CN103717600A - 吡啶并嘧啶衍生物 - Google Patents

Abstract

式I的化合物为RON的抑制剂，并可用于治疗癌症，其中Het、R³和R⁴具有在权利要求1中表明的含义。

Description

吡啶并嘧啶衍生物

发明背景

本发明具有以下的目的：发现具有有价值的性质的新化合物，特别是可用于制备药物的那些新化合物。

本发明涉及能够抑制一种或多种激酶的吡啶并嘧啶化合物。化合物在治疗各种病症方面发现具有用途，包括癌症、败血性休克、原发性开角型青光眼(POAG)、增生、类风湿性关节炎、银屑病、动脉粥样硬化、视网膜病、骨关节炎、子宫内膜异位、慢性炎症和/或神经退行性疾病例如阿尔茨海默病。

本发明涉及化合物和化合物的用途，其中通过激酶，特别是受体酪氨酸激酶抑制、调整和/或调节信号转导，此外涉及包含这些化合物的药用组合物，和涉及化合物用于治疗激酶引起的疾病的用途。

因为蛋白激酶调节几乎每一个细胞过程，包括新陈代谢、细胞增殖、细胞分化和细胞存活，它们是用于治疗性干预各种疾病状态的有吸引力的靶标。例如，其中蛋白激酶起关键作用的细胞周期调控和血管生成，为与以下许多疾病状态有关的细胞过程：例如但不限于癌症、炎性疾病、异常血管生成和与之相关的疾病、动脉粥样硬化、黄斑变性、糖尿病、肥胖和疼痛。

特别是，本发明涉及其中通过RON (récepteur d'origine nantais)抑制、调整和/或调节信号转导起作用的化合物和化合物的用途。

通过其影响细胞调节的主要机制之一为通过细胞外信号的跨膜转导，这反过来又调节细胞内的生化途径。蛋白磷酸化代表细胞内信号自分子到分子传播，最终导致细胞反应的一个过程。这些信号转导级联被高度调节并经常重叠，如同自许多蛋白激酶及磷酸酶的存在那样很明显。蛋白的磷酸化主要发生于丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基，并且因此蛋白激酶已根据其磷酸化位点的特异性进行分类，即丝氨酸/苏氨酸激酶和酪氨酸激酶。因为在细胞内磷酸化是这样普遍存在的过程，并且因为细胞表型很大程度上受到这些通路活性的影响，目前认为许多疾病状态和/或疾病可归因于激酶级联分子成分的异常激活或功能性突变。因此，相当大的关注已致力于表征这些蛋白和能够调节其活性的化合物(综述参见：Weinstein-Oppenheimer等，Pharma. &. Therap., 2000, 88, 229-279)。

由蛋白激酶引起的疾病特征在于这种蛋白激酶的异常活性或过度活性。异常活性涉及：(1) 在通常不表达这些蛋白激酶的细胞内表达；(2) 激酶表达增加，这导致不期望的细胞增殖，例如癌症；(3) 激酶活性增加，这导致不期望的细胞增殖，例如癌症，和/或相应的蛋白激酶的过度活性。过度活性涉及编码某些蛋白激酶的基因扩增，或者产生可能与细胞增殖疾病相关的活性水平(即细胞增殖疾病的一种或多种症状的严重性随着激酶水平增加而增加)。蛋白激酶的生物利用度也可受到该激酶的一组结合蛋白的存在或不存在的影响。

S. Raeppel等在Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 20 (2010) 2745-2749中作为潜在的抗癌疗法描述了有效的RON受体酪氨酸激酶抑制剂，其对密切相关的c-Met具有残留活性或对RON和c-Met具有有效的双重抑制活性，例如N-(3-氟-4-(2-取代的-噻吩并[3,2-b]吡啶-7-氧)苯基)-1-苯基-5-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺。

英克隆系统公司(ImClone Systems) (目前为礼来公司(Eli Lilly & Co.)的部门)开发了IMC-41A10，一种人IgG1单克隆抗体，其高亲和性地结合于人RON RTK (受体酪氨酸激酶)，并阻断MSP (巨噬细胞刺激蛋白)配体结合(J.M. O'Toole等, Cancer Res. 2006, 66, 9162)。IMC-41A10在几种人异种移植肿瘤模型包括结肠、肺和胰腺癌模型中抑制肿瘤生长达50-60%。

也已经描述了RON的小分子抑制剂。这些化学实体抑制RON和密切相关的c-Met激酶两者。c-Met发现在大量的不同癌症中被激活，并且靶向Met/RON的小分子抑制剂目前在患有实体肿瘤的患者处于临床评价中：

(a) 最近的综述参见：P.C. Ma, G. Maulik, J. Christensen和R. Salgia, Cancer Metastasis Rev. 22 (2003), 第309页。

(b) C.W. Birchmeier, W. Birchmeier, E. Gherardi和G.F. Vande Woude, Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 4 (2003), 第915页。

(c) J.G. Christensen, J. Burrows和R. Salgia, Cancer Lett. 225 (2005), 第1页。

(d) S. Corso, P.M. Comoglio和S. Giordano, Trends Mol. Med. 11 (2005), 第284页。

(e) C. Boccaccio和P.M. Comoglio, Nat. Rev. Cancer 6 (2006), 第637页。

(f) B. Peruzzi和D.P. Bottaro, Clin. Cancer Res. 12 (2006), 第3657页。

(g) B.S. Knudsen和G. Vande Woude, Cur. Opin. Gen. Dev. 18 (2008), 第87页。

(h) L. Toschi和P.A. Jänne, Clin. Cancer Res. 14 (2008), 第5941页。

(i) I. Dussault和S.F. Bellon, Anti-Cancer Agents Med. Chem. 9 (2009), 第221页。

(j) N.A. Cipriani, O.O. Abidoye, E. Vokes和R. Salgia, Lung Cancer 63 (2009), 第169页。

(k) J. Porter, Expert Opin. Ther. Patents 20 (2010), 第159页。

(l) T.L. Underiner, T. Herbertz和S.J. Miknyoczki, Anti-Cancer Agents Med. Chem. 10 (2010), 第7页。

例如，Amgen 公开了c-Met/RON的有效的小分子双重抑制剂：

J. Zhang等, Cancer Res. 2008, 68, 6680;

L.Liu等, J. Med. Chem. 2008, 51, 3688。

这种具有1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-3-氧代-2-苯基-2,3-二氢-1H-吡唑-4-甲酰胺头基的基于喹啉的化合物抑制Met和RON酶两者，并且证实在小鼠的结肠直肠异种移植模型中具有抗肿瘤活性。

百时美施贵宝(Bristol-Myers Squib)描述了BMS-777607作为新的基于吡啶的Met/RON激酶超家族的选择性和口服有效的抑制剂，其已被开发进入I期临床试验(G.M. Schroeder等, J. Med. Chem. 2009, 52, 1251)。

因此，给予本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗癌症，包括实体癌，例如癌(例如肺、胰腺、甲状腺、膀胱或结肠的癌)、骨髓性疾病(例如骨髓性白血病)或腺瘤(例如绒毛状结肠腺瘤)。

肿瘤此外包括单核细胞性白血病、脑、泌尿生殖器、淋巴系统、胃、喉和肺癌，包括肺腺癌和小细胞肺癌、胰腺和/或乳腺癌。

化合物此外适合于治疗由HIV-1 (1型人类免疫缺陷病毒)引起的免疫缺陷。

癌样增生过多性疾病认为是脑癌、肺癌、鳞状上皮癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、肾癌、结肠直肠癌、乳腺癌、头癌、颈癌、食道癌、妇科癌症、甲状腺癌、淋巴瘤、慢性白血病和急性白血病。具体地讲，癌样细胞生长为代表本发明靶标的疾病。本发明因此涉及在治疗和/或预防所述疾病中作为药物和/或药物活性成分的本发明化合物，和涉及本发明的化合物用于制备用于治疗和/或预防所述疾病的药物的用途，和涉及用于治疗所述疾病的方法，所述方法包括给予需要这种给予的患者一种或多种本发明的化合物。

