CN103732229A - 基于药剂的联用的癌症治疗方法 - Google Patents

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Abstract

需要使紫杉烷类抗肿瘤剂的对各种肿瘤的药效增大的治疗方法。本发明人对紫杉烷类抗肿瘤剂的抗肿瘤作用增强方法进行了研究，结果，确认了含有N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯酰基]-N-[2-氧代-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙氨酰胺(FK330)或其盐作为有效成分的癌症治疗用组合物使紫杉烷类抗肿瘤剂的抗肿瘤作用增强，从而完成了本发明。即，本申请涉及含有FK330或其盐作为有效成分的癌症治疗用组合物，其用于与选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的联合给药。

Description

基于药剂的联用的癌症治疗方法
技术领域
本发明涉及药物，特别是涉及含有N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯酰基]-N-[2-氧代-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙氨酰胺或其盐作为有效成分的、用于与紫杉烷类抗肿瘤剂联用的癌症治疗用组合物。
背景技术
在恶性肿瘤的化疗中，紫杉烷类抗肿瘤剂特别是紫杉醇和多西他赛作为对一些癌瘤有效的药剂使用。
已知紫杉烷类抗肿瘤剂通过阻碍细胞分裂所必需的微管的解聚来阻碍癌细胞的分裂。紫杉醇被用在卵巢癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、胃癌等的治疗中，多西他赛被用在乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌、头颈部癌、卵巢癌、食道癌、子宫癌等的治疗中。
临床上，为了增强药效、扩大抗癌谱，进行了将紫杉烷类抗肿瘤剂与作用机理不同的其他抗肿瘤剂组合的多剂联合疗法。例如，已知紫杉醇与卡铂的联用(Cancer,1996,77:2458-63.)、多西他赛与顺铂等的联用(Eur.J.Surg.Oncol.200632(3)297-302)。另外，在美国食品和药物管理局(FDA)提供的各种数据库例如“DrugsFDA”(http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cder/drugsatfda/index.cfm)和欧洲药物管理局(EMA)的主页(http://www.ema.europa.eu/)上公开了将紫杉醇、多西他赛与其他抗肿瘤剂联用的临床方案。
一般而言，如果抗肿瘤剂的给药量变多，则副作用也成比例地出现，因此其给药需慎重。因此，在抗肿瘤剂的给药中，从副作用的观点考虑，设定最大耐受量(MTD)，限制其给药量。另外，例如根据日本的医药品医疗设备信息提供主页的タキソール注(注册商标：紫杉醇的商品名)的说明书，紫杉醇如记载“1天1次用3小时点滴静注210mg/m2，至少停药3周。将其作为1个疗程，反复给药。需要说明的是，给药量根据年龄、症状适当减量”所述，紫杉醇除用量外还设定给药方法。另外，对于タキソテール注(注册商标：多西他赛的商品名)，也有“1次最高用量为70mg/m2”这样的记载，指定用量。
另一方面，在国际公开02/055541号小册子(专利文献1)中公开了具有良好的一氧化氮(NO)合成酶(NOS)阻碍活性的肽衍生物。特别是，在该公报中报告了作为实施例41公开并由下式表示的N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯酰基]-N-[2-氧代-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙氨酰胺(称为FR260330或FK330)显示出优良的诱导型一氧化氮合成酶(inducible NOS,iNOS)阻碍活性(非专利文献1)，还报告了FK330在大鼠大动脉移植的慢性排斥模型中有效(非专利文献2)。另外，已经公开了：对猴肾缺血/再灌注损伤和大鼠肝移植中的缺血/再灌注损伤也有效(非专利文献3、4)；抑制TGFβ1的增加或由星形细胞的活化诱发的纤维化，对治疗肝硬化有效(专利文献2、非专利文献5)；以及对炎性角化病、角化病或炎性皮肤病也有效(专利文献3)。
iNOS在上皮细胞、平滑肌细胞、巨噬细胞等各种类型的细胞中表达，通过由感染、炎症等诱发的细胞因子等以转录水平诱发其表达，产生NO。iNOS担负在感染、生物体防御等中重要的介质的作用。
根据目前的很多研究可以明确，NO一方面促进癌症的发展或转移，另一方面有时也抑制它们。报告了NO在癌症中的作用依赖于NOS亚型的活性或局部化、NO暴露的浓度或时间、细胞对NO的敏感性(非专利文献6)，从促进NO产生和抑制NO产生这两方面进行了癌症的生理学研究，对于在癌症治疗中的应用，未得出是促进NO产生好还是阻碍NO产生好的一定见解(非专利文献7和8)。
非专利文献9和10记载了：对于人卵巢癌细胞和颈头癌细胞，低浓度的NO表现出抑制基于顺铂和紫杉醇的细胞凋亡的倾向，高浓度的NO促进细胞凋亡。在这些文献中也记载了：通过iNOS抑制剂1400W和生存素RNAi的联用，不仅促进基于紫杉醇的细胞凋亡，还促进基于顺铂的细胞凋亡，可以说NO的细胞保护效果不是选择性地作用于紫杉醇。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开第02/055541号小册子
专利文献2：日本专利第3700854号公报
专利文献3：日本特开2006-008621号公报
非专利文献
非专利文献1：European Journal of Pharmacology509,71,(2005)
非专利文献2：Transplantation79,101386(2005)
非专利文献3：Transplantation81,4,627(2006)
非专利文献4：American Journal of Transplantation6,9,2013(2006)
非专利文献5：Wound Repair and Regeneration15,881(2007)
非专利文献6：Nature Reviews Cancer,6(7),521-34(2006)
非专利文献7：Cancer Chemotherapy and Pharmacology,67,1211-1224(2011)
非专利文献8：Nitric Oxide19,158-163(2008)
非专利文献9：Cancer Research,68,5158-5166(2008)
非专利文献10：International Journal of Cancer,124,2033-2041(2009)
发明内容
发明所要解决的问题
紫杉烷类抗肿瘤剂虽然在各种肿瘤的治疗中是有用的，但考虑到副作用，给药量和用法受到限制，现在要求在不增加给药量的情况下进一步增大对各种肿瘤的药效的治疗方法。另外，虽然在治疗初期有效，但在继续治疗的过程中，抗肿瘤效果减弱的获得抗性也成为问题。
用于解决问题的手段
本发明人针对紫杉烷类抗肿瘤剂的抗肿瘤作用增强方法进行了深入研究，结果意外地发现，通过联用N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯酰基]-N-[2-氧代-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙氨酰胺，可显著地增强抗肿瘤作用并发现其增强作用的机制，从而完成了本发明。
即，本发明涉及：
(1)一种癌症治疗用组合物，含有FK330或其盐作为有效成分，其特征在于，以与选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂组合地联合给药的方式使用。
进一步，如下地示出某些方式。
(2)根据(1)所述的组合物，其特征在于，以与紫杉醇或多西他赛组合地联合给药的方式使用。
(3)根据(2)所述的组合物，其特征在于，以与紫杉醇组合地联合给药的方式使用。
(4)根据(2)所述的组合物，其特征在于，以与多西他赛组合地联合给药的方式使用。
(5)根据(1)至(4)中任一项所述的组合物，其为包含60～1200mg/天的FK330或其盐的口服给药用组合物。
(6)根据(5)所述的组合物，其为包含60～200mg/天的FK330或其盐的口服给药用组合物。
(7)根据(1)至(6)中任一项所述的组合物，其特征在于，以进一步与选自含铂抗肿瘤剂、蒽环类抗肿瘤剂、环磷酰胺、氟尿嘧啶、曲妥珠单抗和卡培他滨的一种以上抗肿瘤剂组合地联合给药的方式使用。
(8)根据(1)至(6)中任一项所述的组合物，其特征在于，以在选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的一个给药周期中的至少一天联合给药的方式使用。
(9)根据(8)所述的组合物，其特征在于，以在选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的给药日的至少一天联合给药的方式使用。
(10)根据(8)所述的组合物，其特征在于，以在选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的一个给药周期中的每天联合给药的方式使用。
