CN103747790A - 制造包含局部麻醉剂、类肝素和缓冲剂的组合物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及制备用于治疗下泌尿道疾病或病症的组合物的改进的方法，所述组合物包含类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂，所述方法可以包括：(i)提供固体形式或液体形式的类肝素；(ii)提供固体形式或液体形式的局部麻醉剂；(iii)向所述固体形式或液体形式的类肝素添加液体缓冲剂；(Iv)向所述液体缓冲剂与类肝素的混合物添加所述局部麻醉剂；以及(v)如果需要，调整所述液体缓冲剂、局部麻醉剂与类肝素的混合物的pH，以便获得约6.8至约8.3的pH而没有所述局部麻醉剂的沉淀。

Description

制造包含局部麻醉剂、类肝素和缓冲剂的组合物的方法

交叉引用

本申请要求C.Lowell Parsons于2011年1月6日提交的题为“制造包含局部麻醉剂、类肝素和缓冲剂的组合物的方法”（Method forManufacturing Composition Comprising Local Anesthetic,Heparinoid,and Buffer）的美国临时申请系列号61/430,468的优先权，其内容在此以其全文引为参考。

技术领域

本发明涉及制造适合于治疗在间质性膀胱炎和其他下泌尿道病症中观察到的膀胱症状的组合物的改进的方法，所述其他下泌尿道病症例如但不限于膀胱过度活动症、前列腺炎、女性中的尿道综合征和妇科慢性盆腔疼痛。所述组合物包含局部麻醉剂、糖胺聚糖以及缓冲剂，所述局部麻醉剂通常为利多卡因，所述糖胺聚糖通常为肝素，所述缓冲剂通常为碳酸氢钠，然后所述组合物被直接滴注到膀胱中。

背景技术

间质性膀胱炎(IC)是一种慢性进展性下泌尿道病症，其引起尿急和尿频和/或盆腔疼痛。许多年来，泌尿科医师将IC视为他们对其尚无大体上有效的治疗的罕见疾病。事实上，这种病症相当常见。在1999年，在美国的流行程度据估计为750,000例(Curhan等，J Urol161(2)∶549-552(1999))。然而，IC的真实流行程度据估计为至少1-2百万患有严重慢性盆腔疼痛的患者。此外，膀胱过度活动症、尿道综合征、前列腺炎和妇科慢性盆腔疼痛综合征包括数百万患者，它们也引起没有有效疗法的尿急、尿频、尿失禁或盆腔疼痛的膀胱症状，并且所有这些综合征与传统上诊断的IC共有类似的症状和可能共同的病理生理学（Parsons,CL Int Br J Urol Dec,2010）；对于这些病症没有大体上有效的治疗。

因此，需要既有益于较大部分的患者群体，提供症状的即时缓解而不引起附加的疼痛，无需广泛改变饮食，又能进一步提供疾病过程随时间逆转的治疗。

用于治疗间质性膀胱炎的组合物和方法被描述在于2008年8月19日授予Parsons的题为“用于间质性膀胱炎的即时症状缓解和长期治疗的间质疗法”（Interstitial Therapy for Immediate Symptom Relief andChronic Therapy in Interstitial Cystitis）的美国专利号7,414,039和Parsons于2008年12月4日公布的题为“用于间质性膀胱炎的即时症状缓解和长期治疗的新型间质疗法”（Novel Interstitial Therapy forImmediate Symptom Relief and Chronic Therapy in Interstitial Cystitis）的美国专利申请公布号2008/0300219中，两者在此以其全文引为参考，以及被描述在Flashner等在2006年7月20日公布的题为“用于治疗下泌尿道病症的试剂盒和改进的组合物”（Kits and ImprovedCompositions for Treating Lower Urinary Tract Disorders）的PCT专利申请公布号WO2006/07663和Flashner等在2007年6月28日公布的题为“用于治疗下泌尿道病症的试剂盒和改进的组合物”（Kits andImproved Compositions for Treating Lower Urinary Tract Disorders）的PCT专利申请公布号WO2007/073397中，两者在此以其全文引为参考。总的来说，在该授权的专利和这些公布的专利申请中所公开的组合物包含局部麻醉剂、类肝素以及缓冲剂，所述局部麻醉剂通常为利多卡因，所述类肝素通常为肝素，所述缓冲剂通常为碳酸氢钠，所述组合物被直接滴注到膀胱中。

碱化的利多卡因和肝素可用于成功地治疗膀胱症状例如但不限于尿频、尿急、尿失禁和膀胱产生的疼痛。由膀胱（脏器）产生的疼痛不总是被感觉为由膀胱产生。疼痛可以被认为起源于从肚脐至膝盖的任何位置，并且也可以被认为起源于腰区向下到臀部直至腿部，并且通常与膀胱充满或排空没有关联。因此，盆腔疼痛的起源可能不被认识到是来自于膀胱。在各种“临床综合征”中都可以观察到这些膀胱症状，所述临床综合征事实上可能都来自于一种疾病过程：功能失调的上皮（Parsons,CL Int Br J Urol,Dec2010）。然而，所有这些能够产生膀胱症状的综合征都可以用这种解决方案成功地治疗，包括但不限于膀胱过度活动症、间质性膀胱炎、女性中的尿道综合征、复发性下泌尿道感染、前列腺炎（男性慢性盆腔疼痛综合征）、辐射性膀胱炎、化学性膀胱炎、妇科慢性盆腔疼痛综合征（例如子宫内膜异位、外阴痛、外阴阴道炎、酵母性阴道炎）。

然而，在混合这三种化合物中存在问题，因为错误的平衡将引起利多卡因的沉淀和功效丧失。利多卡因当暴露于等于或高于7.0的pH时，将去离子化并通过脂质膜例如膀胱上皮吸收。结果，吸收的利多卡因将麻醉膀胱神经并缓解上面提到的膀胱症状。肝素将“包被”膀胱壁，并从一开始就抑制引起膀胱症状的钾扩散。因此，该组合提供了膀胱症状的长时间缓解（Parsons,Urology2003）。然而，混合肝素、利多卡因和缓冲剂必须以精确方式进行，以防止利多卡因的沉淀，因为取决于条件，利多卡因将在高于7的pH值下沉淀。利多卡因的沉淀降低其生物利用度并降低组合物的功效。

因此，对用于制备包含类肝素如肝素、局部麻醉剂如利多卡因和缓冲剂如碳酸氢钠的组合物，避免局部麻醉剂如利多卡因的沉淀并因此维持局部麻醉剂的生物利用度且维持组合物的功效的改进的方法，存在着需求。在所有情况下，这些混合物的制备物是用于直接滴注到膀胱中以治疗膀胱症状。因此，摩尔渗透压浓度、阳离子的比浓度和pH要求不像这些药物的用于静脉内或皮下施用的制备物那样受限制。

发明内容

本发明涉及制备包含类肝素如肝素、局部麻醉剂如利多卡因和缓冲剂如碳酸氢钠的组合物的改进的方法，所述方法防止局部麻醉剂如利多卡因的沉淀，并由此维持局部麻醉剂的生物利用度。这维持了所述组合物的稳定性和功效。

本发明的一个方面是制备可用于通过将组合物滴注到膀胱中来治疗下泌尿道病症的组合物的方法，所述组合物包含含有类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂的混合物，所述方法包括下列步骤：

(1)提供固体形式或液体形式的类肝素；

(2)提供固体形式或液体形式的局部麻醉剂；

(3)向所述固体形式或液体形式的类肝素添加液体缓冲剂；

(4)向所述液体缓冲剂与类肝素的混合物添加所述局部麻醉剂；以及

(5)如果需要，调整所述液体缓冲剂、局部麻醉剂与类肝素的混合物的pH，以便获得约6.7至约8.3的pH或者获得甚至更高的pH而没有所述局部麻醉剂的沉淀。最适pH为约7.4。

通常，所述类肝素选自肝素、硫酸软骨素、硫酸乙酰肝素、透明质酸、硫酸角质素、硫酸皮肤素、透明质烷（hyaluronan）和戊聚糖多硫酸钠。优选地，所述类肝素选自肝素和戊聚糖多硫酸钠。更优选地，所述类肝素是肝素，例如肝素钠。

通常，所述局部麻醉剂选自苯佐卡因、利多卡因、丁卡因、丁哌卡因、可卡因、依替卡因、氟卡胺、甲哌卡因、普拉莫星、丙胺卡因、普鲁卡因、氯普鲁卡因、奥西卡因（oxyprocaine）、丙对卡因、罗哌卡因、达克罗宁、二丁卡因、丙氧卡因、氯二甲苯酚、辛可卡因、地昔伐卡因、二胺卡因、海克卡因、左布比卡因、丙氧卡因、吡咯卡因、利索卡因、罗多卡因及其药学可接受的衍生物和生物电子等排体，以及它们的组合。优选地，所述局部麻醉剂选自利多卡因、丁哌卡因、苯佐卡因、丁卡因、依替卡因、氟卡胺、丙胺卡因和二丁卡因，及其组合。更优选地，所述局部麻醉剂是利多卡因，例如盐酸利多卡因。

