生性疾病治疗或预防中的意外改善。当同时、贯序或分开给药时，PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-4-基]噻唑-2-基}酰胺)(化合物A)与MEK抑制剂协同地相互作用以抑制细胞增殖。本发明的组合尤其适合于标准全身治疗失败的晚期癌症患者的治疗。这包括患有对单药治疗显示耐药性或者对不同于本文中所公开的那些的组合显示耐药性的肿瘤类型的患者。
增生性疾病的本质是多因素的。在某些情况下，可将具有不同作用机制的药物加以组合。然而，仅考虑具有不同作用方式的治疗剂的任意组合不一定形成具有有利效果的组合。
与仅施用本发明的组合中所使用药学治疗剂中的一种治疗剂的单药治疗相比，本发明药物组合的给药不仅可导致如下有利效果(例如关于缓解、延迟发展或抑制症状的协同治疗效果)，而且还导致如下惊人有利效果(例如副作用减少、生活质量提高或发病率降低)。
另一个益处是可以使用更低剂量的本发明组合的治疗剂，例如这些剂量需要不仅经常较低而且以较低频率施用，或者可以用于降低单独使用组合伴侣中的一种所观察到副作用的发生率。这符合待治疗患者的愿望和要求。
可以由所确立的测试模型来证明本发明的组合导致在前文中所述的有利效果。本领域技术人员完全能够选择相关的测试模型来证明这种有利效果。例如，可在临床研究中或者在试验步骤中显示本发明的组合的药理活性，如在下文中所描述。
合适的临床研究具体地是例如在增生性疾病患者中的开放性、剂量递增研究。这种研究具体地证明了本发明的组合中治疗剂的协同作用。可以直接地通过对本领域技术人员为已知的这些研究的结果，来确定对增生性疾病的有利效果。这种研究可以特别适合于对使用任一治疗剂的单药治疗与本发明的组合的效果进行比较。
在一个实施方式中，将PI3K抑制剂化合物A的剂量递增直到达到最大耐受剂量，并且以固定剂量给予至少一种本发明的MEK抑制剂化合物。可替换地，可以固定剂量给予PI3K抑制剂化合物A并且将至少一种本发明MEK抑制剂的剂量递增。各患者可以每天或间断地接受一定剂量的PI3K抑制剂化合物A和/或至少一种本发明的MEK抑制剂。可在这种研究(例如在12、18或24周后通过每6周对症状评分进行评估)中确定疗效。
在一个优选实施方式中，MEK抑制剂是化合物B或化合物C或者其药学上可接受盐。
在确定一种或多种组分之间的协同相互作用中，通过以不同的w/w比率范围和剂量向需要治疗的患者给予各组合，可以确定地测量效果的最佳范围和用于该效果的各组分的绝对剂量范围。就人而言，在患者中进行临床研究的复杂程度和成本会使得使用此测试形式作为协同作用的主要模型不现实。然而，在一个物种中对协同作用的观察可以预测在其它物种和动物模型中存在的效果，如本文中所述，从而用于测量协同作用并且这种研究的结果也可以用于通过应用药代动力学/药效动力学方法来预测在其它物种中所需的有效剂量和血浆浓度比率范围以及绝对剂量和血浆浓度。肿瘤模型与人体中所见效果之间确定的相关性表明动物中的协同作用例如可显示于BRAF突变体：SW1417、COLO205、LS411N、HCT-29、和RKO中；KRAS突变体：NCI-H23、NCI-H2122、NCI-H358、NCI-H460、HCT-15、SW480、SW620、SW837、COLO-678、LS123、NCI-H747、HCT-116、T84、LS180、SW948、和GP2d中；PIK3CA突变体：NCI-H460、HCT-15、HCT-116、HCT-29、RKO、T84、SW48中；和TP53突变体：C2BBe1癌症肿瘤模型中，如下面实施例中所描述。
