TW201429474A - 藉由藥劑並用的癌治療方法 - Google Patents

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Yukinori Arai
Nobuaki Amino
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Abstract

本發明之課題係尋求增大紫杉烷系抗腫瘤劑對各種腫瘤之藥效之治療方法。本發明之解決手段係本發明者對於增強紫杉烷系抗腫瘤劑之抗腫瘤作用之方法，進行檢討之結果，確認含有N2-(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基〕-N-〔2-羰基-2-(4-{〔6-(三氟甲基)嘧啶-4-基〕氧}哌啶-1-基)乙基〕-3-吡啶-2-基-L-丙胺醯胺(FK330)或其鹽作為有效成份之癌治療用組成物，增強紫杉烷系抗腫瘤劑之抗腫瘤作用，完成本發明。亦即，本申請書係關於與選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑之並用投與用之含有FK330或其鹽作為有效成份之癌治療用組成物，作為某種型態係前列腺癌或卵巢癌治療用組成物。

Description

藉由藥劑並用的癌治療方法
本發明係關於醫藥，尤其含有N2-〔(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基〕-N-〔2-羰基-2-(4-{〔6-(三氟甲基)嘧啶-4-基〕氧}哌啶-1-基)乙基〕-3-吡啶-2-基-L-丙胺醯胺或其鹽作為有效成份，用以與紫杉烷系抗腫瘤劑並用之癌治療用組成物。
惡性腫瘤之化學療法中，紫杉烷系抗腫瘤劑，尤其汰癌勝(Paclitaxel)或剋癌易(Docetaxel)係作為幾種癌性腫瘤的有效藥劑使用。
已知紫杉烷系抗腫瘤劑係抑制細胞分裂時必要的微管去聚合，抑制癌細胞分裂。汰癌勝係使用於治療卵巢癌、非小細胞肺癌、乳癌、胃癌等，剋癌易係使用於治療乳癌、非小細胞肺癌、胃癌、頭頸部癌、卵巢癌、食道癌、子宮體癌等。
臨床現場中，以增強藥效或擴大抗癌範圍為目的，進行與紫杉烷系抗腫瘤劑作用機制不同之其他抗腫瘤劑組合之多劑並 用療法。例如汰癌勝與佳鉑帝(Carboplatin)並用(Cancer,1996,77：2458-63.)或剋癌易與順鉑(cisplatin)等(Eur.J.Surg.Oncol.2006 32(3)297-302)。另外，美國食品暨藥物管理局(FDA)提供各種資料庫，例如"Drugs@FDA"(http：//www.accessdata.fda.gov/scripts/cder/drugsatfda/index.cfm)或歐洲藥物管理局(EMA)之首頁(http：//www.ema.europa.eu/)係揭示並用汰癌勝或剋癌易與其他抗腫瘤劑之臨床處方。
一般，若增多抗腫瘤劑之投與量時，可見到副作用亦隨其成比例，所以其投與係必須慎重。因此，關於投與抗腫瘤劑，就副作用之觀點，設定最大耐用量(MTD)，其投與量受到限制。另外，例如依據日本醫藥品醫藥機器情報提供首頁之Taxol(紫杉醇)注射液(註冊商標：汰癌勝之商品名)之附加文件時，汰癌勝係記載著「1天1次210mg/m2，以3小時點滴靜脈注射，至少停藥3週。以此為1個單位，重複投與。另外，投與量係依年齡、症狀而適當減量」，汰癌勝係除了用量，投與方法亦特定。另外，關於Taxol(紫杉醇)注射液(註冊商標：剋癌易之商品名)，有「1次最高用量為70mg/m2」之記載，指示用量。
另一方面，具有良好的一氧化氮(NO)合成酵素(NOS)抑制活性之胜肽衍生物係揭示於國際公開02/055541號手冊(專利文獻1)。尤其，該公報所揭示之實施例41，報告以下式表示之N2-〔(2E)-3-(4-氯苯 基)-2-丙烯醯基〕-N-〔2-羰基-2-(4-{〔6-(三氟甲基)嘧啶-4-基〕氧}哌啶-1-基)乙基〕-3-吡啶-2-基-L-丙胺醯胺(稱為FR260330或FK330)顯示優異的誘導型一氧化氮合成酵素(inducible NOS,iNOS)抑制活性(非專利文獻1)，進一步揭示FK330對大鼠大動脈移植之慢性排斥模式有效(非專利文獻2)。另外，對於猴子腎缺血/再灌流傷害及大鼠肝臟移植之缺血/再灌流傷害亦有效(非專利文獻3、4)或抑制藉由TGFβ1增加或星狀細胞活化所衍生之纖維化，對肝硬化治療有效(專利文獻2、非專利文獻5)，進一步，已有報告對炎症性角化症、角化症、或炎症性皮膚病亦有效(專利文獻3)。
認為iNOS係於上皮細胞、平滑肌細胞、巨噬細胞等各種型式的細胞表現，因感染或炎症等所衍生之細胞激素等，於轉錄階層(transcriptional level)誘導其表現，產生NO。iNOS係擔任感染或身體防禦等之中心媒介物質(mediator)的角色。
NO促進癌的發展或轉移，另一方面亦抑制此等，由至今的許多研究而顯示。揭示NO對癌的作用係依賴NOS 異構物之活性或局部性、NO暴露之濃度或期間、細胞對NO之敏感性(非專利文獻6)，就促進NO產生及抑制NO產生之兩方面，進行癌的生理學上研究，對癌治療的應用上，未能得到促進NO產生及抑制NO產生之何者為佳之一定的見解(非專利文獻7及8)。
非專利文獻9及10係記載著對於人類卵巢癌細胞或頭頸部癌細胞，低濃度之NO顯示抑制順鉑(cisplatin)及汰癌勝(Paclitaxel)所引起之細胞凋亡(apoptosis)之趨勢，高濃度之NO促進細胞凋亡。此等文獻亦記載藉由iNOS抑制劑1400W與生存素(survivin)RNAi並用，不僅是汰癌勝(Paclitaxel)，亦促進順鉑(cisplatin)所引起之細胞凋亡(apoptosis)，可說NO之細胞保護效果並非汰癌勝(Paclitaxel)選擇性之作用。
先前技術文獻 〔專利文獻〕
〔專利文獻1〕國際公開第02/055541號手冊
〔專利文獻2〕特許第3700854號公報
〔專利文獻3〕特開2006-008621號公報
〔非專利文獻〕
〔非專利文獻1〕European Journal of Pharmacology 509,71(2005)
〔非專利文獻2〕Transplantation 79,10 1386(2005)
〔非專利文獻3〕Transplantation 81,4,627(2006)
〔非專利文獻4〕American Journal of Transplantation 6,9,2013(2006)
〔非專利文獻5〕Wound Repair and Regeneration 15,881(2007)
〔非專利文獻6〕Nature Reviews Cancer,6(7),521-34(2006)
〔非專利文獻7〕Cancer Chemotherapy and Pharmacology,67,1211-1224(2011)
〔非專利文獻8〕Nitric Oxide 19,158-163(2008)
〔非專利文獻9〕Cancer Research,68,5158-5166(2008)
〔非專利文獻10〕International Journal of Cancer,124,2033-2041(2009)
紫杉烷系抗腫瘤劑係有效於治療各種腫瘤，但就副作用上，投與量或用法受到限制，現在進一步追求的不是使投與量增加，而是更增大對各種腫瘤之藥效之治療方法。另外，治療最初係有效，但繼續治療中抗腫瘤效果減弱之取得耐性成為問題。
本發明者對於增強紫杉烷系抗腫瘤劑之抗腫瘤作用之 方法，努力進行檢討之結果，意外地藉由並用N2-〔(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基〕-N-〔2-羰基-2-(4-{〔6-(三氟甲基)嘧啶-4-基〕氧}哌啶-1-基)乙基〕-3-吡啶-2-基-L-丙胺醯胺，發現可達成增強明顯的抗腫瘤作用及其增強作用的機制，完成本發明。
亦即，本發明係關於
(1)與選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑組合，並用投與用為特徵之含有FK330或其鹽作為有效成份之癌治療用組成物。
進一步某些型態如後所示。
(2)與汰癌勝或剋癌易組合，並用投與用為特徵之(1)記載之組成物。
(3)與汰癌勝組合，並用投與用為特徵之(2)記載之組成物。
(4)與剋癌易組合，並用投與用為特徵之(2)記載之組成物。
(5)含60~1200mg/日之FK330或其鹽之經口投與用組成物之(1)至(4)記載之組成物。
(6)包含60~200mg/日之FK330或其鹽之經口投與用組成物之(5)記載之組成物。
(7)進一步與選自白金系抗腫瘤劑、蒽環(anthracycline)系抗腫瘤劑、癌德星(cyclophosphamide)、氟尿嘧啶(Fluorouracil)、賀癌平(Trastuzumab)及截瘤達(Capecitabine)中1種以上之抗腫瘤劑組合，並用投與 用為特徵之(1)至(6)記載之組成物。
(8)選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑之1個投與循環中至少1天，並用投與用為特徵之(1)至(6)記載之組成物。
(9)選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑之投與日之至少1天，並用投與用為特徵之(8)記載之組成物。
(10)選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑之1個投與循環中全天，並用投與用為特徵之(8)記載之組成物。
另外，本申請書發明亦關於後述之發明。
(11)與選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑同時地、分別地，連續或間隔地投與為特徵之(1)至(6)記載之癌治療用組成物。
(12)含有FK330或其鹽作為有效成份之用以治療接受藉由選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑治療之對象之癌治療用組成物。
(13)使用紫杉烷系抗腫瘤劑之癌之治療用之(1)至(12)記載之癌治療用組成物。
(14)使用紫杉烷系抗腫瘤劑之癌係非小細胞肺癌、前列腺癌、乳癌或胃癌之(13)記載之癌治療用組成物。
(15)使用紫杉烷系抗腫瘤劑之癌係非小細胞肺癌之(13)記載之癌治療用組成物。
(16)使用紫杉烷系抗腫瘤劑之癌係前列腺癌或去勢 抵抗性前列腺癌之(13)記載之癌治療用組成物。
進而，本發明亦關於下述之發明。
(17)將選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑之使用於並用治療時之治療有效用量、以及FK330或其鹽之使用於並用治療時之治療有效用量之組合，投與於對象為特徵之癌之治療方法。
(18)將選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑之使用於並用治療時之治療有效用量、以及FK330或其鹽之使用於並用治療時之治療有效用量，同時地、分別地，連續或間隔地投與於對象為特徵之癌之治療方法。
另外，所謂「對象」係指其預防或治療為必要之人類或其他動物，作為某種型態，其預防或治療為必要之人類。
另外，進一步本申請書發明係關於以下之發明。
(19)與選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑組合，並用投與用為特徵之製造癌治療用組成物用之FK330或其鹽之使用。
(20)與選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑組合，並用投與用為特徵之癌治療用之FK330或其鹽。
(21)與選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑組合投與為特徵之含有FK330或其鹽作為有效成份之癌治療劑。
(22)含有FK330或其鹽作為有效成份之選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑之抗腫瘤作用增強 劑。