通常，所述缓冲剂选自碳酸氢盐缓冲剂、Tris（三(羟甲基)氨基甲烷）缓冲剂、MOPS缓冲剂（3-(N-吗啉代)丙磺酸）、HEPES（N-(2-羟乙基)哌嗪-N-(2-乙磺酸)）缓冲剂、ACES（2-[(2-氨基-2-氧代乙基)氨基]乙磺酸）缓冲剂、ADA（N-(2-乙酰胺基)2-亚氨基二乙酸）缓冲剂、AMPSO（3-[(1,1-二甲基-2-羟乙基)氨基]-2-丙磺酸）缓冲剂、BES（N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸）缓冲剂、Bicine（N,N-双(2-羟乙基甘氨酸）缓冲剂、Bis-Tris（双-(2-羟乙基)亚氨基-三(羟甲基)甲烷）缓冲剂、CAPS（3-(环己基氨基)-1-丙磺酸）缓冲剂、CAPSO（3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸）缓冲剂、CHES（2-(N-环己基氨基)乙磺酸）缓冲剂、DIPSO（3-[N,N-双(2-羟乙基)氨基]-2-羟基-丙磺酸）缓冲剂、HEPPS（N-(2-羟乙基哌嗪)-N′-(3-丙磺酸)）缓冲剂、HEPPSO（N-(2-羟乙基)哌嗪-N′-(2-羟基丙磺酸)）缓冲剂、MES（2-(N-吗啉代)乙磺酸）缓冲剂、三乙醇胺缓冲剂、咪唑缓冲剂、甘氨酸缓冲剂、乙醇胺缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、MOPSO（3-(N-吗啉代)-2-羟基丙磺酸）缓冲剂、PIPES（哌嗪-N,N′-双(2-乙磺酸)）缓冲剂、POPSO（哌嗪-N,N′-双(2-羟基丙磺酸)）缓冲剂、TAPS（N-三[羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸）缓冲剂、TAPSO（3-[N-三(羟甲基)甲基氨基]-2-羟基-丙磺酸）缓冲剂、TES（N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸）缓冲剂、tricine（N-三(羟甲基)甲基甘氨酸缓冲剂）、2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇缓冲剂、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲剂及其组合。优选地，所述缓冲剂选自碳酸氢盐缓冲剂、Tris缓冲剂及其组合。更优选地，所述缓冲剂是碳酸氢盐缓冲剂，例如碳酸氢钠。

所述方法还可以包括在制备包含所述类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂的缓冲组合物之后，添加下列一种或多种组分的步骤：(i)渗透压组分；(ii)能够使所述组合物持留在膀胱上皮表面的化合物；(iii)抗细菌剂；(iv)抗真菌剂；(v)血管收缩剂；或(vi)防腐剂。

在一种可选方式中，所述类肝素与局部麻醉剂两者以固体形式提供，所述固体形式可以是粉末形式。在另一种可选方式中，所述类肝素与局部麻醉剂两者以液体形式提供。在又一种可选方式中，所述类肝素以固体形式提供，并且所述局部麻醉剂以液体形式提供；所述类肝素的固体形式可以是粉末形式。在另一种可选方式中，所述类肝素以液体形式提供，并且所述局部麻醉剂以固体形式提供；所述局部麻醉剂的固体形式可以是粉末形式。在制备中，(i)类肝素如肝素、(ii)局部麻醉剂如利多卡因和(iii)缓冲剂这所有三种组分的粉末可以被同时水化，如果所述利多卡因不沉淀的话。

优选地，所述类肝素是肝素，所述局部麻醉剂是利多卡因，并且所述缓冲剂是碳酸氢盐缓冲剂。更优选地，所述肝素是肝素钠，所述局部麻醉剂是盐酸利多卡因，并且所述碳酸氢盐缓冲剂是碳酸氢钠。

本发明的另一方面是制备可用于通过将组合物滴注到膀胱中来治疗下泌尿道病症的组合物的可选的方法，所述组合物包含含有类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂的混合物，所述方法包括下列步骤：

(1)提供固体形式或液体形式的类肝素；

(2)提供固体形式或液体形式的局部麻醉剂；

(3)将所述固体形式或液体形式的类肝素与所述固体形式或液体形式的局部麻醉剂混合；

(4)向所述类肝素与局部麻醉剂的混合物添加液体缓冲剂，以形成液体缓冲剂、类肝素与局部麻醉剂的混合物；以及

(5)如果需要，调整所述液体缓冲剂、局部麻醉剂与类肝素的混合物的pH，以便获得约6.7至约8.3的pH而没有所述局部麻醉剂的沉淀。最适pH为约7.4。

对于该可选的方法来说，所述类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂如上所述。

该可选的方法还可以包括在制备包含所述类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂的缓冲组合物之后，添加下列一种或多种组分的步骤：（i）渗透压组分；（ii）能够使所述组合物持留在膀胱上皮表面的化合物；（iii）抗细菌剂；(iv)抗真菌剂；(v)血管收缩剂；或(vi)防腐剂。

在一种可选方式中，所述类肝素与局部麻醉剂两者以固体形式提供，所述固体形式可以是粉末形式。在另一种可选方式中，所述类肝素与局部麻醉剂两者以液体形式提供。在又一种可选方式中，所述类肝素以固体形式提供，并且所述局部麻醉剂以液体形式提供；所述类肝素的固体形式可以是粉末形式。在另一种可选方式中，所述类肝素以液体形式提供，并且所述局部麻醉剂以固体形式提供；所述局部麻醉剂的固体形式可以是粉末形式。

在又一种可选方式中，可以将所述类肝素例如肝素、所述局部麻醉剂例如利多卡因和所述缓冲剂的液体溶液同时进行混合，只要所述利多卡因不沉淀即可。例如，当希望的pH更接近于pH7.0时，这可以使用更低水平的缓冲剂来进行。一般来说，该可选方式包括下列步骤：

(a)提供液体形式的类肝素；

(b)提供液体形式的局部麻醉剂；

(c)提供液体形式的缓冲剂；

(d)将所述类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂同时进行混合，避免所述局部麻醉剂的沉淀；以及

(e)如果需要，调整液体缓冲剂、液体局部麻醉剂与液体类肝素的混合物的pH，以便获得约6.7至约8.3的pH而没有所述局部麻醉剂的沉淀。

本发明的另一方面是包含类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂的预混合的液体组合物，其稳定至少三个月而没有所述局部麻醉剂的沉淀。所述预混合的液体组合物可以通过上面描述的方法来制备。所述类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂如上所述。优选地，所述类肝素是肝素，所述局部麻醉剂是利多卡因，并且所述缓冲剂是碳酸氢盐缓冲剂。更优选地，所述肝素是肝素钠，所述局部麻醉剂是盐酸利多卡因，并且所述碳酸氢盐缓冲剂是碳酸氢钠。通常，这种组合物的pH为约6.7至约8.3。优选地，这种组合物的pH为约7.0至约7.8。更优选地，这种组合物的pH为约7.4。

所述组合物还可以包含下列一种或多种组分：(i)渗透压组分；(ii)能够使所述组合物持留在膀胱上皮表面的化合物；(iii)抗细菌剂；(iv)抗真菌剂；(v)血管收缩剂；或(vi)防腐剂。

所述组合物可以适合于治疗、改善或预防下泌尿道病症，所述下泌尿道病症包括但不限于选自下列的下泌尿道病症：女性中的细菌性膀胱炎、真菌/酵母性膀胱炎、外阴前庭炎、外阴痛、性交疼痛、尿道综合征和子宫内膜异位；男性中的前列腺炎和慢性盆腔疼痛综合征；以及男性或女性中的辐射诱导的膀胱炎、化疗诱导的膀胱炎、间质性膀胱炎和膀胱过度活动症。通常，所述下泌尿道病症是间质性膀胱炎。

具体实施方式

本发明涉及制备包含类肝素如肝素、局部麻醉剂如利多卡因和缓冲剂如碳酸氢钠的组合物的改进的方法，所述方法包括下列步骤：

(1)第一个步骤是获得固体形式例如粉末形式且不含其他药剂例如适合的阳离子（即钠）的类肝素例如肝素或戊聚糖多硫酸钠，以及固体形式例如粉末形式的局部麻醉剂如盐酸利多卡因。在该阶段不应向固体形式的局部麻醉剂添加缓冲剂（粉末或液体），因为它将在混合物被水化时引起利多卡因的沉淀。

(2)在一种可选方式中，可以向固体形式例如粉末形式的类肝素添加缓冲剂，然后可以添加局部麻醉剂例如利多卡因。在另一种可选方式中，可以将固体形式例如粉末形式的类肝素与固体形式例如粉末形式的局部麻醉剂混合，然后可以添加缓冲剂。