另外，本申请发明也涉及以下的发明。
(11)根据(1)至(6)中任一项所述的癌症治疗用组合物，其特征在于，与选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂同时、分开、连续、或间隔地给药。
(12)一种用于治疗接受基于选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的治疗的对象的癌症治疗用组合物，其含有FK330或其盐作为有效成分。
(13)根据(1)至(12)中任一项所述的癌症治疗用组合物，其用于治疗使用紫杉烷类抗肿瘤剂的癌症。
(14)根据(13)所述的癌症治疗用组合物，其中，使用紫杉烷类抗肿瘤剂的癌症为非小细胞肺癌。
(15)根据(13)所述的癌症治疗用组合物，其中，使用紫杉烷类抗肿瘤剂的癌症为乳腺癌。
进一步，本发明还涉及以下的发明。
(16)一种癌症的治疗方法，其特征在于，将用于选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的联合治疗时的治疗有效用量以及用于FK330或其盐的联合治疗时的治疗有效用量组合，对对象进行给药。
(17)一种癌症的治疗方法，其特征在于，同时、分开、连续、或间隔地对对象给用用于选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的联合治疗时的治疗有效用量以及用于FK330或其盐的联合治疗时的治疗有效用量。
需要说明的是，“对象”是需要该预防或治疗的人或其他动物，作为某一方式，是需要该预防或治疗的人。
另外，本发明进一步还涉及以下的发明。
(18)FK330或其盐在制造癌症治疗用组合物中的应用，该癌症治疗用组合物的特征在于，以与选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂组合地联合给药的方式使用。
(19)FK330或其盐，用于治疗癌症，其特征在于，以与选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂组合地联合给药的方式使用。
(20)一种癌症治疗剂，含有K330或其盐作为有效成分，其特征在于，以与选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂组合的方式给药。
(21)一种选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的抗肿瘤作用增强剂，其含有FK330或其盐作为有效成分。
(22)一种选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的抗性化抑制剂或抗性化预防剂，其含有FK330或其盐作为有效成分。
(23)一种选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的敏感性增强剂，其含有FK330或其盐作为有效成分。
发明效果
通过本发明的含有FK330或其盐作为有效成分的癌症治疗用组合物与紫杉烷类抗肿瘤剂的联用，可增强紫杉烷类抗肿瘤剂的癌症治疗效果，因此，本申请发明的癌症治疗用组合物在应用现有的紫杉烷类抗肿瘤剂的已知的各种癌症的治疗中，能够与选自紫杉烷类抗肿瘤剂中的一种以上的抗肿瘤剂联用。作为适用的癌症，是使用紫杉烷类抗肿瘤剂的实体瘤和淋巴瘤。
附图说明
图1是示出在实施例1中FK330和多柔比星的单独或联合给药时的抗肿瘤效果的图表。Dox表示多柔比星。
图2是示出在实施例1中FK330和吉西他滨的单独或联合给药时的抗肿瘤效果的图表。Gem表示吉西他滨。
图3是示出在实施例1中FK330和伊立替康的单独或联合给药时的抗肿瘤效果的图表。Iri表示伊立替康。
图4是示出在实施例1中FK330和卡铂的单独或联合给药时的抗肿瘤效果的图表。CBDCA表示卡铂。
图5是示出在实施例1中FK330和紫杉醇的单独或联合给药时的抗肿瘤效果的图表。PTX表示紫杉醇。
图6是示出在实施例1中FK330和多西他赛的单独或联合给药时的抗肿瘤效果的图表。Doce表示多西他赛。
图7是示出对人非小细胞肺癌(Calu-6)荷瘤小鼠中FK330的紫杉醇多周期给药时的抗肿瘤效果增强作用进行研究而得到的实施例2的结果的图表。PTX表示紫杉醇。
图8是示出对人非小细胞肺癌(Calu-6)荷瘤小鼠中FK330的紫杉醇的抗肿瘤效果增强作用的用量依赖性进行研究而得到的实施例3的结果的图表。PTX表示紫杉醇。
图9是示出对人非小细胞肺癌(Calu-6)荷瘤小鼠中FK330的给药时机进行研究而得到的实施例4的结果的图表。PTX表示紫杉醇。
图10是示出对人胃癌(AZ-521)荷瘤小鼠中基于FK330的紫杉醇的抗肿瘤效果增强作用进行研究而得到的实施例5的结果的图表。PTX表示紫杉醇。
图11是示出对人胃癌(MKN-28)荷瘤小鼠中基于FK330的紫杉醇的抗肿瘤效果增强作用进行研究而得到的实施例5的结果的图表。PTX表示紫杉醇。
图12是示出对人胃癌(NCI-N87)荷瘤小鼠中基于FK330的紫杉醇的抗肿瘤效果增强作用进行研究而得到的实施例5的结果的图表。PTX表示紫杉醇。
图13是示出对人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)荷瘤小鼠中基于FK330的紫杉醇的抗肿瘤效果增强作用进行研究而得到的实施例6的结果的图表。PTX表示紫杉醇。
图14是示出对作为NO供体的SNAP对紫杉烷诱发微管蛋白聚合作用的抑制作用进行研究而得到的实施例7的结果的图表。A)和B)分别表示SNAP对紫杉醇诱发微管蛋白聚合的抑制作用的代表例和微管蛋白聚合开始后60分钟的合计值。PTX表示紫杉醇，SNAP表示S-亚硝基-N-乙酰基-D,L-青霉胺。
图15是示出对作为NO供体的SNAP对紫杉烷诱发微管蛋白聚合作用的抑制作用进行研究而得到的实施例7的结果的图表。A)和B)分别表示SNAP对多西他赛诱发微管蛋白聚合的抑制作用的代表例和微管蛋白聚合开始后60分钟的合计值。DTX表示多西他赛，SNAP表示S-亚硝基-N-乙酰基-D,L-青霉胺。
图16是示出对人肺癌细胞株Calu-6荷瘤小鼠中对紫杉醇单独和FK330联用时的肿瘤组织内iNOS蛋白表达的作用进行研究而得到的实施例8的结果的图表。PTX表示紫杉醇。
图17是示出对人肺癌细胞株Calu-6荷瘤小鼠中对紫杉醇单独和FK330联用时的肿瘤组织内巨噬细胞(F4/80)浸润的作用进行研究而得到的实施例8的结果的图表。PTX表示紫杉醇。
图18是示出对人肺癌细胞株Calu-6荷瘤小鼠中对紫杉醇单独和FK330联用时的肿瘤组织内硝基酪氨酸(NO的主要终产物)表达的作用进行研究而得到的实施例8的结果的图表。PTX表示紫杉醇。
具体实施方式
以下，对本发明进行详细说明。
本发明的“癌症治疗用组合物”是用于与紫杉烷类抗肿瘤剂联用的药物组合物，作为其他方式，是增强紫杉烷类抗肿瘤剂的抗肿瘤作用的药物组合物。
本发明的“癌症治疗用组合物”中的“癌症”包含使用紫杉烷类抗肿瘤剂的癌症、即使用紫杉烷类抗肿瘤剂的全部实体瘤和淋巴瘤。作为某些方式，可以列举：乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、胃(胃腺)癌、非小细胞肺癌、胰腺癌、头颈部鳞癌、食道癌、膀胱癌、黑色素瘤、大肠癌、肾细胞癌、非霍奇金淋巴瘤、尿路上皮癌等。作为其他方式，可以列举：乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胃(胃腺)癌、非小细胞肺癌等，另外，作为其他方式，可以列举：乳腺癌、胃(胃腺)癌、非小细胞肺癌等，进一步作为其他方式，可以列举乳腺癌，另外进一步作为其他方式，可以列举非小细胞肺癌。
作为乳腺癌的其他方式，例如可以列举：HER2阳性转移性乳腺癌、HER2阴性转移性乳腺癌、HER2阳性乳腺癌或者转移性乳腺癌，作为其他方式，可以列举HER2阴性转移性乳腺癌，另外作为其他方式，可以列举HER2阳性转移性乳腺癌。
作为非小细胞肺癌的其他方式，例如可以列举：局部晚期非小细胞肺癌、或转移性的非小细胞肺癌，作为其他方式，可以列举：非小细胞肺癌中的非鳞癌，另外，作为其他方式，可以列举：转移性的非小细胞肺癌中的非鳞癌，进一步作为其他方式，可以列举：转移性的非小细胞肺癌中的鳞癌。
作为胃癌的其他方式，可以列举：转移性胃癌、转移性胃食管连接部癌等。
作为前列腺癌的其他方式，可以列举：转移性去势抵抗性前列腺癌、激素抵抗性前列腺癌等，作为其他方式，可以列举：激素抵抗性前列腺癌，另外，作为其他方式，可以列举：转移性去势抵抗性前列腺癌。
本发明中使用的FK330或其盐是国际公开02/055541号小册子的实施例41的化合物，可以通过该专利中公开的制造方法容易地得到。
FK330是基于不对称碳原子的存在的(S)形式的光学异构体，但也可以含有(R)形式的光学异构体。
另外，本发明中，FK330的盐是指FK330的制药学上允许的盐，具体而言，可以列举：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸、甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、扁桃酸、酒石酸、二苯甲酰酒石酸、二甲苯酰酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸酸、对甲苯磺酸、天冬氨酸、谷氨酸等有机酸等的酸加成盐。这些酸加成盐能够通过常法的造盐反应来制造。
