CN103739675A - 草莓镶脉病毒抗体及其抗原多肽、免疫原和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种草莓镶脉病毒抗体及其抗原多肽、免疫原和应用。所述抗原多肽为多肽B，多肽B的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；所述免疫原由所述抗原多肽和与其偶联的载体蛋白组成；所述草莓镶脉病毒抗体为抗体B，抗体B由含有多肽B的所述免疫原制备获得；所述应用为一种检测草莓镶脉病毒的试纸条或ELISA检测试剂盒。与现有技术相比，本发明的草莓镶脉病毒抗体能特异识别草莓镶脉病毒；试纸条和ELISA检测试剂盒制作简单，特异性强，灵敏性高。
Description
本申请是申请号为“201310020448.5”，申请日为“2013年1月18日”，名称为“一种草莓镶脉病毒抗体及其抗原多肽、免疫原和应用”的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明属于病毒免疫学检测及技术领域，尤其涉及一种草莓镶脉病毒抗体及其抗原多肽、免疫原和应用。
背景技术
草莓长期靠匍匐茎繁殖，易形成病毒病感染。多表现为斑驳、黄边、皱叶、镶脉等类型。草莓病毒病给草莓生产造成严重的经济损失，一般可使草莓减产高达20％～30％，并且使浆果的质量下降，果实变小，商品性变差。
草莓镶脉病病毒英文名称为Strawberry vein banding virus，简称SVBV，SVBV分类上属花椰菜花叶病毒科、花椰菜花叶病毒属，是一种粒子等轴状的双链DN病毒。它是我国草莓主栽区的主要感染病毒之一，单独侵染时症状不明显，复合侵染后叶脉皱缩，叶片扭曲，同时沿叶脉形成黄白色或紫色病斑，植株极度矮化，匍匐茎发生减少。SVBV以半持久性方式通过蚜虫或嫁接传播，在栽培品种上的带毒率可达21%，已成为危害我国草莓生产的4中主要病毒之一。
SVBV病毒粒子呈球形，大小约45-50nm。基因组长度约为8kb，包括7个基因开放阅读框（ORF），其中ORF IV编码外壳蛋白，Pappu等和隋春都对SVBV的外壳蛋白设计PCR引物，检测了不同地区草莓中的SVBV，结果表明外壳蛋白在SVBV中的保守性较好，不同地区中SVBV病毒的外壳蛋白基因仅存在个别位点的变异。
目前对草莓镶脉病毒的鉴定方法有病毒指示植物鉴定法、电子显微镜镜检法和多聚酶链式反应（PCR）技术等，但上述方法通常实验耗时长，步骤复杂，同时检测需要配备昂贵的检测仪器，难以得到大范围的应用和推广。
胶体金试纸检测技术是一项近年快速发展的高通量技术，它的原理是植物汁液（由加样孔滴入），经样品垫过滤处理后，样品病毒蛋白与标记物垫上的显色标记物发生免疫反应，然后层析到测试线（T线）发生特异性免疫反应，根据是否显色来判断样品是否感染病毒；未反应的显色标记蛋白复合物与控制线（C线）反应显色，确认试纸有效，残液被吸水垫吸收。反应实质为特异性免疫结合反应，胶体金（红色）为反应指示物。
胶体金免疫层析试纸条最大的优点在于检测成本低，操作极为简便，便于大规模推广。目前，国内已在玉米细菌性枯萎病、番茄环斑病毒、烟草环斑病毒、马铃薯X病毒和Y病毒的检测中成功应用，并取得了很好的效果，但在草莓上还未见相关应用的报道，且没有相关的快速检测试剂的研发。
发明内容
本发明提供了一种抗原多肽，利用该抗原多肽获得的多克隆抗体能特异灵敏地识别草莓镶脉病毒（SVBV）。
一种抗原多肽，为多肽A或多肽B，其中多肽A的氨基酸序列如SEQID No.1所示，多肽B的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
所述抗原多肽是以草莓镶脉病毒的外壳蛋白为靶蛋白，根据该外壳蛋白上的两个抗原优势表位设计合成的。其中多肽A对应了SVBV外壳蛋白N端（2-15）区域，多肽B对应了SVBV外壳蛋白C端（455-468）区域。
