CN103655919B - 一种中药保肝制剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种中药保肝制剂，其由栀子、枸杞子、五味子为原料药，按一定比例，分别经过提取、浓缩、干燥，加入辅料制成。本发明还包括对该制剂采用高效液相色谱法测定栀子苷的含量的方法。

Description

一种中药保肝制剂

技术领域

本发明涉及一种中药保肝制剂，其制备方法以及检测，具体涉及由栀子、枸杞子、五味子为原料药制备的制剂。

技术背景

肝脏是人体最大、最重要的消化腺体，它对外来和代谢产生的有害因素具有强大的解毒功能，这些有害因素在损害机体的同时，也会对肝脏本身产生伤害，如受污染的空气、水、食物、药品、饮酒、吸烟、二手烟等有害化学物质，会使人体产生大量自由基，损伤肝细胞，导致化学性肝损伤。通过增强肝脏的抗氧化能力可预防和减轻化学性肝损伤的危害。

现代都市人生活压力大，经常应酬酗酒，工作时间长，饮食高糖高脂，中医学认为，“酒为火热之食，损伤肝阴”，不少肝病患者就是因为过度饮酒导致酒精性肝炎、脂肪肝，直至肝硬化。

栀子：药食两用。具有抗氧化、抗炎、抗自由基损伤、促进胆汁分泌、抗病毒、保护神经细胞等药理作用，其化学成分主要包括环烯醚萜苷类、二萜类、有机酸酯类以及其他化合物，栀子及其主要有效成分具有保肝利胆的作用，对四氯化碳、异硫氰酸-1-萘酯、黄曲霉素B1等诱导的肝损伤具有良好的保护作用，栀子苷及栀子提取物具有显著的保肝作用，栀子提取物可能通过促进动物体内磷酸尿苷的生物合成， 或者抑制D-GlaN与尿苷的结合，同时通过促进胆汁的排泄而对肝组织起保护作用；栀子具有降低血压、促进胰腺分泌、抑制心肌收缩力、保肝、泻下和防止动脉粥样硬化的作用；京尼平苷能降低动物的死亡率、延长动物死亡时间,能降低给予酒精组小鼠血清中AST及ALT的含量，抑制肝内MDA的生成，改善肝脏病理变化；栀子对HA（肝组织透明质酸）和HYP（肝组织羟脯氨酸）的作用不同，主要表现为对HYP的抑制作用，提示其作用环节主要在抑制胶原增生。

枸杞子：药食两用。《太平圣惠方》卷九十四，具有滋补肝肾、益精明目的作用，性甘平而温和，久服可坚筋骨延年益寿；《饮膳正要》第二卷P325金髓煎，有滋肝补肾、益精明目、固髓健骨、润肺补虚之功效。枸杞子对脂质代谢或抗脂肪肝的作用，主要是由于其中含有甜菜碱，甜菜碱在体内起甲基供应体的作用。甜菜碱既溶于水也溶于醇，枸杞子中主要有效成分是甜菜碱，研究报道:CCl₄引起小鼠急性肝损伤24h后，经口15mg/(kg.bw)或经腹腔内3mg/(kg·bw)给予甜菜碱，可观察到血清ALT下降，溴脱氧鸟昔掺入肝细胞核DNA量增加L2J。甜菜碱对CCl₄所致小鼠肝细胞内脂肪沉积有轻微抑制作用,并促进肝细胞新生；用天门冬氨酸甜菜碱也有抗CCl₄所致肝损伤作用，对化学性肝损伤实验性肝损伤均有保护作用；枸杞多糖能明显改善酒精所致大鼠肝脏脂肪性病理变化。