而且，本发明的FK330或其盐可以以各种水合物、溶剂化物和结晶多形性物质的形式使用。另外，FK330或其盐也包含用各种放射性或非放射性同位素标记的化合物。
作为本发明中使用的FK330或其盐，作为某种方式，是游离体酸酐。作为其他方式，是游离体二水合物。例如，将通过国际公开第02/055541号小册子的实施例41中记载的方法得到的FK330游离体用醇/水溶剂系、例如乙醇/水、或异丙醇/水等进行再结晶，使得到的结晶在减压下干燥，能够得到游离体酸酐。另外，通过对得到的游离体酸酐进行调湿操作，能够得到游离体二水合物结晶。
含有FK330或其盐作为有效成分的药物组合物可以使用本领域通常使用的赋形剂即药剂用赋形剂、药剂用载体等并通过通常使用的方法来制备。
给药也可以是基于片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、液剂等的口服给药或基于关节内、静脉内、肌肉内等的注射剂等的非口服给药中的任一形态。作为某种方式，是基于片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、液剂等的口服给药。
作为用于口服给药的固体组合物，使用片剂、散剂、颗粒剂等。在这样的固体组合物中，将1种或2种以上有效成分与至少1种惰性的赋形剂混合。组合物也可以通过常法含有惰性的添加剂例如润滑剂、崩解剂、稳定剂、助溶剂。片剂或丸剂根据需要也可以用糖衣或者胃溶性或肠溶性物质的膜包覆。
用于口服给药的液体组合物含有药剂上允许的乳浊剂、溶液剂、悬浊剂、糖浆剂或者酏剂等，并含有一般使用的惰性的稀释剂例如纯化水或者乙醇。该液体组合物除惰性的稀释剂以外也可以含有增溶剂、润湿剂、悬浊剂这样的辅助剂、甜味剂、风味剂、芳香剂、防腐剂。
用于非口服给药的注射剂含有无菌的水性或非水性的溶液剂、悬浊剂或乳浊剂。作为水性溶剂，例如含有注射用蒸馏水或生理盐水。作为非水性溶剂，例如有乙醇这样的醇类。这样的组合物可以还含有等渗剂、防腐剂、润湿剂、乳化剂、分散剂、稳定剂或助溶剂。它们例如利用通过细菌保留过滤器的过滤、杀菌剂的配合或照射进行无菌化。另外，它们也可以通过制造无菌固体组合物并在使用前溶解或悬浊于无菌水或无菌注射用溶剂来使用。
虽然根据给药途径、剂型、给药部位、赋形剂和添加剂的种类而不同，但本发明的药物组合物含有有效成分为0.01～100重量%、某个方式为0.01～50重量%的一种或一种以上的FK330或其盐。
通常，在口服给药的情况下，FK330(二水合物)的1天的给药量为约60mg/天～约1200mg/天，将其1次给药或分2次～3次给药。作为其他方式，1天的给药量为60～200mg。进一步作为其他方式，是120～250mg、120～220mg、150～250mg或180～200mg。进一步作为其他方式，是100～180mg或180～300mg。进一步作为其他方式，是120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg、200mg、210mg、220mg、230mg、240mg或250mg。进一步作为其他方式，是180mg、190mg或200mg。给药量考虑症状、年龄、性别等根据各自的情况适当确定。
作为可与本发明的FK330联用的紫杉烷类抗肿瘤剂，可以列举：以具有紫杉烷环或其类似结构的化合物为有效成分的药物组合物，作为其他方式，可以列举：以具有紫杉烷环的化合物为有效成分的药物组合物。作为紫杉烷类抗肿瘤剂的另外的其他方式，可以列举：以具有微管解聚抑制作用的化合物为有效成分的药物组合物。药物组合物中适用的赋形剂和剂型可以使用如前所述的赋形剂和剂型。
作为可与FK330联用的紫杉烷类抗肿瘤剂的具体的其他方式，可以列举：紫杉醇(pactitaxel)、多西他赛(docetaxel)、卡巴他赛(cabazitaxel)、白蛋白结合型紫杉醇(abraxane)、替司他赛(tesetaxel)、沃塔紫杉醇(ortataxel)等，另外，作为其他方式，可以列举：紫杉醇(pactitaxel)、多西他赛(docetaxel)或白蛋白结合型紫杉醇(abraxane)，进一步作为其他方式，可以列举：紫杉醇(pactitaxel)或白蛋白结合型紫杉醇(abraxane)，另外进一步作为其他方式，可以列举：紫杉醇(pactitaxel)，作为其他方式，可以列举：多西他赛(docetaxel)。
将可与本发明的FK330联用的主要的现有紫杉烷类抗肿瘤剂与主要的适应癌症种类或适应候补癌症种类一起示于下表。但是，在本发明的联合治疗中，这些抗肿瘤剂的适应癌症种类不限于此。
[表1]
Figure BDA0000464191720000141
紫杉醇、多西他赛、卡巴他赛或白蛋白结合型紫杉醇可以购买市售品使用，或者可以通过本领域技术人员知晓的方法或它们的变形方法容易地得到。
另外，卡巴他赛可以通过国际公开96/30355号小册子中公开的制造方法或它们的变形方法容易地得到。替司他赛可以通过本领域技术人员知晓的方法或国际公开01/27115号小册子中公开的制造方法或它们的变形方法法容易地得到。沃塔紫杉醇可以通过本领域技术人员知晓的方法或美国专利5705508号说明书公开的制造方法或它们的变形方法法容易地得到。
上述抗肿瘤剂已经在临床上使用，本领域技术人员知道其给药途径、给药周期、给药量。根据癌症种类、症状、联用的药剂，优选的用法和用量(Dosage and Administration)不同，它们的详细信息可以通过FDA提供的各种数据库例如“Orange Book”(http://www.fda.gov/cder/orange/default.htm)、日本的医药品医药设备信息提供主页(http://www.info.pmda.go.jp/)容易地获得。这些数据库中的各抗肿瘤剂的信息并入本申请中。
例如，作为紫杉醇的用法和用量的例子，在日本医药品医药设备信息提供主页的タキソール注(注册商标：紫杉醇的商品名)的说明书中有这样的记载：“[功能或效果]卵巢癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、胃癌；[用法及用量]；1.通常，成人，紫杉醇1天1次用3小时点滴静注210mg/m2，至少停药3周。将其作为1个疗程，反复给药。需要说明的是，给药量根据年龄、症状适当减量。”。
另外，作为多西他赛的用法和用量的例子，在日本的医药品医药设备信息提供主页的タキソテール注(注册商标：多西他赛的商品名)的说明书中记载有：“1.乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌、头颈部癌；按照效能或效果的用法和用量；1.通常，成人，1天1次多西他赛60mg/m2，用1小时以上点滴静注，间隔3～4周。需要说明的是，根据症状适当增减，但1次最高用量为70mg/m2”。
在本发明的联合治疗中使用时的治疗有效用量可以根据通常给药的给药途径设定为与通常单独给药时相同的给药量或比其低的用量(例如，单独给药时的最高给药量的0.10～0.99倍)。在以一定的给药周期给药的紫杉烷类抗肿瘤剂的情况下，可以适当调整给药周期以适合与FK330联用。具体的给药频率、给药量、给药周期等考虑患者的症状、年龄、性别等根据个人情况适当确定。
作为将FK330和紫杉烷类抗肿瘤剂联合给药时的给药方式，只要采用各自适合的给药途径、给药频率和给药量，则没有特别限定，例如可以列举：(1)以含有FK330和紫杉烷类抗肿瘤剂的组合物、即单一制剂的形式给药；(2)将对FK330和紫杉烷类抗肿瘤剂分别制剂化而得到的2种制剂以相同给药途径同时给药；(3)将对FK330和紫杉烷类抗肿瘤剂分别制剂化而得到的2种制剂以相同给药途径间隔时间差地给药(例如，以FK330、紫杉烷类抗肿瘤剂的顺序给药、或者以相反的顺序给药)；(4)将对FK330和紫杉烷类抗肿瘤剂分别制剂化而得到的2种制剂以不同给药途径同时给药；(5)将对FK330和紫杉烷类抗肿瘤剂分别制剂化而得到的2种制剂以不同给药途径间隔时间差地给药(例如，以FK330、紫杉烷类抗肿瘤剂的顺序给药、或者以相反的顺序给药)等。作为某种方式，本发明的癌症治疗用组合物与紫杉烷类抗肿瘤剂分别制剂化，紫杉烷类抗肿瘤剂通过静注、点滴静注或口服给药，本发明的癌症治疗用组合物通过口服或非口服给药。作为其他方式，紫杉烷类抗肿瘤剂通过静注、点滴静注给药，本发明的癌症治疗用组合物通过口服给药。
本发明的癌症治疗用组合物的优选的给药方式是在该紫杉烷类抗肿瘤剂给药的1个周期中的至少1天以口服或非口服方式给用本发明的癌症治疗用组合物的方法。此处，“周期”是指，基于一定用药方法的治疗周期或治疗疗程，例如，对于紫杉醇和多西他赛而言，是从给药开始、经过停药期到再次给药之前的约3周～约4周的给药单位期间。作为某种给药方式，是将含有FK330或其盐的本发明的癌症治疗用组合物在紫杉烷类抗肿瘤剂的给药日的至少1天口服给药的方法、在紫杉烷类抗肿瘤剂的所有给药日口服给药的方法、在紫杉烷类抗肿瘤剂的停药日的至少1天口服给药的方法、在紫杉烷类抗肿瘤剂的所有停药日口服给药的方法、在紫杉烷类抗肿瘤剂的给药日的至少1天和停药日的至少1天口服给药的方法、在紫杉烷类抗肿瘤剂给药的1个周期中的每天口服给药的方法或者在紫杉烷类抗肿瘤剂给药的1个周期中间歇地(2天1次、1周1次等)口服给药的方法。作为某种方式，是在紫杉烷类抗肿瘤剂给药的1个周期中的每天口服给药的方法。也可以从紫杉烷类抗肿瘤剂给药的数日前～前一天开始给予本发明的癌症治疗用组合物，该方式包含于紫杉烷类抗肿瘤剂的停药日的给药。在担心FK330和紫杉烷类抗肿瘤剂的药物相互作用的情况下，为了避免相互作用，可以将给药周期分开及/或隔开必要间隔地给药。
