TW201316990A - 藥劑併用之癌治療方法 - Google Patents

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Abstract

本發明之課題：增大紫杉烷系抗腫瘤劑之對各種腫瘤的藥效之治療方法係被要求著。本發明之解決手段：本發明者對紫杉烷系抗腫瘤劑之抗腫瘤作用增強方法進行探討之結果，確認含有N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基]-N-[2-側氧基-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧基}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙胺酸醯胺(FK330)或其鹽作為有效成分之癌治療用組成物，會增強紫杉烷系抗腫瘤劑之抗腫瘤作用，而完成了本發明。亦即，本案係關於含有FK330或其鹽作為有效成分之癌治療用組成物，其係與由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上的抗腫瘤劑併用投與用。

Description

藥劑併用之癌治療方法
本發明係關於醫藥、特別是關於含有N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基]-N-[2-側氧基-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧基}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙胺酸醯胺或其鹽作為有效成分之用以與紫杉烷系抗腫瘤劑併用之癌治療用組成物。
在惡性腫瘤之化學療法中，紫杉烷系抗腫瘤劑、特別是太平洋紫杉醇或歐洲紫杉醇係在數種癌症中作為有效的藥劑而被使用。
已知紫杉烷系抗腫瘤劑係藉由阻礙細胞分裂所必須之微小管的去聚合，來阻礙癌細胞之分裂。太平洋紫杉醇係使用於卵巢癌、非小細胞肺癌、乳癌、胃癌等的治療；歐洲紫杉醇係使用於乳癌、非小細胞肺癌、胃癌、頭頸部癌、卵巢癌、食道癌、子宮體癌等的治療。
在臨床領域中，以藥效增強或抗癌光譜之擴大為目的，進行有組合與紫杉烷系抗腫瘤劑之作用機轉相異之其他抗腫瘤劑的多劑併用療法。例如，已知有太平洋紫杉醇與卡鉑定(carboplatin)之併用(Cancer,1996,77：2458-63)、或歐洲紫杉醇與順鉑等之併用(Eur.J.Surg.Oncol.2006 32(3)297-302)。又，美國食品藥物管理局(FDA)所提供的各種資料庫、例如“Drugs@FDA”(http： //www.accessdata.fda.gov/scripts/cder/drugsatfda/index.cfm)或歐洲醫藥品廳(EMA)之首頁(http：//www.ema.europa.eu/)中，揭示了併用太平洋紫杉醇或歐洲紫杉醇與其他抗腫瘤劑之臨床療法。
一般而言，抗腫瘤劑之投與量增多時，副作用亦與其成比例增加，故該投與必須慎重為之。因此，抗腫瘤劑的投與中，由副作用的觀點而言設定有最大耐受劑量(MTD)，其投與量受到限制。又，依照例如日本之醫藥品醫藥機器資訊提供首頁之Taxol注(註冊商標：太平洋紫杉醇之商品名)之隨附文件，記載了太平洋紫杉醇係「1日1次210mg/m2花3小時點滴靜脈注射，至少停藥3週。以此為1療程而重複投與。再者，投與量係隨年齡、症狀作適宜減量」，如此記載，太平洋紫杉醇除用量外投與方法亦有所特定。又，關於Taxotere注(註冊商標：歐洲紫杉醇之商品名)亦有「1次最高用量為70mg/m2」之記載，用量係有所指示。
另一方面，國際公開02/055541號(專利文獻1)中揭示了具有良好的一氧化氮(NO)合成酵素(NOS)阻礙活性之胜肽衍生物。特別是於該公報中揭示為實施例41，且以下式所示之N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基]-N-[2-側氧基-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧基}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙胺酸醯胺(FR260330、或稱為FK330)被報導顯示有優良的誘導型一氧化氮合成酵素(inducible NOS,iNOS)阻礙活性(非 專利文獻1)，進一步地，亦報導了FK330係有效於大鼠大動脈移植之慢性排斥模式(非專利文獻2)。又，已報導在猿猴腎缺血/再灌流損傷及大鼠肝移植中之缺血/再灌流損傷中亦有效(非專利文獻3、4)、抑制因TGF β 1之增加或星狀細胞之活化而被誘導之纖維化，對肝硬化治療有效(專利文獻2、非專利文獻5)、且對發炎性角化症、角化症、或發炎性皮膚疾病亦有效(專利文獻3)。
iNOS已被觀察到於上皮細胞、平滑肌細胞、巨噬細胞等各型之細胞中有表現，藉由因感染或發炎等而誘導之細胞激素(cytokine)等而在轉錄階段誘導其表現，而產生NO。iNOS係扮演於感染或生物體防禦等之中心媒介者的角色。
NO會促進癌的進行或轉移，但另一方面，從目前為止的許多研究中亦顯示其亦可能會抑制癌的進行或轉移。有報導NO在癌中的作用，係依賴於NOS同型異構物(isoform)之活性或局部性、NO暴露之濃度或期間、細胞對NO之感受性(非專利文獻6)，已有進行由NO產生促進及NO產生抑制之兩面來進行癌的生理學研究，於癌治療的應用上，對NO產生促進或NO產生阻礙何者為 佳，尚未得到一定的見解(非專利文獻7及8)。
非專利文獻9及10中，記載了於人類卵巢癌細胞或頸頭癌細胞中，低濃度的NO會顯示抑制順鉑及太平洋紫杉醇所致之細胞凋亡的傾向，高濃度的NO會促進細胞凋亡。該等文獻中，亦記載了藉由iNOS阻礙劑1400W與生存素(survivin)RNAi之併用，不僅是太平洋紫杉醇，亦會促進順鉑所致之細胞凋亡，可說NO之細胞保護效果並非為太平洋紫杉醇選擇性的作用。
[先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]國際公開第02/055541號
[專利文獻2]日本專利第3700854號公報
[專利文獻3]日本特開2006-008621號公報
[非專利文獻]
[非專利文獻1]European Journal of Pharmacology 509, 71, (2005)
[非專利文獻2]Transplantation 79, 10 1386 (2005)
[非專利文獻3]Transplantation 81, 4, 627 (2006)
[非專利文獻4]American Journal of Transplantation 6, 9, 2013 (2006)
[非專利文獻5]Wound Repair and Regeneration 15, 881 (2007)
[非專利文獻6]Nature Reviews Cancer, 6(7), 521-34 (2006)
[非專利文獻7]Cancer Chemotherapy and Pharmacology, 67: 1211-1224 (2011)
[非專利文獻8]Nitric Oxide 19: 158-163 (2008)
[非專利文獻9]Cancer Research, 68, 5158-5166 (2008)
[非專利文獻10]International Journal of Cancer, 124, 2033-2041 (2009)
紫杉烷系抗腫瘤劑雖然有用於各種腫瘤之治療，但就副作用的觀點，投與量或用法係受到限制，現今仍然有需要在不增加投與量之下，對各種腫瘤的藥效更增大的治療方法。又，治療當初雖有效，但隨著持續的治療，抗腫瘤效果減弱之後天抗性(acquired resistance)，係成為問題。
本發明者針對紫杉烷系抗腫瘤劑之抗腫瘤作用增強方法作努力探討的結果，意外地發現藉由合併使用N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基]-N-[2-側氧基-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧基}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙胺酸醯胺，可達成顯著的抗腫瘤作用增強、及發現其增強作用的機轉，而完成本發明。
亦即，本發係關於
(1)一種含有FK330或其鹽作為有效成分之癌治療用組成物，其特徵在於與由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑組合而併用投與來使用。
進一步於以下顯示其一態樣。
(2)如(1)記載之組成物，其係與太平洋紫杉醇或歐洲紫杉醇組合而併用投與來使用。
(3)如(2)記載之組成物，其係與太平洋紫杉醇組合而併用投與來使用。
(4)如(2)記載之組成物，其係與歐洲紫杉醇組合而併用投與來使用。
(5)如(1)至(4)記載之組成物，其係含有60~1200mg/日之FK330或其鹽的經口投與用組成物。
(6)如(5)記載之組成物，其係含有60~200mg/日之FK330或其鹽的經口投與用組成物。
(7)如(1)至(6)記載之組成物，其中進一步與由鉑系抗腫瘤劑、蒽環(Anthracycline)系抗腫瘤劑、環磷醯胺、氟尿嘧啶、曲妥珠單株抗體(trastuzumab)及截瘤達(capecitabine)中選擇之1者以上之抗腫瘤劑組合而併用投與來使用。
(8)如(1)至(6)記載之組成物，其係於由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上的抗腫瘤劑之1投與循環中的至少1日中併用投與來使用。
(9)如(8)記載之組成物，其係於由紫杉烷系抗腫 瘤劑中選擇之1者以上的抗腫瘤劑之投與日的至少1日中併用投與來使用。
