KR20140056238A - 약제의 병용에 의한 암 치료 방법 - Google Patents

약제의 병용에 의한 암 치료 방법 Download PDF

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Abstract

탁산계 항종양제의 각종 종양에 대한 약효를 증대시키는 치료 방법이 요구되고 있다.
본 발명자는, 탁산계 항종양제의 항종양 작용 증강 방법에 대하여 검토한 결과, N2-[(2E)-3-(4-클로로페닐)-2-프로페노일]-N-[2-옥소-2-(4-{[6-(트리플루오로메틸)피리미딘-4-일]옥시}피페리딘-1-일)에틸]-3-피리딘-2-일-L-알라닌아미드(FK330) 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는 암 치료용 조성물이 탁산계 항종양제의 항종양 작용을 증강시키는 것을 확인하여, 본 발명을 완성하였다. 즉, 본원은, 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제와의 병용 투여용인, FK330 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는 암 치료용 조성물에 관한 것이다.

Description

약제의 병용에 의한 암 치료 방법{METHOD FOR TREATING CANCER BY COMBINED USE OF MEDICINAL AGENTS}
본 발명은 의약, 특히 N2-[(2E)-3-(4-클로로페닐)-2-프로페노일]-N-[2-옥소-2-(4-{[6-(트리플루오로메틸)피리미딘-4-일]옥시}피페리딘-1-일)에틸]-3-피리딘-2-일-L-알라닌아미드 또는 그의 염을 유효 성분으로서 포함하는, 탁산계 항종양제와 병용하기 위한 암 치료용 조성물에 관한 것이다.
악성 종양의 화학 요법에 있어서, 탁산계 항종양제, 특히 파클리탁셀이나 도세탁셀은 몇 개의 암종에서 유효한 약제로서 사용되고 있다.
탁산계 항종양제는 세포 분열에 필요한 미소관의 탈중합을 저해함으로써, 암 세포의 분열을 저해하는 것이 알려져 있다. 파클리탁셀은 난소암, 비소세포 폐암, 유방암, 위암 등의 치료에, 도세탁셀은 유방암, 비소세포 폐암, 위암, 두경부암, 난소암, 식도암, 자궁체암 등의 치료에 사용되고 있다.
임상의 장소에 있어서는, 약효의 증강이나 항암 스펙트럼의 확대를 목적으로 탁산계 항종양제와 작용 기서가 상이한 다른 항종양제를 조합한 다제 병용 요법이 행해지고 있다. 예를 들면, 파클리탁셀과 카르보플라틴의 병용(Cancer, 1996, 77:2458-63.)이나, 도세탁셀과 시스플라틴 등의 병용이 알려져 있다(Eur. J. Surg. Oncol. 2006 32(3) 297-302). 또한, 미국 식품 의약품국(FDA)이 제공하는 각종 데이터 베이스, 예를 들면 "Drugs＠FDA" (http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cder/drugsatfda/index.cfm)나 유럽 의약품청(EMA)의 홈페이지(http://www.ema.europa.eu/)에는, 파클리탁셀이나 도세탁셀과 다른 항종양제를 병용하는 임상 요법이 개시되어 있다.
일반적으로 항종양제의 투여량을 많게 하면 부작용도 그에 비례하여 보이기 때문에, 그의 투여는 신중하게 이루어질 필요가 있다. 그 때문에, 항종양제의 투여에 있어서는 부작용의 관점에서 최대 내용량(MTD)이 설정되어, 그의 투여량이 제한되어 있다. 또한, 예를 들면 일본의 의약품 의약 기기 정보 제공 홈페이지의 탁솔주(등록 상표: 파클리탁셀의 상품명)의 첨부 문서에 따르면, 파클리탁셀은 「1일 1회 210mg/m2를 3시간에 걸쳐서 점적 정맥 주사하고, 적어도 3주일 휴약한다. 이것을 1 기간으로서 투여를 반복한다. 또한, 투여량은, 연령, 증상에 따라 적절히 감량한다」고 기재되어 있는 바와 같이, 파클리탁셀은 용량 뿐만 아니라 투여 방법도 특정되어 있다. 또한, 탁소텔주(등록 상표: 도세탁셀의 상품명)에 대해서도 「1회 최고 용량은 70mg/m2로 한다」는 기재가 있어 용량이 지시되어 있다.
한편, 양호한 일산화질소(NO) 합성 효소(NOS) 저해 활성을 갖는 펩티드 유도체가 국제 공개 02/055541호 공보(특허문헌 1)에 개시되어 있다. 특히, 당해 공보에 실시예 41로서 개시되어 있으며, 하기 식으로 표시되는 N2-[(2E)-3-(4-클로로페닐)-2-프로페노일]-N-[2-옥소-2-(4-{[6-(트리플루오로메틸)피리미딘-4-일]옥시}피페리딘-1-일)에틸]-3-피리딘-2-일-L-알라닌아미드(FR260330 또는 FK330이라고 칭함)는 우수한 유도형 일산화질소 합성 효소(유도성(inducible) NOS, iNOS) 저해 활성을 나타내는 것이 보고되고 있어 있고(비특허문헌 1), FK330이 래트 대동맥 이식의 만성 거절 모델에서 유효하다는 것이 보고되어 있다(비특허문헌2). 또한, 원숭이 신장 허혈/재관류 장해 및 래트 간 이식에서의 허혈/재관류 장해에서도 유효하다는 것(비특허문헌 3, 4)이나, TGFβ1의 증가 또는 성세포(stellate cell)의 활성화에 의해 유도되는 섬유화를 억제하여, 간 경변 치료에 유효하다는 것(특허문헌 2, 비특허문헌 5), 나아가 염증성 각화증, 각화증 또는 염증성 피부 질환에도 유효하다는 것(특허문헌 3)이 이미 보고되어 있다.
Figure pct00001
iNOS는 상피 세포, 평활근 세포, 매크로파지 등의 다양한 타입의 세포에서 발현이 관찰되며, 감염이나 염증 등에 의해 유도된 사이토카인 등에 의해 전사 레벨에서 그의 발현이 유도되어, NO를 생산한다. iNOS는, 감염이나 생체 방어 등에서의 중심적인 매개체의 역할을 담당하고 있다.
NO는 암의 진행 또는 전이를 촉진시키는 한편, 이들을 억제하는 경우가 있다는 것도 지금까지의 수많은 연구로부터 밝혀져 있다. NO의 암에서의 작용은, NOS아이소폼의 활성이나 국재성, NO 폭로의 농도나 기간, NO에 대한 세포의 감수성에 의존하는(비특허문헌 6) 것이 보고되고 있으며, NO 생산 촉진 및 NO 생산 억제의 양면으로부터 암의 생리학적 연구가 이루어지고 있어, 암 치료에 대한 응용에는 NO 생산 촉진 또는 NO 생산 저해 중 어느 것이 좋은지 일정한 견해는 얻어지지 않았다(비특허문헌 7 및 8).
비특허문헌 9 및 10에는, 인간 난소암 세포나 두경부암 세포에 있어서, 저농도의 NO는 시스플라틴 및 파클리탁셀에 의한 아포토시스를 억제하는 경향을 나타내고, 고농도의 NO는 아포토시스를 촉진시킨다는 것이 기재되어 있다. 이들 문헌에는, iNOS 저해제 1400W와 서바이빈 RNAi의 병용에 의해 파클리탁셀 뿐만 아니라 시스플라틴에 의한 아포토시스를 촉진시킨다는 것도 기재되어 있어, NO의 세포 보호 효과는 파클리탁셀 선택적인 작용이 아니라고 할 수 있다.
국제 공개 제02/055541호 공보 일본 특허 제3700854호 공보 일본 특허 공개 제2006-008621호 공보
European Journal of Pharmacology 509, 71, (2005) Transplantation 79, 10 1386(2005) Transplantation 81, 4, 627(2006) American Journal of Transplantation 6, 9, 2013(2006) Wound Repair and Regeneration 15, 881(2007) Nature Reviews Cancer, 6(7), 521-34(2006) Cancer Chemotherapy and Pharmacology, 67, 1211-1224(2011) Nitric Oxide 19, 158-163(2008) Cancer Research, 68, 5158-5166(2008) International Journal of Cancer, 124, 2033-2041(2009)
탁산계 항종양제는 각종 종양의 치료에 유용하지만, 부작용의 점으로부터 투여량이나 용법이 제한되고 있으며, 투여량을 증가시키지 않고 각종 종양에 대한 약효를 보다 증대시키는 치료 방법이 지금도 요구되고 있다. 또한, 치료 당초에는 유효하지만, 치료를 계속하는 동안에 항종양 효과가 감약(減弱)된다는 획득 내성이 문제가 되고 있다.
본 발명자는, 탁산계 항종양제의 항종양 작용 증강 방법에 대하여 예의 검토한 결과, 의외로 N2-[(2E)-3-(4-클로로페닐)-2-프로페노일]-N-[2-옥소-2-(4-{[6-(트리플루오로메틸)피리미딘-4-일]옥시}피페리딘-1-일)에틸]-3-피리딘-2-일-L-알라닌아미드를 병용함으로써, 현저한 항종양 작용 증강이 달성된다는 것, 및 그의 증강 작용의 메커니즘을 발견하여, 본 발명을 완성하였다.
즉, 본 발명은,
(1) 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제와 조합하여 병용 투여하도록 사용되는 것을 특징으로 하는, FK330 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는 암 치료용 조성물에 관한 것이다.
또한, 어떤 형태를 이하에 나타낸다.
(2) 파클리탁셀 또는 도세탁셀과 조합하여 병용 투여하도록 사용되는 것을 특징으로 하는 (1)에 기재된 조성물.
(3) 파클리탁셀과 조합하여 병용 투여하도록 사용되는 것을 특징으로 하는 (2)에 기재된 조성물.
(4) 도세탁셀과 조합하여 병용 투여하도록 사용되는 것을 특징으로 하는 (2)에 기재된 조성물.
(5) 60 내지 1200mg/일의 FK330 또는 그의 염을 함유하는 경구 투여용 조성물인 (1) 내지 (4)에 기재된 조성물.
(6) 60 내지 200mg/일의 FK330 또는 그의 염을 함유하는 경구 투여용 조성물인 (5)에 기재된 조성물.
(7) 플라티나계 항종양제, 안트라사이클린계 항종양제, 시클로포스파미드, 플루오로우라실, 트라스투주마브 및 카페시타빈으로부터 선택되는 1 이상의 항종양제와 더 조합하여 병용 투여하도록 사용되는 것을 특징으로 하는 (1) 내지 (6)에 기재된 조성물.
(8) 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제의 1 투여 사이클 중의 적어도 1일에 있어서 병용 투여하도록 사용되는 것을 특징으로 하는, (1) 내지 (6)에 기재된 조성물.
(9) 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제의 투여일의 적어도 1일에 있어서 병용 투여하도록 사용되는 것을 특징으로 하는, (8)에 기재된 조성물.
(10) 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제의 1 투여 사이클 중의 전체일에 있어서 병용 투여하도록 사용되는 것을 특징으로 하는, (8)에 기재된 조성물.
또한, 본원 발명은 이하의 발명에도 관한 것이다.
(11) 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제와 동시에, 각각, 연속하여, 또는 간격을 두고 투여되는 것을 특징으로 하는, (1) 내지 (6)에 기재된 암 치료용 조성물.
(12) FK330 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는, 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제에 의한 치료를 받고 있는 대상을 치료하기 위한 암 치료용 조성물.
(13) 탁산계 항종양제가 사용되고 있는 암의 치료용인 (1) 내지 (12)에 기재된 암 치료용 조성물.
(14) 탁산계 항종양제가 사용되고 있는 암이 비소세포 폐암인 (13)에 기재된 암 치료용 조성물.
(15) 탁산계 항종양제가 사용되고 있는 암이 유방암인 (13)에 기재된 암 치료용 조성물.
또한, 본 발명은 이하의 발명에도 관한 것이다.
(16) 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제의 병용 치료에 사용하는 경우의 치료 유효 용량, 및 FK330 또는 그의 염의 병용 치료에 사용하는 경우의 치료 유효 용량을 조합하여 대상에게 투여하는 것을 특징으로 하는 암의 치료 방법.