关于本发明的“含有FK330或其盐作为有效成分的、用于治疗接受基于选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的治疗的对象的癌症治疗用组合物”中的“对象”，如果接受基于选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的治疗，则也可以接受其他抗肿瘤剂的给药。其他抗肿瘤剂可以列举后述的抗肿瘤剂。关于“对象”，也可以将选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂与含有FK330或其盐作为有效成分的癌症治疗用组合物同时、分开、连续或间隔地给药。
本发明也可以是“组合包含(a)FK330或其盐以及(b)选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的试剂盒”的方式。该方式是组合包含含有有效成分(a)的制剂(第一制剂)和含有有效成分(b)的制剂(第二制剂)以能够用于这些有效成分的联合疗法的方式。本发明的试剂盒根据需要，也可以是可以含有使符合安慰剂等的各个给药时间的给药变容易的追加的制剂、显示部件的包装品。
2种制剂例如考虑各制剂的生物利用度、稳定性等，在适合各制剂的制剂处方、给药途径、给药频率等给药条件下以相同或不同的给药路径同时、分开、连续或间隔地给药。其中，“同时”是指，将第一制剂和第二制剂一起以相同的给药途径给药，“分开”是指，将第一制剂和第二制剂以相同或不同的给药途径并以相同或不同的给药频率或给药间隔分开给药。“连续”是指，将第一制剂和第二制剂以相同或不同的给药途径并以第一制剂、第二制剂的顺序或相反的顺序给药。“间隔地”是指，将第一制剂和第二制剂以相同或不同的给药途径并以第一制剂、隔着一定间隔、第二制剂的顺序或者相反的顺序给药。
本发明也可以是“包含(a)含有FK330或其盐作为有效成分的组合物和(c)示出与选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂联用的说明书的癌症治疗用医药品”的方式。这意味着以包含含有联合治疗中使用时的治疗有效用量的有效成分的组合物(a)、和示出与选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂联用的所述(a)组合物的说明书(c)这两者的方式包装成的癌症治疗用的医药品。
另外，在将含有本发明的FK330或其盐作为有效成分的癌症治疗用组合物与紫杉烷类抗肿瘤剂联用时，可以根据需要进一步联合化疗中使用的其他抗肿瘤剂。作为能够进一步联用的化疗中使用的其他抗肿瘤剂，是已知与现有紫杉烷类抗肿瘤剂联用的抗肿瘤剂，例如可以列举选自含铂抗肿瘤剂、蒽环类抗肿瘤剂、环磷酰胺、氟尿嘧啶、曲妥珠单抗和卡培他滨中的一种以上抗肿瘤剂，作为某种方式，是顺铂或卡铂，作为其他方式，是多柔比星。
如本申请说明书的实施例1-6所示发现，通过本申请发明的含有FK330或其盐作为有效成分的癌症治疗用组合物和紫杉烷类抗肿瘤剂的联合治疗，可增强癌症治疗作用。其效果通过与含有FK330或其盐作为有效成分的癌症治疗用组合物或紫杉烷类抗肿瘤剂的单剂给药相比显著地减少平均肿瘤体积(mean tumor volume)来确认。
另外，本发明的FK330或其盐没有大多数抗肿瘤剂中报告的严重的副作用，从安全性的观点考虑也有用。
对于实施例示出的动物模型，确认了：本发明的癌症治疗用组合物以紫杉烷类抗肿瘤剂选择性地且呈用量依赖性的方式增强抗肿瘤作用。即，在只是FK330或其盐的情况下，未发现显著的抗肿瘤效果，另外，即使将FK330或其盐与紫杉烷以外的抗肿瘤剂联用，也未能确认特别显著的抗肿瘤作用，但在与紫杉烷类抗肿瘤剂组合时，确认到良好的抗肿瘤作用增强作用。特别是，FK330表现出改善基于多个周期处置的紫杉烷类药剂的抗肿瘤效果的减弱，良好地抑制肿瘤增殖(参照图7)。这给出FK330抑制紫杉烷类抗肿瘤剂的抗性化的启示。
本申请说明书的实施例7和8中显示，NO直接抑制紫杉烷类抗肿瘤剂的微管解聚抑制作用，并且紫杉烷类抗肿瘤剂诱发伴随表达癌组织的iNOS蛋白而来的NO产生，FK330抑制该iNOS活性。
另外，本发明人还发现，NO抑制经由基于紫杉烷类抗肿瘤剂的细胞凋亡的癌细胞增殖抑制作用，在紫杉烷类抗肿瘤剂中选择性地确认到基于NO的化疗剂的减弱效果。
因此，本发明人如下地明确了基于FK330的紫杉烷类抗肿瘤剂的抗肿瘤作用增强的机制。即，紫杉烷类抗肿瘤剂在肿瘤组织中使iNOS蛋白亢进，其结果，会增强NO产生。产生的NO通过直接抑制紫杉烷的微管解聚抑制作用从而减弱紫杉烷类抗肿瘤剂的抗肿瘤效果。另一方面，可以明确，FK330通过阻碍因紫杉烷类抗肿瘤剂而增强的NO产生，能够抑制紫杉烷类抗肿瘤剂的效果的减弱从而增强抗肿瘤作用。
综上所述，可以说FK330或其盐能够增强以微管解聚抑制作用为靶标的全部紫杉烷类抗肿瘤剂的作用。
实施例
以下示出表示本发明的癌症治疗用组合物的有用性的药理试验结果，但本发明不限于这些实施例。
实施例1
1)受试物质
使用游离体二水合物作为FK330。以下，FK330的给药量用该二水合物的重量表示。多西他赛水合物注射剂(タキソテール(商标)点滴静注用)从赛诺菲安万特株式会社购入，作为多西他赛使用。紫杉醇注射剂(紫杉醇注射液“サワイ”)从泽井制药株式会社购入，作为紫杉醇使用。盐酸伊立替康(トポテシン(商标)注)从第一三共株式会社购入，作为伊立替康使用。注射用吉西他滨盐酸盐(ジェムザール(商标)注射用)从如本礼来株式会社购入，作为吉西他滨使用。注射用盐酸多柔比星(アドリアシン(商标)注用10)从协和发酵工业株式会社购入，作为多柔比星使用。卡铂注射液(パラプラチン(商标)注射液)从百时美施贵宝株式会社购入，作为卡铂使用。
2)受试物质的制备和给药
FK330悬浊于0.5%甲基纤维素水溶液(0.5%MC)(20mg/mL)。多西他赛利用附带的溶解液制备成4mg/kg后，用生理盐水(大冢制药)稀释成1mg/mL。紫杉醇、伊立替康、吉西他滨、多柔比星和卡铂在使用时分别用注射用生理盐水制备成1mg/mL、3mg/mL、16mg/mL、1mg/mL和6mg/mL。
3)细胞
来源于人肺癌的Calu6(HTB-56)从美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(VA,USA)获得。细胞使用添加有10%的加热灭活后的胎牛血清(FBS)的RPMI1640培养基，在37℃、5%CO2的条件下进行培养。用PBS将使用胰蛋白酶回收的细胞悬浊至6×107个细胞/mL，与等量的Matrigel(商标)基底膜基质(Becton DickinsonCo.制,Bedford,MA,USA)混合。
4)动物
5周龄的雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxn1nu/CrlCrlj(nu/nu))从日本チャールスリバー公司(日本、神奈川)购入。动物在整个试验期间在特定的未感染病原体(SPF)的条件下供给标准的饲料和饮水进行饲养。以3×106个细胞/0.1mL/小鼠将培养得到的细胞移植到裸鼠的背部皮下。为了减小组间和组内的肿瘤体积偏差，使用SAS将肿瘤体积(短径×[长径]2×0.5)从111.9到369.3mm3的裸鼠分组。
5)给药和测定
将给药第一天作为Day1，观察到Day29。如下地处理各个组(n=5或6)。FK330以6到8小时的间隔，1天2次强制口服给药(5mL/kg)，各化疗剂从尾静脉进行静脉内推注给药(10mL/kg)。
对照组：未处置
FK330单独给药组：FK330100mg/kg以1天2次给药(bid)(200mg/kg/day、从实验开始到结束时为止连续给药)
多西他赛单独给药组：多西他赛10mg/kg/day(Day1、5和9)
紫杉醇单独给药组：紫杉醇10mg/kg/day(Day1到7)
伊立替康单独给药组：伊立替康30mg/kg/day(Day1到7)
吉西他滨单独给药组：吉西他滨160mg/kg/day(Day1、4和7)
多柔比星单独给药组：多柔比星10mg/kg/day(Day1和8)
卡铂单独给药组：卡铂60mg/kg/day(Day1和2)
联用组：
FK330100mg/kg/day bid+多西他赛10mg/kg/day(Day1、5和9)、n=6
FK330100mg/kg/day bid+紫杉醇10mg/kg/day(Day1到7)、n=6
FK330100mg/kg/day bid+伊立替康30mg/kg/day(Day1到7)、n=6
FK330100mg/kg/day bid+吉西他滨160mg/kg/day(Day1、4和7)、n=6
FK330100mg/kg/day bid+多柔比星10mg/kg/day(Day1和8)、n=6
FK330100mg/kg/day bid+卡铂60mg/kg/day(Day1和2)、n=5
FK330以6到8小时的间隔，1天2次强制口服给药(5mL/kg)。各化疗剂在给用FK330后2～4小时后从尾静脉进行静脉内推注给药(10mL/kg)。
每3～4天利用体重和电子游标卡尺测定肿瘤径。肿瘤体积通过(短径×[长径]2×0.52)的椭圆体积的算式算出。
6)统计分析