(10)如(8)記載之組成物，其係於由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上的抗腫瘤劑之1投與循環中的全日中併用投與來使用。
又，本案發明亦關於以下發明。
(11)如(1)至(6)記載之癌治療用組成物，其係與由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑同時地、個別地、連續地、或相間隔地投與。
(12)一種癌治療用組成物，其係含有FK330或其鹽作為有效成分，且係用以治療接受由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑的治療之對象。
(13)如(1)至(12)記載之癌治療用組成物，其係使用紫杉烷系抗腫瘤劑之癌的治療用。
(14)如(13)記載之癌治療用組成物，其中使用紫杉烷系抗腫瘤劑之癌為非小細胞肺癌。
(15)如(13)記載之癌治療用組成物，其中使用紫杉烷系抗腫瘤劑之癌為乳癌。
進一步地，本發明亦關於以下之發明。
(16)一種癌之治療方法，其特徵在於組合用於由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑的併用治療時的治療有效用量、以及用於FK330或其鹽之併用治療時的治療有效用量，而投與至對象。
(17)一種癌之治療方法，其特徵在於將用於由紫杉 烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑的併用治療時的治療有效用量、以及用於FK330或其鹽之併用治療時的治療有效用量，同時地、個別地、連續地、或相間隔地投與至對象。
再者，「對象」意指以該預防或治療為必須之人類或其他動物，在其一態樣中，係以該預防或治療為必須之人類。
又，進一步地，本案發明亦關於以下發明。
(18)一種用以製造癌治療用組成物之FK330或其鹽之使用，其特徵在於與由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑組合而併用投與來使用。
(19)一種用以治療癌之FK330或其鹽，其特徵在於與由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑組合而併用投與來使用。
(20)一種含有FK330或其鹽作為有效成分之癌治療劑，其特徵在於與由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑組合而投與。
(21)一種由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑之抗腫瘤作用增強劑，其係含有FK330或其鹽作為有效成分。
(22)一種由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑之抗性化抑制劑或抗性化預防劑，其係含有FK330或其鹽作為有效成分。
(23)一種由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之 抗腫瘤劑之感受性增強劑，其係含有FK330或其鹽作為有效成分。
藉由將含有本發明之FK330或其鹽作為有效成分之癌治療用組成物與紫杉烷系抗腫瘤劑合併使用，會達成紫杉烷系抗腫瘤劑之癌治療效果的增強，故本案發明之癌治療用組成物，可於既存之已知適應紫杉烷系抗腫瘤劑之各種癌的治療中，與由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑併用來使用。作為適應之癌，係使用紫杉烷系抗腫瘤劑之固態癌及淋巴瘤。
以下，詳細說明本發明。
本發明之「癌治療用組成物」，係用以與紫杉烷系抗腫瘤劑併用之醫藥組成物，作為另一態樣，係增強紫杉烷系抗腫瘤劑之抗腫瘤作用的醫藥組成物。
本發明之「癌治療用組成物」中之「癌」，係包含使用紫杉烷系抗腫瘤劑之癌、亦即使用紫杉烷系抗腫瘤劑之全部的固態癌及淋巴瘤。作為其一態樣，可列舉乳癌、子宮體癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、胃(胃腺)癌、非小細胞肺癌、胰臟癌、頭頸部扁平上皮癌、食道癌、膀胱癌、黑色素瘤、大腸癌、腎細胞癌、非何杰金氏淋巴癌、尿路上皮癌等。作為另一態樣，可列舉乳癌、卵巢癌、前 列腺癌、胃(胃腺)癌、非小細胞肺癌等；又另一態樣，可列舉乳癌、胃(胃腺)癌、非小細胞肺癌等；進一步另一態樣，可列舉乳癌；進一步又另一態樣，可列舉非小細胞肺癌。
乳癌之另一態樣，可列舉例如HER2陽性轉移性乳癌、HER2陰性轉移性乳癌、HER2陽性乳癌、或轉移性乳癌，另一態樣可列舉HER2陰性轉移性乳癌，又另一態樣可列舉HER2陽性轉移性乳癌。
非小細胞肺癌之另一態樣，可列舉例如局部進行性非小細胞肺癌、或轉移性非小細胞肺癌，另一態樣可列舉非小細胞肺癌中之非扁平上皮癌，又另一態樣可列舉轉移性之非小細胞肺癌中之非扁平上皮癌，進一步又另一態樣可列舉轉移性之非小細胞肺癌中之扁平上皮癌。
胃癌之另一態樣，可列舉轉移性胃癌、轉移性胃食道接合部癌等。
前列腺癌之另一態樣，可列舉轉移性去勢抗性前列腺癌、荷爾蒙抗性前列腺癌等，另一態樣可列舉荷爾蒙抗性前列腺癌，又另一態樣可列舉轉移性去勢抗性前列腺癌。
本發明中使用之FK330或其鹽，為國際公開02/055541號之實施例41的化合物，且可容易藉由該專利所揭示之製造方法而獲得。
FK330雖為基於不對稱碳原子之存在的(S)體之光學異性體，但亦可含有(R)體之光學異性體。
又，本發明中，FK330之鹽，意指FK330在製藥學上 容許之鹽，具體而言，可列舉鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機酸；或甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、苦杏仁酸、酒石酸、二苯甲醯基酒石酸、二甲苯甲醯基酒石酸、檸檬酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、天門冬胺酸、麩胺酸等有機酸、等之酸加成鹽。該等之酸加成鹽可藉由一般方法之製鹽反應來製造。
進一步地，本發明之FK330或其鹽，可作為各種水合物或溶劑合物、及結晶多形之物質之形態來使用。又，FK330或其鹽，亦包含以各種放射性或非放射性同位素標記之化合物。
本發明中使用之FK330或其鹽，其一態樣為分離體無水物。另一態樣為分離體2水合物。例如，將藉由國際公開第02/055541號之實施例41所記載之方法所得之FK330分離體，以醇/水溶劑系，例如乙醇/水、或異丙醇/水等進行再結晶，將所得之結晶在減壓下乾燥時，可得到分離體無水物。又，藉由對所得之分離體無水物進行調濕操作，可得到分離體2水合物結晶。
含有FK330或其鹽作為有效成分之醫藥組成物，可使用本領域中通常所用之賦形劑，亦即藥劑用賦形劑或藥劑用載體等，藉由通常使用之方法來調製。
投與係錠劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、液劑等之經口投與、或關節內、靜脈內、肌肉內等注射劑等之非經口投與的任意形態皆可。作為其一態樣，係錠劑、丸 劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、液劑等之經口投與。
用於經口投與之固體組成物，可使用錠劑、散劑、顆粒劑等。如此固體組成物中，係將1種或2種以上之有效成分，與至少1種之不活性賦形劑混合。組成物遵照一般方法，亦可含有不活性之添加劑，例如潤滑劑或崩解劑、安定化劑、溶解輔助劑。錠劑或丸劑亦可依需要以糖衣或胃溶性或腸溶性物質之薄膜被膜。
用以經口投與之液體組成物，含有藥劑學上容許的乳濁劑、溶液劑、懸濁劑、糖漿劑或酏劑等，且含有一般所用之不活性稀釋劑、例如精製水或乙醇。該液體組成物於不活性稀釋劑以外亦可含有如可溶化劑、濕潤劑、懸濁劑之輔助劑；甘味劑、風味劑、芳香劑、防腐劑。
用於非經口投與之注射劑，係含有無菌之水性或非水性溶液劑、懸濁劑或乳濁劑。水性之溶劑例如係含有注射用蒸餾水或生理食鹽液。非水性之溶劑係有例如如乙醇之醇類。如此之組成物，亦可進一步含有等張化劑、防腐劑、濕潤劑、乳化劑、分散劑、安定化劑、或溶解輔助劑。該等係例如藉由通過細菌保留濾膜的過濾、摻混殺菌劑或照射而無菌化。又，該等亦可由製造無菌固體組成物，且於使用前溶解或懸濁於無菌水或無菌注射用溶劑來使用。
雖隨著投與路徑、劑形、投與部位、賦形劑或添加劑之種類不同而相異，但本發明之醫藥組成物係含有0.01~100重量%、作為其一態樣係含有0.01~50重量%之 有效成分之1種或以上之FK330或其鹽。
通常經口投與的情況時，FK330(2水合物)之1日投與量為約60~1200mg/日，將之1次或分為2次~3次投與。作為另一態樣，1日之投與量為60~200mg。作為又另一態樣為120~250mg、120~220mg、150~250mg、或180~200mg。作為又另一態樣為100~180mg、或180~300mg。作為又另一態樣為120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg、200mg、210mg、220mg、230mg、240mg、或250mg。作為又另一態樣為180mg、190mg、或200mg。投與量係考慮症狀、年齡、性別等依照個別情況作適當決定。
能夠與本發明之FK330併用之紫杉烷系抗腫瘤劑，可列舉以具有紫杉烷環或其類緣構造之化合物作為有效成分之醫藥組成物，作為另一態樣，可列舉以具有紫杉烷環之化合物作為有效成分之醫藥組成物。紫杉烷系抗腫瘤劑之又另一態樣，可列舉以具有微小管去聚合阻礙作用之化合物作為有效成分之醫藥組成物。醫藥組成物所適用之賦形劑及劑形，可使用前述者。
能夠與與FK330併用之紫杉烷系抗腫瘤劑之具體的另一態樣，可列舉太平洋紫杉醇(pactitaxel)、歐洲紫杉醇(docetaxel)、cabazitaxel、abraxane、tesetaxel、ortataxel等，作為又另一態樣，可列舉太平洋紫杉醇(pactitaxel)、歐洲紫杉醇(docetaxel)、或abraxane，作為進一步又另一態樣，可列舉太平洋紫杉醇(pactitaxel)或abraxane，作 為進一步又另一態樣，可列舉太平洋紫杉醇(pactitaxel)，作為另一態樣，可列舉歐洲紫杉醇(docetaxel)。