(17) 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제의 병용 치료에 사용하는 경우의 치료 유효 용량, 및 FK330 또는 그의 염의 병용 치료에 사용하는 경우의 치료 유효 용량을 동시에, 각각, 연속하여, 또는 간격을 두고 대상에게 투여하는 것을 특징으로 하는 암의 치료 방법.
또한, 「대상」이란, 그의 예방 또는 치료를 필요로 하는 인간 또는 그 이외의 동물이며, 어떤 형태로서는 그의 예방 또는 치료를 필요로 하는 인간이다.
또한, 본원 발명은 이하의 발명에도 관한 것이다.
(18) 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제와 조합하여 병용 투여하도록 사용되는 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물을 제조하기 위한, FK330 또는 그의 염의 용도.
(19) 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제와 조합하여 병용 투여되도록 사용되는 것을 특징으로 하는, 암 치료를 위한 FK330 또는 그의 염.
(20) 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제와 조합하여 투여하는 것을 특징으로 하는, FK330 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는 암 치료제.
(21) FK330 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는, 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제의 항종양 작용 증강제.
(22) FK330 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는, 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제의 내성화 억제제 또는 내성화 예방제.
(23) FK330 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는, 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제의 감수성 증강제.
본 발명의 FK330 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는 암 치료용 조성물과 탁산계 항종양제의 병용에 의해 탁산계 항종양제의 암 치료 효과의 증강이 달성된다는 점에서, 본원 발명의 암 치료용 조성물은, 기존의 탁산계 항종양제가 적응되는 것이 알려진 각종 암의 치료에 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제와 병용하여 사용할 수 있다. 적응되는 암으로서는, 탁산계 항종양제가 사용되고 있는 고형암 및 림프종이다.
도 1은, 실시예 1에서 FK330과 독소루비신의 단독 또는 병용 투여에서의 항종양 효과를 나타내는 그래프이다. Dox는 독소루비신을 나타낸다.
도 2는, 실시예 1에서 FK330과 젬시타빈의 단독 또는 병용 투여에서의 항종양 효과를 나타내는 그래프이다. Gem은 젬시타빈을 나타낸다.
도 3은, 실시예 1에서 FK330과 이리노테칸의 단독 또는 병용 투여에서의 항종양 효과를 나타내는 그래프이다. Iri는 이리노테칸을 나타낸다.
도 4는, 실시예 1에서 FK330과 카르보플라틴의 단독 또는 병용 투여에서의 항종양 효과를 나타내는 그래프이다. CBDCA는 카르보플라틴을 나타낸다.
도 5는, 실시예 1에서 FK330과 파클리탁셀의 단독 또는 병용 투여에서의 항종양 효과를 나타내는 그래프이다. PTX는 파클리탁셀을 나타낸다.
도 6은, 실시예 1에서 FK330과 도세탁셀의 단독 또는 병용 투여에서의 항종양 효과를 나타내는 그래프이다. Doce는 도세탁셀을 나타낸다.
도 7은, 인간 비소세포 폐암(Calu-6) 담암 마우스에서의 FK330의 파클리탁셀 복수 사이클 투여시의 항종양 효과 증강 작용을 검토한 실시예 2의 결과를 나타내는 그래프이다. PTX는 파클리탁셀을 나타낸다.
도 8은, 인간 비소세포 폐암(Calu-6) 담암 마우스에서의 FK330의 파클리탁셀의 항종양 효과 증강 작용의 용량 의존성을 검토한 실시예 3의 결과를 나타내는 그래프이다. PTX는 파클리탁셀을 나타낸다.
도 9는, 인간 비소세포 폐암(Calu-6) 담암 마우스에서의 FK330의 투여 타이밍을 검토한 실시예 4의 결과를 나타내는 그래프이다. PTX는 파클리탁셀을 나타낸다.
도 10은, 인간 위암(AZ-521) 담암 마우스에서의 FK330에 의한 파클리탁셀의 항종양 효과 증강 작용을 검토한 실시예 5의 결과를 나타내는 그래프이다. PTX는 파클리탁셀을 나타낸다.
도 11은, 인간 위암(MKN-28) 담암 마우스에서의 FK330에 의한 파클리탁셀의 항종양 효과 증강 작용을 검토한 실시예 5의 결과를 나타내는 그래프이다. PTX는 파클리탁셀을 나타낸다.
도 12는, 인간 위암(NCI-N87) 담암 마우스에서의 FK330에 의한 파클리탁셀의 항종양 효과 증강 작용을 검토한 실시예 5의 결과를 나타내는 그래프이다. PTX는 파클리탁셀을 나타낸다.
도 13은, 인간 유방암 세포(MDA-MB-231) 담암 마우스에서의 FK330에 의한 파클리탁셀의 항종양 효과 증강 작용을 검토한 실시예 6의 결과를 나타내는 그래프이다. PTX는 파클리탁셀을 나타낸다.
도 14는, 탁산 유발 튜불린 중합 작용에 대한 NO 공여체인 SNAP의 억제 작용을 검토한 실시예 7의 결과를 나타내는 그래프이다. A) 및 B)는, 파클리탁셀 유발 튜불린 중합에 대한 SNAP의 억제 작용의 대표예와 튜불린 중합 개시 후 60분의 집계값을 각각 나타낸다. PTX는 파클리탁셀, SNAP는 S-니트로소-N-아세틸-D, L-페니실라민을 나타낸다.
도 15는, 탁산 유발 튜불린 중합 작용에 대한 NO 공여체인 SNAP의 억제 작용을 검토한 실시예 7의 결과를 나타내는 그래프이다. A) 및 B)는, 도세탁셀 유발 튜불린 중합에 대한 SNAP의 억제 작용의 대표예와 튜불린 중합 개시 후 60분의 집계값을 각각 나타낸다. DTX는 도세탁셀, SNAP는 S-니트로소-N-아세틸-D, L-페니실라민을 나타낸다.
도 16은, 인간 폐암 세포주 Calu-6 담암 마우스에 있어서, 파클리탁셀 단독 및 FK330 병용시의 종양 조직 내 iNOS 단백 발현에 대한 작용을 검토한 실시예 8의 결과를 나타낸 그래프이다. PTX는 파클리탁셀을 나타낸다.
도 17은, 인간 폐암 세포주 Calu-6 담암 마우스에 있어서, 파클리탁셀 단독 및 FK330 병용시의 종양 조직 내 매크로파지(F4/80) 침윤에 대한 작용을 검토한 실시예 8의 결과를 나타낸 그래프이다. PTX는 파클리탁셀을 나타낸다.
도 18은, 인간 폐암 세포주 Calu-6 담암 마우스에 있어서, 파클리탁셀 단독 및 FK330 병용시의 종양 조직 내 니트로티로신(NO의 주된 최종 생성물) 발현에 대한 작용을 검토한 실시예 8의 결과를 나타낸 그래프이다. PTX는 파클리탁셀을 나타낸다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 「암 치료용 조성물」은 탁산계 항종양제와 병용하기 위한 의약 조성물이며, 다른 형태로서는 탁산계 항종양제의 항종양 작용을 증강하는 의약 조성물이다.
본 발명의 「암 치료용 조성물」에서의 「암」에는, 탁산계 항종양제가 사용되고 있는 암, 즉 탁산계 항종양제가 사용되고 있는 모든 고형암 및 림프종이 포함된다. 어떤 형태로서는, 유방암, 자궁체암, 난소암, 전립선암, 폐암, 위(위선)암, 비소세포 폐암, 췌장암, 두경부 편평 상피암, 식도암, 방광암, 멜라노마, 대장암, 신세포암, 비호지킨 림프종, 요로 상피암 등을 들 수 있다. 다른 형태로서는 유방암, 난소암, 전립선암, 위(위선)암, 비소세포 폐암 등, 또 다른 형태로서는 유방암, 위(위선)암, 비소세포 폐암 등, 또 다른 형태로서는 유방암, 또 다른 형태로서는 비소세포 폐암을 들 수 있다.
유방암의 다른 형태로서는, 예를 들면 HER2 양성 전이성 유방암, HER2 음성 전이성 유방암, HER2 양성 유방암 또는 전이성 유방암을 들 수 있고, 다른 형태로서는 HER2 음성 전이성 유방암을 들 수 있고, 또 다른 형태로서는 HER2 양성 전이성 유방암을 들 수 있다.
비소세포 폐암의 다른 형태로서는, 예를 들면 국소 진행성 비소세포 폐암 또는 전이성의 비소세포 폐암을 들 수 있고, 다른 형태로서는 비소세포 폐암에서의 비편평 상피암을 들 수 있고, 또 다른 형태로서는 전이성의 비소세포 폐암에서의 비편평 상피암을 들 수 있고, 또 다른 형태로서는 전이성의 비소세포 폐암에서의 편평 상피암을 들 수 있다.
위암의 다른 형태로서는, 전이성 위암, 전이성 위식도 접합부암 등을 들 수 있다.
전립선암의 다른 형태로서는, 전이성 거세 저항성 전립선암, 호르몬 저항성 전립선암 등을 들 수 있고, 다른 형태로서는 호르몬 저항성 전립선암을 들 수 있고, 또 다른 형태로서는 전이성 거세 저항성 전립선암을 들 수 있다.
본 발명에서 사용되는 FK330 또는 그의 염은, 국제 공개 02/055541호 공보의 실시예 41의 화합물이며, 당해 특허에 개시된 제조 방법에 의해 용이하게 입수할 수 있다.
FK330은 비대칭 탄소 원자의 존재에 기초한 (S)체의 광학 이성체이지만, (R)체의 광학 이성체를 함유하고 있을 수도 있다.
또한, 본 발명에 있어서 FK330의 염이란, FK330의 제약학적으로 허용되는 염이며, 구체적으로는 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 질산, 인산 등의 무기산이나, 포름산, 아세트산, 프로피온산, 옥살산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 말레산, 락트산, 말산, 만델산, 타르타르산, 디벤조일타르타르산, 디톨루오일타르타르산, 시트르산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산, 아스파라긴산, 글루탐산 등의 유기산 등의 산 부가염을 들 수 있다. 이들 산 부가염은 통상법의 조염 반응에 가함으로써 제조할 수 있다.
또한, 본 발명의 FK330 또는 그의 염은, 각종 수화물이나 용매화물 및 결정 다형의 물질로서 사용할 수 있다. 또한, FK330 또는 그의 염은, 다양한 방사성 또는 비방사성 동위체로 라벨된 화합물도 포함한다.
본 발명에서 사용되는 FK330 또는 그의 염으로서는, 어떤 형태로서는 프리체 무수물이다. 다른 형태로서는 프리체 2수화물이다. 예를 들면, 국제 공개 제02/055541호 공보의 실시예 41에 기재된 방법에 의해 얻어지는 FK330 프리체를 알코올/수용매계, 예를 들면 에탄올/물, 또는 이소프로판올/물 등으로 재결정을 행하고, 얻어진 결정을 감압하에 건조시키면 프리체 무수물을 얻을 수 있다. 또한, 얻어진 프리체 무수물에 대하여 조습 조작을 행함으로써, 프리체 2수화물 결정을 얻을 수 있다.
FK330 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는 의약 조성물은, 당 분야에서 통상 사용되고 있는 부형제, 즉 약제용 부형제나 약제용 담체 등을 사용하여 통상 사용되고 있는 방법에 의해 조제할 수 있다.
투여는 정제, 환제, 캡슐제, 과립제, 산제, 액제 등에 의한 경구 투여, 또는 관절내, 정맥내, 근육내 등의 주사제 등에 의한 비경구 투여 중 어느 하나의 형태일 수도 있다. 어떤 형태로서는, 정제, 환제, 캡슐제, 과립제, 산제, 액제 등에 의한 경구 투여이다.
경구 투여를 위한 고체 조성물로서는, 정제, 산제, 과립제 등이 사용된다. 이러한 고체 조성물에 있어서는, 1종 또는 2종 이상의 유효 성분을 적어도 1종의 불활성의 부형제와 혼합한다. 조성물은 통상법에 따라 불활성의 첨가제, 예를 들면 활택제나 붕괴제, 안정화제, 용해 보조제를 함유하고 있을 수도 있다. 정제 또는 환제는 필요에 따라 당의 또는 위용성 또는 장용성 물질의 필름으로 피막할 수도 있다.