(23)含有FK330或其鹽作為有效成份之選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑之耐性化抑制劑或耐性化預防劑。
(24)含有FK330或其鹽作為有效成份之選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑之敏感性增強劑。
另外，本申請書發明亦關於以下之發明。
(25)與選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑組合，並用投與用為特徵之含有FK330或其鹽作為有效成份之前列腺癌或卵巢癌治療用組成物。
(26)與汰癌勝或剋癌易組合，並用投與用為特徵之(25)記載之組成物。
(27)與汰癌勝組合，並用投與用為特徵之(26)記載之組成物。
(28)與剋癌易組合，並用投與用為特徵之(26)記載之組成物。
(29)含60~1200mg/日之FK330或其鹽之經口投與用組成物之(25)至(28)記載之組成物。
(30)含有60~200mg/日之FK330或其鹽之經口投與用組成物之(29)記載之組成物。
(31)進一步與選自白金系抗腫瘤劑、蒽環(anthracycline)系抗腫瘤劑、癌德星(cyclophosphamide)、氟尿嘧啶(Fluorouracil)、賀癌平(Trastuzumab)及截瘤達(Capecitabine)中1種以上 之抗腫瘤劑組合，並用投與用為特徵之(25)至(30)記載之組成物。
(32)與選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑同時地、分別地，連續或間隔地投與為特徵之(25)至(30)記載之組成物。
(33)含有FK330或其鹽之作為有效成份之用以治療接受藉由選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑治療之對象之前列腺癌或卵巢癌治療用組成物。
(34)使用紫杉烷系抗腫瘤劑之前列腺癌治療用之(25)至(33)記載之組成物。
(35)前列腺癌係去勢抵抗性前列腺癌之(34)記載之癌治療用組成物。
(36)與選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑組合，並用投與用為特徵之製造前列腺癌或卵巢癌治療用組成物用之FK330或其鹽之使用。
(37)與選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑組合，並用投與用為特徵之前列腺癌或卵巢癌治療用之FK330或其鹽。
(38)將選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑之使用於並用治療時之治療有效用量、以及FK330或其鹽之使用於並用治療時之治療有效用量之組合，投與於對象為特徵之前列腺癌或卵巢癌之治療方法。
(39)將選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑之使用於並用治療時之治療有效用量、以及FK330或 其鹽之使用於並用治療時之治療有效用量，同時地、分別地，連續或間隔地投與於對象為特徵之前列腺癌或卵巢癌之治療方法。
因為本發明之藉由並用含有FK330或其鹽作為有效成份之癌治療用組成物與紫杉烷系抗腫瘤劑，可達成增強紫杉烷系抗腫瘤劑之癌治療效果，所以本申請書發明之癌治療用組成物係可與選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑併用而使用於已知既有的紫杉烷系抗腫瘤劑所適用之各種癌的治療。作為可適用之癌，為使用紫杉烷系抗腫瘤劑之固形癌及淋巴癌。作為可適用之癌之其他型態係使用紫杉烷系抗腫瘤劑之前列腺癌或卵巢癌。
用以實施發明之最佳型態
後述係詳細地說明本發明。
本發明之「癌治療用組成物」係用以與紫杉烷系抗腫瘤劑並用之醫藥組成物，作為其他型態係增強紫杉烷系抗腫瘤劑之抗腫瘤作用之醫藥組成物。
本發明之「癌治療用組成物」中的「癌」係使用紫杉烷系抗腫瘤劑的癌，亦即包含使用紫杉烷系抗腫瘤劑之所有固形癌及淋巴腫瘤。作為某種型態，可列舉乳癌、子宮體癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、胃(胃腺)癌、非小細胞肺癌、胰臟癌、頭頸部扁平上皮癌、食道癌、膀胱癌、黑 色素細胞瘤(melanoma)、大腸癌、腎細胞癌、非何傑金氏淋巴癌(Non-Hodgkin Lymphoma)、尿道上皮癌等。作為其他型態，乳癌、卵巢癌、前列腺癌、胃(胃腺)癌、非小細胞肺癌等，又作為其他型態，卵巢癌、前列腺癌等，進而作為其他型態，乳癌，又進而作為其他型態，非小細胞肺癌，作為其他型態，可列舉前列腺癌。
作為乳癌之其他型態，可舉例如HER2陽性轉移性乳癌、HER2陰性轉移性乳癌、HER2陽性乳癌或轉移性乳癌，作為其他型態，可列舉HER2陰性轉移性乳癌，又作為其他型態，可列舉HER2陽性轉移性乳癌。
作為非小細胞肺癌之其他型態，可舉例如局部進行性非小細胞肺癌、或轉移性非小細胞肺癌，作為其他型態，可列舉非小細胞肺癌中之非扁平上皮癌，又作為其他型態，可列舉轉移性非小細胞肺癌中之非扁平上皮癌，進而作為其他型態，可列舉轉移性非小細胞肺癌中之扁平上皮癌。
作為胃癌之其他型態，可列舉轉移性胃癌、轉移性胃食道接合處癌等。
作為前列腺癌之其他型態，可列舉激素抵抗性前列腺癌。作為激素抵抗性前列腺癌，可列舉去勢抵抗性前列腺癌。作為去勢抵抗性前列腺癌之某種型態，可列舉轉移性去勢抵抗性前列腺癌。作為其他型態，可列舉激素抵抗性前列腺癌，又作為其他型態，可列舉去勢抵抗性前列腺癌，進而作為其他型態，可列舉轉移性去勢抵抗性前列腺 癌。
本發明所使用之FK330或其鹽係國際公開02/055541號手冊之實施例41之化合物，藉由該專利所揭示之製造方法而可容易取得。
FK330係基於不對稱碳原子存在，為(S)體之光學異構物，但亦可含有(R)體之光學異構物。
另外，本發明中所謂的FK330的鹽係FK330之製藥學上所容許的鹽，具體上可列舉鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等之無機酸或甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、苦杏仁酸、酒石酸、二苯甲醯酒石酸、二甲苯醯酒石酸、檸檬酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、天冬胺酸、麩胺酸等之有機酸等之酸加成鹽。此等酸加成鹽係藉由賦予常法之造鹽反應而可製造。
進而，作為本發明之FK330或其鹽係可作為各種水合物或溶劑合物及結晶多形之物質使用。另外，FK330或其鹽亦包含各種以放射性或非放射性同位素所標識之化合物。
作為本發明所使用之FK330或其鹽係作為某種型態為自由體無水物。作為其他型態為自由體2水合物。例如將藉由國際公開第02/055541號手冊之實施例41記載之方法所得之FK330自由體，以醇/水溶劑系，例如乙醇/水、或異丙醇/水等進行再結晶，使所得之結晶於減壓下乾燥而可得自由體無水物。另外，藉由對所得之自由體無 水物，進行調濕操作，可得到自由體2水合物結晶。
含有FK330或其鹽作為有效成份之醫藥組成物係使用該領域通常所使用之賦形劑，亦即，藥劑用賦形劑或藥劑用載體等，藉由通常所使用之方法而可調製。
投與係藉由錠劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、液劑等之經口投與、或藉由關節內、靜脈內、肌肉內等之注射劑等之非經口投與中任一種型態皆可。作為某種型態，藉由錠劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、液劑等之經口投與。
作為經口投與用之固體組成物，可使用錠劑、散劑、顆粒劑等。對於如此固體組成物中，將1種或2種以上之有效成份，與至少1種惰性賦形劑混合。組成物係依據常法，亦可含有惰性添加劑，例如滑澤劑或崩散劑、安定化劑、助溶劑。因應需要，錠劑或丸劑亦可以糖衣或胃溶性或腸溶性物質之薄膜被膜。
經口投與用之液體組成物係含藥劑上所容許之乳濁劑、溶液劑、懸浮劑、糖漿劑或酏劑等，包含一般所使用之惰性稀釋劑，例如精製水或乙醇。該液體組成物除了惰性稀釋劑以外，亦可含有如可溶化劑、濕潤劑、懸浮劑之輔助劑、甘味劑、風味劑、芳香劑、防腐劑。
非經口投與用之注射劑係含有無菌的水性或非水性之溶液劑、懸浮劑或乳濁劑。作為水性溶劑，例如包含注射用蒸餾水或生理食鹽液。作為非水性溶劑，例如有如乙醇之醇類。如此組成物亦可進一步含有等張化劑、防腐劑、 濕潤劑、乳化劑、分散劑、安定化劑或助溶劑。此等係藉由例如通過細菌保留濾器之過濾、摻混殺菌劑或照射而無菌化。另外，此等係製造無菌的固體組成物，亦可於使用前溶解或懸浮於無菌水或無菌的注射用溶劑後使用。
雖依投與途徑、劑型、投與部位、賦形劑或添加劑之種類而異，本發明之醫藥組成物係含有0.01~100重量%，作為某種型態為0.01~50重量%之有效成份之1種或其以上之FK330或其鹽。
通常經口投與時，FK330(2水合物)之1日投與量係約60~1200mg/日，將此以1次或分2次~3次投與。作為其他型態，作為1日投與量，為60~200mg。進而作為其他型態，為120~250mg、120~220mg、150~250mg或180~200mg。進而作為其他型態，為100~180mg或180~300mg。進而作為其他型態，為120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg、200mg、210mg、220mg、230mg、240mg或250mg。進而作為其他型態，為180mg、190mg或200mg。投與量係考慮症狀、年齡、性別等，因應各個狀況而適當決定。
本發明之作為可與FK330並用之紫杉烷系抗腫瘤劑，可列舉以具有紫杉烷環或其類似結構之化合物作為有效成份之醫藥組成物，作為其他型態，可列舉以具有紫杉烷環之化合物作為有效成份之醫藥組成物。作為紫杉烷系抗腫瘤劑之另外其他型態，可列舉以具有微管去聚合抑制作用之化合物作為有效成份之醫藥組成物。醫藥組成物所 適用之賦形劑及劑型係可使用前述者。
作為可與FK330並用之紫杉烷系抗腫瘤劑之具體的其他型態，可列舉汰癌勝(paclitaxel)、剋癌易(docetaxel)、卡巴他賽(cabazitaxel)、白蛋白納米紫杉醇(abraxane)、替司他賽(tesetaxel)、歐塔紫杉醇(ortataxel)等，另外作為其他型態，可列舉汰癌勝、剋癌易、白蛋白納米紫杉醇等，進一步作為其他型態，可列舉汰癌勝或白蛋白納米紫杉醇，另外再作為其他型態，可列舉汰癌勝，作為其他型態，可列舉剋癌易。
將本發明可與FK330並用之主要的既有紫杉烷系抗腫瘤劑，與主要適用的癌種類或適用的候補癌種類一同如下表所示。但是，本發明之並用治療中，此等抗腫瘤劑之適用癌種類並非局限於此等者。
汰癌勝、剋癌易、卡巴他賽或白蛋白納米紫杉醇係可購買市售品使用，或藉由相關業者已知之方法或此等之變法而可容易取得。
卡巴他賽另外藉由國際公開96/30355號手冊所揭示之製造方法或此等之變法而可容易取得。替司他賽係藉由相關業者已知之方法或國際公開01/27115號手冊所揭示之製造方法或此等之變法而可容易取得。歐塔紫杉醇係藉由相關業者已知之方法或美國專利5705508號說明書所揭示之製造方法或此等之變法而可容易取得。
前述之抗腫瘤劑已於臨床上使用，其投與途徑、投與循環、投與量係相關業者熟悉的。依據癌種類或症狀、並用藥劑而適合的用法、用量(Dosage and Administration)不同，此等詳細資料係藉由FDA提供的各種資料庫，例如"Orange Book"(http：//www.fda.gov/cder/orange/default.htm)或日本之醫藥品機器情報提供首頁(http：//www.info.pmda.go.jp/)而可容易取得。此等資料庫之各抗腫瘤劑之資料為本申請書所採用者。
例如作為汰癌勝的用法、用量之例，日本之醫藥品機器情報提供首頁之Taxol(紫杉醇)注射液(註冊商標：汰癌勝之商品名)之附加文件係記載著「〔效能或效果〕卵巢癌、非小細胞肺癌、乳癌、胃癌；〔用法及用量〕；1.通常成人係汰癌勝，1天1次210mg/m2，以3小時點滴靜脈注射，至少停藥3週。以此為1個單位，重複投與。 另外，投與量係依年齡、症狀而適當減量。」。