能夠與本發明之FK330併用之主要現存之紫杉烷系抗腫瘤劑，係與主要的適應癌種類或適應候補癌種類一起示於下表。惟，本發明之併用治療中，該等抗腫瘤劑之適應癌種類不限定於該等。
太平洋紫杉醇、歐洲紫杉醇、cabazitaxel、或abraxane，可購入市售品來使用，或藉由所屬技術領域中具有通常知識者公知之方法或該等之替代法可容易獲得。
cabazitaxel，亦可藉由國際公開96/30355號所揭示之製造方法或該等之替代法可容易獲得。tesetaxel，藉由所屬技術領域中具有通常知識者公知之方法、或國際公開 01/27115號所揭示之製造方法或該等之替代法可容易獲得。ortataxel，藉由所屬技術領域中具有通常知識者公知之方法、或美國專利5705508號說明書所揭示之製造方法或該等之替代法可容易獲得。
上述抗腫瘤劑已在臨床上被使用，且其投與路徑、投與循環、投與量係所屬技術領域中具有通常知識者所公知。隨著癌種類或症狀、所併用的藥劑不同，適合的用法/用量(Dosage and Administration)即相異，該等之詳細資訊可藉由FDA所提供之各種資料庫、例如”Orange Book”(http：//www.fda.gov/cder/orange/default.htm)、或日本的醫藥品醫藥機器資訊提供首頁(http：//www.info.pmda.go.jp/)而容易獲得。該等資料庫中之各抗腫瘤劑的資訊係一併用於本案。
例如，作為太平洋紫杉醇之用法/用量的例子，日本的醫藥品醫藥機器資訊提供首頁之Taxol注(註冊商標：太平洋紫杉醇之商品名)之附件中記載「[效能或效果]卵巢癌、非小細胞肺癌、乳癌、胃癌；[用法及用量]；1.通常，太平洋紫杉醇於成人係1日1次將210mg/m2花3小時點滴靜脈注射，至少停藥3週。以此為1療程而重複投與。再者，投與量係隨著年齡、症狀而適當地減量。」。
又，作為歐洲紫杉醇之用法/用量的例子，於日本的醫藥品醫藥機器資訊提供首頁之Taxotere注(註冊商標：歐洲紫杉醇之商品名)的附件中記載「1.乳癌、非小細胞肺癌、胃癌、頭頸部癌；各效能或效果之用法及用量；1. 通常、歐洲紫杉醇於成人係1日1次將60mg/m2花費1小時以上，以間隔3~4週進行點滴靜脈注射。再者，隨著症狀作適當增減，惟1次最高用量為70mg/m2」。
本發明中，用於併用治療的情況之治療有效用量，可隨著通常投與之投與路徑，設定為與通常單獨投與時相同的投與量或較其為低之用量(例如，單獨投與時之最高投與量的0.10~0.99倍)。以一定的投與循環投與之紫杉烷系抗腫瘤劑的情況時，亦可適當調整投與循環，以適合於與FK330併用。具體的的投與頻率、投與量、投與循環等，係考慮患者的症狀、年齡、性別等，依各自的情況作適當決定。
將FK330與紫杉烷系抗腫瘤劑併用投與時的投與形態，只要係採用各自所適合的投與路徑、投與頻率及投與量，則無特殊限定，可列舉例如：(1)含有FK330與紫杉烷系抗腫瘤劑之組成物、亦即作為單一製劑之投與；(2)將使FK330與紫杉烷系抗腫瘤劑各自經製劑化而得之2種製劑以同一投與路徑之同時投與；(3)將使FK330與紫杉烷系抗腫瘤劑各自經製劑化而得之2種製劑以同一投與路徑且隔出時間差之投與(例如以FK330、紫杉烷系抗腫瘤劑之順序投與、或者以相反順序投與)；(4)將使FK330與紫杉烷系抗腫瘤劑各自經製劑化而得之2種製劑以不同投與路徑之同時投與；(5)將使FK330與紫杉烷系抗腫瘤劑各自經製劑化而得之2種製劑以不同投與路徑且隔出時間差之投與(例如以FK330、紫 杉烷系抗腫瘤劑之順序投與、或者以相反順序投與)等。作為其一態樣，本發明之癌治療用組成物係與紫杉烷系抗腫瘤劑分別製劑化，紫杉烷系抗腫瘤劑係藉由靜脈注射、點滴靜脈注射或經口而投與；本發明之癌治療用組成物係以經口或非經口投與。作為另一態樣，紫杉烷系抗腫瘤劑係藉由靜脈注射、點滴靜脈注射來投與；本發明之癌治療用組成物係經口投與。
本發明之癌治療用組成物之較佳投與形態，係於該紫杉烷系抗腫瘤劑投與之1循環中的至少1日，將本發明之癌治療用組成物經口或非經口投與的方法。此處，「循環」意指一定的療法之治療循環或治療療程，例如太平洋紫杉醇或歐洲紫杉醇中，係由開始投與，經過停藥期間，至進行下次投與之前為止的3~4週左右的投與單位期間。作為其一投與形態，係將含有FK330或其鹽之本發明之癌治療用組成物，於紫杉烷系抗腫瘤劑之投與日的至少1日經口投與之方法、於紫杉烷系抗腫瘤劑之投與日之每日經口投與的方法、於紫杉烷系抗腫瘤劑之停藥日之至少1日經口投與的方法、於紫杉烷系抗腫瘤劑之停藥日每日經口投與之方法、於紫杉烷系抗腫瘤劑之投與日的至少1日及停藥日的至少1日經口投與的方法、於紫杉烷系抗腫瘤劑投與之1循環中每日經口投與的方法、或於紫杉烷系抗腫瘤劑投與之1循環中間歇地(2日1次、1週1次等)經口投與的方法。作為其一態樣，係於紫杉烷系抗腫瘤劑投與之1循環中每日經口投與的方法。亦可由紫杉烷系抗腫 瘤劑之投與數日前~前一日開始投與本發明之癌治療用組成物，此態樣係包含於紫杉烷系抗腫瘤劑之停藥日的投與。擔心FK330與紫杉烷系抗腫瘤劑之藥物相互作用的情況時，為了迴避相互作用，可分開投與時期、及/或隔出必要的間隔來投與。
本發明之「含有FK330或其鹽作為有效成分之用以治療正接受由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上抗腫瘤劑之治療的對象之癌治療用組成物」中之「對象」，只要係接受由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上抗腫瘤劑的治療即可，亦可接受其他抗腫瘤劑的投與。其他抗腫瘤劑可列舉後述者。「對象」係能夠將由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上抗腫瘤劑與含有FK330或其鹽作為有效成分之癌治療用組成物同時地、個別地、連續地、或相間隔地投與。
本發明亦可為「將(a)FK330或其鹽、以及(b)由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上的抗腫瘤劑組合而包含的套組」之形態。此係將含有有效成分(a)之製劑(第一製劑)及含有有效成分(b)之製劑(第二製劑)，以能夠使用於該等有效成分之併用療法的方式組合而包含者。本發明之套組，亦可依期望，為可含有安慰劑等之使配合各自投與時期之投與成為容易的追加製劑或表示構件之包裝品。
2種類之製劑，係為例如考慮各製劑之生物有效性、安定性等，以適合各自製劑之製劑處方、投與路徑、投與 頻率等之投與條件下，以相同或相異之投與路徑同時地、個別地、連續地、或相間隔地投與。此處「同時地」意指將第一製劑與第二製劑一起以相同的投與路徑投與，「個別地」意指將第一製劑與第二製劑以相同或相異之投與路徑、以相同或相異之投與頻率或投與間隔個別地投與。「連續地」意指將第一製劑與第二製劑以相同或相異之投與路徑、以第一製劑之後第二製劑的順序、或以相反順序來投與。「相間隔地」意指將第一製劑與第二製劑以相同或相異之投與路徑、以第一製劑之後空出一定的間隔再第二製劑之順序、或以相反的順序來投與。
本發明亦可為「含有(a)含有FK330或其鹽作為有效成分之組成物、與(c)表示與由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上的抗腫瘤劑併用之添附文件而成之癌治療用醫藥品」的形態。此係意味著包含：含有用於併用治療時之治療有效用量的有效成分之組成物(a)、與表示與由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上的抗腫瘤劑併用之前述(a)組成物之相關附件(c)，的兩者而包裝的癌治療用之醫藥品。
又，將本發明之含有FK330或其鹽作為有效成分之癌治療用組成物與紫杉烷系抗腫瘤劑合併使用時，亦可依照期望，進一步與化學療法所使用之其他抗腫瘤劑併用。作為可進一步併用之化學療法所使用之其他抗腫瘤劑、係以往已知與紫杉烷系抗腫瘤劑併用之抗腫瘤劑，可列舉例如由鉑系抗腫瘤劑、蒽環系抗腫瘤劑、環磷醯胺、氟尿嘧 啶、曲妥珠單株抗體及截瘤達中選擇之1者以上之抗腫瘤劑，作為其一態樣為順鉑或卡鉑定、作為另一態樣為阿黴素。
如本案說明書之實施例1-6所示，發現了藉由含有本案發明之FK330或其鹽作為有效成分的癌治療用組成物與紫杉烷系抗腫瘤劑之併用治療，癌治療作用會增強。其效果係藉由與含有FK330或其鹽作為有效成分之癌治療用組成物或紫杉烷系抗腫瘤劑之單劑投與比較，平均腫瘤體積(mean tumor volume)有意義地減少而得到確認。
又，本發明之FK330或其鹽，沒有如許多抗腫瘤劑中被報告之嚴重副作用，就安全性觀點而言亦為有用。
實施例所示之動物模式中，確認了本發明之癌治療用組成物係紫杉烷系抗腫瘤劑選擇性地、且用量依存性地增強抗腫瘤作用。亦即，僅FK330或其鹽的情況時，見不到有意義的抗腫瘤效果，又，將FK330或其鹽與紫杉烷以外之抗腫瘤劑併用，雖確認不到特別顯著之抗腫瘤作用增強作用，但與紫杉烷系抗腫瘤劑組合時，確認了良好的抗腫瘤作用增強作用。特別地係顯示了FK330會改善複數循環處置所造成之紫杉烷系藥劑之抗腫瘤效果減弱，而良好地抑制了腫瘤增殖(參照圖7)。此暗示了FK330會抑制紫杉烷系抗腫瘤劑之抗性化。
本案說明書之實施例7及8中，顯示了NO會直接抑制紫杉烷系抗腫瘤劑之微小管去聚合阻礙作用、以及紫杉烷系抗腫瘤劑會誘發癌組織之iNOS蛋白表現所伴隨的NO 產生，FK330會抑制其iNOS活性。
又，本發明者等，亦發現了NO會抑制透過紫杉烷系抗腫瘤劑所致細胞凋亡之癌細胞增殖抑制作用，NO所致之化學療法劑減弱效果，在紫杉烷系抗腫瘤劑被選擇性地觀察到。