(3)一旦包含类肝素和局部麻醉剂两者的组合物被制备后，然后通过逐渐加入缓冲剂例如碳酸氢钠来缓冲此时是溶液的组合物，直至获得约6.7至约8.3或可能更高的pH，而没有局部麻醉剂的沉淀。优选地，得到的组合物的pH为约7.0至约7.8。更优选地，得到的组合物的pH为约7.4。在该阶段需要的缓冲剂的量可能随着每种制备物而变，因此应该连续地监测pH以确保添加的缓冲剂的量是合适的。

(4)最后，如果需要可以添加防腐剂；这不引起沉淀。

(5)固体形式的肝素与固体形式的盐酸利多卡因的混合可以首先添加缓冲剂、然后添加水来进行。在另一种可选方式中，当准备生产最终产物时，可以将各种液体组分全部混合（以正确的顺序）。在又一种可选方式中，可以将粉末状肝素和缓冲剂与液体利多卡因混合，以获得最终产物。在又一种可选方式中，可以将所有三种组分即类肝素如肝素、局部麻醉剂如利多卡因和缓冲剂的粉末同时水化，如果利多卡因不沉淀的话。在另一种可选方式中，可以将所有三种组分即类肝素如肝素、局部麻醉剂如利多卡因和缓冲剂的液体溶液同时混合，只要利多卡因不沉淀即可；例如，当希望的pH更接近于7.0的pH值时，这可以使用更低水平的缓冲剂来进行。本质上，为了生产最终产物，可以使用液体或粉末状药剂的任何组合，只要遵从混合化合物的正确顺序即可。关键是避免局部麻醉剂与缓冲剂接触，除非存在类肝素。

(6)通过例如上述的方法生产的最终液体产物将是稳定的，并能够被储存三个月以上而不沉淀。因此，按照本发明制备的稳定至少三个月而没有利多卡因沉淀的预混合的液体组合物，在本发明的范围之内。

必需使用粉末状类肝素（肝素）和粉末状局部麻醉剂开始组合物的制备，因为在美国销售的可商购的肝素和利多卡因溶液旨在用于全身性注射到体内。这些是人们希望将其混合以用于膀胱中的可获得的仅有产品。当加入缓冲剂时，这些可获得的肝素和利多卡因溶液是不相容的；不论随后采取何种尝试来避免沉淀并将利多卡因维持在溶液中，利多卡因都将沉淀。

组合物还可以包含如下进一步描述的渗透压组分。

当在本文中使用时，“类肝素”是指包含糖胺聚糖并且最适地还包含较小的含氮分子（例如低分子量分子）的任何分子，所述糖胺聚糖是指包含糖的长支链网络的分子（例如硫酸软骨素、硫酸乙酰肝素、透明质酸、硫酸角质素、硫酸皮肤素、透明质烷、戊聚糖多硫酸钠等）。它不意味着将本发明限于任一种糖胺聚糖（GAG）或GAG来源。GAG分子包括但不限于低分子量（LMW）GAG、天然来源的GAG、生物技术制备的GAG、化学改性的GAG、合成的GAG等。类肝素也可以由戊糖而不是己糖构成（GAG由己糖构成），例如戊聚糖多硫酸盐。这并不意味着将本发明限于任一种类肝素分子或类肝素分子的来源。当在本文中使用时，“肝素”是指一类非均质的如上所述的直链阴离子型糖胺聚糖，具有抗凝剂性质，分子量在2,000至40,000Da范围内。肝素通过以单位表示的比抗凝活性来度量。在某些实施方式中，肝素是8,000-40,000道尔顿范围内的较高分子量物质。当在本文中使用时，“低分子量肝素”是指2,000-8,000道尔顿范围内的较低分子量（LMW）物质。戊聚糖多硫酸钠可以在4,000-6,000道尔顿范围内。在本发明的范围内还包括诸如达肝素或依诺肝素的聚合物。LMW肝素通过未分级的肝素的受控的酶水解或化学水解来制造，并且除了可能由酶或化学处理引入的一些变化之外，具有与未分级的肝素非常相似的化学结构。尽管不打算限制本发明的组合物的作用机制，但这些药物的作用机制可能与全长肝素类似。LMW肝素通常从批量肝素（bulk heparin）分离。在一种实施方式中，肝素或另一种类肝素是肝素盐。当在本文中使用时，短语“药学可接受的盐”、“其药学可接受的盐”或“药学可接受的复合物”出于本申请的目的是等同的，并且是指从药学可接受的无毒性酸或碱制备的衍生物，所述酸或碱包括无机酸和无机碱以及有机酸和有机碱。

由于这些多糖中存在的硫酸基团和/或羧酸基团使得它们具有负电荷，因此它们以盐的形式施用，使用适合的阳离子中和酸基团上的负电荷。通常，阳离子是钠。然而，也可以使用其他生理上可耐受的不诱导尿道功能障碍的平衡离子，例如镁、铝、钙、铵，或者从生理上可接受的有机碱制成的盐，所述有机碱例如但不限于三甲胺、三乙胺、吗啉、吡啶、哌啶、甲基吡啶、二环己胺、N,N′-二苯甲基乙二胺、2-羟乙基胺、双(2-羟乙基)胺、三(2-羟乙基)胺、二苯甲基哌啶、N-苯甲基-对苯乙胺、脱氢枞胺、N,N′-双脱氢枞胺、葡萄糖胺、N-甲基葡萄糖胺、三甲基吡啶、奎宁、喹啉和碱性氨基酸例如赖氨酸和精氨酸。这些阳离子型平衡离子也可以可选地用作阴离子型缓冲剂例如碳酸氢盐的平衡离子。钠通常被用作如上指出的带正电荷的平衡离子。这些盐可以通过本领域技术人员已知的方法来制备。然而，由于钾在待治疗病症和综合征的病因学中的作用，一般不希望使用钾作为平衡离子。具有所需活性的其他多糖包括但不限于硫酸葡聚糖和卡拉胶。在本发明的方法中可以使用其他糖胺聚糖，包括低分子量（LMW）糖胺聚糖、天然来源的糖胺聚糖、生物技术制备的糖胺聚糖、化学改性的糖胺聚糖和合成的糖胺聚糖，以及由戊糖构成的直链阴离子型多糖。

在某些实施方式中，类肝素包含肝素样分子（例如硫酸乙酰肝素）。例如，肝素样分子例如硫酸乙酰肝素是具有与肝素类似的结构的糖胺聚糖，区别在于硫酸乙酰肝素与肝素相比经受较少的聚合，因此与肝素相比具有更多的葡萄糖醛酸和N-乙酰葡萄糖胺。硫酸乙酰肝素含有较少的硫酸基团，因此作为抗凝剂不如肝素有效。肝素以各种形式存在，其特征在于硫酸化程度不同。通常，肝素具有约2kDa至约40kDa的分子量。肝素和硫酸乙酰肝素二者都以含有糖醛酸（葡萄糖醛酸或艾杜糖醛酸）和N-硫酸酯化或N-乙酰化的葡萄糖胺的二糖重复单元为特征。糖残基可以在葡萄糖胺的C-6和C-3位置以及糖醛酸的C-2位置处被进一步O-硫酸酯化。在这类化合物中存在至少32种潜在的独特的二糖单元。在肝素中存在的糖的5个实例是：(1)α-L-艾杜糖醛酸2-硫酸酯；(2)2-脱氧-2-磺氨基-α-D-葡萄糖6-硫酸酯；(3)β-D-葡萄糖醛酸；(4)2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-葡萄糖；和(5)α-L-艾杜糖醛酸。

在一种实施方式中，每mg肝素含有至少130USP单位。肝素通过以单位表示的比抗凝活性来度量；在陈述肝素的活性中，规定了USP单位或国际单位（IU）。当在本文中使用时，“USP单位”是指当与USP参比标准品相比时，在20℃下添加0.2ml1%CaCl₂后，将1.0ml柠檬酸化绵羊血浆的凝血阻止1小时的肝素的量（定义为单位/ml）。当在本文中使用时，“IU”是指在按照未分级肝素的第五国际标准（FifthInternational standard for Unfractionated Heparin）（WHO-5）建立的测定法中有活性的肝素的量（定义为国际单位/ml）（Linhardt,R.J.& Gunay,N.S.（1999）Semin Thromb Hemost25,5-16.）。

在本发明的方法和通过那些方法制备的组合物中使用的特别优选的类肝素包括肝素和戊聚糖多硫酸钠。在本发明的方法和通过那些方法制备的组合物中使用的最特别优选的类肝素是肝素。肝素的优选形式是肝素钠，但是，如上所述可以使用其他平衡离子。在按照本发明的方法制备的组合物中，肝素的量可以高达每单位剂量的组合物约200,000单位至约250,000单位的范围内；可以使用任何中间的肝素量，例如但不限于每单位剂量的组合物5,000单位、10,000单位、15,000单位、20,000单位、25,000单位、30,000单位、35,000单位、40,000单位、45,000单位、50,000单位、55,000单位、60,000单位、65,000单位、70,000单位、75,000单位、80,000单位、85,000单位、90,000单位、95,000单位、100,000单位、110,000单位、120,000单位、130,000单位、140,000单位、150,000单位、160,000单位、170,000单位、180,000单位、190,000单位、210,000单位、220,000单位、230,000单位或240,000单位。