在本发明的一个优选实施方式中，本发明的组合包含PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-吡啶-4-基]-噻唑-2-基}酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐，以及选自6-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)、(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(化合物C)、PD0325901、PD-184352、RDEA119、GSK1120212、XL518、AS-701255、AS-701173、AS703026、RDEA436、E6201、RO4987655、JTP-74057、RG7167、和/或RG7420的至少一种MEK抑制剂化合物或其药学上可接受盐，其用于增生性疾病，优选癌症，包括PI3Kα过度表达或扩增、PIK3CA突变和/或HRAS、KRAS、NRAS或BRAF突变的治疗或预防。优选地，包含PI3Kα过度表达或扩增、PIK3CA突变、以及/或者HRAS、KRAS、NRAS或BRAF突变的癌症是黑色素瘤、胰腺癌、结直肠癌、食道癌、或肺癌。
在一个方面，本发明提供一种用于对人给药的协同组合，该组合包含处于一定组合范围(w/w)内的(a)PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-4-基]噻唑-2-基}酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐，和(b)至少一种本发明的MEK抑制剂化合物，优选化合物B或其药学上可接受盐，所述组合范围对应于例如下面的实施例中所描述的用于确定协同相互作用的肿瘤模型中所观察的范围。适当地，人体中的比率范围对应于选自在50:1至1:50、50:1至1:20、50:1至1:10、50:1至1:1、20:1至1:50、20:1至1:20、20:1至1:10、20:1至1:1、10:1至1:50、10:1至1:20、10:1至1:10、10:1至1:1、1:1至1:50、1:1至1:20和1:1至1:10重量份之间的非人范围。更适当地，人范围对应于大约10:1至1:1、5:1至1:1或2：1至1:1重量份的非人范围。
在另一方面，本发明提供一种用于对人给药的协同组合，该组合包含处于一定组合范围(w/w)内的(a)PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-4-基]噻唑-2-基}酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐、和(b)至少一种本发明的MEK抑制剂化合物，优选化合物B或其药学上可接受盐，所述组合范围对应于例如下面实施例中所述的用来确定协同相互作用的肿瘤模型中所观察的范围。
根据另一方面，本发明提供一种用于人体给药的协同组合，该组合包含(a)PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-4-基]噻唑-2-基}酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐、和(b)至少一种本发明的MEK抑制剂化合物，优选化合物B或其药学上可接受盐，其中各组分的剂量范围对应于在主要用于确定协同相互作用的合适肿瘤模型(例如在下面实施例中所描述肿瘤模型)中所观察的协同范围。
本发明的一个目的是提供一种药物组合物，其包含针对增生性疾病联合治疗有效的量的本发明组合。在此组合物中，组合伴侣(a)和(b)可以在单一制剂中或者在单位剂型中经由任何合适途径同时但分开地给药、或者顺序地给药。该单位剂型也可以是固定组合。
用于两种组合伴侣的分开给药或者用于以固定组合给药的药物组合物，即包含本发明组合的单个盖仑制剂组合物，可以本身已知的方式制备并且适合于肠内，诸如口服或直肠以及胃肠外给药于哺乳动物(温血动物)，包括人，该组合物包含仅仅治疗有效量的至少一种药理学活性组合伴侣(例如如上所指出的)，或者连同一种或多种药学上可接受载体，特别是适合于肠内或胃肠外应用的药学上可接受载体。
该新型药物组合物可含有从大约0.1%至大约99.9%、优选从大约1%至大约60%的治疗剂。