结果用平均值(Mean)±标准误差(SEM)表示。试验期间中，将触诊界限以下判定为完全消失(CR)，测定值为0。针对试验结束时的肿瘤体积的实测值，在单独给药组和联用组进行不对应的2组间的差异的检验(Student's t-test)，将小于5%判定为有显著差异。数据处理使用SAS或Graphpad Prism version5.03。
7)结果
对将FK330和各种化疗剂联合给药时的抗肿瘤作用进行了研究。结果示于图1到图6。即，FK330与多柔比星的联用效果示于图1，FK330与吉西他滨的联用效果示于图2，FK330与伊立替康的联用效果示于图3，FK330与卡铂的联用效果示于图4，FK330与紫杉醇的联用效果示于图5，FK330与多西他赛的联用效果示于图6。单独使用FK330时，未确认到抗肿瘤效果，但抗肿瘤效果的显著增强由紫杉醇(Day29的相对于紫杉醇单独组的肿瘤体积减少率为57.6%)和多西他赛(Day29的相对于多西他赛单独组的肿瘤体积减少率为65.2%)确认。另一方面，FK330未影响吉西他滨和卡铂的抗肿瘤效果，抗肿瘤效果的少许增强利用多柔比星(Day29的相对于多柔比星单独组的肿瘤体积减少率34.5%)和伊立替康(Day29的相对于伊立替康单独组的肿瘤体积减少率34.1%)观察，但不是显著作用。
结果用平均值(Mean)±标准误差(SEM)表示(n=6)。*：P<0.03、**：P<0.01表示将联用组与化疗剂单独给药组比较时的显著差异。N.S.：表示在将联用组与化疗剂单独给药组比较时没有显著差异(Student'st-test)。
8)结论
FK330在单独使用时未确认到抗肿瘤效果，但是使紫杉醇和多西他赛的抗肿瘤效果增强。另一方面，不影响伊立替康、吉西他滨、多柔比星和卡铂的抗肿瘤效果。这些结果暗示了FK330选择性地增强紫杉烷类抗肿瘤剂的抗肿瘤效果。
实施例2
1)受试物质
FK330的用量用含有水合物的重量表示。紫杉醇注射剂(紫杉醇注射液“サワイ”)从泽井制药株式会社购入，作为紫杉醇使用。
2)受试物质的制备和给药
FK330悬浊于0.5%甲基纤维素水溶液(0.5%MC)(20mg/mL)。紫杉醇在使用时用注射用生理盐水(大冢制药)制备成1mg/mL。
3)细胞
来源于人肺癌的Calu6(HTB-56)从美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(VA,USA)获得。细胞使用添加有10%的加热灭活后的胎牛血清(FBS)的RPMI1640培养基，在37℃、5%CO2的条件下进行培养。用PBS将使用胰蛋白酶回收的细胞悬浊至6×107个细胞/mL，与等量的Matrigel(商标)基底膜基质(Becton DickinsonCo.制,Bedford,MA,USA)混合。
4)动物
5周龄的雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxn1nu/CrlCrlj(nu/nu))从日本チャールスリバー公司(日本、神奈川)购入。动物在整个试验期间在特定的未感染病原体(SPF)的条件下供给标准的饲料和饮水进行饲养。以3×106个细胞/0.1mL/小鼠将培养得到的细胞移植到裸鼠的背部皮下。为了减小组间和组内的肿瘤体积偏差，使用SAS将肿瘤体积(短径×[长径]2×0.5)从126.1到299.0mm3的裸鼠分组。
5)给药和测定
将给药第一天作为Day1，观察到Day83。如下地处理各个组(n=6)。FK330以5mL/kg进行强制口服给药，紫杉醇以10mL/kg进行尾静脉内给药。紫杉醇在从Day1到Day7连续给药后停药24天(第1个周期)。在PTX的第2个周期和第3个周期的给药中，分别从Day31或Day60连续给药6天。
对照组：未处置
FK330单独给药组：FK330100mg/kg bid(200mg/kg/day、从实验开始到结束时为止连续给药)
紫杉醇单独给药组：紫杉醇10mg/kg/day(在第1个周期中连续给药7天，在第2个周期以后连续给药6天)
联用组：
FK330100mg/kg/kg bid(200mg/kg/day、从实验开始到实验结束时为止连续给药)+紫杉醇10mg/kg/day(在第1个周期中连续给药7天，在第2个周期以后连续给药6天)
FK330以6到8小时的间隔，1天2次强制口服给药(5mL/kg)。紫杉醇在给用FK330后2～4小时后从尾静脉进行静脉内推注给药(10mL/kg)。
每3～4天利用体重和电子游标卡尺测定肿瘤径。肿瘤体积通过(短径×[长径]2×0.52)的椭圆体积的算式算出。
6)统计分析
结果用平均值(Mean)±标准误差(SEM)表示。试验期间中，将触诊界限以下判定为完全消失(CR)，测定值为0。针对各测定时的肿瘤体积的实测值，在单独给药组和联用组进行不对应的2组间的差异的检验(Student's t-test)，将小于5%判定为有显著差异。数据处理使用SAS。
7)结果
对FK330的紫杉醇多周期给药时的联用作用进行了研究。结果示于图7。对于人非小细胞肺癌(Calu-6)荷瘤小鼠，确认到随着多周期给药，紫杉醇的抗肿瘤效果有减弱的倾向。FK330显著增强紫杉醇的抗肿瘤效果，Day29的相对于紫杉醇单独组的肿瘤体积减少率为57.6%(P<0.01)，Day60的相对于紫杉醇单独组的肿瘤体积减少率为86.1%(P<0.01)，Day83的相对于紫杉醇单独组的肿瘤体积减少率为87.6%(P<0.01)。
结果用平均值(Mean)±标准误差(SEM)表示(n=6)。**：P<0.01表示将联用组与化疗剂单独给药组比较时的显著差异(Student's t-test)。
8)结论
对于人非小细胞肺癌(Calu-6)荷瘤小鼠而言，紫杉醇的抗肿瘤效果周期依赖性地减弱。另一方面，FK330的联用增强了基于多周期给药的紫杉醇的抗肿瘤效果，显著抑制了肿瘤的再增殖。该结果暗示了FK330改善基于多周期处置的紫杉烷类药剂的抗肿瘤效果的减弱。
实施例3
受试物质的制备和细胞的调整与实施例2同样地进行。
1)动物
5周龄的雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxn1nu/CrlCrlj(nu/nu))从日本チャールスリバー公司(日本、神奈川)购入。动物在整个试验期间在特定的未感染病原体(SPF)的条件下供给标准的饲料和饮水进行饲养。以3×106个细胞/0.1mL/小鼠将培养得到的细胞移植到裸鼠的背部皮下。为了减小组间和组内的肿瘤体积偏差，使用SAS将肿瘤体积(短径×[长径]2×0.5)从123.3到274.4mm3的裸鼠分组。
2)给药和测定
将给药第一天作为Day0，观察到Day59。如下地处理各个组(n=5)。FK330以5mL/kg进行强制口服给药，紫杉醇以10mL/kg进行尾静脉内给药。紫杉醇在从Day0到Day5的连续给药后，设定21天的停药期，将其作为1个周期，给药到第2个周期。
对照组：未处置
紫杉醇单独给药组：紫杉醇10mg/kg/day(在第1个周期中从Day0开始连续给药6天，在第2个周期中从Day27开始连续给药6天)
联用组：
FK33030mg/kg bid(60mg/kg/day)+紫杉醇10mg/kg/day(在第1个周期中从Day0开始6天给药连续，在第2个周期中从Day27开始连续给药6天)
FK33060mg/kg bid(120mg/kg/day)+紫杉醇10mg/kg/day(在第1个周期中从Day0开始连续给药6天，在第2个周期中从Day27开始连续给药6天)
FK330100mg/kg bid(200mg/kg/day)+紫杉醇10mg/kg/day(在第1个周期中从Day0开始连续给药6天，在第2个周期中从Day27开始连续给药6天)
FK330以6到8小时的间隔，1天2次强制口服给药(5mL/kg)。紫杉醇在给用FK330后2～4小时后从尾静脉进行静脉内推注给药(10mL/kg)。
每3～4天利用体重和电子游标卡尺测定肿瘤径。肿瘤体积通过(短径×[长径]2×0.52)的椭圆体积的算式算出。
3)结果
对FK330的紫杉醇的抗肿瘤效果增强作用的用量依赖性进行了研究，结果示于图8。结果用平均值(Mean)±标准误差(SEM)表示(n=4到5)。对于试验结束时(Day59)的肿瘤体积，紫杉醇单独组是1640.1±902.8mm3，FK33030mg/kg bid联用组是955.9±231.0mm3，FK33060mg/kgbid联用组是706.2±256.1mm3，FK330100mg/kg bid联用组是297.9±101.4mm3，FK330用量依赖性地增强了紫杉醇的抗肿瘤效果(相对于紫杉醇单独组的肿瘤体积减少率：FK33030mg/kg bid为41.7%、FK33060mg/kg bid为56.9%、FK330100mg/kg bid为81.8%)。
4)结论
FK330的联用呈用量依赖性地增强了紫杉醇的抗肿瘤效果。
实施例4
受试物质的制备和细胞的调整与实施例2同样地进行。
1)动物
5周龄的雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxn1nu/CrlCrlj(nu/nu))从日本チャールスリバー公司(日本、神奈川)购入。动物在整个试验期间在特定的未感染病原体(SPF)的条件下供给标准的饲料和饮水进行饲养。以3×106个细胞/0.1mL/小鼠将培养得到的细胞移植到裸鼠的背部皮下。为了减小组间和组内的肿瘤体积偏差，使用SAS将肿瘤体积(短径×[长径]2×0.5)从142.1到323.7mm3的裸鼠分组。
2)给药和测定
将给药第一天作为Day0，观察到Day55。如下地处理各个组(n=5或6)。FK330以5mL/kg进行强制口服给药，紫杉醇以10mL/kg进行尾静脉内给药。紫杉醇在从Day0到Day5的连续给药后，设定21天的停药期，并从Day27到Day31连续5天给药。