本发明还提供了一种免疫原，由所述抗原多肽和与其偶联的载体蛋白组成。其中，所述载体蛋白可选牛血清白蛋白、血蓝蛋白或鸡卵白蛋白。优选牛血清白蛋白。
本发明还提供了一种草莓镶脉病毒抗体，为抗体A或抗体B，其中抗体A由含有多肽A的所述免疫原制备获得，抗体B由含有多肽B的所述免疫原制备获得。
将所述免疫原与佐剂混合并充分乳化后，进行动物免疫；获取免疫动物的抗血清，从抗血清中分离纯化获得所述草莓镶脉病毒抗体。该草莓镶脉病毒抗体能特异识别所述抗原多肽，即抗体A特异性识别多肽A，抗体B特异性识别多肽B。
获得所述草莓镶脉病毒抗体后，采用ELISA法测定其效价、反应特异性和敏感性。经间接ELISA检测，抗体A和抗体B都具有较好的特异性和灵敏度，因此可用于草莓镶脉病毒的检测。
从而，本发明提供了一种检测草莓镶脉病毒的试纸条，包括样品垫、标记物垫、反应膜和吸样垫，所述标记物垫包被有胶体金标记或酶标记的抗体A，所述反应膜包被有抗体B；或所述标记物垫包被有胶体金标记或酶标记的抗体B，所述反应膜包被有抗体A。
所述反应膜通常是硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；所述标记物垫通常是玻璃纤维膜。所述试纸条还可装入塑料卡中制成检测卡。由于抗体A和抗体B分别识别SVBV外壳蛋白的不同抗原决定簇，因此可通过双抗体夹心法，利用所述试纸条对SVBV进行检测。
本发明还提供了一种含有所述草莓镶脉病毒抗体的检测试剂盒。
所述检测试剂盒优选为ELISA检测试剂盒。当采用双抗夹心法进行检测时，该ELISA检测试剂盒同时含有抗体A和抗体B，并以抗体A为包被抗体，以抗体B为检测抗体；或以抗体B为包被抗体，以抗体A为检测抗体。
当采用间接ELISA法进行检测时，该ELISA检测试剂盒含有抗体A或抗体B，并以抗体A或抗体B为一抗，以能特异识别抗体A或抗体B的酶标抗抗体为二抗。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
（1）本发明的草莓镶脉病毒抗体能特异性识别草莓镶脉病毒外壳蛋白，可准确检测样品中草莓镶脉病毒的水平，具有高特异性、高敏感性的特点；
（2）本发明的试纸条和检测试剂盒制作成本低，能简便快速地对草莓镶脉病毒进行检测，可加以大规模推广。
附图说明
图1为实施例2中部分间接ELISA检测结果图；
图2为本发明胶体金检测试纸条的结构示意图。
具体实施方式
实施例1 草莓镶脉病病毒抗体的制备
（1）抗原免疫
分析研究草莓镶脉病病毒外壳蛋白的序列，选取两个抗原优势表位，采用固相合成法合成了两种多肽，其氨基酸序列分别如下：
多肽A：SSRRERLEQLFEEDC；多肽A的前14个氨基酸与SVBV外壳蛋白N端（2-15）氨基酸相同，为了便于与载体蛋白交联，在多肽A的C端最末端添加了一个半胱氨酸C；
多肽B：CESSSDESDDSTDLE；多肽B的后14个氨基酸与SVBV外壳蛋白C端（455-468）氨基酸相同，为了便于与载体蛋白交联，在多肽B的N端添加了一个半胱氨酸C；
将多肽A和多肽B分别与牛血清白蛋白（BSA）进行交联（戊二醛法），获得免疫原；将免疫原与弗氏完全佐剂（FCA）等体积混合并充分乳化，静脉注射免疫家兔，第一次免疫后21天进行第二次免疫；此后每隔14天再加强免疫一次，共免疫注射四次，注射量为0.5mL/次；第四次免疫一周后，对免疫家兔进行颈动脉放血法采血；将全血置37℃温箱1小时，再置4℃冰箱内3～4小时，待血液凝固、血块收缩后，用毛细滴管吸取血清；于3000rpm离心15分钟，上清即为抗血清；分装后置4℃冰箱中保存备用。
下面以抗体B为例，详细说明从抗血清中获取抗体的方法，抗体A的获取方法与之相同。
（2）亲和纯化
1）将多肽B交联到SulfoLink柱料上，用半胱氨酸封闭；
2）用20mL PBS（50mM，pH7.4）以60mL/h流速预处理亲合纯化柱；
3）将10mL抗血清用PBS（50mM，pH7.4）稀释至20mL，重复上样一次；