用于肠内给药或胃肠外给药的联合治疗的合适药物组合物例如是采用单位剂型(例如糖衣片、片剂、胶囊或栓剂、或者安瓿瓶)中的药物组合物。除非另有说明，这些单位剂型是以本身已知方式制造，例如通过各种常规的混合、粉碎、直接压片、制粒、包糖衣、溶解、冷冻干燥工艺，或者本领域技术人员容易了解的制造技术而制造。应当理解的是各剂型的单个剂量中所包含组合伴侣的单位含量无需自身构成有效量，因为可以通过多个剂量单位的给药来达到必需的有效量。
含有药剂的组合或药剂组合中的单独药剂的单位剂型可以采用包封在胶囊(例如明胶胶囊)内的微型片剂的形式。为此，可以使用药物制剂中所采用的明胶胶囊，例如可购自辉瑞的称为“CAPSUGEL”的硬明胶胶囊。
本发明的单位剂型还可以任选地包含用于药品的其它常规载体或赋形剂。这种载体的例子包括但不限于：崩解剂、粘合剂、润滑剂、助流剂、稳定剂、填充剂、稀释剂、着色剂、调味剂和防腐剂。本领域技术人员可考虑剂型的具体期望特性通过常规实验在无任何过分负担的情况下选择一种或多种前述载体。所使用各载体的量可在本技术领域的常规范围内变化。下面的参考文献(它们的内容均以参考的方式并入本文中)揭示了用于制备口服剂型的工艺和赋形剂。见《药用赋形剂手册》第4版，Rowe等人编辑，美国药学会(2003年)；以及《Remington：药学的科学和实践(theScienceandPracticeofPharmacy)》，第20版，Gennaro编辑，LippincottWilliams&Wilkins(2003年)。
通过在制粒前或者在制粒期间将一种或多种常规载体加入初始混合物中，或者通过将一种或多种常规载体与包含采用口服剂型的药剂组合或者药剂组合的单独药剂的颗粒加以混合，而将这些任选的其它常规载体加入到口服剂型中。在后者的实施方式中，可将组合的混合物进一步混合(例如利用V-混合器)，随后压制或模压成片剂(例如单层片剂)、用胶囊包封、或者填充入小袋中。
药学上可接受崩解剂的例子包括但不限于：淀粉类；粘土；纤维素类；海藻酸盐；胶类；交联聚合物，例如交联聚乙烯吡咯烷酮或交聚维酮，例如购自InternationalSpecialtyProducts(Wayne，NJ)的POLYPLASDONEXL；交联羧甲基纤维素钠或可斯卡麦勒斯钠，例如购自FMC的AC-DI-SOL；以及交联羧甲基纤维素钙；大豆多糖类；和瓜尔胶。崩解剂可以以组合物的大约0重量%至大约10重量%的量而存在。在一个实施方式中，崩解剂是以组合物的大约0.1重量%至大约5重量%的量而存在。
药学上可接受粘合剂的例子包括但不限于：淀粉类；纤维素类及其衍生物，例如微晶纤维素，例如购自FMC(费城，PA)的AVICELPH、购自Dow化学公司(Midland，MI)的羟丙基纤维素、羟乙基纤维素和羟丙甲基纤维素METHOCEL；蔗糖；右旋糖；玉米糖浆；多糖类；明胶。粘合剂可以组合物的大约0重量%至大约50重量%例如2-20重量%的量而存在。
药学上可接受润滑剂和药学上可接受助流剂的例子包括但不限于：胶体二氧化硅、三硅酸镁、淀粉类、滑石、磷酸钙、硬脂酸镁、硬脂酸铝、硬脂酸钙、碳酸镁、氧化镁、聚乙二醇、粉状纤维素和微晶纤维素。润滑剂可以组合物的大约0重量%至大约10重量%的量而存在。在一个实施方式中，润滑剂可以组合物的大约0.1重量%至大约1.5重量%的量而存在。助流剂可以大约0.1重量%至大约10重量%的量而存在。
药学上可接受填充剂和药学上可接受稀释剂的例子包括但不限于：糖粉（confectioner’ssugar）、可压缩糖、葡萄糖结合剂、糊精、右旋糖、乳糖、甘露醇、微晶纤维素、粉状纤维素、山梨糖醇、蔗糖和滑石。填充剂和/或稀释剂例如可以组合物的大约0重量%至大约80重量%的量而存在。
在一个实施方式中，本发明还涉及一种用于治疗或预防需要治疗的受试对象中增生性疾病的药物组合物或药剂的制备的本发明组合。