对照组：未处置
紫杉醇单独给药组：紫杉醇10mg/kg/day(到Day0到Day5和从Day27到Day31)
联用组：
同时给药FK330100mg/kg bid(200mg/kg/day)+紫杉醇10mg/kg/day(从Day0到Day5和从Day27到Day31)
依次给药FK330100mg/kg bid(200mg/kg/day)+紫杉醇10mg/kg/day(从Day0到Day5和从Day27到Day31)
连续给药FK330100mg/kg bid(200mg/kg/day)+紫杉醇10mg/kg/day(从Day0到Day5和从Day27到Day31)
FK330以6到8小时的间隔，1天2次强制口服给药(5mL/kg)。对于同时给药，FK330在紫杉醇的给药日(从Day0到Day5和从Day27到Day31)给药，对于连续给药，FK330在紫杉醇给药日后的停药日(从Day6到Day26和从Day32到Day55)给药，连续给药从实验开始日到实验结束日为止每天给药。紫杉醇在给用FK330后2～4小时后从尾静脉进行静脉内推注给药(10mL/kg)。
每3～4天利用体重和电子游标卡尺测定肿瘤径。肿瘤体积通过(短径×[长径]2×0.52)的椭圆体积的算式算出。
3)结果
对于人非小细胞肺癌(Calu-6)荷瘤小鼠，研究了紫杉醇联用时FK330的给药时机，结果示于图9。结果用平均值(Mean)±标准误差(SEM)表示(n=5或6)。
试验期间中，将触诊界限以下判定为完全消失(CR)，测定值为0。对于试验结束时(Day55)的肿瘤体积，紫杉醇单独组为1229.2±289.6mm3，紫杉醇和FK330的同时给药时是559.8±161.8mm3，FK330的依次给药时是1150.9±264.9mm3，FK330的连续给药时是168.5±66.0mm3，相对于紫杉醇单独组的肿瘤体积减少率分别是54.5%、6.4%和86.3%。
4)结论
暗示了FK330的给药时机从紫杉烷类药剂的给药开始日开始在周期期间中连续给药时联用效果最高。
实施例5
受试物质的制备与实施例2同样地进行。
1)细胞
来源于人胃癌的NCI-N87(CRL-5822)从美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(VA,USA)获得，MKN-28(JCRB0253)从药物基础研究所(HSRRB)获得，AZ-521(RCB2087)从理研BRC获得。NCI-N87和MKN-28细胞使用添加有10%的加热灭活后的胎牛血清(FBS)的RPMI1640培养基，AZ-521使用含有10%的加热灭活后的FBS的DMEM培养基，在37℃、5%CO2的条件下进行培养。用PBS将使用胰蛋白酶回收的细胞悬浊至6×107个细胞/mL，与等量的Matrigel(商标)基底膜基质(Becton Dickinson Co.制,Bedford,MA,USA)混合。
2)动物
5周龄的雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxn1nu/CrlCrlj(nu/nu))从日本チャールスリバー公司(日本、神奈川)购入。动物在整个试验期间在特定的未感染病原体(SPF)的条件下供给标准的饲料和饮水进行饲养。以3×106个细胞/0.1mL/小鼠将培养得到的细胞移植到裸鼠的背部皮下。为了减小组间和组内的肿瘤体积偏差，使用SAS，对于AZ-521荷瘤小鼠，将肿瘤体积(短径×[长径]2×0.5)从386.6到766.6mm3的裸鼠分组，对于MKN-28荷瘤小鼠，将肿瘤体积从186.0到319.2mm3的裸鼠分组，对于NCI-N87荷瘤小鼠，将肿瘤体积从192.1到364.2的裸鼠分组。
3)给药和测定
将给药第一天作为Day0，对AZ-521荷瘤小鼠观察到Day46，对MKN-28荷瘤小鼠观察到Day84，对NCI-N87荷瘤小鼠观察到Day56。如下地处理各个组(n=5或6)。FK330以5mL/kg进行强制口服给药，紫杉醇以10mL/kg进行尾静脉内给药。紫杉醇在下述条件下进行多周期给药。
对照组：未处置
FK330单独给药组：FK330100mg/kg bid(200mg/kg/day、从实验开始到实验结束时为止连续给药)
紫杉醇单独给药组：紫杉醇10mg/kg/day
AZ-521荷瘤小鼠：
将紫杉醇从Day0到Day5连续给药6天后，设置22天的停药期(第1个周期)、将紫杉醇从Day28到Day32连续给药5天(第2个周期)。
MKN-28荷瘤小鼠：
将紫杉醇从Day0到Day5连续给药6天后，在22天的停药期后，从Day28到Day32连续给药5天，设置23天的停药期(第2个周期)。进而，从Day56到Day60连续给药5天(第3个周期)。
NCI-N87荷瘤小鼠：
将紫杉醇从Day0到Day5连续给药6天后，在26天的停药期后，从Day32到Day36连续给药5天(第2个周期)。
联用组：
FK330100mg/kg bid(200mg/kg/day、从实验开始到实验结束时为止连续给药)+紫杉醇10mg/kg/day
FK330以6到8小时的间隔，1天2次强制口服给药(5mL/kg)。紫杉醇在给用FK330后2～4小时后从尾静脉进行静脉内推注给药(10mL/kg)。
每3～4天利用体重和电子游标卡尺测定肿瘤径。肿瘤体积通过(短径×[长径]2×0.52)的椭圆体积的算式算出。
4)统计分析
结果用平均值(Mean)±标准误差(SEM)表示。针对各测定时的肿瘤体积的实测值，在单独给药组和联用组进行不对应的2组间的差异的检验(Student's t-test)，将小于5%判定为有显著差异。数据处理使用Graphpad Prism version5.03。
5)结果
对于人胃癌(AZ-521、MKN-28、NCI-N87)荷瘤小鼠，研究了FK330的与紫杉醇的联用效果，结果示于图10至图12。即，将AZ-521荷瘤小鼠中FK330和紫杉醇的联用效果示于图10，将MKN-28荷瘤小鼠中的联用效果示于图11，将NCI-N87荷瘤小鼠中的联用效果示于图12。与人非小细胞肺癌荷瘤小鼠同样地，FK330增强了紫杉醇的抗肿瘤效果。对于AZ-521荷瘤小鼠而言，实验最后一天的紫杉醇单独组的肿瘤体积为3285.4±359.4mm3，紫杉醇和FK330的联用组为795.0±223.3mm3，相对于紫杉醇单独组，肿瘤体积减少了75.8%(P<0.01)。对于MKN-28和NCI-N87荷瘤小鼠而言，FK330也增强了紫杉醇的抗肿瘤效果(MKN-28荷瘤小鼠：454.1±147.5mm3vs164.8±18.5mm3、减少了63.7%、P=0.08，NCI-N87荷瘤小鼠：492.0±48.5mm3vs223.9±85.1mm3、减少了54.5%、P<0.03)。
结果用平均值(Mean)±标准误差(SEM)表示(n=5或6)。P值表示将联用组与化疗剂单独给药组比较时的显著差异(Student's t-test)。
6)结论
FK330的联用增强了人胃癌荷瘤模型中紫杉醇的抗肿瘤效果，特别是，观察到改善基于多周期处置的紫杉醇的抗肿瘤效果的减弱的效果。
实施例6
1)受试物质
FK330的用量换算成单体(非水合物)重量来表示。紫杉醇从LCLaboratories公司(Woburn,MA,USA)购入，作为紫杉醇使用。
2)受试物质的制备和给药
FK330悬浊于0.5%甲基纤维素水溶液(0.5%MC)(20mg/mL)，口服给药。紫杉醇用乙醇/发色团溶液(以1:1混合)制备10mg/mL的储备溶液后，在给药之前用注射用生理盐水(大冢制药)稀释成1mg/mL，尾静脉内给药。
3)细胞
来源于人乳腺癌的MDA-MB-231(HTB-26)从美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(VA,USA)获得。细胞使用添加有10%的加热灭活后的胎牛血清(FBS)的DMEM培养基，在37℃、5%CO2的条件下进行培养。用PBS将使用胰蛋白酶回收的细胞悬浊至6×107个细胞/mL，与等量的Matrigel(商标)基底膜基质(Becton Dickinson公司制,Bedford,MA,USA)混合。
4)动物
5周龄的雌性裸鼠(CAnN Cg-Foxn1nu/CrlCrlj(nu/nu))从日本チャールスリバー公司(日本、神奈川)购入。动物在整个试验期间在特定的未感染病原体(SPF)的条件下供给标准的饲料和饮水进行饲养。以3×106个细胞/0.1mL/小鼠将培养得到的细胞移植到裸鼠的背部皮下。为了减小组间和组内的肿瘤体积偏差，使用SAS将肿瘤体积(短径×[长径]2×0.5)从148.7到312.5mm3的裸鼠分组。
5)给药和测定
将给药第一天作为Day1，观察到Day66。如下地处理各个组(n=6)。FK330以5mL/kg进行强制口服给药，紫杉醇以10mL/kg进行尾静脉内给药。紫杉醇在从Day1到Day4连续给药4天后，停药25天(第1个周期)。在PTX的第2个周期的给药时，从Day30开始连续给药4天。
对照组：未处置
FK330单独给药组：FK330100mg/kg bid(200mg/kg/day、从实验开始到实验结束时为止连续给药)
紫杉醇单独给药组：紫杉醇10mg/kg/day(各周期中连续给药4天)
联用组：
FK330100mg/kg/kg bid(200mg/kg/day、从实验开始到实验结束时为止连续给药)+紫杉醇10mg/kg/day(各周期中连续给药4天)