可显示本发明的化合物具有抗增殖作用。给与具有增生过多性疾病的患者本发明的化合物，例如以抑制肿瘤生长，减少与淋巴增生性疾病相关的炎症，抑制由于组织修复引起的移植排斥或神经损伤等。本发明化合物适合于预防或治疗目的。本文使用的术语“治疗”用于指预防疾病和治疗预先存在的病症两者。通过在明显的疾病发展之前给予本发明的化合物实现增殖/活力的预防，例如以预防肿瘤生长。或者，化合物用于通过稳定或改善患者的临床症状治疗正在发生的疾病。

宿主或患者可属于任何哺乳动物种类，例如灵长类动物，特别是人；啮齿动物，包括小鼠、大鼠和仓鼠；兔、马、牛、狗、猫等。动物模型对于试验研究是感兴趣的，提供用于治疗人疾病的模型。

特定细胞对用本发明的化合物处理的敏感性可通过体外测试来确定。一般地，细胞的培养物与各种浓度的本发明化合物一起温育足以使得活性物质诱导细胞死亡或抑制细胞增殖、细胞活力或迁移的时间段，通常在约1小时-1周之间。体外测试可使用来自活组织检测样品的培养细胞来进行。然后测定处理之后剩余的细胞量。剂量依所使用的具体化合物、具体疾病、患者状态等而定变化。治疗剂量一般相当地足以减少靶组织中不期望的细胞群体，同时保持患者的存活能力。治疗通常持续到已经发生显著减少，例如细胞负荷减少至少约50%，并可持续到基本上在体内检测不到更多不期望的细胞。

存在许多与细胞增殖和细胞死亡(细胞凋亡)的失调有关的疾病。感兴趣的病症包括但不限于以下的病症。本发明的化合物适合于治疗其中存在平滑肌细胞和/或炎性细胞的增殖和/或向血管内膜层迁移，导致经过该血管的血流受限(例如在血管内膜闭塞性损伤的情况下)的各种病症。感兴趣的闭塞性移植血管疾病包括动脉粥样硬化、移植后的冠状血管疾病、静脉移植狭窄、吻合后假体的再狭窄(perianastomatic prosthetic restenosis)、血管成形术或支架置入后再狭窄等。

另外，本发明的化合物可用于在某些现有的癌症化学疗法和放射疗法中实现相加或协同效应和/或恢复某些现有的癌症化学疗法和放射疗法的效力。

术语“方法”指用于完成给定任务的方式、手段、技术和程序，包括但不限于化学、药理学、生物学、生物化学和医学领域的从业者自已知的方式、手段、技术和程序已知或易于开发的那些方式、手段、技术和程序。

本文使用的术语“给予”指以这样一种方式使本发明的化合物与靶标激酶聚在一起的方法，在这种方式中化合物可直接即通过与激酶本身相互作用或间接即通过与激酶的催化活性所依赖的另一种分子相互作用影响激酶的酶活性。本文使用的给予可体外即在在试管中或体内即在生物体的细胞或组织中实现。

在本文中，术语“治疗”包括去掉、基本上抑制、减慢或扭转疾病或障碍的进展、基本上改善疾病或障碍的临床症状或者基本上防止出现疾病或障碍的临床症状。

在本文中，术语“预防”首先指阻止有机体获得障碍或疾病的方法。

对于用于本发明的任何化合物，治疗有效量(本文也称为治疗有效剂量)可最初自细胞培养试验进行估测。例如，剂量可在动物模型进行配制以获得包括IC50或IC100的循环浓度范围，如在细胞培养测定的那样。这种信息可用于更精确地确定人的有用剂量。初始剂量也可自体内数据进行估测。使用这些最初的指导方针，本领域的普通技术人员可确定人的有效剂量。

此外，本文描述的化合物的毒性和治疗效力可通过标准制药过程以细胞培养或实验动物进行测定，例如通过测定LD50和ED50。毒性和治疗作用之间的剂量比为治疗指数，并可表示为LD50与ED50之间的比率。呈现高治疗指数的化合物为优选的。自这些细胞培养试验和动物研究得到的数据可用于配制对于用于人不为毒性的剂量范围。这种化合物的剂量优选地在包括ED50的循环浓度范围内，该范围内伴随很少或没有毒性。剂量可依所使用的剂型和所采用的给予途径而定在该范围内变化。精确配方、给与途径和剂量可由单个医生针对患者的病症进行选择(参见例如Fingl等, 1975, 在The Pharmacological Basis of Therapeutics, 第1章, 第1页)。

剂量数量和间隔可单独进行调整，以提供足以保持治疗作用的活性化合物的血浆水平。用于口服给予的通常患者剂量在约50-2000 mg/kg/天，通常在约100-1000 mg/kg/天，优选地在约150-700 mg/kg/天和最优选地在约250-500 mg/kg/天的范围内。

优选地，通过每天给予多个剂量获得治疗有效的血清水平。在局部给予或选择性摄取的情况下，有效的局部药物浓度可能不与血浆浓度相关。本领域的技术人员将能够优化治疗有效的局部剂量而无需过度的试验。

本文描述的化合物可用于预防、治疗和/或研究的优选的疾病或障碍为细胞增殖性疾病，尤其是癌症，例如但不限于乳头状瘤、成胶质细胞瘤(blastoglioma)、卡波济氏肉瘤、黑色素瘤、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、星形细胞瘤、头癌、颈癌、皮肤癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、肺癌、子宫癌、前列腺癌、睾丸癌、结肠直肠癌、甲状腺癌、胰腺癌、胃癌、肝细胞癌、白血病、淋巴瘤、何杰金氏病和伯基特氏病。

现有技术

其它杂环衍生物及其作为抗肿瘤药物的用途已经描述于WO 2006/116713 A1中。

S.Raeppel等在Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 20 (2010) 2745-2749中作为潜在的抗癌疗法描述了的有效的RON受体酪氨酸激酶抑制剂。

发明概述

本发明涉及式I的化合物，及其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体，包括它们所有比率的混合物：

其中

.

本发明也涉及这些化合物的光学活性形式(立体异构体)、盐、对映体、外消旋体、非对映体以及水合物和溶剂化物。化合物的术语溶剂化物意思是指由于其相互吸引力形成的惰性溶剂分子加合到化合物上。溶剂化物例如为单-或二水合物或者醇化物。当然，本发明也涉及盐的溶剂化物。

术语药学上有用的衍生物意思是指例如本发明化合物的盐以及所谓的前药化合物。术语前药衍生物意思是指已经通过例如烷基或酰基、糖或寡肽修饰，并且在有机体中快速裂解形成有效的本发明化合物的式I化合物。

这些也包括如同例如在Int. J. Pharm. 115, 61-67 (1995)中描述的本发明化合物的可生物降解的聚合物衍生物。

表达“有效量”表示药物或药用活性成分的量，其在组织、系统、动物或人中引起例如研究人员或医生寻求或期望的生物或医学反应。

另外，表达“治疗有效量”表示与没有接受该量的相应受试者相比较，具有以下结果的量：

疾病、综合征、病症、不适、障碍或副作用的治疗改善、治愈、预防或消除或者还有疾病、病症或障碍的预先减少。

表达“治疗有效量”也包括对于增加正常生理功能有效的量。

本发明也涉及式I化合物的混合物，例如以1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:10、1:100或1:1000的比率存在的例如两种非对映体的混合物的用途。

这些特别优选地为立体异构体化合物的混合物。

本发明涉及式I化合物及其盐，和涉及用于制备权利要求1-12的式I化合物及其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体的方法，特征在于

a) 式II的化合物

Het-CO-L　　II

其中Het具有在权利要求1中表明的含义和

L表示Cl、Br、I或者游离的或反应性官能团修饰的OH基团，

与式III的化合物反应

其中R³和R⁴具有在权利要求1中表明的含义，

和/或式I的碱或酸转化为其一种盐。

在上下文，基团Het、R¹、R²、R³和R⁴具有对式I表明的含义，除非另外明确指明。

A表示烷基，为无支链(直链)或支链的，并具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个C原子。A优选地表示甲基，此外还有乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基，此外还有戊基、1-、2-或3-甲基丁基、1,1-、1,2-或2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、己基、1-、2-、3-或4-甲基戊基、1,1-、1,2-、1,3-、2,2-、2,3-或3,3-二甲基丁基、1-或2-乙基丁基、1-乙基-1-甲基丙基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-或1,2,2-三甲基丙基，进一步优选地例如三氟甲基。

A非常特别优选地表示具有1、2、3、4、5或6个C原子的烷基，优选地为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、三氟甲基、五氟乙基或1,1,1-三氟乙基。