组合物中类肝素的量随着对象、疾病的严重性和过程、对象的健康、对治疗的响应、药物动力学考虑因素例如肝功能和肾功能以及治疗医师的判断而变。因此，可以通过本发明的方法制备每单位剂量包含不同量的肝素的许多组合物。

根据本发明的实践，仅仅作为实例，当类肝素是戊聚糖多硫酸钠时，组合物中类肝素的量可以为每单位剂量约1mg至约1500mg戊聚糖多硫酸钠（例如每单位剂量约100mg至约600mg戊聚糖多硫酸钠）。根据本发明的实践，仅仅作为实例，当类肝素是硫酸乙酰肝素时，组合物中类肝素的量可以为每单位剂量约0.5mg至约10,000mg硫酸乙酰肝素（例如每单位剂量约100mg至约300mg硫酸乙酰肝素）。根据本发明的实践，仅仅作为实例，当类肝素是透明质酸时，组合物中类肝素的量可以为每单位剂量约5mg至约1500mg透明质酸（例如每单位剂量约10mg至约100mg透明质酸）。根据本发明的实践，仅仅作为实例，当类肝素是硫酸软骨素时，组合物中类肝素的量可以为每单位剂量约1mg至约10,000mg硫酸软骨素（例如每单位剂量约100mg至约300mg硫酸软骨素）。根据本发明的实践，仅仅作为实例，当类肝素是肝素钠时，组合物中类肝素的量可以为每单位剂量约10mg至约1000mg肝素钠。

局部麻醉剂通常为钠通道阻断剂，例如但不限于通常被称为“卡因”药物的药物以及其他钠通道阻断剂。在按照本发明的方法制备的组合物中，局部麻醉剂可以是但不限于苯佐卡因、利多卡因、丁卡因、丁哌卡因、可卡因、依替卡因、氟卡胺、甲哌卡因、普拉莫星、丙胺卡因、普鲁卡因、氯普鲁卡因、奥西卡因、丙对卡因、罗哌卡因、达克罗宁、二丁卡因、丙氧卡因、氯二甲苯酚、辛可卡因、地昔伐卡因、二胺卡因、海克卡因、左布比卡因、丙氧卡因、吡咯卡因、利索卡因、罗多卡因及其药学可接受的衍生物和生物电子等排体中的任一种，或其组合。优选地，麻醉剂（例如局部麻醉剂）选自利多卡因、丁哌卡因、苯佐卡因、丁卡因、依替卡因、氟卡胺、丙胺卡因和二丁卡因或其组合。特别优选的局部麻醉剂是利多卡因，例如盐酸利多卡因。当在本文中使用时，局部麻醉剂的指称包括与希望的pH、所使用的缓冲剂和存在的任何平衡离子相容的该局部麻醉剂的所有盐；局部麻醉剂的指称不打算在这些标准之外限制所使用的盐形式或平衡离子。

组合物中局部麻醉剂的量随着对象、疾病的严重性和过程、对象的健康、对治疗的响应、药物动力学考虑因素例如肝功能和肾功能以及治疗医师的判断而变。因此，可以通过本发明的方法制备每单位剂量包含不同量的局部麻醉剂的许多组合物。例如，组合物中麻醉剂的量可以在每单位剂量约10mg至约400mg的范围内。例如，利多卡因的量可以为每单位剂量10mL的1%利多卡因或每单位剂量16mL的2%利多卡因。

在按照本发明的方法制备的组合物中，缓冲剂可以是但不限于碳酸氢盐缓冲剂、Tris（三(羟甲基)氨基甲烷）缓冲剂、MOPS缓冲剂（3-(N-吗啉代)丙磺酸）、HEPES（N-(2-羟乙基)哌嗪-N-(2-乙磺酸)）缓冲剂、ACES（2-[(2-氨基-2-氧代乙基)氨基]乙磺酸）缓冲剂、ADA（N-(2-乙酰胺基)2-亚氨基二乙酸）缓冲剂、AMPSO（3-[(1,1-二甲基-2-羟乙基)氨基]-2-丙磺酸）缓冲剂、BES（N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸）缓冲剂、Bicine（N,N-双(2-羟乙基甘氨酸）缓冲剂、Bis-Tris（双(2-羟乙基)亚氨基-三(羟甲基)甲烷）缓冲剂、CAPS（3-(环己基氨基)-1-丙磺酸）缓冲剂、CAPSO（3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸）缓冲剂、CHES（2-(N-环己基氨基)乙磺酸）缓冲剂、DIPSO（3-[N,N-双(2-羟乙基)氨基]-2-羟基-丙磺酸）缓冲剂、HEPPS（N-(2-羟乙基哌嗪)-N′-(3-丙磺酸)）缓冲剂、HEPPSO（N-(2-羟乙基)哌嗪-N′-(2-羟基丙磺酸)）缓冲剂、MES（2-(N-吗啉代)乙磺酸）缓冲剂、三乙醇胺缓冲剂、咪唑缓冲剂、甘氨酸缓冲剂、乙醇胺缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、MOPSO（3-(N-吗啉代)-2-羟基丙磺酸）缓冲剂、PIPES（哌嗪-N,N′-双(2-乙磺酸)）缓冲剂、POPSO（哌嗪-N,N′-双(2-羟基丙磺酸)）缓冲剂、TAPS（N-三[羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸）缓冲剂、TAPSO（3-[N-三(羟甲基)甲基氨基]-2-羟基-丙磺酸）缓冲剂、TES（N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸）缓冲剂、tricine（N-三(羟甲基)甲基甘氨酸缓冲剂）、2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇缓冲剂和2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲剂或其组合。特别优选的缓冲剂是碳酸氢盐缓冲剂和Tris缓冲剂或其组合。特别优选的碳酸氢盐缓冲剂是碳酸氢钠。

组合物中缓冲剂的量随着对象、疾病的严重性和过程、对象的健康、对治疗的响应、药物动力学考虑因素例如肝功能和肾功能以及治疗医师的判断而变。因此，可以通过本发明的方法制备每单位剂量包含不同量的缓冲剂的许多组合物。例如，当缓冲剂是碳酸氢钠时，碳酸氢钠的量可以为每单位剂量约3mL的8.4%碳酸氢钠。

通过本发明的方法制备的特别优选的组合物可以包含肝素钠作为类肝素、盐酸利多卡因作为局部麻醉剂和碳酸氢钠作为缓冲剂。

通过本发明的方法制备的组合物可以包含一种或多种附加的任选组分。这种附加的任选组分可以包括：

(1)渗透压组分，其提供与人类细胞和血液相容的等渗或接近等渗的溶液；

(2)能够使组合物持留在膀胱上皮表面的化合物，其量足以治疗、改善或预防下泌尿道病症；

(3)抗细菌剂，其量足以治疗、改善或预防下泌尿道病症；

(4)抗真菌剂，其量足以治疗、改善或预防下泌尿道病症；

(5)血管收缩剂，其量足以治疗、改善或预防下泌尿道病症；以及

(6)防腐剂。

当存在时，任选的渗透压组分是盐例如氯化钠，或糖，或者两种以上这些组分的组合。糖可以是单糖例如右旋糖，二糖例如蔗糖或乳糖，多糖例如葡聚糖40、葡聚糖60或淀粉，或糖醇例如甘露糖醇。对于本领域技术人员来说，显然溶液的所有组分都对溶液的摩尔渗透压浓度有贡献，但是为了获得等渗或接近等渗的溶液，应考虑这些组分的贡献以确保添加正确比例的渗透压组分，并且不添加产生高渗溶液的过量渗透压组分。事实上，当组合物如上所述包含肝素钠作为类肝素、盐酸利多卡因作为麻醉剂和碳酸氢钠作为缓冲剂时，来自于肝素钠和碳酸氢钠的钠离子、来自于盐酸利多卡因的氯离子以及来自于碳酸氢钠的碳酸根/碳酸氢根离子的渗透压贡献就已足够，不需要附加的渗透压组分。然而，溶液不一定是等渗的，它可以是低渗、等渗或高渗的，因为膀胱上皮能够耐受大范围的摩尔渗透压浓度。

如果存在抗细菌剂，抗细菌剂可以选自磺胺类、青霉素类、甲氧苄啶加上磺胺甲

唑的组合、喹诺酮类、乌洛托品、呋喃妥因、头孢菌素类、碳青霉烯类、氨基糖苷类、四环素类和大环内酯类。适合的磺胺类包括但不限于磺胺、磺胺嘧啶、磺胺甲唑、磺胺异

唑、磺胺甲二唑、磺胺多辛和乙酰磺胺。适合的青霉素类包括但不限于甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、氯唑西林、双氯西林、氨苄青霉素、阿莫西林、巴氨西林、羧苄青霉素、替卡西林、美洛西林和哌拉西林。适合的喹诺酮类包括但不限于萘啶酸、西诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、司帕沙星、洛美沙星、氟罗沙星、培氟沙星和氨氟沙星。适合的头孢菌素类包括但不限于头孢噻吩、头孢唑啉、头孢氨苄、头孢羟氨苄、头孢孟多、头孢西丁、头孢克洛、头孢呋辛、氯碳头孢、头孢尼西、头孢替坦、头孢雷特、头孢噻肟、头孢泊肟酯、头孢唑肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶和头孢吡肟。适合的碳青霉烯类包括但不限于亚胺培南、美罗培南和氨曲南。适合的氨基糖苷类包括但不限于奈替米星和庆大霉素。适合的四环素类包括但不限于四环素、土霉素、地美环素、米诺环素、多西环素和氯四环素。适合的大环内酯类包括但不限于红霉素、克拉霉素和阿奇霉素。