在另一个实施方式中，本发明涉及一种PI3K抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-吡啶-4-基]噻唑-2-基}酰胺)(化合物A)或其药学上可接受盐，和(b)选自6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺、(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺、PD0325901、PD-184352、RDEA119、GSK1120212、XL518、AS-701255、AS-701173、AS703026、RDEA436、E6201、RO4987655、JTP-74057、RG7167、或RG7420的至少一种MEK抑制剂化合物或其药学上可接受盐的用途，其用于治疗或预防有此需要的受试对象中增生性疾病的药物组合物或药剂的制备。优选的是选自6-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺(化合物B)或者(S)-5-氟-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯氨基)-N-(2-羟基丙氧基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(化合物C)的MEK抑制剂。
根据本发明，治疗有效量的本发明组合的各组合伴侣可以同时地或顺序地按任意顺序给药，并且各组分可分开地给药或者以固定组合的形式给药。例如，根据本发明的治疗增生性疾病的方法可包括：同时地或者顺序地按任意顺序，以联合治疗有效量优选协同有效量(例如以对应于本文中所描述量的每日剂量或间断剂量)，(i)给予采用游离形式或药学上可接受盐的形式的第一药剂、并且(ii)给予采用游离形式或药学上可接受盐的形式的药剂(b)。本发明组合的各组合伴侣可以在治疗期间的不同时间分开地给药、或者以分开的或单独的组合形式同时地给药。此外，术语“给药”还包括在体内转变成组合伴侣本身的组合伴侣前体药物的使用。因此，本发明应被理解成包括所有的同时或交替治疗的上述方案，并且术语“给予”应如此解释。
本发明组合中所使用的各组合伴侣的有效剂量可基于所采用的特定化合物或药物组合物、给药方式、正在治疗的病况、以及正在治疗病况的严重程度而变化。因此，本发明组合的给药方案是根据多种因素(包括给药途径以及患者的肾功能和肝功能)加以选择。具有普通技能的临床医生或医生可以容易地确定并指定缓解、对抗或阻止病情发展所需单个治疗剂的有效量。
本发明组合的组合伴侣(a)和(b)在无毒性情况下产生功效的最佳比率、单独和联合剂量、以及浓度是基于传输至靶点部位的治疗剂的动力学，并且是利用本领域技术人已知的方法加以确定。
各组合伴侣的有效剂量会要求这些化合物中的一种化合物与该组合中的其它化合物相比更频繁的给药。因此，为了能够进行适当的给药，包装的药物产品可包含一个或多个含有化合物组合的剂型、以及一个或多个含有化合物组合之一，但不包含组合中的其它化合物的剂型。
如果在本文中未有另外说明，当用于本发明组合中的组合伴侣以如同上市的单独药物形式而使用时，它们的剂量和给药方式可以是根据各市售药物的药品说明书中所提供的信息。
PI3K抑制剂化合物化合物A可以每天以单一剂量或分开剂量，以在大约0.05至大约50mg/kg体重/日、优选大约0.1-25mg/kg/日、更优选大约0.5-10mg/kg/日范围内的有效剂量，以单一剂量或分开剂量向合适的受试对象给药。就70kg的人而言，这将折合大约35-700mg/日的优选剂量范围。
MEK抑制剂化合物化合物B可以每天以单一剂量或分开剂量，以在大约0.001至大约100mg/kg体重/日、优选大约1至大约35mg/kg/日范围内的有效剂量，以单一剂量或分开剂量向合适的受试对象给药。就70kg的人而言，这将折合为大约0.05至7g/日、优选大约0.05至约2.5g/日的优选剂量范围。
MEK抑制剂化合物化合物C可以以单一剂量或分开剂量，以在大约0.001至大约100mg/kg体重/日、优选大约1mg/kg/日至大约35mg/kg/日范围内的有效剂量，以单一剂量或分开剂量，每天向合适的受试对象给药。就70kg的人而言，这将折合大约0.07至2.45g/日、优选大约0.05至大约1.0g/日的优选剂量范围。