因此，本發明者等，如下所述般地揭示FK330所致之紫杉烷系抗腫瘤劑之抗腫瘤作用增強的機制。亦即，紫杉烷系抗腫瘤劑係於腫瘤組織中使iNOS蛋白亢進，結果會增強NO產生。所產生之NO，藉由直接地抑制紫杉烷之微小管去聚合阻礙作用，而引起紫杉烷系抗腫瘤劑之抗腫瘤效果減弱。另一方面，FK330藉由阻礙因紫杉烷系抗腫瘤劑所增強之NO產生，可抑制紫杉烷系抗腫瘤劑之效果的減弱而增強抗腫瘤作用。
由以上所述，FK330或其鹽可說能夠增強以微小管去聚合阻礙作用為標的之所有紫杉烷系抗腫瘤劑之作用。
[實施例]
顯示本發明之癌治療用組成物的有用性之藥理試驗結果係如以下所示，但本發明不受該等實施例所限定。
實施例1 1)被測物質
FK330係使用分離體2水合物。以下，FK330之投與量係以該2水合物之重量來表示。歐洲紫杉醇水合物注射 劑(Taxotere(商標)點滴靜脈注射用)係由Sanofi-Aventis股份有限公司購入，作為歐洲紫杉醇使用。太平洋紫杉醇注射劑(太平洋紫杉醇注射液「Sawai」)係由澤井製藥股份有限公司購入，作為太平洋紫杉醇使用。鹽酸愛萊諾迪肯(Topotecin(商標)注)係由第一三共股份有限公司購入，作為愛萊諾迪肯使用。注射用吉西他濱鹽酸鹽(Gemzar(商標)注射用)係由日本Eli Lilly股份有限公司購入，作為吉西他濱使用。注射用鹽酸阿黴素(ADRIACIN(商標)注用(Injection)10)係由協和發酵工業股份有限公司購入，作為阿黴素使用。卡鉑定注射液(Paraplatin(商標)注射液)係由Bristol-Myers股份有限公司購入，作為卡鉑定使用。
2)被測物質之調製及投與
FK330係懸濁於0.5%甲基纖維素水溶液(0.5% MC)(20mg/mL)。歐洲紫杉醇係以添附之溶解液調製為4mg/kg後，以生理食鹽液(大塚製藥)稀釋為1mg/mL。太平洋紫杉醇、愛萊諾迪肯、吉西他濱、阿黴素及卡鉑定係以注射用生理食鹽水，分別於使用於調製為1mg/mL、3mg/mL、16mg/mL、1mg/mL及6mg/mL。
3)細胞
來自人類肺癌之Calu 6(HTB-56)係由American Type Culture Collection(VA,USA)獲得。細胞係使用添 加有10%之經加熱不活化的胎牛血清(FBS)的RPMI1640培養基，於37℃、5% CO2之條件下培養。將使用胰蛋白酵素回收之細胞以PBS懸濁為6x107 cells/mL，與等量之Matrigel(商標)Basement Membrane Matrix(Becton Dickinson Co.製，Bedford,MA,USA)混合。
4)動物
5週齡之雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxnlnu/CrlCrlj(nu/nu))係由日本Charles River公司(日本、神奈川)購入。動物係於試驗期間持續於特定病原體未感染(SPF)條件下給予標準的飼料與飲水進行飼養。將經培養之細胞以3x106 cells/0.1 mL/mouse移植於裸鼠之背部皮下。將腫瘤體積(短徑x[長徑]2 x 0.5)成為111.9至369.3 mm3之裸鼠，以群間及群內之腫瘤體積變異為小的方式使用SAS分群。
5)藥物投與及測定
以投與初日為Day1，進行觀察至Day29為止。將各自之群(n=5或6)如以下方式處理。FK330係1日2次、以6至8小時之間隔強制經口投與(5mL/kg)，各化學療法劑係由尾靜脈進行靜脈內大量輸注(bolus)投與(10mL/kg)。
對照群：未處置
FK330單獨投與群：將FK330 100mg/kg以1日2次 投與(bid)(200mg/kg/day、由實驗開始至結束時止連日投與)
歐洲紫杉醇單獨投與群：歐洲紫杉醇10mg/kg/day(Day1、5及9)
太平洋紫杉醇單獨投與群：太平洋紫杉醇10mg/kg/day(Day1至7)
愛萊諾迪肯單獨投與群：愛萊諾迪肯30mg/kg/day(Day1至7)
吉西他濱單獨投與群：吉西他濱160mg/kg/day(Day1、4及7)
阿黴素單獨投與群：阿黴素10mg/kg/day(Day1及8)
卡鉑定單獨投與群：卡鉑定60mg/kg/day(Day1及2)
併用群：FK330 100 mg/kg/day bid+歐洲紫杉醇10 mg/kg/day(Day1、5及9)、n=6
FK330 100 mg/kg/day bid+太平洋紫杉醇10 mg/kg/day(Day1至7)、n=6
FK330 100 mg/kg/day bid+愛萊諾迪肯30 mg/kg/day(Day1至7)、n=6
FK330 100 mg/kg/day bid+吉西他濱160 mg/kg/day(Day1、4及7)、n=6
FK330 100 mg/kg/day bid+阿黴素10 mg/kg/day( Day1及8)、n=6
FK330 100 mg/kg/day bid+卡鉑定60 mg/kg/day(Day1及2)、n=5
FK330係1日2次、以6至8小時之間隔強制經口投與(5mL/kg)。各化學療法劑係在FK330投與後2~4小時後由尾靜脈進行靜脈內大量輸注投與(10mL/kg)。
每3~4日測定體重與使用數位游標卡尺測定腫瘤直徑。腫瘤體積係由(短徑x[長徑]2 x 0.52)之橢圓體積的計算式算出。
6)統計解析
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示。試驗期間中，將觸診界限以下判定為完全消失(CR)、測定值為0。關於試驗結束時之腫瘤體積的實測值，進行單獨投與群與併用群中無對應之2群間之差的檢定(Student’s t-test)，將未達5%判斷為具有有意義的差。數據處理係使用SAS或Graphpad Prism version 5.03。
7)結果
探討併用投與FK330與各種化學療法劑時之抗腫瘤作用。結果係如圖1至圖6所示。亦即，分別將FK330與阿黴素之併用效果示於圖1、與吉西他濱之併用效果示於圖2、與愛萊諾迪肯之併用效果示於圖3、與卡鉑定之併用效果示於圖4、與太平洋紫杉醇之併用效果示於圖5、與歐 洲紫杉醇之併用效果示於圖6。FK330單獨時雖無法觀察到抗腫瘤效果，抗腫瘤效果之有意義的增強係在太平洋紫杉醇(於Day29之對太平洋紫杉醇單獨群之腫瘤體積減少率57.6%)及歐洲紫杉醇(於Day29之對歐洲紫杉醇單獨群之腫瘤體積減少率65.2%)中被確認。另一方面，FK330對吉西他濱及卡鉑定之抗腫瘤效果並無影響，抗腫瘤效果之若干增強雖在阿黴素(於Day29之對阿黴素單獨群之腫瘤體積減少率34.5%)及愛萊諾迪肯(於Day29之對愛萊諾迪肯單獨群之腫瘤體積減少率34.1%)中被觀察到，但並非有意義之作用。
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)來表示(n=6)。*：P<0.03、**：P<0.01表示將併用群與化學療法劑單獨投與群比較時之有意義差。N.S.：表示將併用群與化學療法劑單獨投與群比較時並無有意義差(Student’s t-test)。
8)結論
FK330單獨時雖無法觀察到抗腫瘤效果，但會增強太平洋紫杉醇及歐洲紫杉醇之抗腫瘤效果。另一方面，對愛萊諾迪肯、吉西他濱、阿黴素及卡鉑定之抗腫瘤效果並無影響。該等結果，暗示FK330會選擇性地增強紫杉烷系抗腫瘤劑之抗腫瘤效果。
實施例2 1)被測物質
FK330之用量係以包含水合物之重量來表示。太平洋紫杉醇注射劑(太平洋紫杉醇注射液「Sawai」)係由澤井製藥股份有限公司購入，作為太平洋紫杉醇使用。
2)被測物質之調製及投與
將FK330懸濁於0.5%甲基纖維素水溶液(0.5% MC)(20mg/mL)。太平洋紫杉醇係以注射用生理食鹽水(大塚製藥)使用時調製為1mg/mL。
3)細胞
來自人類肺癌之Calu 6(HTB-56)係由American Type Culture Collection(VA,USA)獲得。細胞係使用添加有10%之經加熱不活化的胎牛血清(FBS)的RPMI1640培養基，於37℃、5% CO2之條件下培養。將使用胰蛋白酵素回收之細胞以PBS懸濁為6x107 cells/mL，與等量之Matrigel(商標)Basement Membrane Matrix(Becton Dickinson Co.製，Bedford,MA,USA)混合。
4)動物
5週齡之雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxnlnu/CrlCrlj(nu/nu))係由日本Charles River公司(日本、神奈川)購入。動物係於試驗期間持續於特定病原體未感染(SPF)條件下給予標準的飼料與飲水進行飼養。將經培養之細胞以 3x106 cells/0.1 mL/mouse移植於裸鼠之背部皮下。將腫瘤體積(短徑x[長徑]2 x 0.5)成為126.1至299.0 mm3之裸鼠以群間及群內之腫瘤體積變異為小的方式使用SAS分群。
5)藥物投與及測定
以投與初日為Day1，進行觀察至Day83為止。將各自之群(n=6)如以下方式處理。FK330係以5mL/kg進行強制經口投與，太平洋紫杉醇係以10mL/kg進行尾靜脈內投與。太平洋紫杉醇係進行由Day1至Day7之連續投與後停藥24日(1循環)。PTX之第2循環及第3循環之投與中，分別由Day31或Day60起連續投與6日。
對照群：未處置
FK330單獨投與群：FK330 100mg/kg bid(200mg/kg/day、由實驗開始至實驗結束時連續投與)
太平洋紫杉醇單獨投與群：太平洋紫杉醇10mg/kg/day(1循環係7日連續投與、2循環以後係6日連續投與)
併用群：FK330 100 mg/kg/kg bid(200mg/kg/day、由實驗開始至實驗結束時連續投與)+太平洋紫杉醇10 mg/kg/day(1循環係7日連續投與、2循環以後係6日連續投與)
FK330係1日2次、以6至8小時間隔進行強制經口投與(5mL/kg)。太平洋紫杉醇係於FK330投與後2~4 小時後由尾靜脈進行靜脈內大量輸注投與(10mL/kg)。
每3~4日測定體重與使用數位游標卡尺測定腫瘤直徑。腫瘤體積係由(短徑x[長徑]2 x 0.52)之橢圓體積的計算式算出。