경구 투여를 위한 액체 조성물은, 약제적으로 허용되는 유탁제, 용액제, 현탁제, 시럽제 또는 엘릭시르제 등을 포함하고, 일반적으로 사용되는 불활성의 희석제, 예를 들면 정제수 또는 에탄올을 포함한다. 당해 액체 조성물은 불활성의 희석제 이외에 가용화제, 습윤제, 현탁제와 같은 보조제, 감미제, 풍미제, 방향제, 방부제를 함유하고 있을 수도 있다.
비경구 투여를 위한 주사제는, 무균의 수성 또는 비수성의 용액제, 현탁제 또는 유탁제를 함유한다. 수성의 용제로서는, 예를 들면 주사용 증류수 또는 생리 식염액이 포함된다. 비수성의 용제로서는, 예를 들면 에탄올과 같은 알코올류가 있다. 이러한 조성물은, 등장화제, 방부제, 습윤제, 유화제, 분산제, 안정화제 또는 용해 보조제를 더 포함할 수도 있다. 이들은 예를 들면 박테리아 보류 필터를 통과하는 여과, 살균제의 배합 또는 조사에 의해 무균화된다. 또한, 이들은 무균의 고체 조성물을 제조하고, 사용 전에 무균수 또는 무균의 주사용 용매에 용해 또는 현탁하여 사용할 수도 있다.
투여 경로, 제형, 투여 부위, 부형제나 첨가제의 종류에 따라 상이하지만, 본 발명의 의약 조성물은 0.01 내지 100중량％, 어떤 형태로서는 0.01 내지 50중량％의 유효 성분인 1종 또는 그 이상의 FK330 또는 그의 염을 함유한다.
통상 경구 투여의 경우, FK330(2수화물)의 1일의 투여량은 약 60 내지 1200 mg/일이며, 이것을 1회에 또는 2회 내지 3회로 나누어 투여한다. 다른 형태로서는 1일의 투여량으로서 60 내지 200 mg이다. 또 다른 형태로서는 120 내지 250mg, 120 내지 220mg, 150 내지 250mg 또는 180 내지 200mg이다. 또 다른 형태로서는 100 내지 180mg 또는 180 내지 300mg이다. 또 다른 형태로서는 120mg, 130mg, 140mg, 150mg, 160mg, 170mg, 180mg, 190mg, 200mg, 210mg, 220mg, 230mg, 240mg 또는 250mg이다. 또 다른 형태로서는 180mg, 190mg 또는 200mg이다. 투여량은 증상, 연령, 성별 등을 고려하여 각각의 경우에 따라 적절히 결정된다.
본 발명의 FK330과 병용 가능한 탁산계 항종양제로서는, 탁산환 또는 그의 유연(類緣) 구조를 갖는 화합물을 유효 성분으로 하는 의약 조성물을 들 수 있고, 다른 형태로서는 탁산환을 갖는 화합물을 유효 성분으로 하는 의약 조성물을 들 수 있다. 탁산계 항종양제의 또 다른 형태로서는, 미소관 탈중합 저해 작용을 갖는 화합물을 유효 성분으로 하는 의약 조성물을 들 수 있다. 의약 조성물에 적용되는 부형제 및 제형은, 상술한 것을 사용할 수 있다.
FK330과 병용 가능한 탁산계 항종양제의 구체적인 다른 형태로서는, 파클리탁셀(paclitaxel), 도세탁셀(docetaxel), 카바지탁셀(cabazitaxel), 아브락산(abraxane), 테세탁셀(tesetaxel), 오르타탁셀(ortataxel) 등을 들 수 있고, 또 다른 형태로서는 파클리탁셀(paclitaxel), 도세탁셀(docetaxel) 또는 아브락산(abraxane)을 들 수 있고, 또 다른 형태로서는 파클리탁셀(paclitaxel) 또는 아브락산(abraxane)을 들 수 있고, 또 다른 형태로서는 파클리탁셀(paclitaxel)을 들 수 있고, 다른 형태로서는 도세탁셀(docetaxel)을 들 수 있다.
본 발명의 FK330과 병용 가능한 주된 기존 탁산계 항종양제를 주된 적응암 종류 또는 적응 후보암 종류와 함께 하기 표에 나타낸다. 단, 본 발명의 병용 치료에 있어서, 이들 항종양제의 적응암 종류는 이들로 한정되는 것은 아니다.
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파클리탁셀, 도세탁셀, 카바지탁셀 또는 아브락산은 시판품을 구입하여 사용하는 것이 가능하고, 또는 당업자에게 있어서 자명한 방법 또는 그들의 변법에 의해 용이하게 입수 가능하다.
카바지탁셀은, 국제 공개 96/30355호 공보에 개시된 제조 방법 또는 그들의 변법에 의해 용이하게 입수 가능하다. 테세탁셀은 당업자에게 있어서 자명한 방법, 또는 국제 공개 01/27115호 공보에 개시된 제조 방법 또는 그들의 변법에 의해 용이하게 입수 가능하다. 오르타탁셀은 당업자에게 있어서 자명한 방법, 또는 미국 특허 5705508호 명세서에 개시된 제조 방법 또는 그들의 변법에 의해 용이하게 입수 가능하다.
상기한 항종양제는 이미 임상적으로 사용되고 있으며, 그의 투여 경로, 투여 사이클, 투여량은 당업자에게 명확하다. 암 종류나 증상, 병용하는 약제에 따라 적합한 용법·용량(Dosage and Administration)은 상이하며, 이들의 상세한 정보는 FDA가 제공하는 각종 데이터 베이스, 예를 들면 "Orange Book"(http://www.fda.gov/cder/orange/default.htm)이나, 일본의 의약품 의약 기기 정보 제공 홈페이지(http://www.info.pmda.go.jp/)에 의해 용이하게 입수 가능하다. 이들의 데이터 베이스에 있는 각 항종양제의 정보는 본원에 도입되는 것이다.
예를 들면, 파클리탁셀의 용법·용량의 예로서는, 일본의 의약품 의약 기기 정보 제공 홈페이지의 탁솔주(등록 상표: 파클리탁셀의 상품명)의 첨부 문서에는, 「[효능 또는 효과]; 난소암, 비소세포 폐암, 유방암, 위암; [용법 및 용량]; 1. 통상, 성인에게는 파클리탁셀로서 1일 1회 210mg/m2를 3시간에 걸쳐서 점적 정맥 주사하고, 적어도 3주일 휴약한다. 이것을 1 기간으로 하여 투여를 반복한다. 또한, 투여량은, 연령, 증상에 따라 적절히 감량한다」고 기재되어 있다.
또한, 도세탁셀의 용법·용량의 예로서는, 일본의 의약품 의약 기기 정보 제공 홈페이지의 탁소텔주(등록 상표: 도세탁셀의 상품명)의 첨부 문서에는, 「1. 유방암, 비소세포 폐암, 위암, 두경부암; 효능 또는 효과마다의 용법 및 용량; 1. 통상, 성인에게 1일 1회, 도세탁셀로서 60mg/m2를 1시간 이상에 걸쳐서 3 내지 4주일 간격으로 점적 정맥 주사한다. 또한, 증상에 따라 적절히 증감할 것, 단 1회 최고 용량은 70mg/m2로 한다」고 기재되어 있다.
본 발명에서의 병용 치료에 사용하는 경우의 치료 유효 용량은 통상 투여되는 투여 경로에 따라, 통상 단독으로 투여되는 경우와 동일한 투여량 또는 그보다 저용량(예를 들면, 단독으로 투여한 경우의 최고 투여량의 0.10 내지 0.99배)으로 설정할 수 있다. 일정한 투여 사이클로 투여되는 탁산계 항종양제의 경우에는, FK330과의 병용에 적합하도록 투여 사이클을 적절히 조정할 수도 있다. 구체적인 투여 빈도, 투여량, 투여 사이클 등은, 환자의 증상, 연령, 성별 등을 고려하여 각각의 경우에 따라 적절히 결정된다.
FK330과 탁산계 항종양제를 병용 투여하는 경우의 투여 형태로서는, 각각에 적합한 투여 경로, 투여 빈도 및 투여량을 채용하는 한 특별히 한정되지 않으며, 예를 들면 (1) FK330과 탁산계 항종양제를 함유하는 조성물, 즉 단일 제제로서의 투여, (2) FK330과 탁산계 항종양제를 각각 제제화하여 얻어지는 2종의 제제의 동일 투여 경로에서의 동시 투여, (3) FK330과 탁산계 항종양제를 각각 제제화하여 얻어지는 2종의 제제의 동일 투여 경로에서의 시간차를 둔 투여(예를 들면 FK330, 탁산계 항종양제의 순서로의 투여, 또는 역순서로의 투여), (4) FK330과 탁산계 항종양제를 각각 제제화하여 얻어지는 2종의 제제의 상이한 투여 경로에서의 동시 투여, (5) FK330과 탁산계 항종양제를 각각 제제화하여 얻어지는 2종의 제제의 상이한 투여 경로에서의 시간차를 둔 투여(예를 들면 FK330, 탁산계 항종양제의 순서로의 투여, 또는 역순서로의 투여) 등을 들 수 있다. 어떤 형태로서는, 본 발명의 암 치료용 조성물은 탁산계 항종양제와는 별도로 제제화하여, 탁산계 항종양제는 정맥 주사, 점적 정맥 주사 또는 경구에 의해 투여되고, 본 발명의 암 치료용 조성물은 경구 또는 비경구로 투여된다. 다른 형태로서는, 탁산계 항종양제는 정맥 주사, 점적 정맥 주사에 의해 투여되고, 본 발명의 암 치료용 조성물은 경구로 투여된다.
본 발명의 암 치료용 조성물의 바람직한 투여 형태는, 그의 탁산계 항종양제 투여의 1 사이클 중 적어도 1일에 본 발명의 암 치료용 조성물을 경구 또는 비경구적으로 투여하는 방법이다. 여기서, 「사이클」이란, 일정한 요법에 의한 치료 사이클 또는 치료 기간을 의미하고, 예를 들면 파클리탁셀이나 도세탁셀에서는, 투여 개시로부터 휴약 기간을 거쳐서 다음 투여를 행하기 전까지의 3 내지 4주일 정도의 투여 단위 기간이다. 어떤 투여 형태로서는, FK330 또는 그의 염을 포함하는 본 발명의 암 치료용 조성물을 탁산계 항종양제의 투여일의 적어도 1일에 경구 투여하는 방법, 탁산계 항종양제의 투여일의 전체일에 경구 투여하는 방법, 탁산계 항종양제의 휴약일의 적어도 1일에 경구 투여하는 방법, 탁산계 항종양제의 휴약일의 전체일에 경구 투여하는 방법, 탁산계 항종양제의 투여일의 적어도 1일 및 휴약일의 적어도 1일에 경구 투여하는 방법, 탁산계 항종양제 투여의 1 사이클 중 전체일에 경구 투여하는 방법, 또는 탁산계 항종양제 투여의 1 사이클 중에 간헐적(2일에 1회, 1주일에 1회 등)으로 경구 투여하는 방법이다. 어떤 형태로서는, 탁산계 항종양제 투여의 1 사이클 중 전체일에 경구 투여하는 방법이다. 탁산계 항종양제의 투여 수일 전 내지 전날부터 본 발명의 암 치료용 조성물을 투여할 수도 있고, 이 형태는 탁산계 항종양제의 휴약일의 투여에 포함된다. FK330과 탁산계 항종양제의 약물 상호 작용이 염려되는 경우에는, 상호 작용을 피하기 위해 투여 시기를 나누거나, 및/또는 필요한 간격을 두고 투여할 수 있다.
본 발명의 「FK330 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는, 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제에 의한 치료를 받고 있는 대상을 치료하기 위한 암 치료용 조성물」에서의 「대상」은, 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제에 의한 치료를 받고 있으면 다른 항종양제의 투여를 받고 있을 수도 있다. 다른 항종양제는 후술하는 것을 들 수 있다. 「대상」은, 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제를 FK330 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는 암 치료용 조성물과 동시, 각각, 연속하여, 또는 간격을 두고 투여되고 있을 수도 있다.