可以利用已知方法经验性地确定用于治疗各个体的增生性疾病的各组合伴侣的最佳剂量，该最佳剂量将取决于多种因素，包括但不限于：个体的疾病发展程度、年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给药时间和给药途径；以及该个体正在服用的其它药物。可利用本领域众所周知的常规测试和程序来确定最佳剂量。
可与载体材料混合而制造单个剂型的各组合伴侣的量，将根据被治疗个体和具体给药方式而变化。在一些实施方式中，含有如本文中所描述的药剂组合的单位剂型将含有组合的各药剂在单独给药时通常给药的量。
给药频率可基于所使用化合物以及待治疗或预防的特定病况而变化。通常，优选的是使用足以提供有效治疗的最小剂量。通常可利用本领域技术人员所熟悉的适合于被治疗或预防病情的检测来监测患者的治疗效果。
本发明涉及一种患有增生性疾病的受试对象的治疗方法，该治疗方法包括以针对增生性疾病的联合有效治疗的量向所述受试对象给予本发明的组合。具体地，用本发明的组合治疗的增生性疾病是黑色素瘤、结直肠癌或肺癌(特别是非小细胞肺癌)。此外，治疗可以包括手术治疗或放射治疗。
本发明还涉及用于治疗增生性疾病(特别是癌症)的本发明的组合。
本发明还提供一种商业包装品，该商业包装品包含作为治疗剂的本发明的组合，连同说明书，其为了用于有此需要治疗的受试对象中增生性疾病的发展延迟或治疗而同时、分开或序贯给药。
下面的实施例说明了上面所描述的本发明，然而这些实施例并非意图以任意方式限制本发明的范围。也可以利用相关领域技术人员所知的其它测试模型来确定本发明药物组合的有利效果。
实施例1
材料和方法
结直肠癌细胞系SW1417、COLO205、LS411N、HT-29、RKO、OUMS-23、SW620、LoVo、SW480、SW837、COLO-678、LS123-NCI-H747、HCT-15、HCT116、DLD-1、T84、SW948、LS180、GP2d、HuTu80、CW-2、SW48、NCI-H716、C2Bbe1、SNU-C1和KM12是从美国典型培养物收藏中心(ATCC)获得并且维持在供应商所规定的其各自培养基中。这些结直肠癌细胞系具有以下突变状态：
突变(mut)和野生型(wt)表示已知的功能上相关的突变。Mut§是基于来自分析的表达的缺失。Mut#是指具有未知功能意义的突变。Nd是指没有数据。*是指在研究结束时进行的重复实验，其中数据被排除在中间值和平均值的计算之外。**是指显示一些分散的重复数据点和剂量反应。
为了评价联合效果，将细胞以500细胞/孔接种入384孔平板中并培养过夜。将化合物母板的内容物以1:200进行预稀释(将1μL化合物溶液稀释到200μL含10%胎牛血清的细胞RPMI-160培养基中)，然后将5μL此预稀释液转移到含有20μL细胞培养基的细胞培养板中，以实现目标最终化合物浓度以及0.09%的赋形剂(DMSO)浓度。
在以37℃/5%CO2条件进行72小时培养之后，通过使用25μL试剂/孔和各条件的n=2个复制板对细胞ATP水平进行定量分析(CellTiterGlo，Promega)而对单独药剂以及它们的交叉组合对细胞存活率的效果进行评价。同样地对添加化合物时的细胞的数量/活力进行评价，细胞的数量/活力用于估计特定细胞系的群体倍增时间。利用标准的四参数曲线拟合(SLFit，模型205)计算单独药剂的IC50。利用根据Loewe相加作用模型的过度抑制2D矩阵对化合物组合之间的潜在协同相互作用进行评估并且以协同作用评分的形式作出报告。另外，通过从处于50%抑制的等效线图中所获得的联合指数分析对化合物组合进行评价，并且以最佳联合指数(CI)的形式作出报告，该最佳联合指数(CI)对应于等效曲线中的最低值。利用CHALICE软件(Lehár等人，NatBiotechnol(2009年7月)，27(4)：69：66)执行所有的协同作用计算。下面提供对联合指数和协同作用评分的值的解释：
联合指数(CI) 协同作用评分
CI=1→剂量相加作用 S～0→剂量相加作用