如果存在抗真菌剂，抗真菌剂可以选自两性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟康唑、咪康唑和氟胞嘧啶。

如果存在血管收缩剂，血管收缩剂可以是肾上腺素。

如果存在能够使组合物持留在膀胱上皮表面的化合物，所述化合物通常是可活化的胶凝剂。可活化的胶凝剂通常是热可逆胶凝剂。热可逆胶凝剂可以选自Pluronics F127凝胶、Lutrol凝胶、N-异丙基丙烯酰胺、甲基丙烯酸乙酯、N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺、1-2%的木葡聚糖溶胶、pluronic和聚丙烯酸的接枝共聚物、pluronic-壳聚糖水凝胶以及[聚乙二醇-聚[乳酸-共-乙醇酸]-聚乙二醇]（PEG-PLGA-PEG）共聚物。

如果存在防腐剂，防腐剂可以选自对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞和苯甲酸；苯甲酸目前正被用在临床上，获得了良好成功。然而，通过本发明的方法制备的组合物通常不需要防腐剂组分，因为组合物被制备和分配在密封的单个单位剂量小瓶中。

如果存在任何这些任选组分，即渗透压组分、能够使组合物持留在膀胱上皮表面的化合物、抗细菌组分、抗真菌化合物、血管收缩剂或防腐剂，它们通常在包含类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂的稳定溶液已被制备后添加。如果使用，这些附加的任选组分的量被选择成使得类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂的溶液保持稳定，并且避免局部麻醉剂的沉淀并获得溶液的最终pH；如上所述最终pH通常为约6.7至约8.3。最适pH为约7.4。

如果需要对组合物进行灭菌，通常通过过滤进行灭菌。其他灭菌方法是本领域已知的。

因此，本发明的一个方面是制备可用于治疗下泌尿道病症的组合物的方法，所述组合物包含类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂，所述方法包括下列步骤：

(1)提供固体形式或液体形式的类肝素；

(2)提供固体形式或液体形式的局部麻醉剂；

(3)向所述固体形式或液体形式的类肝素添加液体缓冲剂；

(4)向所述液体缓冲剂与类肝素的混合物添加所述局部麻醉剂；以及

(5)如果需要，调整所述液体缓冲剂、局部麻醉剂与类肝素的混合物的pH，以便获得约6.7至约8.3的pH而没有所述局部麻醉剂的沉淀。最适pH为约7.4。

正如上面详细描述的，当混合过程从固体形式的类肝素或局部麻醉剂开始时，在混合过程起始时类肝素或局部麻醉剂可以以粉末形式提供。固体形式和液体形式的所有可能的组合对于这种方法来说都是可能的；换句话说，可以使用：(i)均为固体形式的类肝素和局部麻醉剂；(ii)均为液体形式的类肝素和局部麻醉剂；(iii)固体形式的类肝素和液体形式的局部麻醉剂；或(iv)液体形式的类肝素和固体形式的局部麻醉剂。当在本文中使用时，“液体形式”通常是指溶液，例如水性溶液。在另一种可选方式中，如上所述，可以将所有三种组分即类肝素如肝素、局部麻醉剂如利多卡因以及缓冲剂的粉末同时水化，如果利多卡因不沉淀的话。在又一种可选方式中，可以将所有三种组分即类肝素如肝素、局部麻醉剂如利多卡因以及缓冲剂的液体溶液同时混合，只要利多卡因不沉淀即可；例如，当希望的pH更接近于7.0的pH值时，这可以使用更低水平的缓冲剂来进行。

本发明的另一方面是制备可用于治疗下泌尿道病症的组合物的方法，所述组合物包含类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂，所述方法包括下列步骤：

(1)提供固体形式或液体形式的类肝素；

(2)提供固体形式或液体形式的局部麻醉剂；

(3)将所述固体形式或液体形式的类肝素与所述固体形式或液体形式的局部麻醉剂混合；

(4)向所述类肝素与局部麻醉剂的混合物添加液体缓冲剂，以形成液体缓冲剂、类肝素与局部麻醉剂的混合物；以及

(5)如果需要，调整所述液体缓冲剂、局部麻醉剂与类肝素的混合物的pH，以便获得约6.7至约8.3的pH而没有所述局部麻醉剂的沉淀。最适pH为约7.4。

正如上面详细描述的，当混合过程从固体形式的类肝素或局部麻醉剂开始时，在混合过程起始时类肝素或局部麻醉剂可以以粉末形式提供。固体形式和液体形式的所有可能的组合对于这种方法来说都是可能的；换句话说，可以使用：(i)均为固体形式的类肝素和局部麻醉剂；(ii)均为液体形式的类肝素和局部麻醉剂；(iii)固体形式的类肝素和液体形式的局部麻醉剂；或(iv)液体形式的类肝素和固体形式的局部麻醉剂。在另一种可选方式中，正如上面描述的，可以将所有三种组分即类肝素如肝素、局部麻醉剂如利多卡因以及缓冲剂的粉末同时水化，如果利多卡因不沉淀的话。在又一种可选方式中，可以将所有三种组分即类肝素如肝素、局部麻醉剂如利多卡因以及缓冲剂的液体溶液同时混合，只要利多卡因不沉淀即可；例如，当希望的pH更接近于7.0的pH值时，这可以使用更低水平的缓冲剂来进行。

在这些方法中，类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂如上所述。具体来说，优选的类肝素是肝素，优选的局部麻醉剂是盐酸利多卡因形式的利多卡因，并且优选的缓冲剂是碳酸氢钠。

这些方法还可以包括在制备包含类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂的缓冲组合物之后，添加下列一种或多种组分的附加步骤：(i)渗透压组分；(ii)能够使所述组合物持留在膀胱上皮表面的化合物；(iii)抗细菌剂；(iv)抗真菌剂；(v)血管收缩剂；或(vi)防腐剂。

本发明的又一方面是制备可用于通过将组合物滴注到膀胱中来治疗下泌尿道病症的组合物的方法，所述组合物包含含有类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂的混合物，所述方法包括下列步骤：

(1)提供液体形式的类肝素；

(2)提供液体形式的局部麻醉剂；

(3)提供液体形式的缓冲剂；

(4)将所述类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂同时进行混合，避免所述局部麻醉剂的沉淀；以及

(5)如果需要，调整液体缓冲剂、液体局部麻醉剂与液体类肝素的混合物的pH，以便获得约6.7至约8.3的pH而没有所述局部麻醉剂的沉淀。

用于类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂的优选组分如上所述。

本发明的又一方面是包含类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂的预混合的液体组合物，其稳定至少三个月而没有局部麻醉剂的沉淀。组合物通常通过如上所述的本发明的方法来制备。通常，在这种组合物中，类肝素是肝素，局部麻醉剂是利多卡因，并且缓冲剂是碳酸氢钠。这种组合物的pH通常为约6.7至约8.3。优选地，这种组合物的pH为约7.0至约7.8。更优选地，这种组合物的pH为约7.4。

本发明的组合物适合于治疗、改善或预防选自下列的下泌尿道病症：女性中的细菌性膀胱炎、真菌/酵母性膀胱炎、外阴前庭炎、外阴痛、性交疼痛、尿道综合征和子宫内膜异位；男性中的前列腺炎和慢性盆腔疼痛综合征；以及男性或女性中的辐射诱导的膀胱炎、化疗诱导的膀胱炎、间质性膀胱炎和膀胱过度活动症。本发明的组合物在治疗间质性膀胱炎中特别有用。

当在本文中使用时，术语“治疗、改善或预防”是指组合物所施用的对象的下泌尿道病症的任何主观或客观的可检测的改进。例如，术语“治疗、改善或预防”可以是指通过PORIS量表、PUF量表或这些量表的任何组分所确定的改进，疼痛的减轻，尿频的减轻，尿急的减轻，对施用麻醉剂的需要的减少，尿失禁的减轻，尿道上皮对钾的异常透过性降低，或大于一种的这些参数的改进。术语“治疗、改善或预防”不陈述或暗示隐伏的下泌尿道病症的治愈。

本发明通过下面的实施例进行示例说明。包含该实施例仅仅是出于说明目的，不打算对本发明进行限制。

实施例

进行下面的实验以测试按照本发明制备的组合物的功效，并将其与通过现有方法制备的组合物进行比较。

溶液1如下制备：将可商购的肝素、利多卡因（被FDA批准用于人类使用）如下进行混合：将含有50,000单位肝素的5ml肝素溶液、5ml4%的利多卡因（200mg）和2ml8.4%的碳酸氢钠（168mg）进行混合，混合的方式为将肝素与碳酸氢盐加在一起，然后最后添加利多卡因，使最终pH为7.4。在2-3分钟后溶液变混浊，表明利多卡因从溶液中损失。