본 발명은, 「(a) FK330 또는 그의 염, 및 (b) 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제를 조합하여 포함하는 키트」의 형태일 수도 있다. 이것은, 유효 성분 (a)를 포함하는 제제(제1 제제) 및 유효 성분 (b)를 포함하는 제제(제2 제제)를, 이들의 유효 성분의 병용 요법에 사용할 수 있도록 조합하여 포함하는 것이다. 본 발명의 키트는, 목적에 따라 플라시보제 등의 각각의 투여 시기에 맞춘 투여를 용이하게 하는 추가적인 제제나 표시 부재를 포함하고 있을 수도 있는 포장품일 수도 있다.
2종류의 제제는, 예를 들면 각 제제의 생물학적 이용 가능성, 안정성 등을 고려하여, 각각의 제제에 적합한 제제 처방, 투여 경로, 투여 빈도 등의 투여 조건하에 동일하거나 또는 상이한 투여 루트로 동시, 각각, 연속하여, 또는 간격을 두고 투여되는 것이다. 여기서, 「동시에」란, 제1 제제와 제2 제제를 함께 동일한 투여 경로로 투여하는 것을 의미하고, 「각각」이란, 제1 제제와 제2 제제를 동일 또는 상이한 투여 경로로, 동일 또는 상이한 투여 빈도 또는 투여 간격으로 각각 투여하는 것을 의미한다. 「연속하여」란, 제1 제제와 제2 제제를 동일 또는 상이한 투여 경로로, 제1 제제에 이어서 제2 제제의 순서, 또는 역순서로 투여하는 것을 의미한다. 「간격을 두고」란, 제1 제제와 제2 제제를 동일 또는 상이한 투여 경로로, 제1 제제에 이어서 일정한 간격을 두고 제2 제제의 순서, 또는 역순서로 투여하는 것을 의미한다.
본 발명은, 「(a) FK330 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는 조성물과, (c) 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제와 병용하는 것이 표시된 첨부 문서를 함유하여 이루어지는, 암 치료용 의약품」의 형태일 수도 있다. 이것은, 병용 치료에 사용하는 경우의 치료 유효 용량의 유효 성분을 함유하는 조성물 (a)와, 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제와 병용하는 것이 표시된, 상기 (a)의 조성물에 관한 첨부 문서 (c)의 양쪽을 포함하여 포장된, 암 치료용의 의약품을 의미한다.
또한, 본 발명의 FK330 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는 암 치료용 조성물을 탁산계 항종양제와 병용하여 사용하는 경우, 목적에 따라 화학 요법에 사용되는 다른 항종양제를 병용할 수도 있다. 더 병용할 수 있는 화학 요법에 사용되는 다른 항종양제로서는, 종래 탁산계 항종양제와 병용하는 것이 알려져 있는 항종양제이며, 예를 들면 플라티나계 항종양제, 안트라사이클린계 항종양제, 시클로포스파미드, 플루오로우라실, 트라스투주마브 및 카페시타빈으로부터 선택되는 1 이상의 항종양제를 들 수 있고, 어떤 형태로서는 시스플라틴 또는 카르보플라틴이며, 다른 형태로서는 독소루비신이다.
본원 명세서의 실시예 1-6에 나타낸 바와 같이, 본원 발명의 FK330 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는 암 치료용 조성물과 탁산계 항종양제의 병용 치료에 의해 암 치료 작용이 증강되는 것이 발견되었다. 그 효과는, FK330 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는 암 치료용 조성물 또는 탁산계 항종양제의 단제 투여에 비해 유의하게 평균 종양 부피(mean tumor volume)를 감소시킴으로써 확인되었다.
또한, 본 발명의 FK330 또는 그의 염은 많은 항종양제에 보고되는 위독한 부작용을 갖지 않아, 안전성의 점으로부터도 유용하다.
실시예에 나타낸 동물 모델에서는, 본 발명의 암 치료용 조성물은 탁산계 항종양제 선택적, 용량 의존적으로 항종양 작용을 증강하는 것이 확인되었다. 즉, FK330 또는 그의 염만인 경우에는 유의한 항종양 효과가 보이지 않고, FK330 또는 그의 염을 탁산 이외의 항종양제와 병용하여도 특별히 현저한 항종양 작용 증강 작용은 확인되지 않지만, 탁산계 항종양제와 조합한 경우에는 양호한 항종양 작용 증강 작용이 확인되었다. 특히, FK330은 복수 사이클 처치에 의한 탁산계 약제의 항종양 효과의 감약을 개선하고, 종양 증식을 양호하게 억제하는 것이 나타났다(도 7 참조). 이것은 FK330이 탁산계 항종양제의 내성화를 억제하는 것을 시사한다.
본원 명세서의 실시예 7 및 8에는, NO가 직접 탁산계 항종양제의 미소관 탈중합 저해 작용을 억제하는 것, 및 탁산계 항종양제는 암 조직의 iNOS 단백을 발현에 동반하는 NO 생산을 유발하고, FK330은 그의 iNOS 활성을 억제하는 것이 나타나 있다.
또한, 본 발명자들은, NO는 탁산계 항종양제에 의한 아포토시스를 통한 암 세포 증식 억제 작용을 억제하고, NO에 의한 화학 요법제의 감약 효과는 탁산계 항종양제에 선택적으로 관찰된다는 것도 발견하였다.
따라서, 본 발명자들은, FK330에 의한 탁산계 항종양제의 항종양 작용 증강의 메커니즘으로서 이하를 밝혔다. 즉, 탁산계 항종양제는, 종양 조직에서 iNOS 단백의 를 항진하고, 그 결과 NO 생산을 증강한다. 생산된 NO는, 탁산의 미소관 탈중합 저해 작용을 직접적으로 억제함으로써 탁산계 항종양제의 항종양 효과의 감약을 일으킨다. 한편, FK330은, 탁산계 항종양제에 의해 증강된 NO 생산을 저해 함으로써, 탁산계 항종양제의 효과의 감약을 억제하여 항종양 작용을 증강할 수 있다는 것을 밝힌 것이다.
이상으로부터, FK330 또는 그의 염은 미소관 탈중합 저해 작용을 타깃으로 하는 모든 탁산계 항종양제의 작용을 증강할 수 있다고 할 수 있다.
실시예
본 발명의 암 치료용 조성물의 유용성을 나타내는 약리 시험 결과를 이하에 나타내지만, 본 발명은 이들 실시예로 한정되는 것은 아니다.
실시예 1
1) 피검 물질
FK330으로서는 프리체 2수화물을 사용하였다. 이하, FK330의 투여량은 당해 2수화물의 중량으로 표시하였다. 도세탁셀 수화물 주사제(탁소텔(상표) 점적 정맥 주사용)는 사노피-아벤티스 가부시끼가이샤로부터 구입하여, 도세탁셀로서 사용하였다. 파클리탁셀 주사제(파클리탁셀 주사액 「사와이」)는 사와이 세이야꾸 가부시끼가이샤로부터 구입하여, 파클리탁셀로서 사용하였다. 염산이리노테칸(토포테신(상표)주)은 다이이찌 산쿄 가부시끼가이샤로부터 구입하여, 이리노테칸으로서 사용하였다. 주사용 젬시타빈염산염(젬자르(상표) 주사용)은 닛본 일라이 릴리 가부시끼가이샤로부터 구입하여, 젬시타빈으로서 사용하였다. 주사용 염산독소루비신(아드리아신(상표)주용 10)은 교와 핫꼬 고교 가부시끼가이샤로부터 구입하여, 독소루비신으로서 사용하였다. 카르보플라틴 주사액(파라플라틴(상표) 주사액)은 브리스톨·마이어스 가부시끼가이샤로부터 구입하여, 카르보플라틴으로서 사용하였다.
2) 피검 물질의 조제 및 투여
FK330은 0.5％ 메틸셀룰로오스 수용액(0.5％ MC)에 현탁하였다(20mg/mL). 도세탁셀은 첨부 용해액으로 4mg/kg으로 조제한 후, 생리 식염액(오쯔카 세이야꾸)으로 1mg/mL로 희석하였다. 파클리탁셀, 이리노테칸, 젬시타빈, 독소루비신 및 카르보플라틴은 주사용 생리 식염수로 각각 1mg/mL, 3mg/mL, 16mg/mL, 1mg/mL 및 6mg/mL로 용시 조제(用時調劑)하였다.
3) 세포
인간 폐암 유래 Calu 6(HTB-56)은 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection)(VA, USA)으로부터 입수하였다. 세포는 10％의 가열 불활성화한 소 태자 혈청(FBS)이 첨가된 RPMI1640 배지를 사용하여, 37℃, 5％ CO2의 조건으로 배양하였다. 트립신을 사용하여 회수한 세포를 PBS로 6×107셀/mL에 현탁하여, 등량의 마트리겔(Matrigel)(상표) 베이스먼트 멤브레인 매트릭스(Basement Membrane Matrix)(벡톤 디킨슨 컴퍼니(Becton Dickinson Co.) 제조, 베드포드(Bedford), MA, USA)와 혼합하였다.
4) 동물
5주령의 웅성 누드 마우스(CAnN Cg-Foxn1nu/CrlCrlj(nu/nu))는 닛본 찰스 리버사(일본, 가나가와)로부터 구입하였다. 동물은 시험 기간을 통해 특정 병원체 미감염(SPF) 조건하에 표준적인 사료와 음수를 부여하여 사육하였다. 배양한 세포를 3×106셀/0.1mL/마우스로 누드 마우스의 배부 피하에 이식하였다. 종양 부피(단경×[장경]2×0.5)가 111.9로부터 369.3mm3가 된 누드 마우스를 군간 및 군내의 종양 부피 편차가 작아지도록 SAS를 사용하여 군을 나누었다.
5) 약물 투여 및 측정
투여 첫날을 1일차로 하여 29일차까지 관찰을 행하였다. 각각의 군(n=5 또는 6)을 이하와 같이 처리하였다. FK330은 1일 2회, 6 내지 8시간 간격으로 강제 경구 투여(5mL/kg)하고, 각 화학 요법제는 꼬리 정맥으로부터 정맥내 볼루스 투여(10mL/kg)하였다.
대조군: 미처치
FK330 단독 투여군: FK330 100mg/kg을 1일 2회 투여(비드)(200mg/kg/일, 실험 개시부터 종료시까지 연일 투여)
도세탁셀 단독 투여군: 도세탁셀 10mg/kg/일(1, 5 및 9일차)
파클리탁셀 단독 투여군: 파클리탁셀 10mg/kg/일(1 내지 7일차)
이리노테칸 단독 투여군: 이리노테칸 30mg/kg/일(1 내지 7일차)
젬시타빈 단독 투여군: 젬시타빈 160mg/kg/일(1, 4 및 7일차)
독소루비신 단독 투여군: 독소루비신 10mg/kg/일(1 및 8일차)
카르보플라틴 단독 투여군: 카르보플라틴 60mg/kg/일(1 및 2일차)
병용군:
FK330 100mg/kg/일 비드+도세탁셀 10mg/kg/일(1, 5 및 9일차), n=6
FK330 100mg/kg/일 비드+파클리탁셀 10mg/kg/일(1 내지 7일차), n=6
FK330 100mg/kg/일 비드+이리노테칸 30mg/kg/일(1 내지 7일차), n=6
FK330 100mg/kg/일 비드+젬시타빈 160mg/kg/일(1, 4 및 7일차), n=6
FK330 100mg/kg/일 비드+독소루비신 10mg/kg/일(1 및 8일차), n=6
FK330 100mg/kg/일 비드+카르보플라틴 60mg/kg/일(1 및 2일차), n=5
FK330은 1일 2회, 6 내지 8시간 간격으로 강제 경구 투여(5mL/kg)하였다. 각 화학 요법제는 FK330 투여 후 2 내지 4시간 후에 꼬리 정맥으로부터 정맥내 볼루스 투여(10mL/kg)하였다.