五味子：可用于保健食品的原料。最早列于神农本草经上品，中药功效在于滋补强壮之力，药用价值极高。具有益气生津，补肾养心，收敛固涩之功效，敛肺滋肾，安神止汗之功效。五味子主含五味子素(五 味子醇甲)、去氧五味子素(五味子甲素)、r-五味子素(五味子乙素)及五味子醇。其中五味子素、r-五味子素为主要成分之一。《本草从经》记载，五味子除烦渴、消水肿、解酒毒、收耗散之气。五味子能促进肝脏的解毒过程　通过加速醋胺酚的代谢率及减低GSH耗损、对抗CCl₄的毒害作用等。五味子具有制止肝脏损伤，激活合成代谢过程以促进受损肝细胞的修复，并能增强脱氧核醣核酸（DNA）合成物和鸟胺酸脱羧酶的活性，再生肝脏细胞的作用。四氯化碳（CC1₄）是其中一种对肝脏最具毒害的物质。大量研究显示，五味子的强效保肝功效能对抗CC1₄的毒害作用，五味子提取物对CCl₄中毒大鼠肝细胞的超微结构具有保护作用。包天桐等研究发现用四氯化碳、硫代乙酰胺等引起小鼠肝损伤为模型，发现五味子的醇提物均有不同程度的降低因化学物质引起的血清转氨酶升高作用。用五味子醇提取物治疗注射四氯化碳后的小鼠，肝细胞的粗面内质网脱颗粒、线粒体肿胀、嵴断裂等症状均明显减轻。大鼠注射四氯化碳后产生嗜碱质、线粒体、RNA和糖原的活性均降低，经五味子制剂治疗后，肝小叶坏死区缩小，所用各种组织化学酶活性均增高，所以五味子对四氯化碳损伤大鼠肝脏的保护作用可能是通过肝细胞内蛋白质合成代谢实现的。用五味子醇提物，预先24h给药能显著降低大剂量扑热息痛（400mg/kg）肝中毒所致的小鼠死亡率，并防止肝内谷胱甘肽的耗竭，增强肝微粒体代谢扑热息痛的速度，血中扑热息痛含量下降。五味子酒精提取物亦具有降低酒精性肝损伤作用。五味子醇甲、乙素是五味子阻滞肝细胞损伤的主要有效活性成分。五味子乙素可通过诱导小鼠肝脏H SP27和 H SP70的表达而发挥保肝作用。

将栀子、枸杞子、五味子联合使用尚无文献报道，本发明人经过实验意外的发现用上述3种中药原料药制备的制剂具有协同增效作用，可以预防和治疗化学性肝损伤，具有保肝作用，同时本发明经过对提取方法和制剂学的研究，找到一种效果良好，稳定性强，耐光与热，易于口服，口感适宜的制剂。

发明内容

本发明涉及一种中药保肝制剂，由以下重量配比的中药原料药制备而成，栀子1.8-2.5份、枸杞子1.8-2.5份、五味子0.8-1.5份。

优选的，由以下重量配比的中药原料药制备而成，栀子1.99份、枸杞子1.99份、五味子1.0份。

本发明的中药保肝制剂，剂型选自片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、栓剂、膏剂、滴丸剂或贴剂。

优选是胶囊剂。

本发明还包括，本发明的中药保肝制剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：药材用乙醇提取，滤取药液；药渣再用水提取，过滤；滤液合并，浓缩，干燥，加入辅料制成制剂。

优选的，本发明的中药保肝制剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：药材用5倍重量的60%的乙醇回流提取2次，每次1小时，醇提液合并浓缩，醇提药渣以用6倍重量的水煮沸提取1小时，水提液浓缩，合并醇提浓缩液和水提浓缩液，经过干燥处理得到药物活性物质， 以该活性物质为药物活性成分，按照制剂学常规技术制备成中药保肝制剂。

其中所述干燥方法优选为不高于90℃条件下真空干燥。

本发明还包括，本发明的中药保肝制剂的检测方法，其特征在于：采用高效液相色谱法测定，测定制剂中栀子苷和葛根素的含量，其色谱条件为：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相：乙腈-水（11：89），检测波长为238±2nm；其中，测定时需要对制剂进行提取，所述提取包括以醇为溶剂对制剂内容物进行提取，提取方法采用超声或回流提取，提取时间30-60分钟，提取后溶液用溶剂稀释至刻度，注入色谱仪。

本发明的制剂具有预防化学性肝损伤的作用，可以用于肝保健。

该保健食品是由栀子、枸杞子、五味子组成，经现代工艺制成的对肝损伤有辅助保护功能的保健食品。采用现代制剂工艺，在合理的质量控制方法以及严格的产品管理措施下制成，质量稳定、服用方便。本品符合国家食品药品监督管理局对保健食品的要求，方中三味药栀子、枸杞子、五味子均有保肝作用，其中栀子、枸杞子均为药食两用的药材，五味子为可用于保健食品的原料，符合国家保健食品原料使用的要求，各原料之间没有配伍禁忌安全有效，可长期服用。