A中的1或2个CH和/或CH₂基团也可用N、O或S原子和/或用-CH=CH-基团置换。A因此还表示例如2-甲氧基乙基。更优选地，A表示具有1-6个C原子的无支链或支链烷基，其中1或2个不相邻的CH和/或CH₂基团可用N和/或O原子置换和/或另外1-7个H原子可被F置换。

A'表示烷基，为无支链(直链)或支链的，并具有1、2、3、4、5或6个C原子。A优选地表示甲基，此外还有乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基，此外还有戊基、1-、2-或3-甲基丁基、1,1-、1,2-或2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、己基、1-、2-、3-或4-甲基戊基、1,1-、1,2-、1,3-、2,2-、2,3-或3,3-二甲基丁基、1-或2-乙基丁基、1-乙基-1-甲基丙基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-或1,2,2-三甲基丙基，进一步优选地例如三氟甲基。

A'优选地表示具有1、2、3或4个C原子的烷基，优选地为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基或三氟甲基。

Ar¹表示例如苯基、邻-、间-或对-甲苯基、邻-、间-或对-乙基苯基、邻-、间-或对-丙基苯基、邻-、间-或对-异丙基苯基、邻-、间-或对-叔丁基苯基、邻-、间-或对-三氟甲基苯基、邻-、间-或对-氟苯基、邻-、间-或对-溴苯基、邻-、间-或对-氯苯基、邻-、间-或对-羟基苯基、邻-、间-或对-甲氧基苯基、邻-、间-或对-甲基磺酰基苯基、邻-、间-或对-硝基苯基、邻-、间-或对-氨基苯基、邻-、间-或对-甲基氨基苯基、邻-、间-或对-二甲基氨基苯基、邻-、间-或对-氨基磺酰基苯基、邻-、间-或对-甲基氨基磺酰基苯基、邻-、间-或对-氨基羰基苯基、邻-、间-或对-羧基苯基、邻-、间-或对-甲氧基羰基苯基、邻-、间-或对-乙氧基羰基苯基、邻-、间-或对-乙酰基苯基、邻-、间-或对-甲酰基苯基、邻-、间-或对-氰基苯基，进一步优选地为2,3-、2,4-、2,5-、2,6-、3,4-或3,5-二氟苯基、2,3-、2,4-、2,5-、2,6-、3,4-或3,5-二氯苯基、2,3-、2,4-、2,5-、2,6-、3,4-或3,5-二溴苯基、2,3,4-、2,3,5-、2,3,6-、2,4,6-或3,4,5-三氯苯基、对-碘苯基、4-氟-3-氯苯基、2-氟-4-溴苯基、2,5-二氟-4-溴苯基或2,5-二甲基-4-氯苯基。

Ar¹特别优选地表示苯基。

Ar²表示例如苯基、邻-、间-或对-甲苯基、邻-、间-或对-乙基苯基、邻-、间-或对-丙基苯基、邻-、间-或对-异丙基苯基、邻-、间-或对-叔丁基苯基、邻-、间-或对-三氟甲基苯基、邻-、间-或对-氟苯基、邻-、间-或对-溴苯基、邻-、间-或对-氯苯基、邻-、间-或对-羟基苯基、邻-、间-或对-甲氧基苯基、邻-、间-或对-甲基磺酰基苯基、邻-、间-或对-硝基苯基、邻-、间-或对-氨基苯基、邻-、间-或对-甲基氨基苯基、邻-、间-或对-二甲基氨基苯基、邻-、间-或对-氨基磺酰基苯基、邻-、间-或对-甲基氨基磺酰基苯基、邻-、间-或对-氨基羰基苯基、邻-、间-或对-羧基苯基、邻-、间-或对-甲氧基羰基苯基、邻-、间-或对-乙氧基羰基苯基、邻-、间-或对-乙酰基苯基、邻-、间-或对-甲酰基苯基、邻-、间-或对-氰基苯基，进一步优选地为2,3-、2,4-、2,5-、2,6-、3,4-或3,5-二氟苯基、2,3-、2,4-、2,5-、2,6-、3,4-或3,5-二氯苯基、2,3-、2,4-、2,5-、2,6-、3,4-或3,5-二溴苯基、2,3,4-、2,3,5-、2,3,6-、2,4,6-或3,4,5-三氯苯基、对-碘苯基、4-氟-3-氯苯基、2-氟-4-溴苯基、2,5-二氟-4-溴苯基或2,5-二甲基-4-氯苯基。

Ar²优选地表示苯基，其为未取代的或者被OH和/或OA单-或二取代。

Ar²特别优选地表示苯基或者邻-、间-或对-甲氧基苯基。

Het优选地表示1-R¹-5-R²-1H-吡唑-4-基。

贯穿本发明，出现多于一次的所有基团可为相同或不同的，即为相互独立的。

式I的化合物可具有一个或多个手心中心，并因此可以各种立体异构体形式存在。式I包括所有这些形式。

因此，本发明具体地讲涉及其中所述基团中至少一个具有以上表明的优选含义之一的式I化合物。化合物的一些优选基团可用以下子式Ia-Ie表示，其符合式I，并且其中没有更详细指定的基团具有对式I表明的含义，但是其中

.

及其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体，包括它们所有比率的混合物。

式I化合物以及用于其制备的起始原料另外通过如在文献(例如在标准出版物，例如Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie [有机化学的方法(Methods of Organic Chemistry)], Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart)中描述的本身已知的方法，确切地讲在已知和适合于所述反应的反应条件下进行制备。在此也可使用这里没有更详细提及的本身已知的变体。

式I化合物可优选地通过使式II化合物与式III化合物反应得到。

式II和式III化合物为通常已知的。然而，如果它们为新的，它们可通过本身已知的方法进行制备。

在式II化合物中，L优选地表示Cl、Br、I或者游离的或反应性修饰的OH基团，例如活化的酯；咪唑化物(imidazolide)或具有1-6个C原子的烷基磺酰氧基(优选地为甲基磺酰氧基或三氟甲基磺酰氧基)或具有6-10个C原子的芳基磺酰氧基(优选地为苯基-或对-甲苯基磺酰氧基)。

反应通常在酸结合剂存在下进行，酸结合剂优选地为有机碱，例如DIPEA、三乙胺、二甲基苯胺、吡啶或喹啉。

加入碱金属或碱土金属氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐或者碱金属或碱土金属，优选地为钾、钠、钙或铯的另一种弱酸盐也可为有利的。依所使用的条件而定，反应时间在几分钟-14天之间，反应温度在约-30°和140°之间，通常在-10°和90°之间，特别是在约0°和约70°之间。合适的惰性溶剂的实例为烃类，例如己烷、石油醚、苯、甲苯或二甲苯；氯代烃类，例如三氯乙烯、1,2-二氯乙烷、四氯化碳、氯仿或二氯甲烷；醇类，例如甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇或叔丁醇；醚类，例如乙醚、异丙醚、四氢呋喃(THF)或二

烷；乙二醇醚类，例如乙二醇单甲醚或单乙醚、乙二醇二甲醚(二乙二醇二甲醚)；酮类，例如丙酮或丁酮；酰胺类，例如乙酰胺、二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺(DMF)；腈类，例如乙腈；亚砜类，例如二甲基亚砜(DMSO)；二硫化碳；羧酸类，例如甲酸或乙酸；硝基化合物，例如硝基甲烷或硝基苯；酯类，例如乙酸乙酯，或所述溶剂的混合物。特别优选的是乙腈、二氯甲烷和/或DMF。

醚的裂解通过如本领域技术人员已知的方法进行。例如甲醚的醚裂解的标准方法为使用三溴化硼。氢解可去除基团，例如裂解苄醚，可例如通过在催化剂(例如贵金属催化剂，例如钯，有利地在载体例如炭上)的存在下用氢气处理来裂开。合适的溶剂在此为以上表明的那些溶剂，特别是例如醇类，例如甲醇或乙醇，或者酰胺类，例如DMF。氢解作用通常在约0-100°之间的温度和约1-200巴的压力下，优选地在20-30°和1-10巴下进行。