3 내지 4일마다 체중과 디지털 노기스(Nonius)를 사용하여 종양 직경을 측정하였다. 종양 부피는 (단경×[장경]2×0.52)의 타원 부피의 계산식으로부터 산출하였다.
6) 통계 해석
결과는 평균값(Mean)±표준 오차(SEM)로 나타내었다. 시험 기간 중, 촉진(觸診) 한계 이하를 완전 소실(CR)로서 판정하고, 측정값은 0으로 하였다. 시험 종료시의 종양 부피의 실측값에 대하여 단독 투여군과 병용군에서 대응이 없는 2군간의 차의 검정(스튜던트 티 검정(Student's t-test))을 행하고, 5％ 미만을 유의차 있음으로 판정하였다. 데이터 처리에는 SAS 또는 그래프패드 프리즘(Graphpad Prism) 버전 5.03을 사용하였다.
7) 결과
FK330과 각종 화학 요법제를 병용 투여했을 때의 항종양 작용을 검토하였다. 결과는 도 1 내지 도 6에 나타내었다. 즉, FK330과 독소루비신의 병용 효과는 도 1에, 젬시타빈과의 병용 효과는 도 2에, 이리노테칸과의 병용 효과는 도 3에, 카르보플라틴과의 병용 효과는 도 4에, 파클리탁셀과의 병용 효과는 도 5에, 도세탁셀과의 병용 효과는 도 6에 각각 나타내었다. FK330 단독으로는 항종양 효과는 관찰되지 않았지만, 항종양 효과의 유의한 증강이 파클리탁셀(29일차에서의 파클리탁셀 단독군에 대한 종양 부피 감소율 57.6％) 및 도세탁셀(29일차에서의 도세탁셀 단독군에 대한 종양 부피 감소율 65.2％)에서 확인되었다. 한편, FK330은 젬시타빈 및 카르보플라틴의 항종양 효과에는 영향을 주지 않고, 항종양 효과의 약간의 증강이 독소루비신(29일차에서의 독소루비신 단독군에 대한 종양 부피 감소율 34.5％) 및 이리노테칸(29일차에서의 이리노테칸 단독군에 대한 종양 부피 감소율 34.1％)에서 관찰되었지만, 유의한 작용이 아니었다.
결과는 평균값(Mean)±표준 오차(SEM)로 나타내었다(n=6). *: P<0.03, **: P<0.01은 병용군을 화학 요법제 단독 투여군과 비교했을 때의 유의차를 나타낸다. N.S.: 병용군을 화학 요법제 단독 투여군과 비교했을 때에 유의차가 없는 것을 나타낸다(스튜던트 티 검정).
8) 결론
FK330은, 단독으로는 항종양 효과는 관찰되지 않았지만, 파클리탁셀 및 도세탁셀의 항종양 효과를 증강시켰다. 한편, 이리노테칸, 젬시타빈, 독소루비신 및 카르보플라틴의 항종양 효과에는 영향을 주지 않았다. 이들의 결과는, FK330은 탁산계 항종양제의 항종양 효과를 선택적으로 증강하는 것을 시사하는 것이다.
실시예 2
1) 피검 물질
FK330의 용량은 수화물을 포함하는 중량으로 표시하였다. 파클리탁셀 주사제(파클리탁셀 주사액 「사와이」)는 사와이 세이야꾸 가부시끼가이샤로부터 구입하여, 파클리탁셀로서 사용하였다.
2) 피검 물질의 조제 및 투여
FK330은 0.5％ 메틸셀룰로오스 수용액(0.5％ MC)에 현탁하였다(20mg/mL). 파클리탁셀은 주사용 생리 식염수(오쯔카 세이야꾸)로 1mg/mL로 용시 조제하였다.
3) 세포
인간 폐암 유래 Calu 6(HTB-56)은 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(VA, USA)으로부터 입수하였다. 세포는 10％의 가열 불활성화한 소 태자 혈청(FBS)이 첨가된 RPMI1640 배지를 사용하여, 37℃, 5％ CO2의 조건으로 배양하였다. 트립신을 사용하여 회수한 세포를 PBS로 6×107셀/mL에 현탁하고, 등량의 마트리겔(상표) 베이스먼트 멤브레인 매트릭스(벡톤 디킨슨 컴퍼니 제조, 베드포드, MA, USA)와 혼합하였다.
4) 동물
5주령의 웅성 누드 마우스(CAnN Cg-Foxn1nu/CrlCrlj(nu/nu))는 닛본 찰스 리버사(일본, 가나가와)로부터 구입하였다. 동물은 시험 기간을 통해 특정 병원체 미감염(SPF) 조건하에 표준적인 사료와 음수를 부여하여 사육하였다. 배양한 세포를 3×106셀/0.1mL/마우스로 누드 마우스의 배부 피하에 이식하였다. 종양 부피(단경×[장경]2×0.5)가 126.1로부터 299.0mm3가 된 누드 마우스를 군간 및 군내의 종양 부피 편차가 작아지도록 SAS를 사용하여 군을 나누었다.
5) 약물 투여 및 측정
투여 첫날을 1일차로 하여 83일차까지 관찰을 행하였다. 각각의 군(n=6)을 이하와 같이 처리하였다. FK330은 5mL/kg으로 강제 경구 투여를 행하고, 파클리탁셀은 10mL/kg으로 꼬리 정맥내 투여를 행하였다. 파클리탁셀은 1일차 내지 7일차의 연속 투여를 행한 후 24일간 휴약하였다(1 사이클). PTX의 2 사이클 및 3 사이클째의 투여에서는, 각각 31일차 또는 60일차로부터 6일간 연속 투여하였다.
대조군: 미처치
FK330 단독 투여군: FK330 100mg/kg 비드(200mg/kg/일, 실험 개시부터 실험 종료시까지 연속 투여)
파클리탁셀 단독 투여군: 파클리탁셀 10mg/kg/일(1 사이클에서는 7일간 연속 투여, 2 사이클 이후에는 6일간 연속 투여)
병용군:
FK330 100mg/kg/kg 비드(200mg/kg/일, 실험 개시부터 실험 종료시까지 연속 투여)+파클리탁셀 10mg/kg/일(1 사이클에서는 7일간 연속 투여, 2 사이클 이후에는 6일간 연속 투여)
FK330은 1일 2회, 6 내지 8시간 간격으로 강제 경구 투여(5mL/kg)하였다. 파클리탁셀은 FK330 투여 후 2 내지 4시간 후에 꼬리 정맥으로부터 정맥내 볼루스 투여(10mL/kg)하였다.
3 내지 4일마다 체중과 디지털 노기스를 사용하여 종양 직경을 측정하였다. 종양 부피는 (단경×[장경]2×0.52)의 타원 부피의 계산식으로부터 산출하였다.
6) 통계 해석
결과는 평균값(Mean)±표준 오차(SEM)로 나타내었다. 시험 기간 중, 촉진 한계 이하를 완전 소실(CR)로서 판정하고, 측정값은 0으로 하였다. 각 측정시의 종양 부피의 실측값에 대하여, 단독 투여군과 병용군에서 대응이 없는 2군간의 차의 검정(스튜던트 티 검정)을 행하고, 5％ 미만을 유의차 있음으로 판정하였다. 데이터 처리에는 SAS를 사용하였다.
7) 결과
FK330의 파클리탁셀 복수 사이클 투여시의 병용 작용을 검토하였다. 결과는 도 7에 나타내었다. 인간 비소세포 폐암(Calu-6) 담암 마우스에 있어서, 복수 사이클 투여함에 따라 파클리탁셀의 항종양 효과는 감약되는 경향이 관찰되었다. FK330은 파클리탁셀의 항종양 효과를 분명하게 증강하고, 29일차에서의 파클리탁셀 단독군에 대한 종양 부피 감소율은 57.6％(P<0.01), 60일차에서의 파클리탁셀 단독군에 대한 종양 부피 감소율은 86.1％(P<0.01), 83일차에서의 파클리탁셀 단독군에 대한 종양 부피 감소율은 87.6％(P<0.01)였다.
결과는 평균값(Mean)±표준 오차(SEM)로 나타내었다(n=6). **: P<0.01은 병용군을 화학 요법제 단독 투여군과 비교했을 때의 유의차를 나타낸다(스튜던트 티 검정).
8) 결론
인간 비소세포 폐암(Calu-6) 담암 마우스에 있어서, 파클리탁셀의 항종양 효과는 사이클 의존적으로 감약되었다. 한편 FK330의 병용은, 복수 사이클 투여에 의한 파클리탁셀의 항종양 효과를 증강하고, 종양의 재증식을 분명하게 억제하였다. 이 결과는, FK330이 복수 사이클 처치에 의한 탁산계 약제의 항종양 효과의 감약을 개선하는 것을 시사하는 것이다.
실시예 3
피검 물질의 조제 및 세포의 조정은 실시예 2와 동일하게 행하였다.
1) 동물
5주령의 웅성 누드 마우스(CAnN Cg-Foxn1nu/CrlCrlj(nu/nu))는 닛본 찰스 리버사(일본, 가나가와)로부터 구입하였다. 동물은 시험 기간을 통해 특정 병원체 미감염(SPF) 조건하에 표준적인 사료와 음수를 부여하여 사육하였다. 배양한 세포를 3×106셀/0.1mL/마우스로 누드 마우스의 배부 피하에 이식하였다. 종양 부피(단경×[장경]2×0.5)가 123.3으로부터 274.4mm3가 된 누드 마우스를 군간 및 군내의 종양 부피 편차가 작아지도록 SAS를 사용하여 군을 나누었다.
2) 약물 투여 및 측정
투여 첫날을 0일차로 하여 59일차까지 관찰을 행하였다. 각각의 군(n=5)을 이하와 같이 처리하였다. FK330은 5mL/kg으로 강제 경구 투여를 행하고, 파클리탁셀은 10mL/kg으로 꼬리 정맥내 투여를 행하였다. 파클리탁셀은 0일차 내지 5일차의 연속 투여 후에 21일의 휴약 기간을 설정하고, 이것을 1 사이클로 하여 2 사이클까지 투여하였다.
대조군: 미처치
파클리탁셀 단독 투여군: 파클리탁셀 10mg/kg/일(1 사이클에서는 0일차로부터 6일간 연속 투여, 2 사이클에서는 27일차로부터 6일간 연속 투여)
병용군:
FK330 30mg/kg 비드(60mg/kg/일)+파클리탁셀 10mg/kg/일(1 사이클에서는 0일차로부터 6일간 연속 투여, 2 사이클에서는 27일차로부터 6일간 연속 투여)
FK330 60mg/kg 비드(120mg/kg/일)+파클리탁셀 10mg/kg/일(1 사이클에서는 0일차로부터 6일간 연속 투여, 2 사이클에서는 27일차로부터 6일간 연속 투여)
FK330 100mg/kg 비드(200mg/kg/일)+파클리탁셀 10mg/kg/일(1 사이클에서는 0일차로부터 6일간 연속 투여, 2 사이클에서는 27일차로부터 6일간 연속 투여)
FK330은 1일 2회, 6 내지 8시간 간격으로 강제 경구 투여(5mL/kg)하였다. 파클리탁셀은 FK330 투여 후 2 내지 4시간 후에 꼬리 정맥으로부터 정맥내 볼루스 투여(10mL/kg)하였다.
3 내지 4일마다 체중과 디지털 노기스를 사용하여 종양 직경을 측정하였다. 종양 부피는 (단경×[장경]2×0.52)의 타원 부피의 계산식으로부터 산출하였다.
3) 결과
FK330의 파클리탁셀의 항종양 효과 증강 작용의 용량 의존성을 검토한 결과를 도 8에 나타내었다. 결과는 평균값(Mean)±표준 오차(SEM)로 나타내었다(n=4 내지 5). 시험 종료시(59일차)의 종양 부피는, 파클리탁셀 단독군에서는 1640.1±902.8mm3, FK330 30mg/kg 비드 병용군에서는 955.9±231.0mm3, FK330 60mg/kg 비드 병용군에서는 706.2±256.1mm3, FK330 100mg/kg 비드 병용군에서는 297.9±101.4mm3이며, FK330은 용량 의존적으로 파클리탁셀의 항종양 효과를 증강하였다(파클리탁셀 단독군에 대한 종양 부피 감소율: FK330 30mg/kg 비드에서는 41.7％, FK330 60mg/kg 비드에서는 56.9％, FK330 100mg/kg 비드에서는 81.8％).