4）再用30mL PBS（50mM，pH7.4）以60mL/h流速清洗纯化柱；
5）最后用0.1M的glycine-HCl（pH3.0）洗脱抗体B，调节pH至7.4；（3）透析除盐
将装有抗体B（以2mL抗体B为例）的透析袋置于1×PB Buffer透析液中，4℃静止透析，每8小时换液一次，换液5次（共1000mL）后透析完成，调节抗体B浓度至1mg/mL，备用。
实施例2 抗体测定
利用抗原多肽采用ELISA法定抗体的效价、反应特异性和敏感性，同时以PCR检测为阳性的草莓植株作为阳性对照，PCR检测为阴性的草莓植株作为阴性对照，1μg/mL BSA为空白对照。下面以多肽B+抗体B为例，对具体检测方法进行详细说明。
（1）抗原包被
1）取1g试样（阳性对照和阴性对照植株的叶片），加样品提取包被液（0.05M碳酸盐缓冲液，pH9.6）10mL匀浆，双层纱布过滤，用包被缓冲液将匀浆稀释至浓度为200μL/mL；将多肽B稀释至浓度为1μg/mL，备用；
2）取步骤1）中获得的各抗原稀释液0.1mL，加入酶标板反应孔中，4℃过夜反应；
3）弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液PBST（1×PBS+Tween-20）洗板3次，每次洗3min；
每升PBST洗涤缓冲液含Na2HPO41.12g、KH2PO40.20g、KCl0.20g、NaCl8.0g、Tween-200.5g，调节pH至7.4；
（2）封闭
1）每孔加入0.2mL封闭液，25℃放置2h；
封闭液的配方为：每升封闭液含Na2HPO41.15g、KH2PO40.20g、KCl0.20g、NaCl8.0g、Na2SO31.3g、聚乙烯吡咯烷酮K3020g、Tween-2020g，2g鸡蛋清粉或牛血清蛋白，调节pH7.4；
2）每孔加0.25mL洗涤缓冲液PBST洗涤3～5次；
（3）加抗体
1）用抗体稀释缓冲液按1:100～1:10000梯度稀释抗体B；每孔加0.1mL，置湿盒中，25℃放置2h；
抗体稀释缓冲液的配方为：每升抗体稀释缓冲液含Na2HPO41.12g、KH2PO40.20g、KCl0.20g、NaCl8.0g、聚乙烯吡咯烷酮K3010g、Tween-2010g，调节pH至7.4；
2）用洗涤缓冲液PBST洗板3次，每次洗3min；
（4）加酶标抗体
1）用酶标缓冲液按说明稀释酶标抗体（碱性磷酸酶AP标记亲和纯化山羊抗兔IgG(H+L)二抗，购自美国jackson公司），于各反应孔中加入经稀释的酶标抗体0.1mL，室温放置2h；
酶标缓冲液的配方为：每升酶标缓冲液含Na2HPO41.12g、KH2PO40.20g、KCl0.20g、NaCl8.0g、牛血清蛋白2.0g、聚乙烯吡咯烷酮K3020g、Tween-200.5g，调节pH至7.4；
2）用洗涤缓冲液PBST洗板3次，每次洗3min；
（5）显色
1）配制底物缓冲液，配方为：每升含0.1g MgCl2·6H2O、97mL二乙醇胺，蒸馏水定容至1000mL，调节pH值至9.6～9.8；
临用前每5mL底物缓冲液中加1片pNPP底物片剂（5mg/片，美国agdia公司）溶解；
2）于各反应孔中加入现配的pNPP底物溶液0.1mL，室温下避光放置孵育至阳性对照和阳性样品显黄色；
（6）终止反应
各反应孔中加入0.1mL终止液氢氧化钠（3mol/L），终止反应；
（7）结果判定
将酶标板放于酶标仪上，于405nm读取吸光度数值。以待检样本OD405值与空白对OD405值比值（P/N）作为判定标准。若P/N比值≥3，则判定为阳性，反之为阴性。目测时，阳性样品显黄色；而阴性样品无色透明（图1）。间接法ELISA检测结果如表1所示。
表1 草莓镶脉病毒间接法ELISA部分检测结果
| OD405 | 抗体A-1 | 抗体A-2 | 抗体A-3 | 平均值 | P/N |