溶液2如下制备：将粉末状肝素钠（50,000单位）和粉末状盐酸利多卡因（200mg）溶解在总共13ml水中，然后加入2ml8.4%的碳酸氢钠（168mg），得到7.4的最终pH。将溶液除菌过滤并置于带塞子的小瓶中，保持清澈和稳定。然而，如果第一个步骤是在不存在肝素的条件下将液体利多卡因与缓冲剂混合，则溶液变混浊，表明利多卡因从溶液中损失。

为了在临床上测试这两种不同溶液（上面的溶液1和2），将它们各自给予被诊断患有间质性膀胱炎的5位不同患者。患者以盲方式在不同天接受每种溶液，然后要求对溶液进行比较。所有5位患者发现溶液2比溶液1更有效至少50%。

这些结果表明了通过本发明的方法制备的组合物的改进的功效，其中局部麻醉剂具有改进的生物利用度，在该情形下，所述局部麻醉剂是利多卡因。

证明了可以在高于pH8.3的pH值下调配溶液并避免利多卡因的沉淀。

在临床上，患者对所测试的三种pH反映良好：一种是7.06，另一种是7.45，又一种是7.72。此外，当从混合粉末状肝素和利多卡因开始，然后相应地用tris或碳酸氢钠缓冲时，利多卡因在所有pH下都保持在溶液中。

本发明的优点

本发明提供了制备用于治疗下泌尿道病症的组合物的改进的方法，所述组合物包含类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂，通常为肝素、利多卡因和碳酸氢钠。通过本发明的方法制备的组合物稳定三个月以上，并且不经历局部麻醉剂的沉淀。因此，它们保留了功效并且局部麻醉剂保留了生物利用度，这与以前可用的组合物相比是一种改进。

本发明的组合物作为旨在用于医学应用、特别是治疗下泌尿道疾病和病症的组合物，具有工业实用性。本发明的方法对于用于治疗下泌尿道疾病和病症的药物的制备，具有工业实用性。

对于值的范围来说，本发明涵盖了所述范围的上限与下限之间至少为下限单位的十分之一的每个居间的值，除非上下文明确表明不是如此。此外，本发明涵盖了任何其他陈述的居间值和范围，包括所述范围的上限和下限中的任一个或两者，除非从所陈述的范围内明确排除。

除非另有定义，否则在本文中使用的所有技术和科学术语的含义为本发明所属技术领域中的普通技术人员所通常理解的含义。本领域普通技术人员也将认识到，与本文所描述的相似或等同的任何方法和材料，也可用于实践或试验本发明。

提供了本文中讨论的公布和专利，仅仅是因为它们的公开早于本申请的提交日。在这里决不能被解释为承认本发明不能利用先有发明而有资格在日期上先于这样的公布。此外，提供的公布日期可能不同于真实的公布日期，其可能需要独立地验证。

引用的所有出版物在此以其全文引为参考，包括所有出版的专利、专利申请和文献参考，以及已合并在那些出版的文件中的出版物。然而，就在此引为参考的任何出版物引用待公布的信息来说，本申请人不承认在本申请的提交日之后公布的任何这样的信息为现有技术。

当在本说明书和权利要求书中使用时，单数形式包括复数形式。例如，不带具体数量指称的术语包括复数指称物，除非内容明确说明不是如此。此外，在一系列要素之前的术语“至少”应该被理解为指称所述系列中的每个要素。可以在缺乏本文中没有具体公开的任何要素、限制的情况下适当地实践本文中示例性描述的发明。因此，例如术语“包含”、“包括”、“含有”等，应该被扩展性而非限制性地理解。此外，本文中使用的术语和表述作为描述性而非限制性术语使用，并且在这样的术语和表述的使用中不打算排除将来示出并描述的任何等同物或其任何部分，并且应该认识到，在要求保护的发明的范围内可以做出各种修改。因此，应该理解，尽管已通过优选实施方式和任选特征具体公开了本发明，但本领域技术人员可以对本文公开的发明进行修改和改变，并且这样的修改和改变被认为是在本文公开的发明的范围之内。在本文中对本发明进行了广义和一般性描述。落于属级公开内容的范围之内的每个较狭窄的种级和亚属级分组，也形成这些发明的一部分。这包括每个发明的属级描述，其前提或负限制是从所述属中移除任何主题内容，不论被删除的材料是否具体存在于其中。此外，当发明的特征或方面根据Markush组进行描述时，本领域技术人员将会认识到，本发明因此也按照所述Markush组中的任意个体成员或成员的亚组进行描述。还应该理解，上面的描述旨在说明性而不是限制性的。在查看上面的描述后，许多实施方式对于本领域技术人员来说是显而易见的。因此，本发明的范围不应根据上面的描述来确定，而是应根据权利要求书以及这样的权利要求书有权要求的等同物的全部范围来确定。本领域技术人员仅仅利用常规实验就能认识到或能够确定所描述的发明的特定实施方式的许多等同物。权利要求书意欲涵盖这样的等同物。

Claims (88)

1.制备可用于通过将组合物滴注到膀胱中来治疗下泌尿道病症的组合物的方法，所述组合物包含含有类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂的混合物，所述方法包括下列步骤：

(a)提供固体形式或液体形式的类肝素；

(b)提供固体形式或液体形式的局部麻醉剂；

(c)向所述固体形式或液体形式的类肝素添加液体缓冲剂；

(d)向所述液体缓冲剂与类肝素的混合物添加所述局部麻醉剂；以及

(e)如果需要，调整所述液体缓冲剂、局部麻醉剂与类肝素的混合物的pH，以便获得约6.7至约8.3的pH而没有所述局部麻醉剂的沉淀。

2.权利要求1的方法，其中所述类肝素选自肝素、硫酸软骨素、硫酸乙酰肝素、透明质酸、硫酸角质素、硫酸皮肤素、透明质烷和戊聚糖多硫酸钠。

3.权利要求2的方法，其中所述类肝素选自肝素和戊聚糖多硫酸钠。

4.权利要求3的方法，其中所述类肝素是肝素。

5.权利要求4的方法，其中所述肝素是肝素钠。

6.权利要求4的方法，其中所述肝素具有约8,000道尔顿至约40,000道尔顿的分子量。

7.权利要求4的方法，其中所述肝素具有2,000道尔顿至约8,000道尔顿的分子量。

8.权利要求3的方法，其中所述类肝素是戊聚糖多硫酸钠。

9.权利要求1的方法，其中所述局部麻醉剂选自苯佐卡因、利多卡因、丁卡因、丁哌卡因、可卡因、依替卡因、氟卡胺、甲哌卡因、普拉莫星、丙胺卡因、普鲁卡因、氯普鲁卡因、奥西卡因、丙对卡因、罗哌卡因、达克罗宁、二丁卡因、丙氧卡因、氯二甲苯酚、辛可卡因、地昔伐卡因、二胺卡因、海克卡因、左布比卡因、丙氧卡因、吡咯卡因、利索卡因、罗多卡因及其药学可接受的衍生物和生物电子等排体，以及它们的组合。

10.权利要求9的方法，其中所述局部麻醉剂选自利多卡因、丁哌卡因、苯佐卡因、丁卡因、依替卡因、氟卡胺、丙胺卡因和二丁卡因，及其组合。

11.权利要求10的方法，其中所述局部麻醉剂是利多卡因。

12.权利要求11的方法，其中所述利多卡因是盐酸利多卡因。

13.权利要求1的方法，其中所述缓冲剂选自碳酸氢盐缓冲剂、Tris（三(羟甲基)氨基甲烷）缓冲剂、MOPS缓冲剂（3-(N-吗啉代)丙磺酸）、HEPES（N-(2-羟乙基)哌嗪-N-(2-乙磺酸)）缓冲剂、ACES（2-[(2-氨基-2-氧代乙基)氨基]乙磺酸）缓冲剂、ADA（N-(2-乙酰胺基)2-亚氨基二乙酸）缓冲剂、AMPSO（3-[(1,1-二甲基-2-羟乙基)氨基]-2-丙磺酸）缓冲剂、BES（N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸）缓冲剂、Bicine（N,N-双(2-羟乙基甘氨酸）缓冲剂、Bis-Tris（双-(2-羟乙基)亚氨基-三(羟甲基)甲烷）缓冲剂、CAPS（3-(环己基氨基)-1-丙磺酸）缓冲剂、CAPSO（3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸）缓冲剂、CHES（2-(N-环己基氨基)乙磺酸）缓冲剂、DIPSO（3-[N,N-双(2-羟乙基)氨基]-2-羟基-丙磺酸）缓冲剂、HEPPS（N-(2-羟乙基哌嗪)-N′-(3-丙磺酸)）缓冲剂、HEPPSO（N-(2-羟乙基)哌嗪-N′-(2-羟基丙磺酸)）缓冲剂、MES（2-(N-吗啉代)乙磺酸）缓冲剂、三乙醇胺缓冲剂、咪唑缓冲剂、甘氨酸缓冲剂、乙醇胺缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、MOPSO（3-(N-吗啉代)-2-羟基丙磺酸）缓冲剂、PIPES（哌嗪-N,N′-双(2-乙磺酸)）缓冲剂、POPSO（哌嗪-N,N′-双(2-羟基丙磺酸)）缓冲剂、TAPS（N-三[羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸）缓冲剂、TAPSO（3-[N-三(羟甲基)甲基氨基]-2-羟基-丙磺酸）缓冲剂、TES（N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸）缓冲剂、tricine（N-三(羟甲基)甲基甘氨酸缓冲剂）、2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇缓冲剂、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲剂及其组合。