肝体阴而用阳，肝藏血，同时肝主疏泄；病理上肝气易郁，肝血易亏。多种致病素都易导致肝气郁结，这种肝气郁结引起脏腑气血逆乱，各种病理产物丛生。助肝是消除已生诸邪，故本方选用疏达解郁之品， 补肝体是使肝获得发挥肝用的物质基础，是治病本。

以下通过药效实验数据说明本发明的治疗和预防肝损伤的作用并说明其协同增效作用：

实验如下： 

采用白酒复制大鼠肝损伤模型,

用本发明方法提取的栀子、枸杞子、五味子混合提取物和和按照本发明方法分别提取的栀子、枸杞子、五味子提取物以及对照组分别灌胃给药,连续8周,测定血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)及三酰甘油(TG)的含量,并观察肝脏的病理组织学改变。

结果：各组均可显著降低大鼠血清AST、ALT及TG含量,与肝损伤模型组比较有显著性差异(P0.01或0.05);肝组织病理学改变较肝损模型组显著减轻(P0.05)。但混合提取物组效果更优。

结论本发明药物活性物质对大鼠酒精性肝损伤具有保护作用,呈一定的量效关系，栀子、枸杞子、五味子混合提取物较单独药物提取物组效果更优，显示三者具有协同增效作用。

以上评价方法主要针对降低酒精性肝损伤危害，因此，功能名称也可为有助于降低酒精性肝损伤危害。

以上药物配方比例经过优选，配方如下，组方的中各药材的比例为，栀子1.99份（375g）、枸杞子1.99份（375g）、五味子1.0份（188g）；以上组成，1份为188g，可制成药物制剂1000剂。所述剂指制成的成品药物制剂，如胶囊剂1000剂指胶囊制剂1000粒，片剂1000剂指片剂1000片，对于颗粒剂是颗粒剂1000克。重量可以增大或者 减小，但各组成之间的生药材重量配比的比例不变。

根据以上各个药材中功效成分的性质，本发明的方法采取一定浓度的乙醇进行提取，提取后药渣再进行水提，尽量将其有效成分提取完全。以干浸膏收率及栀子苷提取率为考察指标，对提取工艺中的醇提工艺进行试验考察。按4因素（乙醇浓缩、加醇量、煎煮次数、煎煮时间）3水平，设计正交试验表L₉（3⁴），用此表进行正交试验，实验结果如表1,2,3。

表1正交试验结果

表2干膏得率方差分析

表3栀子苷含量方差分析

从以上结果和综合考虑，确定了醇提条件，方中3味药材经过60%的醇提2次，每次1小时。以干膏率为考察指标，确定了水提条件，6倍水提1小时。

分别采用烘干法、真空干燥法两种干燥方法进行对比研究。烘干法、真空干燥法分别进行3种不同温度（60℃、75℃、90℃）干燥的比较。以干燥时间和栀子苷含量作为观察指标，确定选择真空干燥法在不高于90℃条件下进行干燥。

由于本品为纯中药提取物，具有较强的吸湿性，考虑加入适宜的辅料进行制粒，以增加物料的流动性，提高制剂的稳定性。乙醇为润湿剂制粒，以成型性、流动性、崩解时限以及吸湿性等为考察指标。选择微晶纤维素作为填充剂，羧甲淀粉钠作为崩解剂，二氧化硅和硬脂酸镁做为润滑剂，具体见表4。

表4制剂的成型研究

为了更好的控制产品的疗效，制定了方中栀子苷的含量测定方法，具体为，高效液相色谱法，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相：乙腈-水（11：89），检测波长为238±2nm。

供试品溶液的制备方法的建立，以栀子苷的含量为指标，考察了不同提取溶剂、提取方法和提取时间，结果甲醇、50%甲醇、50%乙醇都和乙醇配成的其它比例的溶剂均能做为提取溶。提取方法超声和回流均 可，处理时间30-60分钟，放冷，加相应溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。结果见表5,6。

表5提取溶剂的选择

表6提取时间的选择

通过供试品制备方法研究，确定制备方法为20-80%乙醇适量，超声处理，放冷，加20-80%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

具体实施方式：

下面结合实施例进一步说明本发明，但不表明对本发明权利要求的限制。

实施例1

仪器与试药 

仪器Agilent1100型高效液相色谱仪；

试药栀子、枸杞子、五味子饮片；栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,供含量测定用)；乙醇为药用乙醇和分析醇，乙腈为色谱纯试剂，水为超纯水。