4) 결론
FK330의 병용은, 용량 의존적으로 파클리탁셀의 항종양 효과를 증강하였다.
실시예 4
피검 물질의 조제 및 세포의 조정은 실시예 2와 동일하게 행하였다.
1) 동물
5주령의 웅성 누드 마우스(CAnN Cg-Foxn1nu/CrlCrlj(nu/nu))는 닛본 찰스 리버사(일본, 가나가와)로부터 구입하였다. 동물은 시험 기간을 통해 특정 병원체 미감염(SPF) 조건하에 표준적인 사료와 음수를 부여하여 사육하였다. 배양한 세포를 3×106셀/0.1mL/마우스로 누드 마우스의 배부 피하에 이식하였다. 종양 부피(단경×[장경]2×0.5)가 142.1로부터 323.7mm3가 된 누드 마우스를 군간 및 군내의 종양 부피 편차가 작아지도록 SAS를 사용하여 군을 나누었다.
2) 약물 투여 및 측정
투여 첫날을 0일차로 하여 55일차까지 관찰을 행하였다. 각각의 군(n=5 또는 6)을 이하와 같이 처리하였다. FK330은 5mL/kg으로 강제 경구 투여를 행하고, 파클리탁셀은 10mL/kg으로 꼬리 정맥내 투여를 행하였다. 파클리탁셀은 0일차 내지 5일차의 연속 투여 후에 21일의 휴약 기간을 설정하고, 27일차부터 31일차까지 5일간 연속 투여하였다.
대조군: 미처치
파클리탁셀 단독 투여군: 파클리탁셀 10mg/kg/일(0일차 내지 5일차 및 27일차 내지 31일차)
병용군:
동시 투여 FK330 100mg/kg 비드(200mg/kg/일)+파클리탁셀 10mg/kg/일(0일차 내지 5일차 및 27일차 내지 31일차)
순차 투여 FK330 100mg/kg 비드(200mg/kg/일)+파클리탁셀 10mg/kg/일(0일차 내지 5일차 및 27일차 내지 31일차)
연속 투여 FK330 100mg/kg 비드(200mg/kg/일)+파클리탁셀 10mg/kg/일(0일차 내지 5일차 및 27일차 내지 31일차)
FK330은 1일 2회, 6 내지 8시간 간격으로 강제 경구 투여(5mL/kg)하였다. 동시 투여에서는 FK330은 파클리탁셀의 투여일에 (0일차 내지 5일차 및 27일차 내지 31일차), 연속 투여에서는 파클리탁셀 투여일 후의 휴약일에(6일차 내지 26일차 및 32일차 내지 55일차), 연속 투여는 실험 개시일부터 실험 종료일까지의 전체일에 투여하였다. 파클리탁셀은 FK330 투여 후 2 내지 4시간 후에 꼬리 정맥으로부터 정맥내 볼루스 투여(10mL/kg)하였다.
3 내지 4일마다 체중과 디지털 노기스를 사용하여 종양 직경을 측정하였다. 종양 부피는 (단경×[장경]2×0.52)의 타원 부피의 계산식으로부터 산출하였다.
3) 결과
인간 비소세포 폐암(Calu-6) 담암 마우스에 있어서, 파클리탁셀 병용에서의 FK330의 투여 타이밍을 검토한 결과를 도 9에 나타내었다. 결과는 평균값(Mean)±표준 오차(SEM)로 나타내었다(n=5 또는 6).
시험 기간 중, 촉진 한계 이하를 완전 소실(CR)로서 판정하고, 측정값은 0으로 하였다. 시험 종료시(55일차)의 종양 부피는, 파클리탁셀 단독군에서는 1229.2±289.6mm3, 파클리탁셀과 FK330의 동시 투여에서는 559.8±161.8mm3, FK330의 순차 투여에서는 1150.9±264.9mm3, FK330의 연속 투여에서는 168.5±66.0mm3였으며, 각각 파클리탁셀 단독군에 대한 종양 부피 감소율은 54.5％, 6.4％ 및 86.3％였다.
4) 결론
FK330의 투여 타이밍은 탁산계 약제의 투여 개시일로부터 사이클 기간 중 연일 투여한 경우가 가장 병용 효과가 높은 것이 시사되었다.
실시예 5
피검 물질의 조제는 실시예 2와 동일하게 행하였다.
1) 세포
인간 위암 유래 NCI-N87(CRL-5822)은 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(VA, USA)으로부터, MKN-28(JCRB0253)은 이야꾸 키반 겡뀨쇼(HSRRB)로부터, AZ-521(RCB2087)은 리켄 BRC로부터 입수한 것을 사용하였다. NCI-N87 및 MKN-28 세포는 10％의 가열 불활성화한 소 태자 혈청(FBS)이 첨가된 RPMI1640 배지를 사용하고, AZ-521은 10％의 가열 불활성화한 FBS를 포함하는 DMEM 배지를 사용하여, 37℃, 5％ CO2의 조건으로 배양하였다. 트립신을 사용하여 회수한 세포를 PBS로 6×107셀/mL로 현탁하여, 등량의 마트리겔(상표) 베이스먼트 멤브레인 매트릭스(벡톤 디킨슨 컴퍼니 제조, 베드포드, MA, USA)와 혼합하였다.
2) 동물
5주령의 웅성 누드 마우스(CAnN Cg-Foxn1nu/CrlCrlj(nu/nu))는 닛본 찰스 리버사(일본, 가나가와)로부터 구입하였다. 동물은 시험 기간을 통해 특정 병원체 미감염(SPF) 조건하에 표준적인 사료와 음수를 부여하여 사육하였다. 배양한 세포를 3×106셀/0.1mL/마우스로 누드 마우스의 배부 피하에 이식하였다. AZ-521 담암 마우스에서는 종양 부피(단경×[장경]2×0.5)가 386.6으로부터 766.6mm3가, MKN-28 담암 마우스에서는 종양 부피가 186.0으로부터 319.2mm3가, NCI-N87 담암 마우스에서는 종양 부피가 192.1로부터 364.2가 된 누드 마우스를 군간 및 군내의 종양 부피 편차가 작아지도록 SAS를 사용하여 군을 나누었다.
3) 약물 투여 및 측정
투여 첫날을 0일차로 하여, AZ-521 담암 마우스에서는 46일차까지, MKN-28 담암 마우스에서는 84일차까지, NCI-N87 담암 마우스에서는 56일차까지 관찰을 행하였다. 각각의 군(n=5 또는 6)을 이하와 같이 처리하였다. FK330은 5mL/kg으로 강제 경구 투여를 행하고, 파클리탁셀은 10mL/kg으로 꼬리 정맥내 투여를 행하였다. 파클리탁셀은 하기의 조건으로 복수 사이클 투여하였다.
대조군: 미처치
FK330 단독 투여군: FK330 100mg/kg 비드(200mg/kg/일, 실험 개시부터 실험 종료시까지 연속 투여)
파클리탁셀 단독 투여군: 파클리탁셀 10mg/kg/일
AZ-521 담암 마우스:
파클리탁셀을 0일차 내지 5일차까지 6일간 연속 투여를 행한 후 22일간의 휴약 기간을 두고(1 사이클), 파클리탁셀을 28일차 내지 32일차까지 5일간 연속 투여하였다(2 사이클).
MKN-28 담암 마우스:
파클리탁셀을 0일차부터 5일차까지 6일간 연속 투여를 행한 후, 22일간의 휴약 기간 후, 28일차부터 32일차까지 5일간 연속 투여하여 23일간의 휴약 기간을 두었다(2 사이클). 또한, 56일차부터 60일차까지 5일간의 연속 투여를 행하였다(3 사이클).
NCI-N87 담암 마우스:
파클리탁셀을 0일차부터 5일차까지 6일간 연속 투여를 행한 후, 26일간의 휴약 기간 후, 32일차부터 36일차까지 5일간 연속 투여하였다(2 사이클).
병용군:
FK330 100mg/kg 비드(200mg/kg/일, 실험 개시부터 실험 종료시까지 연속 투여)+파클리탁셀 10mg/kg/일
FK330은 1일 2회, 6 내지 8시간 간격으로 강제 경구 투여(5mL/kg)하였다. 파클리탁셀은 FK330 투여 후 2 내지 4시간 후에 꼬리 정맥으로부터 정맥내 볼루스 투여(10mL/kg)하였다.
3 내지 4일마다 체중과 디지털 노기스를 사용하여 종양 직경을 측정하였다. 종양 부피는 (단경×[장경]2×0.52)의 타원 부피의 계산식으로부터 산출하였다.
4) 통계 해석
결과는 평균값(Mean)±표준 오차(SEM)로 나타내었다. 각 측정시의 종양 부피의 실측값에 대하여, 단독 투여군과 병용군에서 대응이 없는 2군간의 차의 검정(스튜던트 티 검정)을 행하고, 5％ 미만을 유의차 있음으로 판정하였다. 데이터 처리에는 그래프패드 프리즘 버전 5.03을 사용하였다.
5) 결과
인간 위암(AZ-521, MKN-28, NCI-N87) 담암 마우스에 있어서, FK330의 파클리탁셀과의 병용 효과를 검토한 결과를 도 10 내지 도 12에 나타내었다. 즉, AZ-521담암 마우스에서의 FK330과 파클리탁셀의 병용 효과를 도 10에, MKN-28 담암 마우스에서의 병용 효과를 도 11에, NCI-N87 담암 마우스에서의 병용 효과를 도 12에 각각 나타내었다. 인간 비소세포 폐암 담암 마우스와 마찬가지로, FK330은 파클리탁셀의 항종양 효과를 증강하였다. AZ-521 담암 마우스에 있어서, 실험 마지막 날의 파클리탁셀 단독군의 종양 부피는 3285.4±359.4mm3, 파클리탁셀과 FK330의 병용군에서는 795.0±223.3mm3였으며, 파클리탁셀 단독군에 대하여 종양 부피가 75.8％(P<0.01) 감소하였다. MKN-28 및 NCI-N87 담암 마우스에 있어서도, FK330은 파클리탁셀의 항종양 효과를 증강하였다(MKN-28 담암 마우스: 454.1±147.5mm3 대 164.8±18.5mm3, 63.7％ 감소, P=0.08, NCI-N87 담암 마우스: 492.0±48.5mm3 대 223.9±85.1mm3, 54.5％ 감소, P<0.03).
결과는 평균값(Mean)±표준 오차(SEM)로 나타내었다(n=5 또는 6). P값은 병용군을 화학 요법제 단독 투여군과 비교했을 때의 유의차를 나타낸다(스튜던트 티 검정).
6) 결론
FK330의 병용은, 인간 위암 담암 모델에 있어서 파클리탁셀의 항종양 효과를 증강하고, 특히 복수 사이클 처치에 의한 파클리탁셀의 항종양 효과의 감약을 개선하는 효과가 관찰되었다.
실시예 6
1) 피검 물질
FK330의 용량은 단체(비수화물) 중량으로 환산하여 표시하였다. 파클리탁셀은 LC 래버러토리스사(LC Laboratories)(워번(Woburn), MA, USA)로부터 구입하여, 파클리탁셀로서 사용하였다.
2) 피검 물질의 조제 및 투여
FK330은 0.5％ 메틸셀룰로오스 수용액(0.5％ MC)에 현탁하고(20mg/mL), 경구 투여하였다. 파클리탁셀은, 에탄올/발색단(chromophore) 용액(1:1로 혼합)으로 10 mg/mL의 스톡 용액을 조제한 후, 투여 직전에 주사용 생리 식염수(오쯔카 세이야꾸)로 1mg/mL로 희석하여 꼬리 정맥내 투여하였다.
3) 세포
인간 유방암 유래 MDA-MB-231(HTB-26)은 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(VA, USA)으로부터 입수하였다. 세포는 10％의 가열 불활성화한 소 태자 혈청(FBS)이 첨가된 DMEM 배지를 사용하여, 37℃, 5％ CO2의 조건으로 배양하였다. 트립신을 사용하여 회수한 세포를 PBS로 6×107셀/mL에 현탁하고, 등량의 마트리겔(상표) 베이스먼트 멤브레인 매트릭스(벡톤 디킨슨사, 베드포드, MA, USA)와 혼합하였다.