酯可例如使用乙酸或使用NaOH或KOH，在水、水/THF或水/二

烷中，于0-100°之间的温度下进行皂化。

氮上的烷基化在如本领域技术人员已知的标准条件下进行。

式I化合物此外可通过溶剂分解作用，特别是水解，或者通过氢解作用，自其官能衍生物释放它们来得到。

此外能够使一种式I化合物转化为另一种式I化合物。优选地，基团R⁴≠H优选地通过用无机或有机酸像TFA处理来去除，得到式I化合物，其中R⁴=H。

药用盐及其它形式

所述本发明的化合物可以其最终的非盐形式使用。另一方面，本发明也包括以其药学上可接受的盐形式存在的这些化合物的用途，这种药学上可接受的盐可通过本领域已知的方法衍生于各种有机和无机酸和碱。式I化合物的药学上可接受的盐形式在大多数情况下通过常规方法进行制备。如果式I化合物含有羧基，则其合适的盐之一可通过使化合物与合适的碱反应从而得到相应的碱加成盐来形成。这种碱为例如碱金属氢氧化物，包括氢氧化钾、氢氧化钠和氢氧化锂；碱土金属氢氧化物，例如氢氧化钡和氢氧化钙；碱金属醇盐，例如乙醇钾和丙醇钠；和各种有机碱，例如哌啶、二乙醇胺和N-甲基谷氨酰胺。同样包括式I化合物的铝盐。在某些式 I化合物的情况下，可通过用以下药学上可接受的有机和无机酸处理这些化合物来形成酸加成盐：例如卤化氢，例如氯化氢、溴化氢或碘化氢；其它无机酸，及其相应的盐，例如硫酸盐、硝酸盐或磷酸盐等；和烷基-和单芳基-磺酸盐，例如乙磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐；和其它有机酸及其相应的盐，例如乙酸盐、三氟乙酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、枸橼酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、抗坏血酸盐等。因此，式I化合物的药学上可接受的酸加成盐包括以下盐：乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、精氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐(苯磺酸盐)、硫酸氢盐、亚硫酸氢盐、溴化物、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、辛酸盐、氯化物、氯苯甲酸盐、枸橼酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、磷酸二氢盐、二硝基苯甲酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、半乳糖二酸盐(得自粘酸)、半乳糖醛酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、半琥珀酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、异丁酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、偏磷酸盐、甲磺酸盐、甲基苯甲酸盐、磷酸一氢盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、油酸盐、扑酸盐(palmoate)、果胶酸盐、过硫酸盐，苯基乙酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、膦酸盐、邻苯二甲酸盐，但这不表示仅限于此。

此外，本发明化合物的碱盐包括铝、铵、钙、铜、铁(III)、铁(II)、锂、镁、锰(III)、锰(II)、钾、钠和锌盐，但是这不代表限于此。在以上提及的盐中，优选为铵；碱金属盐钠和钾盐，以及碱土金属盐钙和镁盐。衍生于药学上可接受的有机非毒性碱的式I化合物的盐包括以下物质的盐：伯、仲和叔胺、取代的胺，还包括天然存在的取代胺、环胺和碱性离子交换树脂，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、氯普鲁卡因、胆碱、N,N'-二苄基乙二胺(苄星青霉素)、二环己基胺、二乙醇胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、海巴明(hydrabamine)、异丙胺、利多卡因、赖氨酸、葡甲胺、N-甲基-D-葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙醇胺、三乙胺、三甲胺、三丙胺和三(羟甲基)甲基胺(氨丁三醇)，但是这不打算表示仅限于此。

可使用例如以下的试剂将含有碱性含氮基团的本发明化合物季铵化：(C₁-C₄)烷基卤化物，例如甲基、乙基、异丙基和叔丁基氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二(C₁-C₄)烷基酯，例如硫酸二甲基酯、二乙基酯和二戊基酯；(C₁₀-C₁₈)烷基卤化物，例如癸基、十二烷基、月桂基、肉豆蔻基和十八烷基氯化物、溴化物和碘化物；以及芳基(C₁-C₄)烷基卤化物，例如苄基氯和苯乙基溴。可使用这种盐制备水溶性和油溶性的本发明化合物。

优选的以上提及的药用盐包括乙酸盐、三氟乙酸盐、苯磺酸盐、枸橼酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、半琥珀酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、羟乙基磺酸盐、扁桃酸盐、葡甲胺、硝酸盐、油酸盐、膦酸盐、新戊酸盐、磷酸钠、硬脂酸盐、硫酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、硫代苹果酸盐、甲苯磺酸盐和氨丁三醇，但这不打算表示仅限于此。

碱性式I化合物的酸加成盐通过将游离碱形式与足够量的所需的酸接触，引起以常规方式形成盐来制备。可通过使盐形式与碱接触并以常规方式分离游离碱而再生游离碱。关于某些物理性质，游离碱形式在某些方面不同于其相应的盐形式，例如在极性溶剂中的溶解度方面；然而，对于本发明的目的，盐在其它方面相当于其各自的游离碱形式。

如所提及的那样，式I化合物的药学上可接受的碱加成盐用金属或胺例如碱金属和碱土金属或有机胺形成。优选的金属为钠、钾、镁和钙。优选的有机胺为N,N’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基-D-葡糖胺和普鲁卡因。

本发明的酸性化合物的碱加成盐通过使游离酸形式与足够量的所需要的碱接触，引起以常规方式形成盐来制备。可通过使盐形式与酸接触并以常规方式分离游离酸而再生游离酸。关于某些物理性质，游离酸形式在某些方面不同于其相应的盐形式，例如在极性溶剂中的溶解度方面；然而，对于本发明的目的，盐在其它方面相当于其各自的游离酸形式。

如果本发明的化合物含有多于一个能够形成这种类型的药学上可接受的盐的基团，则本发明还包括多重盐。典型的多重盐形式包括例如酒石酸氢盐、二乙酸盐、二富马酸盐、二葡甲胺、二磷酸盐、二钠盐和三盐酸盐，但是这不打算代表限于此。

就上述内容而言，可见本文中的表达“药学上可接受的盐”意思是指包括以其盐之一的形式存在的式I化合物的活性成分，特别是如果与活性成分的游离形式或早期使用的活性成分的任何其它盐形式相比较，这种盐形式赋予活性成分改善的药代动力学性质。活性成分的药学上可接受的盐形式也可首次为这种活性成分提供其早前不具有的期望的药代动力学性质，甚至可能在其体内治疗效力方面对这种活性成分的药效学具有积极的影响。

本发明此外涉及药物，所述药物包含至少一种式I化合物和/或其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体，包括它们所有比率的混合物，以及任选地包含赋形剂和/或助剂。

药用制剂可以每个剂量单位包含预定量的活性成分的剂量单位的形式给予。这种单位可依所治疗的病症、给予的方法以及患者的年龄、体重和情况而定包含例如0.5 mg-1 g，优选地为1 mg-700 mg，特别优选地为5 mg-100 mg的本发明化合物，或者药用制剂可以每个剂量单位包含预定量的活性成分的剂量单位的形式给予。优选的剂量单位制剂为包含如以上表明的每日剂量或部分剂量或其相应分数的活性成分的那些制剂。此外，这种类型的药用制剂可使用药学领域通常已知的方法来制备。

药用制剂可适合于经任何期望的合适方法给予，例如经口(包括口颊或舌下)、直肠、鼻、局部(包括口颊、舌下或经皮)、阴道或非肠道(包括皮下、肌内、静脉内或皮内)方法给予。这种制剂可使用药学领域已知的所有方法来制备，例如通过将活性成分与赋形剂或助剂混合来制备。

适合于经口给予的药用制剂可作为独立的单位给予，这种独立单位例如有胶囊剂或片剂；粉剂或颗粒剂；在水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；可食用的泡沫剂或泡沫食物；或水包油型液体乳剂或油包水型液体乳剂。

因此，例如，在以片剂或胶囊剂的形式经口给予的情况下，可将活性成分组分与口服非毒性和药学上可接受的惰性赋形剂例如乙醇、甘油、水等混合。粉剂可通过将化合物粉碎至合适的细的大小并使其与以类似方式粉碎的药用赋形剂例如可食用的碳水化合物例如淀粉或甘露醇混合来制备。矫味剂、防腐剂、分散剂和染料可同样存在。

胶囊剂通过制备如以上描述的粉末混合物并填充到成型的明胶壳中进行制备。在填充操作前，可向粉末混合物中加入助流剂和润滑剂，例如高度分散的硅酸、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或以固体形式存在的聚乙二醇。可同样加入崩解剂或增溶剂例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠，以改善胶囊剂被服用之后药物的利用度。