6)統計解析
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示。試驗期間中，將觸診界限以下判定為完全消失(CR)、測定值為0。關於各測定時之腫瘤體積的實測值，進行單獨投與群與併用群中無對應之2群間之差的檢定(Student’s t-test)，將未達5%判斷為具有有意義的差。數據處理係使用SAS。
7)結果
探討FK330在太平洋紫杉醇複數循環投與時之併用作用。結果如圖7所示。於人類非小細胞肺癌(Calu-6)荷癌小鼠中，隨著複數循環投與，觀察到太平洋紫杉醇之抗腫瘤效果有減弱之傾向。FK330係顯著地增強太平洋紫杉醇之抗腫瘤效果，於Day29之對太平洋紫杉醇單獨群的腫瘤體積減少率為57.6%(P<0.01)、於Day60之對太平洋紫杉醇單獨群的腫瘤體積減少率為86.1%(P<0.01)、於Day83之對太平洋紫杉醇單獨群的腫瘤體積減少率為87.6%(P<0.01)。
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)來表示 (n=6)。**：P<0.01表示將併用群與化學療法劑單獨投與群比較時之有意義差(Student’s t-test)。
8)結論
於人類非小細胞肺癌(Calu-6)荷癌小鼠中，太平洋紫杉醇之抗腫瘤效果係依隨著循環而減弱。另一方面，FK330之併用，會增強複數循環投與之太平洋紫杉醇之抗腫瘤效果，顯著地抑制腫瘤之再增殖。此結果暗示了FK330會改善複數循環處置之紫杉烷系藥劑之抗腫瘤效果的減弱。
實施例3
被測物質之調製、及細胞之調整係與實施例2同樣方式進行。
1)動物
5週齡之雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxnlnu/CrlCrlj(nu/nu))係由日本Charles River公司(日本、神奈川)購入。動物係於試驗期間持續於特定病原體未感染(SPF)條件下給予標準的飼料與飲水進行飼養。將經培養之細胞以3x106 cells/0.1 mL/mouse移植於裸鼠之背部皮下。將腫瘤體積(短徑x[長徑]2 x 0.5)成為123.3至274.4 mm3之裸鼠以群間及群內之腫瘤體積變異為小的方式使用SAS分群。
2)藥物投與及測定
以投與初日為Day0，進行觀察至Day59為止。將各自之群(n=5)如以下方式處理。FK330係以5mL/kg進行強制經口投與，太平洋紫杉醇係以10mL/kg進行尾靜脈內投與。太平洋紫杉醇係進行由Day0至Day5之連續投與後設定21日之停藥期間，以此為1循環，投與至2循環為止。
對照群：未處置
太平洋紫杉醇單獨投與群：太平洋紫杉醇10mg/kg/day(1循環係Day0起6日連續投與、2循環係Day27起6日連續投與)
併用群：FK330 30 mg/kg bid(60 mg/kg/day)+太平洋紫杉醇10 mg/kg/day(1循環係Day0起6日連續投與、2循環係Day27起6日連續投與)
FK330 60 mg/kg bid(120 mg/kg/day)+太平洋紫杉醇10 mg/kg/day(1循環係Day0起6日連續投與、2循環係Day27起6日連續投與)
FK330 100 mg/kg bid(200 mg/kg/day)+太平洋紫杉醇10 mg/kg/day(1循環係Day0起6日連續投與、2循環係Day27起6日連續投與)
FK330係1日2次、以6至8小時間隔進行強制經口投與(5mL/kg)。太平洋紫杉醇係於FK330投與後2~4 小時後由尾靜脈進行靜脈內大量輸注投與(10mL/kg)。
每3~4日測定體重與使用數位游標卡尺測定腫瘤直徑。腫瘤體積係由(短徑x[長徑]2 x 0.52)之橢圓體積的計算式算出。
3)結果
探討FK330之太平洋紫杉醇抗腫瘤效果增強作用的用量依存性之結果如圖8所示。結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)來表示(n=4至5)。試驗結束時(Day59)之腫瘤體積，太平洋紫杉醇單獨群為1640.1±902.8 mm3、FK330 30mg/kg bid併用群為955.9±231.0 mm3、FK330 60mg/kg bid併用群為706.2±256.1 mm3、FK330 100mg/kg bid併用群為297.9±101.4 mm3，FK330係用量依存性地增強了太平洋紫杉醇之抗腫瘤效果(對太平洋紫杉醇單獨群之腫瘤體積減少率：FK330 30mg/kg bid為41.7%、FK330 60mg/kg bid為56.9%、FK330 100mg/kg bid為81.8%)。
4)結論
FK330之併用，係用量依存性地增強了太平洋紫杉醇之抗腫瘤效果。
實施例4
被測物質之調製、及細胞之調整係與實施例2同樣方 式進行。
1)動物
5週齡之雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxnlnu/CrlCrlj(nu/nu))係由日本Charles River公司(日本、神奈川)購入。動物係於試驗期間持續於特定病原體未感染(SPF)條件下給予標準的飼料與飲水進行飼養。將經培養之細胞以3x106 cells/0.1 mL/mouse移植於裸鼠之背部皮下。將腫瘤體積(短徑x[長徑]2 x 0.5)成為142.1至323.7 mm3之裸鼠以群間及群內之腫瘤體積變異為小的方式使用SAS分群。
2)藥物投與及測定
以投與初日為Day0，進行觀察至Day55為止。將各自之群(n=5或6)如以下方式處理。FK330係以5mL/kg進行強制經口投與，太平洋紫杉醇係以10mL/kg進行尾靜脈內投與。太平洋紫杉醇係於Day0至Day5之連續投與後設定21日之停藥期間，由Day27至Day31連續投與5日。
對照群：未處置
太平洋紫杉醇單獨投與群：太平洋紫杉醇10mg/kg/day(Day0至Day5及Day27至Day31)
併用群：同時投與FK330 100 mg/kg bid(200 mg/kg/day)+太平洋紫杉醇10 mg/kg/day(Day0至Day5及Day27至 Day31)
順次投與FK330 100 mg/kg bid(200 mg/kg/day)+太平洋紫杉醇10 mg/kg/day(Day0至Day5及Day27至Day31)
連續投與FK330 100 mg/kg bid(200 mg/kg/day)+太平洋紫杉醇10 mg/kg/day(Day0至Day5及Day27至Day31)
FK330係1日2次、以6至8小時間隔進行強制經口投與(5mL/kg)。同時投與時FK330係於太平洋紫杉醇之投與日(Day0至Day5及Day27至Day31)、連續投與時係於太平洋紫杉醇投與日後之停藥日(Day6至Day26及Day32至Day55)、連續投與係由實驗開始日至實驗結束日為止每日投與。太平洋紫杉醇係由FK330投與後2至4小時後由尾靜脈進行靜脈內大量輸注投與(10mL/kg)。
每3至4日測定體重與使用數位游標卡尺測定腫瘤直徑。腫瘤體積係以(短徑x[長徑]2 x 0.52)之橢圓體積的計算式算出。
3)結果
人類非小細胞肺癌(Calu-6)荷癌小鼠中，探討太平洋紫杉醇併用中之FK330投與時機的結果如圖9所示。結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)來表示(n=5或6)。
試驗期間中、將觸診界限以下判定為完全消失 (CR)、測定值為0。試驗結束時(Day55)之腫瘤體積，太平洋紫杉醇單獨群為1229.2±289.6 mm3、太平洋紫杉醇與FK330之同時投與為559.8±161.8 mm3、FK330之依序投與為1150.9±264.9 mm3、FK330之連續投與為168.5±66.0 mm3，對太平洋紫杉醇單獨群之腫瘤體積減少率分別為54.5%、6.4%及86.3%。
4)結論
暗示了FK330之投與時機係由紫杉烷系藥劑之投與開始日起於循環期間中連日投與時併用效果最高。
實施例5
被測物質之調製係與實施例2同樣方式進行。
1)細胞
來自人類胃癌之NCI-N87(CRL-5822)係使用由American Type Culture Collection(VA,USA)獲得者、MKN-28(JCRB0253)係使用由醫藥基盤研究所(HSRRB)獲得者、AZ-521(RCB2087)係使用由理研BRC獲得者。NCI-N87及MKN-28細胞係使用添加有10%之經加熱不活化的胎牛血清(FBS)之RPMI1640培養基、AZ-521係使用含有10%之經加熱不活化的FBS之DMEM培養基，於37℃、5% CO2之條件培養。將使用胰蛋白酵素回收之細胞以PBS懸濁為6x107 cells/mL，與等量之Matrigel(商標)Basement Membrane Matrix (Becton Dickinson Co.製，Bedford,MA,USA)混合。
2)動物
5週齡之雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxnlnu/CrlCrlj(nu/nu))係由日本Charles River公司(日本、神奈川)購入。動物係於試驗期間持續於特定病原體未感染(SPF)條件下給予標準的飼料與飲水進行飼養。將經培養之細胞以3x106 cells/0.1 mL/mouse移植於裸鼠之背部皮下。AZ-521荷癌小鼠中係將腫瘤體積(短徑x[長徑]2 x 0.5)成為386.6至766.6 mm3之裸鼠、MKN-28荷癌小鼠中係將腫瘤體積成為186.0至319.2 mm3之裸鼠、NCI-N87荷癌小鼠中係將腫瘤體積成為192.1至364.2之裸鼠以群間及群內之腫瘤體積變異為小的方式使用SAS分群。
3)藥物投與及測定
以投與初日為Day0，AZ-521荷癌小鼠中係進行觀察至Day46、MKN-28荷癌小鼠中係進行觀察至Day84、NCI-N87荷癌小鼠中係進行觀察至Day56。將各自之群(n=5或6)如以下方式處理。FK330係以5mL/kg進行強制經口投與，太平洋紫杉醇係以10mL/kg進行尾靜脈內投與。太平洋紫杉醇係以下述條件進行複數循環投與。