| 多肽P1 | 3.281 | 3.330 | 3.360 | 3.324 | 23.445 |
| 多肽P2 | 0.158 | 0.125 | 0.123 | 0.135 | 0.954 |
| 阳性植株(8-1) | 0.781 | 0.749 | 0.900 | 0.810 | 5.712 |
| 阴性植株(7-5) | 0.215 | 0.186 | 0.197 | 0.199 | 1.406 |
| 空白 | 0.133 | 0.141 | 0.152 | 0.142 | |
| 抗体B-1 | 抗体B-2 | 抗体B-3 | |||
| 多肽P1 | 0.295 | 0.357 | 0.387 | 0.346 | 1.310 |
| 多肽P2 | 3.220 | 3.331 | 3.144 | 3.232 | 12.231 |
| 阳性植株(8-1) | 1.076 | 1.037 | 1.080 | 1.064 | 4.029 |
| 阴性植株(7-5) | 0.265 | 0.283 | 0.297 | 0.282 | 1.066 |
| 空白 | 0.254 | 0.267 | 0.271 | 0.264 |
由表1可见，经间接ELISA检测，抗体A和抗体B都具有较好的特异性和灵敏度，与特异性多肽及带病毒阳性植株都有较好的反应。
实施例3 双抗夹心ELISA试验
利用双抗夹心ELISA法检测样品中的SVBV感染情况，同时以PCR检测为阳性的草莓植株作为阳性对照，PCR检测为阴性的草莓植株作为阴性对照，1μg/mL BSA为空白对照。下面以抗体A+酶标抗体B为例，对具体检测方法进行详细说明。
（1）碱性磷酸酶（AP）标抗体制备
1）取抗体B（2mg/mL）1mL，加入AP5mg溶解；
2）装入透析袋，用0.01mol/L、pH7.2的PBS于4℃透析18h，换液3次；
3）加入2.5%戊二醛20μL，室温（20℃左右）放置2h；4℃下0.01mol/L、pH7.2的PBS透析过夜，换液3次；
4）移入0.05mol/L、pH8.0的Tris-HCl缓冲液中，4℃透析过夜，换液3次；
5）取出标记抗体，用含1%BSA和0.02%叠氮钠的Tris-HCl缓冲液稀释至4mL，即为酶标抗体原液；
6）每毫升酶标抗体原液加入40%甘油，小量分装，4℃保存。
（2）抗体包被
1）用包被缓冲液（0.05M碳酸盐缓冲液，pH9.6）将抗体A按1:100～1:10000梯度稀释；
2）取步骤1）中获得的抗体稀释液0.1mL，加入酶标板反应孔中，4℃过夜；
3）弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液PBST（1×PBS+Tween-20）洗板3次，每次洗3min；
每升PBST洗涤缓冲液含Na2HPO41.12g、KH2PO40.20g、KCl0.20g、NaCl8.0g、Tween-200.5g，调节pH至7.4；
（3）加样
1）取1g试样（待测草莓叶片，同时取阳性对照和阴性对照植株的叶片），加样品提取液（GEB）10mL匀浆，双层纱布过滤，用包被缓冲液将匀浆稀释至浓度为200μL/mL；
每升GEB含Na2HPO41.12g、KH2PO40.20g、KCl0.20g、NaCl8.0g、Na2SO31.3g、聚乙烯吡咯烷酮K3020g、Tween-2020g/L，调节pH至7.4。
2）取步骤1）中获得的样品稀释液0.1mL，加入酶标板反应孔中，置湿盒中，25℃放置2h；
3）弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液PBST（1×PBS+Tween-20）洗板3次，每次洗3min；
（4）加酶标抗体
1）用酶标缓冲液按1:100～1:10000梯度稀释步骤（1）制备的酶标抗体B，于各反应孔中加入经稀释的酶标抗体0.1mL，室温放置2h；