CI<0.5→“实际”协同作用(2倍剂量变化) S>2σS→检测到的实际协同作用
CI<0.3→“有效”协同作用(3倍剂量变化) S>1→通常表示协同作用
CI<0.1→“强”协同作用(10倍剂量变化)
通过使用GraphPadPrism5(GraphPad软件有限公司)的单因素方差分析(Neuman-Keuls法)，进行各结果组的成对多重比较。
结果
将此研究中对所有结直肠细胞系中的主要结果的总结示于如下：
在27种经测试的结直肠癌细胞系中的17种细胞系中，PI3K抑制剂化合物A与MEK抑制剂化合物B显示协同相互作用。平均地，在具有PIK3CA突变的细胞系中存在最高程度的协同作用。除了无PTEN的细胞系外，关键MAP激酶(BRAF/KRAS)或PI3K(PIK3CA/PTEN)途径的突变状态对所观察的协同作用评分不具有统计学显著影响。总之，这些结果表明：化合物A与化合物B在野生型结直肠细胞系中或者在具有BRAF、KRAS和PIK3CA突变的结直肠癌细胞系中具有协同相互作用，但在无PTEN的结直肠癌细胞系中没有协同相互作用。
实施例2
材料和方法
此研究中使用的细胞系是从AmericanTypeCellCollection购得，包括非小细胞肺癌细胞系NCI-H23和NCI-H2122(这些细胞系具有KRAS和LKB1突变二者)、NCI-H358(具有KRAS突变)、NCI-H460(具有KRAS、LKB1和PIK3CA突变)、结直肠癌细胞系SW480(具有KRAS突变)、HCT-15(具有KRASPIK3CA突变)。在5%CO2培养箱中于37℃将所有的细胞系在补充有10%胎牛血清、2mmol/L谷氨酰胺和1%丙酮酸钠的RPMI1640(ATCC#30-2001)培养基中进行培养。
细胞增殖检测：通过根据制造商的方案，利用CellTiter-Glo发光细胞活力检测(Promega#G7573)测量细胞ATP含量，来确定细胞活力。简略地，一式四份或一式二份地以500-900细胞/孔的密度涂布具有30ul/孔生长培养基的透明底384孔黑色培养板(Greiner#781091)，使细胞附着过夜，接着用各种浓度的药物或药物组合(10ul/孔)进行72小时培养，在药物处理结束时，将30ul/孔的CellTiter-Glo试剂添加到各孔中以使细胞溶解，并且在Envision板检测仪中记录发光信号。
用于计算组合的效果的方法：为了以无偏倚方式评价化合物B与化合物A的组合效果并且为了确定在所有可能浓度下的协同作用，而利用“剂量矩阵”进行组合研究，其中在系列稀释的化合物B和化合物A单一药剂剂量的所有可能排列中对组合进行测试，在所有的组合检测中同时地提供各化合物。该“剂量矩阵”是如下：以5μM的最高剂量和大约5nM的低剂量对化合物B进行11剂量2倍系列稀释，以5μM的高剂量和大约20nM的低剂量对化合物A进行9剂量2倍系列稀释。利用Chalice软件(CombinatoRx，CambridgeMA)对单一药剂剂量反应曲线、IC50、IC90、和协同作用进行分析。通过在药物与自身剂量相加作用参考模型中对组合的反应与其单独药剂的反应进行比较，而计算协同作用。可以在等效线图中对与剂量相加的偏差进行目视评价或者用联合指数对其进行数字评价。也可以将与相加相比较的过度抑制绘制成全剂量矩阵图，用于捕获在何处发生协同作用。为了对联合效果的总强度进行定量，还计算在数据与最高单一药剂表面之间的体积评分VHSA=ΣX，YlnfXlnfY(Idata–IHSA)，其关于单一药剂稀释因子fX，fY进校标准化。
细胞增殖检测结果：总之，在所有六种被检查细胞系中观察到协同作用，形成在2.09至5.49范围内的协同作用评分，协同的区域是宽的并且通常就化合物A而言在高于150nM的剂量下和就化合物B而言在80nM以上的剂量下观察到协同作用。这些结果表明：化合物B与化合物A在具有KRAS突变的CRC和NSCLC细胞系中具有协同相互作用的可能性。
细胞系 协同作用评分
HCT-15 3.05
NCI-H358 4.26
NCI-H23 3.50
SW480 2.09
NCI-H2122 5.49