另外，作為剋癌易的用法、用量之例，日本之醫藥品機器情報提供首頁之Taxol(紫杉醇)注射液(註冊商標：剋癌易之商品名)之附加文件係記載著「1.乳癌、非小細胞肺癌、胃癌、頭頸部癌；每個效能或效果之用法及用量；1.通常成人1天1次，以60mg/m2之剋癌易，以1小時以上點滴靜脈注射，間隔3~4週。另外，依症狀而適當增減，但是，1次最高用量為70mg/m2」。
本發明中使用並用治療時之治療有效用量係藉由通常所投與之投與途徑，可設定與通常單獨投與時相同的投與量或比其低的用量(例如單獨投與時之最高投與量之0.10~0.99倍)。以一定的投與循環投與紫杉烷系抗腫瘤劑時，亦可適當調整投與循環以適合於與FK330之並用。具體的投與次數、投與量、投與循環等係考慮患者的症狀、年齡、性別等，因應各個情況所適當決定。
作為並用投與FK330與紫杉烷系抗腫瘤劑時之投與形態，只要採用分別適合之投與途徑、投與次數及投與量，並無特別的限定，可舉例如(1)含有FK330與紫杉烷系抗腫瘤劑之組成物，亦即，作為單一的製劑之投與、(2)將FK330與紫杉烷系抗腫瘤劑分別製劑化所得之2種製劑，以相同投與途徑同時投與、(3)將FK330與紫杉烷系抗腫瘤劑分別製劑化所得之2種製劑，以相同投與途徑，不同時間投與(例如以FK330、紫杉烷系抗腫瘤劑的順序投與，或以相反的順序投與)、(4)將FK330與 紫杉烷系抗腫瘤劑分別製劑化所得之2種製劑，以不同投與途徑同時投與、(5)將FK330與紫杉烷系抗腫瘤劑分別製劑化所得之2種製劑，以不同投與途徑，不同時間投與(例如以FK330、紫杉烷系抗腫瘤劑的順序投與，或以相反的順序投與)等。作為某種型態，本發明之癌治療用組成物係與紫杉烷系抗腫瘤劑分別製劑化，紫杉烷系抗腫瘤劑係藉由靜脈注射、點滴靜脈注射或經口所投與，本發明之癌治療用組成物係經口或非經口投與。作為其他型態，紫杉烷系抗腫瘤劑係藉由靜脈注射、點滴靜脈注射所投與，本發明之癌治療用組成物係經口投與。
本發明之癌治療用組成物之適合投與型態係該紫杉烷系抗腫瘤劑投與之1個循環中至少1天經口或非經口投與本發明之癌治療用組成物之方法。在此，所謂「循環」係指藉由一定的處方之治療循環或治療單位，例如以汰癌勝或剋癌易係自投與開始，經過停藥期間，至進行下次投與前之3~4週程度之投與單位期間。作為某種投與型態係將含有FK330或其鹽之本發明之癌治療用組成物，於紫杉烷系抗腫瘤劑投與日之至少1天，經口投與之方法、於紫杉烷系抗腫瘤劑投與日之全天，經口投與之方法、於紫杉烷系抗腫瘤劑停藥日之至少一天之經口投與之方法、於紫杉烷系抗腫瘤劑停藥日之全日，經口投與之方法、於紫杉烷系抗腫瘤劑停藥日之至少一天及停藥日之至少1天，經口投與之方法、於紫杉烷系抗腫瘤劑投與之1個循環中之全天，經口投與之方法、或於紫杉烷系抗腫瘤劑投與之1 個循環中，間歇地(2天1次，1週1次等)經口投與之方法。作為某種型態，於紫杉烷系抗腫瘤劑投與之1個循環中之全天，經口投與之方法。自紫杉烷系抗腫瘤劑投與之數日前~前天，投與本發明之癌治療用組成物亦可，此型態係包含於紫杉烷系抗腫瘤劑之停藥日投與。若擔心FK330與紫杉烷系抗腫瘤劑之藥物相互作用時，為避免相互作用，可分開投與時期及/或隔必要間隔而投與。
本發明之「含有FK330或其鹽作為有效成份之用以治療接受藉由選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑治療之對象之癌治療用組成物」或「含有FK330或其鹽作為有效成份之用以治療接受藉由選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑治療之對象之前列腺癌或卵巢癌治療用組成物」中之「對象」係接受藉由選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑治療，亦可接受其他抗腫瘤劑。其他抗腫瘤劑係可列舉後述者。「對象」亦可將選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑，與含有FK330或其鹽之作為有效成份之癌治療用組成物同時地、分別地，連續或間隔地投與。
本發明亦可為「包含組合(a)FK330或其鹽及(b)選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑之試劑組」之型態。此係包含組合含有效成份(a)之製劑(第一製劑)及含有效成份(b)之製劑(第二製劑)，而可使用此等於有效成份之並用療法者。本發明之試劑組係因應需要，可為包含容易投與以配合安慰劑等之分別投與時期而 追加之製劑或表示零件之包裝品。
2種製劑係考慮例如各製劑之生物利用度、安全性等，適合各製劑之製劑處方、投與途徑、投與次數等之投與條下，於相同或相異之投與途徑，同時地、分別地，連續或間隔地投與者。在此，所謂「同時地」係指將第一製劑與第二製劑一同以相同投與途徑投與，所謂「分別地」係指將第一製劑與第二製劑於相同或相異的投與途徑，以相同或相異的投與次數或投與間隔分別投與。所謂「連續」係指將第一製劑與第二製劑於相同或相異的投與途徑，以第二製劑接著第一製劑之順序，或相反的順序投與。所謂「間隔地」係指將第一製劑與第二製劑於相同或相異的投與途徑，於第一製劑之後，隔著一定間隔，再第二製劑之順序，或相反的順序投與。
本發明可為「含有(a)含有FK330或其鹽作為有效成份之組成物及(c)表示與選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑並用之附加文件而成之癌治療用醫藥品」或「含有(a)含有FK330或其鹽作為有效成份之組成物及(c)表示與選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑並用之附加文件而成之前列腺癌或卵巢癌治療用醫藥品」之型態。此係指包含含有使用於並用治療時之治療有效用量之有效成份之組成物(a)及表示與選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑並用之關於前述(a)之組成物附加文件(c)二者所包裝之癌治療用醫藥品。
另外，本發明之並用含有FK330或其鹽作為有效成 份之癌治療用組成物與紫杉烷系抗腫瘤劑使用時，因應所需，亦可進一步併用化學療法所使用之其他抗腫瘤劑。作為可進一步併用化學療法所使用之其他抗腫瘤劑係先前已知與紫杉烷系抗腫瘤劑並用之抗腫瘤劑，可舉例如選自白金系抗腫瘤劑、蒽環(anthracycline)系抗腫瘤劑、癌得星(cyclophosphamide)、氟尿嘧啶(Fluorouracil)、賀癌平(Trastuzumab)及截瘤達(Capecitabine)中1種以上之抗腫瘤劑，作為某種型態，為順鉑(cisplatin)或佳鉑帝(Carboplatin)，作為其他型態，為艾黴素(doxorubicin)。
如本申請說明書之實施例1-6所示，藉由本發明之含有FK330或其鹽作為有效成份之癌治療用組成物與紫杉烷系抗腫瘤劑之並用治療，發現可增強癌治療作用。其效果係藉由比含有FK330或其鹽作為有效成份之癌治療用組成物或紫杉烷系抗腫瘤劑之單劑投與，有意義地減少平均腫瘤體積(mean tumor volume)所確認。
另外，本發明之FK330或其鹽不具有如大多抗腫瘤劑所揭示之嚴重副作用，就安全性上亦適用的。
實施例所示之動物模式，確認本發明之癌治療用組成物係選擇性地且用量依賴性地增強紫杉烷系抗腫瘤劑之抗腫瘤作用。亦即，僅FK330或其鹽時，未見有意義的抗腫瘤效果，另外，即使並用FK330或其鹽與紫杉烷以外之抗腫瘤劑，亦不能確認有特別明顯的增強抗腫瘤效果之作用，但使與紫杉烷系抗腫瘤劑組合時，確認有良好的增 強抗腫瘤作用之作用。尤其FK330改善複數循環處理所引起紫杉烷系抗腫瘤劑之抗腫瘤效果減弱，顯示良好地抑制腫瘤增殖(參考圖7)。此顯示FK330抑制紫杉烷系抗腫瘤劑之耐性化。
本申請說明書之實施例7及8係顯示NO直接抑制紫杉烷系抗腫瘤劑之微管去聚合抑制作用，並且紫杉烷系抗腫瘤劑係隨著癌組織之iNOS蛋白表現而誘發NO產生，FK330抑制該iNOS活性。
另外，本發明者等亦發現NO係抑制紫杉烷系抗腫瘤劑所引起之介在細胞凋亡(apoptosis)之癌細胞增殖抑制作用，NO所引起之化學療法劑之減弱效果係依紫杉烷系抗腫瘤劑選擇性承認。
因此，本發明者等表示藉由FK330增強紫杉烷系抗腫瘤劑之抗腫瘤作用之機制如後。亦即，紫杉烷系抗腫瘤劑係於腫瘤組織，使iNOS表現亢進，其結果係增強產生NO。所產生的NO係直接抑制紫杉烷系抗腫瘤劑之微管去聚合抑制作用，引起紫杉烷系抗腫瘤劑之抗腫瘤效果減弱。另一方面，顯示FK330係藉由抑制因紫杉烷系抗腫瘤劑所增強之NO產生，抑制紫杉烷系抗腫瘤劑之效果減弱，可增強抗腫瘤作用者。
基於前述，可說FK330或其鹽係可增強以微管去聚合抑制作用為目標之所有紫杉烷系抗腫瘤劑之作用。
〔圖1〕圖1係表示實施例1中，單獨或並用投與FK330與艾黴素(doxorubicin)之抗腫瘤效果圖。Dox係表示艾黴素。
〔圖2〕圖2係表示實施例1中，單獨或並用投與FK330與吉西他濱(Gemcitabine)之抗腫瘤效果圖。Gem係表示吉西他濱。
〔圖3〕圖3係表示實施例1中，單獨或並用投與FK330與抗癌妥(Irinotecan)之抗腫瘤效果圖。Iri係表示抗癌妥。
〔圖4〕圖4係表示實施例1中，單獨或並用投與FK330與佳鉑帝(Carboplatin)之抗腫瘤效果圖。CBDCA係表示佳鉑帝。
〔圖5〕圖5係表示實施例1中，單獨或並用投與FK330與汰癌勝(Paclitaxel)之抗腫瘤效果圖。PTX係表示汰癌勝。
〔圖6〕圖6係表示實施例1中，單獨或並用投與FK330與剋癌易(Docetaxel)之抗腫瘤效果圖。Doce係表示剋癌易。
〔圖7〕圖7係表示對於人類非小細胞肺癌(Calu-6)得癌小鼠，檢討FK330之汰癌勝複數循環投與時之抗腫瘤效果增強作用之實施例2之結果圖。PTX係表示汰癌勝。
〔圖8〕圖8係表示對於人類非小細胞肺癌(Calu-6)得癌小鼠，檢討FK330之汰癌勝之抗腫瘤效果增強作 用之用量依賴性之實施例3之結果圖。PTX係表示汰癌勝。
〔圖9〕圖9係表示對於人類非小細胞肺癌(Calu-6)得癌小鼠，檢討FK330之投與時間之實施例4之結果圖。PTX係表示汰癌勝。
〔圖10〕圖10係表示對於人類胃癌(AZ-521)得癌小鼠，檢討藉由FK330之汰癌勝之抗腫瘤效果增強作用之實施例5之結果圖。PTX係表示汰癌勝。
〔圖11〕圖11係表示對於人類胃癌(MKN-28)得癌小鼠，檢討藉由FK330之汰癌勝之抗腫瘤效果增強作用之實施例5之結果圖。PTX係表示汰癌勝。
〔圖12〕圖12係表示對於人類胃癌(NCI-N87)得癌小鼠，檢討藉由FK330之汰癌勝(Paclitaxel)之抗腫瘤效果增強作用之實施例5之結果圖。PTX係表示汰癌勝。
〔圖13〕圖13係表示對於人類乳癌細胞(MDA-MB-231)得癌小鼠，檢討藉由FK330之汰癌勝之抗腫瘤效果增強作用之實施例6之結果圖。PTX係表示汰癌勝。
〔圖14〕圖14係表示檢討NO供應體之SNAP對紫杉烷誘發微管蛋白聚合作用之抑制作用之實施例7之結果圖。A)及B)係分別表示SNAP對汰癌勝誘發微管蛋白聚合之抑制作用之代表例與微管蛋白聚合開始後60分鐘之合計值。PTX係表示汰癌勝，SNAP係表示S-nitroso-N-acetyl-D,L-penicillamine。
〔圖15〕圖15係表示檢討NO供應體之SNAP對紫杉烷誘發微管蛋白聚合作用之抑制作用之實施例7之結果圖。A)及B)係分別表示SNAP對剋癌易誘發微管蛋白聚合之抑制作用之代表例與微管蛋白聚合開始後60分鐘之合計值。DTX係表示剋癌易，SNAP係表示S-nitroso-N-acetyl-D,L-penicillamine。
〔圖16〕圖16係表示對於人類肺癌細胞株Calu-6得癌小鼠，檢討單獨汰癌勝及併用FK330時之對腫瘤組織內iNOS蛋白表現之作用之實施例8之結果圖。PTX係表示汰癌勝。
〔圖17〕圖17係表示對於人類肺癌細胞株Calu-6得癌小鼠，檢討單獨汰癌勝及併用FK330時之對腫瘤組織內巨噬細胞(F4/80)浸潤之作用之實施例8之結果圖。PTX係表示汰癌勝。