FK330以6到8小时的间隔，1天2次强制口服给药(5mL/kg)。紫杉醇在给用FK330后1～4小时后从尾静脉进行静脉内推注给药(10mL/kg)。
利用体重和电子游标卡尺，每周2次测定肿瘤径。肿瘤体积通过(短径×[长径]2×0.52)的椭圆体积的算式算出。
6)统计分析
结果用平均值(Mean)±标准误差(SEM)表示。试验期间中，将触诊界限以下判定为完全消失(CR)，测定值为0。针对各测定时的肿瘤体积的实测值，关于单独给药组和联用组的比较，进行不对应的2组间的差异的检验(Student's t-test)，将小于5%判定为有显著差异。数据处理使用Graphpad Prism version5.03。
7)结果
对人乳腺癌荷瘤小鼠中FK330的与紫杉醇的联用效果进行了研究，结果示于图13。对于人乳腺癌(MDA-MB-231)荷瘤小鼠而言，FK330显著地增强了紫杉醇的抗肿瘤效果，Day28的相对于紫杉醇单独组的肿瘤体积减少率为59.6%(P<0.01)，Day66的相对于紫杉醇单独组的肿瘤体积减少率为82.8%(P<0.01)。
结果用平均值(Mean)±标准误差(SEM)表示(n=6)。**：P<0.01表示将联用组与紫杉醇单独给药组比较时的显著差异(Student's t-test)。
8)结论
对于人乳腺癌(MDA-MB-231)荷瘤小鼠而言，FK330的联用增强了基于多周期给药的紫杉醇的抗肿瘤效果，明显地抑制了肿瘤的再增殖。
实施例7
1)受试物质
作为NO供体的S-亚硝基-N-乙酰基-D,L-青霉胺(SNAP)使用从Cayman Chemical公司(Ann Arbor,MI,USA)购入的物质。微管蛋白聚合测定试剂盒使用从Cytoskeleton公司(Denver,CO,USA)购入的试剂盒。对于紫杉醇，将测定试剂盒附带的紫杉醇作为紫杉醇使用。多西他赛从Sigma-Aldrich公司(St.Louis,MO,USA)购入，作为多西他赛使用。
2)试验方法
基于荧光法的微管蛋白聚合反应测定根据试剂盒的说明书实施。即，将与来源于精制猪脑的微管蛋白(终浓度2mg/mL)和SNAP(终浓度200或500μmol/L)在试剂盒附带的缓冲液中、在室温下进行15分钟以上的孵育。接着，将紫杉醇(终浓度3μmol/L)或多西他赛(终浓度1μmol/L)以及GPT(终浓度1mmol/L)加到该缓冲液中，在37℃下孵育60分钟。在该孵育期间，利用酶标仪(SpectraMax公司,Molecular Devices公司,Sunnyvale,CA,USA)每1分钟测定荧光强度(测定波长：激发350nm/荧光435nm)。荧光强度的值使用相当于平衡稳态期的反应开始60分钟后的值，以相对于SNAP和紫杉烷未处置组的百分率表示，将实施3次后的平均值作为其值。
3)统计分析
结果用独立的5次实验的平均值(Mean)±标准误差(SEM)表示。关于紫杉醇或多西他赛处置组与未处置组的比较，进行不对应的2组间的差异的检验(Student's t-test)。关于紫杉烷类药剂处置和未处置时的SNAP未处置组(对照组)与SNAP处置组(200和500μmol/L)的比较，进行Dunnett's多重比较检验。将小于5%判定为有显著差异。数据处理使用Graphpad Prism version5.03。
4)结果
将SNAP对紫杉醇诱发微管蛋白聚合作用的抑制作用的代表例和微管蛋白聚合开始后60分钟的合计值示于图14的A)和B)，将SNAP对多西他赛诱发微管蛋白聚合的抑制作用的代表例和微管蛋白聚合开始后60分钟的合计值示于图15的A)和B)。紫杉醇或多西他赛与各紫杉烷未处置比较，将微管蛋白聚合分别显著地促进了152.7%(P<0.05)和184.1%(P<0.001)。作为NO供体的SNAP显著地抑制了由紫杉醇和多西他赛促进的微管蛋白聚合反应。另外，SNAP也显著地抑制了自然发生的微管蛋白聚合反应。
结果用平均值(Mean)±标准误差(SEM)表示(n=5)。#：P<0.05和###：P<0.001表示对紫杉醇或多西他赛处置组和各紫杉烷药剂未处置组进行比较时的显著差异(Student's t-test)。$：P<0.05和$$$：P<0.001表示紫杉烷未处置中SNAP处置组相对于SNAP未处置组(对照组)的显著差异(Dunnett's多重比较检验)。*：P<0.05、**：P<0.01和***：P<0.001表示紫杉烷处置中SNAP处置组相对于SNAP未处置组(对照组)的显著差异(Dunnett's多重比较检验)。
5)结论
NO供体直接抑制了由紫杉醇和多西他赛促进的微管蛋白聚合反应。
实施例8
1)受试物质
FK330的用量换算成单体(非水合物)重量来表示。紫杉醇注射剂(紫杉醇注射液“サワイ”)从泽井制药株式会社购入，作为紫杉醇使用。大鼠抗小鼠F4/80抗原单克隆抗体、兔抗iNOS多克隆抗体以及兔抗硝基酪氨酸抗体分别使用从AbD Serotec公司(Oxford,UK)、Santa CruzBiotechnology公司(Santa Cruz,CA,US)和Millipore公司(Billerica,MA,USA)购入的抗体。
2)受试物质的制备和给药
FK330悬浊于0.5%甲基纤维素水溶液(0.5%MC)(20mg/mL)，口服给药。紫杉醇在使用时用注射用生理盐水(大冢制药)制备成1mg/mL。
3)细胞
来源于人肺癌的Calu-6(HTB-56)从美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(VA,USA)获得。细胞使用添加有10%的加热灭活后的胎牛血清(FBS)的RPMI1640培养基，在37℃、5%CO2的条件下进行培养。用PBS将使用胰蛋白酶回收的细胞悬浊至6×107个细胞/mL，与等量的Matrigel(商标)基底膜基质(Becton Dickinson公司,Bedford,MA,USA)混合。
4)动物
5周龄的雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxn1nu/CrlCrlj(nu/nu))从日本チャールスリバー公司(日本、神奈川)购入。动物在整个试验期间在特定的未感染病原体(SPF)的条件下供给标准的饲料和饮水进行饲养。以3×106个细胞/0.1mL/小鼠将培养得到的细胞移植到裸鼠的背部皮下。为了减小组间和组内的肿瘤体积偏差，使用SAS将肿瘤体积(短径×[长径]2×0.5)从136.8到248.5mm3的裸鼠分组。
5)给药
给药从给药第一天(Day1)开始。如下地处理每个组(n=5)。FK330以5mL/kg从Day1到Day6强制口服给药，紫杉醇以10mL/kg从Day1到Day5进行尾静脉内给药。
对照组：未处置
FK330单独给药组：FK330100mg/kg bid(200mg/kg/day、从Day1到Day6)
紫杉醇单独给药组：紫杉醇10mg/kg/day(从Day1到Day5)
联用组：FK330100mg/kg/kg bid(200mg/kg/day、从Day1到Day6)+紫杉醇10mg/kg/day(从Day1到Day5)
FK330以6到8小时的间隔，1天2次强制口服给药(5mL/kg)。紫杉醇在给用FK330后1～4小时后从尾静脉进行静脉内推注给药(10mL/kg)。
6)组织固定和冷冻切片制作
在Day6从小鼠采集肿瘤组织。用4%多聚甲醛-磷酸缓冲液(和光纯药工业株式会社)在4℃下进行12小时的浸润固定。关于组织固定度，使用10%、15%和20%蔗糖/磷酸缓冲液，根据常法，在4℃下阶段性地进行蔗糖置换。置换结束后，在O.C.T.冷冻切片包埋剂(TorontoResearch Chemicals公司,Toronto,Canada)中包埋癌组织，用干冰/丙酮制成冷冻切片，在-80℃下保存。
7)免疫化学染色和图像分析
用低温恒温器(Sakura Finetech日本株式会社)制作5μm薄的冷冻切片，并风干。用4%多聚甲醛-磷酸缓冲液清洗干燥后的冷冻切片后，为了使内源性过氧化物酶失活，用0.3%过氧化氢/甲醇对切片进行30分钟处理。小鼠巨噬细胞、iNOS和硝基酪氨酸染色按照以下步骤进行。关于iNOS和硝基酪氨酸染色，在进行免疫化学染色前，利用微波(3分钟/500W)进行抗原激活。
小鼠巨噬细胞染色：
一次抗体处理：与大鼠抗小鼠F4/80抗原单克隆抗体(1:200稀释)在室温下孵育60分钟。
二次抗体处理：与生物素化抗大鼠IgG抗体(1:100稀释,vectorlaboratories公司)在室温下孵育30分钟。
检测系统：使用VECTASTAIN ABC试剂盒(Vector Laboratories公司)，将切片在室温下孵育30分钟。
显色：使用3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐(DAB，Dako公司)试剂，在室温下处理1分钟。
iNOS染色：
一次抗体处理：与兔抗iNOS多克隆抗体(1:500稀释)在4℃下孵育一昼夜。
检测系统：使用EnVision(DAKO;)，将切片在室温下孵育30分钟。
显色：使用DAB试剂，在室温下处理1分钟。
硝基酪氨酸染色：
一次抗体处理：与兔抗硝基酪氨酸抗体(1:500稀释)在4℃下孵育一昼夜。
检测系统：使用EnVision(DAKO;)，将切片在室温下孵育30分钟。
显色：使用DAB试剂，在室温下处理1分钟。