NCI-H460 3.11
实施例3
材料和方法
细胞系测试：对来自三种组织类型的38个细胞系(7个胰腺组织、10个肺组织、和21黑色素瘤组织)测试PI3K抑制剂化合物A与MEK抑制剂化合物B的组合(如上面的定义)。在以如下方式所构建的部分填充“剂量矩阵”中对各组合进行测试：以最高浓度(化合物A为11μM或者化合物B为2.7μM)将各单独药剂分配入生长培养基，进行3倍系列稀释以形成覆盖浓度中729因子的7点系列。然后以第2至第6浓度的所有配对将这些化合物加以混合，也通过在最高浓度和最低浓度的彼此混合而扩展此剂量矩阵。也针对一些NSCLC细胞系进行较高分辨率测试，对9种剂量的化合物A和11种剂量的化合物B进行测试，在各情况下利用开始于5μM的2倍稀释。于37℃下在5%CO2培养箱中，将所有细胞系在补充有10%胎牛血清、2mmol/L谷氨酰胺和1%丙酮酸钠的RPMI1640(AmericanTypeCellCollection编号30-2001)培养基中进行培养。在单独的检测板中，一式三份地对各个这种剂量矩阵进行测试。为了确认细胞毒治疗，我们也在药物治疗开始时对“第0天”细胞总数进行了测定。
测量组合效果：利用简单的抑制I=1-T/V对各处理中的细胞反应进行测量，其中T是经处理孔的原始反应并且V是培养板上的复制孔之间的未处理的中间水平。利用“生长抑制”GI=1-(T-V0)/[T<V0？V0：(V-V0)]来测量细胞毒性测量值，其中V0是第0天中间原始水平，并且符号[C？A:B]在条件C为真时产生A且在其为假时产生B。GI=0、1和2分别对应于无效的、抑制细胞的、和完全细胞毒处理。利用Chalice分析软件(CombinatoRx，CambridgeMA)将药剂反应拟合到与剂量的反曲函数中，利用在高剂量下的最大效果Amax、过渡浓度EC50和该过渡的陡度的Hill系数进行参数化，插值到经过点IC50的50%抑制中。利用剂量矩阵中的最大抑制和GI值并且通过利用剂量相加作用Loewe模型对组合的反应与其单个药剂的反应进行比较，而描述组合效果。在所有的组合浓度X、Y中基于数据Idata和剂量相加作用表面ILoewe之间的差异来计算“协同作用评分”SLoewe=ΣX，YlnfxlnfYmax(0，Idata)max(0Idata–ILoewe)，并且利用测量的抑制和单个药剂稀释因子fX，fY进行加权。除了协同作用外，利用联合指数CI50=CX/IC50X+CY/IC50Y测定在50%抑制下的剂量改变，其中CX、CY是与各化合物的IC50值相比在组合中产生50%抑制的单个药剂的最低浓度。
细胞增殖检测结果：将在测试的细胞系中所产生的组合效果示于下表中，连同各细胞系的世系和突变状态(mut=已知的驱动蛋白损伤，mut？=未知的损伤，wt=野生型)。
因为根据定义它们应具有零协同作用，所以药物与自身剂量矩阵(用作对照)的评分显示与实验误差一致的水平。药物与自身协同作用评分的标准偏差约为0.4，因此SLoewe>1的组合可以被认为具有显著协同作用。具有CI50=0.3的剂量变化的协同作用组合可以容易地从我们数据中的小变化而获得(因为剂量矩阵具有3倍稀释)，因此我们只考虑CI50<0.3以建议有用的剂量节约。最后，有用的组合需要以组合形式具有明显的抑制，因此我们要求Imax>0.8并且认为GImax>1.5是特别有希望的。
胰腺细胞系：在胰腺细胞系中（几乎所有的胰腺细胞系是KRAS突变体），化合物A+化合物B的组合一律具有协同作用，在7例中的4例中显示有用的剂量变化。协同作用的最佳例子是HPAC，其在组合中显示具有5倍剂量减小的强协同作用(CI50=0.2)，并且在最高浓度下显著超过细胞抑制(GImax>1.5)(图1)。出人意料地，在BxPC-3(一个KRAS野生型细胞系)中，协同作用模式非常类似于在HPAC中所见的模式。在PANC-1中发现最弱的协同作用，PANC-1在整个剂量矩阵中从来不被抑制达大于50%(图2)。