另外，如果期望或必要，可同样向混合物中掺入合适的粘合剂、润滑剂和崩解剂以及染料。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖类例如葡萄糖或β-乳糖、自玉米制得的甜味剂、天然和合成橡胶例如阿拉伯胶、黄蓍胶或藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。用于这些剂型的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。片剂通过例如制备粉末混合物、将混合物制粒或干压、加入润滑剂和崩解剂并压制整个混合物以得到片剂来制备。粉末混合物通过将以合适的方式粉碎的化合物与如以上描述的稀释剂或基质并任选地与粘合剂例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮、溶出阻滞剂例如石蜡、吸收促进剂例如季盐和/或吸收剂例如膨润土、高岭土或磷酸二钙混合来制备。可通过用粘合剂例如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶浆或者纤维素或聚合物材料的溶液润湿并将其压过筛而将粉末混合物制粒。作为制粒的一种备选，可使粉末混合物通过压片机，得到形状不均匀的块状物，将其破碎从而形成颗粒。通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或矿物油可对颗粒进行润滑，以防止粘附于片剂铸模上。然后压制所润滑的混合物以得到片剂。也可将本发明的化合物与自由流动的惰性赋形剂混合，并然后在不进行制粒或干压步骤的情况下直接压制以得到片剂。可存在由虫胶密封层、糖或聚合物材料层和光泽蜡层组成的透明或不透明保护层。可向这些包衣中加入染料以便能够区别不同的剂量单位。

口服液体例如溶液剂、糖浆剂和酏剂可以剂量单位的形式制备，以致给定的量包含预定量的化合物。糖浆剂可通过使化合物溶解于具有合适矫味剂的水性溶液中来制备，而酏剂使用非毒性的醇性溶媒制备。混悬剂可通过使化合物分散于非毒性的溶媒中来制备。可同样加入增溶剂和乳化剂例如乙氧基化的异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚类、防腐剂、矫味添加剂例如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其它人工甜味剂等。

如果需要，可将用于经口给予的剂量单位制剂包封于微囊中。也可以延长或延迟释放的这样的方式制备制剂，例如通过将粒状材料用聚合物、蜡等进行包衣或者将其包埋于聚合物、蜡等中。

式I化合物及其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体也可以脂质体递送系统例如单层小囊泡、单层大囊泡和多层囊泡的形式给予。脂质体可由各种磷脂例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱形成。

式I化合物及其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体也可使用单克隆抗体作为偶联所述化合物分子的单独的载体来递送。也可将化合物偶联到作为靶向药物载体的可溶性聚合物上。这种聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰氨基苯酚、聚羟乙基天冬酰氨基苯酚或聚氧化乙烯聚赖氨酸，用棕榈酰基取代。此外可将化合物偶联到一类适合于实现药物控释的生物可降解聚合物上，例如聚乳酸、聚-ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯类、聚缩醛类、聚二羟基吡喃类、聚氰基丙烯酸酯类和交联或两亲性嵌段共聚物水凝胶。

适合于经皮给予的药用制剂可作为与接受者的表皮长期亲密接触的独立硬膏剂给予。因此，例如，可用离子电渗疗法使活性成分自硬膏剂中递送，如Pharmaceutical Research, 3 (6)，318 (1986)中的总括所述。

适合于局部给予的药用化合物可配制为软膏剂、霜剂、混悬剂、洗剂、粉末、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油。

对于眼或其它外部组织例如口和皮肤的治疗，制剂优选地作为局部软膏剂或霜剂应用。在配制以得到软膏剂的情况下，可将活性成分与可与石蜡或水混溶的霜剂基质一起应用。或者，可用水包油型霜剂基质或油包水型基质配制活性成分以得到霜剂。

适合于局部应用于眼的药用制剂包括滴眼剂，其中活性成分溶解或悬浮于合适的载体，特别是水性溶剂中。

适合于局部应用于口的药用制剂包括锭剂、软锭剂和漱口剂。

适合于直肠给予的药用制剂可以栓剂或灌肠剂的形式给予。

其中载体物质为固体的适合于经鼻给予的药用制剂包含具有例如在20-500微米范围内的粒度的粗粉末，其以嗅的方式给予，即通过经鼻道从靠近鼻的含有粉末的容器迅速吸入。用液体作为载体物质，用于作为鼻喷雾剂或滴鼻剂给予的合适制剂包含活性成分在水或油中的溶液。

适合于通过吸入给予的药用制剂包含细颗粒粉或雾，所述细颗粒粉或雾可通过各种类型的含有气溶胶的加压分配器、喷雾器或吹入器来产生。

适合于阴道给予的药用制剂可作为阴道栓、卫生棉条、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫或喷雾制剂给予。

适合于非肠道给予的药用制剂包括：水性和非水性无菌注射溶液剂，其包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和由此使得制剂与所治疗的接受者的血液等渗的溶质；以及水性和非水性的无菌混悬液，其可包含混悬介质和增稠剂。制剂可以单剂量或多剂量容器、例如密封的安瓿和小瓶给予，并以冷冻干燥(冻干)状态储存，以致仅需在临用前加入无菌载体液体例如注射用水。按照处方制备的注射溶液剂和混悬剂可自无菌粉末、颗粒和片剂制备。

不言而喻，除了以上特别提及的组分外，制剂也可包含本领域中这种特定类型制剂常用的其它物质；因此，例如，适合于经口给予的制剂可包含矫味剂。

式I化合物的治疗有效量取决于多种因素，包括例如动物的年龄和体重、需要治疗的准确病症及其严重性、制剂的性质和给予方法，并且最终由治疗医生或兽医来确定。然而，本发明化合物用于治疗肿瘤生长例如结肠或乳腺癌的有效量通常在0.1-100 mg/kg接受者(哺乳动物)体重/天的范围内，并且特别是一般地在1-10 mg/kg体重/天的范围内。因此，对于体重70 kg的成年哺乳动物，每天的实际量通常在70-700 mg之间，其中该量可作为每天单次剂量或者通常以每天一系列部分剂量(如2、3、4、5或6个部分剂量)给予，以致总每天剂量相同。可作为本发明化合物本身的有效量的分数来确定其盐或溶剂化物或生理学功能衍生物的有效量。可假定相似的剂量适合于治疗以上提及的其它病症。

本发明此外涉及药物，其包含至少一种式I化合物和/或其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体、包括它们所有比例的混合物以及至少一种其它药物活性成分。

本发明还涉及由以下的独立包装组成的套盒(试剂盒)：

(a) 有效量的式I化合物和/或其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体，包括它们所有比例的混合物，

和

(b) 有效量的其它药物活性成分。

这种套盒包含合适的容器，例如盒子、单个瓶、药袋或安瓿。这种套盒可例如包含单独的安瓿，每一个安瓿含有有效量的以溶解或冻干形式存在的式I化合物和/或其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体，包括它们所有比例的混合物以及有效量的其它药物活性成分。

用途

本发明涉及用于治疗以下疾病的式I化合物：癌症、败血性休克、原发性开角型青光眼(POAG)、增生、类风湿性关节炎、银屑病、动脉粥样硬化、视网膜病、骨关节炎、子宫内膜异位、慢性炎症和/或神经退行性疾病例如阿尔茨海默病。

本发明涉及式I化合物用于制备用于治疗以下疾病的药物的用途：癌症、败血性休克、原发性开角型青光眼(POAG)、增生、类风湿性关节炎、银屑病、动脉粥样硬化、视网膜病、骨关节炎、子宫内膜异位、慢性炎症和/或神经退行性疾病例如阿尔茨海默病。

本发明涉及治疗具有选自以下的疾病的哺乳动物的方法：癌症、败血性休克、原发性开角型青光眼(POAG)、增生、类风湿性关节炎、银屑病、动脉粥样硬化、视网膜病、骨关节炎、子宫内膜异位、慢性炎症和/或神经退行性疾病例如阿尔茨海默病，其中所述方法包括给予哺乳动物治疗有效量的式I化合物。