染色后的图像(F4/80染色图像和iNOS图像为200倍、硝基酪氨酸染色图像为400倍)经由显微镜进入电脑，利用搭载有WinROOF(第5.7版)的图像分析系统(三谷商事株式会社)进行分析。值用每单位总面积的阳性面积的比(%)来表示。每个切片测量5个视野，将其平均值作为值。
8)统计分析
结果用平均值(Mean)±标准误差(SEM)表示。针对肿瘤组织内iNOS蛋白表达、巨噬细胞(F4/80)浸润和硝基酪氨酸(NO的主要终产物)的各测定值，关于对照组与紫杉醇单独组、FK330单独组或紫杉醇和FK330联用组的比较、以及紫杉醇单独组与紫杉醇和FK330联用组的比较，进行不对应的2组间的差异的检验(Student's t-test)。将小于5%判定为有显著差异。数据处理使用Graphpad Prism version5.03。
9)结果
将人肺癌细胞株Calu-6荷瘤小鼠中紫杉醇单独和联用FK330时对肿瘤组织内iNOS蛋白表达、巨噬细胞(F4/80)浸润和硝基酪氨酸(NO的主要终产物)表达的作用示于图16至18。在对照组的肿瘤组织内中几乎没有观察到iNOS阳性细胞和巨噬细胞，硝基酪氨酸(NO的终产物)也低。另一方面，显著观察到通过给用紫杉醇而使巨噬细胞向肿瘤组织内浸润。另外，肿瘤组织内iNOS蛋白表达也显著亢进，其结果，肿瘤组织内硝基酪氨酸量也增加。作为iNOS抑制剂的FK330的联用对肿瘤内巨噬细胞浸润和iNOS蛋白表达几乎不产生作用，但抑制了硝基酪氨酸产生。
结果用平均值(Mean)±标准误差(SEM)表示(n=5)。***：P<0.001表示与对照组比较时的显著差异(Student's t-test)。
10)结论
对于人肺癌(Calu-6)荷瘤小鼠而言，紫杉醇诱发了巨噬细胞向肿瘤组织内的浸润和肿瘤组织内iNOS蛋白表达，其结果，诱发了肿瘤内NO产生。作为iNOS抑制剂的FK330的联用抑制了由紫杉醇诱发的来源于iNOS的NO产生。
产业实用性
对于本发明的以与紫杉烷类抗肿瘤剂组合地联合给药的方式使用为特征的、含有FK330或其盐作为有效成分的癌症治疗用组合物，通过与紫杉烷类抗肿瘤剂的联用而得到高的癌症治疗效果，因此，特别是对已知适应现有紫杉烷类抗肿瘤剂的各种癌症的治疗是有用的。作为适用的癌症，是使用紫杉烷类抗肿瘤剂的实体瘤和淋巴瘤，作为某种方式，可以列举：乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、胃(胃腺)癌、非小细胞肺癌、胰腺癌、头颈部鳞癌、食道癌、膀胱癌、黑色素瘤、大肠癌、肾细胞癌、非霍奇金淋巴瘤等。

Claims (19)

1.一种癌症治疗用组合物，含有N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯酰基]-N-[2-氧代-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙氨酰胺或其盐作为有效成分，其特征在于，以与选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂组合地联合给药的方式使用。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，以与紫杉醇或多西他赛组合地联合给药的方式使用。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，以与紫杉醇组合地联合给药的方式使用。
4.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，以与多西他赛组合地联合给药的方式使用。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其为包含60～1200mg/天的N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯酰基]-N-[2-氧代-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙氨酰胺或其盐的口服给药用组合物。
6.根据权利要求5所述的组合物，其为包含60～200mg/天的N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯酰基]-N-[2-氧代-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙氨酰胺或其盐的口服给药用组合物。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其特征在于，以进一步与选自含铂抗肿瘤剂、蒽环类抗肿瘤剂、环磷酰胺、氟尿嘧啶、曲妥珠单抗和卡培他滨的一种以上抗肿瘤剂组合地联合给药的方式使用。
8.根据权利要求1至6中任一项所述的癌症治疗用组合物，其特征在于，与选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂同时、分开、连续、或间隔地给药。
9.一种用于治疗接受基于选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的治疗的对象的癌症治疗用组合物，其含有N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯酰基]-N-[2-氧代-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙氨酰胺或其盐作为有效成分。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的癌症治疗用组合物，其用于治疗使用紫杉烷类抗肿瘤剂的癌症。
11.根据权利要求10所述的癌症治疗用组合物，其中，使用紫杉烷类抗肿瘤剂的癌症为非小细胞肺癌。
12.根据权利要求10所述的癌症治疗用组合物，其中，使用紫杉烷类抗肿瘤剂的癌症为乳腺癌。
13.N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯酰基]-N-[2-氧代-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙氨酰胺或其盐在制造癌症治疗用组合物中的应用，该癌症治疗用组合物的特征在于，以与选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂组合地联合给药的方式使用。
14.N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯酰基]-N-[2-氧代-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙氨酰胺或其盐，用于治疗癌症，其特征在于，以与选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂组合地联合给药的方式使用。
15.一种癌症的治疗方法，其特征在于，将用于选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的联合治疗时的治疗有效用量以及用于N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯酰基]-N-[2-氧代-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙氨酰胺或其盐的联合治疗时的治疗有效用量组合对对象进行给药。
16.一种癌症的治疗方法，其特征在于，同时、分开、连续、或间隔地对对象给用用于选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的联合治疗时的治疗有效用量以及用于N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯酰基]-N-[2-氧代-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙氨酰胺或其盐的联合治疗时的治疗有效用量。
17.一种选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的抗肿瘤作用增强剂，其含有N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯酰基]-N-[2-氧代-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙氨酰胺或其盐作为有效成分。
18.一种选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的抗性化抑制剂或抗性化预防剂，其含有N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯酰基]-N-[2-氧代-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙氨酰胺或其盐作为有效成分。
19.一种选自紫杉烷类抗肿瘤剂的一种以上抗肿瘤剂的敏感性增强剂，其含有N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯酰基]-N-[2-氧代-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙氨酰胺或其盐作为有效成分。
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