NSCLC肺细胞系：在非小细胞肺癌细胞系中（所有的非小细胞肺癌细胞系是KRAS突变体），协同作用也是一律很强，在具有充分抑制水平的大多数情况下具有约5倍的剂量变化(CI50约为0.2)。(见图1)因为在NSCLC反应中许多最佳组合效果显示实验假象，所以来自单独研究的高分辨率数据也包括在该分析中(见图2)，其在所有的情况下证实并巩固了协同作用的确定。
黑色素瘤细胞系：黑色素瘤细胞系基于它们的遗传背景显示多种相互作用类型(图3)。通常在具有活化的NRAS突变的黑色素瘤细胞系以及在BRAF突变体中发现协同作用。然而，这些背景对作为单个药剂的化合物A显示弱的反应，并且协同作用处于比在胰腺癌和肺癌中关于KRAS突变体中所见水平低得多的水平，并且通常只限于非常高的组合药物浓度。在COLO792和MeWo中看到强协同作用，二者在Ras、BRAF和PTEN中是野生型，但由于它们非常不同的单药剂敏感性而具有不同的相互作用类型。在PTEN突变体中完全没有协同作用，其对任何单个药剂具有抗性。最后，有差异的细胞系LOXIMVI具有非常不同的针对其它BRAF突变体的单药剂反应，并且除了最高组合浓度外，相互作用看上去更像PTEN突变体组合。
总的来说，这些结果表明存在多种相互作用，这些相互作用取决于各细胞系的遗传背景。然而，特别是在NSCLC和胰腺细胞系中的KRAS突变体在对化合物A+化合物B的组合反应时，易显示具有有效剂量变化的良好协同作用和一些急性细胞毒性。

Claims (15)

1.一种药物组合产品，包含用于同时、分开或序贯给药的：
(a)磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂化合物(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-4-基]噻唑-2-基}酰胺)或其药学上可接受盐，和
(b)至少一种丝裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂化合物6-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)酰胺或其药学上可接受盐，以及
任选地至少一种药学上可接受载体。
2.如权利要求1所述的药物组合产品，其用于治疗需要治疗的受试对象中的增生性疾病。
3.如权利要求1所述的药物组合产品，其用于治疗增生性疾病的药剂的制备。
4.如权利要求3所述的药物组合产品，其中所述增生性疾病是癌症。
5.如权利要求3或4所述的药物组合产品，其中所述增生性疾病是黑色素瘤、肺癌、结直肠癌(CRC)、乳腺癌、肾癌、肝癌、急性髓细胞白血病(AML)、骨髓增生异常综合征(MDS)、甲状腺癌、胰腺癌、食道癌、神经纤维瘤病。
6.如权利要求5所述的药物组合产品，其中所述肾癌是肾细胞癌(RCC)。
7.如权利要求5所述的药物组合产品，其中所述肝癌是肝细胞癌。
8.如权利要求5所述的药物组合产品，其中所述肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)。
9.如权利要求3所述的药物组合产品，其中所述增生性疾病是黑色素瘤、结直肠癌(CRC)、非小细胞肺癌(NSCLC)或胰腺癌。
10.如权利要求1所述的药物组合产品，其中以协同有效量提供(a)PI3K抑制剂化合物和(b)至少一种MEK抑制剂化合物，以用于治疗增生性疾病。
11.如权利要求1所述的药物组合产品用于制备治疗增生性疾病的药剂的用途。
12.如权利要求11所述的用途，其中增生性疾病是黑色素瘤、肺癌、结直肠癌(CRC)、乳腺癌、肾癌、肝癌、急性髓细胞白血病(AML)、骨髓增生异常综合征(MDS)、甲状腺癌、胰腺癌、食道癌、神经纤维瘤病。
13.如权利要求12所述的用途，其中所述肾癌是肾细胞癌(RCC)。
14.如权利要求12所述的用途，其中所述肝癌是肝细胞癌。
15.如权利要求12所述的用途，其中所述肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)。
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