方法与结果 

1保健品的制备 

栀子375g、五味子188g破碎成粗粉，与枸杞子375g合并，加入60%乙醇提取二次，每次加入8倍量提取1小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇至相对密度为1.25～1.35(60℃)的稠膏，备用；药渣加6倍量的水煎煮1小时，煎煮液滤过，滤液减压浓缩成相对密度为1.25～1.35(50-60℃)的稠膏，合并上述稠膏，真空干燥，干燥温度低于90℃，粉碎过60目筛，加入微晶纤维素94g、羧甲淀粉钠7g，混合均匀，喷入95%乙醇45g，用30目筛制粒，65℃干燥，20目筛整粒，加入二氧化硅6g、硬脂酸镁3g，混合均匀，填装胶囊1000粒，即得。

2栀子苷HPLC分析

供试品溶液的制备取装量差异项下本品，研细，取约0.1g，精密称定，置50ml量瓶中，加50%乙醇适量，超声处理（功率200W，频率50kHz）50分钟，放冷，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

对照品溶液的制备取栀子苷对照品适量，精密称定，加50%乙醇制成每1ml中含栀子苷30μg的溶液，即得。

色谱条件色谱柱：依利特4.6*250mm C₁₈5μm

流动相：乙腈-水（11：89）

检测波长：经紫外扫描栀子苷最大吸收波长为238nm，以栀子苷的最大吸收波长238nm定为该方法的检测波长。柱温：35℃；流速：1.0ml/min

测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪。

实施例2

取栀子1.8份、枸杞子1.8份、五味子0.8份。

其中1份为188g，按照实施例1的方法提取药物活性物质，按照制剂学常规技术制备成片剂。

实施例3

栀子栀子2.5份、枸杞子2.5份、五味子1.5份。

其中1份为188g，按照实施例1的方法提取药物活性物质，按照制剂学常规技术制备成颗粒剂。

实施例4

栀子375g、五味子188g破碎成粗粉，与枸杞子375g合并，加入60%乙醇提取二次，每次加入8倍量提取1小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇至相对密度为1.25～1.35(60℃)的稠膏，备用；药渣加6倍量的水煎煮1小时，煎煮液滤过，滤液减压浓缩成相对密度为 1.25～1.35(50-60℃)的稠膏，合并上述稠膏，真空干燥，干燥温度低于90℃，粉碎过60目筛，加入微晶纤维素94g、羧甲淀粉钠7g，混合均匀，喷入95%乙醇45g，用30目筛制粒，65℃干燥，20目筛整粒，加入二氧化硅6g、硬脂酸镁3g，混合均匀，压片即得。

Claims (4)

1.一种中药保肝制剂，其特征在于：由以下重量配比的中药原料药制备而成，栀子1.8-2.5份、枸杞子1.8-2.5份、五味子0.8-1.5份，其制备方法步骤如下：药材用5倍重量的60％的乙醇回流提取2次，每次1小时，醇提液合并浓缩，醇提药渣以用6倍重量的水煮沸提取1小时，水提液浓缩，合并醇提浓缩液和水提浓缩液，经过干燥处理得到药物活性物质，以该活性物质为药物活性成分，按照制剂学常规技术制备成中药保肝制剂。

2.权利要求1所述的中药保肝制剂，其特征在于：由以下重量配比的中药原料药制备而成，栀子1.99份、枸杞子1.99份、五味子1.0份，其制备方法步骤如下：栀子375g、五味子188g破碎成粗粉，与枸杞子375g合并，加入60％乙醇提取二次，每次加入8倍量提取1小时，滤过，合并提取液，60℃减压回收乙醇至相对密度为1.25～1.35的稠膏，备用；药渣加6倍量的水煎煮1小时，煎煮液滤过，50-60℃滤液减压浓缩成相对密度为1.25～1.35的稠膏，合并上述稠膏，真空干燥，干燥温度低于90℃，粉碎过60目筛，加入微晶纤维素94g、羧甲淀粉钠7g，混合均匀，喷入95％乙醇45g，用30目筛制粒，65℃干燥，20目筛整粒，加入二氧化硅6g、硬脂酸镁3g，混合均匀，填装胶囊1000粒，即得。

3.权利要求1所述的中药保肝制剂，其特征在于，选自片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、栓剂、膏剂、滴丸剂或贴剂。

4.权利要求1所述的中药保肝制剂，是胶囊剂。