本发明化合物适合作为药用活性成分在癌症疾病和炎性疾病的治疗和控制中用于哺乳动物，尤其是用于人。

宿主或患者可属于任何哺乳动物种类，例如灵长类动物，特别是人；啮齿动物，包括小鼠、大鼠和仓鼠；兔、马、牛、狗、猫等。动物模型对于试验研究是感兴趣的，提供用于治疗人疾病的模型。

特定细胞对用本发明的化合物处理的敏感性可通过体外测试来确定。一般地，细胞的培养物与各种浓度的本发明化合物组合在一起足以使得活性物质例如抗IgM诱导细胞反应例如表面标记的表达的时间段，通常在约1小时-1周之间。体外测试可使用来自血液或来自活组织检测样品的培养细胞来进行。使用识别标记的特异性抗体经流式细胞术评价所表达的表面标记的量。

剂量依所使用的具体化合物、具体疾病、患者状态等而定变化。治疗剂量一般相当地足以减少靶组织中不期望的细胞群，同时保持患者的存活能力。治疗通常持续到已经发生显著减少，例如细胞负荷减少至少约50%，并可持续到基本上在体内检测不到更多不期望的细胞。

为了鉴定信号转导途径和为了检测不同信号转导途径之间的相互作用，不同的科学家已经开发了合适的模型或模型系统，例如细胞培养模型(例如Khwaja等, EMBO, 1997, 16, 2783-93)和转基因动物模型(例如White等, Oncogene, 2001, 20, 7064-7072)。为了确定信号转导级联的某些阶段，可使用相互作用的化合物以调节信号(例如Stephens等, Biochemical J., 2000, 351, 95-105)。本发明的化合物也可用作在动物和/或细胞培养模型或在本申请中提及的临床疾病中测试激酶依赖的信号转导通路的试剂。

激酶活性的测量为本领域的技术人员熟知的技术。用于使用底物例如组蛋白(例如Alessi等, FEBS Lett. 1996, 399, 3, 第333-338页)或碱性髓鞘蛋白测定激酶活性的通用测试系统描述于文献(例如Campos-González, R.和Glenney, Jr., J.R. 1992, J. Biol. Chem. 267, 第14535页)中。

为了鉴定激酶抑制剂，可得到各种检测系统。在闪烁邻近测定法(Sorg等, J. of. Biomolecular Screening, 2002, 7, 11-19)和闪板测定法中，用γATP测量作为底物的蛋白或肽的放射性磷酸化。在抑制性化合物存在下，可检测到放射性信号减小或根本没有。此外，均相时间分辨荧光共振能量转移(HTR-FRET)和荧光偏振(FP)技术适合作为测定方法(Sills等, J. of Biomolecular Screening, 2002, 191-214)。

其它非放射性ELISA测定方法使用特异性的磷酸化抗体(phospho-ABs)。磷酸化-AB仅结合磷酸化底物。这种结合可使用第二过氧化物酶轭合的抗羊抗体经化学发光进行检测(Ross等, 2002, Biochem. J.)。

本发明包括式I化合物和/或其生理学上可接受的盐、互变异构体和溶剂化物用于制备用于治疗或预防癌症的药物的用途。用于治疗的优选癌源自于脑癌、泌尿生殖道癌、淋巴系统癌、胃癌、喉癌和肺癌、肠癌。另一组优选的癌症形式为单核细胞白血病、肺腺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤和乳腺癌。

还包括式I化合物和/或其生理学上可接受的盐、互变异构体和溶剂化物用于制备用于在哺乳动物治疗和/或控制肿瘤诱导的疾病的药物的用途，其中在该方法中给予需要这种治疗的患病哺乳动物治疗有效量的本发明化合物。治疗量依具体疾病而定变化，并可由本领域的技术人员确定而无需过度的努力。

特别优选的是用于治疗疾病的用途，其中所述癌症疾病为实体肿瘤。

实体肿瘤优选地选自鳞状上皮、膀胱、胃、肾脏、头和颈、食道、宫颈、甲状腺、肠、肝脏、脑、前列腺、泌尿生殖道、淋巴系统、胃、喉和/或肺的肿瘤。

实体肿瘤此外优选地选自肺腺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、结肠癌和乳腺癌。

此外优选的是用于治疗血液和免疫系统肿瘤的用途，优选地用于治疗选自急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病和/或慢性淋巴性白血病的肿瘤。

本发明此外涉及本发明的化合物用于治疗骨疾病的用途，其中骨疾病源自于骨肉瘤、骨关节炎和佝偻病。

式I化合物还可与其它熟知的治疗剂同时给予，所述其它熟知的治疗剂因为它们对抗正在治疗的病症的特定有用性而被选择。

本发明化合物也适合于与已知的抗癌剂组合。这些已知的抗癌剂包括以下物质：雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类维生素A受体调节剂、细胞毒性剂、抗增殖剂、异戊二烯(prenyl)蛋白转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂及其它血管生成抑制剂。本发明的化合物特别适合于与放射疗法同时给予。

“雌激素受体调节剂”指无论机制如何干扰或抑制雌激素与受体结合的化合物。雌激素受体调节剂的实例包括但不限于他莫昔芬、雷洛昔芬、艾多昔芬、LY353381、LY 117081、托瑞米芬、氟维司群、4-[7-(2，2-二甲基-1-氧代丙氧基-4-甲基-2-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-2H-1-苯并吡喃-3-基]苯基2,2-二甲基丙酸盐、4,4'-二羟基二苯甲酮-2,4-二硝基苯基腙和SH646。

“雄激素受体调节剂”指无论机制如何干扰或抑制雄激素与受体结合的化合物。雄激素受体调节剂的实例包括非那雄胺和其它5α -还原酶抑制剂、尼鲁米特、氟他胺、比卡鲁胺、利阿唑和醋酸阿比特龙。

“类维生素A受体调节剂”指无论机制如何干扰或抑制类维生素A与受体结合的化合物。这种类维生素A受体调节剂的实例包括贝沙罗汀、维甲酸、13-顺式-视黄酸、9-顺式-视黄酸、α-二氟甲基鸟氨酸、ILX23-7553、反式-Ν-(4'-羟基苯基)视黄酸酰胺和Ν-4-羧基苯基视黄酸酰胺。

“细胞毒性剂”指主要经对细胞功能的直接作用导致细胞死亡或者抑制或干扰细胞分裂的化合物，包括烷化剂、肿瘤坏死因子、嵌入剂、微管蛋白抑制剂和拓扑异构酶抑制剂。

细胞毒性剂的实例包括但不限于替拉扎明(tirapazimine)、sertenef、恶病质素、异环磷酰胺、他索纳明、氯尼达明、卡铂、六甲蜜胺、泼尼莫司汀、二溴卫矛醇、雷莫司汀、福莫司汀、奈达铂、奥沙利铂、替莫唑胺、庚铂(heptaplatin)、雌莫司汀、二丙胺磺酯、曲磷胺、尼莫司汀、二溴螺氯铵、嘌嘧替派、洛铂、塞特铂、profiromycin、顺铂、伊洛福芬、右异环磷酰胺、顺胺二氯(2-甲基吡啶)铂、苄基鸟嘌呤、葡磷酰胺、GPX100、(反式,反式,反式)双-μ-(己烷-1,6-二胺)-μ-[二胺铂(II)]双[二胺(氯)铂(II)]四氯化物、二茴香胺基精胺(diarisidinylspermine)、三氧化二砷、1-(11-十二烷基氨基-10-羟基十一烷基)-3,7-二甲基黄嘌呤、佐柔比星、伊达比星、柔红霉素、比生群、米托蒽醌、吡柔比星、吡萘非特、戊柔比星、氨柔比星、抗瘤酮、3'-去氨基-3'-吗啉代-13-去氧代-10-羟基洋红霉素、蒽环霉素、加卢比星、依利奈法德、MEN10755和4-去甲氧基-3-去氨基-3-吖丙啶基-4-甲磺酰基柔红霉素(参见WO 00/50032)。

微管蛋白抑制剂的实例包括紫杉醇、硫酸长春地辛、3',4'-二去氢-4'-去氧-8'-去甲长春花碱(norvincaleukoblastine)、多西紫杉醇、根霉素、海兔毒素、羟乙磺酸米伏布林、auristatin、西马多丁、RPR109881、BMS184476、长春氟宁、念珠藻环肽(cryptophycin)、2,3,4,5,6-五氟-N- (3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺酰胺、脱水长春碱、N,N-二甲基-L-缬氨酰基-L-缬氨酰基-N-甲基-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-L-脯氨酸-叔丁基酰胺、TDX258和BMS188797。