14.权利要求13的方法，其中所述缓冲剂选自碳酸氢盐缓冲剂、Tris缓冲剂及其组合。

15.权利要求14的方法，其中所述缓冲剂是碳酸氢盐缓冲剂。

16.权利要求15的方法，其中所述缓冲剂是碳酸氢钠。

17.权利要求13的方法，其中所述缓冲剂是Tris缓冲剂。

18.权利要求1的方法，其中所述方法还包括在制备包含所述类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂的缓冲组合物之后，添加下列一种或多种组分的步骤：(i)渗透压组分；(ii)能够使所述组合物持留在膀胱上皮表面的化合物；(iii)抗细菌剂；(iv)抗真菌剂；(v)血管收缩剂；或(vi)防腐剂。

19.权利要求1的方法，其中所述类肝素和局部麻醉剂两者以固体形式提供。

20.权利要求19的方法，其中所述类肝素和局部麻醉剂两者以粉末形式提供。

21.权利要求1的方法，其中所述类肝素和局部麻醉剂两者以液体形式提供。

22.权利要求1的方法，其中所述类肝素以固体形式提供，并且所述局部麻醉剂以液体形式提供。

23.权利要求22的方法，其中所述类肝素以粉末形式提供。

24.权利要求1的方法，其中所述类肝素以液体形式提供，并且所述局部麻醉剂以固体形式提供。

25.权利要求24的方法，其中所述局部麻醉剂以粉末形式提供。

26.权利要求1的方法，其中所述类肝素是肝素，所述局部麻醉剂是利多卡因，并且所述缓冲剂是碳酸氢盐缓冲剂。

27.权利要求26的方法，其中所述肝素是肝素钠，所述局部麻醉剂是盐酸利多卡因，并且所述碳酸氢盐缓冲剂是碳酸氢钠。

28.权利要求1的方法，其中获得的pH为约7.0至约7.8。

29.权利要求1的方法，其中获得的pH为约7.4。

30.权利要求1的方法，其中所述类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂最初以固体形式提供，并被同时水化。

31.制备可用于通过将组合物滴注到膀胱中来治疗下泌尿道病症的组合物的方法，所述组合物包含含有类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂的混合物，所述方法包括下列步骤：

(a)提供固体形式或液体形式的类肝素；

(b)提供固体形式或液体形式的局部麻醉剂；

(c)将所述固体形式或液体形式的类肝素与所述固体形式或液体形式的局部麻醉剂混合；

(d)向所述类肝素与局部麻醉剂的混合物添加液体缓冲剂，以形成液体缓冲剂、类肝素与局部麻醉剂的混合物；以及

(e)如果需要，调整所述液体缓冲剂、局部麻醉剂与类肝素的混合物的pH，以便获得约6.7至约8.3的pH而没有所述局部麻醉剂的沉淀。

32.权利要求31的方法，其中所述类肝素选自肝素、硫酸软骨素、硫酸乙酰肝素、透明质酸、硫酸角质素、硫酸皮肤素、透明质烷和戊聚糖多硫酸钠。

33.权利要求32的方法，其中所述类肝素选自肝素和戊聚糖多硫酸钠。

34.权利要求33的方法，其中所述类肝素是肝素。

35.权利要求31的方法，其中所述肝素是肝素钠。

36.权利要求34的方法，其中所述肝素具有约8,000道尔顿至约40,000道尔顿的分子量。

37.权利要求34的方法，其中所述肝素具有2,000道尔顿至约8,000道尔顿的分子量。

38.权利要求32的方法，其中所述类肝素是戊聚糖多硫酸钠。

39.权利要求31的方法，其中所述局部麻醉剂选自苯佐卡因、利多卡因、丁卡因、丁哌卡因、可卡因、依替卡因、氟卡胺、甲哌卡因、普拉莫星、丙胺卡因、普鲁卡因、氯普鲁卡因、奥西卡因、丙对卡因、罗哌卡因、达克罗宁、二丁卡因、丙氧卡因、氯二甲苯酚、辛可卡因、地昔伐卡因、二胺卡因、海克卡因、左布比卡因、丙氧卡因、吡咯卡因、利索卡因、罗多卡因及其药学可接受的衍生物和生物电子等排体，以及它们的组合。

40.权利要求39的方法，其中所述局部麻醉剂选自利多卡因、丁哌卡因、苯佐卡因、丁卡因、依替卡因、氟卡胺、丙胺卡因和二丁卡因，及其组合。

41.权利要求40的方法，其中所述局部麻醉剂是利多卡因。

42.权利要求41的方法，其中所述利多卡因是盐酸利多卡因。

43.权利要求31的方法，其中所述缓冲剂选自碳酸氢盐缓冲剂、Tris（三(羟甲基)氨基甲烷）缓冲剂、MOPS缓冲剂（3-(N-吗啉代)丙磺酸）、HEPES（N-(2-羟乙基)哌嗪-N-(2-乙磺酸)）缓冲剂、ACES（2-[(2-氨基-2-氧代乙基)氨基]乙磺酸）缓冲剂、ADA（N-(2-乙酰胺基)2-亚氨基二乙酸）缓冲剂、AMPSO（3-[(1,1-二甲基-2-羟乙基)氨基]-2-丙磺酸）缓冲剂、BES（N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸）缓冲剂、Bicine（N,N-双(2-羟乙基甘氨酸）缓冲剂、Bis-Tris（双-(2-羟乙基)亚氨基-三(羟甲基)甲烷）缓冲剂、CAPS（3-(环己基氨基)-1-丙磺酸）缓冲剂、CAPSO（3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸）缓冲剂、CHES（2-(N-环己基氨基)乙磺酸）缓冲剂、DIPSO（3-[N,N-双(2-羟乙基)氨基]-2-羟基-丙磺酸）缓冲剂、HEPPS（N-(2-羟乙基哌嗪)-N′-(3-丙磺酸)）缓冲剂、HEPPSO（N-(2-羟乙基)哌嗪-N′-(2-羟基丙磺酸)）缓冲剂、MES（2-(N-吗啉代)乙磺酸）缓冲剂、三乙醇胺缓冲剂、咪唑缓冲剂、甘氨酸缓冲剂、乙醇胺缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、MOPSO（3-(N-吗啉代)-2-羟基丙磺酸）缓冲剂、PIPES（哌嗪-N,N′-双(2-乙磺酸)）缓冲剂、POPSO（哌嗪-N,N′-双(2-羟基丙磺酸)）缓冲剂、TAPS（N-三[羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸）缓冲剂、TAPSO（3-[N-三(羟甲基)甲基氨基]-2-羟基-丙磺酸）缓冲剂、TES（N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸）缓冲剂、tricine（N-三(羟甲基)甲基甘氨酸缓冲剂）、2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇缓冲剂、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲剂及其组合。

44.权利要求43的方法，其中所述缓冲剂选自碳酸氢盐缓冲剂、Tris缓冲剂及其组合。

45.权利要求44的方法，其中所述缓冲剂是碳酸氢盐缓冲剂。

46.权利要求44的方法，其中所述缓冲剂是碳酸氢钠。

47.权利要求44的方法，其中所述缓冲剂是Tris缓冲剂。

48.权利要求31的方法，其中所述方法还包括在制备包含所述类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂的缓冲组合物之后，添加下列一种或多种组分的步骤：(i)渗透压组分；(ii)能够使所述组合物持留在膀胱上皮表面的化合物；(iii)抗细菌剂；(iv)抗真菌剂；(v)血管收缩剂；或(vi)防腐剂。

49.权利要求31的方法，其中所述类肝素和局部麻醉剂两者以固体形式提供。

50.权利要求49的方法，其中所述类肝素和局部麻醉剂两者以粉末形式提供。

51.权利要求31的方法，其中所述类肝素和局部麻醉剂两者以液体形式提供。

52.权利要求31的方法，其中所述类肝素以固体形式提供，并且所述局部麻醉剂以液体形式提供。

53.权利要求52的方法，其中所述类肝素以粉末形式提供。

54.权利要求31的方法，其中所述类肝素以液体形式提供，并且所述局部麻醉剂以固体形式提供。

55.权利要求54的方法，其中所述局部麻醉剂以粉末形式提供。

56.权利要求31的方法，其中所述类肝素是肝素，所述局部麻醉剂是利多卡因，并且所述缓冲剂是碳酸氢盐缓冲剂。

57.权利要求56的方法，其中所述肝素是肝素钠，所述局部麻醉剂是盐酸利多卡因，并且所述碳酸氢盐缓冲剂是碳酸氢钠。

58.权利要求29的方法，其中获得的pH为约7.4。

59.制备可用于通过将组合物滴注到膀胱中来治疗下泌尿道病症的组合物的方法，所述组合物包含含有类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂的混合物，所述方法包括下列步骤：