對照群：未處置
FK330單獨投與群：FK330 100mg/kg bid(200mg/kg/day、由實驗開始至實驗結束時連續投與)
太平洋紫杉醇單獨投與群：太平洋紫杉醇10mg/kg/day
AZ-521荷癌小鼠：將太平洋紫杉醇由Day0~Day5進行6日連續投與後設置22日之停藥期間(1循環)，將太平洋紫杉醇由Day28~Day32進行5日連續投與(2循環)。
MKN-28荷癌小鼠：將太平洋紫杉醇由Day0至Day5進行6日連續投與後，設置22日之停藥期間後，由Day28至Day32進行5日連續投與，設置23日之停藥期間(2循環)。進而，進行由Day56至Day60之5日連續投與(3循環)。
NCI-N87荷癌小鼠：將太平洋紫杉醇由Day0至Day5進行6日連續投與後，設置26日之停藥期間後，進行由Day32至Day36之5日連續投與(2循環)。
併用群：FK330 100 mg/kg bid(200mg/kg/day、由實驗開始至實驗結束時連續投與)+太平洋紫杉醇10 mg/kg/day
FK330係1日2次、以6至8小時間隔進行強制經口投與(5mL/kg)。太平洋紫杉醇係於FK330投與後2至4小時後由尾靜脈進行靜脈內大量輸注投與(10mL/kg)。
每3至4日測定體重與使用數位游標卡尺測定腫瘤直徑。腫瘤體積係以(短徑x[長徑]2 x 0.52)之橢圓體積的計算式算出。
4)統計解析
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示。關於各測定時之腫瘤體積的實測值，進行單獨投與群與併用群中無對應之2群間之差的檢定(Student’s t-test)，將未達5%判斷為具有有意義的差。數據處理係使用Graphpad Prism version 5.03。
5)結果
於人類胃癌(AZ-521、MKN-28、NCI-N87)荷癌小鼠中，探討FK330與太平洋紫杉醇之併用效果的結果係如圖10至圖12所示。亦即，分別將AZ-521荷癌小鼠中FK330與太平洋紫杉醇之併用效果示於圖10、MKN-28荷癌小鼠中之併用效果示於圖11、NCI-N87荷癌小鼠中之併用效果示於圖12。與人類非小細胞肺癌荷癌小鼠同樣地、FK330增強了太平洋紫杉醇之抗腫瘤效果。AZ-521荷癌小鼠中，實驗最終日之太平洋紫杉醇單獨群隻腫瘤體積為3285.4±359.4 mm3、太平洋紫杉醇與FK330之併用群為795.0±223.3 mm3、相對於太平洋紫杉醇單獨群，腫瘤體積減少了75.8%(P<0.01)。MKN-28以及NCI-N87荷癌小鼠中，FK330亦增強了太平洋紫杉醇之抗腫瘤效果(MKN-28荷癌小鼠：454.1±147.5 mm3 vs 164.8±18.5 mm3、63.7%減少、P=0.08、NCI-N87荷癌小鼠：492.0±48.5 mm3 vs 223.9±85.1 mm3、54.5%減少、P<0.03)。
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)來表示(n=5或6)。P值顯示將併用群與化學療法劑單獨投與群比較時的有意義差(Student’s t-test)。
6)結論
FK330之併用，可觀察到在人類胃癌荷癌模式中亦會增強太平洋紫杉醇之抗腫瘤效果，特別是觀察到改善了複數循環處置之太平洋紫杉醇抗腫瘤效果之減弱的效果。
實施例6 1)被測物質
FK330之用量係以單質(非水合物)重量換算來表示。太平洋紫杉醇係由LC Laboratories公司(Woburn,MA,USA)購入，作為太平洋紫杉醇使用。
2)被測物質之調製及投與
FK330係懸濁於0.5%甲基纖維素水溶液(0.5% MC)(20mg/mL)而經口投與。太平洋紫杉醇係以乙醇/顯色團溶液(以1：1混合)調製10 mg/mL之儲備溶液後，在欲投與之前以注射用生理食鹽水(大塚製藥)稀釋為1mg/mL，進行尾靜脈內投與。
3)細胞
來自人類乳癌之MDA-MB-231(HTB-26)係由American Type Culture Collection(VA,USA)獲得。細胞係使用添加有10%之經加熱不活化之胎牛血清(FBS)的DMEM培養基，於37℃、5% CO2之條件培養。將使用胰蛋白酵素回收之細胞以PBS懸濁為6x107 cells/mL，與等量之Matrigel(商標)Basement Membrane Matrix(Becton Dickinson公司，Bedford,MA,USA)混合。
4)動物
5週齡之雌性裸鼠(CAnN Cg-Foxnlnu/CrlCrlj(nu/nu))係由日本Charles River公司(日本、神奈川)購入。動物係於試驗期間持續於特定病原體未感染(SPF)條件下給予標準的飼料與飲水進行飼養。將經培養之細胞以3x106 cells/0.1 mL/mouse移植於裸鼠之背部皮下。將腫瘤體積(短徑x[長徑]2 x 0.5)成為148.7至312.5 mm3之裸鼠以群間及群內之腫瘤體積變異為小的方式使用SAS分群。
5)藥物投與及測定
以投與初日為Day1，進行觀察至Day66為止。將各自之群(n=6)如以下方式處理。FK330係以5mL/kg進行強制經口投與，太平洋紫杉醇係以10mL/kg進行尾靜脈內投與。太平洋紫杉醇係由Day1至Day4進行4日連續投與後，進行25日之停藥(1循環)。PTX之第2循環的投與，係由Day30起4日連續投與。
對照群：未處置
FK330單獨投與群：FK330 100 mg/kg bid(200 mg/kg/day、由實驗開始至實驗結束時連續投與)
太平洋紫杉醇單獨投與群：太平洋紫杉醇10 mg/kg/day(各循環係4日連續投與)
併用群：FK330 100 mg/kg/kg bid(200 mg/kg/day、由實驗開始至實驗結束時連續投與)+太平洋紫杉醇10 mg/kg/day(各循環係4日連續投與)
FK330係1日2次、以6至8小時間隔進行強制經口投與(5 mL/kg)。太平洋紫杉醇係於FK330投與後1~4小時後，由尾靜脈進行靜脈內大量輸注投與(10 mL/kg)。
每周2次測定體重與使用數位游標卡尺測定腫瘤直徑。腫瘤體積係以(短徑x[長徑]2 x 0.52)之橢圓體積的計算式算出。
6)統計解析
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示。試驗期間中、將觸診界限以下判定為完全消失(CR)、測定值為0。使用各測定時之腫瘤體積的實測值，針對單獨投與群與併用群之比較，進行無對應之2群間之差的檢定(Student’s t-test)。將未達5%判定為具有有意義的差。數據處理係使用Graphpad Prism version 5.03。
7)結果
探討人類乳癌荷癌小鼠中FK330與太平洋紫杉醇之併用效果的結果係如圖13所示。人類乳癌(MDA-MB-231)荷癌小鼠中，FK330會顯著地增強太平洋紫杉醇之抗腫瘤效果，於Day28之對太平洋紫杉醇單獨群的腫瘤體積減少率為59.6%(P<0.01)、於Day66之對太平洋紫杉醇單獨群之腫瘤體積減少率為82.8%(P<0.01)。
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示(n=6)。**：P<0.01表示將併用群與太平洋紫杉醇單獨投與群時之有意義的差(Student’s t-test)。
8)結論
於人類乳癌(MDA-MB-231)荷癌小鼠中，FK330之併用會增強複數循環投與之太平洋紫杉醇的抗腫瘤效果，顯著地抑制腫瘤之再增殖。
實施例7 1)被測物質
NO供給體之S-nitroso-N-acetyl-D,L-penicillamine(SNAP)，係使用由Cayman Chemical公司(Ann Arbor,MI,USA)購入者。微管蛋白聚合測定套組係由Cytoskeleton公司(Denver,CO,USA)購入而使用。太平洋紫杉醇係使用與測定套組所附之太平洋紫杉醇作為太平洋紫杉醇。 歐洲紫杉醇係由Sigma-Aldrich公司(St.Louis,MO,USA)購入，作為歐洲紫杉醇使用。
2)試驗方法
螢光法之微管蛋白聚合反應測定，係遵照套組之說明書實施。亦即，將精製豬腦微管蛋白(最終濃度2 mg/mL)與SNAP(最終濃度200或500μmol/L)於套組所附之緩衝液中，於室溫放置15分鐘以上。接著將太平洋紫杉醇(最終濃度3μmol/L)或歐洲紫杉醇(最終濃度1μmol/L)、及GPT(最終濃度1 mmol/L)加入此緩衝液，於37度放置60分鐘。該放置當中，以微量盤式分析儀(SpectraMax公司，Molecular Devices公司，Sunnyvale,CA,USA)每1分鐘測定螢光強度(測定波長：激發350 nm/螢光435 nm)。螢光強度之值，係使用相當於平衡穩定期之反應開始60分鐘後的值，以對SNAP及紫杉烷未處置群之百分率表示，以施行3次之平均值為其值。
3)統計解析
結果係以獨立5次實驗之平均值(Mean)±標準誤差(SEM)來表示。太平洋紫杉醇或歐洲紫杉醇處置群與未處置群之比較，係進行無對應之2群間之差的檢定(Student’s t-test)。紫杉烷系藥劑處置及未處置之SNAP未處置群(對照群)與SNAP處置群(200及500μmol/L)的比較，係進行Dunnett's多重比較檢定。未達5%則判定 具有有意義的差。數據處理係使用Graphpad Prism version 5.03。
4)結果
分別將SNAP對太平洋紫杉醇誘發微管蛋白聚合作用之抑制作用之代表例、及微管蛋白聚合開始後60分鐘之總計值示於圖14之A)及B)、將SNAP對歐洲紫杉醇誘發微管蛋白聚合之抑制作用的代表例、及微管蛋白聚合開始後60分鐘之總計值示於圖15之A)及B)。太平洋紫杉醇或歐洲紫杉醇，相較於各紫杉烷未處置組，各為152.7%(P<0.05)及184.1%(P<0.001)有意義地促進微管蛋白聚合。NO供給體之SNAP，有意義地抑制了被太平洋紫杉醇及歐洲紫杉醇促進之微管蛋白聚合反應。又，SNAP亦有意義地抑制了自然引起之微管蛋白聚合反應。