酶标缓冲液的配方为：每升酶标缓冲液含Na2HPO41.12g、KH2PO40.20g、KCl0.20g、NaCl8.0g、牛血清蛋白2.0g、聚乙烯吡咯烷酮K3020g、Tween-200.5g，调节pH至7.4；
2）用洗涤缓冲液PBST洗板3次，每次洗3min；
（5）显色
1）配制底物缓冲液，配方为：每升含0.1g MgCl2·6H2O、97mL二乙醇胺，蒸馏水定容至1000mL，调节pH值至9.6～9.8；
临用前每5mL底物缓冲液中加1片pNPP底物片剂（5mg/片，美国agdia公司）溶解；
2）于各反应孔中加入现配的pNPP底物溶液0.1mL，室温下避光放置孵育至阳性对照和阳性样品显黄色；
（6）终止反应
各反应孔中加入0.1mL终止液氢氧化钠（3mol/L），终止反应；
（7）结果判定
将酶标板放于酶标仪上，于405nm读取吸光度数值。以待检样本OD405值与空白对OD405值比值（P/N）作为判定标准。若P/N比值≥3，则判定为阳性，反之为阴性。目测时，阳性样品显黄色；而阴性样品无色透明。
（8）样品检测结果
2012年我们对草莓红颊组培脱毒苗的瓶苗及移栽到基质中的培育过1个月的幼苗均进行了抽检（随机抽检瓶苗100份，幼苗80份），利用本方法在组培苗中并未检出草莓镶脉病毒（SVBV）；同时检测了种植多代的草莓样品37份，检测出携带草莓镶脉病毒的样品13份。
表2 草莓镶脉病毒双抗夹心法ELISA部分检测结果
| OD405 | 重复1 | 重复2 | 重复3 | 平均值 | P/N |
| 阳性样品 | 1.076 | 1.037 | 1.080 | 1.064 | 7.496 |
| 阴性样品 | 0.133 | 0.141 | 0.152 | 0.142 | 1.000 |
| 组培脱毒苗1 | 0.158 | 0.125 | 0.123 | 0.135 | 0.952 |
| 组培脱毒苗2 | 0.181 | 0.230 | 0.260 | 0.224 | 1.576 |
| 组培脱毒苗3 | 0.206 | 0.229 | 0.141 | 0.192 | 1.350 |
| 组培脱毒苗4 | 0.155 | 0.166 | 0.175 | 0.165 | 1.163 |
| 组培脱毒苗5 | 0.195 | 0.257 | 0.287 | 0.246 | 1.733 |
| 多代苗1 | 1.237 | 1.234 | 1.276 | 1.249 | 8.793 |
| 多代苗2 | 1.154 | 1.167 | 1.171 | 1.164 | 8.199 |
| 多代苗3 | 0.226 | 0.278 | 0.229 | 0.244 | 1.718 |
| 多代苗4 | 1.302 | 1.281 | 1.206 | 1.263 | 8.894 |
| 多代苗5 | 0.220 | 0.231 | 0.144 | 0.198 | 1.396 |
| 多代苗6 | 1.085 | 1.116 | 1.093 | 1.098 | 7.734 |
实施例4 胶体金检测试纸条的制备
下面以抗体B为胶体金标记抗体，以抗体A为硝酸纤维素膜检测区抗体，详细介绍胶体金检测试纸条的制备方法。
（1）胶体金垫的制备
1）以氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径35nm的胶体金溶液，制备完成后取100mL胶体金溶液于烧杯内，用0.1M的K2CO3调至pH9.0；
2）加入1.0mL抗体B（浓度为1mg/mL），室温搅拌30min，加入重量百分比为10%的牛血清白蛋白封闭30min；
3）12000r/min、4℃离心30min，弃上清，用胶体金溶液复溶至100mL，按1mL溶液铺40cm的比例，将溶液均匀地铺在玻璃纤维膜上，37℃干燥30min，制成胶体金垫。
（2）硝酸纤维素膜的包被