〔圖18〕圖18係表示對於人類肺癌細胞株Calu-6得癌小鼠，檢討單獨汰癌勝及併用FK330時之對腫瘤組織內硝基酪胺酸(NO主要的最終產物)表現之作用之實施例8之結果圖。PTX係表示汰癌勝。
〔圖19〕圖19係表示對於人類激素抵抗性前列腺癌細胞(PC-3)得癌小鼠，檢討藉由FK330之汰癌勝之抗腫瘤效果增強作用之實施例9之結果圖。PTX係表示汰癌勝。
〔圖20〕圖20係表示對於人類激素抵抗性前列腺癌細胞(PC-3)得癌小鼠，檢討藉由FK330之剋癌易之抗 腫瘤效果增強作用之實施例10之結果圖。DTX係表示剋癌易。
〔圖21〕圖21係表示對於人類乳癌細胞(MDA-MB-468)得癌小鼠，檢討藉由FK330之剋癌易之抗腫瘤效果增強作用之實施例11之結果圖。DTX係表示剋癌易。
〔圖22〕圖22係表示對於人類卵巢癌細胞(MCAS)得癌小鼠，檢討藉由FK330之汰癌勝之抗腫瘤效果增強作用之實施例12之結果圖。PTX係表示汰癌勝。
實施例
顯示本發明之癌治療用組成物之有效性之藥理試驗結果如後所示，但本發明並非受此等實施例限制者。
實施例1 1)試驗物質
使用FK330之自由體2水合物。以下，FK330之投與量係以該2水合物之重量表示。剋癌易水合物注射劑(TAXOTERE(商標)點滴靜脈注射用)係購自Sanofi-aventis股份有限公司，作為剋癌易使用。汰癌勝注射劑(汰癌勝注射液「Sawai」)係購自澤井製藥股份有限公司，作為汰癌勝使用。鹽酸抗癌妥(Irinotecan HCl)(Topotecan(商標)注射劑)係購自第一三共股份有限 公司，作為抗癌妥使用。注射用吉西他濱鹽酸鹽(健擇(Gemzar)(商標)注射用)係購自日本Eli Lilly股份有限公司，作為吉西他濱使用。注射用鹽酸艾黴素((阿黴素(Adriamycin)(商標)注射用10)係購自協和發酵工業股份有限公司，作為艾黴素使用。佳鉑帝注射液(Paraplatin(商標)注射液)係購自Bristol-Myers股份有限公司，作為佳鉑帝使用。
2)試驗物質之調製及投與
將FK330懸浮於0.5%甲基纖維素水溶液(0.5%MC)(20mg/ml)。剋癌易以所附的溶解液，調製成4mg/kg後，以生理食鹽水(大塚製藥)稀釋成1mg/ml。汰癌勝、抗癌妥、吉西他濱、艾黴素及佳鉑帝分別以注射用生理食鹽水，於使用時調製成1mg/ml、3mg/ml、16mg/ml、1mg/ml及6mg/ml。
3)細胞
來自人類肺癌之Calu 6(HTB-56)係取自American Type Culture Collection(VA,USA)。細胞係使用添加10%之加熱惰性化之牛胎兒血清(FBS)之RPMI1640培養基，以37℃，5%CO2之條件培養。將使用胰蛋白酶回收的細胞，以PBS懸浮成6×107cells/ml，與等量之Matrigel(商標)Basement Membrane Matrix(Becton Dickinson Co.製，Bedford,MA,USA)混合。
4)動物
5週齡之雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxnlnu/CrlCrlj(nu/nu))係購自日本Charles River社(日本，神奈川)。動物係整個試驗期間，於未感染特定病原體(SPF)之條件下，給予標準飼料及飲水，進行飼育。將培養的細胞，以3×106cells/0.1ml/mouse，移植於裸鼠背部皮下。將腫瘤體積(長徑×〔短徑〕2×0.52)成為111.9至369.3mm3之裸鼠，使用SAS分組，以減少組間及組內之腫瘤體積參差不齊。
5)藥物投與及測定
投與第一天為Day1，進行觀察至Day29。各組(n=5或6)如下處理。FK330係1天2次，間隔6至8小時，強制經口投與(5ml/kg)，各化學療法劑係自尾靜脈，進行靜脈內快速注射(bolus)投與(10ml/kg)。
對照組：未處理
FK330單獨投與組：1天2次投與(bid)100mg/kg之FK330(200mg/kg/day，自實驗開始至結束時連續投與)
剋癌易單獨投與組：10mg/kg/day之剋癌易(Day1、5及9)
汰癌勝單獨投與組：10mg/kg/day之汰癌勝(Day1至7)
抗癌妥單獨投與組：30mg/kg/day之抗癌妥(Day1至7)
吉西他濱單獨投與組：160mg/kg/day之吉西他濱(Day1、4及7)
艾黴素單獨投與組：10mg/kg/day之艾黴素(Day1及8)
佳鉑帝單獨投與組：60mg/kg/day之佳鉑帝(Day1及2)
並用組：100mg/kg之FK330 bid+10mg/kg/day之剋癌易(Day1、5及9)，n=6
100mg/kg之FK330 bid+10mg/kg/day之汰癌勝(Day1至7)，n=6
100mg/kg之FK330 bid+30mg/kg/day之抗癌妥(Day1至7)，n=6
100mg/kg之FK330 bid+160mg/kg/day之吉西他濱(Day1、4及7)，n=6
100mg/kg之FK330 bid+10mg/kg/day之艾黴素(Day1及8)，n=6
100mg/kg之FK330 bid+60mg/kg/day之佳鉑帝(Day1及2)，n=5
FK330係1天2次，間隔6至8小時，強制經口投與(5ml/kg)。各化學療法劑係投與FK330之2~4小時後，自尾靜脈，進行靜脈內快速注射(bolus)投與 (10ml/kg)。
每隔3~4天，使用體重及數位游標卡尺，測定腫瘤直徑。腫瘤體積係依據(長徑×〔短徑〕2×0.52)之橢圓體積之計算式算出。
6)統計分析
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示。試驗期間中，判定觸診極限以下為完全消失(CR)，測定值為0。關於試驗結束時腫瘤體積之實測值，單獨投與組與並用組，進行非對應之2組間之差的測定(Student's t-test)，未達5%則判定有有意義差。數據處理係使用SAS或Graphpad Prism version 5.03。
7)結果
檢討並用投與FK330與各種化學療法劑時之抗腫瘤作用。結果如圖1至圖6所示。亦即，分別表示FK330與艾黴素之並用效果如圖1，與吉西他濱之並用效果如圖2，與抗癌妥之並用效果如圖3，與佳鉑帝之並用效果如圖4，與汰癌勝之並用效果如圖5，與剋癌易之並用效果如圖6。雖認為單獨FK330沒有抗腫瘤效果，但以汰癌勝(對Day29天之汰癌勝單獨組之腫瘤體積減少率為57.6%)及剋癌易(對Day29天之剋癌易單獨組之腫瘤體積減少率為65.2%)確認抗腫瘤效果之有意義增強。另一方面，FK330對吉西他濱(Gemcitabine)及佳鉑帝 (Carboplatin)之抗腫瘤效果不造成影響，雖觀察到抗腫瘤效果稍增強之艾黴素(對Day29天之艾黴素單獨組之腫瘤體積減少率為34.5%)及抗癌妥(對Day29天之抗癌妥單獨組之腫瘤體積減少率為34.1%)，但無有意義地作用。
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示(n=5至6)。*：P<0.03，**：P<0.01係表示併用組與化學療法劑單獨投與組比較時之有意義差。N.S.：係表示併用組與化學療法劑單獨投與組比較時無有意義差(Student's t-test)。
8)結論
雖認為FK330於單獨時不具有抗腫瘤效果，但使汰癌勝及剋癌易之抗腫瘤效果增強。另一方面，對抗癌妥、吉西他濱、艾黴素及佳鉑帝之抗腫瘤效果不造成影響。此等結果係顯示FK330選擇性地增強紫杉烷系抗腫瘤劑之抗腫瘤效果者。
實施例2 1)試驗物質
FK330之用量係以含水合物之重量表示。汰癌勝注射劑(汰癌勝注射液「Sawai」)係購自澤井製藥股份有限公司，作為汰癌勝使用。
2)試驗物質之調製及投與
將FK330懸浮於0.5%甲基纖維素水溶液(0.5%MC)(20mg/ml)。汰癌勝係於使用時以注射用生理食鹽水(大塚製藥)調製成1mg/ml。
3)細胞
來自人類肺癌之Calu 6(HTB-56)係取自American Type Culture Collection(VA,USA)。細胞係使用添加10%之加熱惰性化之牛胎兒血清(FBS)之RPMI1640培養基，以37℃，5%CO2之條件培養。將使用胰蛋白酶回收的細胞，以PBS懸浮成6×107cells/ml，與等量之Matrigel(商標)Basement Membrane Matrix(Becton Dickinson Co.製，Bedford,MA,USA)混合。
4)動物
5週齡之雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxnlnu/CrlCrlj(nu/nu))係購自日本Charles River社(日本，神奈川)。動物係整個試驗期間，於未感染特定病原體(SPF)之條件下，給予標準飼料及飲水，進行飼育。將培養的細胞，以3×106cells/0.1ml/mouse，移植於裸鼠背部皮下。將腫瘤體積(長徑×〔短徑〕2×0.52)成為126.1至299.0mm3之裸鼠，使用SAS分組，以減少組間及組內之腫瘤體積參差不齊。
5)藥物投與及測定
投與第一天為Day1，進行觀察至Day83。各組(n=6)如下處理。FK330係以5ml/kg強制經口投與，汰癌勝係以10ml/kg，進行尾靜脈內投與。汰癌勝係自Day1至Day7進行連續投與後，停藥24天(1次循環)。PTX之第2次循環及第3次循環之投與係分別自Day31或Day60起連續投與6天。
對照組：未處理
FK330單獨投與組：100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day，自實驗開始至結束時連續投與)
汰癌勝單獨投與組：10mg/kg/day之汰癌勝(1次循環，連續投與7天，2次循環之後，連續投與6天)
並用組：100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day，自實驗開始至結束時連續投與)+10mg/kg/day之汰癌勝(1次循環，連續投與7天，2次循環之後，連續投與6天)
FK330係1天2次，間隔6至8小時，強制經口投與(5ml/kg)。汰癌勝係投與FK330之2~4小時後，自尾靜脈，進行靜脈內快速注射(bolus)投與(10ml/kg)。
每隔3~4天，使用體重及數位游標卡尺，測定腫瘤直徑。腫瘤體積係依據(長徑×〔短徑〕2×0.52)之橢圓體積之計算式算出。
6)統計分析
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示。試驗期間中，判定觸診極限以下為完全消失(CR)，測定值為0。對於各測定時腫瘤體積之實測值，單獨投與組與並用組，進行非對應之2組間之差的測定(Student's t-test)，未達5%則判定有有意義差。數據處理係使用SAS。
7)結果
檢討FK330之汰癌勝複數循環投與時之併用作用。結果如圖7所示。對人類非小細胞肺癌之(Calu-6)得癌小鼠，隨著複數循環投與，認為汰癌勝之抗腫瘤效果有減弱的趨勢。FK330明顯地增強汰癌勝之抗腫瘤效果，對Day29天之汰癌勝單獨組之腫瘤體積減少率為57.6%(P<0.01)，對Day60天之汰癌勝單獨組之腫瘤體積減少率為86.1%(P<0.01)，對Day83天之汰癌勝單獨組之腫瘤體積減少率為87.6%(P<0.01)。
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示(n=6)。**：P<0.01係表示並用組與化學療法劑單獨投與組比較時之有意義差(Student's t-test)。
8)結論
對人類非小細胞肺癌之(Calu-6)得癌小鼠，汰癌勝之抗腫瘤效果係依賴循環地減弱。另一方面，FK330之並用係增強藉由複數循環投與之汰癌勝之抗腫瘤效果，明顯 地抑制腫瘤的再增殖。此結果係顯示FK330為改善因複數循環而紫杉烷系抗腫瘤劑之抗腫瘤效果減弱者。
實施例3
試驗物質之調製及細胞之調整與實施例2同樣地進行。
1)動物