拓扑异构酶抑制剂例如有托泊替康、hycaptamine、伊立替康、卢比替康、6-乙氧基丙酰基-3',4'-O-外亚苄基chartreusin、9-甲氧基-N,N-二甲基-5-硝基吡唑并[3,4,5-kl]吖啶-2-(6H)丙胺、1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':b,7]吲嗪并[1,2b]喹啉-10,13 (9H,15H)-二酮、勒托替康、7-[2-(N-异丙基氨基)乙基]-(20S)喜树碱、BNP1350、BNPI1100、BN80915、BN80942、磷酸依托泊苷、替尼泊苷、索布佐生、2'-二甲基氨基-2'-去氧依托泊苷、GL331、N-[2-(二甲基氨基)乙基]-9-羟基-5,6-二甲基-6H-吡啶并[4,3-b]咔唑-1-甲酰胺、asulacrine、(5a,5aB,8aa,9b)-9-[2-[N-[2-(二甲基氨基)乙基]-N-甲基氨基]乙基]-5-[4-羟基-3,5-二甲氧基苯基]-5,5a,6,8,8a,9-六氢呋喃并(3',4':6,7)萘并(2,3-d)-1,3-二氧杂环戊烯-6-酮、2,3-(亚甲二氧基)-5-甲基-7-羟基-8-甲氧基苯并[c]菲啶

、6,9-双[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]异喹啉-5,10-二酮、5-(3-氨基丙基氨基)-7,10-二羟基-2-(2-羟基乙基氨基甲基)-6H-吡唑并[4,5,1-de]吖啶-6-酮、N-[1-[2- (二乙基氨基)乙基氨基]-7-甲氧基-9-氧代-9H-噻吨-4-基甲基]甲酰胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)吖啶-4-甲酰胺、6-[[2-(二甲基氨基)乙基]氨基]-3-羟基-7H-茚并[2,1-c]喹啉-7-酮和地美司钠。

“抗增殖剂”包括反义RNA和DNA寡核苷酸，例如G3139、ODN698、RVASKRAS、GEM231和 INX3001以及抗代谢药，例如依诺他滨、卡莫氟、替加氟、喷司他汀、去氧氟尿苷、三甲曲沙、氟达拉滨、卡培他滨、加洛他滨、阿糖胞苷十八烷基磷酸盐、fosteabine钠水合物、 雷替曲塞、paltitrexid、乙嘧替氟、噻唑呋林、地西他滨、诺拉曲塞、培美曲塞、奈拉滨、2'-去氧-2'-亚甲基胞苷、2'-氟亚甲基-2'-去氧胞苷、N-[5-(2,3-二氢苯并呋喃基)磺酰基]-N'-(3,4-二氯苯基)脲、N6-[4-去氧-4-[N2-[2(E),4(E)-十四碳二烯酰基]甘氨酰基氨基]-L-甘油-B-L- mannohepto-pyranosyl]腺嘌呤、aplidine、海鞘素、曲沙他滨、4-[2-氨基-4-氧代-4,6,7,8-四氢-3H-嘧啶并[5,4-b]-1,4-噻嗪-6-基-(S)-乙基]-2,5-噻吩酰基-L-谷氨酸、氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、阿拉诺新、11-乙酰基-8-(氨甲酰基氧基甲基)-4-甲酰基-6-甲氧基-14-氧杂-1,11-二氮杂四环(7.4.1.0.0)十四碳-2,4,6-三烯-9-基乙酸酯、苦马豆素、洛美曲索、右雷佐生、蛋氨酸酶、2'-氰基-2'-去氧-N4-棕榈酰-1-B-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶和3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲。“抗增殖剂”还包括与除“血管生成抑制剂”下列出的那些以外的生长因子的单克隆抗体，例如曲妥珠单抗，以及肿瘤抑制基因，例如p53，p53可经重组病毒介导的基因转移来递送(例如参见US专利第6069134号)。

对于RON抑制的测试

在细胞试验中MSP (巨噬细胞刺激蛋白)诱导的pRON的抑制作用

为了测定RON激酶抑制剂在抑制配体诱导的RON磷酸化方面的活性和效力，如以下描述的那样以基于细胞的试验测试化合物。配体诱导的pRON (phosphoRON)在MDA-MB453细胞的抑制作用(基于细胞的电化学发光测定法(ECLA)): MDA-MB453细胞(DSMZ ACC65)进行血清饥饿，用100 µM原钒酸钠预处理(1h，37℃，5% CO₂)，并在37℃，5% CO₂下在无血清培养基中用化合物(连续稀释，起始浓度30 µM)预温育45分钟。细胞用250 ng/ml MSP (R&D系统, #4306-MS)刺激20分钟，弃去上清液，并把细胞在冷的NP-40裂解缓冲液中裂解(1% NP-40, 20 mM Tris, pH8.0, 137 mM NaCl, 10%甘油, 2 mM EDTA, 蛋白酶抑制剂混合物套盒III (Calbiochem), 磷酸酶抑制剂混合物套盒II (Calbiochem))中。MA6000 96孔板(MSD, # L15XB)用PBS, pH7.4, 0.05% Tween20中的3%阻断剂A (MSD)阻断，并用RON特异性的捕获抗体(R&D系统, # MAB691)涂覆。加入细胞裂解产物，并在室温(RT)下温育2小时。生物素化的抗磷酸化酪氨酸抗体(R&D系统，# BAM1676)和磺基标记链霉亲和素试剂(MSD, #R32AD)用于检测。

用于测定RON激酶介导的作用的抑制剂效力的体外(酶)试验

作为384孔闪板试验进行激酶测定。作为测试板，使用得自Perkin Elmer (USA)的384孔链霉亲和素涂覆的闪板微量滴定板。把激酶反应的组分用移液器吸取到试验板。在受试物质(10个浓度)存在或不存在下，把4.5 nM 的GST标记的人重组RON激酶(Life technologies)、500 nM生物素化的肽底物RDILDREYYSVQQHRH-酰胺(自身磷酸化位点衍生的肽底物，定制的)和2 µM的ATP (含有0.5 µCi的<33>P-ATP/孔)用50 µl的总体积(50 mM的HEPES, 5 mM的MgCl₂, 2 mM的DTT, 0.1%的BSA, 0.01% Igepal®CA630, 1% DMSO, pH 7.5)于22℃下温育30分钟。使用50 µl的200 mM EDTA溶液终止反应。在室温下温育另外80分钟后，经抽吸去除上清液，并把孔每一次用100 µl的0.9% NaCl溶液洗涤三次。使用Topcount闪烁计数器(PerkinElmer, USA)测量放射性。IC50值使用测定探针计算(表X)。

实施例1

类似于以下方案进行1-苯基-5-三氟甲基-1H-吡唑-4-羧酸[3-氟-4-(2-氧代-1,2,3,4-四氢-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基氧基)-苯基]-酰胺(“A1”)的制备

1.1 把1.41 ml (10.9 mmol)的4-甲氧基苄基胺加入到2.80 g (10.9 mmol)的(4-氯-3-甲酰基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁基酯在20 ml甲苯中的溶液中。在室温(RT)下搅拌混合物30分钟。然后经真空蒸馏除去溶剂。把残余物溶于20 ml的四氢呋喃(THF)中，并加入0.62 g (16.4 mmol, 1.5当量)的 ...。在RT下搅拌混合物4小时。然后加入2 ml甲醇，并在RT下搅拌混合物5分钟。经真空蒸馏除去溶剂，将残余物溶于100 ml饱和碳酸氢钠溶液中。混合物用150 ml的乙酸乙酯(EA)萃取两次。合并的有机相使用硫酸镁(MgSO₄)干燥，过滤并真空蒸发，得到3.1 g (75%)的2，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。

1.2 把3.10 g (8.20 mmol)的2溶于40 ml的二氯甲烷(DCM)中，并加入10 ml的三氟乙酸。在RT下搅拌混合物2小时。然后把反应混合物真空蒸发至干。将残余物溶于150 ml的EA中，并用100 ml饱和碳酸氢钠溶液萃取。有机相使用MgSO₄干燥，过滤并真空蒸发。粗品产物3 (2.21 g, 97%)无需进一步纯化即可用于下一步骤。