1）用0.01M磷酸缓冲液（pH8.0）将抗体A稀释成0.1mg/mL的溶液，用喷膜仪在硝酸纤维素膜一端以1.5μL/cm的参数进行划线；
2）将可与上述胶体金标记的草莓镶脉病毒抗体特异性结合的山羊抗兔IgG二抗抗体（上海捷宁生物科技有限公司）溶解在用0.01M磷酸缓冲液（pH8.0）配制成0.06mg/mL的溶液，用喷膜仪在硝酸纤维素膜另一端以1.5μL/cm的参数进行划线；
3）划线后在室温下干燥8h，分别得到检测线（T线）和质控线（C线）。
（3）检测试纸的组装
如图2所示，在干燥室内（温度20-25℃，湿度小于30%）将样品垫（玻璃纤维膜）、胶体金垫、硝酸纤维素膜以及吸样垫（吸水试纸）粘贴在底板上，其中硝酸纤维素膜位于底板中部，硝酸纤维素膜包被有T线的一端与胶体金垫的1/3搭接，包被有C线的一端与吸样垫的1/10搭接，样品垫与胶体金垫的1/5搭接。最后切成宽度为2.5mm的试纸条，也可将试纸条装入一个塑料卡中制成检测卡。
实施例5 样品试验
（1）取待测草莓叶片按1：10（W/V）加入样品提取缓冲液用消毒的研钵研磨后，2000r/min离心10min，上清液即为制备好的检测样品；
样品提取缓冲液的配方为：每升样品提取缓冲液含Na2HPO41.12g、KH2PO40.20g、KCl0.20g、NaCl8.0g、牛血清蛋白2.0g、聚乙烯吡咯烷酮K3020g、Tween-200.5g，调节pH至7.4；
（2）室温下将检测试纸有胶体金复合物的一端插入200μL的待测植物样品提纯液中，注意样品液面不要超过试纸条上的MAX线；
（3）肉眼观测30min，观察记录C线和T线的显色情况。
若T线和C线均显色，判定为阳性；若T线不显色，C线显色，判定为阴性；若T线和C线均不显色，则测试失败。
收集草莓样品37份，其中ELISA试剂（以抗体A为包被抗体，以抗体B为检测抗体）检测出阳性样品13份，试纸条（胶体金标记抗体为抗体B，T线含有抗体A）检测出阳性样品12份，具体结果如下表2所示。
表2 试纸条与ELISA对草莓样品的检测结果
| 检测方法 | 阳性样品数 | 阴性样品数 | 总样品数 |
| ELISA | 13 | 24 | 37 |
| 试纸条 | 12 | 25 | 37 |
由表2可见，试纸条与ELISA比较，灵敏度=12/13=92.3%，特异性=25/24=104.2%。表明本发明的胶体金检测试纸条与ELISA试剂盒的特异性和灵敏度均较高，能对草莓镶脉病毒进行简便快速的检测。
Claims (8)
1.一种抗原多肽，其特征在于，为多肽B，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
2.一种免疫原，其特征在于，由权利要求1所述的抗原多肽和与其偶联的载体蛋白组成。
3.如权利要求2所述的免疫原，其特征在于，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、血蓝蛋白或鸡卵白蛋白。
4.如权利要求3所述的免疫原，其特征在于，所述载体蛋白为牛血清白蛋白。
5.一种草莓镶脉病毒抗体，其特征在于，为抗体B，由含有多肽B的权利要求2～4任一所述的免疫原制备获得。
6.一种检测草莓镶脉病毒的试纸条，包括样品垫、标记物垫、反应膜和吸样垫，其特征在于，所述标记物垫包被有胶体金标记或酶标记的权利要求5所述的抗体B，所述反应膜包被有抗体A；
或所述标记物垫包被有胶体金标记或酶标记的抗体A，所述反应膜包被有权利要求5所述的抗体B；
所述抗体A由含有多肽A的免疫原制备获得，所述多肽A的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
7.一种含有如权利要求5所述草莓镶脉病毒抗体的检测试剂盒。
8.如权利要求7所述检测试剂盒，其特征在于，其为ELISA检测试剂盒。
Applications Claiming Priority (1)