5週齡之雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxnlnu/CrlCrlj(nu/nu))係購自日本Charles River社(日本，神奈川)。動物係整個試驗期間，於未感染特定病原體(SPF)之條件下，給予標準飼料及飲水，進行飼育。將培養的細胞，以3×106cells/0.1ml/mouse，移植於裸鼠背部皮下。將腫瘤體積(長徑×〔短徑〕2×0.52)成為123.3至274.4mm3之裸鼠，使用SAS分組，以減少組間及組內之腫瘤體積參差不齊。
2)藥物投與及測定
投與第一天為Day0，進行觀察至Day59。各組(n=5)如下處理。FK330係以5ml/kg強制經口投與，汰癌勝係以10mg/kg，進行尾靜脈內投與。汰癌勝係自Day0至Day5連續投與後，設定21天的停藥期間，以此為1次循環，投與至2次循環。
對照組：未處理
汰癌勝單獨投與組：10mg/kg/day之汰癌勝(1次循環，自Day0連續投與6天，2次循環，自Day27連續投與6天)
並用組：30mg/kg之FK330 bid(60mg/kg/day)+10mg/kg/day之汰癌勝(1次循環，自Day0連續投與6天，2次循環，自Day27連續投與6天)
60mg/kg之FK330 bid(120mg/kg/day)+10mg/kg/day之汰癌勝(1次循環，自Day0連續投與6天，2次循環，自Day27連續投與6天)
100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day)+10mg/kg/day之汰癌勝(1次循環，自Day0連續投與6天，2次循環，自Day27連續投與6天)
FK330係1天2次，間隔6至8小時，強制經口投與(5ml/kg)。汰癌勝係投與FK330之2~4小時後，自尾靜脈，進行靜脈內快速注射(bolus)投與(10ml/kg)。
每隔3~4天，使用體重及數位游標卡尺，測定腫瘤直徑。腫瘤體積係依據(長徑×〔短徑〕2×0.52)之橢圓體積之計算式算出。
3)結果
檢討FK330之汰癌勝之抗腫瘤效果增強作用之用量依賴性之結果如圖8所示。結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示(n=4至5)。試驗結束時(Day59) 之腫瘤體積，汰癌勝單獨組為1640.1±902.8mm3，30mg/kg之FK330 bid並用組為955.9±231.0mm3，60mg/kg之FK330 bid並用組為706.2±256.1mm3，100mg/kg之FK330 bid並用組為297.9±101.4mm3，FK330係用量依賴性地增強汰癌勝之抗腫瘤效果(對汰癌勝單獨組之腫瘤體積減少率：30mg/kg之FK330 bid係41.7%，60mg/kg之FK330 bid係56.9%，100mg/kg之FK330 bid係81.8%)。
4)結論
並用FK330係用量依賴性地增強汰癌勝之抗腫瘤效果。
實施例4
試驗物質之調製及細胞之調整與實施例2同樣地進行。
1)動物
5週齡之雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxnlnu/CrlCrlj(nu/nu))係購自日本Charles River社(日本，神奈川)。動物係整個試驗期間，於未感染特定病原體(SPF)之條件下，給予標準飼料及飲水，進行飼育。將培養的細胞，以3×106cells/0.1ml/mouse，移植於裸鼠背部皮下。將腫瘤體積(長徑×〔短徑〕2×0.52)成為142.1至 323.7mm3之裸鼠，使用SAS分組，以減少組間及組內之腫瘤體積參差不齊。
2)藥物投與及測定
投與第一天為Day0，進行觀察至Day55。各組(n=5或6)如下處理。FK330係以5ml/kg強制經口投與，汰癌勝係以10ml/kg，進行尾靜脈內投與。汰癌勝係自Day0至Day5連續投與後，設定21天的停藥期間，自Day27至Day31連續投與5天。
對照組：未處理
汰癌勝單獨投與組：10mg/kg/day之汰癌勝(自Day0至Day5及自Day27至Day31)
並用組：同時投與100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day)+10mg/kg/day之汰癌勝(自Day0至Day5及自Day27至Day31)
依次投與100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day)+10mg/kg/day之汰癌勝(自Day0至Day5及自Day27至Day31)
連續投與100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day)+10mg/kg/day之汰癌勝(自Day0至Day5及自Day27至Day31)
FK330係1天2次，間隔6至8小時，強制經口投與(5ml/kg)。同時投與係FK330於汰癌勝投與日(自 Day0至Day5及自Day27至Day31)，依次投與係汰癌勝投與日後之停藥日(自Day6至Day26及自Day32至Day55)，連續投與係實驗開始日至實驗結束日之全天，進行投與。汰癌勝係投與FK330之2~4小時後，自尾靜脈，進行靜脈內快速注射(bolus)投與(10ml/kg)。
每隔3~4天，使用體重及數位游標卡尺，測定腫瘤直徑。腫瘤體積係依據(長徑×〔短徑〕2×0.52)之橢圓體積之計算式算出。
3)結果
對人類非小細胞肺癌之(Calu-6)得癌小鼠，檢討併用汰癌勝時FK330之投與時間之結果如圖9所示。結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示(n=5或6)。
試驗期間中，判定觸診極限以下為完全消失(CR)，測定值為0。試驗結束時(Day55)之腫瘤體積，汰癌勝單獨組為1229.2±289.6mm3，汰癌勝與FK330同時投與係559.8±161.8mm3，FK330之依次投與係1150.9±264.9mm3，FK330之連續投與係168.5±66.0mm3，分別對汰癌勝單獨組之腫瘤體積減少率為54.5%、6.4%及86.3%。
4)結論
FK330之投與時間係自紫杉烷系藥劑之投與開始日之 循環期間中連日投與時，顯示並用效果最高。
實施例5
試驗物質之調製與實施例2同樣地進行。
1)細胞
使用來自人類胃癌之NCI-N87(CRL-5822)係取自American Type Culture Collection(VA,USA)，MKN-28(JCRB0253)係取自醫藥基盤研究所(HSRRB)，AZ-521(RCB2087)係取自理研BRC者。NCI-N87及MKN-28細胞係使用添加10%之加熱惰性化之牛胎兒血清(FBS)之RPMI1640培養基，AZ-521係使用含10%之加熱惰性化之FBS之DMEM培養基，以37℃，5%CO2之條件培養。將使用胰蛋白酶回收的細胞，以PBS懸浮成6×107cells/ml，與等量之Matrigel(商標)Basement Membrane Matrix(Becton Dickinson Co.製，Bedford,MA,USA)混合。
2)動物
5週齡之雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxnlnu/CrlCrlj(nu/nu))係購自日本Charles River社(日本，神奈川)。動物係整個試驗期間，於未感染特定病原體(SPF)之條件下，給予標準飼料及飲水，進行飼育。將培養的細胞，以3×106cells/0.1ml/mouse，移植於裸鼠背部 皮下。將AZ-521得癌小鼠之腫瘤體積(長徑×〔短徑〕2×0.52)成為386.6至766.6mm3，MKN-28得癌小鼠之腫瘤體積成為186.0至319.2mm3，NCI-N87得癌小鼠之腫瘤體積成為192.1至364.2mm3之裸鼠，使用SAS分組，以減少組間及組內之腫瘤體積參差不齊。
3)藥物投與及測定
投與第一天為Day0，AZ-521得癌小鼠至Day46，MKN-28得癌小鼠至Day84，NCI-N87得癌小鼠至Day56，進行觀察。各組(n=5或6)如下處理。FK330係以5ml/kg強制經口投與，汰癌勝係以10mg/kg，進行尾靜脈內投與。汰癌勝係依下述條件，複數循環投與。
對照組：未處理
FK330單獨投與組：100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day，自實驗開始至實驗結束時連續投與)
汰癌勝單獨投與組：10mg/kg/day之汰癌勝
AZ-521得癌小鼠：進行Day0~Day5連續投與汰癌勝6天後，隔22天的停藥期間(1次循環)，Day28~Day32連續投與汰癌勝5天(2次循環)。
MKN-28得癌小鼠：進行Day0~Day5連續投與汰癌勝6天後，22天的停藥期間後，自Day28至Day32連續投與5天，隔23天的停藥期間(2次循環)。進一步，自Day56至Day60連續 投與5天(3次循環)。
NCI-N87得癌小鼠：進行Day0至Day5連續投與汰癌勝6天後，隔26天的停藥期間之後，自Day32至Day36連續投與5天(2次循環)。
並用組：100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day，自實驗開始至實驗結束時連續投與)+10mg/kg/day之汰癌勝
FK330係1天2次，間隔6至8小時，強制經口投與(5ml/kg)。汰癌勝係投與FK330之2~4小時後，自尾靜脈，進行靜脈內快速注射(bolus)投與(10ml/kg)。
每隔3~4天，使用體重及數位游標卡尺，測定腫瘤直徑。腫瘤體積係依據(長徑×〔短徑〕2×0.52)之橢圓體積之計算式算出。
4)統計分析
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示。對於各測定時之腫瘤體積之實測值，單獨投與組與並用組，進行非對應之2組間之差的測定(Student's t-test)，未達5%則判定有有意義差。數據處理係使用Graphpad Prism version 5.03。
5)結果
對人類胃癌(AZ-521、MKN-28、NCI-N87)得癌小 鼠，檢討FK330與汰癌勝之併用效果之結果如圖10至圖12所示。亦即，對AZ-521得癌小鼠之FK330與汰癌勝之併用效果如圖10，對MKN-28得癌小鼠之併用效果如圖11，對NCI-N87得癌小鼠之併用效果如圖12，分別表示。與人類非小細胞肺癌得癌小鼠同樣地FK330增強汰癌勝之抗腫瘤效果。對於AZ-521得癌小鼠，實驗最終日之汰癌勝單獨組之腫瘤體積為3285.4±359.4mm3，汰癌勝與FK330並用組為795.0±223.3mm3，對汰癌勝單獨組之腫瘤體積減少75.8%(P<0.01)。對於MKN-28及NCI-N87得癌小鼠，FK330增強汰癌勝之抗腫瘤效果(MKN-28得癌小鼠：454.1±147.5mm3 vs 164.8±18.5mm3，減少63.7%，P=0.08，NCI-N87得癌小鼠：492.0±48.5mm3 vs 223.9±85.1mm3，減少54.5%，P<0.03)。
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示(n=5或6)。P值係表示將並用組與化學療法劑單獨投與組比較時之有意義差(Student's t-test)。
6)結論
藉由並用FK330，認為於人類胃癌得癌模式中增強汰癌勝之抗腫瘤效果，尤其改善因複數循環處理而汰癌勝之抗腫瘤效果減弱之效果。
實施例6 1)試驗物質
FK330之用量係換算成單體(非水合物)之重量表示。汰癌勝係購自LC Laboratories社(Woburn,MA,USA)，作為汰癌勝使用。
2)試驗物質之調製及投與
FK330係懸浮於0.5%甲基纖維素水溶液(0.5%MC)(20mg/ml)，經口投與。汰癌勝係以乙醇/蓖麻油聚氧乙烯醚(Cremophor)溶液(以1：1混合)，調製成10mg/kg之貯備溶液後，於即將投與前，以注射用生理食鹽水(大塚製藥)稀釋成1mg/ml，自尾靜脈內投與。
3)細胞