(a)提供液体形式的类肝素；

(b)提供液体形式的局部麻醉剂；

(c)提供液体形式的缓冲剂；

(d)将所述类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂同时进行混合，避免所述局部麻醉剂的沉淀；以及

(e)如果需要，调整液体缓冲剂、液体局部麻醉剂与液体类肝素的混合物的pH，以便获得约6.7至约8.3的pH而没有所述局部麻醉剂的沉淀。

60.权利要求59的方法，其中所述类肝素是肝素，所述局部麻醉剂是利多卡因，并且所述缓冲剂是碳酸氢钠。

61.权利要求59的方法，其中获得的pH为约6.8至约7.2，并且需要的缓冲剂的量减少。

62.包含类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂的预混合的液体组合物，其稳定至少三个月而没有所述局部麻醉剂的沉淀。

63.权利要求62的组合物，其中所述组合物通过包括下列步骤的方法来制备：

(a)提供固体形式或液体形式的类肝素；

(b)提供固体形式或液体形式的局部麻醉剂；

(c)向所述固体形式或液体形式的类肝素添加液体缓冲剂；

(d)向所述液体缓冲剂与类肝素的混合物添加所述局部麻醉剂；以及

(e)如果需要，调整所述液体缓冲剂、局部麻醉剂与类肝素的混合物的pH，以便获得约6.8至约8.3的pH而没有所述局部麻醉剂的沉淀。

64.权利要求62的组合物，其中所述组合物通过包括下列步骤的方法来制备：

(a)提供固体形式或液体形式的类肝素；

(b)提供固体形式或液体形式的局部麻醉剂；

(c)将所述固体形式或液体形式的类肝素与所述固体形式或液体形式的局部麻醉剂混合；

(d)向所述类肝素与局部麻醉剂的混合物添加液体缓冲剂，以形成液体缓冲剂、类肝素与局部麻醉剂的混合物；以及

(e)如果需要，调整所述液体缓冲剂、局部麻醉剂与类肝素的混合物的pH，以便获得约6.8至约8.3的pH而没有所述局部麻醉剂的沉淀。

65.权利要求62的组合物，其中所述组合物通过包括下列步骤的方法来制备：

(a)提供液体形式的类肝素；

(b)提供液体形式的局部麻醉剂；

(c)提供液体形式的缓冲剂；

(d)将所述类肝素、局部麻醉剂和缓冲剂同时进行混合，避免所述局部麻醉剂的沉淀；以及

(e)如果需要，调整液体缓冲剂、液体局部麻醉剂与液体类肝素的混合物的pH，以便获得约6.7至约8.3的pH而没有所述局部麻醉剂的沉淀。

66.权利要求62的组合物，其中所述类肝素选自肝素、硫酸软骨素、硫酸乙酰肝素、透明质酸、硫酸角质素、硫酸皮肤素、透明质烷和戊聚糖多硫酸钠。

67.权利要求66的组合物，其中所述类肝素选自肝素和戊聚糖多硫酸钠。

68.权利要求67的组合物，其中所述类肝素是肝素。

69.权利要求68的组合物，其中所述肝素是肝素钠。

70.权利要求68的组合物，其中所述肝素具有约8,000道尔顿至约40,000道尔顿的分子量。

71.权利要求68的组合物，其中所述肝素具有2,000道尔顿至约8,000道尔顿的分子量。

72.权利要求67的组合物，其中所述类肝素是戊聚糖多硫酸钠。

73.权利要求62的组合物，其中所述局部麻醉剂选自苯佐卡因、利多卡因、丁卡因、丁哌卡因、可卡因、依替卡因、氟卡胺、甲哌卡因、普拉莫星、丙胺卡因、普鲁卡因、氯普鲁卡因、奥西卡因、丙对卡因、罗哌卡因、达克罗宁、二丁卡因、丙氧卡因、氯二甲苯酚、辛可卡因、地昔伐卡因、二胺卡因、海克卡因、左布比卡因、丙氧卡因、吡咯卡因、利索卡因、罗多卡因及其药学可接受的衍生物和生物电子等排体，以及它们的组合。

74.权利要求73的组合物，其中所述局部麻醉剂选自利多卡因、丁哌卡因、苯佐卡因、丁卡因、依替卡因、氟卡胺、丙胺卡因和二丁卡因，及其组合。

75.权利要求74的组合物，其中所述局部麻醉剂是利多卡因。

76.权利要求75的组合物，其中所述利多卡因是盐酸利多卡因。

77.权利要求63的组合物，其中所述缓冲剂选自碳酸氢盐缓冲剂、Tris（三(羟甲基)氨基甲烷）缓冲剂、MOPS缓冲剂（3-(N-吗啉代)丙磺酸）、HEPES（N-(2-羟乙基)哌嗪-N-(2-乙磺酸)）缓冲剂、ACES（2-[(2-氨基-2-氧代乙基)氨基]乙磺酸）缓冲剂、ADA（N-(2-乙酰胺基)2-亚氨基二乙酸）缓冲剂、AMPSO（3-[(1,1-二甲基-2-羟乙基)氨基]-2-丙磺酸）缓冲剂、BES（N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸）缓冲剂、Bicine（N,N-双(2-羟乙基甘氨酸）缓冲剂、Bis-Tris（双-(2-羟乙基)亚氨基-三(羟甲基)甲烷）缓冲剂、CAPS（3-(环己基氨基)-1-丙磺酸）缓冲剂、CAPSO（3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸）缓冲剂、CHES（2-(N-环己基氨基)乙磺酸）缓冲剂、DIPSO（3-[N,N-双(2-羟乙基)氨基]-2-羟基-丙磺酸）缓冲剂、HEPPS（N-(2-羟乙基哌嗪)-N′-(3-丙磺酸)）缓冲剂、HEPPSO（N-(2-羟乙基)哌嗪-N′-(2-羟基丙磺酸)）缓冲剂、MES（2-(N-吗啉代)乙磺酸）缓冲剂、三乙醇胺缓冲剂、咪唑缓冲剂、甘氨酸缓冲剂、乙醇胺缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、MOPSO（3-(N-吗啉代)-2-羟基丙磺酸）缓冲剂、PIPES（哌嗪-N,N′-双(2-乙磺酸)）缓冲剂、POPSO（哌嗪-N,N′-双(2-羟基丙磺酸)）缓冲剂、TAPS（N-三[羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸）缓冲剂、TAPSO（3-[N-三(羟甲基)甲基氨基]-2-羟基-丙磺酸）缓冲剂、TES（N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸）缓冲剂、tricine（N-三(羟甲基)甲基甘氨酸缓冲剂）、2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇缓冲剂、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲剂及其组合。

78.权利要求77的组合物，其中所述缓冲剂选自碳酸氢盐缓冲剂、Tris缓冲剂及其组合。

79.权利要求78的组合物，其中所述缓冲剂是碳酸氢盐缓冲剂。

80.权利要求79的组合物，其中所述缓冲剂是碳酸氢钠。

81.权利要求78的组合物，其中所述缓冲剂是Tris缓冲剂。

82.权利要求63的组合物，其中所述组合物还包含下列一种或多种组分：(i)渗透压组分；(ii)能够使所述组合物持留在膀胱上皮表面的化合物；(iii)抗细菌剂；(iv)抗真菌剂；(v)血管收缩剂；或(vi)防腐剂。

83.权利要求63的组合物，其中所述类肝素是肝素，所述局部麻醉剂是利多卡因，并且所述缓冲剂是碳酸氢盐缓冲剂。

84.权利要求83的组合物，其中所述肝素是肝素钠，所述局部麻醉剂是盐酸利多卡因，并且所述碳酸氢盐缓冲剂是碳酸氢钠。

85.权利要求63的组合物，其中所述组合物适合于治疗、改善或预防选自下列的下泌尿道病症：女性中的细菌性膀胱炎、真菌/酵母性膀胱炎、外阴前庭炎、外阴痛、性交疼痛、尿道综合征和子宫内膜异位；男性中的前列腺炎和慢性盆腔疼痛综合征；以及男性或女性中的辐射诱导的膀胱炎、化疗诱导的膀胱炎、间质性膀胱炎和膀胱过度活动症。

86.权利要求85的组合物，其中所述下泌尿道病症是间质性膀胱炎。

87.权利要求63的组合物，其中所述组合物的pH为约7.0至约7.8。

88.权利要求87的组合物，其中所述组合物的pH为约7.4。