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Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112098654A (zh) * | 2020-09-15 | 2020-12-18 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种胃蛋白酶原i/ii测定试剂盒及其制备方法 |
| CN113105530A (zh) * | 2021-04-14 | 2021-07-13 | 中国检验检疫科学研究院 | 一种蓝莓休克病毒纳米酶免疫层析试纸条及其制备方法和应用 |
| CN113173975A (zh) * | 2021-04-21 | 2021-07-27 | 中国检验检疫科学研究院 | 夜来香花叶病毒纳米酶免疫层析试纸条及其制备方法和应用 |
| CN114280292A (zh) * | 2021-03-29 | 2022-04-05 | 北京市植物保护站 | 草莓轻型黄边病毒胶体金试纸条及其制备方法与应用 |
| CN114280291A (zh) * | 2021-03-29 | 2022-04-05 | 北京市植物保护站 | 草莓镶脉病毒胶体金试纸条及其制备方法与应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002040691A2 (en) * | 2000-11-01 | 2002-05-23 | Maxygen, Inc. | Strawberry vein banding virus (svbv) promoter |
-
2013
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Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002040691A2 (en) * | 2000-11-01 | 2002-05-23 | Maxygen, Inc. | Strawberry vein banding virus (svbv) promoter |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 江彤 等: "草莓镶脉病毒外壳蛋白的原核表达及多抗血清制备", 《南京农业大学学报》 * |
| 肖敏，张志宏: "草莓镶脉病毒研究进展", 《辽宁农业科学》 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112098654A (zh) * | 2020-09-15 | 2020-12-18 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种胃蛋白酶原i/ii测定试剂盒及其制备方法 |
| CN112098654B (zh) * | 2020-09-15 | 2023-07-18 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种胃蛋白酶原i/ii测定试剂盒及其制备方法 |
| CN114280292A (zh) * | 2021-03-29 | 2022-04-05 | 北京市植物保护站 | 草莓轻型黄边病毒胶体金试纸条及其制备方法与应用 |
| CN114280291A (zh) * | 2021-03-29 | 2022-04-05 | 北京市植物保护站 | 草莓镶脉病毒胶体金试纸条及其制备方法与应用 |
| CN113105530A (zh) * | 2021-04-14 | 2021-07-13 | 中国检验检疫科学研究院 | 一种蓝莓休克病毒纳米酶免疫层析试纸条及其制备方法和应用 |
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