來自人類乳癌之MDA-MB-231(HTB-26)係取自American Type Culture Collection(VA,USA)。細胞係使用添加10%之加熱惰性化之牛胎兒血清(FBS)之DMEM培養基，以37℃，5%CO2之條件培養。將使用胰蛋白酶回收的細胞，以PBS懸浮成6×107cells/ml，與等量之Matrigel(商標)Basement Membrane Matrix(Becton Dickinson社，Bedford,MA,USA)混合。
4)動物
5週齡之雌性裸鼠(CAnN Cg-Foxnlnu/CrlCrlj(nu/nu))係購自日本Charles River社(日本，神奈川)。動物係整個試驗期間，於未感染特定病原體(SPF)之條件下， 給予標準飼料及飲水，進行飼育。將培養的細胞，以3×106cells/0.1ml/mouse，移植於裸鼠背部皮下。將腫瘤體積(長徑×〔短徑〕2×0.5)成為148.7至312.5mm3之裸鼠，使用SAS分組，以減少組間及組內之腫瘤體積參差不齊。
5)藥物投與及測定
投與第一天為Day1，進行觀察至Day66。各組(n=6)如下處理。FK330係以5ml/kg，進行強制經口投與，汰癌勝係以10ml/kg，進行尾靜脈內投與。汰癌勝係進行自Day1至Day4之4天進行連續投與後，進行停藥25天(1次循環)。PTX之第2次循環之投與係自Day30起連續投與4天。
對照組：未處理
FK330單獨投與組：100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day，自實驗開始至結束時連續投與)
汰癌勝單獨投與組：10mg/kg/day之汰癌勝(各循環，連續投與4天)
並用組：100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day，自實驗開始至結束時連續投與)+10mg/kg/day之汰癌勝(各循環，連續投與4天)
FK330係1天2次，間隔6至8小時，強制經口投與(5ml/kg)，汰癌勝係投與FK330之1~4小時後，自尾 靜脈，進行靜脈內快速注射(bolus)投與(10ml/kg)。
使用體重及數位游標卡尺，每週測定腫瘤直徑2次。腫瘤體積係依據(長徑×〔短徑〕2×0.5)之橢圓體積之計算式算出。
6)統計分析
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示。試驗期間中，判定觸診極限以下為完全消失(CR)，測定值為0。使用各測定時之腫瘤體積之實測值，對於單獨投與組與並用組之比較，進行非對應之2組間之差的測定(Student's t-test)。未達5%則判定有有意義差。數據處理係使用Graphpad Prism version 5.03。
7)結果
對人類乳癌得癌小鼠，檢討FK330與汰癌勝之併用效果之結果如圖13所示。對人類乳癌(MDA-MB-231)得癌小鼠，FK330明顯地增強汰癌勝之抗腫瘤效果，對Day28之汰癌勝單獨組之腫瘤體積減少率為59.6%(P<0.01)，對Day66之汰癌勝單獨組之腫瘤體積減少率為82.8%(P<0.01)。
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示(n=6)。**：P<0.01係表示將並用組與汰癌勝單獨投與組比較時之有意義差(Student's t-test)。
8)結論
對人類乳癌(MDA-MB-231)得癌小鼠，FK330之並用係增強藉由複數循環投與汰癌勝之抗腫瘤效果，明顯地抑制腫瘤再增殖。
實施例7 1)試驗物質
NO提供者之S-nitroso-N-acetyl-D,L-penicillamine(SNAP)係使用購自Cayman Chemical社(Ann Arbor,MI,USA)者。微管蛋白聚合測定試劑組係使用購自Cytoskeleton社(Denver,CO,USA)。汰癌勝係使用測定試劑組一同裝入的汰癌勝作為汰癌勝使用。剋癌易(Docetaxel)係購自Sigma-Aldrich社(St.Louis,MO,USA)，作為剋癌易使用。
2)試驗方法
依螢光法之微管蛋白聚合反應測定係依據試劑組說明書實施。亦即，將精製自豬腦之微管蛋白(最終濃度為2mg/ml)及SNAP(最終濃度為200或500μmol/l)，於一同裝入試劑組的緩衝溶液中，室溫培養15分鐘以上。接著，加入汰癌勝(最終濃度為3μmol/l)或剋癌易(最終濃度為1μmol/l)及GPT(最終濃度為1mmol/ml)於此緩衝溶液，以37℃培養60分鐘。於此培養間，以微量盤式分析儀(SpectraMax社，Molecular Devices社， Sunnyvale,CA,USA)每1分鐘測定螢光強度(測定波長：激發350nm/螢光435nm)。螢光強度之值係使用相當於平衡穩定期之反應開始60分鐘後之值，以對SNAP及紫杉烷未處理組之百分率表示，實施3次之平均值作為該值。
3)統計分析
結果係以獨立的5次實驗的平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示。汰癌勝或剋癌易處理組與未處理組之比較係進行非對應之2組間之差的測定(Student's t-test)。紫杉烷系藥劑處理及未處理中，SNAP未處理組(對照組)及SNAP處理組(200及500μmol/l)之比較係進行Dunnett's多重比較測定。未達5%則判定有有意義差。數據處理係使用Graphpad Prism version 5.03。
4)結果
SNAP對汰癌勝誘發微管蛋白聚合作用之抑制作用之代表例、及微管蛋白聚合開始後60分鐘之合計值如圖14之A)及B)，SNAP對剋癌易誘發微管蛋白聚合之抑制作用之代表例、及微管蛋白聚合開始後60分鐘之合計值如圖15之A)及B)，分別表示。汰癌勝或剋癌易與各紫杉烷未處理比較，分別有意義地促進微管蛋白聚合152.7%(P<0.05)及184.1%(P<0.001)。NO提供者之SNAP係有意義地抑制因汰癌勝及剋癌易所誘發之微管蛋 白聚合反應。另外，SNAP亦有意義地抑制自然引起之微管蛋白聚合反應。
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示(n=5)。#：P<0.05及###：P<0.001係表示汰癌勝或剋癌易處理組與各紫杉烷藥劑未處理組比較時之有意義差(Student's t-test)。$：P<0.05及$$$：P<0.001係表示紫杉烷未處理中，SNAP處理組對SNAP未處理組(對照組)之有意義差(Dunnett's多重比較測定)。*：P<0.05、**：P<0.01及***：P<0.001係表示紫杉烷處理中，SNAP處理組對SNAP未處理組(對照組)之有意義差(Dunnett's多重比較測定)。
5)結論
NO提供者係直接抑制因汰癌勝及剋癌易所促進之微管蛋白聚合反應。
實施例8 1)試驗物質
FK330之用量係換算成單體(非水合物)重量表示。汰癌勝注射劑(汰癌勝注射液「Sawai」)係購自澤井製藥股份有限公司，作為汰癌勝使用。大鼠抗小鼠F4/80抗原單株抗體、兔子抗iNOS多株抗體及兔子抗硝基酪胺酸抗體係使用分別購自AbD Serotec社(Oxford,UK)、Santa Cruz Biotechnology社(Santa Cruz,CA,US)及Millipore 社(Billerica,MA,USA)者。
2)試驗物質之調製及投與
將FK330懸浮於0.5%甲基纖維素水溶液(0.5%MC)(20mg/ml)，經口投與。汰癌勝係於使用時以注射用生理食鹽水(大塚製藥)調製成1mg/ml。
3)細胞
來自人類肺癌之Calu-6(HTB-56)係取自American Type Culture Collection(VA,USA)。細胞係使用添加10%之加熱惰性化之牛胎兒血清(FBS)之RPMI1640培養基，以37℃，5%CO2之條件培養。將使用胰蛋白酶回收的細胞，以PBS懸浮成6×107cells/ml，與等量之Matrigel(商標)Basement Membrane Matrix(Becton Dickinson社，Bedford,MA,USA)混合。
4)動物
5週齡之雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxnlnu/CrlCrlj(nu/nu))係購自日本Charles River社(日本，神奈川)。動物係整個試驗期間，於未感染特定病原體(SPF)之條件下，給予標準飼料及飲水，進行飼育。將培養的細胞，以3×106cells/0.1ml/mouse，移植於裸鼠背部皮下。將腫瘤體積(長徑×〔短徑〕2×0.5)成為136.8至248.5mm3之裸鼠，使用SAS分組，以減少組間及組內之腫瘤體積參差不 齊。
5)藥物投與
藥物投與係自投與第一天(Day1)開始。各組(n=5)如下處理。FK330係自Day1至Day6，以5ml/kg強制經口投與，汰癌勝係自Day1至Day5，以10ml/kg進行尾靜脈內投與。
對照組：未處理
FK330單獨投與組：100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day，自Day1至Day6)
汰癌勝單獨投與組：10mg/kg/day之汰癌勝(自Day1至Day5)
並用組：100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day，自Day1至Day6)+10mg/kg/day之汰癌勝(自Day1至Day5)
FK330係1天2次，間隔6至8小時，強制經口投與(5ml/kg)。汰癌勝係投與FK330之1~4小時後，自尾靜脈，進行靜脈內快速注射(bolus)投與(10ml/kg)。
6)固定組織及製作冰凍塊
於第6天自小鼠採取腫瘤組織。以4%三聚甲醛-磷酸緩衝溶液(和光純藥工業(股))，以4℃進行浸潤固定12小時。組織固定度，使用10%、15%及20%蔗糖/磷酸緩衝溶液，依據常法，於4℃，梯度地取代蔗糖。取代結 束後，包埋癌組織於O.C.T冰凍切片包埋劑(Toronto Research Chemicals社，Toronto,Canada)中，於乾冰/丙酮製成冰凍塊，於-80℃保存。
7)免疫化學染色及影像解析
於低溫恆溫器(Cryostat)(Sakura Finetek Japan股份有限公司)，製作5μm薄度的冷凍切片，風乾。以4%三聚甲醛-磷酸緩衝溶液洗淨已乾燥之冷凍切片後，為使內因性過氧化酶失去活性，以0.3%過氧化氫/甲醇處理切片30分鐘。小鼠巨噬細胞、iNOS及硝基酪胺酸染色係如後述步驟進行。關於iNOS及硝基酪胺酸染色係於進行免疫化學染色前，藉由微波爐(3分/500W)進行抗原賦活。
小鼠巨噬細胞染色：一次抗體處理：與大鼠抗小鼠F4/80抗原單株抗體(1：200稀釋)，於室溫培養60分鐘。
二次抗體處理：與生物素化抗大鼠IgG抗體(1：100稀釋vector laboratories社)，於室溫培養30分鐘。
偵測系統：使用VECTASTAIN ABC kit(Vector Laboratories社)，將切片於室溫培養30分鐘。
呈色：使用3,3'-二胺基聯苯胺四鹽酸鹽(3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride)(DAB,Dako社)試劑，於室溫處理1分鐘。
iNOS染色： 一次抗體處理：與兔子抗iNOS多株抗體(1：500稀釋)，於4℃培養一晝夜。
檢測系統：使用EnVision(DAKO；)，將切片於室溫培養30分鐘。
呈色：使用DAB試劑，於室溫處理1分鐘。
硝基酪胺酸染色： 一次抗體處理：與兔子抗硝基酪胺酸抗體(1：500稀釋)，於4℃培養一晝夜。
檢測系統：使用EnVision(DAKO；)，將切片於室溫培養30分鐘。
呈色：使用DAB試劑，於室溫處理1分鐘。
染色影像(F4/80染色影像及iNOS影像係200倍，硝基酪胺酸染色影像係400倍)係藉由顯微鏡，存入電腦，藉由搭載WinROOF(version5.7)之影像分析系統(三谷商事股份有限公司)進行分析。數值係以總面積之陽性面積比(%)表示。各切片測量5個視野，其平均值為數值。
8)統計分析