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示(n=5)。#：P<0.05及###：P<0.001表示將太平洋紫杉醇或歐洲紫杉醇處置群與各紫杉烷藥劑未處置群比較時的有意義的差(Student’s t-test)。$：P<0.05及$$$：P<0.001，係表示紫杉烷未處置時SNAP處置群相對於SNAP未處置群(對照群)之有意義的差(Dunnett's多重比較檢定)。*：P<0.05、**：P<0.01及***：P<0.001表示紫杉烷處置時，SNAP處置群相對於SNAP未處置群(對照群)之有意義的差(Dunnett's多重比較檢定)。
5)結論
NO供給體會直接抑制被太平洋紫杉醇及歐洲紫杉醇促進之微管蛋白聚合反應。
實施例8 1)被測物質
FK330之用量係以單質(非水合物)重量換算來表示。太平洋紫杉醇注射劑(太平洋紫杉醇注射液「Sawai」)係由澤井製藥股份有限公司購入，作為太平洋紫杉醇使用。大鼠抗小鼠F4/80抗原單株抗體、兔子抗iNOS多株抗體、及兔子抗硝基酪胺酸抗體，係分別使用由AbD Serotec公司(Oxford,UK)、Santa Cruz Biotechnology公司(Santa Cruz,CA,US)、及Millipore公司(Billerica,MA,USA)購入者。
2)被測物質之調製及投與
FK330係懸濁於0.5%甲基纖維素水溶液(0.5% MC)(20mg/mL)而經口投與。太平洋紫杉醇係以注射用生理食鹽水(大塚製藥)在使用時調製為1mg/mL。
3)細胞
來自人類肺癌之Calu-6(HTB-56)係由American Type Culture Collection(VA,USA)獲得。細胞係使用添加有10%之經加熱不活化的胎牛血清(FBS)的RPMI1640 培養基，於37℃、5% CO2之條件下培養。將使用胰蛋白酵素回收之細胞以PBS懸濁為6x107 cells/mL，與等量之Matrigel(商標)Basement Membrane Matrix(Becton Dickinson公司，Bedford,MA,USA)混合。
4)動物
5週齡之雄性裸鼠(CAnN Cg-Foxnlnu/CrlCrlj(nu/nu))係由日本Charles River公司(日本、神奈川)購入。動物係於試驗期間持續於特定病原體未感染(SPF)條件下給予標準的飼料與飲水進行飼養。將經培養之細胞以3x106 cells/0.1 mL/mouse移植於裸鼠之背部皮下。將腫瘤體積(短徑x[長徑]2 x 0.5)成為136.8至248.5 mm3之裸鼠以群間及群內之腫瘤體積變異為小的方式使用SAS分群。
5)藥物投與
藥物投與係由投與初日(Day 1)開始。將各自之群(n=5)如以下方式處理。FK330係以5mL/kg由Day1至Day6強制經口投與，太平洋紫杉醇係以10mL/kg由Day1至Day5進行尾靜脈內投與。
對照群：未處置
FK330單獨投與群：FK330 100 mg/kg bid(200 mg/kg/day、Day 1至Day 6)
太平洋紫杉醇單獨投與群：太平洋紫杉醇10 mg/kg/day(Day 1至Day 5)
併用群：FK330 100 mg/kg/kg bid(200 mg/kg/day、Day 1至Day 6)+太平洋紫杉醇10 mg/kg/day(Day 1至Day 5)
FK330係1日2次，以6至8小時間隔進行強制經口投與(5 mL/kg)。太平洋紫杉醇係於FK330投與後1~4小時後由尾靜脈進行靜脈內大量輸注投與(10 mL/kg)。
6)組織固定及冷凍切片作成
於Day 6由小鼠採取腫瘤組織。以4%多聚甲醛-磷酸緩衝液(和光純藥工業股)，於4℃進行浸潤固定12小時。使用組織固定度10%、15%及20%之蔗糖/磷酸緩衝液，遵照一般方法，於4℃階段性地進行蔗糖取代。取代結束後，於O.C.T.Compound(Toronto Research Chemicals公司，Toronto,Canada)中包埋癌組織，以乾冰/丙酮製成冷凍切片，於-80℃保存。
7)免疫化學染色及影像解析
以冷凍切片機(Sakura-Finetek japan股份有限公司)製成5μm薄度之冷凍切片，風乾。將經4%多聚甲醛-磷酸緩衝液乾燥之冷凍切片洗淨後，為了使內生性過氧化酵素失活，係以0.3%過氧化氫/甲醇將切片處理30分鐘。小鼠巨噬細胞，iNOS及硝基酪胺酸染色係如以下順序進行。關於iNOS及硝基酪胺酸染色，係在免疫化學染色進行 前，藉由微波(3分/500 W)進行抗原賦活。
小鼠巨噬細胞染色：一次抗體處理：大鼠抗小鼠F4/80抗原單株抗體(1：200稀釋)，於室溫放置60分鐘。
二次抗體處理：生物素標記抗大鼠IgG抗體(1：100稀釋，vector laboratories公司)於室溫放置30分鐘。
檢測系統：使用VECTASTAIN ABC kit(Vector Laboratories公司)，將切片於室溫放置30分鐘。
顯色：使用3,3'-二胺基聯苯胺四鹽酸鹽(DAB,Dako公司)試藥，於室溫處理1分鐘。
iNOS染色：一次抗體處理：兔子抗iNOS多株抗體(1：500稀釋)於4℃放置一晝夜。
檢測系統：使用EnVision(DAKO；)，將切片於室溫放置30分鐘。
顯色：使用DAB試藥，於室溫處理1分鐘。
硝基酪胺酸染色：一次抗體處理：兔子抗硝基酪胺酸抗體(1：500稀釋)於4℃放置一晝夜。
檢測系統：使用EnVision(DAKO；)，將切片於室溫放置30分鐘。
顯色：使用DAB試藥，於室溫處理1分鐘。
經染色之影像(F4/80染色影像及iNOS影像為200倍、硝基酪胺酸染色影像為400倍)係透過顯微鏡載入電 腦，藉由搭載了WinROOF(version 5.7)之影像解析系統(三谷商事股份有限公司)來解析。值係以單位總面積之陽性面積的比(%)來表示。各切片係各計測5個視野，以其平均值作為值。
8)統計解析
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示。關於腫瘤組織內iNOS蛋白表現、巨噬細胞(F4/80)浸潤、及硝基酪胺酸(NO之主要最終生成物)之各測定值、關於對照群與太平洋紫杉醇單獨群、FK330單獨群、或太平洋紫杉醇及FK330併用群之比較、以及太平洋紫杉醇單獨群與太平洋紫杉醇及FK330併用群之比較，進行無對應之2群間之差的檢定(Student’s t-test)。將未達5%判斷為具有有意義的差。數據處理係使用Graphpad Prism version 5.03。
9)結果
人類肺癌細胞株Calu-6荷癌小鼠中，對於太平洋紫杉醇單獨及FK330併用時之腫瘤組織內iNOS蛋白表現、巨噬細胞(F4/80)浸潤、及硝基酪胺酸(NO之主要最終生成物)表現之作用，係如圖16至18所示。對照群之腫瘤組織內，幾乎觀察不到iNOS陽性細胞以及巨噬細胞，硝基酪胺酸(NO之最終生成物)亦低。另一方面，藉由太平洋紫杉醇之投與，顯著地觀察到巨噬細胞對腫瘤組織 內之浸潤。又，腫瘤組織內iNOS蛋白表現亦顯著地亢進，結果，腫瘤組織內硝基酪胺酸量亦增加。iNOS阻礙劑之FK330之併用，其作用雖不及於腫瘤內巨噬細胞浸潤及iNOS蛋白表現，但抑制了硝基酪胺酸產生。
結果係以平均值(Mean)±標準誤差(SEM)表示(n=5)。***：P<0.001，係表示與對照群比較時之有意義的差(Student’s t-test)。
10)結論
人類肺癌(Calu-6)荷癌小鼠中，太平洋紫杉醇會誘發巨噬細胞對腫瘤組織內之浸潤、及腫瘤組織內iNOS蛋白表現，結果，會誘發腫瘤內NO產生。iNOS阻礙劑之FK330之併用，會抑制被太平洋紫杉醇誘發之來自iNOS的NO產生。
[產業上之可利用性]
以與本發明之紫杉烷系抗腫瘤劑組合而併用投與來使用為特徵之含有FK330或其鹽作為有效成分之癌治療用組成物，藉由與紫杉烷系抗腫瘤劑之併用，可得到高的癌治療效果，故特別是有用於已知會對現存之紫杉烷系抗腫瘤劑適應之各種癌的治療。適應之癌為使用了紫杉烷系抗腫瘤劑之固態癌及淋巴瘤，作為其一態樣，可列舉乳癌、子宮體癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、胃(胃腺)癌、非小細胞肺癌、胰臟癌、頭頸部扁平上皮癌、食道癌、膀胱 癌、黑色素瘤、大腸癌、腎細胞癌、非何杰金氏淋巴癌等。
〔圖1〕圖1為顯示實施例1中，FK330與阿黴素之單獨或併用投與之抗腫瘤效果的圖。Dox表示阿黴素。
〔圖2〕圖2為顯示實施例1中，FK330與吉西他濱(gemcitabine)之單獨或併用投與之抗腫瘤效果的圖。Gem表示吉西他濱。
〔圖3〕圖3為顯示實施例1中，FK330與愛萊諾迪肯(irinotecan)之單獨或併用投與之抗腫瘤效果的圖。Iri表示愛萊諾迪肯。
〔圖4〕圖4為顯示實施例1中，FK330與卡鉑定之單獨或併用投與之抗腫瘤效果的圖。CBDCA表示卡鉑定。
〔圖5〕圖5為顯示實施例1中，FK330與太平洋紫杉醇之單獨或併用投與之抗腫瘤效果的圖。PTX表示太平洋紫杉醇。
〔圖6〕圖6為顯示實施例1中，FK330與歐洲紫杉醇之單獨或併用投與之抗腫瘤效果的圖。Doce表示歐洲紫杉醇。
〔圖7〕圖7為顯示人類非小細胞肺癌(Calu-6)荷癌小鼠中，探討FK330之太平洋紫杉醇複數循環投與時之抗腫瘤效果增強作用的實施例2結果圖。PTX表示太平洋 紫杉醇。
〔圖8〕圖8為顯示人類非小細胞肺癌(Calu-6)荷癌小鼠中，探討FK330之太平洋紫杉醇抗腫瘤效果之增強作用的用量依存性之實施例3的結果圖。PTX表示太平洋紫杉醇。
〔圖9〕圖9為顯示人類非小細胞肺癌(Calu-6)荷癌小鼠中，探討FK330之投與時機之實施例4的結果圖。PTX表示太平洋紫杉醇。
〔圖10〕圖10係顯示人類胃癌(AZ-521)荷癌小鼠中，探討FK330所致之太平洋紫杉醇抗腫瘤效果增強作用之實施例5的結果圖。PTX表示太平洋紫杉醇。