4) 동물
5주령의 자성 누드 마우스(CAnN Cg-Foxn1nu/CrlCrlj(nu/nu))는 닛본 찰스 리버사(일본, 가나가와)로부터 구입하였다. 동물은 시험 기간을 통해 특정 병원체 미감염(SPF) 조건하에 표준적인 사료와 음수를 부여하여 사육하였다. 배양한 세포를 3×106셀/0.1mL/마우스로 누드 마우스의 배부 피하에 이식하였다. 종양 부피(단경×[장경]2×0.5)가 148.7로부터 312.5mm3가 된 누드 마우스를 군간 및 군내의 종양 부피 편차가 작아지도록 SAS를 사용하여 군을 나누었다.
5) 약물 투여 및 측정
투여 첫날을 1일차로 하여 66일차까지 관찰을 행하였다. 각각의 군(n=6)을 이하와 같이 처리하였다. FK330은 5mL/kg으로 강제 경구 투여를 행하고, 파클리탁셀은 10mL/kg으로 꼬리 정맥내 투여를 행하였다. 파클리탁셀은, 1일차부터 4일차까지 4일간 연속 투여를 행한 후, 25일간의 휴약을 행하였다(1 사이클). PTX의 2 사이클째의 투여에서는, 30일차로부터 4일간 연속 투여하였다.
대조군: 미처치
FK330 단독 투여군: FK330 100mg/kg 비드(200mg/kg/일, 실험 개시부터 실험 종료시까지 연속 투여)
파클리탁셀 단독 투여군: 파클리탁셀 10mg/kg/일(각 사이클 4일간 연속 투여)
병용군:
FK330 100mg/kg/kg 비드(200mg/kg/일, 실험 개시부터 실험 종료시까지 연속 투여)+파클리탁셀 10mg/kg/일(각 사이클 4일간 연속 투여)
FK330은 1일 2회, 6 내지 8시간 간격으로 강제 경구 투여(5mL/kg)하였다. 파클리탁셀은 FK330 투여 후 1 내지 4시간 후에 꼬리 정맥으로부터 정맥내 볼루스 투여(10mL/kg)하였다.
체중과 디지털 노기스를 사용하여 종양 직경을 주 2회 측정하였다. 종양 부피는 (단경×[장경]2×0.52)의 타원 부피의 계산식으로부터 산출하였다.
6) 통계 해석
결과는 평균값(Mean)±표준 오차(SEM)로 나타내었다. 시험 기간 중, 촉진 한계 이하를 완전 소실(CR)로서 판정하고, 측정값은 0으로 하였다. 각 측정시의 종양 부피의 실측값을 사용하여, 단독 투여군과 병용군의 비교에 대하여 대응이 없는 2군간의 차의 검정(스튜던트 티 검정)을 행하였다. 5％ 미만을 유의차 있음으로 판정하였다. 데이터 처리에는 그래프패드 프리즘 버전 5.03을 사용하였다.
7) 결과
인간 유방암 담암 마우스에서의 FK330의 파클리탁셀과의 병용 효과를 검토한 결과를 도 13에 나타내었다. 인간 유방암(MDA-MB-231) 담암 마우스에 있어서, FK330은 파클리탁셀의 항종양 효과를 분명하게 증강하고, 28일차에서의 파클리탁셀 단독군에 대한 종양 부피 감소율은 59.6％(P<0.01), 66일차에서의 파클리탁셀 단독군에 대한 종양 부피 감소율은 82.8％(P<0.01)였다.
결과는 평균값(Mean)±표준 오차(SEM)로 나타내었다(n=6). **: P<0.01은 병용군을 파클리탁셀 단독 투여군과 비교했을 때의 유의차를 나타낸다(스튜던트 티 검정).
8) 결론
인간 유방암(MDA-MB-231) 담암 마우스에 있어서, FK330의 병용은 복수 사이클 투여에 의한 파클리탁셀의 항종양 효과를 증강하고, 종양의 재증식을 분명하게 억제하였다.
실시예 7
1) 피검 물질
NO 공여체인 S-니트로소-N-아세틸-D, L-페니실라민(SNAP)은 카이만 케미컬(Cayman Chemical)사(앤 아버(Ann Arbor), MI, USA)로부터 구입한 것을 사용하였다. 튜불린 중합 측정 키트는 사이토스켈레톤(Cytoskeleton)사(덴버(Denver), CO, USA)로부터 구입하여 사용하였다. 파클리탁셀은, 측정 키트에 동봉되어 있는 파클리탁셀을 파클리탁셀로서 사용하였다. 도세탁셀은 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)사(세인트 루이스(St. Louis), MO, USA)로부터 구입하여, 도세탁셀로서 사용하였다.
2) 시험 방법
형광법에 의한 튜불린 중합 반응 측정은, 키트의 설명서에 따라 실시하였다. 즉, 정제 돼지 뇌 유래 튜불린(최종 농도 2mg/mL)과 SNAP(최종 농도 200 또는 500μmol/L)를 키트에 동봉되어 있는 완충액 중에서 15분 이상, 실온에서 인큐베이트 하였다. 이어서 파클리탁셀(최종 농도 3μmol/L) 또는 도세탁셀(최종 농도 1μmol/L) 및 GPT(최종 농도 1mmol/L)를 이 완충액에 가하고, 37℃에서 60분간 인큐베이트하였다. 이 인큐베이션하는 동안, 마이크로플레이트 리더(스펙트라맥스(SpectraMax)사, 몰레큘러 디바이스(Molecular Devices)사, 서니베일(Sunnyvale), CA, USA)로 형광 강도(측정 파장: 여기 350nm/형광 435nm)를 1분 마다 측정하였다. 형광 강도의 값은, 평형 정상기에 해당하는 반응 개시 60분 후의 값을 사용하고, SNAP 및 탁산 미처치군에 대한 백분율로 나타내어, 3회 시행한 평균값을 그의 값으로 하였다.
3) 통계 해석
결과는, 독립된 5회의 실험의 평균값(Mean)±표준 오차(SEM)로 나타내었다. 파클리탁셀 또는 도세탁셀 처치군과 미처치군의 비교는, 대응이 없는 2군간의 차의 검정(스튜던트 티 검정)을 행하였다. 탁산계 약제 처치 및 미처치에서의 SNAP 미처치군(대조군)과 SNAP 처치군(200 및 500μmol/L)의 비교는, 던네트(Dunnett's) 다중 비교 검정을 행하였다. 5％ 미만을 유의차 있음으로 판정하였다. 데이터 처리에는 그래프패드 프리즘 버전 5.03을 사용하였다.
4) 결과
파클리탁셀 유발 튜불린 중합 작용에 대한 SNAP의 억제 작용의 대표예 및 튜불린 중합 개시 후 60분의 집계값을 도 14의 A) 및 B)에, 도세탁셀 유발 튜불린 중합에 대한 SNAP의 억제 작용의 대표예 및 튜불린 중합 개시 후 60분의 집계값을 도 15의 A) 및 B)에 각각 나타내었다. 파클리탁셀 또는 도세탁셀은, 각 탁산 미처치에 비교하여 튜불린 중합을 각각 152.7％(P<0.05) 및 184.1％(P<0.001) 유의하게 촉진하였다. NO 공여체인 SNAP는, 파클리탁셀 및 도세탁셀에 의해 촉진된 튜불린 중합 반응을 유의하게 억제하였다. 또한, SNAP는 자연히 야기되는 튜불린 중합 반응도 유의하게 억제하였다.
결과는 평균값(Mean)±표준 오차(SEM)로 나타내었다(n=5). #: P<0.05 및###: P<0.001은, 파클리탁셀 또는 도세탁셀 처치군과 각 탁산 약제 미처치군을 비교했을 때의 유의차를 나타낸다(스튜던트 티 검정). $: P<0.05 및 $$$: P<0.001은, 탁산 미처치에서의 SNAP 미처치군(대조군)에 대한 SNAP 처치군의 유의차를 나타낸다(던네트 다중 비교 검정). *: P<0.05, **: P<0.01 및 ***: P<0.001은, 탁산 처치에서의 SNAP 미처치군(대조군)에 대한 SNAP 처치군의 유의차를 나타낸다(던네트 다중 비교 검정).
5) 결론
NO 공여체는, 파클리탁셀 및 도세탁셀에 의해 촉진된 튜불린 중합 반응을 직접 억제하였다.
실시예 8
1) 피검 물질
FK330의 용량은 단체(비수화물) 중량으로 환산하여 표시하였다. 파클리탁셀 주사제(파클리탁셀 주사액 「사와이」)는 사와이 세이야꾸 가부시끼가이샤로부터 구입하여, 파클리탁셀로서 사용하였다. 래트 항마우스 F4/80 항원 모노클로날 항체, 토끼 항iNOS 폴리클로날 항체 및 토끼 항니트로티로신 항체는, 각각 AbD 세로텍(AbD Serotec)사(옥스포드(Oxford), UK), 산타 크루즈 바이오테크놀로지(Santa Cruz Biotechnology)사(산타 크루즈(Santa Cruz), CA, US) 및 밀리포어(Millipore)사(빌레리카(Billerica), MA, USA)로부터 구입한 것을 사용하였다.
2) 피검 물질의 조제 및 투여
FK330은 0.5％ 메틸셀룰로오스 수용액(0.5％ MC)에 현탁하여(20mg/mL), 경구 투여하였다. 파클리탁셀은, 주사용 생리 식염수(오쯔카 세이야꾸)로 1mg/mL로 용시 조제하였다.
3) 세포
인간 폐암 유래 Calu-6(HTB-56)은 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(VA, USA)으로부터 입수하였다. 세포는 10％의 가열 불활성화한 소 태자 혈청(FBS)이 첨가된 RPMI1640 배지를 사용하여, 37℃, 5％ CO2의 조건으로 배양하였다. 트립신을 사용하여 회수한 세포를 PBS로 6×107셀/mL에 현탁하고, 등량의 마트리겔(상표) 베이스먼트 멤브레인 매트릭스(벡톤 디킨슨사, 베드포드, MA, USA)와 혼합하였다.
4) 동물
5주령의 웅성 누드 마우스(CAnN Cg-Foxn1nu/CrlCrlj(nu/nu))는 닛본 찰스 리버사(일본, 가나가와)로부터 구입하였다. 동물은 시험 기간을 통해 특정 병원체 미감염(SPF) 조건하에 표준적인 사료와 음수를 부여하여 사육하였다. 배양한 세포를 3×106셀/0.1mL/마우스로 누드 마우스의 배부 피하에 이식하였다. 종양 부피(단경×[장경]2×0.5)가 136.8로부터 248.5mm3가 된 누드 마우스를 군간 및 군내의 종양 부피 편차가 작아지도록 SAS를 사용하여 군을 나누었다.
5) 약물 투여
약물 투여는, 투여 첫날(1일차)로부터 개시하였다. 각각의 군(n=5)을 이하와 같이 처리하였다. FK330은 5mL/kg으로 강제 경구 투여를 1일차부터 6일차까지, 파클리탁셀은 10mL/kg으로 꼬리 정맥내 투여를 1일차부터 5일차까지 행하였다.
대조군: 미처치
FK330 단독 투여군: FK330 100mg/kg 비드(200mg/kg/일, 1일차 내지 6일차)
파클리탁셀 단독 투여군: 파클리탁셀 10mg/kg/일(1일차 내지 5일차)
병용군: FK330 100mg/kg/kg 비드(200mg/kg/일, 1일차 내지 6일차)+파클리탁셀 10mg/kg/일(1일차 내지 5일차)
FK330은 1일 2회, 6 내지 8시간 간격으로 강제 경구 투여(5mL/kg)하였다. 파클리탁셀은 FK330 투여 후 1 내지 4시간 후에 꼬리 정맥으로부터 정맥내 볼루스 투여(10mL/kg)하였다.