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示。對於腫瘤組織內iNOS蛋白表現、巨噬細胞(F4/80)浸潤、及硝基酪胺酸(NO之主要最終產物)之各測定值，對於對照組與汰癌勝單獨組、FK330單獨組、或汰癌勝及FK330並用組比較，以及汰癌勝單獨組與汰癌勝及FK330 並用組比較，進行非對應之2組間之差的測定(Student's t-test)。未達5%則判定有有意義差。數據處理係使用Graphpad Prism version 5.03。
9)結果
對人類肺癌細胞株Calu-6得癌小鼠，汰癌勝單獨及FK330並用時之對腫瘤組織內iNOS蛋白表現、巨噬細胞(F4/80)浸潤、及硝基酪胺酸(NO之主要最終產物)之作用，如圖16至18表示。對照組之腫瘤組織內，幾乎不認為有iNOS陽性細胞及巨噬細胞，硝基酪胺酸(NO之主要最終產物)亦低。另一方面，藉由投與汰癌勝，認為腫瘤組織內有明顯的巨噬細胞浸潤。另外，腫瘤組織內iNOS蛋白表現亦明顯亢進，其結果係腫瘤組織內硝基酪胺酸量亦增加。並用iNOS抑制劑之FK330，雖不對腫瘤內巨噬細胞浸潤及iNOS蛋白表現造成作用，但抑制產生硝基酪胺酸。
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示(n=5)。***：P<0.001係表示與對照組比較時之有意義差(Student's t-test)。
10)結論
對人類肺癌(Calu-6)得癌小鼠，汰癌勝誘發腫瘤組織內巨噬細胞的浸潤及腫瘤組織內iNOS蛋白表現，其結果係誘發腫瘤內NO產生。並用iNOS抑制劑之FK330係 抑制藉由汰癌勝所誘發之來自iNOS之NO產生。
實施例9 1)試驗物質
FK330之用量係換算成單體(非水合物)重量表示。汰癌勝係購自LC Laboratories社(Woburn,MA,USA)，作為汰癌勝使用。
2)試驗物質之調製及投與
FK330係懸浮於0.5%甲基纖維素水溶液(0.5%MC)(20mg/ml)，經口投與。汰癌勝係以乙醇/蓖麻油聚氧乙烯醚(Cremophor)溶液(以1：1混合)，調製成10mg/ml之貯備溶液後，於即將投與前，以注射用生理食鹽水(大塚製藥)稀釋成1mg/ml，進行尾靜脈內投與。
3)細胞
來自人類激素扺抗性前列腺癌之PC-3(CRL-1435)係取自American Type Culture Collection(VA,USA)。細胞係使用添加10%之加熱惰性化之牛胎兒血清(FBS)之DMEM培養基，以37℃，5%CO2之條件培養。將使用胰蛋白酶回收的細胞，以PBS懸浮成6×107cells/ml，與等量之Matrigel(商標)Basement Membrane Matrix(Becton Dickinson社，Bedford,MA,USA)混合。
4)動物
5週齡之雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxnlnu/CrlCrlj(nu/nu))係購自日本Charles River社(日本，神奈川)。動物係整個試驗期間，於未感染特定病原體(SPF)之條件下，給予標準飼料及飲水，進行飼育。將培養的細胞，以3×106cells/0.1ml/mouse，移植於裸鼠背部皮下。將腫瘤體積成為156.0至300.1mm3之裸鼠，使用SAS分組，以減少組間及組內之腫瘤體積參差不齊。
5)藥物投與及測定
投與第一天為Day0，進行觀察至Day55。各組(n=6)如下處理。FK330係以5ml/kg，進行強制經口投與，汰癌勝係以10ml/kg，進行尾靜脈內投與。汰癌勝係自Day0至Day4進行連續投與5天後，進行停藥25天(1次循環)。汰癌勝之第2次循環之投與係自Day30起連續投與4天。
對照組：未處理
FK330單獨投與組：100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day，自實驗開始至結束時連續投與)
汰癌勝單獨投與組：將10mg/kg/day之汰癌勝，Day0~Day4進行連續投與5天後，隔著25天之停藥期間(1次循環)，Day30~Day33連續投與汰癌勝4天(2次循環)。
並用組： 100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day，自實驗開始至結束時連續投與)+10mg/kg/day之汰癌勝(第1次循環係連續投與5天，第2次循環係連續投與4天)。
FK330係1天2次，間隔6至8小時，強制經口投與(5ml/kg)。汰癌勝係投與FK330之1~4小時後，自尾靜脈，進行靜脈內快速注射(bolus)投與(10ml/kg)。
使用體重及數位游標卡尺，每週測定腫瘤直徑2次。腫瘤體積係依據(長徑×〔短徑〕2×0.5)之橢圓體積之計算式算出。
6)統計分析
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示。試驗期間中，判定觸診極限以下為完全消失(CR)，測定值為0。使用各測定時腫瘤體積之實測值，對於單獨投與組與並用組之比較，進行非對應之2組間之差的測定(Student's t-test)。未達5%則判定有有意義差。數據處理係使用Graphpad Prism version 5.03。
7)結果
對人類激素扺抗性前列腺癌，檢討FK330與汰癌勝之併用效果之結果如圖19所示。對人類前列腺癌(PC-3)得癌小鼠，FK330明顯地增強汰癌勝之抗腫瘤效果，對Day30之汰癌勝單獨組之腫瘤體積減少率為63.1%(P<0.05)，對Day55之汰癌勝單獨組之腫瘤體積減少率為 72.1%(P<0.001)。
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示(n=6)。*：P<0.05，***：P<0.001係表示將並用組與汰癌勝單獨投與組比較時之有意義差(Student's t-test)。
8)結論
對人類激素扺抗性前列腺癌(PC-3)得癌小鼠，FK330之並用係增強藉由複數循環投與汰癌勝之抗腫瘤效果，明顯地抑制腫瘤再增殖。
實施例10 1)試驗物質
FK330之用量係換算成單體(非水合物)重量表示。剋癌易水合物注射劑(TAXOTERE(商標)點滴靜脈注射用)係購自Sanofi-aventis股份有限公司，作為剋癌易使用。
2)試驗物質之調製及投與
FK330係懸浮於0.5%甲基纖維素水溶液(0.5%MC)(20mg/ml)，經口投與。剋癌易(40mg/ml)係以95%之乙醇，調製成20mg/ml，於即將投與前，以注射用生理食鹽水(大塚製藥)稀釋成1mg/ml，進行尾靜脈內投與。
3)細胞
來自人類激素扺抗性前列腺癌之PC-3(CRL-1435)係取自American Type Culture Collection(VA,USA)。細胞係使用添加10%之加熱惰性化之牛胎兒血清(FBS)之DMEM培養基，以37℃，5%CO2之條件培養。將使用胰蛋白酶回收的細胞，以PBS懸浮成6×107cells/ml，與等量之Matrigel(商標)Basement Membrane Matrix(Becton Dickinson社，Bedford,MA,USA)混合。
4)動物
5週齡之雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxnlnu/CrlCrlj(nu/nu))係購自日本Charles River社(日本，神奈川)。動物係整個試驗期間，於未感染特定病原體(SPF)之條件下，給予標準飼料及飲水，進行飼育。將培養的細胞，以3×106cells/0.1ml/mouse，移植於裸鼠背部皮下。將腫瘤體積成為152.1至301.2mm3之裸鼠，使用SAS分組，以減少組間及組內之腫瘤體積參差不齊。
5)藥物投與及測定
投與第一天為Day0，進行觀察至Day51。各組(n=5~6)如下處理。FK330係以5ml/kg，進行強制經口投與，剋癌易係以10ml/kg，進行尾靜脈內投與。剋癌易係進行Day0及Day1的2天連續投與後，進行停藥25天(1次循環)。剋癌易之第2次循環之投與係自Day27起 連續投與2天。
對照組：未處理
FK330單獨投與組：100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day，自實驗開始至結束時連續投與)
剋癌易單獨投與組：10mg/kg/day之剋癌易，進行Day0及Day1的2天連續投與後，間隔25天停藥期間(1次循環)，自Day27起連續投與剋癌易2天(2次循環)。
並用組：100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day，自實驗開始至結束時連續投與)+10mg/kg/day之剋癌易(各循環係連續投與2天)
FK330係1天2次，間隔6至8小時，強制經口投與(5ml/kg)。剋癌易係投與FK330之1~4小時後，自尾靜脈，進行靜脈內快速注射(bolus)投與(10ml/kg)。
使用體重及數位游標卡尺，每週測定腫瘤直徑2次。腫瘤體積係依據(長徑×〔短徑〕2×0.5)之橢圓體積之計算式算出。
6)統計分析
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示。試驗期間中，判定觸診極限以下為完全消失(CR)，測定值為0。使用各測定時之腫瘤體積之實測值，對於單獨投與組與並用組之比較，進行非對應之2組間之差的測定 (Student's t-test)。未達5%則判定有有意義差。數據處理係使用Graphpad Prism version 5.03。
7)結果
對人類激素扺抗性前列腺癌，檢討FK330與剋癌易之併用效果之結果如圖20所示。對人類前列腺癌(PC-3)得癌小鼠，FK330明顯地增強剋癌易之抗腫瘤效果，對Day27之汰癌勝單獨組之腫瘤體積減少率為49.3%(P=0.062)，對Day51之剋癌易單獨組之腫瘤體積減少率為42.0%(P<0.05)。
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示(n=5~6)。*：P<0.05係表示將並用組與剋癌易單獨投與組比較時之有意義差(Student's t-test)。
8)結論
對人類激素扺抗性前列腺癌(PC-3)得癌小鼠，FK330之並用係增強藉由複數循環投與剋癌易之抗腫瘤效果。
實施例11 1)試驗物質
FK330之用量係換算成單體(非水合物)重量表示。剋癌易(Docetaxel)水合物注射劑(TAXOTERE(商標)點滴靜脈注射用)係購自Sanofi-aventis股份有限公司， 作為剋癌易使用。
2)試驗物質之調製及投與
FK330係懸浮於0.5%甲基纖維素水溶液(0.5%MC)(20mg/ml)，經口投與。剋癌易(40mg/ml)係以95%之乙醇，調製成20mg/ml後，於即將投與前，以注射用生理食鹽水(大塚製藥)稀釋成1.5mg/ml，進行尾靜脈內投與。
3)細胞
來自人類乳癌之MDA-MB-468(HTB-132)係取自American Type Culture Collection(VA,USA)。細胞係使用添加10%之加熱惰性化之牛胎兒血清(FBS)之RPMI1640培養基，以37℃，5%CO2之條件培養。將使用胰蛋白酶回收的細胞，以PBS懸浮成6×107cells/ml，與等量之Matrigel(商標)Basement Membrane Matrix(Becton Dickinson社，Bedford,MA,USA)混合。
4)動物
5週齡之雌性裸鼠(CAnN Cg-Foxnlnu/CrlCrlj(nu/nu))係購自日本Charles River社(日本，神奈川)。動物係整個試驗期間，於未感染特定病原體(SPF)之條件下，給予標準飼料及飲水，進行飼育。將培養的細胞，以3×106cells/0.1ml/mouse，移植於裸鼠背部 皮下。將腫瘤體積成為133.2至326.5mm3之裸鼠，使用SAS分組，以減少組間及組內之腫瘤體積參差不齊。
5)藥物投與及測定
投與第一天為Day0，進行觀察至Day65。各組(n=6)如下處理。FK330係以5ml/kg，進行強制經口投與，剋癌易係以10ml/kg，進行尾靜脈內投與。剋癌易係於Day0進行投與後，停藥36天(1次循環)，於Day37再次投與(2次循環)。
對照組：未處理
FK330單獨投與組：100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day，自實驗開始至結束時連續投與)