〔圖11〕圖11係顯示人類胃癌(MKN-28)荷癌小鼠中，探討FK330所致之太平洋紫杉醇抗腫瘤效果增強作用之實施例5的結果圖。PTX表示太平洋紫杉醇。
〔圖12〕圖12係顯示人類胃癌(NCI-N87)荷癌小鼠中，探討FK330所致之太平洋紫杉醇抗腫瘤效果增強作用之實施例5的結果圖。PTX表示太平洋紫杉醇。
〔圖13〕圖13係顯示人類乳癌細胞(MDA-MB-231)荷癌小鼠中，探討FK330所致之太平洋紫杉醇抗腫瘤效果增強作用之實施例6的結果圖。PTX表示太平洋紫杉醇。
〔圖14〕圖14係顯示探討NO供給體之SNAP對紫杉烷誘發微管蛋白聚合作用之抑制作用的實施例7之結果圖。A)及B)分別顯示SNAP對太平洋紫杉醇誘發微管 蛋白聚合之抑制作用的代表例與微管蛋白聚合開始後60分鐘之總計值。PTX表示太平洋紫杉醇、SNAP表示S-nitroso-N-acetyl-D,L-penicillamine。
〔圖15〕圖15係顯示探討NO供給體之SNAP對紫杉烷誘發微管蛋白聚合作用之抑制作用的實施例7之結果圖。A)及B)分別顯示SNAP對歐洲紫杉醇誘發微管蛋白聚合之抑制作用的代表例與微管蛋白聚合開始後60分鐘之總計值。DTX表示歐洲紫杉醇、SNAP表示S-nitroso-N-acetyl-D,L-penicillamine。
〔圖16〕圖16係顯示人類肺癌細胞株Calu-6荷癌小鼠中，探討太平洋紫杉醇單獨及與FK330併用時對腫瘤組織內iNOS蛋白表現之作用的實施例8之結果圖。PTX表示太平洋紫杉醇。
〔圖17〕圖17係顯示人類肺癌細胞株Calu-6荷癌小鼠中，探討太平洋紫杉醇單獨及與FK330併用時對腫瘤組織內巨噬細胞(F4/80)浸潤之作用的實施例8之結果圖。PTX表示太平洋紫杉醇。
〔圖18〕圖18係顯示人類肺癌細胞株Calu-6荷癌小鼠中，探討太平洋紫杉醇單獨及與FK330併用時對腫瘤組織內硝基酪胺酸(NO之主要最終生成物)表現之作用的實施例8之結果圖。PTX表示太平洋紫杉醇。

Claims (19)

  1. 一種含有N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基]-N-[2-側氧基-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧基}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙胺酸醯胺或其鹽作為有效成分之癌治療用組成物，其特徵在於與由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑組合而併用投與來使用。
  2. 如申請專利範圍第1項之組成物，其係與太平洋紫杉醇或歐洲紫杉醇組合而併用投與來使用。
  3. 如申請專利範圍第1項之組成物，其係與太平洋紫杉醇組合而併用投與來使用。
  4. 如申請專利範圍第1項之組成物，其係與歐洲紫杉醇組合而併用投與來使用。
  5. 如申請專利範圍第1至4項中任一項之組成物，其係包含60~1200mg/日之N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基]-N-[2-側氧基-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧基}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙胺酸醯胺或其鹽之經口投與用組成物。
  6. 如申請專利範圍第5項之組成物，其係包含60~200 mg/日之N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基]-N-[2-側氧基-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧基}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙胺酸醯胺或其鹽之經口投與用組成物。
  7. 如申請專利範圍第1至6項中任一項之組成物，其 係進一步與由鉑系抗腫瘤劑、蒽環系抗腫瘤劑、環磷醯胺、氟尿嘧啶、曲妥珠單株抗體及截瘤達中選擇之1者以上之抗腫瘤劑組合而併用投與來使用。
  8. 如申請專利範圍第1至6項中任一項之癌治療用組成物，其係與由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑同時地、個別地、連續地、或相間隔地投與。
  9. 一種用以治療接受由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑的治療之對象之癌治療用組成物，其係含有N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基]-N-[2-側氧基-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧基}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙胺酸醯胺或其鹽作為有效成分。
  10. 如申請專利範圍第1至9項中任一項之癌治療用組成物，其係使用紫杉烷系抗腫瘤劑之癌的治療用。
  11. 如申請專利範圍第10項之癌治療用組成物，其中使用紫杉烷系抗腫瘤劑之癌為非小細胞肺癌。
  12. 如申請專利範圍第10項之癌治療用組成物，其中使用紫杉烷系抗腫瘤劑之癌為乳癌。
  13. 一種N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基]-N-[2-側氧基-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧基}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙胺酸醯胺或其鹽之使用，其係用以製造癌治療用組成物，該癌治療用組成物之特徵為與由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑組合而併用投與來使用。
  14. 一種用於治療癌之N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2- 丙烯醯基]-N-[2-側氧基-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧基}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙胺酸醯胺或其鹽，其特徵係與由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑組合而併用投與來使用。
  15. 一種癌之治療方法，其特徵為組合由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑在用於併用治療時的治療有效用量、以及、N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基]-N-[2-側氧基-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧基}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙胺酸醯胺或其鹽在用於併用治療時的治療有效用量，而投與至對象。
  16. 一種癌之治療方法，其特徵為將由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑在用於併用治療時的治療有效用量、以及、N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基]-N-[2-側氧基-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧基}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙胺酸醯胺或其鹽在用於併用治療時的治療有效用量，同時地、個別地、連續地、或相間隔地投與至對象。
  17. 一種由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑之抗腫瘤作用增強劑，其係含有N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基]-N-[2-側氧基-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧基}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙胺酸醯胺或其鹽作為有效成分。
  18. 一種由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑之抗性化抑制劑或抗性化預防劑，其係含有N2- [(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基]-N-[2-側氧基-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧基}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙胺酸醯胺或其鹽作為有效成分。
  19. 一種由紫杉烷系抗腫瘤劑中選擇之1者以上之抗腫瘤劑之感受性增強劑，其係含有N2-[(2E)-3-(4-氯苯基)-2-丙烯醯基]-N-[2-側氧基-2-(4-{[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧基}哌啶-1-基)乙基]-3-吡啶-2-基-L-丙胺酸醯胺或其鹽作為有效成分。
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