1.3 把2.21 g (7.96 mmol)的3溶于30 ml乙腈中，并加入1.36 g (8.39 mmol, 1.05当量)的1,1’-羰基二咪唑。在RT下搅拌混合物24小时。然后经真空蒸馏除去溶剂。残余物用水处理，滤出并用小量甲醇洗涤，得到2.05 g (85%)的4，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。

1.4 把400 mg (1.31 mmol)的4、250 mg (1.97 mmol, 1.5当量)的4-氨基-2-氟苯酚和854 mg (2.62 mmol, 2.0当量)的碳酸铯悬浮于10 ml的DMF中，并在150℃下搅拌4 小时。然后经真空蒸馏除去溶剂，并把残余物在约50 g的硅胶上进行层析，洗脱液为DCM/甲醇(99/1 v/v)，得到222 mg (43%)为结晶固体的5。

1.5 把216 mg (0.84 mmol)的1-苯基-5-三氟甲基吡唑-4-羧酸溶于5 ml 的DCM中，加入0.09 ml (1.26 mmol, 1.5当量)的亚硫酰二氯，并把混合物回流1小时。然后真空蒸发反应混合物。把残余物溶于5 ml吡啶中，并加入222 mg (0.67当量)的5。在RT下搅拌混合物1小时。然后在30 ml水中搅拌反应混合物并过滤。把残余物溶于50 ml的DCM中，使用MgSO₄干燥并在30 g的硅胶上进行层析，洗脱液为DCM/甲醇(98/2 v/v)，得到304 mg (86%)为无色结晶的1-苯基-5-三氟甲基-1H-吡唑-4-羧酸{3-氟-4-[3-(4-甲氧基-苄基)-2-氧代-1,2,3,4-四氢-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基氧基]-苯基}-酰胺(“A2”)；

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ[ppm] 3.74 (s, 3H), 4.41 (s, 2H), 4.54 (s, 2H), 6.17 (d, 1H, J=5.8 Hz), 7.36 (t, 1H, J=9.0 Hz), 7.58-7.49 (m, 3H), 7.67-7.58 (m, 3H) 8.33 (s, 1H), 9.87 (s, 1H), 10.82 (s, 1H)。

1.6 把304 mg (0.48 mmol)的6溶于5 ml的TFA中，并在80℃下搅拌16小时。在混合物已经冷却至RT后，加入20 ml乙醚，并用抽吸滤出沉淀，用乙醚洗涤。将其用约15 ml丙酮处理，加热至沸，再次用抽吸滤出，并用丙酮洗涤，得到225 mg (91%)的“A1”；

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ[ppm] 10.83 (s, 1H), 9.53 (d, J=1.5 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.94 (t, J=4.8 Hz, 1H), 7.90 (dd, J=12.8, 2.3 Hz, 1H), 7.68-7.60 (m, 3H), 7.60-7.51 (m, 3H), 7.40 (t, J=9.0 Hz, 1H), 7.03 (d, J=1.4 Hz, 1H), 6.20 (d, J=5.8 Hz, 1H), 4.45 (d, J=0.7 Hz, 2H)。

类似地制备以下化合物：

本发明化合物抑制RON的IC₅₀值

以下实施例涉及药物：

实施例A：注射小瓶

将100 g式I的活性成分和5 g磷酸氢二钠在3 l重蒸馏水中的溶液用2 N盐酸调节至pH 6.5，无菌过滤，转移至注射小瓶中，在无菌条件下冷冻干燥，并在无菌条件下密封。每一个注射小瓶含有5 mg的活性成分。

实施例B：栓剂

将20 g式I的活性成分与100 g大豆卵磷脂和1400 g可可脂的混合物熔化，倾入到模具中，并使之冷却。每一粒栓剂含有20 mg的活性成分。

实施例C：溶液剂

自在940 ml重蒸馏水中的1 g式I的活性成分、9.38 g的NaH₂PO₄·2H₂O、28.48 g的Na₂HPO₄·12H₂O和0.1 g的苯扎氯铵制备溶液。将pH调节至6.8，并将该溶液制成1 l，且经照射灭菌。该溶液可以滴眼液的形式使用。

实施例D：软膏剂

将500 mg式I的活性成分与99.5 g的凡士林在无菌条件下混合。

实施例E：片剂

将1 kg式I的活性成分、4 kg乳糖、1.2 kg马铃薯淀粉、0.2 kg滑石粉和0. 1 kg硬脂酸镁的混合物以常规方式压制以得到片剂，从而使每一片剂含有10 mg的活性成分。

实施例F：糖锭剂

类似于实施例E压制片剂，并接着以常规方式用蔗糖、马铃薯淀粉、滑石粉、黄蓍胶和染料的包衣材料包衣。

实施例G：胶囊剂

将2 kg式I的活性成分以常规方式引入到硬明胶胶囊中，从而使每一粒胶囊含有20 mg的活性成分。

实施例H：安瓿

将1 kg式I的活性成分在60 l重蒸馏水中的溶液无菌过滤，转移至安瓿中，在无菌条件下冷冻干燥并在无菌条件下密封。每一个安瓿含有10 mg的活性成分。

Claims (12)

1. 式I的化合物，及其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体，包括它们所有比率的混合物：

其中

。

2. 权利要求1的化合物，及其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体，包括它们所有比率的混合物，其中

Het表示1-R¹-5-R²-1H-吡唑-4-基。

3. 权利要求1或2的化合物，及其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体，包括它们所有比率的混合物，其中

Ar¹表示苯基。

4. 权利要求1-3中一项或多项的化合物，及其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体，包括它们所有比率的混合物，其中

Ar²表示苯基，其为未取代的或者被OH和/或OA单取代或二取代。

5. 权利要求1-4中一项或多项的化合物，及其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体，包括它们所有比率的混合物，其中

A表示具有1-6个C原子的无支链或支链烷基，其中1或2个不相邻的CH和/或CH₂基团可被N和/或O原子置换和/或另外1-7个H原子可被F置换。

6. 权利要求1-5中一项或多项的化合物，及其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体，包括它们所有比率的混合物，其中

。

7. 权利要求1的化合物，及其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体，包括它们所有比率的混合物，所述化合物选自：

。

8. 用于制备权利要求1-7的式I化合物及其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体的方法，其特征在于

a) 式II的化合物

Het-CO-L　　　II

其中Het具有在权利要求1中表明的含义，和

L表示Cl、Br、I或者游离的或反应性官能团修饰的OH基团，

与式III的化合物反应

其中R³和R⁴具有在权利要求1中表明的含义，

和/或

把式I的碱或酸转化为其一种盐。

9. 药物，所述药物包含权利要求1-7的至少一种式I化合物和/或其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体，包括它们所有比率的混合物，以及任选地包含赋形剂和/或助剂。

10. 权利要求1-7的化合物及其药学上有用的盐、互变异构体和立体异构体，包括它们所有比率的混合物，用于治疗癌症、败血性休克、原发性开角型青光眼(POAG)、增生、类风湿性关节炎、银屑病、动脉粥样硬化、视网膜病、骨关节炎、子宫内膜异位、慢性炎症和/或神经退行性疾病。

11. 权利要求1-7的式I化合物和/或其生理学上可接受的盐、互变异构体和立体异构体，用于治疗肿瘤，其中治疗有效量的式I化合物与选自以下的化合物联合给予：1) 雌激素受体调节剂，2) 雄激素受体调节剂，3) 类维生素A受体调节剂，4) 细胞毒性剂，5) 抗增殖剂，6) 异戊二烯蛋白转移酶抑制剂，7) HMG-CoA还原酶抑制剂，8) HIV蛋白酶抑制剂，9) 逆转录酶抑制剂和10) 其它血管生成抑制剂。

12. 权利要求1-7的式I化合物和/或其生理学上可接受的盐、互变异构体和立体异构体，用于治疗肿瘤，其中治疗有效量的式I化合物与放射疗法和选自以下的化合物联合给予：1) 雌激素受体调节剂，2) 雄激素受体调节剂，3) 类维生素A受体调节剂，4) 细胞毒性剂，5) 抗增殖剂，6) 异戊二烯蛋白转移酶抑制剂，7) HMG-CoA还原酶抑制剂，8) HIV蛋白酶抑制剂，9) 逆转录酶抑制剂和10) 其它血管生成抑制剂。