剋癌易單獨投與組：將15mg/kg/day之剋癌易於Day0進行後，隔36天之停藥期間(1次循環)，於Day37再次投與(2次循環)。
並用組：100mg/kg之FK330 bid+15mg/kg/day之剋癌易。
FK330係1天2次，間隔6至8小時，強制經口投與(5ml/kg)。剋癌易係投與FK330之1~4小時後，自尾靜脈，進行快速注射(bolus)投與(10ml/kg)。
使用體重及數位游標卡尺，每週測定腫瘤直徑2次。腫瘤體積係依據(長徑×〔短徑〕2×0.5)之橢圓體積之計算式算出。
6)統計分析
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示。試驗期間中，判定觸診極限以下為完全消失(CR)，測定值為0。使用各測定時腫瘤體積之實測值，對於單獨投與組與並用組之比較，進行非對應之2組間之差的測定(Student's t-test)。未達5%則判定有有意義差。數據處理係使用Graphpad Prism version 5.03。
7)結果
對人類乳癌得癌小鼠，檢討FK330與剋癌易之併用效果之結果如圖21所示。對人類乳癌(MDA-MB-468)得癌小鼠，FK330明顯地增強剋癌易之抗腫瘤效果，對Day37之剋癌易單獨組之腫瘤體積減少率為46.6%(P<0.05)，對Day65之剋癌易單獨組之腫瘤體積減少率為76.6%(P<0.01)。
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示(n=6)。*：P<0.05，**：P<0.01係表示將並用組與汰癌勝單獨投與組比較時之有意義差(Student's t-test)。
8)結論
對人類乳癌(MDA-MB-468)得癌小鼠，FK330之並用係增強藉由複數循環投與剋癌易之抗腫瘤效果，明顯地抑制腫瘤再增殖。
實施例12 1)試驗物質
FK330之用量係換算成單體(非水合物)重量表示。汰癌勝係購自LC Laboratories社(Woburn,MA,USA)，作為汰癌勝使用。
2)試驗物質之調製及投與
FK330係懸浮於0.5%甲基纖維素水溶液(0.5%MC)(20mg/ml)，經口投與。汰癌勝係以乙醇/蓖麻油聚氧乙烯醚(Cremophor)溶液(以1：1混合)，調製成10mg/ml之貯備溶液後，於即將投與前，以注射用生理食鹽水(大塚製藥)稀釋成1mg/ml，進行尾靜脈內投與。
3)細胞
來自人類卵巢癌之MCAS(JCRB0240)係使用取自醫藥基盤研究所(HSRRB)者。細胞係使用添加20%之加熱惰性化之牛胎兒血清(FBS)之EMEM培養基，以37℃，5%CO2之條件培養。將使用胰蛋白酶回收的細胞，以PBS懸浮成6×107cells/ml，與等量之Matrigel(商標)Basement Membrane Matrix(Becton Dickinson社，Bedford,MA,USA)混合。
4)動物
5週齡之雌性裸鼠(CAnN Cg-Foxnlnu/CrlCrlj(nu/nu)) 係購自日本Charles River社(日本，神奈川)。動物係整個試驗期間，於未感染特定病原體(SPF)之條件下，給予標準飼料及飲水，進行飼育。將培養的細胞，以3×106cells/0.1ml/mouse，移植於裸鼠背部皮下。將腫瘤體積成為144.7至302.7mm3之裸鼠，使用SAS分組，以減少組間及組內之腫瘤體積參差不齊。
5)藥物投與及測定
投與第一天為Day0，進行觀察至Day91。各組(n=6)如下處理。FK330係以5ml/kg，進行強制經口投與，汰癌勝係以10ml/kg，進行尾靜脈內投與。汰癌勝係自Day0至Day4進行連續投與5天後，進行停藥24天(1次循環)。自Day29起連續5天進行汰癌勝之第2次循環之投與。停藥29天後，自Day63起連續5天進行汰癌勝之第3次循環之投與。
對照組：未處理
FK330單獨投與組：100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day，自實驗開始至結束時連續投與)
汰癌勝單獨投與組：將10mg/kg/day之汰癌勝，Day0~Day4進行連續投與5天，隔24天之停藥期間(1次循環)。接著，自Day29連續投與汰癌勝5天後，隔29天停藥期間(2次循環)，進一步，自Day63連續投與汰癌勝5天(3次循環)。
並用組： 100mg/kg之FK330 bid(200mg/kg/day，自實驗開始至結束時連續投與)+10mg/kg/day之汰癌勝(各循環連續投與5天)
FK330係1天2次，間隔6至8小時，強制經口投與(5ml/kg)，汰癌勝係投與FK330之1~4小時後，自尾靜脈，進行靜脈內快速注射(bolus)投與(10ml/kg)。
使用體重及數位游標卡尺，每週測定腫瘤直徑2次。腫瘤體積係依據(長徑×〔短徑〕2×0.5)之橢圓體積之計算式算出。
6)統計分析
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示。試驗期間中，判定觸診極限以下為完全消失(CR)，測定值為0。使用各測定時腫瘤體積之實測值，對於單獨投與組與並用組之比較，進行非對應之2組間之差的測定(Student's t-test)。未達5%則判定有有意義差。數據處理係使用Graphpad Prism version 5.03。
7)結果
對人類卵巢癌，檢討FK330與汰癌勝之併用效果之結果如圖22所示。對人類卵巢癌(MCAS)得癌小鼠，FK330明顯地增強汰癌勝之抗腫瘤效果，對Day63之汰癌勝單獨組之腫瘤體積減少率為61.5%(無有意義差)，對Day91之汰癌勝單獨組之腫瘤體積減少率為86.0%(P< 0.05)。
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示(n=6)。*：P<0.05係表示將並用組與汰癌勝單獨投與組比較時之有意義差(Student's t-test)。
8)結論
對人類卵巢癌(MCAS)得癌小鼠，FK330之並用係增強藉由複數循環投與汰癌勝之抗腫瘤效果，明顯地抑制腫瘤再增殖。
產業上利用性
本發明係以與紫杉烷系抗腫瘤劑組合，並用投與用為特徵，含有FK330或其鹽作為有效成份之癌治療用組成物係藉由與紫杉烷系抗腫瘤劑並用而可得到高的癌治療效果，所以特別適用於已知既有的紫杉烷系抗腫瘤劑所適用之各種癌的治療。作為所適用的癌係使用紫杉烷系抗腫瘤劑之固形癌及淋巴癌，作為某種型態，可列舉乳癌、子宮體癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、胃(胃腺)癌、非小細胞肺癌、胰臟癌、頭頸部扁平上皮癌、食道癌、膀胱癌、黑色素細胞瘤(melanoma)、大腸癌、腎細胞癌、非何傑金氏淋巴癌(Non-Hodgkin Lymphoma)等，作為其他型態，為前列腺癌或卵巢癌。

Claims (15)

  1. 一種前列腺癌或卵巢癌治療用組成物，其特徵係與選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑組合，並用投與用之含有N2-〔(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基〕-N-〔2-羰基-2-(4-{〔6-(三氟甲基)嘧啶-4-基〕氧}哌啶-1-基)乙基〕-3-吡啶-2-基-L-丙胺醯胺或其鹽作為有效成份。
  2. 如申請專利範圍第1項之組成物，其係與汰癌勝(Paclitaxel)或剋癌易(Docetaxel)組合，並用投與用。
  3. 如申請專利範圍第2項之組成物，其係與汰癌勝(Paclitaxel)組合，並用投與用。
  4. 如申請專利範圍第2項之組成物，其係與剋癌易(Docetaxel)組合，並用投與用。
  5. 如申請專利範圍第1項至第4項中任一項之組成物，其係包含60~1200mg/日之N2-〔(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基〕-N-〔2-羰基-2-(4-{〔6-(三氟甲基)嘧啶-4-基〕氧}哌啶-1-基)乙基〕-3-吡啶-2-基-L-丙胺醯胺或其鹽之經口投與用組成物。
  6. 如申請專利範圍第5項之組成物，其係包含60~200mg/日之N2-〔(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基〕-N-〔2-羰基-2-(4-{〔6-(三氟甲基)嘧啶-4-基〕氧}哌啶-1-基)乙基〕-3-吡啶-2-基-L-丙胺醯胺或其鹽之經口投與用組成物。
  7. 如申請專利範圍第1項至第6項中任一項之組成物，其係進一步與選自白金系抗腫瘤劑、蒽環(anthracycline)系抗腫瘤劑、癌德星(cyclophosphamide)、氟尿嘧啶(Fluorouracil)、賀癌平(Trastuzumab)及截瘤達(Capccitabine)中1種以上之抗腫瘤劑組合，並用投與用。
  8. 如申請專利範圍第1項至第6項中任一項之組成物，其係與選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑同時地、分別地，連續或間隔地投與。
  9. 一種前列腺癌或卵巢癌治療用組成物，其特徵係含有N2-〔(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基〕-N-〔2-羰基-2-(4-{〔6-(三氟甲基)嘧啶-4-基〕氧}哌啶-1-基)乙基〕-3-吡啶-2-基-L-丙胺醯胺或其鹽作為有效成份，用以治療接受藉由選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑治療之對象。
  10. 如申請專利範圍第1項至第9項中任一項之組成物，其為使用紫杉烷系抗腫瘤劑之前列腺癌治療用。
  11. 如申請專利範圍第10項之癌治療用組成物，其中前列腺癌係去勢抵抗性前列腺癌。
  12. 一種製造前列腺癌或卵巢癌治療用組成物用之N2-〔(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基〕-N-〔2-羰基-2-(4-{〔6-(三氟甲基)嘧啶-4-基〕氧}哌啶-1-基)乙基〕-3-吡啶-2-基-L-丙胺醯胺或其鹽之使用，其特徵係與選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑組合，並用 投與用。
  13. 一種前列腺癌或卵巢癌治療用之N2-〔(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基〕-N-〔2-羰基-2-(4-{〔6-(三氟甲基)嘧啶-4-基〕氧}哌啶-1-基)乙基〕-3-吡啶-2-基-L-丙胺醯胺或其鹽，其特徵係與選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑組合，並用投與用。
  14. 一種前列腺癌或卵巢癌之治療方法，其特徵係將選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑之使用於並用治療時之治療有效用量、以及N2-〔(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基〕-N-〔2-羰基-2-(4-{〔6-(三氟甲基)嘧啶-4-基〕氧}哌啶-1-基)乙基〕-3-吡啶-2-基-L-丙胺醯胺}或其鹽之使用於並用治療時之治療有效用量組合，投與於對象。
  15. 一種前列腺癌或卵巢癌之治療方法，其特徵係將選自紫杉烷系抗腫瘤劑中1種以上之抗腫瘤劑之使用於並用治療時之治療有效用量、以及N2-〔(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基〕-N-〔2-羰基-2-(4-{〔6-(三氟甲基)嘧啶-4-基〕氧}哌啶-1-基)乙基〕-3-吡啶-2-基-L-丙胺醯胺}或其鹽之使用於並用治療時之治療有效用量，同時地、分別地，連續或間隔地投與於對象。
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