6) 조직 고정 및 동결 절편 제작
6일차에 마우스로부터 종양 조직을 채재(harvest)하였다. 4％ 파라포름알데히드-인산 완충액(와코 쥰야꾸 고교 주)으로 4℃에서 12시간 침윤 고정을 행하였다. 조직 고정도, 10％, 15％ 및 20％ 수크로오스/인산 완충액을 사용하여, 통상법에 따라 4℃에서 단계적으로 수크로오스 치환하였다. 치환 종료 후, O.C.T. 컴파운드(Compound)(토론토 리서치 케미컬스(Toronto Research Chemicals)사, 토론토(Toronto), 캐나다(Canada)) 중에 암 조직을 포매하고, 드라이 아이스/아세톤으로 동결 절편을 제작하여, -80℃에서 보존하였다.
7) 면역 화학 염색 및 화상 해석
5μm의 얇은 동결 절편을 크라이오스탯(사쿠라 파인텍 재팬 가부시끼가이샤)으로 제작하고, 풍건하였다. 4％ 파라포름알데히드-인산 완충액으로 건조시킨 동결 절편을 세정한 후, 내인성 퍼옥시다아제를 실활화(失活化)시키기 위해 0.3％ 과산화수소/메탄올로 절편을 30분간 처리하였다. 마우스 매크로파지, iNOS 및 니트로티로신 염색은 이하의 순서에 따라 행하였다. iNOS 및 니트로티로신 염색에 대해서는, 면역 화학 염색을 행하기 전에 마이크로웨이브(3분/500W)에 의해 항원 활력화를 행하였다.
마우스 매크로파지 염색:
1차 항체 처리: 래트 항마우스 F4/80 항원 모노클로날 항체(1:200 희석)와 60분간 실온에서 인큐베이션하였다.
2차 항체 처리: 비오틴화 항래트 IgG 항체(1:100 희석, 벡터 래버러토리스(vector laboratories)사)와 30분간 실온에서 인큐베이션 하였다.
검출계: 벡타스테인 ABC 키트(VECTASTAIN ABC kit)(벡터 래버러토리스사)를 사용하여, 절편을 30분간 실온에서 인큐베이션 하였다.
발색: 3,3'-디아미노벤지딘테트라히드로클로라이드(DAB, 다코(Dako)사) 시약을 사용하여, 실온에서 1분간 처리하였다.
iNOS 염색:
1차 항체 처리: 토끼 항iNOS 폴리클로날 항체(1:500 희석)와 만 하루 4℃에서 인큐베이션하였다.
검출계: 엔비전(EnVision)(다코;)을 사용하여, 절편을 30분간 실온에서 인큐베이션하였다.
발색: DAB 시약을 사용하여, 실온에서 1분간 처리하였다.
니트로티로신 염색:
1차 항체 처리: 토끼 항니트로티로신 항체(1:500 희석)와 만 하루 4℃에서 인큐베이션하였다.
검출계: 엔비전(다코;)을 사용하여, 절편을 30분간 실온에서 인큐베이션하였다.
발색: DAB 시약을 사용하여, 실온에서 1분간 처리하였다.
염색한 화상(F4/80 염색 화상 및 iNOS 화상은 200배, 니트로티로신 염색 화상은 400배)은 현미경을 통해 컴퓨터에 도입하고, 윈루프(WinROOF)(버전 5.7)를 탑재한 화상 해석 시스템(미따니 쇼지 가부시끼가이샤)에 의해 해석하였다. 값은, 총 면적당의 양성 면적의 비(％)로 나타내었다. 각 절편당 5 시야를 계측하고, 그의 평균값을 값으로 하였다.
8) 통계 해석
결과는 평균값(Mean)±표준 오차(SEM)로 나타내었다. 종양 조직 내 iNOS 단백 발현, 매크로파지(F4/80) 침윤 및 니트로티로신(NO의 주된 최종 생성물)의 각 측정값에 대하여, 대조군과 파클리탁셀 단독군, FK330 단독군 또는 파클리탁셀 및 FK330 병용군의 비교, 및 파클리탁셀 단독군과 파클리탁셀 및 FK330 병용군의 비교에 대하여, 대응이 없는 2군간의 차의 검정(스튜던트 티 검정)을 행하였다. 5％ 미만을 유의차 있음으로 판정하였다. 데이터 처리에는 그래프패드 프리즘 버전 5.03을 사용하였다.
9) 결과
인간 폐암 세포주 Calu-6 담암 마우스에서의 파클리탁셀 단독 및 FK330 병용시의 종양 조직 내 iNOS 단백 발현, 매크로파지(F4/80) 침윤 및 니트로티로신(NO의 주된 최종 생성물) 발현에 대한 작용을 도 16 내지 18에 나타내었다. 대조군의 종양 조직 내에는 iNOS 양성 세포 및 매크로파지는 거의 관찰되지 않고, 니트로티로신(NO의 최종 생성물)도 낮았다. 한편, 파클리탁셀 투여에 의해 종양 조직 내로의 매크로파지의 침윤이 분명하게 관찰되었다. 또한, 종양 조직 내 iNOS 단백 발현도 분명하게 항진하여, 그 결과 종양 조직 내 니트로티로신량도 증가하였다. iNOS 저해제인 FK330의 병용은, 종양 내 매크로파지 침윤 및 iNOS 단백 발현에는 작용을 미치지 않았지만, 니트로티로신 생산을 억제하였다.
결과는 평균값(Mean)±표준 오차(SEM)로 나타내었다(n=5). ***: P<0.001은, 대조군과 비교했을 때의 유의차를 나타낸다(스튜던트 티 검정).
10) 결론
인간 폐암(Calu-6) 담암 마우스에 있어서, 파클리탁셀은 종양 조직 내로의 매크로파지의 침윤 및 종양 조직 내 iNOS 단백 발현을 유발하고, 그 결과 종양 내 NO 생산을 유발하였다. iNOS 저해제인 FK330의 병용은, 파클리탁셀에 의해 유발되는 iNOS 유래 NO 생산을 억제하였다.
본 발명의 탁산계 항종양제와 조합하여 병용 투여되도록 사용되는 것을 특징으로 하는 FK330 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는 암 치료용 조성물은, 탁산계 항종양제와의 병용에 의해 높은 암 치료 효과가 얻어진다는 점에서, 특히 기존의 탁산계 항종양제에 적응되는 것이 알려진 각종 암의 치료에 유용하다. 적응되는 암으로서는 탁산계 항종양제가 사용되고 있는 고형암 및 림프종이며, 어떤 형태로서는 유방암, 자궁체암, 난소암, 전립선암, 폐암, 위(위선)암, 비소세포 폐암, 췌장암, 두경부 편평 상피암, 식도암, 방광암, 멜라노마, 대장암, 신세포암, 비호지킨 림프종 등을 들 수 있다.

Claims (19)

  1. 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제와 조합하여 병용 투여되도록 사용되는 것을 특징으로 하는, N2-[(2E)-3-(4-클로로페닐)-2-프로페노일]-N-[2-옥소-2-(4-{[6-(트리플루오로메틸)피리미딘-4-일]옥시}피페리딘-1-일)에틸]-3-피리딘-2-일-L-알라닌아미드 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는 암 치료용 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 파클리탁셀(paclitaxel) 또는 도세탁셀(docetaxel)과 조합하여 병용 투여되도록 사용되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 파클리탁셀과 조합하여 병용 투여되도록 사용되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  4. 제2항에 있어서, 도세탁셀과 조합하여 병용 투여되도록 사용되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 60 내지 1200mg/일의 N2-[(2E)-3-(4-클로로페닐)-2-프로페노일]-N-[2-옥소-2-(4-{[6-(트리플루오로메틸)피리미딘-4-일]옥시}피페리딘-1-일)에틸]-3-피리딘-2-일-L-알라닌아미드 또는 그의 염을 포함하는 경구 투여용 조성물인 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 60 내지 200mg/일의 N2-[(2E)-3-(4-클로로페닐)-2-프로페노일]-N-[2-옥소-2-(4-{[6-(트리플루오로메틸)피리미딘-4-일]옥시}피페리딘-1-일)에틸]-3-피리딘-2-일-L-알라닌아미드 또는 그의 염을 포함하는 경구 투여용 조성물인 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 플라티나계 항종양제, 안트라사이클린계 항종양제, 시클로포스파미드, 플루오로우라실, 트라스투주마브 및 카페시타빈으로부터 선택되는 1 이상의 항종양제와 더 조합하여 병용 투여하도록 사용되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제와 동시에, 각각, 연속하여, 또는 간격을 두고 투여되는 것을 특징으로 하는, 암 치료용 조성물.
  9. N2-[(2E)-3-(4-클로로페닐)-2-프로페노일]-N-[2-옥소-2-(4-{[6-(트리플루오로메틸)피리미딘-4-일]옥시}피페리딘-1-일)에틸]-3-피리딘-2-일-L-알라닌아미드 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는, 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제에 의한 치료를 받고 있는 대상을 치료하기 위한 암 치료용 조성물
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 탁산계 항종양제가 사용되고 있는 암의 치료용인 암 치료용 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 탁산계 항종양제가 사용되고 있는 암이 비소세포 폐암인 암 치료용 조성물.
  12. 제10항에 있어서, 탁산계 항종양제가 사용되고 있는 암이 유방암인 암 치료용 조성물.
  13. 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제와 조합하여 병용 투여되도록 사용되는 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물을 제조하기 위한, N2-[(2E)-3-(4-클로로페닐)-2-프로페노일]-N-[2-옥소-2-(4-{[6-(트리플루오로메틸)피리미딘-4-일]옥시}피페리딘-1-일)에틸]-3-피리딘-2-일-L-알라닌아미드 또는 그의 염의 용도.
  14. 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제와 조합하여 병용 투여되도록 사용되는 것을 특징으로 하는, 암 치료를 위한, N2-[(2E)-3-(4-클로로페닐)-2-프로페노일]-N-[2-옥소-2-(4-{[6-(트리플루오로메틸)피리미딘-4-일]옥시}피페리딘-1-일)에틸]-3-피리딘-2-일-L-알라닌아미드 또는 그의 염.
  15. 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제의 병용 치료에 사용하는 경우의 치료 유효 용량, 및 N2-[(2E)-3-(4-클로로페닐)-2-프로페노일]-N-[2-옥소-2-(4-{[6-(트리플루오로메틸)피리미딘-4-일]옥시}피페리딘-1-일)에틸]-3-피리딘-2-일-L-알라닌아미드 또는 그의 염의 병용 치료에 사용하는 경우의 치료 유효 용량을 조합하여 대상에게 투여하는 것을 특징으로 하는 암의 치료 방법.
  16. 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제의 병용 치료에 사용하는 경우의 치료 유효 용량, 및 N2-[(2E)-3-(4-클로로페닐)-2-프로페노일]-N-[2-옥소-2-(4-{[6-(트리플루오로메틸)피리미딘-4-일]옥시}피페리딘-1-일)에틸]-3-피리딘-2-일-L-알라닌아미드 또는 그의 염의 병용 치료에 사용하는 경우의 치료 유효 용량을 동시에, 각각, 연속하여, 또는 간격을 두고 대상에게 투여하는 것을 특징으로 하는 암의 치료 방법.
  17. N2-[(2E)-3-(4-클로로페닐)-2-프로페노일]-N-[2-옥소-2-(4-{[6-(트리플루오로메틸)피리미딘-4-일]옥시}피페리딘-1-일)에틸]-3-피리딘-2-일-L-알라닌아미드 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는, 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제의 항종양 작용 증강제.
  18. N2-[(2E)-3-(4-클로로페닐)-2-프로페노일]-N-[2-옥소-2-(4-{[6-(트리플루오로메틸)피리미딘-4-일]옥시}피페리딘-1-일)에틸]-3-피리딘-2-일-L-알라닌아미드 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는, 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제의 내성화 억제제 또는 내성화 예방제.
  19. N2-[(2E)-3-(4-클로로페닐)-2-프로페노일]-N-[2-옥소-2-(4-{[6-(트리플루오로메틸)피리미딘-4-일]옥시}피페리딘-1-일)에틸]-3-피리딘-2-일-L-알라닌아미드 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는, 탁산계 항종양제로부터 선택되는 1 이상의 항종양제의 감수성 증강제.
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